تم تمويل هذه الدراسة من خلال منح من المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين U21A20368 (L. Y.) ، 82101000 (HW) ، و 82100982 (FL) ، وبرنامج سيتشوان للعلوم والتكنولوجيا 2023NSFSC1499 (H. W.). يتم تضمين جميع البيانات والصور الأصلية في هذه الورقة.

تمت الموافقة على الإجراءات التجريبية في هذه الدراسة من قبل اللجنة الأخلاقية لمدرسة غرب الصين لطب الأسنان ، جامعة سيتشوان (WCHSIRB-D-2021-125). تم الحصول على الفئران البالغة C57BL / 6 من شركة Gempharmatech Experimental Animals Company ، تشنغدو ، الصين. يندلع التاج الكامل للضرس الأول الفكي العلوي بعد 21 يوما من الولادة. يجب أن تكون الفئران للجراحة أكبر من 21 يوما مع حيوية طبيعية11. هنا ، تم استخدام الفئران البالغة من العمر 6 إلى 8 أسابيع للنمذجة. الشكل 1 هو مخطط تدفق يوضح البروتوكول المستخدم.
1. التحضير قبل الجراحة (الشكل 2)
<ol><li>احصل على الأدوات التالية: مجهر مجسم ، لوحة تثبيت ، شريط طبي ، هفوة الفم ، لدغ أسنان طفيف التوغل بقطر 0.6 مم ، قبضة أسنان عالية السرعة للأسنان ، ملف 8 # C + ، وسادة تسخين ، حقنة 1 مل ، كرة قطنية معقمة ، ملقط العين.</li>
	<li>الحصول على الأدوية التالية: مزيج التخدير ، مرهم بيطري.</li>
</ol>2. إعداد هفوة الفم
<ol><li>وزن وتخدير الفأر عن طريق الحقن داخل الصفاق لمحلول مزيج التخدير (10٪ كيتامين هيدروكلوريد + 5٪ زيلازين + 85٪ محلول ملحي متساوي التوتر معقم) عند 0.007 مل / جم من وزن الجسم وتأكيد التخدير المناسب من خلال طريقة قرصة إصبع القدم. ضع مرهم تشحيم العيون على العينين لمنع إصابة العينين بسبب الجفاف أثناء العملية. ملاحظة: القبعات الطبية والأقنعة والقفازات وزرة وغيرها من الحماية الأساسية ضرورية. تأكد من أن كل من بيئة الجراحة وغرفة الماوس نظيفة وآمنة. من الضروري وجود وسادة حرارية للدعم الحراري طوال الإجراء.</li>
	<li>تحضير هفوة الفم كما هو موضح أدناه (الشكل 3).<ol><li>احصل على المواد التالية: سلك قوس تقويم الأسنان بقطر 8 ميكرومتر ، ذو طيات ثني حلقة صغيرة ، قاطع سلك ثقيل ، قلم تحديد ، غطاء مطاطي بطول 3 مم وقطر مقطع عرضي 1 مم.</li>
		<li>أولا ، قم بتصويب السلك المقوس باليد اليسرى للتثبيت والإبهام ، ثني إصبع السبابة لليد اليمنى قليلا ضد قوس السلك. كرر هذا الإجراء عدة مرات ، وسوف يسهل الانحناء إلى الزاوية ثلاثية الأبعاد الصحيحة.</li>
		<li>استخدم ذو طيات ثني حلقة يونغ لثني الحافة العلوية (الشكل 3G ، a-i) لشبه المنحرف (الشكل 3C ، a-l-k-b) بطول حوالي 8 مم عند نقطة منتصف سلك القوس. تأكد من أن النقطة a (الشكل 3) على حافة منقار الكماة.</li>
		<li>امسك الزردية باليد اليسرى ، وقم بتثبيت الطرف الحر لسلك القوس بالإبهام الأيمن والسبابة ، وثني سلك القوس من النقطة أ لعمل زاوية حوالي 120 درجة. كرر الإجراء السابق عند النقطة i (الشكل 3G). تحقق مما إذا كان سلك القوس على مستوى واحد عن طريق وضعه على طاولة أفقية دون التحديق.</li>
		<li>اترك حوالي 9 مم من الطول على كل جانب (الشكل 3D ، a-b ، l-k) وثني الطرف الحر بزاوية 75 درجة باستخدام نفس مهارة الخطوة 2.2.4 ، مع التأكد من أن كل حافة على مستوى واحد. ثني هذه الزاوية الحادة مع طرف منقار ذو طيات.</li>
		<li>أوجد النقطة c حوالي 5 مم من النقطة b. اتبع نفس المهارة لثني زاوية 105 درجة على النقطة ج. ثني زاوية أخرى 105 درجة عند النقطة d 5 مم من النقطة c. اترك حوالي 4.5 مم من النقطة d وابحث عن النقطة e. ثني الطرف الحر عند النقطة e لتشكيل زاوية حوالي 100 -105 درجة (الشكل 3E). ملاحظة: كانت الفئران C57 البالغة من العمر 6-8 أسابيع التي استخدمناها حوالي 20 جم. لا يمكن أن يؤدي تباعد 5 مم إلى تشويش الفكين العلوي والسفلي للفئران دون تحريك ، ولكن أيضا لن يضغط على جلد الفئران ويسبب عدم الراحة. إذا تم استخدام أنواع أو أعمار أخرى من الفئران ، يرجى ضبط طول أجزاء c-d و i-h وفقا للوضع الفعلي (الشكل 3E ، G).</li>
		<li>ثني خافض اللسان الإضافي لجزء الفك السفلي (الشكل 3G ، j-i-h-g).</li>
		<li>تكرار خطوات الانحناء للجزء a-b-c على الجزء l-k-j. قم بتثبيت أجزاء i-k و k-j في نفس الوقت وثني الطرف الحر عند النقطة j لجعله عموديا على مستوى i-k-j. نقطة المشبك i التي تبعد 5 مم عن النقطة j ، ثني الطرف الحر لجعله موازيا لكل من مستوى i-k-j وجزء c-d (الشكل 3H).</li>
		<li>اترك طول 5 مم من النقطة i ، عند النقطة h ، ثني القوس الرأسي إلى جزء i-h ومواز لمستوى j-i-h. ابحث عن النقطة g عند 5 مم من النقطة h. المشبك j-i-h-g الطائرة وثني نهاية حرة متناظرة لجزء k-j. ثم يجب أن تكون النهاية الحرة بعد النقطة f متناظرة مع النهاية الخالية من النقاط الإلكترونية (الشكل 3H).</li>
		<li>ضع أغطية مطاطية على الطرف الحر (الشكل 3F).</li>
	</ol></li>
</ol>3. الشلل
<ol><li>إصلاح الماوس ضعيف على لوحة التثبيت مع الأطراف المؤمنة بشريط الجلد. ضغط الأطراف الحرة من هفوة الفم مع الإبهام والسبابة.</li>
	<li>إصلاح القواطع الأمامية الماوس في الأخدود شبه منحرف من ذراعين. تأكد من أن الذراع مع خافض اللسان هو للفك السفلي. اضبط كمامة الفم للتأكد من تثبيت لسان الفأر ولكن ليس نقص تروية.</li>
</ol>4. تقييم الأسنان
<ol><li>تأكد من أن الضرس الأول الفكي العلوي للجراحة يجب أن يكون خاليا من تسوس الأسنان والصدمات وتكون الأسنان. تأكد من عدم وجود احمرار أو تورم أو ناسور على اللثة المحيطة. تأكد من أن الأسنان المقابلة صحية ومتاحة للعمل كمجموعة تحكم صحية.</li>
</ol>5. التعرض اللب
<ol><li>استخدم نتوءات الأسنان للحفر في الجانب الإطباقي من الضرس الأول الفكي العلوي بسرعة 20000 دورة في الدقيقة. تأكد من إزالة المينا. حافظ على العملية باستخدام قبضة الأسنان فقط في طبقة ضحلة من العاج لمنع التحفيز الحراري المفرط على أنسجة لب الأسنان12.</li>
	<li>في الوقت نفسه ، منع ارتفاع درجة الحرارة باستخدام حقنة لإسقاط محلول ملحي طبيعي على السن كل 3 دقائق أثناء العملية.</li>
	<li>ضع ملف 8 # أو 10 # C + على أدنى موضع للحفرة المحفورة واخترق العاج الأخير لفضح حجرة اللب. سيكون شعورا واضحا بالسقوط عند إزالة العاج المحلي تماما. لا تسبر عميقا جدا ، وإلا فقد يتم إخراج أنسجة لب الأسنان من حجرة اللب.</li>
	<li>تنظيف الشظايا حول السن. خلع هفوة الفم. انتهت الجراحة. استخدم الضرس الأول الفكي المعاكس كعنصر تحكم بدون تشغيل.</li>
</ol>6. رعاية ما بعد الجراحة
<ol><li>بعد الجراحة، يتم تطبيق كاربروفين (5 ملغ/كغ) تحت الجلد ويوضع الفأر على وسادة التسخين الحرارية الكيميائية في وضعية الانبطاح حتى الشفاء من التخدير. إطعام الفئران وتوفير مياه الشرب. يجب الإشراف على عملية الاسترداد. يجب ألا تكون أي أخرى في نفس الغرفة حتى يتم استرداد الماوس بالكامل.</li>
</ol>7. جمع العينات وتخزينها
<ol><li>القتل الرحيم للفأر مع خلع عنق الرحم تحت حالة مخدر عميق بعد 24 ساعة من العملية أو أي نقطة زمنية أخرى حسب التجربة9. قطع عضلات الهيكل العظمي المرتبطة بالفك العلوي والزيجوما بمقص العيون. إزالة الهيكل العظمي والعظام الأمامية والأنسجة الرخوة واخراج الصفيحة gnathostegite مع الأضراس الفكية. ملاحظة: وفقا ل He et al. ، تمت الإشادة بأنه يجب جمع عينة التهاب لب السن بعد أقل من 72 ساعة بعد الجراحة لتجنب النخر الواسع في أنسجة لب الأسنان13.</li>
	<li>قسم الغناتوستيغيت سهميا إلى نصفين وقم بتخزين الأنسجة في 4٪ بارافورمالدهيد في PBS ، درجة الحموضة 7.4 ، عند 4 درجات مئوية لتثبيت 24 ساعة.</li>
</ol>8. التحليل النسيجي
<ol><li>اغسل الأنسجة بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS) وقم بإزالة الكلس منها في محلول إزالة الكلس المتغير يوميا بنسبة 5٪ EDTA و 4٪ سكروز في PBS ، درجة الحموضة 7.4 ، عند 4 درجات مئوية لمدة 2-4 أسابيع10.</li>
	<li>قم بتضمين 1/2 gnathostegite في البارافين وتأكد من أن الوجه السهمي بدون أسنان في الجزء السفلي من أشرطة الأنسجة.</li>
	<li>قطع كتلة البارافين إلى شرائح بسمك 5 ميكرومتر مع ميكروتوم البارافين. اضبط زاوية كتلة البارافين وفقا للعلاقة القريبة والبعيدة والعلوية والسفلية التي لوحظت تحت المجهر لضمان إمكانية قطع لب التاج الكامل وانثقاب الضرس الأول.</li>
</ol>

إنشاء نموذج فأر التهاب اللب باستخدام هفوة الفم الجديدة 

<ol>
	<li>Kleinert, A., Kleinert, L., Ozimirska, M., Cha&#322;as, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endodontium+-+together+or+separately.">Endodontium - together or separately.</a> Folia Morphol. 77 (3), 409-415 (2018).</li><li>Dhillon, H., Kaushik, M., Sharma, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+endodontics-Creating+new+horizons.">Regenerative endodontics-Creating new horizons.</a> J Biomed Mater Res B Appl Biomater. 104 (4), 676-685 (2016).</li><li>Prati, C., Pirani, C., Zamparini, F., Gatto, M. R., Gandolfi, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+20-year+historical+prospective+cohort+study+of+root+canal+treatments.+A+Multilevel+analysis.">A 20-year historical prospective cohort study of root canal treatments. A Multilevel analysis.</a> Int Endod J. 51 (9), 955-968 (2018).</li><li>Su, Y., Wang, C., Ye, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Healing+rate+and+post-obturation+pain+of+single-+versus+multiple-visit+endodontic+treatment+for+infected+root+canals:+a+systematic+review.">Healing rate and post-obturation pain of single- versus multiple-visit endodontic treatment for infected root canals: a systematic review.</a> J Endod. 37 (2), 125-132 (2011).</li><li>Murray, P. E., Garcia-Godoy, F., Hargreaves, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regenerative+endodontics:+a+review+of+current+status+and+a+call+for+action.">Regenerative endodontics: a review of current status and a call for action.</a> J Endod. 33 (4), 377-390 (2007).</li><li>Arora, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+application+of+immunotherapy+for+modulation+of+pulp+inflammation:+opportunities+for+vital+pulp+treatment.">Potential application of immunotherapy for modulation of pulp inflammation: opportunities for vital pulp treatment.</a> Int Endod J. 54 (8), 1263-1274 (2021).</li><li>Eramo, S., Natali, A., Pinna, R., Milia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dental+pulp+regeneration+via+cell+homing.">Dental pulp regeneration via cell homing.</a> Int Endod J. 51 (4), 405-419 (2018).</li><li>Hasan, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Toll-like+receptor+2,+Dectin-1,+and+Osteopontin+in+murine+model+of+pulpitis.">Expression of Toll-like receptor 2, Dectin-1, and Osteopontin in murine model of pulpitis.</a> Clin Oral Investig. 27 (3), 1177-1192 (2023).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DDIT3+aggravates+pulpitis+by+modulating+M1+polarization+through+EGR1+in+macrophages.">DDIT3 aggravates pulpitis by modulating M1 polarization through EGR1 in macrophages.</a> Int Immunopharmacol. 120, 110328 (2023).</li><li>Richert, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+critical+analysis+of+research+methods+and+experimental+models+to+study+pulpitis.">A critical analysis of research methods and experimental models to study pulpitis.</a> Int Endod J. 55 (Suppl 1), 14-36 (2022).</li><li>Huang, X. F., Zhao, Y. B., Zhang, F. M., Han, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+gene+expression+during+tooth+eruption+and+orthodontic+tooth+movement+in+mice.">Comparative study of gene expression during tooth eruption and orthodontic tooth movement in mice.</a> Oral Dis. 15 (8), 573-579 (2009).</li><li>Kwon, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermal+irritation+of+teeth+during+dental+treatment+procedures.">Thermal irritation of teeth during dental treatment procedures.</a> Restor Dent Endod. 38 (3), 105-112 (2013).</li><li>He, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulpal+tissue+inflammatory+reactions+after+experimental+pulpal+exposure+in+mice.">Pulpal tissue inflammatory reactions after experimental pulpal exposure in mice.</a> J Endod. 43 (1), 90-95 (2017).</li><li>Karrar, R. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+biomarkers+for+objective+assessment+of+symptomatic+pulpitis:+A+systematic+review+and+meta-analysis.">Molecular biomarkers for objective assessment of symptomatic pulpitis: A systematic review and meta-analysis.</a> Int Endod J. 56 (10), 1160-1177 (2023).</li><li>Goldman, E., Reich, E., Abramovitz, I., Klutstein, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+apical+periodontitis+in+mice.">Inducing apical periodontitis in mice.</a> J Vis Exp. (150), e59521 (2019).</li><li>Duncan, H. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Present+status+and+future+directions-Vital+pulp+treatment+and+pulp+preservation+strategies.">Present status and future directions-Vital pulp treatment and pulp preservation strategies.</a> Int Endod J. 55 (Suppl 3), 497-511 (2022).</li><li>Shi, X., Li, Z., He, Y., Jiang, Q., Yang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+different+dental+burs+for+experimental+induction+of+pulpitis+in+mice.">Effect of different dental burs for experimental induction of pulpitis in mice.</a> Arch Oral Biol. 83, 252-257 (2017).</li><li>Du, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indigenous+microbiota+protects+development+of+medication-related+osteonecrosis+induced+by+periapical+disease+in+mice.">Indigenous microbiota protects development of medication-related osteonecrosis induced by periapical disease in mice.</a> Int J Oral Sci. 14 (1), 16 (2022).</li></ol>

يعلن المؤلفون عدم وجود تضارب في المصالح.

نظرا لأن الأنسجة الرخوة الانفرادية داخل الأسنان ، يؤدي لب الأسنان دورا مهما في الحفاظ على النشاط الحيوي للأسنان ولكنه يظل شديد الحساسية. أصبح الحفاظ على هذا اللب الحيوي هو النهج الأولي المفضل في العلاجات اللبية الحديثة ، مما يستلزم فهما شاملا للآليات الالتهابية لب الأسنان16. ...

لب الأسنان ، وهو جزء لا يتجزأ من السن ، مسؤول عن وظائف أساسية متعددة مثل إمدادات المغذيات ، وتشكيل العاج ، والوظيفة الحسية ، وردود الفعل الدفاعية1. ومع ذلك ، فإن لب الأسنان ، المحاط بالأنسجة الصلبة ، عرضة للإصابات والأضرار الناجمة عن التسوس العميق أو التهاب لب السن أو الصدمات أو العلاجات اللاحقة 2,3. عدم وجود لب الأسنان الوظيفي يزيد من خطر هشاشة الأسنان4. علاوة على ذلك ، فإن فقدان حيوية اللب في الأسنان الدائمة الشابة يمكن أن يؤثر سلبا على نضوج الأسنان ، وتفشل تقنيات أطقم الأسنان الحالية في استعادة ردود الفعل العصبية التي يوفرها اللبالصحي 4. وقد دفع هذا الوضع الباحثين إلى استكشاف حلول بديلة لإدارة اللب الملتهب بما يتجاوز مجرد الإزالة.
في عام 2007 ، بدأ موراي وآخرون تطبيق هندسة الأنسجة في علاج جذور الأسنان التجديدي ، مما أثار اهتماما متزايدا بالحفاظ على اللب وتجديده5. ومع ذلك ، تشكل أنسجة اللب الملتهبة تحديا حيث تطلق الخلايا عوامل التهابية مثل IL-6 ، والتي تجند الخلايا الالتهابية وتؤدي إلى نخر الخلايا وفقدان حيوية اللب ومضاعفات في الانتعاش الوظيفي 6,7. لذلك ، فإن فهم الالتهاب وموت الخلايا المرتبط به أمر بالغ الأهمية للتقدم في الحفاظ على اللب الحيوي. هناك عدد من التجارب التي أجريت لاستكشاف البيولوجيا الجزيئية لللب الملتهب في الجسم الحي أو في المختبر 8,9. على الرغم من أن التجارب في المختبر مثل مزارع الخلايا 2D أو 3D قد تم تطويرها لسنوات وأصبحت ناضجة وتستخدم على نطاق واسع لاختبار تفاعلات خلايا اللب مع العوامل الالتهابية ، إلا أن هذه التجارب لا يمكن أن تعكس التفاعل بين أنسجة اللب والجهاز المناعي الجهازي10. إذا كانت الظاهرة قيد الدراسة مشتقة من خلايا من أصل نسيجي آخر مثل الجهاز المناعي والأوعية الدموية والجهاز العصبي ، فإن زراعة خلايا اللب النقية ستؤدي إلى طريق مسدود. لذلك ، في التجارب في الجسم الحي ضرورية للغاية ومرجعية.
أصبحت الفئران بشكل متزايد خيارا شائعا في أبحاث الالتهابات في الجسم الحي بسبب فعاليتها من حيث التكلفة وخصوبتها العالية وحيويتها. ومع ذلك ، لا يوجد حاليا بروتوكول شامل لنموذج التهاب لب الفئران ، والذي يمكن أن يكون بمثابة مرجع. يشكل صغر حجم الفئران وحساسيتها للتحفيز تحديات كبيرة أثناء الإجراءات التجريبية. غالبا ما تتطلب مراقبة الأسنان الصغيرة المخبأة في عمق فم الفأر استخدام مجهر ناتئ ، على الرغم من الوجود الأكثر شيوعا للمجاهر المكتبية في المختبرات. يتطلب عدم وجود فتاحة الفم مساعدة من الآخرين. لمعالجة هذا الأمر ، ابتكرت المجموعة هفوة الفم باستخدام المواد المتاحة بسهولة والتي تهدف إلى توفير بروتوكول موحد وقابل للتكرار لبناء نموذج التهاب لب الفئران. توضح هذه المقالة تفاصيل الإجراء ، الذي يغطي التحضير قبل الجراحة ، والشلل ، وجراحة التعرض لللب ، وجمع العينات على الفئران C57. يوصي هذا البروتوكول باستخدام كمامة الفم ، وتوفير معلومات عن هيكلها وإنتاجها وتطبيقها لتسهيل الباحثين الآخرين في تكرار الإجراء.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Animal</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57/B6J mice</td>
			<td>Gempharmatech Experimental Animals Company</td>
			<td>C57/B6J</td>
			<td>For the establishment of pulp exposure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL syringe</td>
			<td>Chengdu Xinjin Shifeng Medical Apparatus &#38; Instruments Co. LTD.</td>
			<td>SB1-074(IV)</td>
			<td>Apply in drug injection.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8# C+ file</td>
			<td>Readysteel</td>
			<td>0010047</td>
			<td>Apply in exposing the roof of pulp chamber.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthesia Mix solution</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>10% ketamine hydrochloride+ 5% xylazine + 85% sterile isotonic saline.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI Staining Solution</td>
			<td>Beyotime</td>
			<td>C1005</td>
			<td>Apply in immunofluorescence staining for counter-staining of nucleus.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dental high-speed dental handpiece</td>
			<td>Jing yuan electronic commerce technology</td>
			<td>WJ-422</td>
			<td>Apply in pulp exposure.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heavy wire cutter</td>
			<td>Jirui Medical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>none</td>
			<td>Apply inarc cutting.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin and Eosin Stain kit</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL700B</td>
			<td>For the histological analysis of the slides.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IL-6 antibody</td>
			<td>Novus</td>
			<td>NBP2-89149</td>
			<td>Apply in immunofluorescence staining to detect the inflammation of the dental pulp.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine(Ketamine hydrochloride)</td>
			<td>Vet One, Boise, Idaho, USA</td>
			<td>C3N VT1</td>
			<td>100mg/kg, IP. Apply in nesthetization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medical tap</td>
			<td>3M</td>
			<td>1530</td>
			<td>Apply in mice immobilization.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Orthodontic arch wire&#160;</td>
			<td>Shanghai Wei Rong Medical Apparatus Co. LTD.</td>
			<td>K417</td>
			<td>Diameter of 8&#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round dental burr (0.6 mm)</td>
			<td>Shofu global</td>
			<td>072208</td>
			<td>Apply in removing enamel and shallow layer of dentin.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Young loop bending plier</td>
			<td>Jirui Medical Instrument Co., Ltd.</td>
			<td>none</td>
			<td>Apply in arc bending.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

establishment of a murine pulp exposure model with a novel mouth-gag for pulpitis research

التهاب لب السن ، وهو سبب شائع لفقدان الأسنان الطبيعي ، يؤدي إلى نخر وفقدان النشاط الحيوي في لب الأسنان الملتهب. يعد الكشف عن الآليات الكامنة وراء التهاب لب السن وعلاجه الفعال محورا مستمرا لأبحاث اللبية. لذلك ، فإن فهم العملية الالتهابية داخل لب الأسنان أمر حيوي لتحسين الحفاظ على اللب. بالمقارنة مع التجارب الأخرى في المختبر ، يقدم نموذج التهاب لب الفئران سياقا أكثر أصالة وتنوعا وراثيا لمراقبة التطور المرضي لالتهاب لب السن. ومع ذلك ، فإن استخدام الفئران ، على الرغم من فعاليتها من حيث التكلفة وإمكانية الوصول إليها ، يشكل صعوبات بسبب صغر حجمها وضعف التنسيق وانخفاض تحملها ، مما يعقد الإجراءات داخل الفم والأسنان. يقدم هذا البروتوكول تصميما جديدا وتطبيقا لكمامة الفم لكشف لب الفأر ، مما يسهل إجراءات أكثر كفاءة داخل الفم. هفوة الفم ، التي تتكون من قوس أسنان متاح بسهولة لمعظم أطباء الأسنان ويمكن أن تسرع بشكل كبير من التحضير الجراحي ، حتى بالنسبة للإجراءات لأول مرة. تم استخدام التصوير المقطعي المحوسب الدقيق ، وتلطيخ الهيماتوكسيلين يوزين (HE) ، وتلطيخ التألق المناعي لتحديد التغيرات في التشكل والتعبير الخلوي. الهدف من هذه المقالة هو مساعدة الباحثين على إنشاء إجراء أكثر قابلية للتكرار وأقل تطلبا لإنشاء نموذج التهاب اللب باستخدام هفوة الفم الجديدة هذه.

The dental pulp, an integral part of the tooth, is responsible for multiple essential functions such as nutrient supply, dentin formation, sensory function, and defense reactions1. Nevertheless, the dental pulp, surrounded by hard tissue, is susceptible to injuries and damages from deep caries, pulpitis, trauma, or subsequent therapies2,3. The absence of functional dental pulp increases the risk of tooth fragility4. Moreover, the loss of pulp vitality in young permanent teeth can adversely affect tooth maturation, and current denture techniques fail to restore the neural feedback offered by healthy pulp4. This situation has led researchers to explore alternative solutions for managing inflamed pulp beyond mere removal.
In 2007, Murray et al. initiated the application of tissue engineering in regenerative endodontics, thereby sparking increased interest in pulp preservation and regeneration5. However, inflamed pulp tissue poses a challenge as cells release inflammatory factors such as IL-6, which recruit inflammatory cells and results in cell necrosis, loss of pulp vitality, and complications in functional recovery6,7. Understanding inflammation and the associated cell death is, therefore, crucial for advancements in the preservation of vital pulp. There are a number of experiments that have been conducted to explore the molecular biology of the inflame pulp in vivo or in vitro8,9. Though in vitro&#160;experiments like 2D or 3D cell cultures have been developed for years and are becoming mature and widely used to test reactions of pulp cells to inflammatory factors, these experiments cannot reflect the interaction between pulp tissue and the systemic immune system10. If the phenomenon being studied is derived from cells of other tissue origin like immune, vascular and nervous system, then pure pulp cell culture will lead to a dead end. Therefore, in vivo experiments are very necessary and referential.
Mice have increasingly become a common choice in inflammation research in vivo&#160;due to their cost-effectiveness, high fertility, and vitality. However, a comprehensive protocol for mice pulpitis model is currently absent, which can serve as a reference. The small size of mice and their sensitivity to stimulation pose significant challenges during experimental procedures. Observing the minuscule teeth concealed deep within the mouse mouth often necessitates the use of a cantilever microscope, notwithstanding the more common presence of desktop microscopes in laboratories. The absence of a mouth opener requires assistance from others. To address this, the group has devised a mouth-gag using readily available materials which aims to provide a standardized and reproducible protocol for constructing the mice pulpitis model. This article details the procedure, covering preoperative preparation, immobilization, pulp exposure surgery, and sample collection on C57 mice. This protocol recommends the use of the mouth-gag, providing information on its structure, production, and application to facilitate other researchers in replicating the procedure.

تسليط الضوء على المؤلف: تعزيز أبحاث لب الأسنان باستخدام نماذج الماوس المحسنة

إنشاء نموذج التعرض لب الفئران مع هفوة الفم الجديدة لأبحاث التهاب لب السن

Individual experiments like 2D or 3D cell cultures have been widely used to test the reactions of dental pulp cells. These experiments cannot reflect the interaction between pulp tissue and the systemic immune system. Therefore, in vivo experiments are becoming increasingly popular in endodontic research.C57 mice have increasingly become a common choice in inflammation research on dental pulp due to their cost effectiveness, high fertility and vitality. However, the small size of mice and lack of coordination posed significant challenges during experimental procedures. The fixation process is an important factor that higher the technical threshold.We devised a novel mouth gag using readily available materials and simple assemblies to assist researchers in pulp exposure surgery. According to our research, this mouth gag can significantly shorten the time required for beginners to immobilize the mouth and expose the maxillary first molar of mice.

تم إجراء الإجراء الموصوف أعلاه على الضرس الأول الفكي الأيمن من الفئران C57BL / 6 البالغة من العمر 3 ، 6-8 أسابيع ، في حين تم الحفاظ على الأضراس الأولى للفك العلوي الأيسر كعنصر تحكم. تم استخدام نتائج الأنسجة والتألق المناعي من التحكم الفارغ ، وعينات التهاب لب السن لمدة 12 ساعة و 24 ساعة من التهاب لب ...

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research at JoVE.com

تقدم هذه المقالة بروتوكولا مبسطا لإنشاء نموذج التهاب لب السن في الفئران باستخدام هفوة الفم المبتكرة ، يليها التحليل النسيجي اللاحق.

Pulpitis, a common cause of natural tooth loss, leads to necrosis and loss of bioactivity in the inflamed dental pulp. Unraveling the mechanisms ...

تم استخدام التجارب الفردية مثل ثقافات الخلايا 2D أو 3D على نطاق واسع لاختبار تفاعلات خلايا لب الأسنان. لا يمكن أن تعكس هذه التجارب التفاعل بين أنسجة اللب والجهاز المناعي الجهازي. لذلك ، أصبحت التجارب في الجسم الحي تحظى بشعبية متزايدة في البحوث اللبية.أصبحت الفئران C57 خيارا شائعا بشكل متزايد في أبحاث الالتهاب على لب الأسنان بسبب فعاليتها من حيث التكلفة والخصوبة العالية والحيوية. ومع ذلك ، فإن صغر حجم الفئران ونقص التنسيق يشكلان تحديات كبيرة أثناء الإجراءات التجريبية. عملية التثبيت هي عامل مهم يرفع العتبة الفنية.ابتكرنا هفوة فم جديدة باستخدام مواد متاحة بسهولة وتجميعات بسيطة لمساعدة الباحثين في جراحة التعرض لللب. وفقا لبحثنا ، يمكن أن تقصر هفوة الفم هذه بشكل كبير الوقت اللازم للمبتدئين لشل حركة الفم وفضح الضرس الأول الفكي العلوي للفئران.

establishment-murine-pulp-exposure-model-with-novel-mouth-gag-for

Research

JoVE Journal

Medicine

Establishment of a Murine Pulp Exposure Model with a Novel Mouth-Gag for Pulpitis Research

708 Views.  Sichuan University. تم استخدام التجارب الفردية مثل ثقافات الخلايا 2D أو 3D على نطاق واسع لاختبار تفاعلات خلايا لب الأسنان. لا يمكن أن تعكس هذه التجارب التفاعل بين أنسجة اللب والجهاز المناعي الجهازي. لذلك ، أصبحت التجارب في الجسم الحي تحظى بشعبية متزايدة في البحوث اللبية.أصبحت الفئران C57 خيار...

Video: تسليط الضوء على المؤلف: تعزيز أبحاث لب الأسنان باستخدام نماذج الماوس المحسنة

Pulpitis, a common cause of natural tooth loss, leads to necrosis and loss of bioactivity in the inflamed dental pulp. Unraveling the mechanisms underlying pulpitis and its efficient treatment is an ongoing focus of endodontic research. Therefore, understanding the inflammatory process within the dental pulp is vital for improving pulp preservation. Compared to other in vitro experiments, a murine pulpitis model offers a more authentic and genetically diverse context to observe the pathological progression of pulpitis. However, using mice, despite their cost-effectiveness and accessibility, poses difficulties due to their small size, poor coordination, and low tolerance, complicating intraoral and dental procedures. This protocol introduces a novel design and application of a mouth-gag to expose mouse pulp, facilitating more efficient intraoral procedures. The mouth-gag, comprised of a dental arch readily available to most dentists and can significantly expedite surgical preparation, even for first-time procedures. Micro-CT, hematoxylin-eosin (HE) staining, and immunofluorescence staining were used to identify changes in morphology and cell expression. The aim of this article is to help researchers establish a more reproducible and less demanding procedure for creating a pulp inflammation model using this novel mouth-gag.

This article presents a streamlined protocol for establishing a pulpitis model in mice using an innovative mouth-gag, followed by subsequent histological analysis.

Preparation of the Mouth Gag for a Mouse Pulpitis Model

To begin, straighten an 8 micron thick orthodontic arch wire with your left hand while keeping the right hand slightly bent against the wire arc. Use a Young loop bending plier to bend the top edge of the trapezoid about eight millimeters at the midpoint of the bow wire. Ensure that point A is on the edge of the plier beak.Now hold the plier with the left hand. Clamp the free end of the bow wire with the right thumb and forefinger, then bend the bow wire from point A to make a 120-degree angle. Place the arch wire on a horizontal table to check if it is on a single plane.Leave about nine millimeters on each side of the wire and use pliers to bend the free end to a 75-degree angle. Now locate point C which is about five millimeters from point B.Bend the wire at point C to make a 105-degree angle. Similarly, bend the wire at points D and E.Clamp the IK and KJ parts simultaneously.Duplicate the A, B, C bending at points L, J, and K, then bend the free end at point J to make it vertical to the IKJ plane. Bend an extra tongue depressor for the mandibular part. Clamp point I five millimeters from point J and bend the free end to make it parallel to both the IKJ plane and the CD part.Next, leave a five millimeter gap from point I and at point H, bend the arch vertically to the IH and JIH planes. Locate point G five millimeters from H and clamp the JIHG lane. Then bend the arch at point G.Now bend the free end symmetrical to the KJ plane.The free end after point F should be symmetrical to the free end at point E.Finally, place rubber caps on the free ends.

إعداد هفوة الفم لنموذج التهاب لب الفأر

Using A Mouth Gag for Pulpitis Assessment in Mice

To begin, fix an anesthetized mouse in a supine position on a fixation plate. Secure the limbs with skin tape. Compress the free ends of a prepared mouth gag with the thumb and the index finger.Fix the mouse's front incisors in the trapezoidal groove between the two arms of the mouth gag. Ensure the arm with the tongue depressor is placed on the mandibula. Check the maxillary first molar to ensure it is free of dental caries, trauma, and odontogenesis.Assess the surrounding gingiva to ensure absence of redness, swelling, or fistula. Then, check the health of the opposite teeth. Next, with a dental burr, drill the occlusal side of the maxillary first molar at 20, 000 RPM.Remove the enamel. With a syringe, drop normal saline every three minutes over the tooth to prevent overheating. Put a number 8 C+file on the lowest position of the drilled pit and pierce the last dentine to expose the pulp chamber.Clean the fragments around the tooth, then remove the mouth gag. The time taken to fix the mouth with the mouth gag and to find the maxillary first molar was significantly shortened relative to the traditional method. The pulp exposure was confirmed through micro CT and reconstruction modeling.At 24 hours post-surgery, most of the pulp tissue retained its morphology.