عملية صب المستندة إلى الغزل الرطب من الجيلاتين لتجديد الأنسجة

هذا البروتوكول يحسن مفهوم أساسي من الرطب الغزل لتطوير مادة من شريط واحد من الألياف إلى شرائط مختلفة التي يمكن استخدامها لأي تطبيق طبي المفضل. هذه التقنية بسيطة وغير مكلفة ، ولا تتطلب إضافة البوليمرات الاصطناعية لتخصيص البوليمرات الطبيعية في مورد من البروتين للمواد ذات الأهمية. ويمكن توسيع هذه التقنية إلى التنمية الحيوية لقتل العلاج البارد مثل العلاج العصبي المركزي أو المحيطي، استبدال الأوعية الدموية، أو إعادة بناء المسالك البولية مباشرة.

هذه الطريقة هي للتطبيق الطبي بما في ذلك استراتيجية لـ النيانر الأنسجة أو الطب التجديدي. يمكن تنفيذ هذه التقنية بسهولة من قبل المبتدئين. لاحظ أنه بعد عدة تكرارات صب، ينبغي دائما التحقق من نوعية الحل للحفاظ على تشكيل الأمثل.

لتشكيل أنبوب الغزل الرطب، أولا غمر مقياس 24 من قبل ثلاثة أرباع بوصة القسطرة الوريدية الطرفية في محلول الجيلاتين الطازجة أعدت لمدة ثلاث ثوان، تليها الغمر في محلول الأسيتون الطازجة أعدت لمدة دقيقة واحدة. كرر هذه الخطوات 20 مرة. بعد الغمر الأسيتون الماضي، والسماح للمصببة أنبوب الجافة لمدة خمس دقائق في درجة حرارة الغرفة، واستخدام الهيموستات لنقل بعناية أنبوب الجيلاتين من القسطرة إلى ماصة باستور الزجاج مع 2.5٪ بوليكابولكتون حل ثنائي كلورو الميثان للحضن بين عشية وضحاها تحت غطاء محرك السيارة في درجة حرارة الغرفة.

في صباح اليوم التالي، تعقيم الجيلاتين لمدة ساعتين تحت الأشعة فوق البنفسجية قبل غمر الأنبوب لفترة وجيزة في الإيثانول 75٪. ثم غسل الأنبوب مرتين مع الخلايا الجذعية المتوسطة لإزالة الإيثانول المتبقية. لزراعة أنبوب الجيلاتين مع ثقافة الخلية، استبدال نهاية سوبينات الخلايا الجذعية الدهنية البشرية من قارورة الثقافة مع ملليلتر واحد من 0.25٪ تريبسين-EDTA لاحتضان 3.5 دقيقة في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون.

عندما تكون الخلايا منفصلة، وإلقاء القبض على رد فعل مع ملليلتر واحد من مصل البقر الجنين ونقل تعليق الخلية في أنبوب microcentrifuge. جمع الخلايا عن طريق الطرد المركزي وإعادة تعليق بيليه في ملليلتر واحد من الخلايا الجذعية المتوسطة. ثم ضع أنبوب الجيلاتين في بئر واحد من لوحة ستة بئر تحتوي على ثلاثة ملليلترات من الخلايا الجذعية المتوسطة.

بعد عد الخلايا، بذور أربع مرات 10 إلى الرابعة من الخلايا الجذعية الدهنية البشرية في أنبوب لمدة أسبوعين حضانة في حاضنة ثقافة الخلية. بعد التأكد من المستوى المناسب من التخمير من عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم في أنثى ثمانية أسابيع من العمر Sprague Dawley الفئران، حلق الشعر من منطقة trapezius وتعقيم الجلد المكشوف مع حل بوديوني اليود. تغطية الفئران مع الستائر الجراحية العقيمة للحد من التلوث البكتيري للموقع الجراحي واستخدام مقص الجراحية لجعل الضحلة، شق الجلد سنتيمترين طويلة.

ضع أنبوب الجيلاتين مباشرة في الطبقة بين اللفافة والعضلات واستخدم خياطة النايلون لإغلاق الجرح. ثم تعقيم الشق مع محلول بوديوني اليود. حث الجرذ عن طريق حقن العضلي من كيتوبروفين وسيفازولين والحفاظ على الحيوان في ظل ظروف معقمة لمدة سبعة أيام.

يمكن استخدام هذا المفهوم الرطب الغزل المستخدم لتطوير الجيلاتين في ألياف وأنابيب. الملاحظات المورفولوجية للأنبوب الجيلاتين عن طريق مسح المجهر الإلكتروني يكشف عن سطح غير أملس جدا مع قطر داخلي أكبر من 200 ميكرومتر وسمك ما يقرب من 20 ميكرومتر. يُظهر تلطيخ أنبوب الجيلاتين لثقافة الخلايا الجذعية الدهنية البشرية للتعبير عن علامة الخلية العصبية تلطيخًا إيجابيًا للعلامة إلى جانب نوى متعددة تم اكتشافها مما يشير إلى أن الخلايا يمكن أن تخترق أنبوب الجيلاتين وتلتزم به وتتمايز إلى خلايا السلف العصبي.

زرع أنبوب الجيلاتين في طبقة اللفافة يؤكد سلامته والتكييف الحيوي ، حيث لا يلاحظ أي مؤشر على احمرار أو تورم أو أعراض التهاب أخرى داخل الأنسجة المحلية ويحيط الأنبوب بالأنسجة الضامة المتطورة. في حين تحاول هذا الإجراء من نقطتين واحد، وضمان الغمر من العفن في وقت الطلاء محددة في كل حل مهمة جدا لبناء شكل أنبوب دقيق. بعد هذا الإجراء، يمكن إجراء تجاربنا استخدام نموذج الحيوان من الأمراض البشرية للتحقيق بدقة في نتائج المواد الحيوية لاستراتيجية تجديد الأنسجة.

بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في تطوير بوليمرات الطبيعة المترابطة البسيطة في أي نوع من المواد لتطبيق طبي تقرر. في ظل حالة الاستخدام العادي، يعتبر حل ثنائي كلورو الميثان من البولي كابرولكتون ليعرض الحد الأدنى من المخاطر البيئية، ولكن لا تنسى أن تقوم بأي خطوات مع هذه المادة الكيميائية في خزانة السلامة البيولوجية المناسبة.