Badanie zakażenia Candida w jamie ustnej u pacjentów z pierwotnym zespołem Sjögrena

W niniejszym badaniu przedstawiono protokół badania doustnego zakażenia Candida u pacjentów z pierwotnym zespołem Sjögrena, który można zastosować do szybkiego leczenia w celu uniknięcia powikłań związanych z infekcją. Oferujemy szereg systematycznych, prostych i wykonalnych metod wykrywania zakażeń Candida w jamie ustnej, identyfikacji szczepów Candida oraz badania wrażliwości przeciwgrzybiczej powszechnie stosowanych leków u pacjentów z pierwotnym zespołem Sjögrena. Być może koncentrujemy się na roli doustnego zakażenia kandydata na początek i progresję pierwotnych patologów zespołu Sjögrena w naszych przyszłych badaniach.

Aby rozpocząć, wybierz uczestników na podstawie obramowanych kryteriów włączenia. W celu pobrania śliny poinstruuj pacjenta, aby trzymał rurkę z lejkiem i pozwalał, aby ślina stopniowo spływała do rurki wzdłuż dolnej wargi przez 15 minut. Na koniec poproś uczestnika, aby wypluł całą pozostałą ślinę do probówki.

W przypadku niskiego niestymulowanego przepływu śliny, należy pobrać wymaz z błony śluzowej jamy ustnej w miejscach podejrzanych o zakażenie co najmniej 10 razy i pozwolić pacjentowi przepłukać usta pięcioma mililitrami PBS przez jedną minutę. Następnie zbierz płyn do płukania jamy ustnej do sterylnej probówki o pojemności 50 mililitrów i włóż do niej wacik. Dodaj jeden mililitr PBS do zebranej śliny i wiruj probówkę przez jedną minutę.

Na początek pobierz próbkę śliny pacjenta w PBS. Rozpuść 7 gramów proszku agarowego SD w 100 mililitrach podwójnie destylowanej wody. Za pomocą autoklawu sterylizuj pożywkę w temperaturze 121 stopni Celsjusza przez 15 minut.

Wlej około 10 mililitrów pożywki do 10-centymetrowego naczynia do hodowli mikrobiologicznej i pozwól mu ostygnąć. Następnie rozprowadź 200 mikrolitrów próbki śliny na powierzchni agaru i inkubuj przez 48 godzin w temperaturze 37 stopni Celsjusza. Aby przygotować pożywkę diagnostyczną Candida, wymieszaj 4,77 grama proszku ze 100 mililitrami podwójnie destylowanej wody.

Podgrzej mieszaninę do 100 stopni Celsjusza, aż osiągnie lekkie wrzenie. Następnie dozuj około 10 mililitrów pożywki do każdego 10-centymetrowego naczynia do hodowli mikrobiologicznej i pozwól mu się zestalić. Następnie przenieś kolonie Candida do 500 mikrolitrów pożywki SD i dokładnie je zawiesij za pomocą pipety.

Umieścić 50 mikrolitrów zawiesiny na agarze diagnostycznym i inkubować płytkę w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 48 godzin. Na koniec zidentyfikuj szczepy z dojrzałych kolonii, używając określonego koloru i wzoru kolonii. Test identyfikacji szczepu Candida przy użyciu agaru diagnostycznego Candida wykazał, że pacjenci z pierwotnym zespołem Sjögrena mieli infekcje jamy ustnej Candida albicans, Candida glabrata i Candida albicans plus Candida krusei.

Na początek pobierz próbkę śliny pacjenta w PBS. Za pomocą precyzyjnie uformowanej pętli rozsmaruj próbkę na szklanym szkiełku i pozostaw do wyschnięcia w temperaturze pokojowej. W międzyczasie rozpuść 10 gramów wodorotlenku potasu w 100 mililitrach podwójnie destylowanej wody.

Następnie podgrzej szkiełko lampą alkoholową i zabarwij je 10% wodorotlenkiem potasu. Przykryj próbkę szkiełkiem nakrywkowym i lekko dociśnij, aby stała się przezroczysta. Za pomocą mikroskopu wizualizuj strzępki i komórki drożdży.

W przypadku testu barwienia CFW zabarwić rozmazane szkiełko kroplą CFW. Przykryj go szkiełkiem nakrywkowym i odłóż na minutę. Wizualizuj strzępki za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego i powtórz trzy razy.

Badanie wymazu wodorotlenku potasu u pacjentów z pierwotnym zespołem Sjögrena w próbkach z jamy ustnej wykazało obecność strzępek Candida, a barwienie CFW potwierdziło istnienie strzępek i zarodników grzybów.