DNA損傷部位におけるタンパク質の局在化のための近接リガンドアッセイ

DNA損傷応答は、ゲノムの安定性と完全性を維持する細胞システムです。このプロセスの機能不全は、癌、加齢性疾患、慢性炎症などのいくつかの病気を引き起こします。私たちの目標は、このプロセスに協力するタンパク質を特定し、治療統合のための代替ターゲットの特定を可能にすることです。

DNA損傷応答へのタンパク質の関与を特徴付けるために、通常、DNA損傷のマーカーであるH2AXヒストンのリン酸化型を用いた免疫蛍光研究が適用されます。さらに、DNA損傷後に共免疫沈降などのタンパク質収集アッセイを実施して、シグナル伝達におけるタンパク質の役割を特定することができます。相互作用研究は通常、免疫沈降アッセイに基づいていますが、これらはin vitroであり、相互作用の位置に関する情報は提供されません。

免疫蛍光法は、タンパク質の細胞局在に関する情報を得ることができますが、相互作用の証明は困難であり、顕微鏡の分解能に依存します。ここでは、近接リガンドアッセイとGamma-H2AX染色を組み合わせたシンプルなプロトコルにより、DNA損傷の状況におけるタンパク質の相互作用の空間的および時間的特性評価が可能になることを示します。さらに、データ分析のためのユーザーフレンドリーなマクロを提供しています。