Ensaio de ligante de proximidade para localizar proteínas em locais de dano ao DNA

A resposta ao dano ao DNA é um sistema celular que mantém a estabilidade e integridade do genoma. Disfunções neste processo causam várias doenças, como câncer, doenças relacionadas à idade e inflamação crônica. Nosso objetivo é identificar proteínas que cooperam nesse processo, o que permite a identificação de alvos alternativos para integração terapêutica.

Para caracterizar a participação de uma proteína na resposta ao dano ao DNA, geralmente são aplicados estudos de imunofluorescência com a forma fosforilada da histona H2AX, um marcador de dano ao DNA. Além disso, ensaios de coleta de proteínas, como co-imunoprecipitação, podem ser realizados após danos ao DNA para identificar o papel da proteína na sinalização. Os estudos de interação geralmente são baseados em ensaios de imunoprecipitação, mas estes são in vitro e não fornecem informações sobre a localização da interação.

A imunofluorescência pode fornecer informações sobre a localização celular das proteínas, mas provar a interação pode ser difícil e depende da resolução do microscópio. Mostramos aqui que um protocolo simples que combina ensaio de ligante de proximidade com coloração Gamma-H2AX permite a caracterização espacial e temporal da interação das proteínas no contexto de dano ao DNA. Além disso, fornecemos uma macro amigável para análise de dados.