مقايسة ترابط القرب لتوطين البروتينات في مواقع تلف الحمض النووي

استجابة تلف الحمض النووي هي نظام خلوي يحافظ على استقرار الجينوم وسلامته. تسبب الاختلالات الوظيفية في هذه العملية العديد من الأمراض مثل السرطان والأمراض المرتبطة بالعمر والالتهابات المزمنة. هدفنا هو تحديد البروتينات التي تتعاون في هذه العملية ، مما يسمح بتحديد الأهداف البديلة للتكامل العلاجي.

لتوصيف مشاركة البروتين في استجابة تلف الحمض النووي ، عادة ما يتم تطبيق دراسات التألق المناعي مع الشكل الفسفوري لهيستون H2AX ، وهو علامة على تلف الحمض النووي. علاوة على ذلك ، يمكن إجراء فحوصات جمع البروتين مثل الترسيب المناعي المشترك بعد تلف الحمض النووي لتحديد دور البروتين في الإشارات. عادة ما تستند دراسات التفاعل إلى فحوصات الترسيب المناعي ، ولكنها في المختبر ولا توفر معلومات حول موقع التفاعل.

يمكن أن يعطي التألق المناعي معلومات حول توطين الخلية للبروتينات ، ولكن إثبات التفاعل قد يكون صعبا ويعتمد على دقة المجهر. نوضح هنا أن بروتوكولا بسيطا يجمع بين مقايسة ترابط القرب مع تلطيخ Gamma-H2AX يسمح بالتوصيفات المكانية والزمانية لتفاعل البروتينات في سياق تلف الحمض النووي. علاوة على ذلك ، قدمنا ماكرو سهل الاستخدام لتحليل البيانات.