تم دعم هذا البحث من قبل المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (82201084) ، ومؤسسة علوم ما بعد الدكتوراه الصينية (2022M722232) ، ومؤسسة بكين لأبحاث ما بعد الدكتوراه (2023-ZZ-020) ، ومشروع مياوبو لمستشفى بكين تيانتان ، وجامعة العاصمة الطبية (2023MP10) وصندوق البحوث العامة ، مجلس هونغ كونغ لمنح البحوث (27111820 و 17116521).

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الموضحة أدناه من قبل اللجنة الأخلاقية لمستشفى بكين تيانتان ، جامعة العاصمة الطبية (رقم KY2023-177-01) ، وقدم جميع المرضى المشاركين في هذه الدراسة موافقة مستنيرة.
1. معايير إدراج المريض واستبعاده
<ol><li>معايير التضمين: صنف المرضى كمرضى pSS إذا استوفوا معايير الكلية الأمريكية لأمراض الروماتيزم (ACR) / الرابطة الأوروبية لمكافحة الروماتيزم (EULAR)لعام 2016 12. على وجه التحديد ، قم بتأسيس معايير التصنيف النهائية على المجموع المرجح لخمسة عناصر: إيجابية الأجسام المضادة ل SSA / Ro والتهاب الغدد الليمفاوية البؤري مع درجة تركيز تبلغ ≥ 1 بؤرة / 4 مم2 ، كل منها يسجل 3 ؛ درجة تلطيخ العين غير الطبيعية ≥ 5 (أو درجة فان بيجسترفيلد ≥ 4) ، نتيجة اختبار شيرمر ≤ 5 مم / 5 دقائق ومعدل تدفق لعابي غير محفز ≤ 0.1 مل / دقيقة ، كل منها يسجل 1. الأفراد الذين يعانون من علامات و / أو أعراض توحي ب SS والذين لديهم درجة إجمالية قدرها ≥ 4 للعناصر المذكورة أعلاه يستوفون معايير pSS.</li>
	<li>معايير الاستبعاد: استبعاد المرضى الذين لا يستطيعون التعاون مع جمع العينات والمرضى الذين يتلقون العلاج من عدوى المبيضات عن طريق الفم. ملاحظة: من الضروري ملاحظة أن الطرق الموضحة أدناه مناسبة أيضا للتوصيف الشامل لعدوى المبيضات الفموية لدى الأفراد المصابين ب SS الثانوي.</li>
	<li>لمنع الملوثات المحتملة أثناء جمع عينات المبيضات ونقلها وزراعتها ، اتخذ احتياطات دقيقة. ويشمل ذلك التحضير التجريبي الدقيق ، واستخدام المواد ذات الاستخدام الواحد والمعقمة ، ووضع العلامات المناسبة ، والختم الآمن لأنابيب أخذ العينات ، وإجراء الإجراءات التجريبية في خزانة مهنية للسلامة الأحيائية.</li>
</ol>2. جمع العينات
<ol><li>جمع اللعاب: اطلب من المرضى حمل الأنبوب بقمع والسماح لتدفق اللعاب تدريجيا إلى الأنبوب على طول الشفة السفلى. في نهاية المجموعة ، اطلب من المريض أن يبصق كل اللعاب المتبقي في الفم في الأنبوب. جمع اللعاب لمدة 15 دقيقة.</li>
	<li>جمع غسول الفم والمسحات: إذا لم يكن لدى المريض تدفق لعاب غير محفز أو منخفض للغاية (أقل من 0.03 مل / دقيقة) ، فقم بمسح منطقة الغشاء المخاطي للفم مع عدوى المبيضات الفموية المشتبه بها 10x على الأقل ، ثم اطلب من المريض استخدام 5 مل من محلول ملحي مخزن بالفوسفات (PBS ؛ انظر جدول المواد) لشطف الفم لمدة 1 دقيقة. قم بتخزين غسول الفم في أنبوب معقم سعة 50 مل وضع المسحة في أنبوب غسول الفم. ملاحظة: بالنسبة لمرضى pSS الذين يعانون من تدفق اللعاب غير المحفز لأكثر من 0.03 مل / دقيقة ، لا يزال من الممكن استخدام الخطوة 2.2 لجمع عينات للكشف عن عدوى المبيضات عن طريق الفم.</li>
</ol>3. معالجة العينات
<ol><li>أضف 1 مل من PBS إلى اللعاب الذي تم جمعه. لا تضيف برنامج تلفزيوني إلى غسول الفم باستخدام برنامج تلفزيوني. يهتز أنبوب غسول الفم باستخدام دوامة لمدة 1 دقيقة.</li>
</ol>4. ثقافة المبيضات
<ol><li>لجعل وسط أجار سابوراند (SDA) ، قم بإذابة 70 جم SDA (انظر جدول المواد) في 1000 مل من الماء المقطر المزدوج.</li>
	<li>معقم باستخدام الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة ، طبق 10 مل من وسط SDA هذا في طبق استزراع ميكروبيولوجي 10 سم (انظر جدول المواد) ويبرد.</li>
	<li>خذ 200 ميكرولتر من العينة المحضرة في الخطوة 3 وقم بوضعها على أطباق الاستزراع الميكروبيولوجي 10 سم المحضرة ب 10 مل من وسط SDA في الخطوة 4.2.</li>
	<li>احتضان لمدة 48 ساعة عند 37 درجة مئوية ، وسوف تنضج مستعمرة المبيضات . قم بتخزين طبق SDA مؤقتا مع مستعمرات المبيضات عند 4 درجات مئوية. يمكن تخزين مستعمرات المبيضات المستزرعة على طبق SDA لمدة 2-4 أسابيع.</li>
</ol>5. تحديد سلالة المبيضات
<ol><li>لصنع الوسط ، أخرج 47.7 جم من مسحوق أجار المبيضات التشخيصي (انظر جدول المواد) ، وضعه في 1000 مل من الماء المقطر المزدوج ، وقم بتسخينه إلى 100 درجة مئوية.</li>
	<li>عندما يغلي الوسط قليلا ، ضع 10 مل في طبق استزراع ميكروبيولوجي 10 سم واتركه ليبرد.</li>
	<li>حل مستعمرات المبيضات في 500 ميكرولتر من وسط SDA (الخطوة 4) ، وتعليق وفصل عن طريق الماصة.</li>
	<li>لوحة 50 ميكرولتر من العينة مع مستعمرات المبيضات (الخطوة 5.3) على الوسط المعد في الخطوة 5.2. احتضان لمدة 48 ساعة عند 37 درجة مئوية حتى تنضج مستعمرات المبيضات .</li>
	<li>وفقا للون وأنماط مستعمرات المبيضات ، حدد سلالة (سلالات) المبيضات المكتسبة من مرضى pSS. استخدم معايير تحديد سلالة المبيضات التالية: مستعمرة الزمرد الأخضر هي المبيضات البيض ، والمستعمرة الزرقاء الرمادية هي المبيضات الاستوائية ، والمستعمرات الوردية ذات الحواف الغامضة ، والميكروفيلي هي المبيضات كروسي ، والمستعمرة الصغيرة الحمراء الأرجوانية هي المبيضات جلابراتا ، والمستعمرة البيضاء اللبنية تحتوي على عدة سلالات بما في ذلك المبيضات parapsilosis.</li>
</ol>6. مقايسة تشكيل المبيضات بيوفيلم
<ol><li>لجعل قاعدة نيتروجين الخميرة (YNB) -50 جلوكوز (جم) متوسطة ، تزن 1.34 جم YNB (انظر جدول المواد) و 1.98 جم D (+) - جلوكوز (انظر جدول المواد). تذوب في 200 مل من الماء المقطر المزدوج.</li>
	<li>لجعل YNB-100G متوسطا ، أخرج 1.34 جم YNB و 3.96 جم D (+) - جلوكوز وقم بإذابتهما في 200 مل من الماء المقطر المزدوج.</li>
	<li>قم بتصفية المحاليل باستخدام مرشح حقنة 0.22 ميكرومتر (انظر جدول المواد). يمكن تخزين وسيط YNB-50G و YNB-100G المصفى عند 4 درجات مئوية لمدة 3 أشهر.</li>
	<li>اختر 3 مستعمرات (أو أكثر) من نفس السلالة على الأطباق في الخطوة 5 وانقلها إلى 200 ميكرولتر من وسط YNB-50G (الخطوتان 6.1 و 6.3) في طبق من 96 بئرا (انظر جدول المواد). افعل ذلك للسلالات التي لوحظت في الطبق. استزرع بين عشية وضحاها عند 37 درجة مئوية مع الاهتزاز عند 200 دورة في الدقيقة.</li>
	<li>نضح تعليق المبيضات ، إضافة 1 مل من برنامج تلفزيوني ، والطرد المركزي لخلايا الخميرة في 1500 × غرام لمدة 5 دقائق في درجة حرارة الغرفة ، وتجاهل طاف. كرر هذه الخطوة 2x في نفس الأنبوب.</li>
	<li>أعد تعليق الخلايا في 1 مل من وسط YNB-100G وقم بإعداد تخفيفات مختلفة (1:10 و 1: 100 و 1: 1000) من الخلايا. خذ 200 ميكرولتر من تعليق الخلية المتدرجة وقم بوضعه على وسط SDA مقاس 10 سم بطريقة اللوحة الحلزونية13. يتم الطلاء باستخدام آلة تودع حجما معروفا من العينة على صفيحة أجار دوارة بكمية متناقصة باستمرار على شكل حلزوني أرخميدس. ثقافة لمدة 24-48 ساعة عند 37 درجة مئوية.</li>
	<li>احسب تركيز الخلايا في التخفيفات المختلفة وفقا لعدد وحدات CFU في لوحة SDA بناء على الطريقة القياسية13. عد لفترة وجيزة المستعمرات المنفصلة جيدا على كل لوحة. عد المستعمرات في أوكتان واحد من الحافة الخارجية باتجاه المركز حتى يتم ملاحظة 25 مستعمرة على الأقل. أيضا ، احسب ما تبقى من هذا القوس حيثحدث العد 25. احسب تركيز الخلايا بقسمة عدد المستعمرات على حجم السائل المقابل للمنطقة التي تم الحصول على عدد المستعمراتعليها 13. اضبط تركيز الخلايا على 1 × 107 خلايا / مل.</li>
	<li>ضع 100 ميكرولتر من معلق الخلية في YNB-100G في لوحة 96 بئرا واحتضانها عند 37 درجة مئوية لمدة 2 ساعة أثناء الاهتزاز عند 200 دورة في الدقيقة.</li>
	<li>أخرج بحذر المادة الطافية ، واغسل 2x باستخدام برنامج تلفزيوني ، وابتعد عن خلايا الخميرة العائمة. يتشكل الغشاء الحيوي المبيضات في الجزء السفلي من لوحة 96 بئرا.</li>
</ol>7. مقايسة تشكيل Hyphal
ملاحظة: فقط المبيضات التي يمكن أن تشكل خيوط (مثل المبيضات البيض) يمكن أن تحفز لتشكيل hyphal. انتقل إلى الخطوة 8 لمزيد من توصيف المبيضات التي لا يمكن أن تشكل خيوط (مثل المبيضات glabrata).
<ol><li>أعد تعليق تعليق خلية الخميرة في الخطوة 6.6 واضبط تركيز الخلية على 1 × 106 خلايا / مل باستخدام وسيط YNB-100G.</li>
	<li>لتحضير وسط النمو الكامل RPMI 1640 ، أضف 50 مل من مصل الجنين البقري (انظر جدول المواد) إلى 450 مل من وسط RPMI 1640 (انظر جدول المواد) واحفظه عند 4 درجات مئوية لمزيد من التجارب.</li>
	<li>نقل 2 ميكرولتر من معلق خلية المبيضات المخفف في 200 ميكرولتر من وسط النمو الكامل RPMI 1640 إلى صفيحة 96 بئرا ومزرعة طوال الليل عند 37 درجة مئوية للسماح للخيوط الفطرية وخلايا الخميرة بالتكون.</li>
</ol>8. اختبار مسحة KOH ومقايسة تلطيخ CFW
<ol><li>أخرج 1 ميكرولتر من العينات من الخطوة 3 أو الخطوة 6 أو الخطوة 7 باستخدام حلقة مصبوبة بدقة (انظر جدول المواد) وقم بتلطيخ مساحة 1 سم × 1 سم على الشرائح الزجاجية. انتظر حتى يجف في درجة حرارة الغرفة.</li>
	<li>لصنع محلول KOH بنسبة 10٪ ، قم بوزن 10 جم من مسحوق KOH (انظر جدول المواد) وقم بإذابته في 100 مل من الماء المقطر المزدوج.</li>
	<li>سخني الشريحة قليلا باستخدام مصباح كحول حتى تذوب العينة. قم بتلطيخ الشرائح المعدة في الخطوة 8.1 بنسبة 10٪ KOH (الخطوة 8.2) ، وقم بتغطيتها بقسيمة غطاء. اضغط قليلا على انزلاق الغطاء لجعل العينة شفافة.</li>
	<li>تصور خلايا الخيوط والخميرة تحت المجهر.</li>
	<li>قم بتلطيخ الشرائح المحضرة في الخطوة 8.1 مع قطرة من CFW (انظر جدول المواد) ، وقم بتغطيتها بغطاء ، وانتظر لمدة دقيقة واحدة.</li>
	<li>تصور الخيوط باستخدام مجهر مضان عند تكبير 100x و 200x. CFW متحمس عند 355 نانومتر ويتم اكتشافه عند 300-440 نانومتر. صور الصور تحت وقت التعرض. كرر 3x لتجنب النتائج الإيجابية الخاطئة.</li>
</ol>9. اختبار الحساسية للفطريات
ملاحظة: يتم إجراء هذا الاختبار وفقا لتعليمات الشركة المصنعة لمجموعة الحساسية الفطرية الشبيهة بالخميرة (التخفيف الدقيق ؛ انظر جدول المواد).
<ol><li>قم بإعداد مستعمرات المبيضات (الخطوة 4) التي يقل عمرها عن 4 أيام باستخدام أمبولة كلوريد الصوديوم 0.85٪ (انظر جدول المواد) والحصول على التعليق الذي له تعكر يعادل 2 McFarland. حدد التعكر وفقا لمجموعة معايير McFarland (انظر جدول المواد). استخدم تعليق المبيضات المحضر على الفور.</li>
	<li>ماصة 135 ميكرولتر من وسط ATB F2 في المجموعة التي تحتوي على 3 × 104 خلايا خميرة / مل في كل قبة في شريط الاختبار ووضع الغطاء. ضع شريط الاختبار في حاوية مغلقة. ثقافة لمدة 24 ساعة عند 35 درجة مئوية.</li>
	<li>مراقبة نمو المبيضات مع التفسير البصري (الرجوع إلى دليل المستخدم). للحصول على القيمة المرجعية (النطاق المرجعي)، راجع دليل المستخدم. تحقق مما إذا كانت فتحة التحكم تنمو بشكل كاف. إذا كان نمو فتحة التحكم غير كاف أو لا ينمو ، فلا يمكن قراءة النتائج وتحتاج إلى 24 ساعة أخرى من الزراعة.</li>
</ol>

تشخيص وتحديد سلالة المبيضات الفموية ذات الصلة pSS

<ol>
	<li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbiota+dysbiosis+in+primary+Sj&#246;gren's+syndrome+and+the+ameliorative+effect+of+hydroxychloroquine.">Microbiota dysbiosis in primary Sj&#246;gren's syndrome and the ameliorative effect of hydroxychloroquine.</a> Cell Rep. 40 (11), 111352 (2022).</li><li>Humphrey, S. P., Williamson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+saliva:+normal+composition,+flow,+and+function.">A review of saliva: normal composition, flow, and function.</a> J Prosthet Dent. 85 (2), 162-169 (2001).</li><li>Marsh, P. D., Do, T., Beighton, D., Devine, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+saliva+on+the+oral+microbiota.">Influence of saliva on the oral microbiota.</a> Periodontol 2000. 70 (1), 80-92 (2016).</li><li>Vila, T., Rizk, A. M., Sultan, A. S., Jabra-Rizk, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+power+of+saliva:+Antimicrobial+and+beyond.">The power of saliva: Antimicrobial and beyond.</a> PLoS Pathog. 15 (11), e1008058 (2019).</li><li>Serrano, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+related+to+oral+candidiasis+in+patients+with+primary+Sj&#246;gren's+syndrome.">Risk factors related to oral candidiasis in patients with primary Sj&#246;gren's syndrome.</a> Med Oral Patol Oral Cir Bucal. 25 (5), e700-e705 (2020).</li><li>Nape&#241;as, J. J., Rouleau, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+complications+of+Sj&#246;gren's+syndrome.">Oral complications of Sj&#246;gren's syndrome.</a> Oral Maxillofac Surg Clin North Am. 26 (1), 55-62 (2014).</li><li>Mathews, S. A., Kurien, B. T., Scofield, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+manifestations+of+Sj&#246;gren's+syndrome.">Oral manifestations of Sj&#246;gren's syndrome.</a> J Dent Res. 87 (4), 308-318 (2008).</li><li>Leung, K. C. M., McMillan, A. S., Cheung, B. P. K., Leung, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sj&#246;gren's+syndrome+sufferers+have+increased+oral+yeast+levels+despite+regular+dental+care.">Sj&#246;gren's syndrome sufferers have increased oral yeast levels despite regular dental care.</a> Oral Dis. 14 (2), 163-173 (2008).</li><li>Lundstrom, I. M., Lindstrom, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subjective+and+clinical+oral+symptoms+in+patients+with+primary+Sj&#246;gren's+syndrome.">Subjective and clinical oral symptoms in patients with primary Sj&#246;gren's syndrome.</a> Clin Exp Rheumatol. 13 (6), 725-731 (1995).</li><li>Alam, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+identification:+a+journey+from+conventional+to+molecular+methods+in+medical+mycology.">Candida identification: a journey from conventional to molecular methods in medical mycology.</a> World J Microbiol Biotechnol. 30 (5), 1437-1451 (2014).</li><li>Bauters, T. G., Nelis, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+chromogenic+and+fluorogenic+membrane+filtration+methods+for+detection+of+four+Candida+species.">Comparison of chromogenic and fluorogenic membrane filtration methods for detection of four Candida species.</a> J Clin Microbiol. 40 (5), 1838-1839 (2002).</li><li>Soto-Rojas, A. E., Villa, A. R., Sifuentes-Osornio, J., Alarc&#243;n-Segovia, D., Kraus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+candidiasis+and+Sj&#246;gren's+syndrome.">Oral candidiasis and Sj&#246;gren's syndrome.</a> J Rheumatol. 25 (5), 911-915 (1998).</li><li>Gilchrist, J. E., Campbell, J. E., Donnelly, C. B., Peeler, J. T., Delaney, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spiral+plate+method+for+bacterial+determination.">Spiral plate method for bacterial determination.</a> Appl Microbiol. 25 (2), 244-252 (1973).</li><li>Biomerieux. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ATB+FUNGUS+3+Sensitivity+test+for+yeast-like+fungi.+REF+14204.">ATB FUNGUS 3 Sensitivity test for yeast-like fungi. REF 14204.</a> Biomerieux. , (2014).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+widely+used+ATB+FUNGUS+3+automated+readings+in+China+and+its+misleading+high+MICs+of+Candida+spp.+to+Azoles:+Challenges+for+developing+countries'+clinical+microbiology+labs.">The widely used ATB FUNGUS 3 automated readings in China and its misleading high MICs of Candida spp. to Azoles: Challenges for developing countries' clinical microbiology labs.</a> PLoS One. 9 (12), e114004 (2014).</li><li>Hu, L., Zhou, P., Zhao, W., Hua, H., Yan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+staining+vs.+routine+KOH+smear+for+rapid+diagnosis+of+oral+candidiasis-A+diagnostic+test.">Fluorescence staining vs. routine KOH smear for rapid diagnosis of oral candidiasis-A diagnostic test.</a> Oral Dis. 26 (5), 941-947 (2020).</li><li>Samaranayake, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+krusei+infections+and+fluconazole+therapy.">Candida krusei infections and fluconazole therapy.</a> Hong Kong Med J. 3 (3), 312-314 (1997).</li><li>Lee, Y., Puumala, E., Robbins, N., Cowen, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antifungal+drug+resistance:+Molecular+mechanisms+in+Candida+albicans+and+beyond.">Antifungal drug resistance: Molecular mechanisms in Candida albicans and beyond.</a> Chem Rev. 121 (6), 3390-3411 (2021).</li><li>Rihab, B., Lina, E. H., No&#233;mie, S. T., Jean, S., Marjolaine, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+experience+of+dry+mouth+and+screening+for+Sjogren's+syndrome+by+the+dentist:+patient-reported+experiences.">The experience of dry mouth and screening for Sjogren's syndrome by the dentist: patient-reported experiences.</a> BMC Oral Health. 23 (1), 1010 (2023).</li><li>Panpetch, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oral+Candida+administration+in+a+Clostridium+difficile+mouse+model+worsens+disease+severity+but+is+attenuated+by+Bifidobacterium.">Oral Candida administration in a Clostridium difficile mouse model worsens disease severity but is attenuated by Bifidobacterium.</a> PLoS One. 14 (1), e210798 (2019).</li><li>Alwaily, E. R., Abood, M. S., Al Uobody, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+of+oral+candidiasis+in+patients+under+12+years:+18S+rRNA+as+a+marker+of+molecular+characterization+of+Candida+tropicalis.">Diagnosis of oral candidiasis in patients under 12 years: 18S rRNA as a marker of molecular characterization of Candida tropicalis.</a> Arch Razi Inst. 78 (1), 475-483 (2023).</li><li>Chen, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Candida+infection+as+an+early+sign+of+subsequent+Sj&#246;gren's+syndrome:+A+population-based+matched+cohort+study.">Candida infection as an early sign of subsequent Sj&#246;gren's syndrome: A population-based matched cohort study.</a> Front Med (Lausanne). 8, 796324 (2022).</li></ol>

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإعلان عنه.

في المخطوطة الحالية ، نقدم سلسلة من الطرق المنهجية والبسيطة والممكنة للكشف عن عدوى المبيضات الفموية ، وتحديد سلالات المبيضات ، واختبار الحساسية المضادة للفطريات للأدوية شائعة الاستخدام في المرضى الذين يعانون من pSS. 
في الإعدادات العملية ، ليست كل الطرق المقدمة ف?...

المبيضات سببها المبيضات النيابة، والتي هي مسببات الأمراض الانتهازية. تشمل السلالات الشائعة المبيضات البيض ، المبيضات كروسي ، المبيضات غلابراتا ، المبيضات parapsilosis ، والمبيضات دبلينينسيس1. تشمل العدوى الانتهازية التي تسببها المبيضات التهابات المبيضات السطحية وداء المبيضات الغازي. داء المبيضات الغازية يحدث بشكل رئيسي في الأفراد الذين يعانون من نقص المناعة. على سبيل المثال ، في المرضى الذين يعانون من متلازمة نقص المناعة المكتسب (الإيدز) ، يمكن أن يهدد داء المبيضات الغازي بشكل كبير نوعية الحياة أو حتى العمرالافتراضي 2. عدوى المبيضات السطحية ، مثل داء المبيضات المخاطي الجلدي ، أكثر شيوعا في المرضى3. 
داء المبيضات الفموي ، عدوى المبيضات السطحية ، هو العدوى الفطرية البشرية الأكثر شيوعا. المبيضات البيض هو متعايش طبيعي للفم. تم الإبلاغ عن أن معدل نقل المبيضات spp. يتراوح من 20٪ إلى 75٪ في عموم السكان دون أي أعراض4. يمكن أن يؤدي فرط نمو المبيضات إلى عدم الراحة المحلية لدى المرضى ، مثل تغير طعم الإحساس ، والإحساس بالحرقة في الفم ، وعسر البلع بسبب سوء التغذية ، وتأخر الشفاء ، والإقامة الطويلة في المستشفى. يمكن أن يؤدي داء المبيضات الفموي طويل الأمد إلى داء المبيضات الغازي الشديد ، مما يؤدي إلى مراضة ووفيات كبيرة5. داء المبيضات الفموي يمكن أن يزيد أيضا من خطر الإصابة بسرطان الفم5. ضعف وظيفة الغدد اللعابية هو من بين عوامل الخطر لداء المبيضات الفموي6. بدء العدوى هو التصاق المبيضات بجدران الخلايا الظهارية. ويلي ذلك انتشار وخيوط المبيضات وتشكيل ونضج الغشاء الحيوي7. من الصعب للغاية القضاء على الأغشية الحيوية وهي مقاومة للعلاج التقليدي المضاد للفطريات ، مما يجعل العلاج السريري تحديا لعدوى المبيضات الفموية المرتبطة بالأغشية الحيوية7.
متلازمة سجوجرن الأولية (pSS) هي أحد أمراض المناعة الذاتية التي تتميز بجفاف الفم وجفاف العين وأعراض منهجية أخرى8. جفاف الفم هو أكثر أعراض pSS شيوعا. اللعاب له وظائف فسيولوجية مهمة مضادة للفطريات. من ناحية ، يمكن أن يخفف وينظف الفم وبعد ذلك يزيل الكائنات الحية من الغشاء المخاطي. من ناحية أخرى ، يحتوي اللعاب على بروتينات مضادة للميكروبات ، مثل اللاكتوفيرين ، سيالوبيروكسيديز ، الليزوزيم ، الببتيدات الغنية بالهيستيدين ، والأجسام المضادة المضادة المضادة للفحم ، والتي يمكن أن تتفاعل مع الغشاء المخاطي للفم وتمنع فرط نمو المبيضات6. قد يؤدي انخفاض تدفق اللعاب إلى تعريض مرضى pSS لداء المبيضات الفموي. وجدت دراسة مقطعية قائمة على الملاحظة أجريت على 61 مريضا من مرضى pSS أن 13.1٪ من مرضى pSS قدموا علامات فموية لداء المبيضات ووحدة تشكيل المستعمرة (CFU) / مل من المبيضات البيض تم العثور عليها بشكل كبير وسلبي مع مستويات اللعاب الكامل غير المحفز (UWS) واللعاب الكامل المحفز (SWS) 9.
يمكن للطرق المقدمة في هذه المخطوطة تحديد عدوى المبيضات الفموية بناء على السمات المورفولوجية المميزة (على سبيل المثال ، خلايا الخيوط والخميرة) في اللطاخة المباشرة أو بعد زراعة10. يعتمد تحديد سلالة المبيضات باستخدام أجار تشخيص المبيضات على تكوين مستعمرات ملونة مختلفة ذات مورفولوجيا متنوعة ، والتي تنتج عن انقسام ركائز كروموجينية بواسطة إنزيمات خاصة بالأنواع11. في هذه المخطوطة ، يتم تقديم طرق منهجية للكشف عن عدوى المبيضات الفموية ، بما في ذلك زراعة المبيضات الفموية التقليدية والفحص السريع عن طريق اختبار مسحة هيدروكسيد البوتاسيوم (KOH) ومقايسة تلطيخ الكالكوفلور الأبيض (CFW)10. بالإضافة إلى ذلك ، تم تقديم اختبار الحساسية للفطريات ، والذي يمكن أن يوجه علاج عدوى المبيضات عن طريق الفم السريري. في الحالات الفعلية ، ليس من الضروري تنفيذ جميع الأساليب المقدمة في هذه المخطوطة. يمكن اختيار طريقة (طرق) الكشف عن المبيضات عن طريق الفم وفقا للغرض. إن فحص عدوى المبيضات الفموية وتحديد سلالات المبيضات في مرضى pSS لا يفيد علاج المرض فحسب ، بل يساعد أيضا في تقييم توصيف داء المبيضات الفموي وملامح الأنواع.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.22 &#181;m Syringe Filter</td>
			<td>MERCK</td>
			<td>SLGV004SL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5 mL Centrifuge Tube</td>
			<td>axygen</td>
			<td>MCT-150-C-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 cm Microbiological Culture Dishes</td>
			<td>Jet Bio-Filtration Co. Ltd</td>
			<td>TCD000100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Jet Bio-Filtration Co., Ltd</td>
			<td>CFT011150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL Centrifuge Tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430290</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well Microplates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3599</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>API 0.85% NaCl ampule</td>
			<td>BIOMERIEUX</td>
			<td>20070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcofluor White Stain</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>18909-100ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHROMagar Candida</td>
			<td>CHROMagar</td>
			<td>P002860</td>
			<td>Candida diagnostic agar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D(+)-Glucose Monohydrate</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co.,Ltd</td>
			<td>10010518</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26170035</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>McFarland Standards Kit</td>
			<td>BIOMERIEUX</td>
			<td>70900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nunc precision molded loops&#160;</td>
			<td>ThermoFisher Scientific</td>
			<td>254399</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C10010500BT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium Hydroxide</td>
			<td>Aladdin</td>
			<td>P112284-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerSoil DNA Isolation Kit&#160;</td>
			<td>MO BIO</td>
			<td>12888-50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Medium</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11875119</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sabourand&#39;s Agar Medium</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>S9710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast Nitrogen Base Without Amino acids</td>
			<td>Solarbio</td>
			<td>Y8040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Yeast-like Fungal Susceptibility Kit (Microdilution)</td>
			<td>BIOMERIEUX</td>
			<td>14204</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

examination of oral candida infection in primary sj&#246;gren&#39;s syndrome patients

متلازمة سجوجرن الأولية (pSS) هي أحد أمراض المناعة الذاتية التي تتميز بأعراض مثل جفاف الفم وجفاف العين وأعراض منهجية أخرى. بسبب نقص اللعاب الذي يعاني منه مرضى pSS ، غالبا ما يحدث دسباقتريوز الفم. المضاعفات الشائعة ل pSS هي عدوى المبيضات الفموية. في هذه المقالة ، يصف المؤلفون طرقا منهجية يمكنها تشخيص عدوى المبيضات الفموية بشكل فعال وتحديد سلالات المبيضات باستخدام اللعاب أو مسحات الغشاء المخاطي للفم أو غسول الفم من مرضى pSS. يتم استخدام أجار سكر العنب من Sabouraud (SDA) ، ومقايسة تكوين hyphal ، واختبار مسحة هيدروكسيد البوتاسيوم (KOH) ، ومقايسة تلطيخ الكالكوفلور الأبيض (CFW) لتشخيص عدوى المبيضات عن طريق الفم. يستخدم أجار تشخيص المبيضات لتحديد سلالات المبيضات . أخيرا ، يتم استخدام اختبار الحساسية للفطريات لتحديد العلاج المناسب للفطريات. يمكن أن تعزز هذه الطريقة الموحدة التشخيص والعلاج والبحث المستقبلي لعدوى المبيضات الفموية المرتبطة ب pSS. التشخيص المبكر ، باستخدام هذه الطريقة ، يمكن أن يمنع أيضا أي مضاعفات تنشأ بسبب التأخير في تلقي العلاج المناسب.

Candidiasis is caused by Candida spp., which are opportunistic pathogens. Common strains include Candida albicans, Candida krusei, Candida glabrata, Candida parapsilosis, and Candida dubliniensis1. Opportunistic infections caused by Candida spp. include superficial Candida infections and invasive candidiasis. Invasive candidiasis mainly happens in immunocompromised individuals; for example, in patients with acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), invasive candidiasis can significantly threaten the quality of life or even the life span2. Superficial Candida infection, such as mucocutaneous candidiasis, is more common in patients3. 
Oral candidiasis, a superficial Candida infection, is the most common human fungal infection. Candida albicans is a normal commensal of the mouth; the carriage rate of Candida spp. has been reported to range from 20% to 75% in the general population without any symptoms4. Overgrowth of Candida can lead to local discomfort in patients, such as the altered taste of sensation, burning sensation in the mouth, dysphagia due to poor nutrition, delayed recovery, and prolonged hospital stay. Long-term oral candidiasis can lead to severe invasive candidiasis, resulting in significant morbidity and mortality5. Oral candidiasis can also increase the risk of oral cancer5. Impaired salivary gland function is among the risk factors for oral candidiasis6. The initiation of infection is the adhesion of Candida to epithelial cell walls. This is followed by the proliferation and filamentation of Candida and the formation and maturation of biofilm7. Biofilms are extremely difficult to eradicate and are resistant to conventional antifungal treatment, making clinical treatment a challenge for biofilm-associated oral Candida infection7.
Primary Sj&#246;gren's syndrome (pSS) is an autoimmune disease that is characterized by dry mouth, dry eyes, and other systematic symptoms8. Dry mouth is the most frequent symptom of pSS. Saliva has important physiological antifungal functions. On the one hand, it can dilute and scour the mouth and thereafter remove organisms from the mucosa. On the other hand, saliva contains antimicrobial proteins, such as lactoferrin, sialoperoxidase, lysozyme, histidine-rich polypeptides, and specific anti-candidal antibodies, which can interact with the oral mucosa and prevent the overgrowth of Candida6. The reduced saliva flow may predispose pSS patients to oral candidiasis. An observational cross-sectional study conducted in 61 pSS patients found that 13.1% of pSS patients presented oral signs of candidiasis and colony forming unit (CFU)/mL of Candida albicans was found significantly and negatively correlated with levels of unstimulated whole saliva (UWS) and stimulated whole saliva (SWS)9.
The methods introduced in this manuscript can identify oral Candida infection based on characterized morphological attributes (e.g., the hyphae and yeast cells) in direct smear or after culturing10. The strain identification of the Candida using a Candida diagnostic agar is based on the formation of different colored colonies with varied morphology, which result from the cleavage of chromogenic substrates by species-specific enzymes11. In this manuscript, systematic methods for detecting oral Candida infection are introduced, including traditional oral Candida culture and rapid examination by potassium hydroxide (KOH) smear test and calcofluor white (CFW) staining assay10. Additionally, the antifungal susceptibility test, which can guide clinical oral Candida infection treatment, has been introduced. In actual situations, it is not necessary to perform all of the introduced methods in this manuscript; the oral Candida detection method(s) can be selected according to the purpose. The examination of oral Candida infection and the determination of Candida strains in pSS patients not only benefit the disease treatment but also help assess the characterization of oral candidiasis and the species profiles.

تسليط الضوء على المؤلف: تشخيص المبيضات عن طريق الفم لتعزيز نظام العلاج السريري لمرضى pSS

فحص عدوى المبيضات الفموية في مرضى متلازمة سجوجرن الأولية

In this research, we present a protocol for the examination of oral candida infection in patients with primary Sjogren syndrome, which can be used for timely treatment to avoid infection-related complications. We provide a series of systematic, simple, and feasible methods for detecting oral candida infections, identifying candida strains, and testing the antifungal susceptibility of commonly-used drugs in patients with primary Sjogren's syndrome. Maybe our focus on the role of oral candida infection in the onset and the progression of primary Sjogren's syndrome pathologists in our future studies.

في هذه الدراسة ، تم اختيار 12 مريضا يعانون من pSS كمرضى تمثيليين وتم فحصهم بحثا عن عدوى المبيضات الفموية (الجدول 1). من بين هؤلاء المرضى ، أظهر بعض المرضى آفات فموية نموذجية لعدوى المبيضات ، بما في ذلك التهاب الشفة الزاوي (الذي يتميز بتشققات في زوايا الفم ، والتقشر ، واحتقان ?...

Watch this Scientific Journal Video about Author Spotlight: Oral Candida Diagnosis to Advance Clinical Treatment Regimen for pSS Patients at JoVE.com

هنا ، نقدم بروتوكولا لفحص عدوى المبيضات عن طريق الفم في المرضى الذين يعانون من متلازمة سجوجرن الأولية ، والتي يمكن استخدامها للعلاج في الوقت المناسب ، وبعد ذلك ، تجنب المضاعفات ذات الصلة.

Primary Sj&#246;gren's syndrome (pSS) is an autoimmune disease characterized by symptoms such as dry mouth, dry eyes, and other systematic symptoms. Due ...

في هذا البحث ، نقدم بروتوكولا لفحص عدوى المبيضات الفموية في المرضى الذين يعانون من متلازمة شوغرن الأولية ، والتي يمكن استخدامها للعلاج في الوقت المناسب لتجنب المضاعفات المرتبطة بالعدوى. نحن نقدم سلسلة من الطرق المنهجية والبسيطة والممكنة للكشف عن عدوى المبيضات الفموية ، وتحديد سلالات المبيضات ، واختبار الحساسية المضادة للفطريات للأدوية شائعة الاستخدام في المرضى الذين يعانون من متلازمة سجوجرن الأولية. ربما تركيزنا على دور عدوى المبيضات عن طريق الفم في بداية وتطور علماء أمراض متلازمة سجوجرن الأولية في دراساتنا المستقبلية.

examination-oral-candida-infection-primary-sjgren-s-syndrome

Research

JoVE Journal

Medicine

Examination of Oral Candida Infection in Primary Sj&#246;gren&#39;s Syndrome Patients

570 Views.  Capital Medical University. في هذا البحث ، نقدم بروتوكولا لفحص عدوى المبيضات الفموية في المرضى الذين يعانون من متلازمة شوغرن الأولية ، والتي يمكن استخدامها للعلاج في الوقت المناسب لتجنب المضاعفات المرتبطة بالعدوى. نحن نقدم سلسلة من الطرق المنهجية والبسيطة والممكنة للكشف عن عدوى المبيضات الفموية ، و...

Video: تسليط الضوء على المؤلف: تشخيص المبيضات عن طريق الفم لتعزيز نظام العلاج السريري لمرضى pSS

Primary Sj&#246;gren's syndrome (pSS) is an autoimmune disease characterized by symptoms such as dry mouth, dry eyes, and other systematic symptoms. Due to the hyposalivation experienced by pSS patients, oral dysbacteriosis often occurs. A common complication of pSS is the oral Candida infection. In this article, the authors describe systematic methods that can effectively diagnose oral Candida infection and identify the Candida strains using saliva, oral mucosal swabs, or mouthwash from pSS patients. The Sabouraud's Dextrose Agar (SDA), hyphal formation assay, potassium hydroxide (KOH) smear test, and calcofluor white (CFW) staining assay are used for the diagnosis of oral Candida infection. A Candida diagnostic agar is used for the identification of Candida strains. Finally, antifungal susceptibility testing is used to determine appropriate antifungal drug treatment. This standardized method can enhance the diagnosis, treatment, and future research of pSS-related oral Candida infections. Early diagnosis, using this method, can also prevent any complications arising due to delay in receiving appropriate treatment.

Here, we present a protocol for the examination of oral Candida infection in patients with primary Sj&#246;gren's syndrome, which can be used for timely treatment and, thereafter, avoiding related complications.

Sample Collection for Diagnosis of Oral Candida in pSS Patients

To begin, select the participants based on the framed inclusion criteria. For saliva collection, instruct the patient to hold the tube with a funnel and let the saliva flow gradually into the tube along the lower lip for 15 minutes. At the end, ask the participant to spit all the remaining saliva into the tube.In case of low, unstimulated saliva flow, swab the oral mucosa in infection-suspected areas at least 10 times, and let the patient rinse their mouth with five milliliters of PBS for one minute. Then collect the mouthwash in a 50-milliliter sterile tube and put the swab into it. Add one milliliter of PBS to the collected saliva and vortex the tube for one minute.