نحن نعترف بمساهمات المونسنيور Ondřej Šebesta (مرفق Vinicna Microscopy Core ، كلية العلوم ، جامعة تشارلز) لمسح الشرائح بالكامل ومشروع "e-Infrastruktura CZ" (e-INFRA LM2018140) ، الذي زودنا بالموارد الحسابية لهذه الدراسة. تم الاعتراف بالفنيين يانا دوسوديلوفا وجان جافوريك لمساعدتهم الفنية الممتازة. تم تمويل هذا البحث من قبل برنامج البحث والابتكار Horizon 2020 التابع للاتحاد الأوروبي ، المنحة رقم 856620 ، ووزارة الصحة في جمهورية التشيك ، منحة AZV NU21-03-00506 ، وبرنامج Cooperatio (التخصصات الجراحية). ويشترك في تمويل مرفق فينيكنا المجهري الأساسي مشروع الاستشعار المجهري الكبير LM2023050 التابع لشركة Czech-BioAging.

كان هذا البروتوكول جزءا من دراسة أجريت وفقا للمعايير الأخلاقية المنصوص عليها في إعلان هلسنكي (إصدار 2013) ؛ تمت الموافقة عليه من قبل لجنة الأخلاقيات بكلية الطب والمستشفى الجامعي في بلسن (118/2021 ، 11 مارس 2021). يوضح الشكل 1 ملخصا للطرق المستخدمة.
1. اختيار كتل الأنسجة FFPE
<ol><li>استرجع معرفات كتلة FFPE من ملفات المرضى بمساعدة الأطباء المعالجين أو أخصائيي علم الأمراض.</li>
	<li>اطلب كتل FFPE من أرشيف علم الأمراض المحلي.</li>
	<li>لكل مريض ، حدد 2-3 كتل FFPE تحتوي على أنسجة ورم قابلة للحياة ، بشكل تفضيلي مع منطقة الورم المحيطة والكبد غير الورم. ملاحظة: ينصح بالحصول على رأي أخصائي علم الأمراض لهذا الاختيار. تم استخدام التقييم النسيجي للكبد غير الورمي ، جنبا إلى جنب مع البيانات السريرية والمخبرية لتحديد المسببات الأساسية لسرطان الكبد.</li>
</ol>2. إزالة البارافين والإماهة من أنسجة FFPE
<ol><li>قطع واحد أو اثنين من أقسام الأنسجة بسمك 4 ميكرومتر من كل من كتل الأنسجة FFPE على ميكروتوم. ملاحظة: يمكن أن يتراوح سمك المقاطع بين 3 ميكرومتر و 5 ميكرومتر دون تأثير تلطيخ ملحوظ ؛ ومع ذلك ، فإن سمك 4 ميكرومتر هو المعيار.</li>
	<li>ضع الأقسام في حمام مائي (42 درجة مئوية) لإزالة التجاعيد.</li>
	<li>قم بتركيب الشرائح عن طريق التقاطها ووضعها على شريحة مجهرية زجاجية موجبة الشحنة. ثم قم بتطبيق الشرائح للتجفيف في درجة الحرارة المحيطة (AT) لمدة 24 ساعة.</li>
	<li>ضع الشرائح في ترموستات (56 درجة مئوية) لمدة 1 ساعة.</li>
	<li>استخدم autostainer لإزالة البارافين من الأقسام في محلول إزالة الشمع -1 (30 ثانية عند 72 درجة مئوية) ، محلول إزالة الشمع -2 (10 ثوان عند 72 درجة مئوية) ، محلول إزالة الشمع -3 (10 ثوان عند AT) ، الإيثانول 96٪ -1 (10 ثوان) ، الإيثانول 96٪ -2 (10 ثوان) ، والإيثانول 96٪ -3 (10 ثوان).</li>
	<li>استخدم ملطخا تلقائيا لإعادة ترطيب الأقسام في محلول الغسيل -1 (10 ثوان ، AT) ، ومحلول الغسيل -2 (10 ثوان ، AT) ، ومحلول الغسيل -3 (5 دقائق ، AT).</li>
</ol>3. أداء IHC في ملطخ مؤتمت بالكامل
ملاحظة: يتم تنفيذ IHC وفقا لبروتوكول الشركة المصنعة. الخطوات موضحة بإيجاز أدناه.
<ol><li>طريقة استرجاع المستضد<ol><li>استرجع المستضد باستخدام إجراء استرجاع الحواتم المستحثة بالحرارة (ER) في محلول ER بدرجة حموضة عالية (على سبيل المثال ، Tris-EDTA): محلول ER-1 (10 ثوان ، AT) ، محلول ER -2 (10 ثوان ، AT) ، محلول ER -3 (20 دقيقة عند 100 درجة مئوية) ، محلول ER -4 (12 دقيقة ، AT).</li>
		<li>اشطف الشريحة في محلول غسيل لمدة 3 مرات (30 ثانية لكل منهما) و 1x (3 دقائق).</li>
		<li>قم بحظر البيروكسيديز الداخلي باستخدام محلول كتلة بيروكسيد لمدة 5 دقائق في AT.</li>
		<li>اشطفها في محلول غسيل لمدة 3 مرات (30 ثانية لكل منهما).</li>
		<li>منع الارتباط غير المحدد للأجسام المضادة مع كتلة البروتين ل NKp46 فقط لمدة 30 دقيقة في AT.</li>
	</ol></li>
	<li>الارتباط بالأجسام المضادة الأولية: احتضان الأجسام المضادة الأولية لمدة 15 دقيقة في AT، ثم اشطفها بمحلول غسيل لمدة 3 مرات (30 ثانية لكل منها).</li>
	<li>بالنسبة لربط الأجسام المضادة الثانوية ، اتبع الخطوات الموضحة أدناه.<ol><li>احتضان مع الأجسام المضادة الثانوية المترافقة بيروكسيديز الفجل لمدة 8 دقائق في AT.</li>
		<li>اشطفه بمحلول غسيل لمدة 2x (2 دقيقة لكل منهما) و 1x بالماء منزوع الأيونات.</li>
		<li>تصور التفاعل عن طريق شطف الشرائح بمحلول ديامينوبنزيدين (DAB) ثم احتضانها بمحلول DAB لمدة 10 دقائق في AT.</li>
		<li>اشطفيه لمدة 3 مرات (30 ثانية) بالماء منزوع الأيونات.</li>
		<li>قم بتلطيخ الأقسام باستخدام الهيماتوكسيلين من ماير.</li>
		<li>اشطفه بالماء منزوع الأيونات لمدة 1x (30 ثانية) ، ومحلول الغسيل لمدة 1x (30 ثانية) ، والماء منزوع الأيونات لمدة 1x (30 ثانية).</li>
		<li>استخدم ملطخا منزلقا مؤتمتا بالكامل لتجفيف الأقسام في الإيثانول 70٪ (2 دقيقة) ، والإيثانول 80٪ (2 دقيقة) ، والإيثانول 96٪ -1 (3 دقائق) ، والإيثانول 96٪ -2 (3 دقائق) ، والإيثانول 100٪ (3 دقائق) ، والزيلين -1 (4 دقائق) ، والزيلين -2 (4 دقائق) ، والزيلين -3 (4 دقائق).</li>
		<li>استخدم شبشب غطاء زجاجي مؤتمت بالكامل لتركيب الأقسام الموجودة على الشرائح في وسط تركيب. ملاحظة: تم استخدام عينات مراقبة الأنسجة السلبية والإيجابية (اللوزتين) طوال الوقت.</li>
	</ol></li>
</ol>4. الحصول على مسح الشرائح بالكامل
<ol><li>امسح الشرائح الملطخة ضوئيا باستخدام الهدف 20x والكثافة المتوسطة العالية للتركيز على ماسح ضوئي كامل الشرائح.</li>
</ol>5. تحليل المدينة العالمية للخدمات الإنسانية باستخدام البرنامج
<ol><li>إنشاء مشروع لصور المدينة العالمية للخدمات الإنسانية في البرنامج.<ol><li>قم بتنزيل QuPath-0.4.3 (أو أعلى) وفتحه.exe</li>
		<li>قم بإنشاء مجلد جديد باسم مناسب.</li>
		<li>انقر فوق الزر "إنشاء مشروع " في الزاوية اليسرى العليا من البرنامج وحدد المجلد الذي تم إنشاؤه حديثا.</li>
		<li>اسحب الصور الممسوحة ضوئيا إلى نافذة البرنامج. عندما تنبثق نافذة جديدة تلقائيا ، حدد تعيين نوع الصورة > H-DAB وانقر فوق استيراد (الشكل 2).</li>
		<li>مراقبة قائمة الصور في النافذة اليسرى من القائمة ؛ انقر نقرا مزدوجا لفتح الصورة.</li>
		<li>حدد من القائمة الرئيسية في الجزء العلوي ملف لحفظ الصور كمشروع. ملاحظة: يمكن للبرنامج التعامل مع مجموعة واسعة من تنسيقات الصور ، بما في ذلك العديد من تنسيقات الشرائح بأكملها. ومع ذلك ، يفضل تنسيق tiff لمنع فقدان البيانات الأولية والبيانات الوصفية المرتبطة بها.</li>
	</ol></li>
	<li>إضافة تعليقات توضيحية إلى المناطق ذات الأهمية<ol><li>حدد أداة الفرشاة أو أداة العصا من القائمة الرئيسية في الأعلى للتعليق على منطقة الورم. بالنسبة للمناطق المتقطعة من الورم ، اتبع الخطوات 5.2.1.1-5.2.1.3.<ol><li>أضف تعليقات توضيحية عليها بشكل منفصل.</li>
			<li>اضغط مع الاستمرار على المفتاح Ctrl أثناء تحديد جميع مناطق الورم</li>
			<li>انقر بزر الماوس الأيمن وحدد تحرير > متعددة دمج المحدد.</li>
		</ol></li>
		<li>تأكد من تحديد التعليق التوضيحي للورم (الحدود لها لون أصفر).</li>
		<li>انقر فوق أتمتة في القائمة الرئيسية وحدد إظهار محرر البرامج النصية.</li>
		<li>انسخ البرنامج النصي المتوفر في الملف التكميلي 1 أو في https://petebankhead.github.io/qupath/scripts/2018/08/08/three-regions.htmls والصقه في محرر البرامج النصية، ثم انقر فوق تشغيل. سيتم إنشاء عائد الاستثمار: مركز الورم (TC) والهامش الداخلي (IM) والهامش الخارجي (OM) ومنطقة الورم (PT) وتسميتها تلقائيا.</li>
		<li>للحصول على طريقة بديلة لإنشاء مناطق الاهتمام، اتبع الخطوات 5.2.5.1-5.2.5.5.<ol><li>حدد أداة Polyline من القائمة الرئيسية في الأعلى لرسم حد يفصل بين أعشاش الخلايا الخبيثة والأنسجة المجاورة غير الورمية.</li>
			<li>حدد الحد الناتج. حدد من القائمة الرئيسية في الجزء العلوي الكائنات > التعليقات التوضيحية > توسيع التعليقات التوضيحية > 500 ميكرومتر لنصف قطر التمدد > مسطح لغطاء الخط. قم بتنشيط إزالة الداخلية وتنشيط تقييد الوالدين.</li>
			<li>انقر بزر الماوس الأيمن فوق التعليق التوضيحي الناتج ، تحرير تقسيم > واحد. سيتم تمديد شروحين منفصلين تلقائيا كمناطق بعرض 500 ميكرومتر على كل جانب من الحدود.</li>
			<li>قم بتسمية المناطق المشروحة بشكل مناسب ل IM و OM بالنقر بزر الماوس الأيمن فوق التعليق التوضيحي في القائمة الموجودة على اليمين، وتحديد تعيين الخصائص، وإدخال الاسم.</li>
			<li>يمثل TC منطقة الورم المتبقية. قم بتوسيع منطقة PT بعرض 500 ميكرومتر المجاورة ل OM باستخدام نفس الإجراء. ملاحظة: تمت مراجعة الشرائح المشروحة واكتشافات QuPath AF بواسطة أخصائي أمراض نسيجية.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>تحسين تصنيف البكسل<ol><li>حدد أداة المستطيل من القائمة الرئيسية. ثم قم بالتعليق على منطقة تحتوي على جميع أنواع وحدات البكسل التي يجب تمييزها (على سبيل المثال ، الهيماتوكسيلين ، DAB ، والخلفية).</li>
		<li>من القائمة الرئيسية، حدد تحليل > المعالجة المسبقة > تقدير متجه البقعة.</li>
		<li>عندما تنبثق النافذة Visual Stain Editor تلقائيا ، حدد Auto > OK ، وقم بتعيين H- DAB المقدر كاسم لمتجه البقعة.</li>
		<li>للحصول على طريقة بديلة ، اتبع الخطوات 5.3.4.1 إلى 5.3.4.3.<ol><li>حدد أداة المستطيل من القائمة الرئيسية وقم بالتعليق على منطقة صغيرة من نواة نموذجية ملطخة بالهيماتوكسيلين.</li>
			<li>حدد صورة من القائمة اليسرى وانقر نقرا مزدوجا فوق Stain 1 > Yes.</li>
			<li>حدد أداة المستطيل من القائمة الرئيسية وقم بتعليق منطقة صغيرة من التلطيخ الإيجابي باستخدام DAB. حدد صورة من القائمة اليسرى وانقر نقرا مزدوجا فوق Stain 2 > Yes.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>تقييم جزء مساحة الخلايا المناعية الإيجابية باستخدام خيار تصنيف البكسل .<ol><li>من القائمة الرئيسية، انقر على تصنيف > تصنيف البيكسل > إنشاء عتبة.</li>
		<li>حدد مرتفع للدقة > القناة: DAB > المرشح الأولي: غاوسي > سيجما: 0.5 > (الشكل 3) العتبة: (0.2-0.3) > فوق العتبة: موجبة > أقل من العتبة: سلبية.</li>
		<li>بالنسبة للمنطقة، حدد أي تعليق توضيحي، واكتب اسما للمصنف > حفظ > قياس > موافق. سيتم تغيير الخلايا الإيجابية DAB إلى اللون الأحمر (الشكل 4).</li>
		<li>انسخ النتائج من القائمة الموجودة على الجانب الأيمن إلى جدول بيانات.</li>
		<li>أو افتح القياس في القائمة الرئيسية العلوية، وحدد إظهار قياسات التعليقات التوضيحية > نسخ إلى الحافظة، والصق النتائج في جدول بيانات.</li>
		<li>لإغلاق الصورة، انقر بزر الماوس الأيمن > Multi View > Close Viewer. ملاحظة: قبل القياس الكمي ، تم التخلص من أي قطع أثرية. تم تعديل العتبة لكل حالة مع تلطيخ إيجابي محدد ضعيف. تم التحقق أولا من صحة التعليقات التوضيحية وتصنيف البكسل ثم مراجعتها من قبل أخصائي علم الأنسجة الأقدم. تم إجراء جميع التحليلات بطريقة عمياء. يمكن العثور على مزيد من المعلومات حول تحليل IHC باستخدام البرنامج على https://forum.image.sc/tag/QP.</li>
	</ol></li>
</ol>6. الأساليب الإحصائية وتحليل البيانات
<ol><li>كانت نقاط نهاية الدراسة هي وقت التكرار (TTR) ، والبقاء على قيد الحياة بدون أمراض (DFS) ، والبقاء على قيد الحياة بشكل عام (OS). تم فرض رقابة على المرضى الذين لم ينتكسوا أو يموتون في آخر متابعة لهم. ملاحظة: يتم التعبير عن البيانات المستمرة الموزعة بشكل غير طبيعي كوسيط (min-max). يتم التعبير عن النسب كبيانات أولية (نسب مئوية). تمت مقارنة أجزاء منطقة الخلايا المناعية في مناطق مختلفة من الاهتمام (ROIs) بواسطة فريدمان أنوفا ، تليها اختبار أزواج ويلكوكسون المطابق مع تصحيح بونفيروني. بسبب التوزيع اللامعلمي لمعظم المتغيرات ، تم استخدام ارتباط سبيرمان لتقييم الارتباطات بين أزواج المتغيرات الترتيبية أو الكمية. لتحديد القيمة النذير للمتنبئين الفرديين لنقاط النهاية ، تم إجراء متغير أحادي متبوعا بتحليل انحدار كوكس متعدد المتغيرات. تم حساب نسب الخطر (HR). كانت الموارد البشرية تظهر المخاطر النسبية للمجموعة المتوسطة العالية المجمعة مقارنة ب 1 للمجموعة المنخفضة. تم حساب جميع تقديرات البقاء على قيد الحياة بطريقة كابلان ماير ومقارنتها بين المجموعات بواسطة اختبار رتبة اللوغاريتم. تم استخدام GraphPad Prism 9.0 (GraphPad Software LLC) للتحليلات الإحصائية. تم اعتبار قيمة p من جانبين < 0.05 ذات دلالة إحصائية.</li>
</ol>

Prognostic Significance of Immune Cell Infiltration in Hepatocellular Carcinoma

لا يوجد تضارب في المصالح المالية للإفصاح عنه.

ثبت أن التنظيم المكاني ووفرة الخلايا المناعية المتسللة إلى الورم يؤثران على البقاء على قيد الحياة في أنواع مختلفة من السرطان ، وشمل سرطان الخلايا الكبدية (HCC)1،2،3،4. تم عرض الأهمية النذير للخلايا الليمفاوية المتسللة إلى الورم في السرطانات لأول مرة على الهيماتوكسيلين ويوزين (H&E) الملطخة 5,6. بعد ذلك ، أظهرت دراسة رائدة أجراها Galon et al. باستخدام الكيمياء الهيستولوجية المناعية (IHC) ارتباطات كثافات الخلايا التائية CD3 + و CD8 + في أنسجة سرطان القولون مع التشخيص4.
IHC هو المعيار الذهبي لتصور الخلايا المناعية وقياسها ورسم خرائطها داخل أنسجة الورم لمزيد من الارتباط بالنتائج السريرية7. تقدم المدينة العالمية للخدمات الإنسانية العديد من المزايا ، مثل التكلفة المنخفضة ، والتوافر على نطاق واسع ، والتوافق مع الأنسجة المضمنة في البارافين المثبتة بالفورمالين (FFPE)8. ومع ذلك ، فإن التقييم الدقيق للخلايا المناعية الملطخة ب IHC يمثل تحديا كبيرا. يستغرق التسجيل التقليدي في مجالات الرؤية المجهرية المختارة وقتا طويلا ولم يعد كافيا لضمان التحليل الموضوعي عالي الجودة والقابل للتكرار الضروري لاختيار العلامات الحيوية المرشحة والارتباط السريري الموثوقبه 9. يمكن تقييم عمليات المسح الضوئي للشرائح الكاملة كصورة كاملة أو بعد أخذ عينات فرعية10.
يمكن أن يضمن التقييم الكمي المحوسب لوفرة الخلايا المناعية في عينات الأنسجة بيانات عملية ودقيقة وموثوقة وذات صلة سريريا11. QuPath هو برنامج مجاني مفتوح المصدر يتيح تحليل الصور الرقمية للشرائح الملطخة ب IHC ويزيد من كمية المعلومات الناتجة عن العينات الفردية12.
نظرا لأن الخلايا المتغصنة غير الناضجة (iDCs) والخلايا القاتلة الطبيعية (NK) والخلايا البدينة تشارك في الاستجابات المناعية المضادة للورم وقد ثبت أنها ترتبط بنتائج المرضى13،14،15 ، فإننا نقدم هنا بروتوكولا خطوة بخطوة لتقييم توزيعها المكاني في أنسجة FFPE HCC واستكشاف تأثيرها النذير. يتم التعبير عن CD1a بشكل رئيسي على غشاء الخلايا المتغصنة غير الناضجة ، والتي ارتبطت كثافتها بالنتائج السريرية في مجموعة متنوعة من الأورام البشرية16,17. يمكن أن تلعب الخلايا البدينة دورا في الورم أو دورا مضادا للورم داخل البيئة المكروية للورم (TME)18. يمكنهم دعم تكوين الأوعية وتسهيل ورم خبيث19. على العكس من ذلك ، فقد تم الإبلاغ عن أن الخلايا البدينة يمكن أن تتوسط في موت الخلايا المبرمج للخلايا السرطانية من خلال إنتاج IL-420. يستخدم تلطيخ مضاد CD117 بشكل شائع لتصور وقياس الخلايا البدينة داخل أنسجة الورم21. يعتقد أن الخلايا القاتلة الطبيعية تساهم في مراقبة ومراقبة سرطان الكبد22 عن طريق قتل الخلايا السرطانية23. يعد تعبير NKp46 بواسطة NK معلمة حاسمة لنشاطهم المضاد للورم24. ومع ذلك ، ارتبطت خلايا NKp46 + NK بشكل إيجابي مع قطر الورم في مرضى سرطان الكبد25. على الرغم من ذلك ، لا يعرف سوى القليل عن علاقتها ببقاء المريض.
كنا نهدف إلى إجراء تقييم كمي لوفرة خلايا CD1a + iDCs وخلايا CD117 + البدينة وخلايا NKp46 + NK في مناطق مختلفة من سرطان الكبد وتسليط الضوء على أهميتها النذير. تم تضمين ما مجموعه 70 مريضا متتاليا يعانون من المرحلة الأولى إلى الرابعة من HCC المؤكدة مرضيا ، والذين كانوا مؤهلين للاستئصال وفقا لإرشادات BCLC وخضعوا لاستئصال الكبد بقصد علاجي في مستشفى جامعة بيلسن بين عامي 1997 و 2019 ، في الدراسة الحالية بأثر رجعي. تمت مراجعة تقارير علم الأمراض للمرضى. لم يكن لدى أي من المرضى المشمولين في هذه الدراسة نقائل بعيدة ولم يتلقوا علاجا مساعدا جديدا مثل العلاج الكيميائي أو العلاج الإشعاعي قبل الجراحة. تم استبعاد ما مجموعه 3 مرضى يعانون من عينات نسيجية رديئة الجودة ، وتم تضمين المرضى ال 67 المتبقين في الدراسة (الجدول 1).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-CD1a</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>PA0235</td>
			<td>Identifier- immature dendritic cells; RTU, Protocol F, ER2/20 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-CD117</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>&#160;PA0007</td>
			<td>Identifier- mast cells; RTU, Protocol F, ER2/20 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BOND Plus Microscope Slides</td>
			<td>Leica Biosystems, Germany</td>
			<td>S21.2113.A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BOND RXm</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>49.1501</td>
			<td>Fully Automated IHC Stainer&#160;&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bond Aspirating Probe Cleaning Kit</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>CS9100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bond&#160;Dewax&#160;Solution</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>AR9222</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bond&#160;Polymer Refine Detection Kit</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>DS9800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BondTM Epitope Retrieval 2</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>AR9640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BondTM Primary Antibody Diluent</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>AR9352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BondTM Wash Solution 10X Concentrate</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>AR9590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer Specifications: Intel(R) Core(TM) i5-10500 CPU @ 3.10GHz&#160;&#160; 3.10 GHz Installed RAM: 128 G</td>
			<td>Intel</td>
			<td></td>
			<td>A 64-bit operating system that has Windows 7. Any computer with Java-based operating system and Excel available</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslips</td>
			<td>Leica Biosystems, Germany</td>
			<td>14071135636</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CV Mount</td>
			<td>Leica Biosystems, Germany</td>
			<td>14046430011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CV5030 Fully Automated Glass Coverslipper</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>149CVTS5025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drying Oven UN30</td>
			<td>Memmert GmbH&#160;</td>
			<td>UN30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GraphPad Prism 9.0</td>
			<td>GraphPad Software LLC&#160;</td>
			<td></td>
			<td>Version 12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human NKp46/NCR1 Antibody, Monoclonal Mouse IgG2B Clone # 195314</td>
			<td>R&#38;D Systems, Inc., United States</td>
			<td>MAB1850</td>
			<td>Identifier- natural killer cells; Dilution 1:150, Protocol F + BLOK, ER2/20 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica HI1210 - Water Bath</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>14041521466</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein Block</td>
			<td>Agilent Dako, United States</td>
			<td>X0909</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuPath 0.3.2 or higher versions</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>&#160;version (QuPath v.0.3.2)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RM2235 Rotary Microtome</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>149AUTO00C1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ST5020 Multistainer Slide Stainer</td>
			<td>Leica Biosystems</td>
			<td>DEV-ST5010-CV5030</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Statistica</td>
			<td>StatSoft Inc.</td>
			<td></td>
			<td>version 7</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeiss Axio Scan.Z1</td>
			<td>ScienceServices GmbH, Germany</td>
			<td>430038-9000-000&#160;</td>
			<td>Slide scanner&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mast cells in the microenvironment of hepatocellular carcinoma confer favorable prognosis: a retrospective study using qupath image analysis software

قد تقدم الأفكار التي يوفرها الكشف في الموقع عن الخلايا المناعية داخل سرطان الخلايا الكبدية (HCC) معلومات عن نتائج المرضى. ترتبط الدراسات التي تبحث في التعبير عن الخلايا المناعية وتوطينها داخل أنسجة الورم بالعديد من التحديات ، بما في ذلك عدم وجود تعليق توضيحي دقيق لمناطق الورم والاختيار العشوائي لمجالات الرؤية المجهرية. QuPath هو برنامج مفتوح المصدر وسهل الاستخدام يمكنه تلبية الحاجة المتزايدة لعلم الأمراض الرقمي في تحليل صورة الشريحة الكاملة (WSI).
تم تقييم تسلل سرطان الكبد والأنسجة المجاورة بواسطة الخلايا المتغصنة غير الناضجة CD1a + (iDCs) والخلايا البدينة CD117 + والخلايا القاتلة الطبيعية NKp46 + (NKs) من الناحية المناعية الكيميائية في عينات تمثيلية ل 67 مريضا يعانون من سرطان الكبد الذين خضعوا للاستئصال العلاجي. تم تقييم جزء المساحة (AF) للخلايا الملطخة إيجابيا تلقائيا في WSIs باستخدام QuPath في مركز الورم (TC) والهامش الداخلي (IM) والهامش الخارجي (OM) ومنطقة peritumor (PT). تم تقييم الأهمية النذير للخلايا المناعية لوقت التكرار (TTR) ، والبقاء على قيد الحياة بدون أمراض (DFS) ، والبقاء على قيد الحياة بشكل عام (OS).
كان الرجفان الأذيني للخلايا البدينة أكبر بكثير من AF ل NKs ، وكان AF ل iDCs أقل بكثير مقارنة ب NKs في كل منطقة من مناطق الاهتمام. ارتبطت AFs العالية للخلايا البدينة في مناطق IM و PT مع DFS أطول. بالإضافة إلى ذلك ، ارتبط التركيز البؤري التلقائي العالي للخلايا البدينة في المراسلة الفورية بنظام تشغيل أطول.
يعد التحليل بمساعدة الكمبيوتر باستخدام هذا البرنامج أداة مناسبة للحصول على معلومات تنبؤية للخلايا المناعية المتسللة إلى الورم (iDCs والخلايا البدينة و NKs) في مناطق مختلفة من سرطان الكبد بعد الاستئصال. أظهرت الخلايا البدينة أكبر تركيز بؤري تلقائي في جميع مناطق الاهتمام (ROIs). أظهرت الخلايا البدينة في منطقة الورم و IM أهمية تنبؤية إيجابية.

The spatial organization and abundance of tumor-infiltrating immune cells have been proven to impact survival in different cancers, hepatocellular carcinoma (HCC) included1,2,3,4. The prognostic significance of tumor-infiltrating lymphocytes in cancers was first shown on hematoxylin and eosin (H&#38;E) stained sections5,6. Then, a pioneer study by Galon et al. using immunohistochemistry (IHC) demonstrated associations of the densities of CD3+ and CD8+ T cells in colon cancer tissue with prognosis4.
IHC is a gold standard for visualizing, quantifying, and mapping immune cells within tumor tissue for further association with clinical outcomes7. IHC presents several advantages, such as low cost, widespread availability, and compatibility with formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) tissue8. However, accurate assessment of IHC-stained immune cells is a big challenge. Traditional scoring in selected microscopic fields of view is time-consuming and no longer sufficient to ensure the high-quality, reproducible, objective analysis essential for candidate biomarker selection and reliable clinical correlation9. Whole-slide scans can be assessed as a whole image or after subsampling10.
Computerized quantitative assessment of the abundance of immune cells in tissue samples can ensure practical, accurate, reliable, and clinically relevant data11. QuPath is a free, open-source software that enables the digital image analysis of IHC-stained slides and maximizes the amount of information yielded from individual samples12.
Since immature dendritic cells (iDCs), natural killer (NK) cells, and mast cells are involved in anti-tumor immune responses and were shown to correlate with patients&#39; outcomes13,14,15, we here present a step-by-step protocol for assessing their spatial distribution in FFPE HCC tissue and exploring their prognostic impact. CD1a is expressed mainly on the membrane of immature dendritic cells, the density of which has been associated with clinical outcomes in a variety of human tumors16,17. Mast cells can play a protumor or anti-tumor role within the tumor microenvironment (TME)18. They can support angiogenesis and facilitate metastasis19. Conversely, it has been reported that mast cells can mediate tumor cell apoptosis through the production of IL-420. Anti-CD117 staining is commonly used to visualize and quantify mast cells within the tumor tissue21. NK cells are thought to contribute to the surveillance and control of HCC22 by killing cancer cells23. NKp46 expression by NK is a crucial parameter for their anti-tumor activity24. However, NKp46+ NK cells correlated positively with tumor diameter in HCC patients25. Despite this, little is known about their correlation with patient survival.
We aimed to quantitatively assess the abundance of CD1a+ iDCs, CD117+ mast cells, and NKp46+ NK cells in different regions of HCC and highlight their prognostic significance. A total of 70 consecutive patients with pathologically confirmed stage I-IV HCC, who were eligible for resection according to BCLC guidelines and underwent curative-intent liver resection at Pilsen University Hospital between 1997 and 2019, were included in the current retrospective study. Pathology reports of the patients were reviewed. None of the patients included in this study had distant metastases nor had received neoadjuvant therapy such as chemotherapy or radiotherapy before surgery. A total of 3 patients with poor-quality histological specimens were excluded, and the remaining 67 patients were included in the study (Table 1).

Author Spotlight: Investigating Immune Cell Dynamics in the Tumor Microenvironment &amp;#8212; Challenges and Innovations in Cancer Prognosis

تمنح الخلايا البدينة في البيئة المكروية لسرطان الخلايا الكبدية تشخيصا إيجابيا: دراسة بأثر رجعي باستخدام برنامج تحليل الصور QuPath 

يتم عرض التركيبة السكانية والخصائص السريرية للمرضى في الجدول 1. بلغ متوسط عمر المرضى 69 عاما، وكان معظمهم من الذكور (77.6٪). فيما يتعلق بمسببات سرطان الكبد ، كان التهاب الكبد المزمن غير الفيروسي هو أكثر الأمراض الخلفية شيوعا ، مع انتشار التهاب الكبد الدهني غير الكحولي (NASH) (23.9٪). كان 15 مريضا فقط (22.4٪) يعانون من تليف الكبد كمرض خلفي. غالبية المرضى (68.7٪) لديهم المرحلة الأولى من TNM. تم وصف نتائج سريرية ومرضية أكثر تفصيلا في عملناالمنشور سابقا 2،26.
نتائج في المتابعة الأخيرة ، لوحظ تكرار الورم في 29 مريضا (41.8٪) ، منهم 89.7٪ لديهم تكرار موضعي وتوفي 38 (56.7٪) مريضا. في 5 سنوات بعد الجراحة ، كانت نسبة DFS 33.2 ٪ ، وكانت نسبة OS 49.4 ٪ ، وكانت نسبة خالية من التكرار (RFP) 48.7 ٪ (الجدول 2).
توزيع الخلايا المناعية في مناطق مختلفة من الاهتمام تم العثور على بروتين CD117 في الغالب في الغشاء السيتوبلازمي للخلايا المستديرة (الشكل 5 أ). في TC و IM ، كانت موضعية في الغالب في السدى وفي الفضاء حول الأوعية. في مناطق OM و PT ، لوحظت خلايا CD117 + في كبسولة الورم وفي الفضاء حول الأوعية.
تم العثور على بروتين NKp46 في الغالب في الغشاء السيتوبلازمي للخلايا المستديرة ، والتي كانت موجودة داخل مساحات تشبه الجيوب الأنفية في TC و IM ، بالإضافة إلى ارتباطها بالسدى (الشكل 5B). في منطقة OM و PT ، لوحظت خلايا NKp46 + في كبسولات حول أعشاش الورم وفي سدى المسالك البابية.
تم العثور على بروتين CD1a في TC و IM ، ومعظمهم في الغشاء السيتوبلازمي للخلايا المستديرة (المتناثرة أو في المجاميع) في السدى ، داخل وعلى طول حدود المساحات الشبيهة بالجيوب الأنفية (الشكل 5C). في منطقة PT ، لوحظ CD1a + DC داخل وعلى طول حدود الجيوب الأنفية وداخل الظهارة الصفراوية في المسالك البابية.
كان الرجفان الأذيني للخلايا البدينة أكبر بكثير من AF لخلايا NKp46 + (p < 0.001) (الشكل 6). أظهرت CD1a + iDCs في كل عائد استثمار أدنى تركيز بؤري تلقائي مقارنة بالخلايا البدينة والخلايا القاتلة الطبيعية (p < 0.001) (الشكل 6). كان AF لخلايا CD117 + و NKp46 + في TC أو IM أصغر بكثير من تلك الموجودة في منطقة PT و OM (p < 0.001) (الشكل 6). بالنسبة لخلايا CD1a + ، لم يختلف التركيز البؤري التلقائي بشكل كبير بين المناطق.
يوضح الجدول 3 الارتباطات المهمة للخلايا المناعية الفردية بين جميع عائد الاستثمار. يوضح الشكل 7 خريطة الحرارة للارتباطات المهمة بين الخلايا المناعية المختلفة داخل المناطق المختلفة. ارتبط AF للخلايا البدينة CD117 + في TC بشكل كبير مع AF ل CD1a في TC و IM.
القيمة النذير للمتغيرات السريرية والمرضية من بين المتغيرات السريرية والمرضية ، ارتبط العمر الأصغر فقط بزيادة خطر التكرار (HR = 0.96 ، CI: 0.93-0.99 ، p = 0.007) ، في حين لم يرتبط أي متغير ب DFS و OS (الجدول 4).
القيم النذير للخلايا المناعية المتسللة ارتبط التركيز البؤري التلقائي المرتفع للخلايا البدينة CD117 + في IM ب DFS أطول (HR = 0.48 ، CI: 0.241 - 0.935 ، p = 0.031) ونظام التشغيل (HR = 0.34 ، CI: 0.167 - 0.703 ، p = 0.004) (الشكل 8 ، الجدول 5). بالإضافة إلى ذلك ، ارتبط AF مرتفع للخلايا البدينة CD117 + في منطقة PT ب DFS أطول (HR = 0.48 ، CI: 0.247 - 0.945 ، p = 0.034) (الشكل 8 ، الجدول 5). على النقيض من ذلك ، لم ترتبط AFs لخلايا iDC و NK بأي من النتائج. احتفظت الخلايا البدينة CD117+ في الهامش الداخلي بارتباطات كبيرة مع DFS (HR = 0.46 ، CI: 0.23-0.91 ، p = 0.027) ونظام التشغيل (HR = 0.33 ، CI: 0.16-0.68 ، p = 0.003) بعد التعديل لمرحلة TNM (الجدول 6). أما بالنسبة للخلايا البدينة في منطقة PT ، فقد ظل الارتباط مع DFS كبيرا أيضا (HR = 0.47 ، CI: 0.24-0.93 ، p = 0.029) (الجدول 6).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66743/66743fig01.jpg"> الشكل 1: تخطيطي تمثيلي للطرق. رسم تخطيطي لتدفق العمل لتحديد الدور النذير للخلايا البدينة والخلايا المتغصنة والخلايا القاتلة الطبيعية في سرطان الكبد. الاختصارات: FFPE ، البارافين الثابت الفورمالين جزءا لا يتجزأ ؛ H& E ، الهيماتوكسيلين ويوزين. عائد الاستثمار ، مناطق الاهتمام. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/66743fig01large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66743/66743fig02.jpg"> الشكل 2: لقطة شاشة لنافذة البرنامج. لقطة شاشة وصفية توضح خطوة استيراد الصور إلى مشروع في البرنامج. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/66743fig02large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66743/66743fig03.jpg"> الشكل 3: لقطة شاشة لخيار كسر المساحة. لقطة شاشة من البرنامج توضح المعلمات المحددة لتحديد جزء مساحة التلوين الإيجابي. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/66743fig03large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66743/66743fig04.jpg"> الشكل 4: لقطة شاشة لخيار تصنيف البكسل. لقطة شاشة من البرنامج تظهر خلايا DAB الموجبة قبل وبعد تصنيف البكسل. تم تحويل تلطيخ DAB البني إلى اللون الأحمر بعد تصنيف البكسل. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/66743fig04large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66743/66743fig05.jpg"> الشكل 5: تلطيخ مناعي تمثيلي للخلايا المناعية الفطرية في مرضى سرطان الكبد. تلطيخ مناعي تمثيلي لخلايا (A) CD117 + و (B) NKp46 + و (C) CD1a + في TC (400x) و TIM (200x) من سرطان الكبد. الاختصارات: سرطان الكبد ، سرطان الخلايا الكبدية. TC ، مركز الأورام. TIM ، الهامش الغازي للورم ، مع الهامش الداخلي (IM) والهامش الخارجي (OM). يمثل الخط المنقط حدا بين الورم والأنسجة غير الورمية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/66743fig05large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66743/66743fig06.jpg"> الشكل 6: إحصائيات تصف جزء مساحة الخلايا المناعية الفطرية في مرضى سرطان الكبد. إحصائيات لجزء مساحة الخلايا المتغصنة CD1a + والخلايا البدينة CD117 + وخلايا NKp46 + NK) في مناطق TC و IM و OM و PT من HCC. الخطوط السوداء هي المتوسطات. تم استخدام اختبار الأزواج المتطابقة مع Wilcoxon مع تصحيح Bonferroni للمقارنات. الاختصارات: سرطان الكبد ، سرطان الخلايا الكبدية. TC ، مركز الأورام. IM ، الهامش الداخلي ؛ OM ، الهامش الخارجي ؛ PT ، منطقة peritumor. : p <0.001 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/66743fig06large.jpg" target="_blank">الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66743/66743fig07.jpg"> الشكل 7: خريطة حرارية للارتباطات المعنوية بين كسور مساحة الخلايا البدينة و DCs و NKs في مناطق مختلفة ذات أهمية. خريطة حرارية للارتباطات المعنوية بين كسور المنطقة للخلايا البدينة CD117 + و CD1a + DCs و NKp46 + NKs في TC و IM و OM و PT (سبيرمان ρ ، p < 0.05). الاختصارات: TC ، مركز الأورام. IM ، الهامش الداخلي ؛ OM ، الهامش الخارجي ؛ PT ، منطقة peritumor. DC ، الخلايا المتغصنة. NK ، الخلايا القاتلة الطبيعية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/66743fig07large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/66743/66743fig08.jpg"> الشكل 8: منحنيات Kaplan-Meier DFS و OS للخلايا البدينة المتسللة للورم في مرضى سرطان الكبد. تحليل كابلان ماير ل DFS و OS وفقا للتركيز البؤري التلقائي المنخفض مقابل العالي للخلايا البدينة المتسللة للورم في الهامش الداخلي (A ، C) و PT (B) من سرطان الكبد. الاختصارات: سرطان الكبد ، سرطان الخلايا الكبدية. DFS ، البقاء على قيد الحياة خالية من الأمراض ؛ IM ، الغازية الداخلية ؛ PT ، منطقة peritumor. تم تكييف الرقم بإذن من Ali et al.26. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/66743fig08large.jpg" target="_blank">يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
الجدول 1: الخلفية السريرية لمرضى سرطان الخلايا الكبدية المسجلين. الخلفية السريرية للحالات المسجلة من سرطان الخلايا الكبدية. الاختصارات: NAFLD ، مرض الكبد الدهني غير الكحولي. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/Table%201.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الجدول 2: الاحتمال المقدر للنتائج في تحليل كابلان-ماير. الاحتمال المقدر ل RFP و DFS ونظام التشغيل في تحليل كابلان ماير. الاختصارات: RFP ، نسبة خالية من التكرار ؛ DFS ، البقاء على قيد الحياة خالية من الأمراض ؛ نظام التشغيل ، البقاء على قيد الحياة بشكل عام. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/Table%202.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الجدول 3: العلاقة بين جزء المنطقة من الخلايا البدينة المتسللة إلى الورم والخلايا المتغصنة والخلايا القاتلة الطبيعية في عائد استثمار مختلف. ارتباط سبيرمان (ρ) بين جزء مساحة الخلايا البدينة المتسللة إلى الورم والخلايا المتغصنة والخلايا القاتلة الطبيعية في عائد استثمار مختلف ، p < 0.038. الاختصارات: TC ، مركز الأورام. IM ، الهامش الداخلي ؛ OM ، الهامش الخارجي ؛ PT ، منطقة peritumor. عائد الاستثمار ، مناطق الاهتمام. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/Table%203.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الجدول 4: تحليل أحادي المتغير للمتغيرات السريرية والمرضية المرتبطة بوقت التكرار (TTR) ، والبقاء على قيد الحياة بدون أمراض (DFS) ، والبقاء على قيد الحياة بشكل عام (OS). " لا" ، جنس الإناث أو "أ" كانت الفئات المرجعية للمتغيرات ثنائية التفرع. تشير القيم الغامقة إلى دلالة إحصائية عند مستوى p < 0.05. الاختصارات: الموارد البشرية ، نسبة الخطر ؛ CI ، فاصل الثقة ؛ TTR ، وقت التكرار ؛ DFS ، البقاء على قيد الحياة خالية من الأمراض. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/Table%204.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الجدول 5: تحليل أحادي المتغير لارتباط جزء المساحة للخلايا البدينة CD117 + وخلايا CD1a + denderitic والخلايا القاتلة الطبيعية NKp46 + مع TTR و DFS و OS لكل منطقة اهتمام فردية باستخدام انحدار كوكس (67 مريضا بسرطان الكبد). تم تحويل جزء مساحة الخلايا المناعية لكل قسم مساحة (مم 2) إلى نسب مئوية ثم تصنيفها إلى منخفضة (0-25 في المائة) مقابل عالية (25-100 في المائة). تظهر نسب الخطر المخاطر النسبية مقارنة ب 1 للتركيز البؤري التلقائي المنخفض. تشير القيم الغامقة إلى دلالة إحصائية عند مستوى p < 0.05. الاختصارات: AF ، جزء المنطقة ؛ DFS ، البقاء على قيد الحياة خالية من الأمراض ؛ نظام التشغيل ، البقاء على قيد الحياة بشكل عام ؛ الموارد البشرية ، نسبة الخطر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/Table%205.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الجدول 6: جزء المساحة من الخلايا البدينة CD117 + لكل عائد استثمار فردي مرتبط بالبقاء على قيد الحياة بدون مرض والبقاء على قيد الحياة بشكل عام (تحليل متعدد المتغيرات). تحليل متعدد المتغيرات لارتباط جزء المساحة للخلايا البدينة CD117 + مع DFS و OS في منطقة IM و PT باستخدام تحوف كوكس (67 مريضا بسرطان الكبد). تم تحويل جزء مساحة الخلايا المناعية لكل قسم مساحة (مم2) إلى نسب مئوية ثم تصنيفها إلى منخفضة (0-24 في المائة) مقابل عالية (25-100 في المائة). تظهر نسب الخطر المخاطر النسبية مقارنة ب 1 للتركيز البؤري التلقائي المنخفض. تشير القيم الغامقة إلى دلالة إحصائية عند مستوى p > 0.05. الاختصارات: AF ، جزء المنطقة ؛ DFS ، البقاء على قيد الحياة خالية من الأمراض ؛ نظام التشغيل ، البقاء على قيد الحياة بشكل عام ؛ الموارد البشرية ، نسبة الخطر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/Table%206.xlsx" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الجدول.</a>
الملف التكميلي 1: برنامج نصي لإنشاء عائد استثمار. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/66743/Supplemental%20File%20(Script%20for%20ROI).zip" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لتنزيل هذا الملف.</a>

Read this Scientific Article Protocol about Mast Cells in the Microenvironment of Hepatocellular Carcinoma Confer Favorable Prognosis: A Retrospective Study using QuPath Image Analysis Software at JoV

إن وجود الخلايا البدينة في الهامش الداخلي ومناطق الورم في سرطان الخلايا الكبدية بعد الاستئصال يمنح تشخيصا إيجابيا. تؤيد هذه الدراسة برنامج تحليل الصور QuPath كمنصة واعدة يمكن أن تلبي الحاجة إلى التكرار والاتساق والدقة في علم الأمراض الرقمي.

The insights provided by in-situ detection of immune cells within hepatocellular carcinoma (HCC) might present information on patient outcomes. Studies ...

ركزنا على تقييم توزيع الخلايا المناعية داخل البيئة المكروية للورم. أولا ، نساعد في تسلل الخلايا المناعية في عينة الورم والأنسجة المجاورة غير السرطانية ، ثم نحدد تأثيرها النذير في سرطان الخلايا الكبدية. التحدي الأول هو تعقيد هياكل الورم ، مما يجعل الفصل بين الورم والأنسجة غير السرطانية أمرا صعبا.بالإضافة إلى ذلك ، فإن الصواريخ اليدوية للحصول على الشهادات تستغرق وقتا طويلا. أيضا ، تلطيخ غير محدد هو مشكلة موروثة لجميع طرق الكيمياء المناعية. إن تعزيز التشخيص الذي تمنحه الخلايا الرئيسية في منطقة الورم المدفونة والهامش الداخلي يجادل بإجراء أبحاث أبعد على الخلايا الرئيسية في سرطان الخلايا الكبدية والسرطانات الأخرى.سيستفيد هذا التحليل من استخدام برنامج تحليل الطاقة للتعليق الدقيق على المنطقة محل الاهتمام وتصحيح القياس الكمي للخلايا المناعية.

mast-cells-microenvironment-hepatocellular-carcinoma-confer-favorable

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Mast Cells in the Microenvironment of Hepatocellular Carcinoma Confer Favorable Prognosis: A Retrospective Study using QuPath Image Analysis Software

830 Views.  Charles University. ركزنا على تقييم توزيع الخلايا المناعية داخل البيئة المكروية للورم. أولا ، نساعد في تسلل الخلايا المناعية في عينة الورم والأنسجة المجاورة غير السرطانية ، ثم نحدد تأثيرها النذير في سرطان الخلايا الكبدية. التحدي الأول هو تعقيد هياكل الورم ، مما يجعل الفصل بين الورم والأنسجة ?...

Video: Author Spotlight: Investigating Immune Cell Dynamics in the Tumor Microenvironment &#8212; Challenges and Innovations in Cancer Prognosis

The insights provided by in-situ detection of immune cells within hepatocellular carcinoma (HCC) might present information on patient outcomes. Studies investigating the expression and localization of immune cells within tumor tissues are associated with several challenges, including a lack of precise annotation for tumor regions and random selection of microscopic fields of view. QuPath is an open-source, user-friendly software that could meet the growing need for digital pathology in whole-slide image (WSI) analysis.
The infiltration of HCC and adjacent tissues by CD1a+ immature dendritic cells (iDCs), CD117+ mast cells, and NKp46+ natural killer cells (NKs) cells was assessed immunohistochemically in representative specimens of 67 patients with HCC who underwent curative resection. The area fraction (AF) of positively stained cells was assessed automatically in WSIs using QuPath in the tumor center (TC), inner margin (IM), outer margin (OM), and peritumor (PT) area. The prognostic significance of immune cells was evaluated for time to recurrence (TTR), disease-free survival (DFS), and overall survival (OS).
The AF of mast cells was significantly greater than the AF of NKs, and the AF of iDCs was significantly lower compared to NKs in each region of interest. High AFs of mast cells in the IM and PT areas were associated with longer DFS. In addition, high AF of mast cells in IM was associated with longer OS.
Computer-assisted analysis using this software is a suitable tool for obtaining prognostic information for tumor-infiltrating immune cells (iDCs, mast cells, and NKs) in different regions of HCC after resection. Mast cells displayed the greatest AF in all regions of interest (ROIs). Mast cells in the peritumor region and IM showed a positive prognostic significance.

The presence of mast cells in the inner margin and peritumor areas of hepatocellular carcinoma after resection confers a favorable prognosis. This study endorses QuPath image analysis software as a promising platform that could meet the need for reproducibility, consistency, and accuracy in digital pathology.