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Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish

Drug treatment of whole animals is an essential tool in any model system for pharmacological and chemical genetic studies. Intravenous (IV) injection is ...

Children’s Hospital Boston

Harvard Medical School

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&#x5BE1;&#x805A;&#x56FD;&#x5BB6;&#x548C;&#x6709;&#x673A;&#x7269;&#x5C0F;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; IbpB &#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#x53CD;&#x5E94;&#x7075;&#x6D3B;&#x603B;&#x7AD9;&#x65B9;&#x9762;&#x5177;&#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Small heat shock proteins (sHSPs) represent an abundant and ubiquitous family of molecular chaperones that are believed to prevent irreversible aggregation of other cellular proteins under stress conditions. One of the most prominent features of sHSPs is that they exist as homo-oligomers. Examples of both monodisperse and polydisperse oligomers are found within this family. The small heat shock inclusion-body binding protein B (IbpB) of Escherichia coli, originally discovered as a component of inclusion bodies, exhibits a pronounced polydispersity in its oligomeric state. This research was performed to elucidate the temperature effect on the oligomeric state and chaperone-like activity of the polydisperse IbpB oligomers, as well as the structural basis for such a temperature effect. The data presented here demonstrate that the large oligomers of IbpB progressively dissociate into smaller ones at increasing heat-shock temperatures, accompanied by a notable enhancement of chaperone-like activities. The secondary structure, enriched mainly by beta-strands, is slightly changed with such temperature increases. The dimeric building blocks, which seem to be highly stable, act as the functional unit of IbpB. Limited proteolysis was used to identify the susceptible sites in IbpB that may compose the subunit interfaces, which indicated that the 11 residues at both the N and the C terminus are highly flexible and the removal of each will lead to the formation of dimers, as well as the disappearance of chaperone-like activities. Truncation of 11 residues from either end, using recombinant DNA technology, also led to the formation of dimeric mutant IbpB proteins lacking chaperone-like activities. Taken together, the flexible termini appear to be essential for small heat shock protein IbpB to generate various temperature-responsive oligomers, which exhibit various levels of chaperone-like activities, by interlinking or separating the dimer building blocks.

The essential role of the flexible termini in the temperature-responsiveness of the oligomeric state and chaperone-like activity for the polydisperse small heat shock protein IbpB from Escherichia coli.

Prot&eacute;ines de choc thermique faible (sHSP) repr&eacute;sentent une famille abondante et omnipr&eacute;sente de chaperons mol&eacute;culaires qui sont cens&eacute;s emp&ecirc;cher l&#39;agr&eacute;gation irr&eacute;versible des autres prot&eacute;ines cellulaires en conditions de stress. Une des caract&eacute;ristiques plus &eacute;minents de sHSP est qu&#39;ils existent comme homo-oligom&egrave;res. Exemples d&#39;oligom&egrave;res monodisperses tant polydispers&eacute;s se trouvent au sein de cette famille. La petite chaleur choc-corps d&#39;inclusion GRB2 B (IbpB) d&#39;Escherichia coli, d&eacute;couvert &agrave; l&#39;origine comme un composant de corps d&#39;inclusion, exhibe une polydispersit&eacute; prononc&eacute;e dans son &eacute;tat oligom&egrave;re. Cette recherche a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e afin d&#39;&eacute;lucider l&#39;effet de la temp&eacute;rature sur l&#39;&eacute;tat oligom&egrave;re et activit&eacute; chaperon des polydispersit&eacute; IbpB oligom&egrave;res, ainsi que la base structurale pour un tel effet de la temp&eacute;rature. Les donn&eacute;es pr&eacute;sent&eacute;es ici montrent que les grandes oligom&egrave;res de IbpB se dissocient progressivement en plus petits &agrave; l&#39;&eacute;l&eacute;vation des temp&eacute;ratures de choc thermique, accompagn&eacute;es d&#39;une am&eacute;lioration notable des activit&eacute;s semblables &agrave; ceux chaperon. La structure secondaire, enrichie principalement par les b&ecirc;ta-brins, est l&eacute;g&egrave;rement modifi&eacute;e avec ces augmentations de temp&eacute;rature. Les blocs de construction dim&egrave;res, qui semblent &ecirc;tre tr&egrave;s stable, agir comme unit&eacute; fonctionnelle de IbpB. La prot&eacute;olyse limit&eacute;e a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour identifier les sites sensibles en IbpB qui peuvent composer les interfaces de la sous-unit&eacute;, qui a indiqu&eacute; que les 11 r&eacute;sidus &agrave; N et &agrave; la partie C terminale sont tr&egrave;s flexibles et la suppression de chacun conduira &agrave; la formation de dim&egrave;res, ainsi que la disparition des activit&eacute;s semblables &agrave; ceux chaperon. Troncature de 11 r&eacute;sidus provenant de le des extr&eacute;mit&eacute;s, en utilisant la technologie de recombinaison de l&#39;ADN, a &eacute;galement conduit &agrave; la formation de dim&egrave;res prot&eacute;ines mutantes de IbpB manque d&#39;activit&eacute;s semblables &agrave; ceux chaperon. Pris ensemble, les terminus flexibles apparaissent indispensable pour petits heat shock protein IbpB pour g&eacute;n&eacute;rer des oligom&egrave;res de temp&eacute;rature diff&eacute;rents, qui pr&eacute;sentent diff&eacute;rents niveaux d&#39;activit&eacute;s semblables &agrave; ceux chaperon, par la mise en relation ou en s&eacute;parant les blocs de construction du dim&egrave;re.

Le r&ocirc;le essentiel des terminus du flexibles de la temp&eacute;rature-r&eacute;activit&eacute; de l&#39;&eacute;tat oligom&egrave;re et chaperon-comme l&#39;activit&eacute; de la prot&eacute;ine de choc thermique petit IbpB polydispers&eacute;s, d&#39;Escherichia coli.

Die wesentliche Rolle der flexiblen Termini in der Temperatur-Ansprechverhalten des oligomeren Zustand und Chaperon-&#xE4;hnliche Aktivit&#xE4;t f&#xFC;r die polydispersen kleinen Hitzeschock-Protein IbpB aus Escherichia coli.

Proteine di scossa di calore piccola (sHSPs) rappresentano un&#39;abbondante e onnipresente famiglia di chaperoni molecolari che si ritiene che per prevenire l&#39;aggregazione irreversibile delle altre proteine cellulari in condizioni di stress. Una delle caratteristiche pi&ugrave; importanti di sHSPs &egrave; che esistono come homo-oligomeri. Esempi di oligomeri monodispersi sia polidispersi sono trovati all&#39;interno di questa famiglia. Il calore piccola scossa inclusione-corpo proteina B (IbpB) di Escherichia coli, originariamente scoperto come componente dei corpi di inclusione, esibisce un pronunciato polidisperdibilit&agrave; nel suo stato oligomerica. Questa ricerca &egrave; stata eseguita per chiarire l&#39;effetto della temperatura sulla oligomerici dello stato e sull&#39;attivit&agrave; di chaperone-like degli oligomeri IbpB polidispersi, come pure la base strutturale per un effetto di temperatura. I dati qui presentati dimostrano che i grandi oligomeri di IbpB progressivamente dissociano in quelle pi&ugrave; piccole ad aumentare le temperature di scossa di calore, accompagnate da un notevole potenziamento della attivit&agrave; di chaperone-like. La struttura secondaria, arricchita soprattutto da beta-filamenti, &egrave; leggermente cambiata con tali aumenti di temperatura. I blocchi di costruzione dimerica, che sembrano essere altamente stabile, agire come unit&agrave; funzionale di IbpB. Proteolisi limitata &egrave; stato utilizzato per identificare i siti sensibili in IbpB che possono comporre le interfacce di subunit&agrave;, che ha indicato che i 11 residui sia la N e C terminale sono altamente flessibili e la rimozione di ciascuna porter&agrave; alla formazione di dimeri, cos&igrave; come la scomparsa di attivit&agrave; di chaperone-like. Troncamento di 11 residui da entrambe le estremit&agrave;, utilizzando la tecnologia del DNA ricombinante, ha portato anche alla formazione di proteine di IbpB mutanti dimerica carente attivit&agrave; di chaperone-like. Presi insieme, i termini flessibile sembrano essere essenziali per la proteina di shock termico piccolo IbpB per generare vari oligomeri temperatura-sensibli a reagire, che presentano vari livelli di attivit&agrave; di chaperone-like, interlinking o separare i blocchi di costruzione del dimero.

Il ruolo essenziale della stazione termini flessibile in temperatura-reattivit&agrave; dello stato oligomerici e attivit&agrave; di chaperone-like per la proteina di scossa di calore piccola IbpB polidispersi da Escherichia coli.

&#x5C0F;&#x578B;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (sHSPs)&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x51DD;&#x96C6;&#x3092;&#x4E88;&#x9632;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8C4A;&#x304B;&#x3067;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SHSPs &#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x7279;&#x5FB4;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x30DB;&#x30E2;-&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5358;&#x5206;&#x6563;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x591A;&#x5206;&#x6563;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x4F8B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x5185;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5C0F;&#x578B;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x5C01;&#x5165;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; B (IbpB) &#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3001;&#x3082;&#x3068;&#x3082;&#x3068;&#x767A;&#x898B;&#x5C01;&#x5165;&#x4F53;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x767A;&#x97F3;&#x306E;&#x591A;&#x5206;&#x6563;&#x6027;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6E29;&#x5EA6;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x57FA;&#x76E4;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x591A;&#x5206;&#x6563; IbpB &#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x89E3;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;IbpB &#x306E;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x71B1;&#x885D;&#x6483;&#x6E29;&#x5EA6;&#x306E;&#x4E0A;&#x6607;&#x3067;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x3082;&#x306E;&#x306B;&#x5F90;&#x3005; &#x306B;&#x5207;&#x308A;&#x96E2;&#x3057;&#x3066;&#x8003;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&Beta;-&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x3067;&#x4E3B;&#x306B;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3001;&#x4E8C;&#x6B21;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6E29;&#x5EA6;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x82E5;&#x5E72;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x308B;, &#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x30D3;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306F;&#x3001;IbpB &#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5358;&#x4F4D;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x52D5;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9650;&#x5B9A;&#x5206;&#x89E3; 11 &#x306E;&#x6B8B;&#x6E23;&#x306E; N&#x3001;C &#x672B;&#x7AEF;&#x306B;&#x306F;&#x9AD8;&#x3044;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x304C;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x6D88;&#x5931;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF; &#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059; IbpB &#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048; DNA &#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x7AEF;&#x304B;&#x3089; 11 &#x6B8B;&#x57FA;&#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x5909;&#x7570; IbpB &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x5C0F;&#x578B;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; IbpB &#x76F8;&#x4E92;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30D3;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x5404;&#x7A2E;&#x306E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x30C6;&#x30EB;&#x30DF;&#x30CB;&#x6E29;&#x5EA6;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x72B6;&#x614B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x591A;&#x5206;&#x6563;&#x306E;&#x5C0F;&#x578B;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; IbpB &#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xC791;&#xC740; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (sHSPs)&#xB294; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC9D1;&#xACC4;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xC790; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xC758; &#xD48D;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; &#xD328;&#xBC00;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Shsps&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; &#xD638;&#xBAA8; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0;&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8; &#xBD84;&#xC0B0; &#xBC0F; polydisperse &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC758; &#xC608;&#xAC00;&#xC774; &#xAC00;&#xC871; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC791;&#xC740; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xD3EC;&#xD568; &#xBC14;&#xB514; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; B (IbpB) &#xC6D0;&#xB798; &#xD3EC;&#xD568; &#xC2DC;&#xCCB4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C; &#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; oligomeric &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC74C;&#xB41C; &#xC99D;&#xAC00;&#xD560;&#xC218;&#xB85D; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; oligomeric &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xC628;&#xB3C4; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; polydisperse IbpB &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0;&#xC758; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAC19;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xC628;&#xB3C4; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C; &#xC704;&#xD574; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Ibpb&#xC758; &#xD070; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC810;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB3D9;&#xD589; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC8FC;&#xBAA9;&#xD560; &#xB9CC;&#xD55C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xC628;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; &#xAC83; &#xB4E4;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCA0;&#xD0C0; &#xAC00;&#xB2E5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xB18D;&#xCD95; &#xC774;&#xCC28; &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC628;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8; &#xC57D;&#xAC04; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; &#xAC83; &#xAC19;&#xB2E4;, dimeric &#xBE14;&#xB85D; Ibpb&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xC704; &#xC5ED;&#xD560;. &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xBCA0;&#xC774;&#xC2A4; N &#xBC0F; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; 11 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC740; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC720;&#xC5F0; &#xD558; &#xACE0; &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAC19;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC2E4;&#xC885;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC791;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; Ibpb&#xC5D0; &#xCDE8;&#xC57D; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C;. &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; DNA &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC591;&#xCABD; &#xB05D;&#xC5D0;&#xC11C; 11 &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC798;&#xB9BC; &#xB610;&#xD55C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAC19;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBD80;&#xC871; dimeric &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; IbpB &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC8FC;&#xB3C4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8; &#xC791;&#xC740; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; interlinking &#xB610;&#xB294; dimer &#xBE4C;&#xB529; &#xBE14;&#xB85D;&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAC19;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC628;&#xB3C4; &#xBC18;&#xC751; &#xC62C;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; IbpB &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAC83; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Oligomeric &#xC0C1;&#xD0DC; &#xBC0F; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; polydisperse &#xC791;&#xC740; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Ibpb&#xC758; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xAC19;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC628;&#xB3C4; &#xC751;&#xB2F5;&#xC131;&#xC5D0; &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xD14C;&#xB974;&#xBBF8;&#xB2C8;&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;.

Peque&ntilde;o heat shock proteins (sHSPs) representan una familia abundante y omnipresente de chaperonas moleculares que se cree para prevenir la agregaci&oacute;n irreversible de otras prote&iacute;nas celulares bajo condiciones de estr&eacute;s. Una de las caracter&iacute;sticas m&aacute;s prominentes del sHSPs es que existen como homo-olig&oacute;meros. Ejemplos de olig&oacute;meros tanto monodispersos y polidispersas se encuentran dentro de esta familia. El calor peque&ntilde;o choque cuerpo de inclusi&oacute;n prote&iacute;na de Uni&oacute;n B (IbpB) de Escherichia coli, descubierto como un componente de cuerpos de inclusi&oacute;n, exhibe un Polidispersidad pronunciada en su estado oligom&eacute;rica. Esta investigaci&oacute;n fue realizada para dilucidar el efecto de la temperatura en el estado oligom&eacute;rica y acompa&ntilde;ante-como la actividad de los olig&oacute;meros de IbpB polidispersas, as&iacute; como la base estructural para tal efecto de temperatura. Los datos aqu&iacute; presentados demuestran que los grandes olig&oacute;meros de IbpB disocian progresivamente en otras m&aacute;s peque&ntilde;as en el aumento de la temperatura de shock t&eacute;rmico, acompa&ntilde;ado por una notable mejora de actividades como acompa&ntilde;ante. La estructura secundaria, principalmente por beta-filamentos, se cambia un poco con estos aumentos de temperatura. Los bloques de edificio dim&eacute;rico, que parecen ser muy estable, act&uacute;an como la unidad funcional de IbpB. Prote&oacute;lisis limitada fue utilizada para identificar los lugares susceptibles de IbpB que puede componer las interfaces de la subunidad, que indicaron que los 11 residuos en tanto la N y la terminal C son altamente flexibles y la eliminaci&oacute;n de cada uno dar&aacute; lugar a la formaci&oacute;n de d&iacute;meros, as&iacute; como la desaparici&oacute;n de actividades como acompa&ntilde;ante. Truncamiento de 11 residuos de cualquiera de los extremos, utilizando la tecnolog&iacute;a del ADN recombinante, tambi&eacute;n condujo a la formaci&oacute;n de las prote&iacute;nas IbpB dim&eacute;rica mutantes carente de actividades como acompa&ntilde;ante. Tomados en conjunto, los t&eacute;rminos flexibles parecen ser esenciales para la prote&iacute;na de choque t&eacute;rmico peque&ntilde;o IbpB para generar varios olig&oacute;meros temperaturas sensibles, que exhiben diferentes niveles de actividades como acompa&ntilde;ante, por interconexi&oacute;n o separar los bloques de edificio de d&iacute;mero.

El papel esencial de los t&eacute;rminos flexibles en la temperatura-capacidad de respuesta del estado oligom&eacute;rica y acompa&ntilde;ante-como actividad de la prote&iacute;na de choque de calor peque&ntilde;o polidispersas IbpB de Escherichia coli.

&#x5C0F;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; (sHSPs) &#x4EE3;&#x8868;&#x4E86;&#x4E00;&#x79CD;&#x4E30;&#x5BCC;&#x548C;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4F34;&#x4FA3;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3002;&#x5F53;&#x524D;&#x6A21;&#x578B;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8BE5; sHSPs &#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x805A;&#x96C6;&#x7684;&#x975E;&#x672C;&#x673A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5F62;&#x6210;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;SHSPs &#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x6D3B;&#x52A8;&#x901A;&#x5E38;&#x662F;&#x7531;&#x538B;&#x5236;&#x70ED;&#x6216;&#x5316;&#x5B66;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x805A;&#x96C6;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x3002;&#x4E0D;&#x8FC7;&#xFF0C;sHSPs &#x7ECF;&#x5E38;&#x53D1;&#x73B0;&#x5728;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x62A5;&#x544A;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5B83;&#x660E;&#x663E;&#x5730;&#x8868;&#x660E;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027; sHSP/&#x57FA;&#x4F53;&#x590D;&#x6742;&#x5F62;&#x6210; sHSP &#x91CD;&#x8F7D;&#x975E;&#x672C;&#x673A;&#x886C;&#x5E95;&#xFF0C;&#x662F;&#x4F53;&#x5185;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x975E;&#x5E38;&#x60C5;&#x51B5;&#x65F6;&#x3002;SHSPs &#x51FD;&#x6570;&#x6765;&#x9632;&#x6B62;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x805A;&#x96C6;&#x7684;&#x63D0;&#x6848;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5177;&#x8BEF;&#x5BFC;&#x6027;&#x3002;sHSPs &#x663E;&#x793A;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EB3;&#x5165;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x96C6;&#x7684;&#x6D88;&#x9664;&#x3002;

&#x5C0F;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

Small heat-shock proteins (sHSPs) represent an abundant and ubiquitous family of molecular chaperones. The current model proposes that sHSPs function to prevent irreversible aggregation of non-native proteins by forming soluble complex. The chaperone activity of sHSPs is usually determined by the capacity to suppress thermally or chemically induced protein aggregation. However, sHSPs were frequently found in the insoluble complex particularly in vivo. In this report, it is clearly revealed that the insoluble sHSP/substrate complex is formed when sHSP is overloaded with non-native substrates, which is the very case under in vivo conditions. The proposal that sHSPs function to prevent the protein aggregation seems misleading. sHSPs appear to promote the elimination of protein aggregates by incorporating into the insoluble protein complex.

Small heat-shock proteins function in the insoluble protein complex.

Prot&eacute;ines de choc thermique faible (sHSP) repr&eacute;sentent une famille abondante et omnipr&eacute;sente de chaperons mol&eacute;culaires. Le mod&egrave;le actuel propose cette fonction sHSP pour emp&ecirc;cher l&#39;agr&eacute;gation irr&eacute;versible des prot&eacute;ines non indig&egrave;nes en formant des complexes solubles. L&#39;activit&eacute; d&#39;escorte de sHSP est g&eacute;n&eacute;ralement d&eacute;termin&eacute;e par la capacit&eacute; &agrave; supprimer l&#39;agr&eacute;gation de la prot&eacute;ine induite thermiquement ou chimiquement. Cependant, sHSP fr&eacute;quemment trouv&eacute;es dans le complexe insoluble en particulier in vivo. Dans ce rapport, il est clairement r&eacute;v&eacute;l&eacute; que le complex sHSP/substrat insoluble est form&eacute; quand sHSP est surcharg&eacute;e avec des substrats non indig&egrave;nes, qui est le cas m&ecirc;me dans des conditions in vivo. La proposition que sHSP fonctionne pour emp&ecirc;cher l&#39;agr&eacute;gation des prot&eacute;ines semble fallacieuse. sHSP semble favoriser l&#39;&eacute;limination des agr&eacute;gats de prot&eacute;ine en incorporant dans la complexe de prot&eacute;ines insoluble.

Fonction de prot&eacute;ines de petit choc thermique dans la complexe de prot&eacute;ines insoluble.

Kleine Hitzeschockproteine &#x200B;&#x200B;funktionieren in der unl&#xF6;slichen Protein-Komplex.

Proteine di scossa di calore piccola (sHSPs) rappresentano una famiglia di chaperoni molecolari abbondante e onnipresente. L&#39;attuale modello propone che la funzione sHSPs per impedire irreversibile aggregazione di proteine non-native formando complessi solubili. L&#39;attivit&agrave; di chaperone di sHSPs &egrave; solitamente determinata dalla capacit&agrave; di eliminare l&#39;aggregazione di proteine indotte termicamente o chimicamente. Tuttavia, sHSPs erano frequentemente trovati nel complesso insolubile particolarmente in vivo. In questa relazione, si rivela chiaramente che il complesso insolubile sHSP/substrato &egrave; formato quando sHSP &egrave; sovraccaricato con substrati non nativo, che &egrave; il caso molto sotto le condizioni in vivo. La proposta che sHSPs funzione per evitare l&#39;aggregazione proteica sembra fuorviante. sHSPs sembrano favorire l&#39;eliminazione degli aggregati di proteina incorporando nel complesso proteico insolubile.

Funzione proteine di scossa di calore piccola nel complesso proteico insolubile.

&#x5C0F;&#x578B;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; (sHSPs)&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x8C4A;&#x304B;&#x3067;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x975E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x96C6;&#x7D04;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B; sHSPs &#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.SHSPs &#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x901A;&#x5E38;&#x71B1;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x51DD;&#x96C6;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;sHSPs &#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x7279;&#x306B; in vivo &#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5831;&#x544A;&#x3067;&#x306F;, sHSP &#x975E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x57FA;&#x677F;&#x3068; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D0;&#x30FC; &#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027; sHSP/&#x57FA;&#x677F;&#x8907;&#x96D1;&#x304C;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;SHSPs &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x51DD;&#x96C6;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x63D0;&#x6848;&#x306F;&#x8AA4;&#x89E3;&#x3092;&#x62DB;&#x304F;&#x3088;&#x3046;&#x3067;&#x3059;&#x3002;sHSPs &#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4E0D;&#x6EB6;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3002;

&#xC791;&#xC740; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (sHSPs)&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xC758; &#xD48D;&#xBD80; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; &#xD328;&#xBC00;&#xB9AC;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC; &#xBAA8;&#xB378; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC774; &#xC544;&#xB2CC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC9D1;&#xACC4;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; sHSPs &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Shsps&#xC758; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F4; &#xB610;&#xB294; &#xD654;&#xD559;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xB824;&#xBA74; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, sHSPs &#xC790;&#xC8FC; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xD788; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;. &#xC774; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131; sHSP/&#xAE30;&#xD310; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD615;&#xC2DD;&#xC774; sHSP in vivo &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xACBD;&#xC6B0; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC774; &#xC544;&#xB2CC; &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xC6A9; &#xB418; &#xAC83;&#xC774; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB4DC;&#xB7EC;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. SHSPs &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC9D1;&#xACC4; &#xBC29;&#xC9C0; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC81C;&#xC548; &#xC798;&#xBABB; &#xB41C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC778;&#xB2E4;. Shsps&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xB4EF;&#xD558;&#xB2E4;.

&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBD88;&#xC6A9; &#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE30;&#xB2A5;.

Prote&iacute;nas de choque t&eacute;rmico peque&ntilde;o (sHSPs) representan una familia abundante y omnipresente de chaperonas moleculares. El modelo actual propone esa funci&oacute;n sHSPs para evitar la agregaci&oacute;n irreversible de prote&iacute;nas no nativos formando complejo soluble. La actividad de acompa&ntilde;ante de sHSPs generalmente se determina por la capacidad de inhibir la agregaci&oacute;n de la prote&iacute;na inducida t&eacute;rmicamente o qu&iacute;micamente. Sin embargo, sHSPs frecuentemente encontradas en el complejo insoluble particularmente en vivo. En este informe, se revela claramente que el insoluble sHSP/sustrato complejo se forma cuando sHSP est&aacute; sobrecargada con sustratos no nativos, que es el mismo caso en condiciones in vivo. La propuesta que sHSPs funcionan para evitar la agregaci&oacute;n de la prote&iacute;na parece enga&ntilde;osa. sHSPs parecen promover la eliminaci&oacute;n de los agregados de prote&iacute;nas mediante la incorporaci&oacute;n en el complejo insoluble de la prote&iacute;na.

Funci&oacute;n de prote&iacute;nas de choque t&eacute;rmico peque&ntilde;o en el complejo insoluble de la prote&iacute;na.

sHSP (&#x5C0F;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D;) IbpB (&#x5217;&#x5165;-&#x8EAB;&#x4F53;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; B&#xFF09; &#x4ECE;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x79F0;&#x4E3A; ATP &#x72EC;&#x7ACB;&#x63A7;&#x80A1;&#x4F34;&#x4FA3;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x914D;&#x5408;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x9632;&#x6B62;&#x805A;&#x5408;&#x6613;&#x53D1;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; insolubilization&#x3002;&#x5B83;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0; IbpB &#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x529F;&#x80FD;&#x5927;&#x5927;&#x8C03;&#x5236;&#x800C;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x6E29;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5373;&#x5F53;&#x6E29;&#x5EA6;&#x5347;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x6B63;&#x5E38;&#x5230;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#xFF0C;IbpB &#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x63D0;&#x5347;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5B83;&#x80FD;&#x591F;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6613;&#x53D1;&#x805A;&#x5408;&#x5BA2;&#x6237;&#x7AEF;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x4EBA;&#x4EEC;&#x666E;&#x904D;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x91CA;&#x653E;&#x548C; sHSPs &#x5BA2;&#x6237;&#x7AEF;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x590D;&#x6027;&#x53D6;&#x51B3;&#x7684; ATP &#x4F9D;&#x8D56;&#x4F34;&#x4FA3; Hsp &#xFF08;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D;) &#x7B49;&#x63F4;&#x52A9; 70 &#x548C; Hsp100 &#x5F53;&#x73AF;&#x5883;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4ECE;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x6062;&#x590D;&#x6B63;&#x5E38;&#x65F6;&#xFF0C;&#x6B64;&#x6062;&#x590D;&#x9636;&#x6BB5; sHSPs &#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x5C1A;&#x672A;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x548C;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684; IbpB &#x540E;&#x7531;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x4E00;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4E0B;&#x964D;&#x81F3;&#x6B63;&#x5E38;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; IbpB&#xFF0C;&#x5373;&#x6210;&#x4E3A;&#x529F;&#x80FD;&#x53EA;&#x6709;&#x5728;&#x70ED;&#x6FC0;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5C06;&#x4FDD;&#x7559;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x5E94;&#x6FC0;&#x72B6;&#x6001;&#x5220;&#x9664;&#x540E;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x6BD4;&#x8F83;&#x6F14;&#x793A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x7684; IbpB &#x662F;&#x6709;&#x522B;&#x4E8E;&#x975E;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x7684; IbpB &#x7684;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x8F6C;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#x5728; N &#x548C; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x3001; &#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x4EE5;&#x53CA;&#x589E;&#x5F3A;&#x52A8;&#x6001;&#x4E9A;&#x57FA;&#x89E3;&#x79BB;/&#x91CD;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8010;&#x4EBA;&#x5BFB;&#x5473;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x7684; IbpB &#x663E;&#x793A;&#x5176;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#xFF0C;&#x6025;&#x5267;&#x51CF;&#x5C11;&#x6697;&#x793A;&#x7684;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x7F51;&#x7AD9;&#x66DD;&#x5149;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0D;&#x4E3A; IbpB &#x5C55;&#x793A;&#x4F34;&#x4FA3;&#x6D3B;&#x52A8;&#x552F;&#x4E00;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD; &#39;holdases&#39; sHSPs &#x4F5C;&#x4E3A;&#x7EF4;&#x62A4;&#x5C06;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x8981;&#x6062;&#x590D;&#x4ECE;&#x70ED;&#x51B2;&#x51FB;&#x5E94;&#x529B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;

&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x5E94;&#x6FC0;&#x72B6;&#x6001;&#x5220;&#x9664;&#x540E;&#x53EF;&#x4FDD;&#x7559;&#x5C0F;&#x70ED;&#x4F11;&#x514B;&#x86CB;&#x767D; IbpB &#x7684;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x4F34;&#x4FA3;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;

sHSP (small heat-shock protein) IbpB (inclusion-body-binding protein B) from Escherichia coli is known as an ATP-independent holding chaperone which prevents the insolubilization of aggregation-prone proteins by forming stable complexes with them. It was found that the chaperone function of IbpB is greatly modulated by the ambient temperature, i.e. when the temperature increases from normal to heat-shock, the chaperone activity of IbpB is dramatically elevated to a level that allows it to effectively bind the aggregation-prone client proteins. Although it is generally believed that the release and refolding of the client protein from the sHSPs depends on the aid of the ATP-dependent chaperones such as Hsp (heat-shock protein) 70 and Hsp100 when the ambient temperature recovers from heat-shock to normal, the behaviour of the sHSPs during this recovery stage has not yet been investigated. In the present study, we examined the behaviour and properties of IbpB upon temperature decrease from heat-shock to normal. We found that IbpB, which becomes functional only under heat-shock conditions, retains the chaperone activity for an extended period of time after the heat-shock stress condition is removed. A detail comparison demonstrates that such preconditioned IbpB is distinguished from the non-preconditioned IbpB by a remarkable conformational transformation, including a significant increase in the flexibility of the N- and C-terminal regions, as well as enhanced dynamic subunit dissociation/reassociation. Intriguingly, the preconditioned IbpB displayed a dramatic decrease in its surface hydrophobicity, suggesting that the exposure of hydrophobic sites might not be the sole determinant for IbpB to exhibit chaperone activity. We propose that the maintenance of the chaperone activity for such 'holdases' as sHSPs would be important for cells to recover from heat-shock stress.

The dramatically increased chaperone activity of small heat-shock protein IbpB is retained for an extended period of time after the stress condition is removed.

sHSP (prot&eacute;ine de choc thermique petit) IbpB (inclusion-corps-GRB2 B) d&#39;Escherichia coli est connue comme un chaperon d&#39;exploitation ATP-ind&eacute;pendante qui emp&ecirc;che l&#39;insolubilisation des prot&eacute;ines sujettes &agrave; l&#39;agr&eacute;gation en formant des complexes stables avec eux. Il a &eacute;t&eacute; constat&eacute; que la fonction chaperon de IbpB est fortement modul&eacute;e par la temp&eacute;rature ambiante, c&#39;est-&agrave;-dire lorsque la temp&eacute;rature augmente de normal &agrave; choc thermique, l&#39;activit&eacute; d&#39;escorte de IbpB est consid&eacute;rablement &eacute;lev&eacute;e &agrave; un niveau qui lui permet de se lier efficacement les prot&eacute;ines client sujettes &agrave; l&#39;agr&eacute;gation. Bien qu&#39;il est g&eacute;n&eacute;ralement admis que la lib&eacute;ration et le repliement de la prot&eacute;ine de client de la sHSP repose sur l&#39;aide des chaperons ATP-d&eacute;pendante comme Hsp (prot&eacute;ine de choc thermique) 70 et Hsp100 lorsque la temp&eacute;rature ambiante se remet de choc thermique &agrave; la normale, le comportement de la sHSP pendant cette phase de r&eacute;cup&eacute;ration n&#39;a pas encore &eacute;t&eacute; examin&eacute;. Dans la pr&eacute;sente &eacute;tude, nous avons &eacute;tudi&eacute; le comportement et les propri&eacute;t&eacute;s de IbpB &agrave; la diminution de la temp&eacute;rature de choc thermique &agrave; la normale. Nous avons trouv&eacute; que IbpB, qui devient fonctionnel que dans des conditions de choc thermique, conserve l&#39;activit&eacute; d&#39;escorte pour une longue p&eacute;riode de temps apr&egrave;s avoir retir&eacute; la condition de contrainte de choc thermique. Une comparaison d&eacute;taill&eacute;e montre que ce IbpB pr&eacute;conditionn&eacute; se distingue de la IbpB non pr&eacute;conditionn&eacute;s par une remarquable transformation conformationnelle, y compris une augmentation significative dans la flexibilit&eacute; des r&eacute;gions N - et C-terminal, ainsi que des dynamiques sous-unit&eacute; dissociation/r&eacute;association. Curieusement, le IbpB pr&eacute;conditionn&eacute; affiche une diminution dramatique de son hydrophobicit&eacute; de surface, ce qui sugg&egrave;re que l&#39;exposition des sites hydrophobes pourrait ne pas &ecirc;tre le seul facteur d&eacute;terminant pour IbpB activit&eacute; chaperon. Nous proposons que le maintien de l&#39;activit&eacute; d&#39;escorte pour ces &laquo; holdases &raquo; comme sHSP serait important pour les cellules r&eacute;cup&eacute;rer du stress de choc thermique.

L&#39;activit&eacute; chaperon une hausse ph&eacute;nom&eacute;nale de la prot&eacute;ine de choc thermique petit IbpB est conserv&eacute;e pendant une p&eacute;riode prolong&eacute;e de temps apr&egrave;s que la condition de contrainte est supprim&eacute;e.

sHSP (kleine Hitze-Schock-Protein) ist IbpB (Aufnahme-K&ouml;rper-verbindliches Protein B) von Escherichia coli als ein ATP-unabh&auml;ngigen Betrieb Anstandsdame bekannt, die die Insolubilization der Aggregation neigende Proteine verhindert durch bilden stabile Komplexe mit ihnen. Es wurde festgestellt, dass die Anstandsdame-Funktion des IbpB noch stark durch die Umgebungstemperatur d.h. moduliert ist wenn der Temperaturanstieg von normal in Hitze-Schock, die Anstandsdame-Aktivit&auml;t von IbpB ist drastisch erh&ouml;ht, um ein Niveau, das effektiv die Aggregation neigende Client-Proteine binden kann. Obwohl es im Allgemeinen geglaubt wird, dass die Freigabe und R&uuml;ckfaltung von der Client-Protein aus der sHSPs abh&auml;ngt Hilfe die ATP-abh&auml;ngige Chaperone wie Hsp (Hitzeschock Protein) 70 und Hsp100 bei Umgebungstemperatur von Hitze-Schock erholt, normal, ist das Verhalten der sHSPs in dieser Phase der Erholung noch nicht untersucht worden. In der vorliegenden Studie untersuchten wir das Verhalten und die Eigenschaften des IbpB bei der Temperatur R&uuml;ckgang von Hitze-Schock auf Normal. Wir fanden, dass IbpB, die funktionale nur unter Hitzeschock Bedingungen wird, beh&auml;lt die Anstandsdame-Aktivit&auml;t f&uuml;r l&auml;ngere Zeit nach die Hitze-Schock-Spannung-Bedingung entfernt wird. Ein Detail-Vergleich zeigt, dass solche vorkonditionierten IbpB unterscheidet sich von der IbpB nicht Bauteile sind durch eine bemerkenswerte Konformations&auml;nderungen Transformation, einschlie&szlig;lich eine deutliche Steigerung in der Flexibilit&auml;t der N - und C-terminalen Regionen, sowie verbesserte dynamische Untereinheit Dissoziation/Reassozation. Interessanterweise angezeigt die vorkonditionierten IbpB einen dramatischen R&uuml;ckgang seiner Oberfl&auml;che Hydrophobie, was darauf hindeutet, dass die Exposition der hydrophoben Websites m&ouml;glicherweise nicht die alleinige Determinante f&uuml;r IbpB Anstandsdame Aktivit&auml;t aufweisen. Wir schlagen vor, dass die Aufrechterhaltung der Anstandsdame Aktivit&auml;t f&uuml;r solche &#39;Holdases&#39; als sHSPs w&auml;re wichtig f&uuml;r Zellen von Hitzeschock Stress erholen.

Die stark gestiegenen Chaperon-Aktivit&auml;t der kleinen Hitzeschock-Protein IbpB bleibt f&uuml;r l&auml;ngere Zeit nach der Stress-Zustand entfernt wird.

sHSP (proteine di scossa di calore piccola) IbpB (inclusione-corpo-binding protein B) da Escherichia coli &egrave; conosciuto come un chaperone di azienda ATP-indipendente che impedisce l&#39;insolubilizzazione di aggregazione-inclini proteine formando complessi stabili con loro. Si &egrave; constatato che la funzione di chaperone di IbpB &egrave; notevolmente modulata dalla temperatura ambiente, cio&egrave; quando la temperatura aumenta da normale a scossa di calore, l&#39;attivit&agrave; di chaperone di IbpB &egrave; drammaticamente elevata a un livello che permette di associare efficacemente le proteine client aggregazione-incline. Anche se si ritiene generalmente che il rilascio e il ripiegamento della proteina client dalla sHSPs dipende l&#39;aiuto dei chaperoni trifosfato di Adenosina-dipendente come Hsp (proteine di scossa di calore) 70 e Hsp100 quando la temperatura ambiente recupera calore-shock alla normalit&agrave;, il comportamento di sHSPs durante questa fase di recupero non &egrave; ancora stato studiato. Nel presente studio, abbiamo esaminato il comportamento e le propriet&agrave; della IbpB su temperatura diminuzione di scossa di calore alla normalit&agrave;. Abbiamo trovato che IbpB, che diventa funzionale solo in condizioni di scossa di calore, mantiene l&#39;attivit&agrave; di chaperone per un lungo periodo di tempo dopo che la condizione di stress di scossa di calore &egrave; rimosso. Un confronto di dettaglio dimostra che tale tempo IbpB &egrave; distinto dalla IbpB non condizionato da una notevole trasformazione conformazionale, compreso un aumento significativo nella flessibilit&agrave; delle regioni N - e C-terminale, cos&igrave; come migliorata dinamica subunit&agrave; dissociazione/riassociazione. Curiosamente, il IbpB tempo visualizzato una diminuzione drammatica nella sua idrofobicit&agrave; superficiale, suggerendo che l&#39;esposizione dei siti idrofobi potrebbe non essere il solo determinante per IbpB ad esporre chaperone attivit&agrave;. Proponiamo che il mantenimento dell&#39;attivit&agrave; chaperone per tali &#39;holdases&#39; come sHSPs sarebbe importante per le cellule di recuperare dallo stress di scossa di calore.

L&#39;attivit&agrave; di chaperone significativamente maggiore di proteine di scossa di calore piccola IbpB &egrave; mantenuto per un periodo prolungato di tempo, dopo aver rimosso la condizione di stress.

sHSP &#xFF08;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#xFF09; IbpB &#xFF08;&#x5C01;&#x5165;&#x4F53;&#x7D50;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; B) &#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x5F7C;&#x3089;&#x3068;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306A;&#x932F;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x96C6;&#x8A08;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E0D;&#x6EB6;&#x5316;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3059;&#x308B; ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x6301;&#x682A;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x6607;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027; IbpB &#x306E;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x304B;&#x3089;&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x6607;&#x683C;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x96C6;&#x8A08;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B; IbpB &#x306E;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3057;&#x3001;sHSPs &#x304B;&#x3089;&#x30AF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B; ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; Hsp &#xFF08;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#xFF09; &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x63F4;&#x52A9; 70 &#x3068; Hsp100 &#x5468;&#x56F2;&#x6E29;&#x5EA6;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x304B;&#x3089;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x4FE1;&#x3058;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5FA9;&#x65E7;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067; sHSPs &#x306E;&#x6319;&#x52D5;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x6319;&#x52D5;&#x3068;&#x901A;&#x5E38;&#x6E29;&#x5EA6;&#x6E1B;&#x5C11;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x304B;&#x3089;&#x8981; IbpB &#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x3001;IbpB &#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x71B1;&#x885D;&#x6483;&#x5FDC;&#x529B;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x5F8C;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x9577;&#x6642;&#x9593;&#x4FDD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8A73;&#x7D30;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x4ED8;&#x304D; IbpB &#x304B;&#x3089;&#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x4ED8;&#x304D;&#x7981;&#x7159; IbpB &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x3068; C &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x9855;&#x8457;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x533A;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x52D5;&#x7684;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x89E3;&#x96E2;/&#x518D;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Lrad &#x524D;&#x51E6;&#x7406;&#x4ED8;&#x304D; IbpB &#x306F;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x9732;&#x51FA;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059; IbpB &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x305D;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027; sHSPs &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A; &#39;holdases&#39; &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF; &#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x30B7;&#x30E3;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x71B1;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; IbpB &#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x524A;&#x9664;&#x5F8C;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x9577;&#x6642;&#x9593;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

sHSP (&#xC791;&#xC740; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;) IbpB (&#xD3EC;&#xD568; &#xBC14;&#xB514; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; B) &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xC548;&#xC815; &#xB41C; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9D1;&#xACC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC26C;&#xC6B4; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; insolubilization&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; ATP &#xB3C5;&#xB9BD; &#xC9C0;&#xC8FC; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. Ibpb&#xC758; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xD568;&#xC218;&#xB294; &#xD06C;&#xAC8C; &#xBCC0;&#xC870; &#xC8FC;&#xC704; &#xC628;&#xB3C4; &#xC758;&#xD574; &#xC989;, &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9;, Ibpb&#xC758; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC815;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC628;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC9D1;&#xACC4; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xAE30; &#xC26C;&#xC6B4; &#xD074;&#xB77C;&#xC774;&#xC5B8;&#xD2B8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC218;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB41C; &#xB420; &#xB54C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xBC1D;&#xD600;&#xC84C;&#xB2E4;. &#xB9B4;&#xB9AC;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xD074;&#xB77C;&#xC774;&#xC5B8;&#xD2B8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; Shsps&#xC5D0;&#xC11C; refolding &#xC758;&#xC874; &#xD55C;&#xB2E4;&#xB294; Hsp (&#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;) &#xAC19;&#xC740; ATP &#xC885;&#xC18D; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790;&#xC758; &#xB3C4;&#xC6C0; 70&#xC640; Hsp100 &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC628;&#xB3C4; &#xC815;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5EC;&#xACA8;&#xC9C4;&#xB2E4;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3D9;&#xC548; Shsps&#xC758; &#xD589;&#xB3D9; &#xC544;&#xC9C1; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB294; &#xAC83;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD589;&#xB3D9;&#xACFC; &#xC815;&#xC0C1; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xC73C;&#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xC628;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; Ibpb&#xC758; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5F4;-&#xCDA9;&#xACA9; &#xC870;&#xAC74; &#xD558; &#xC5D0;&#xC11C;&#xB9CC; &#xC791;&#xB3D9; &#xB418; &#xACE0;, IbpB &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74;&#xC774; &#xC81C;&#xAC70; &#xB41C; &#xD6C4; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xC5F0;&#xC7A5;&#xB41C; &#xAE30;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC138;&#xBD80; &#xBE44;&#xAD50;&#xB294; &#xADF8;&#xB7EC;&#xD55C; preconditioned IbpB N &#xBC0F; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B4; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBE44; preconditioned IbpB &#xAD6C;&#xBCC4;&#xC740;&#xC73C;&#xB85C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB3D9;&#xC801; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xBD84;&#xB9AC;/&#xC7AC;&#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Intriguingly, preconditioned IbpB &#xD45C;&#xC2DC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; hydrophobicity&#xC5D0; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xB178;&#xCD9C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; Ibpb&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;&#xC774; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC744; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Shsps&#xB85C; &#xAC19;&#xC740; &#39;holdases&#39;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB420; &#xAC83; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xC81C;&#xC548; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xC791;&#xC740; &#xC5F4; &#xCDA9;&#xACA9; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; Ibpb&#xC758; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; &#xBCF4;&#xD638;&#xC790; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74;&#xC774; &#xC81C;&#xAC70; &#xB41C; &#xD6C4; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xC624;&#xB79C;&#xB41C; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

sHSP (prote&iacute;na de choque t&eacute;rmico peque&ntilde;o) IbpB (prote&iacute;na de uni&oacute;n a inclusi&oacute;n-cuerpo B) de Escherichia coli se conoce como un acompa&ntilde;ante de explotaci&oacute;n independiente de la ATP que previene la insolubilizaci&oacute;n de propensas a la agregaci&oacute;n de prote&iacute;nas mediante la formaci&oacute;n de complejos estables con ellos. Se encontr&oacute; que la funci&oacute;n de acompa&ntilde;ante de IbpB es grandemente modulada por la temperatura ambiente, es decir, cuando la temperatura aumenta desde normal hasta shock t&eacute;rmico, la actividad de acompa&ntilde;ante de IbpB es elevado dram&aacute;ticamente a un nivel que permite enlazar efectivamente las prote&iacute;nas propensas a la agregaci&oacute;n del cliente. Aunque generalmente se cree que el lanzamiento y refolding de la prote&iacute;na del cliente de las sHSPs depende de la ayuda de los acompa&ntilde;antes dependientes de ATP como Hsp (prote&iacute;na de choque t&eacute;rmico) 70 y Hsp100 cuando la temperatura ambiente se recupera de shock t&eacute;rmico a la normalidad, el comportamiento de la sHSPs durante esta etapa de recuperaci&oacute;n no se ha investigado a&uacute;n. En el presente estudio, se examinan el comportamiento y propiedades de IbpB sobre la disminuci&oacute;n de la temperatura de shock t&eacute;rmico a la normalidad. Encontramos que IbpB, que se convierte en funcional s&oacute;lo bajo condiciones de choque t&eacute;rmico, conserva la actividad de acompa&ntilde;ante por un largo per&iacute;odo de tiempo despu&eacute;s de retira la condici&oacute;n de estr&eacute;s de shock t&eacute;rmico. Una comparaci&oacute;n de detalle demuestra que tal IbpB previo se distingue de la IbpB no-precondicionada por una notable transformaci&oacute;n conformacional, incluyendo un aumento significativo en la flexibilidad de las regiones N - y c-terminal, as&iacute; como mayor din&aacute;mica de la subunidad disociaci&oacute;n/reasociaci&oacute;n. Es fascinante, el IbpB previo muestra una disminuci&oacute;n dram&aacute;tica en su hidrofobicidad superficial, lo que sugiere que la exposici&oacute;n de sitios hidrof&oacute;bicos podr&iacute;a no ser el &uacute;nico factor determinante para IbpB que exhiben actividad de acompa&ntilde;ante. Proponemos que el mantenimiento de la actividad de acompa&ntilde;ante para tal &#39;holdases&#39; como sHSPs ser&iacute;a importante para las c&eacute;lulas para recuperarse del estr&eacute;s de shock t&eacute;rmico.

La actividad de acompa&ntilde;ante dram&aacute;ticamente creciente de la prote&iacute;na de choque t&eacute;rmico peque&ntilde;o IbpB se mantiene por un largo per&iacute;odo de tiempo despu&eacute;s de retira la condici&oacute;n de estr&eacute;s.

&#x5728;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x751F;&#x3001; &#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x661F;) &#x51FA;&#x73B0;&#x4E3B;&#x52A8;&#x8109;-&#x6027;&#x817A;-&#x4E2D; (AGM) &#x5730;&#x533A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x62A5;&#x544A;&#x8840;&#x6D41;&#x91CF;&#x662F; HSC &#x5F62;&#x6210;&#x5B88;&#x6052;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x3002;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#xFF0C;&#x5316;&#x5B66;&#x8840;&#x6D41;&#x91CF;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#x7BA1;&#x63A7;&#x7684; HSC &#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x5FC3; (&#x5316;) &#x80DA;&#x80CE;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5FC3;&#x8DF3;&#x548C;&#x8840;&#x6DB2;&#x7684;&#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;&#x5C55;&#x793A;&#x548C;&#x4E25;&#x91CD;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684;&#x661F;.&#x6D41;&#x91CF;&#x4FEE;&#x6539;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x4E3B;&#x8981;&#x5F71;&#x54CD; HSC &#x611F;&#x5E94;&#x7684;&#x5FC3;&#x8DF3; &#xFF1B; &#x53D1;&#x75C5;&#x540E;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4E00;&#x6C27;&#x5316;&#x6C2E; &#xFF08;&#x65E0;&#xFF09; &#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x89C4;&#x5B9A; HSC &#x6570;&#x91CF;&#x751A;&#x81F3;&#x5F53;&#x6CBB;&#x7597;&#x53D1;&#x751F;&#x5FAA;&#x73AF;&#xFF0C;&#x5F00;&#x59CB;&#x4E4B;&#x524D;&#x548C;&#x75C5;&#x4F8B;&#x6570;&#x4ECE;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x83B7;&#x6551;&#x661F;&#x3002;Morpholino &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x7684; nos1 (nnos/enos&#xFF09; &#x963B;&#x6B62; HSC &#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x5B83;&#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x662F;&#x6240;&#x793A;&#x662F;&#x81EA;&#x4E3B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x5728;&#x9F20;&#x6807;&#xFF0C;Nos3 (eNos) &#x6709;&#x4EBA;&#x5728;&#x661F;&#x5728;&#x5E74;&#x5EA6;&#x80A1;&#x4E1C;&#x5927;&#x4F1A;&#x3002;&#x5BAB;&#x5185; Nos &#x6291;&#x5236;&#x6216;&#x80DA;&#x80CE; Nos3 &#x7F3A;&#x9677;&#x5BFC;&#x81F4;&#x9020;&#x8840;&#x96C6;&#x7FA4;&#x548C;&#x79FB;&#x690D;&#x6027;&#x5C0F;&#x9F20;&#x661F;&#x7684;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230; AGM &#x9020;&#x8840;&#x7684;&#x8840;&#x6D41;&#x91CF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6807;&#x8BC6;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684; HSC &#x53D1;&#x5C55;&#x4E0B;&#x6E38;&#x76D1;&#x7BA1;&#x65E0;&#x3002;

&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x8840;&#x6D41;&#x91CF;&#x3002;

During vertebrate embryogenesis, hematopoietic stem cells (HSCs) arise in the aorta-gonads-mesonephros (AGM) region. We report here that blood flow is a conserved regulator of HSC formation. In zebrafish, chemical blood flow modulators regulated HSC development, and silent heart (sih) embryos, lacking a heartbeat and blood circulation, exhibited severely reduced HSCs. Flow-modifying compounds primarily affected HSC induction after the onset of heartbeat; however, nitric oxide (NO) donors regulated HSC number even when treatment occurred before the initiation of circulation, and rescued HSCs in sih mutants. Morpholino knockdown of nos1 (nnos/enos) blocked HSC development, and its requirement was shown to be cell autonomous. In the mouse, Nos3 (eNos) was expressed in HSCs in the AGM. Intrauterine Nos inhibition or embryonic Nos3 deficiency resulted in a reduction of hematopoietic clusters and transplantable murine HSCs. This work links blood flow to AGM hematopoiesis and identifies NO as a conserved downstream regulator of HSC development.

Hematopoietic stem cell development is dependent on blood flow.

Cours de l&#x26;#39;embryogen&#xE8;se des vert&#xE9;br&#xE9;s, les cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques (CSH) provenant de l&#x26;#39;aorte-gonades-m&#xE9;son&#xE9;phros (AGA) r&#xE9;gion. Nous rapportons ici que le flux sanguin est un r&#xE9;gulateur conserv&#xE9; de la formation HSC. Chez le poisson z&#xE8;bre, les modulateurs chimiques du flux sanguin r&#xE9;glement&#xE9; d&#xE9;veloppement HSC, et silencieux cardiaques (SIH) embryons, faute d&#x26;#39;un battement de coeur et le sang de circulation, expos&#xE9; CSH a fortement r&#xE9;duit. Flow-modifiant compos&#xE9;s principalement affect&#xE9; &#xE0; induction HSC apr&#xE8;s le d&#xE9;but de battement de coeur; les bailleurs de fonds cependant, l&#x26;#39;oxyde nitrique (NO) r&#xE9;glement&#xE9; nombre HSC m&#xEA;me lorsque le traitement a eu lieu avant l&#x26;#39;ouverture de la circulation, et sauv&#xE9; CSH chez les mutants SiH. Knockdown morpholino de NOS1 (nNOS / enos) a bloqu&#xE9; le d&#xE9;veloppement HSC, et son exigence a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;montr&#xE9; que la cellule autonome. Chez la souris, NOS3 (eNOS) a &#xE9;t&#xE9; exprim&#xE9; dans les CSH &#xE0; l&#x26;#39;AGA. Intra-ut&#xE9;rine inhibition de la NOS ou embryonnaires d&#xE9;ficit NOS3 a entra&#xEE;n&#xE9; une r&#xE9;duction des clusters h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques et transplantables CSH murines. Ce flux sanguin travail des liens &#xE0; l&#x26;#39;Assembl&#xE9;e G&#xE9;n&#xE9;rale de l&#x26;#39;h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE8;se et identifie NO en tant que r&#xE9;gulateur conserv&#xE9;e en aval du d&#xE9;veloppement HSC.

D&#xE9;veloppement des cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques est d&#xE9;pendante sur le d&#xE9;bit sanguin

Ergeben sich w&auml;hrend der Embryogenese Wirbeltiere h&auml;matopoetischen Stammzellen (HSCs) in der Aorta-Gonaden-Urniere (AGM)-Region. Wir berichten hier, dass Blutfluss einen konservierten Regulator der HSC-Formation. Im Zebrafisch ausgestellt chemische Blut flie&szlig;en Modulatoren geregelte HSC-Entwicklung und silent Heart (Sih) Embryonen, fehlt ein Herzschlag und Blutzirkulation, stark reduzierte HSCs. Flow-&Auml;ndern von Verbindungen, die in erster Linie betroffen HSC Induktion nach Beginn der Herzschlag; jedoch geregelt Stickstoffmonoxid (NO) Spender HSC Anzahl sogar als Behandlung geschahen vor der Einleitung der Zirkulation, HSCs in Sih Mutanten gerettet. Morpholino Knockdown nos1 (Nnos/Enos) blockierte HSC Entwicklung und seiner Anforderung wurde gezeigt, um autonome Zelle sein. In der Maus, Nos3 (eNos) fand ihren Niederschlag in HSCs in der Hauptversammlung. Intrauterin Nos-Hemmung oder embryonalen Nos3 Mangel f&uuml;hrte zu einer Verminderung von h&auml;matopoetischen Clustern und &uuml;bertragbare murinen HSCs. Diese Arbeit verbindet Blutfluss mit AGM Blutbildung und identifiziert Nr. als konservierte nachgeschaltete Regulator der HSC-Entwicklung.

H&auml;matopoetische Stammzelle-Entwicklung ist Durchblutung abh&auml;ngig.

Durante l&#39;embriogenesi vertebrato, le cellule staminali ematopoietiche (HSCs) sorgono nella regione aorta-gonadi-mesonefro (AGM). Segnaliamo qui che il flusso di sangue &egrave; un regolatore conservato di formazione HSC. In zebrafish, chimica sangue flusso modulatori regolamentato HSC sviluppo ed embrioni silenzioso cuore (sih), manca una battito cardiaco e la circolazione sanguigna, esposta severamente ridotto flusso di HSCs.-Modifica composti principalmente influenzate HSC induzione dopo l&#39;inizio del battito cardiaco; Tuttavia, l&#39;ossido nitrico (NO) donatori regolato numero HSC in anche quando il trattamento si &egrave; verificato prima dell&#39;iniziazione della circolazione e salvato HSCs sih mutanti. Oligonucleotides atterramento di nos1 (nnos/enos) bloccato HSC sviluppo e relativo requisito ha dimostrato di essere cellula autonoma. Nel topo, Nos3 (eNos) &egrave; stato espresso nelle HSCs in AGM. Inibizione Nos intrauterina o embrionali Nos3 deficit condotto ad una riduzione del cluster ematopoietiche e HSCs murini trapiantabili. Questo lavoro collega il flusso di sangue a ematopoiesi AGM e identifica NO come un regolatore conservato a valle dello sviluppo HSC.

Lo sviluppo di cellule staminali ematopoietiche &egrave; dipendente dal flusso sanguigno.

&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;HSC&#xFF09;&#x306B;&#x5927;&#x52D5;&#x8108; - &#x751F;&#x6B96;&#x817A; - &#x4E2D;&#x814E;&#xFF08;AGM&#xFF09;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x6D41;&#x304C;HSC&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5316;&#x5B66;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x8840;&#x6D41;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x5668;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D3;&#x30FC;&#x30C8;&#x3068;&#x8840;&#x6DB2;&#x5FAA;&#x74B0;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3001;HSC&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C8;&#x5FC3;&#x81D3;&#x30B7;&#x30E9;&#x30F3;&#xFF08;SiH&#xFF09;&#x306E;&#x80DA;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3059;&#x308B;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x4FEE;&#x98FE;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x30CF;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D3;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x5F8C;&#x3001;HSC&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x4E00;&#x9178;&#x5316;&#x7A92;&#x7D20;&#xFF08;NO&#xFF09;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x5FAA;&#x74B0;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x524D;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x3068;SiH&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x6551;&#x51FA;&#x3057;&#x3066;&#x3082;HSC&#x6570;&#x3092;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E2;&#x30EB;&#x30DB;&#x30EA;&#x30CE;&#x306F;NOS1&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#xFF08;nNOS&#x306E;/&#x30A4;&#x30FC;&#x30CE;&#x30B9;&#xFF09;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;HSC&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x81EA;&#x5F8B;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;NOS3&#xFF08;&#x30A4;&#x30FC;&#x30CE;&#x30B9;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;AGM&#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x5B50;&#x5BAE;&#x5185;&#x306E;NOS&#x963B;&#x5BB3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x80DA;NOS3&#x6B20;&#x4E4F;&#x306F;&#x3001;&#x9020;&#x8840;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x79FB;&#x690D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AGM&#x9020;&#x8840;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x3078;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x306E;&#x8840;&#x6D41;&#x304A;&#x3088;&#x3073;HSC&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x4E0B;&#x6D41;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;NO&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x6D41;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;

&#xCC99;&#xCD94; embryogenesis &#xB3D9;&#xC548; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (HSCs)&#xB294; &#xB300;&#xB3D9;&#xB9E5;-&#xC0DD;&#xC2DD; &#xAE30;-mesonephros (AGM) &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAE30; &#xD608; HSC &#xD615;&#xC131;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xB2E4;. Zebrafish&#xC5D0;&#xC11C; &#xD654;&#xD559; &#xD608;&#xC561; &#xD750;&#xB984; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30; &#xADDC;&#xC81C; HSC &#xAC1C;&#xBC1C;, &#xC790;&#xB3D9; &#xC2EC;&#xC7A5; (sih) &#xBC30;&#xC544;, &#xD558;&#xD2B8; &#xBE44;&#xD2B8; &#xBC0F; &#xD608;&#xC561; &#xC21C;&#xD658; &#xBD80;&#xC871; &#xC2EC;&#xAC01; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; HSCs. &#xD750;&#xB984; &#xC218;&#xC815; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; HSC &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xD2B8; &#xBE44;&#xD2B8;; &#xBC1C;&#xBCD1; &#xD6C4; &#xC804;&#xC2DC; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC0B0;&#xD654; &#xC9C8;&#xC18C; (NO) &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xADDC;&#xC81C; HSC &#xC218; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD608;&#xC561; &#xC21C;&#xD658;&#xC758; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xC804;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD55C; sih &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC5D0; HSCs &#xAD6C;&#xC870; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;. Morpholino &#xCD5C;&#xC800; nos1 (&#xC774; &#xB178;&#xC2A4;&#xC758; nnos) &#xCC28;&#xB2E8; &#xB41C; HSC &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC790;&#xC0AC;&#xC758; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D; &#xC790;&#xC728; &#xC140; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. Nos3 &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; (eNos)&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828;&#xD574; Hscs&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC790;&#xAD81;&#xB0B4; Nos &#xC800;&#xD574; &#xB610;&#xB294; &#xBC30;&#xC544; Nos3 &#xACB0;&#xD54D; hematopoietic &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xBC0F; transplantable murine HSCs &#xAC10;&#xC18C; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC5C8; &#xB2E4;. &#xC774; &#xC77C;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828;&#xD574; &#xC870; &#xD608;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC5C6;&#xC74C; HSC &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xB2E4;&#xC6B4;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xB85C; &#xC2DD;&#xBCC4;.

&#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD608;&#xC561;&#xC758; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Durante la embriog&#xE9;nesis de los vertebrados, las c&#xE9;lulas madre hematopoy&#xE9;ticas (HSC) se originan en la aorta, g&#xF3;nadas-mesonefros (AGM) de la regi&#xF3;n. Presentamos aqu&#xED; que el flujo de sangre es un regulador conservada de la formaci&#xF3;n de HSC. En el pez cebra, qu&#xED;micos moduladores de flujo de la sangre regula el desarrollo de HSC y silenciosos embriones coraz&#xF3;n (SIH), a falta de una circulaci&#xF3;n latidos del coraz&#xF3;n y la sangre, exhibi&#xF3; HSCs muy reducidos. La modificaci&#xF3;n de flujo compuestos principalmente afectados por inducci&#xF3;n HSC despu&#xE9;s de la aparici&#xF3;n de latidos del coraz&#xF3;n, los donantes sin embargo, el &#xF3;xido n&#xED;trico (NO) regula el n&#xFA;mero HSC incluso cuando el tratamiento se produjo antes del inicio de la circulaci&#xF3;n, y rescat&#xF3; a CMH en los mutantes SiH. Morpholino ca&#xED;da de NOS1 (nNOS / eNOS) bloqueaba el desarrollo de HSC, y su exigencia ha demostrado ser c&#xE9;lulas aut&#xF3;nomas. En el rat&#xF3;n, NOS3 (eNOS) se expres&#xF3; en las CMH en la Junta General de Accionistas. La inhibici&#xF3;n de los n&#xFA;meros intrauterino o embrionarias deficiencia de NOS3 result&#xF3; en una reducci&#xF3;n de las agrupaciones hematopoy&#xE9;ticas trasplantables HSCs y murinos. Este flujo de trabajo de los v&#xED;nculos de sangre para la hematopoyesis y la Junta General de Accionistas NO identifica como un regulador del desarrollo aguas abajo conservado HSC.

Desarrollo de c&#xE9;lulas madre hematopoy&#xE9;ticas depende del flujo de sangre

&#x5728;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528; N-&#x9499;&#x7C98;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x516C;&#x5E03;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E86;&#x5728;&#x8BE5;&#x5B57;&#x6BB5;&#x4E2D;&#x7684;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BD5;&#x56FE;&#x89E3;&#x51B3;&#x5206;&#x6B67;&#xFF0C;&#x8FBE;&#x6210;&#x5171;&#x8BC6;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x96C6;&#x4F53;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x6F84;&#x6E05;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E9B;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7559;&#x4E0B;&#x4E00;&#x4E9B;&#x4ECD;&#x672A;&#x89E3;&#x51B3;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;

&#x89E3;&#x51B3;&#x4E89;&#x8BAE;&#x7684;&#x601D;&#x8003; N-&#x9499;&#x7C98;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Discrepancies in published results about the role of N-cadherin in hematopoietic stem cells have led to confusion in the field. Attempting to settle the disagreements and reach a consensus, we undertook a collective discussion approach. This process clarified a number of issues but left some questions still unresolved.

Resolving the controversy about N-cadherin and hematopoietic stem cells.

Les &#xE9;carts dans les r&#xE9;sultats publi&#xE9;s sur le r&#xF4;le de la N-cadh&#xE9;rine dans les cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques ont conduit &#xE0; une confusion dans le domaine. Tenter de r&#xE9;gler les diff&#xE9;rends et parvenir &#xE0; un consensus, nous avons entrepris une approche de la discussion collective. Ce processus a clarifi&#xE9; un certain nombre de questions, mais a laiss&#xE9; quelques questions encore en suspens.

R&#xE9;soudre la controverse propos de N-cadh&#xE9;rine et les cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques

Diskrepanzen in der ver&ouml;ffentlichten Ergebnisse zur Rolle der N-Cadherin in h&auml;matopoetischen Stammzellen f&uuml;hrten zur Verwirrung im Feld. Versuch, die Unstimmigkeiten zu begleichen und einen Konsens, unternahmen wir einen kollektive Diskussion-Ansatz. Dieser Prozess eine Reihe von Fragen gekl&auml;rt aber verlie&szlig; einige noch ungel&ouml;sten Fragen.

Die Kontroverse &uuml;ber N-Cadherin und hematopoietic Stammzellen zu l&ouml;sen.

Discrepanze nei risultati pubblicati sul ruolo della N-caderina nelle cellule staminali ematopoietiche hanno portato confusione nel campo. Tentativo di risolvere i disaccordi e raggiungere un consenso, abbiamo intrapreso un approccio di discussione collettiva. Questo processo ha chiarito una serie di questioni, ma lasciato alcune questioni ancora irrisolte.

Risolvere la controversia su N-caderina e di cellule staminali ematopoietiche.

&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;N-&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x516C;&#x958B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x4E0D;&#x4E00;&#x81F4;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x5185;&#x306E;&#x6DF7;&#x4E71;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x610F;&#x898B;&#x306E;&#x4E0D;&#x4E00;&#x81F4;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3057;&#x3001;&#x5408;&#x610F;&#x306B;&#x5230;&#x9054;&#x3057;&#x3088;&#x3046;&#x3068;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x96C6;&#x56E3;&#x8A0E;&#x8AD6;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x304C;&#x307E;&#x3060;&#x672A;&#x89E3;&#x6C7A;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3002;

N-&#x30AB;&#x30C9;&#x30D8;&#x30EA;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x8AD6;&#x4E89;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;

&#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; N cadherin&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC8C;&#xC2DC; &#xACB0;&#xACFC; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xD544;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xD63C;&#xB780;&#xC744; &#xC774;&#xB04C;&#xC5B4; &#xB0C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9D1;&#xB2E8; &#xD1A0;&#xB860; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xC57D;&#xC18D; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558; &#xACE0; &#xD569;&#xC758; &#xB3C4;&#xB2EC; &#xD558;&#xB824;&#xACE0;. &#xC774; &#xACFC;&#xC815;&#xC740; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xBA85;&#xD655;&#xD788; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xD574;&#xACB0; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC744; &#xB0A8;&#xACA8;.

N cadherin &#xBC0F; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB17C;&#xB780;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las discrepancias en los resultados publicados sobre el papel de la N-cadherina en las c&#xE9;lulas madre hematopoy&#xE9;ticas se han llevado a la confusi&#xF3;n en el campo. El intento de resolver los desacuerdos y llegar a un consenso, se realiz&#xF3; un enfoque discusi&#xF3;n colectiva. Este proceso de aclarar una serie de cuestiones, pero dej&#xF3; algunas preguntas sin resolver.

La resoluci&#xF3;n de la controversia sobre la N-cadherina y las c&#xE9;lulas madre hematopoy&#xE9;ticas

&#x5206;&#x5B50;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x53D7;&#x5230;&#x6240;&#x6709;&#x53D1;&#x80B2;&#x9636;&#x6BB5;&#x5904;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x9A71;&#x52A8;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5143;&#x7D20;&#x7684;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x5206;&#x79BB;&#x548C;&#x8868;&#x5F81;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x6CDB; &#xFF08;ubi&#xFF09; &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x6784;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x53D1;&#x80B2;&#x9636;&#x6BB5;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x6210;&#x4EBA;&#x5668;&#x5B98;&#x3002;&#x503C;&#x5F97;&#x6CE8;&#x610F;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x8840;&#x6DB2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C31;&#x7CFB;&#xFF0C;ubi &#x8868;&#x793A;&#x5E76;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; ubi &#x9A71;&#x52A8;&#x8367;&#x5149;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x9020;&#x8840;&#x79FB;&#x690D;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x79FB;&#x690D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x771F;&#x5B9E;&#x53CA;&#x591A;&#x5411;&#x5206;&#x5316;&#x6F5C;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x8BC4;&#x4F30;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x751F;&#x6210;&#x8868;&#x8FBE;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728; 4-&#x7F9F;&#x57FA;&#x4ED6;&#x83AB;&#x6614;&#x82AC;&#x63A7;&#x5236; Cre &#x91CD;&#x7EC4;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x4ECE; ubi:cre(ERt2) &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; ubi:loxP &#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;-loxp &#x5E8F;&#x5217;&#x91CD;&#x7EC4;-mCherry (ubi:Switch) &#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x5176;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x672C;&#x6784;&#x8367;&#x5149;&#x6CBF;&#x88AD;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x8BD5;&#x5242;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;Ubi &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x548C;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x884C;&#x56E0;&#x6B64;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x8D44;&#x6E90;&#x548C;&#x91CD;&#x8981;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7684;&#x6CDB;&#x7D20;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7EFC;&#x5408;&#x62DB;&#x8058;&#x8003;&#x8BD5;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;

Molecular genetics approaches in zebrafish research are hampered by the lack of a ubiquitous transgene driver element that is active at all developmental stages. Here, we report the isolation and characterization of the zebrafish ubiquitin (ubi) promoter, which drives constitutive transgene expression during all developmental stages and analyzed adult organs. Notably, ubi expresses in all blood cell lineages, and we demonstrate the application of ubi-driven fluorophore transgenics in hematopoietic transplantation experiments to assess true multilineage potential of engrafted cells. We further generated transgenic zebrafish that express ubiquitous 4-hydroxytamoxifen-controlled Cre recombinase activity from a ubi:cre(ERt2) transgene, as well as ubi:loxP-EGFP-loxP-mCherry (ubi:Switch) transgenics and show their use as a constitutive fluorescent lineage tracing reagent. The ubi promoter and the transgenic lines presented here thus provide a broad resource and important advancement for transgenic applications in zebrafish.

Ubiquitous transgene expression and Cre-based recombination driven by the ubiquitin promoter in zebrafish.

Des approches de g&#xE9;n&#xE9;tique mol&#xE9;culaire dans la recherche du poisson z&#xE8;bre sont entrav&#xE9;s par le manque d&#x26;#39;un &#xE9;l&#xE9;ment conducteur transg&#xE8;ne omnipr&#xE9;sente qui est actif &#xE0; tous les stades de d&#xE9;veloppement. Nous rapportons ici l&#x26;#39;isolement et la caract&#xE9;risation du poisson-z&#xE8;bre ubiquitine (ubi) promoteur, qui entra&#xEE;ne l&#x26;#39;expression du transg&#xE8;ne constitutive durant toutes les &#xE9;tapes de d&#xE9;veloppement et analys&#xE9;s organes adultes. Notamment, ubi exprime dans toutes les lign&#xE9;es de cellules sanguines, et nous d&#xE9;montrer l&#x26;#39;application de ubi ax&#xE9;e fluorophore transg&#xE9;niques dans des exp&#xE9;riences de transplantation h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tique &#xE0; &#xE9;valuer le potentiel des cellules multilign&#xE9;e vrai greff&#xE9;es. Nous avons en outre g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; le poisson-z&#xE8;bre transg&#xE9;nique qui expriment omnipr&#xE9;sente 4-hydroxytamoxif&#xE8;ne contr&#xF4;l&#xE9;e par l&#x26;#39;activit&#xE9; de la recombinase Cre d&#x26;#39;un ubi: CRE (ERT2) transg&#xE8;ne, ainsi que ubi: loxP-EGFP-loxP-mCherry (ubi: Switch) transg&#xE9;niques et de montrer leur utilisation en tant que constitutive lign&#xE9;e fluorescente tra&#xE7;age r&#xE9;actif. Le promoteur ubi et les lign&#xE9;es transg&#xE9;niques pr&#xE9;sent&#xE9;s ici ainsi fournir une ressource vaste et progr&#xE8;s important pour les applications transg&#xE9;niques chez le poisson z&#xE8;bre.

Ubiquitous expression du transg&#xE8;ne Cre et &#xE0; base de recombinaison Pouss&#xE9; par le promoteur de l&#x26;#39;ubiquitine chez le poisson z&#xE8;bre

Molekulargenetik Ans&auml;tze im Zebrafisch-Forschung werden durch das Fehlen eines allgegenw&auml;rtigen Transgene Treiber Elements behindert, die zu allen Entwicklungsstadien aktiv ist. Hier berichten wir die Isolierung und Charakterisierung des Projekttr&auml;gers Zebrafisch Ubiquitin (Ubi), die Laufwerke konstitutive Transgenexpression in allen Entwicklungsstadien und analysiert Erwachsenen Organe. Insbesondere, Ubi dr&uuml;ckt in alle Blutk&ouml;rperchen &Uuml;bertragungslinien und wir demonstrieren die Anwendung der Ubi-gesteuerte Fluorophor Transgenics h&auml;matopoetische Transplantation Experimente auf wahre multiline&auml;rer des engrafted Zellen beurteilen. Wir weiter generiert transgene Zebrafisch, der allgegenw&auml;rtigen 4-Hydroxytamoxifen-Steuerung Cre Recombinase Aktivit&auml;t aus einer ubi:cre(ERt2) Transgene sowie Ubi:loxP auszudr&uuml;cken-EGFP-LoxP-mCherry (Ubi:Switch) Transgenics und ihrer Verwendung als konstitutive fluoreszierende &Uuml;bertragungslinie Ablaufverfolgung Reagenzien zu zeigen. Die Ubi-Projekttr&auml;ger und die transgenen Linien, die hier vorgestellten stellen daher eine breite Ressource und ein wichtiger Fortschritt f&uuml;r transgene Anwendungen im Zebrafisch.

Allgegenw&auml;rtige Transgenexpression und Cre-basierte Rekombination, getrieben von der Ubiquitin-Projekttr&auml;ger im Zebrafisch.

Approcci di genetica molecolare nella ricerca di zebrafish sono ostacolati dalla mancanza di un elemento di driver transgene onnipresente che &egrave; attivo in tutte le fasi dello sviluppo. Riportiamo l&#39;isolamento e la caratterizzazione del promotore zebrafish ubiquitina (ubi), che spinge l&#39;espressione del transgene costitutiva durante tutte le fasi di sviluppo e analizzato organi adulti. In particolare, ubi esprime in tutte le cellule del sangue lignaggi, e dimostreremo l&#39;applicazione del fluoroforo ubi-driven transgenica in esperimenti di trapianto ematopoietico per valutare il vero potenziale multilineare delle cellule engrafted. Abbiamo generato ulteriore zebrafish transgenici che esprimono onnipresente 4-hydroxytamoxifen-controllato Cre ricombinasi attivit&agrave; da un transgene ubi:cre(ERt2), come pure ubi:loxP-EGFP-loxP-transgenetica mCherry (ubi:Switch) e mostrano il loro uso come reagente di tracciatura costitutiva lignaggio fluorescente. Il promotore di ubi e le linee transgeniche presentate qui cos&igrave; forniscono una risorsa ampia e importante avanzamento per applicazioni transgeniche in zebrafish.

Espressione del transgene onnipresente e ricombinazione Cre-based guidato dal promotore di ubiquitin nello zebrafish.

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D0;&#x306E;&#x8981;&#x7D20;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x59A8;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x767A;&#x9054;&#x6BB5;&#x968E;&#x3068;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#xFF08;UBI&#xFF09;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5358;&#x96E2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x8840;&#x6DB2;&#x7D30;&#x80DE;&#x7CFB;&#x5217;&#x306B;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x79FB;&#x690D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x771F;&#x306E;&#x591A;&#x5206;&#x5316;&#x80FD;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9020;&#x8840;&#x79FB;&#x690D;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;UBI&#x99C6;&#x52D5;&#x578B;&#x86CD;&#x5149;&#x4F53;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; CRE&#xFF08;ERt2&#xFF09;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF1A;&#x306E;loxP-EGFP-loxP&#x90E8;&#x4F4D;-mCherry&#xFF08;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF1A;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#xFF09;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D4;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x660E;&#x793A;&#x7684;&#x306A;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;4  - &#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x5236;&#x5FA1;Cre&#x30EA;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D3;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x8A66;&#x85AC;&#x3092;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9;&#x69CB;&#x6210;&#x86CD;&#x5149;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3002; UBI&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x3068;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9032;&#x6B69;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x99C6;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;Cre&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;

Zebrafish &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC790; &#xC720;&#xC804;&#xD559; &#xBC29;&#xBC95; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB41C; &#xC720;&#xBE44;&#xCFFC;&#xD130;&#xC2A4; transgene &#xB4DC;&#xB77C;&#xC774;&#xBC84; &#xC694;&#xC18C; &#xBD80;&#xC871;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC29;&#xD574; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBD84;&#xB9AC;&#xC640; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB3D9;&#xC548; &#xC81C;&#xC815; transgene &#xC2DD;&#xC774; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xC131;&#xC778; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBD84;&#xC11D; zebrafish &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; (ubi) &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xBCF4;&#xACE0;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xBAA8;&#xB4E0; &#xD608;&#xC561; &#xC138;&#xD3EC; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC5D0;&#xC11C; ubi &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; engrafted &#xC140;&#xC758; &#xC9C4;&#xC815;&#xD55C; multilineage &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC870; &#xD608; &#xC774;&#xC2DD; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; ubi &#xAD6C;&#xB3D9; fluorophore &#xC81C; &#xB2C9;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB354; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; 4 hydroxytamoxifen &#xC81C;&#xC5B4; Cre recombinase &#xD65C;&#xB3D9; ubi:loxp&#xC640; ubi:cre(ERt2) transgene&#xC5D0;&#xC11C; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; zebrafish &#xC0DD;&#xC131;-EGFP-loxP-mCherry (ubi:Switch) &#xC81C; &#xB2C9; &#xC81C;&#xC815; &#xD615;&#xAD11; &#xD608;&#xD1B5; &#xCD94;&#xC801; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Ubi &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xBC0F; &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xB77C;&#xC778; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; zebrafish&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC1C;&#xC804;&#xACFC; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xB9AC;&#xC18C;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; transgene &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; Cre &#xAE30;&#xBC18; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; zebrafish &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xBAA8;&#xD130;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAD6C;&#xB3D9;.

Enfoques moleculares en la investigaci&#xF3;n gen&#xE9;tica del pez cebra se ven obstaculizados por la falta de un elemento conductor transg&#xE9;n en todas partes que est&#xE1; activo en todas las etapas de desarrollo. Aqu&#xED; reportamos el aislamiento y caracterizaci&#xF3;n del pez cebra ubiquitina (UBI), el promotor, que lleva a la expresi&#xF3;n del transgen constitutiva durante todas las etapas de desarrollo y se analizaron los &#xF3;rganos adultos. En particular, ubi expresa en todos los linajes de c&#xE9;lulas sangu&#xED;neas, y demostrar la aplicaci&#xF3;n de la ubi-impulsada por fluor&#xF3;foro transg&#xE9;nicos en los experimentos de trasplante hematopoy&#xE9;tico para evaluar el potencial real multilinaje de c&#xE9;lulas injertadas. Hemos generado m&#xE1;s de pez cebra transg&#xE9;nico que expresa en todas partes 4-hydroxytamoxifen controlado por la recombinasa Cre actividad de una ubi: CRE transg&#xE9;n (ERt2), as&#xED; como la ubi: loxP-EGFP-loxP-mCherry (ubi: Switch) transg&#xE9;nicos y demostrar su uso como linaje fluorescente constitutiva rastreo reactivo. El promotor ubi y las l&#xED;neas transg&#xE9;nicas que aqu&#xED; se presentan por lo tanto constituyen un recurso amplio y avance importante para las aplicaciones de transg&#xE9;nicos en el pez cebra.

Ubiquitous expresi&#xF3;n del transgen y Cre-basadas en la recombinaci&#xF3;n Impulsado por el promotor de ubiquitina en el pez cebra

&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; (&#x8868;&#x8FBE;&#x5E8F;&#x5217;&#x6807;&#x7B7E;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#xFF09; &#x4E0E;&#x5176;&#x4ED6;&#x810A;&#x690E;&#x52A8;&#x7269;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x5176;&#x4F18;&#x52BF;&#x7814;&#x7A76;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9A7B;&#x7559;&#x5728;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x5668;&#x5B98;&#x3002;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x5375;&#x4F53;&#x5916;&#x53D7;&#x7CBE;&#x548C;&#x673A;&#x5173;&#x7684;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x5145;&#x5206;&#x53D1;&#x5C55;&#x76F4;&#x81F3;&#x900F;&#x660E;&#x3002;&#x8FD9;&#x6837;&#x5F88;&#x5BB9;&#x6613;&#x6210;&#x50CF;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x53CC;&#x8272;&#x7D20;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#xFF0C;&#x53F0;&#x6E7E;&#xFF0C;&#x5728;&#x6210;&#x5E74;&#x540E;&#x6210;&#x4E3A;&#x65B0;&#x6D41;&#x884C;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x6A21;&#x578B;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x9886;&#x57DF;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x5B8C;&#x5168;&#x900F;&#x660E;&#x7684;&#x673A;&#x6784;&#x3002;&#x5B83;&#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x79CD;&#x4F18;&#x79C0;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x7814;&#x7A76;&#x6210;&#x4EBA;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;HSC&#xFF09; &#x7684;&#x79FB;&#x690D;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x4E2D;&#x3002;&#x65E0;&#x4E0E;&#x4F26;&#x6BD4;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x5F71;&#x50CF;&#x529B;&#x91CF;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5DE8;&#x5927;&#x7684;&#x673A;&#x9047;&#xFF0C;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x53D1;&#x80B2;&#x548C;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7AE0;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; HSC &#x4F5C;&#x4E3A;&#x793A;&#x4F8B;&#x5E76;&#x7ED3;&#x5408;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x4F53;&#x5185;&#x6210;&#x50CF;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#xFF0C;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5728;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x3001; HSC &#x79FB;&#x690D;&#x548C;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x63D0;&#x4F9B;&#x534F;&#x8BAE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6280;&#x672F;&#x8FD8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x5176;&#x4ED6;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#xFF1A; &#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

Compared with other vertebrate animal models, zebrafish (Danio rerio) has its superior advantages for studying stem cell migration. Zebrafish have similar tissues and organs as mammals, where tissue-specific stem cells reside in. Zebrafish eggs are externally fertilized and remain transparent until most of the organs are fully developed. This allows imaging stem cells in vivo very easily. Recently, a zebrafish double pigmentation mutant, casper, became a new popular imaging model in the zebrafish field due to its completely transparent bodies in adulthood. It has been used as an excellent model to study adult hematopoietic stem cell (HSC) in the transplantation setting. The unparalleled imaging power of zebrafish provides great opportunities of tracing stem cells in vivo in the developmental and regenerative context. In this chapter, we use HSC as an example and combine the powerful imaging techniques in zebrafish, to provide protocols for in vivo imaging fluorescence-labeled stem cell migration, stem cell fate tracing in zebrafish embryos, HSC transplantation, and in vivo imaging in both zebrafish embryos and adults. These techniques can also be applied to other types of stem cells in zebrafish embryos and adults.

Stem cell migration: a zebrafish model.

Compar&#xE9; &#xE0; d&#x26;#39;autres mod&#xE8;les animaux vert&#xE9;br&#xE9;s, le poisson z&#xE8;bre (Danio rerio) a ses avantages sup&#xE9;rieurs pour l&#x26;#39;&#xE9;tude de la migration de cellules souches. Le poisson z&#xE8;bre ont des tissus et des organes similaires comme les mammif&#xE8;res, o&#xF9; les cellules souches tissulaires sp&#xE9;cifiques r&#xE9;sident po &#x153;ufs de poisson z&#xE8;bre sont &#xE0; l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur f&#xE9;cond&#xE9; et rester transparente jusqu&#x26;#39;&#xE0; la plupart des organes sont compl&#xE8;tement d&#xE9;velopp&#xE9;s. Cela permet d&#x26;#39;imagerie des cellules souches in vivo tr&#xE8;s facilement. R&#xE9;cemment, un mutant pigmentation poisson z&#xE8;bre double, casper, est devenu un mod&#xE8;le d&#x26;#39;imagerie populaire dans le domaine du poisson z&#xE8;bre &#xE0; cause de ses organes compl&#xE8;tement transparentes &#xE0; l&#x26;#39;&#xE2;ge adulte. Il a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; comme un excellent mod&#xE8;le pour &#xE9;tudier les cellules souches adultes h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques (CSH) dans le cadre de transplantation. La puissance d&#x26;#39;imagerie in&#xE9;gal&#xE9;e de poisson z&#xE8;bre offre de grandes opportunit&#xE9;s de tra&#xE7;age des cellules souches in vivo dans le contexte du d&#xE9;veloppement et de r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration. Dans ce chapitre, nous utilisons HSC &#xE0; titre d&#x26;#39;exemple et de combiner les techniques d&#x26;#39;imagerie puissantes chez le poisson z&#xE8;bre, de fournir des protocoles pour l&#x26;#39;imagerie in vivo marqu&#xE9; par fluorescence migration des cellules souches, le destin des cellules souches de tra&#xE7;age dans embryons de poisson z&#xE8;bre, la transplantation HSC, et in vivo d&#x26;#39;imagerie &#xE0; la fois embryons de poisson z&#xE8;bre et les adultes. Ces techniques peuvent &#xE9;galement &#xEA;tre appliqu&#xE9;e &#xE0; d&#x26;#39;autres types de cellules souches des embryons de poisson z&#xE8;bre et les adultes.

Endiguer la migration cellulaire: un mod&#xE8;le de poisson z&#xE8;bre

Verglichen mit anderen vertebrate Tiermodelle, hat Zebrab&auml;rbling (Danio Rerio) seine &uuml;berlegene Vorteile f&uuml;r Stammzell-Migration zu studieren. Zebrafish haben &auml;hnliche Gewebe und Organen als S&auml;ugetiere, wo Gewebe-spezifischen Stammzellen in befinden. Zebrafisch-Eier werden extern befruchtet und transparent bleiben, bis die meisten Organe vollst&auml;ndig entwickelt sind. Dadurch k&ouml;nnen Stammzellen in vivo imaging-sehr leicht. Ein Zebrafisch Doppel Pigmentierung Mutant, Casper, vor kurzem wurde ein neues Modell der beliebten Bildgebung im Feld Zebrafisch aufgrund seiner v&ouml;llig transparent Organe im Erwachsenenalter. Es wurde als ein hervorragendes Modell eingesetzt, adulten h&auml;matopoetische Stammzellen (HSC) in der Transplantation-Einstellung zu studieren. Die beispiellose bildgebende macht der Zebrafisch bietet gro&szlig;e Chancen der Ablaufverfolgung Stammzellen in vivo im Entwicklungs- und regenerative Kontext. In diesem Kapitel, die wir verwenden HSC als Beispiel und kombiniert die leistungsstarken bildgebenden Verfahren im Zebrafisch, Protokolle f&uuml;r in-vivo Bildgebung Fluoreszenz-markierten Stem Cell Migration, Ablaufverfolgung in Zebrafisch-Embryonen, HSC-Transplantation und in-vivo Bildgebung bei Zebrafisch-Embryonen und Erwachsenen Stammzellen-Schicksal. Diese Techniken k&ouml;nnen auch auf andere Arten von Stammzellen im Zebrafisch-Embryonen und Erwachsenen angewendet werden.

Stammzellen-Migration: Ein Zebrafisch-Modell.

Confrontato con altri modelli animali vertebrati, Danio zebrato (Danio rerio) ha i suoi vantaggi superiori per studiare la migrazione delle cellule staminali. Zebrafish hanno tessuti e organi simili come mammiferi, dove le cellule staminali tessuto-specifiche risiedono in. Zebrafish uova vengono fecondate esternamente e rimangano trasparente fino a quando la maggior parte degli organi sono completamente sviluppata. Questo permette molto facilmente di imaging in vivo le cellule staminali. Recentemente, un mutante di zebrafish doppio pigmentazione, casper, &egrave; diventato un nuovo modello di imaging popolare nel campo zebrafish a causa dei suoi organi completamente trasparente in et&agrave; adulta. &Egrave; stato utilizzato come un eccellente modello per studiare adulta cellule staminali ematopoietiche (HSC) nell&#39;impostazione del trapianto. L&#39;ineguagliabile potenza imaging di zebrafish offre grandi opportunit&agrave; di analisi le cellule staminali in vivo nel contesto dello sviluppo e rigenerativo. In questo capitolo, noi usiamo HSC come esempio e combinare le tecniche di imaging potente nello zebrafish, per fornire protocolli di imaging in vivo marcato con fluorescenza delle cellule staminali migrazione, destino delle cellule staminali tracing in embrioni di zebrafish, trapianto di HSC e imaging in vivo in adulti e di embrioni di zebrafish. Queste tecniche possono essere applicate anche ad altri tipi di cellule staminali di embrioni di zebrafish e adulti.

Migrazione delle cellule staminali: un modello di zebrafish.

&#x4ED6;&#x306E;&#x810A;&#x690E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#xFF08;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x5229;&#x70B9;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x5375;&#x306F;&#x3001;&#x5916;&#x90E8;&#x53D7;&#x7CBE;&#x3055;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C1;&#x5E38;&#x99D0;&#x3057;&#x3001;&#x81D3;&#x5668;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x304C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#x900F;&#x660E;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x3001;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3084;&#x5668;&#x5B98;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x8272;&#x7D20;&#x6C88;&#x7740;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x4EBA;&#x3067;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x900F;&#x660E;&#x306A;&#x4F53;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x306B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x4EBA;&#x6C17;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x79FB;&#x690D;&#x306E;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3067;&#x6210;&#x4EBA;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;HSC&#xFF09;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x6BD4;&#x985E;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x529B;&#x304C;&#x767A;&#x9054;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x518D;&#x751F;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3067;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x7D20;&#x6674;&#x3089;&#x3057;&#x3044;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7AE0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4F8B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;HSC&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3001;in vivo&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904A;&#x8D70;&#x3001;&#x30BC;&#x200B;&#x200B;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x3067;&#x306E;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3001;HSC&#x79FB;&#x690D;&#x3057;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x3067;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x80DA;&#x3068;&#x5927;&#x4EBA;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x306F;&#x3001;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x80DA;&#x3068;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x3082;&#x9069;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#xFF1A;&#x7D30;&#x80DE;&#x904A;&#x8D70;&#x3092;&#x5E79;

&#xB2E4;&#xB978; &#xCC99;&#xCD94; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;, zebrafish (Danio rerio) &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xACF5;&#xBD80;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xC7A5;&#xC810;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. Zebrafish &#xC870;&#xC9C1; &#xAD00;&#xB828; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958;&#xB85C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xBC0F; &#xC7A5;&#xAE30;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;. Zebrafish &#xACC4;&#xB780; &#xC678;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC815; &#xB41C; &#xBC0F; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB420; &#xB54C;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xD22C;&#xBA85; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xBA74;, &#xC544;&#xC8FC; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xD654;&#xC0C1; &#xC9C4; &#xCC30;. &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, zebrafish &#xC774;&#xC911; &#xC5FC;&#xC0C9; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;, &#xCE90;&#xC2A4;&#xD37C;, &#xC131;&#xC778; &#xAE30;&#xC5D0; zebrafish &#xD544;&#xB4DC;&#xB294; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xD22C;&#xBA85; &#xD55C; &#xBAB8; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC778;&#xAE30; &#xC788;&#xB294; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBAA8;&#xB378; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC131;&#xC778; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (HSC) &#xC774;&#xC2DD; &#xC124;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xC218;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Zebrafish&#xC758; &#xB6F0;&#xC5B4;&#xB09C;&#xB41C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC804;&#xC6D0; &#xCD94;&#xC801; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC1C;&#xB2EC; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; vivo&#xC758; &#xC88B;&#xC740; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; HSC&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4; &#xACE0; zebrafish, &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xAD11; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85; zebrafish &#xD0DC;&#xC544;, HSC &#xC774;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; zebrafish &#xD0DC;&#xC544; &#xBC0F; &#xC131;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xCD94;&#xC801;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;. Zebrafish &#xD0DC;&#xC544; &#xBC0F; &#xC131;&#xC778; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC885;&#xB958;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xBC95;&#xC744; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;: zebrafish &#xBAA8;&#xB378;.

En comparaci&#xF3;n con otros modelos animales vertebrados, el pez cebra (Danio rerio) tiene sus ventajas superiores para el estudio de la migraci&#xF3;n de c&#xE9;lulas madre. El pez cebra tiene tejidos y &#xF3;rganos similares como los mam&#xED;feros, en los tejidos espec&#xED;ficos de las c&#xE9;lulas madre residen pulg huevos de pez cebra son externamente fertilizados y seguir siendo transparente hasta que la mayor&#xED;a de los &#xF3;rganos est&#xE1;n completamente desarrollados. Esto permite que las c&#xE9;lulas madre de im&#xE1;genes in vivo muy f&#xE1;cilmente. Recientemente, un pez cebra mutante pigmentaci&#xF3;n doble, Casper, se convirti&#xF3; en un nuevo modelo de imagen popular en el campo de pez cebra, debido a sus cuerpos completamente transparentes en la edad adulta. Se ha utilizado como un excelente modelo para estudiar c&#xE9;lulas madre adultas hematopoy&#xE9;ticas (HSC) en el &#xE1;mbito del trasplante. La potencia de imagen sin precedentes de pez cebra ofrece grandes oportunidades de rastreo de las c&#xE9;lulas madre in vivo en el contexto de desarrollo y regeneraci&#xF3;n. En este cap&#xED;tulo, se utiliza HSC como un ejemplo y se combinan las t&#xE9;cnicas de imagen de gran alcance en el pez cebra, para proporcionar protocolos de im&#xE1;genes in vivo de fluorescencia marcado con la migraci&#xF3;n de c&#xE9;lulas madre, el destino de las c&#xE9;lulas madre de rastreo en embriones de pez cebra, el trasplante de HSC y de im&#xE1;genes in vivo, tanto en embriones de pez cebra y adultos. Estas t&#xE9;cnicas pueden aplicarse tambi&#xE9;n a otros tipos de c&#xE9;lulas madre en embriones de pez cebra y adultos.

Migraci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas madre: un modelo de pez cebra

&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6216;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x4E86;&#x6781;&#x6709;&#x4EF7;&#x503C;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x67D0;&#x4E9B;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4EBA;&#x53E3;&#xFF0C;&#x5939;&#x5C42;&#x5355;&#x5143;&#x683C;-&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x5173;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x627E;&#x51FA;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x8BB8;&#x591A;&#x5176;&#x4ED6;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x4E00;&#x9879;&#x5173;&#x952E;&#x6280;&#x672F;&#x8981;&#x6C42;&#x8FDB;&#x884C;&#x79FB;&#x690D;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x662F;&#x533A;&#x5206;&#x79FB;&#x690D;&#x7684;&#x6350;&#x8D60;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5185;&#x6E90;&#x6027;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x548C;&#x968F;&#x7740;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x6350;&#x52A9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x5DF2;&#x6210;&#x4E3A;&#x6267;&#x884C;&#x79FB;&#x690D;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x7531;&#x4E8E;&#x80DA;&#x80CE;&#x671F;&#x95F4;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x751A;&#x81F3;&#x67D0;&#x4E9B;&#x6210;&#x5E74;&#x4EBA;&#x7684;&#x900F;&#x660E;&#x5EA6;&#x4F18;&#x826F;&#x6A21;&#x5F0F;&#x751F;&#x7269;&#x3002;&#x5229;&#x7528;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x5FEB;&#x901F;&#x6F14;&#x53D8;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x6350;&#x8D60;&#x8005;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8F7B;&#x677E;&#x5730;&#x786E;&#x5B9A;&#x548C;&#x7814;&#x7A76;&#x4F53;&#x5185;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7AE0;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x9996;&#x5148;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x80DA;&#x80CE;&#x548C;&#x6210;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x79FB;&#x690D;&#x7684;&#x7406;&#x7531;&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x9488;&#x5BF9;&#x4E09;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x79FB;&#x690D;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF1A; &#x9A6C;&#x8D5B;&#x514B;&#x5206;&#x6790; blastula/&#x539F;&#x80A0;&#x79FB;&#x690D;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x3001; &#x80BF;&#x7624;&#x79FB;&#x690D;&#x3002;

&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x7684;&#x79FB;&#x690D;&#x3002;

Tissue or cell transplantation has been an extremely valuable technique for studying developmental potential of certain cell population, dissecting cell-environment interaction relationship, identifying stem cells, and many other applications. One key technical requirement for performing transplantation assay is the capability of distinguishing the transplanted donor cells from the endogenous host cells, and tracing the donor cells over time. Zebrafish has emerged as an excellent model organism for performing transplantation assay, thanks to the transparency of embryos during development and even certain adults. Using transgenic techniques and fast-evolving imaging technology, fluorescence-labeled donor cells can be easily identified and studied in vivo. In this chapter, we will first discuss the rationale of different types of zebrafish transplantation in both embryos and adults, and then focus on detailed methods of three types of transplantation: blastula/gastrula transplantation for mosaic analysis, stem cell transplantation, and tumor transplantation.

Transplantation in zebrafish.

Tissus ou de cellules a &#xE9;t&#xE9; une technique extr&#xEA;mement pr&#xE9;cieux pour l&#x26;#39;&#xE9;tude de la population de potentiel de d&#xE9;veloppement certaine cellule, diss&#xE9;quer la relation d&#x26;#39;interaction cellule-environnement, identifier les cellules souches, et de nombreuses autres applications. Une exigence technique cl&#xE9; pour effectuer des dosages de transplantation est la capacit&#xE9; de distinguer les cellules du donneur transplant&#xE9;s &#xE0; partir des cellules h&#xF4;tes endog&#xE8;nes, et le tra&#xE7;age des cellules du donneur au fil du temps. Le poisson z&#xE8;bre est apparu comme un excellent mod&#xE8;le pour effectuer des dosages de transplantation, gr&#xE2;ce &#xE0; la transparence des embryons au cours du d&#xE9;veloppement et m&#xEA;me certains adultes. En utilisant des techniques transg&#xE9;niques et l&#x26;#39;&#xE9;volution rapide des technologies d&#x26;#39;imagerie, les cellules du donneur de fluorescence-marqu&#xE9;s peuvent &#xEA;tre facilement identifi&#xE9;s et &#xE9;tudi&#xE9;s in vivo. Dans ce chapitre, nous allons d&#x26;#39;abord discuter de la justification des diff&#xE9;rents types de poisson-z&#xE8;bre transplantation dans les deux embryons et les adultes, et ensuite se concentrer sur les m&#xE9;thodes d&#xE9;taill&#xE9;es de trois types de transplantation: blastula / gastrula transplantation pour l&#x26;#39;analyse de la mosa&#xEF;que, la transplantation de cellules souches, et la transplantation d&#x26;#39;une tumeur.

Transplantation chez le poisson z&#xE8;bre

Gewebe- oder Transplantation wurde eine &auml;u&szlig;erst wertvolle Technik f&uuml;r das Studium der entwicklungspolitischen Potenzial bestimmter Zellpopulation, sezieren Cell-Umwelt-Interaktion-Beziehung, Stammzellen und viele andere Anwendungen identifiziert. Eine technische Grundvoraussetzung f&uuml;r die Durchf&uuml;hrung der Transplantation Assay ist die F&auml;higkeit der Unterscheidung der transplantierten Spenderzellen aus endogenen Wirtszellen und tracing die Spenderzellen im Laufe der Zeit. Zebrab&auml;rbling hat eine ausgezeichnete Modellorganismus f&uuml;r die Durchf&uuml;hrung der Transplantation Assay, dank der Transparenz von Embryonen w&auml;hrend der Entwicklung und sogar bestimmte Erwachsene entwickelt. Mit Transgene Techniken und schnell &auml;ndernden imaging-Technologie, Fluoreszenz-markierten Spenderzellen problemlos identifiziert und in-vivo untersucht. In diesem Kapitel werden wir zuerst besprechen das Grundprinzip der verschiedenen Arten von Zebrafisch-Transplantation bei Embryonen und Erwachsenen, und konzentrieren Sie dann detaillierte Methoden der drei Arten der Transplantation: Blastula/Gastrula Transplantation f&uuml;r Mosaik-Analyse, Stammzelltransplantation und Tumor-Transplantation.

Transplantation in Zebrafisch.

Trapianto di tessuti o cellule &egrave; stata una tecnica estremamente preziosa per lo studio dello sviluppo potenziale di certe popolazione cellulare, dissezione rapporto di interazione cellula-ambiente, individuando le cellule staminali e molte altre applicazioni. Un requisito tecnico chiave per l&#39;eseguimento del trapianto &egrave; la capacit&agrave; di distinguere le cellule del donatore trapiantato dalle cellule endogene host e tracciando le cellule del donatore nel tempo. Zebrafish &egrave; emerso come un organismo modello eccellente per l&#39;eseguimento del trapianto, grazie alla trasparenza degli embrioni durante lo sviluppo e anche alcuni adulti. Utilizzando tecniche transgeniche e in rapida evoluzione tecnologia di imaging, le cellule del donatore con etichetta fluorescenza possono essere facilmente identificate e studiate in vivo. In questo capitolo, ci sar&agrave; prima discutere il razionale dei diversi tipi di trapianto di zebrafish embrioni sia gli adulti e quindi concentrarsi su metodi dettagliati di tre tipi di trapianto: trapianto blastula/gastrula per l&#39;analisi del mosaico, trapianto di cellule staminali e trapianto di tumore.

Trapianto in zebrafish.

&#x7D44;&#x7E54;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x89E3;&#x5256;&#x3057;&#x3001;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79FB;&#x690D;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x8981;&#x4EF6;&#x306F;&#x3001;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;&#x306E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x79FB;&#x690D;&#x3057;&#x305F;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306F;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x4E2D;&#x306E;&#x80DA;&#x306E;&#x900F;&#x660E;&#x6027;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x306F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x304A;&#x304B;&#x3052;&#x3067;&#x3001;&#x79FB;&#x690D;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D6E;&#x4E0A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x6280;&#x8853;&#x3068;&#x9AD8;&#x901F;&#x9032;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;in vivo&#x3067;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x30E2;&#x30B6;&#x30A4;&#x30AF;&#x89E3;&#x6790;&#x3001;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x79FB;&#x690D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x539F;&#x8178;&#x80DA;/&#x80DE;&#x80DA;&#x79FB;&#x690D;&#xFF1A;&#x3053;&#x306E;&#x7AE0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305A;&#x79FB;&#x690D;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x305F;&#x5F8C;&#x306E;&#x80DA;&#x3068;&#x6210;&#x4EBA;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x79FB;&#x690D;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x8AD6;&#x7406;&#x7684;&#x6839;&#x62E0;&#x3092;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3042;&#x308D;&#x3046;&#x3002;

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Zebrafish&#xC758; &#xC774;&#xC2DD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Tejidos o de c&#xE9;lulas ha sido una t&#xE9;cnica muy valiosa para el estudio de potencial de desarrollo de la poblaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas determinado, la disecci&#xF3;n de la c&#xE9;lula y el medio ambiente relaci&#xF3;n de interacci&#xF3;n, la identificaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas madre, y muchas otras aplicaciones. Un requisito clave t&#xE9;cnica para realizar un ensayo de trasplante es la capacidad de distinguir las c&#xE9;lulas del donante trasplantadas de las c&#xE9;lulas hu&#xE9;sped end&#xF3;genos, y rastreo de las c&#xE9;lulas del donante en el tiempo. El pez cebra se ha convertido en un organismo modelo excelente para realizar un ensayo de trasplante, gracias a la transparencia de los embriones durante el desarrollo e incluso algunos adultos. El uso de t&#xE9;cnicas transg&#xE9;nicas y r&#xE1;pida evoluci&#xF3;n de la tecnolog&#xED;a de im&#xE1;genes, etiquetadas por fluorescencia c&#xE9;lulas del donante pueden ser f&#xE1;cilmente identificadas y estudiadas en vivo. En este cap&#xED;tulo, analizaremos primero la l&#xF3;gica de los diferentes tipos de trasplante de pez cebra en los embriones y adultos, a continuaci&#xF3;n, centrarse en los m&#xE9;todos detallados de tres tipos de trasplante: bl&#xE1;stula / g&#xE1;strula de trasplante para el an&#xE1;lisis del mosaico, el trasplante de c&#xE9;lulas madre, y el trasplante del tumor.

Trasplante en el pez cebra

BMP &#x548C; Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x63A7;&#x5236;&#x57FA;&#x672C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7; SMAD (BMP) &#x548C; TCF (Wnt&#xFF09; &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x518D;&#x751F;&#x7684;&#x6025;&#x6027;&#x635F;&#x4F24;&#x540E;&#x9020;&#x8840;&#x5B97;&#x65CF;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5173;&#x952E;&#x8840;&#x6DB2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;SMAD1 &#x548C; TCF7L2 &#x4E0E;&#x4E3B;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x6BD7;&#x90BB;&#x9020;&#x8840;&#x57FA;&#x56E0; co-occupy &#x7684;&#x7F51;&#x7AD9;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;SMAD1 &#x548C; TCF7L2 &#x8DDF;&#x8E2A;&#x5206;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7A33;&#x538B;&#x5668;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4ECE;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5230;&#x7CFB;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x6CBF;&#x88AD;&#x8C03;&#x8282;&#x5668; C/EBP&alpha; &#x7CFB;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x79FB; SMAD1 &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7F51;&#x7AD9;&#x521A;&#x5360;&#x9886;&#x7684; C/EBP&alpha;&#xFF0C;&#x800C;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C03;&#x8282;&#x5668; GATA1 nonerythroid &#x76EE;&#x6807;&#x6307;&#x793A; SMAD1 &#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA; BMP &#x548C; Wnt &#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8DEF;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x518D;&#x751F;&#x53CD;&#x5E94;&#x52A0;&#x4E0A;&#x6CBF;&#x88AD;&#x4E3B;&#x76D1;&#x7BA1;&#x8005;&#x63A7;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E49;&#x8702;&#x7A9D;&#x6807;&#x8BC6;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

&#x6CBF;&#x88AD;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x76F4;&#x63A5;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x518D;&#x751F;&#x671F;&#x95F4;&#x7684; BMP &#x548C; Wnt &#x901A;&#x8DEF;&#x5BF9;&#x7279;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

BMP and Wnt signaling pathways control essential cellular responses through activation of the transcription factors SMAD (BMP) and TCF (Wnt). Here, we show that regeneration of hematopoietic lineages following acute injury depends on the activation of each of these signaling pathways to induce expression of key blood genes. Both SMAD1 and TCF7L2 co-occupy sites with master regulators adjacent to hematopoietic genes. In addition, both SMAD1 and TCF7L2 follow the binding of the predominant lineage regulator during differentiation from multipotent hematopoietic progenitor cells to erythroid cells. Furthermore, induction of the myeloid lineage regulator C/EBPÎ± in erythroid cells shifts binding of SMAD1 to sites newly occupied by C/EBPÎ±, whereas expression of the erythroid regulator GATA1 directs SMAD1 loss on nonerythroid targets. We conclude that the regenerative response mediated by BMP and Wnt signaling pathways is coupled with the lineage master regulators to control the gene programs defining cellular identity.

Lineage regulators direct BMP and Wnt pathways to cell-specific programs during differentiation and regeneration.

BMP et Wnt contr&#xF4;ler les voies de signalisation essentiels r&#xE9;ponses cellulaires via l&#x26;#39;activation de facteurs de transcription de la SMAD (BMP) et TCF (Wnt). Ici, nous montrons que la r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration des lign&#xE9;es h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques apr&#xE8;s une blessure aigu&#xEB; d&#xE9;pend de l&#x26;#39;activation de chacune de ces voies de signalisation pour induire l&#x26;#39;expression de g&#xE8;nes cl&#xE9;s de sang. Les deux Smad1 et TCF7L2 co-occupent les sites avec les principaux r&#xE9;gulateurs des g&#xE8;nes adjacents &#xE0; h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques. En outre, &#xE0; la fois Smad1 et TCF7L2 suivre la liaison de l&#x26;#39;organisme de r&#xE9;glementation lign&#xE9;e pr&#xE9;dominante lors de la diff&#xE9;renciation de cellules prog&#xE9;nitrices h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques multipotentes &#xE0; cellules &#xE9;rythro&#xEF;des. En outre, l&#x26;#39;induction de l&#x26;#39;organisme de r&#xE9;glementation lign&#xE9;e my&#xE9;lo&#xEF;de C / EBP&#x3B1; dans les cellules &#xE9;rythro&#xEF;des d&#xE9;place la liaison de Smad1 aux sites r&#xE9;cemment occup&#xE9;s par C / EBP&#x3B1;, alors que l&#x26;#39;expression du r&#xE9;gulateur &#xE9;rythro&#xEF;de GATA1 dirige Smad1 perte sur des cibles nonerythroid. Nous concluons que la r&#xE9;ponse r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rative m&#xE9;di&#xE9;e par BMP et les voies de signalisation Wnt est coupl&#xE9; avec les principaux r&#xE9;gulateurs de la lign&#xE9;e de contr&#xF4;ler les programmes de g&#xE8;nes d&#xE9;finissant l&#x26;#39;identit&#xE9; cellulaire.

Lineage r&#xE9;gulateurs direct BMP et Wnt Pathways to Cell-sp&#xE9;cifiques Programmes cours de la diff&#xE9;renciation et r&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;ration

BMP und Wnt Signalwege Steuern wesentliche zellulare Antworten durch Aktivierung der Transkriptionsfaktoren SMAD (BMP) und TCF (Wnt). Hier zeigen wir, dass die Aktivierung von jeder dieser Signalisierung von Konzepten f&uuml;r die Expression von Genen wichtige Blut veranlassen Regeneration von h&auml;matopoetischen Linien nach akuten Verletzungen abh&auml;ngt. SMAD1 und TCF7L2 co-occupy Websites mit master Regler neben h&auml;matopoetischen Gene. Zus&auml;tzlich folgen SMAD1 und TCF7L2 die Bindung des Reglers vorherrschende Linie w&auml;hrend der Differenzierung aus multipotenten h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen Erythroid Zellen. Dar&uuml;ber hinaus verschiebt Induktion von myeloid Abstammung Regler C/EBP&alpha; in Erythroid Zellen Bindung von SMAD1 zu Websites, die von C/EBP&alpha;, neu besetzt, w&auml;hrend Ausdruck des Reglers Erythroid GATA1 SMAD1 Verlust auf Nonerythroid Ziele leitet. Wir schlie&szlig;en, dass die regenerative Antwort von BMP und Wnt signalisieren Wege vermittelt mit der Linie master Regulierungsbeh&ouml;rden die gen-Programme definieren zellul&auml;re Identit&auml;t zu steuern gekoppelt ist.

Linie Regulierungsbeh&ouml;rden leiten BMP und Wnt Bahnen auf zellspezifische Programme w&auml;hrend der Differenzierung und Regeneration.

BMP e vie di segnalazione Wnt controllano essenziale risposte cellulari attraverso l&#39;attivazione dei fattori di trascrizione SMAD (BMP) e TCF (Wnt). Qui, ci mostra che la rigenerazione dei lignaggi ematopoietici dopo lesione acuta dipende l&#39;attivazione di ciascuna di queste vie per indurre l&#39;espressione di geni chiave sangue di segnalazione. Sia SMAD1 e TCF7L2 co-occupy siti con regolatori master adiacenti ai geni ematopoietiche. Inoltre, entrambi SMAD1 e TCF7L2 seguire l&#39;associazione del regolatore di lignaggio predominante durante la differenziazione di cellule progenitrici ematopoietiche multipotenti cellule eritroidi. Inoltre, induzione del regolatore lineage mieloide C/EBP&alpha; in cellule eritroidi sposta associazione di SMAD1 ai siti appena occupati da C/EBP&alpha;, considerando che l&#39;espressione del regolatore eritroide GATA1 dirige SMAD1 perdita su obiettivi nonerythroid. Possiamo concludere che la risposta rigenerativa mediata da BMP e vie di segnalazione Wnt &egrave; accoppiata con i regolatori master lignaggio a controllare i programmi di gene definizione di identit&agrave; cellulare.

Regolatori di lignaggio diretto BMP e Wnt percorsi di cella specifici programmi durante la differenziazione e della rigenerazione.

BMP&#x3068;Wnt&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;SMAD&#xFF08;BMP&#xFF09;&#x3068;TCF&#xFF08;Wnt&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#xFF09;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x6027;&#x50B7;&#x5BB3;&#x5F8C;&#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x518D;&#x751F;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8840;&#x6DB2;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3042;&#x308B;Smad1&#x3068;TCF7L2&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#xB7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3092;&#x5171;&#x540C;&#x5360;&#x6709;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3042;&#x308B;Smad1&#x3068;TCF7L2&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x652F;&#x914D;&#x7684;&#x306A;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x5F93;&#x3063;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;GATA1&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;nonerythroid&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3042;&#x308B;Smad1&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7CFB;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306F;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x7CFB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;C /EBP&#x3B1;&#x3001;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;C /EBP&#x3B1;&#x304C;&#x5360;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;Smad1&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;BMP&#x3068;Wnt&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x518D;&#x751F;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30C7;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x30DE;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x5206;&#x5316;&#xB7;&#x518D;&#x751F;&#x6642;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x7CFB;&#x7D71;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x76F4;&#x63A5;BMP&#x3068;Wnt&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;

BMP &#xBC0F; Wnt &#xC2E0;&#xD638; &#xD1B5;&#xB85C; SMAD (BMP) &#xBC0F; TCF (Wnt) &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xAE09;&#xC131; &#xBD80;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC870; &#xD608; &#xD608;&#xD1B5;&#xC758; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xAC01; &#xC2E0;&#xD638; &#xC8FC;&#xC694; &#xD608;&#xC561; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xC815;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Smad1&#xACFC; TCF7L2 &#xC870; &#xD608; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC778;&#xC811; &#xD55C; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; co-occupy. &#xB610;&#xD55C;, smad1&#xACFC; TCF7L2 &#xB530;&#xB77C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xC911; &#xC8FC;&#xB41C; &#xD608;&#xD1B5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; multipotent hematopoietic &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; erythroid &#xC140;. &#xB610;&#xD55C;, &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xD608;&#xD1B5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; erythroid &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; C/EBP&alpha;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xC2DD; erythroid &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; GATA1 SMAD1 &#xC190;&#xC2E4; nonerythroid &#xB300;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC9C0;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xC0C8;&#xB85C; C/EBP&alpha;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC810;&#xC720; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; smad1&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC774;&#xB3D9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC911;&#xC7AC; BMP&#xC640; Wnt &#xC2E0;&#xD638; &#xACBD;&#xB85C; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xC751;&#xB2F5; &#xD608;&#xD1B5; &#xB9C8;&#xC2A4;&#xD130; &#xADDC;&#xC81C; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC815;&#xCCB4;&#xC131;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC81C;&#xC5B4;&#xC640; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC5C8;&#xB2E4;.

&#xB9AC;&#xB2C8;&#xC9C0; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC140; &#xAD00;&#xB828; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; BMP &#xBC0F; Wnt &#xACBD;&#xB85C; &#xC9C1;&#xC811;.

BMP y v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n Wnt controlar esenciales respuestas celulares a trav&#xE9;s de la activaci&#xF3;n de los factores de transcripci&#xF3;n Smad (BMP) y TCF (Wnt). Aqu&#xED;, se muestra que la regeneraci&#xF3;n de los linajes hematopoy&#xE9;ticos despu&#xE9;s de una lesi&#xF3;n aguda depende de la activaci&#xF3;n de cada una de estas v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n para inducir la expresi&#xF3;n de genes sangu&#xED;neos importantes. Tanto Smad1 y TCF7L2 ocupan co-sitios con reguladores maestros adyacentes a los genes hematopoy&#xE9;ticos. Adem&#xE1;s, tanto Smad1 y TCF7L2 siga la uni&#xF3;n del regulador linaje predominante durante la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas progenitoras hematopoy&#xE9;ticas pluripotentes a las c&#xE9;lulas eritroides. Por otra parte, la inducci&#xF3;n del regulador de linaje mieloide C / EBP en las c&#xE9;lulas eritroides se desplaza la uni&#xF3;n de Smad1 a los sitios ocupados por los nuevos C / EBP, mientras que la expresi&#xF3;n del regulador eritroide GATA1 dirige Smad1 la p&#xE9;rdida de objetivos no eritroides. Llegamos a la conclusi&#xF3;n de que la respuesta regenerativa mediada por BMP y v&#xED;as de se&#xF1;alizaci&#xF3;n Wnt se acopla con los reguladores linaje del Maestro para controlar los programas de genes que definen la identidad celular.

Reguladores de linaje directo BMP y v&#xED;as Wnt a c&#xE9;lulas espec&#xED;ficas de los programas durante la diferenciaci&#xF3;n y regeneraci&#xF3;n

&#x6210;&#x4EBA;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x5730;&#x88AB;&#x7528;&#x4F5C;&#x764C;&#x75C7;&#x548C;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EFC;&#x5408;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (&#x6FC0;&#x5149;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#xFF09; &#x548C;&#x540C;&#x65F6;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x91CF;&#x5316;&#x4F53;&#x5185;&#x6D41;&#x5F0F; (IVFC)&#x3002;&#x8BE5;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x662F;&#x4E13;&#x95E8;&#x4E3A;&#x975E;&#x4FB5;&#x5165;&#x6027;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5E73;&#x7A33;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x548C;&#x5FAA;&#x73AF;&#x5728;&#x6210;&#x5E74;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C; &#xFF08;&#x53F0;&#x6E7E;&#xFF09; &#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x51FA;&#x6765;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x900F;&#x660E;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x7684;&#x3002;&#x672C;&#x6587;&#x4E66;&#x4E2D;&#x7684;&#x5171;&#x7126;&#x6210;&#x50CF;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x9C7C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x5FAE;&#x89C2;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x6307;&#x5357;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x67E5;&#x627E;&#x5408;&#x9002;&#x8239;&#x53EA;&#x4E3A;&#x5FAA;&#x73AF; IVFC &#x7EC6;&#x80DE;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x53CC;&#x91CD;&#x76EE;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x901A;&#x8FC7;&#x6210;&#x50CF;&#x900F;&#x660E;&#x6210;&#x4EBA;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x53F0;&#x6E7E;&#x8109;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x8DDF;&#x8E2A; CD41-GFP/Gata1-DsRed &#x7684;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;/&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x7EFF;&#x8272;&#x548C;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x9C7C;&#x4E2D;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x521D;&#x59CB;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x4EEA;&#x5668;&#x3002;&#x4F53;&#x5185;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5141;&#x8BB8;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5728;&#x540C;&#x6837;&#x7684;&#x9C7C;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x968F;&#x7740;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A8;&#x79FB;&#x800C;&#x4E0D;&#x7ED8;&#x5236;&#x8840;&#x6DB2;&#x6837;&#x672C;&#x6216;&#x727A;&#x7272;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x5C06;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x6B64;&#x4EEA;&#x5668;&#x5728;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x524D;&#x666F;&#x3002;&copy; 2011&#x5E74;&#x56FD;&#x9645;&#x793E;&#x4F1A;&#x5730;&#x4F4D;&#x7684;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x3002;

&#x5149;&#x5B66;&#x5E73;&#x53F0;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5728;&#x6210;&#x5E74;&#x6591;&#x9A6C;&#x9C7C;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;

Adult zebrafish are being increasingly used as a model in cancer and stem cell research. Here we describe an integrated optical system that combines a laser scanning confocal microscope (LSCM) and an in vivo flow cytometer (IVFC) for simultaneous visualization and cell quantification. The system is set up specifically for non-invasive tracking of both stationary and circulating cells in adult zebrafish (casper) that have been engineered to be optically transparent. Confocal imaging in this instrument serves the dual purpose of visualizing fish tissue microstructure and an imaging-based guide to locate a suitable vessel for quantitative analysis of circulating cells by IVFC. We demonstrate initial testing of this novel instrument by imaging the transparent adult zebrafish casper vasculature and tracking circulating cells in CD41-GFP/Gata1-DsRed transgenic fish whose thrombocytes/erythrocytes express the green and red fluorescent proteins. In vivo measurements allow cells to be tracked under physiological conditions in the same fish over time, without drawing blood samples or sacrificing animals. We also discuss the potential applications of this instrument in biomedical research. Â© 2011 International Society for Advancement of Cytometry.

An optical platform for cell tracking in adult zebrafish.

Le poisson-z&#xE8;bre pour adultes sont de plus en plus utilis&#xE9; comme un mod&#xE8;le dans le cancer et la recherche sur les cellules souches. On d&#xE9;crit ici un syst&#xE8;me optique int&#xE9;gr&#xE9; qui combine un microscope confocal &#xE0; balayage laser (MCBL) et une dans cytom&#xE8;tre de flux vivo (IVFC) pour la visualisation simultan&#xE9;e et la quantification de cellules. Le syst&#xE8;me est mis en place sp&#xE9;cifiquement pour les non-invasive des cellules de suivi &#xE0; la fois fixes et circulant dans le poisson-z&#xE8;bre adulte (casper) qui ont &#xE9;t&#xE9; modifi&#xE9;es pour &#xEA;tre optiquement transparent. Imagerie confocale dans cet instrument sert &#xE0; la fois de visualiser la microstructure des tissus de poissons et un guide d&#x26;#39;imagerie bas&#xE9;e sur de localiser un r&#xE9;cipient appropri&#xE9; pour l&#x26;#39;analyse quantitative des cellules circulantes par IVFC. Nous d&#xE9;montrons l&#x26;#39;essai initial de ce nouvel instrument d&#x26;#39;imagerie par l&#x26;#39;adulte transparente du poisson z&#xE8;bre casper vasculaire et le suivi des cellules circulantes dans le poisson transg&#xE9;nique CD41-GFP/Gata1-DsRed dont thrombocytes / &#xE9;rythrocytes exprimer les prot&#xE9;ines vertes et rouges fluorescentes. In vivo mesures permettent aux cellules de suivre dans des conditions physiologiques dans le m&#xEA;me poisson au fil du temps, sans en tirer des &#xE9;chantillons de sang ou de sacrifier des animaux. Nous discutons &#xE9;galement des applications potentielles de cet instrument dans la recherche biom&#xE9;dicale. &#xA9; 2011 Soci&#xE9;t&#xE9; internationale pour la promotion de la cytom&#xE9;trie.

Une plate-forme optique pour le suivi cellulaire chez le poisson z&#xE8;bre adulte

Erwachsene Zebrafisch zunehmend eingesetzt werden als Modell in Krebs und Stammzellforschung. Hier beschreiben wir ein integriertes optisches System, das einen Laser-scanning-Konfokales Mikroskop (LSCM) und eine in-vivo-Flow Cytometer (IVFC) f&uuml;r gleichzeitige Visualisierung und Quantifizierung der Zelle kombiniert. Das System ist speziell f&uuml;r nicht-invasive Verfolgung der beiden station&auml;re und zirkulierende Zellen in Erwachsenen Zebrafisch (Casper), die entwickelt wurden, um optisch transparent sein eingerichtet. Konfokale Bildgebung in dieses Instrument dient der dual Visualisierung Fisch Gewebe Mikrostruktur und eine Bildgebung-basierte Anleitung f&uuml;r ein geeignetes Schiff f&uuml;r die Quantitative Analyse von zirkulierenden Zellen durch IVFC zu suchen. Wir demonstrieren die Erstpr&uuml;fung dieses neuartigen Instruments von imaging die transparente Erwachsenen Zebrafisch-Casper-Gef&auml;&szlig;system und Nachverfolgen von zirkulierende Zellen in CD41-GFP/Gata1-DsRed transgene Fische deren Thrombozyten/Erythrozyten gr&uuml;n und rot fluoreszierende Proteine schnelles. In-vivo Messungen erm&ouml;glichen Zellen unter physiologischen Bedingungen in die gleichen Fische im Laufe der Zeit verfolgt werden, ohne Zeichnung Blutproben oder Tiere zu opfern. Wir diskutieren auch die Einsatzm&ouml;glichkeiten dieses Instruments in der biomedizinischen Forschung. &copy; 2011 Internationale Gesellschaft zur F&ouml;rderung der Cytometry.

Eine optische Plattform f&uuml;r Zelle tracking im Erwachsenen Zebrab&auml;rbling.

Zebrafish adulto vengono usati sempre pi&ugrave; come un modello nella ricerca cancro e cellule staminali. Qui descriviamo un sistema ottico integrato che combina un laser a scansione, microscopio confocale (LSCM) e un citometro a flusso in vivo (IVFC) per la visualizzazione simultanea e quantificazione delle cellule. Il sistema &egrave; istituito appositamente per non-invasiva tracking di entrambi fissi e circolanti cellule nello zebrafish adulto (casper) che sono state progettate per essere otticamente trasparente. Imaging confocale in questo strumento ha il duplice scopo di visualizzazione pesce microstruttura dei tessuti e una guida basata su imaging per individuare un recipiente adatto per analisi quantitativa di cellule da IVFC circolanti. Dimostriamo che i test iniziali di questo nuovo strumento di imaging il sistema vascolare casper di zebrafish adulto trasparente e rilevamento delle cellule circolanti nel pesce transgenico CD41-GFP/Gata1-DsRed cui trombociti/eritrociti esprimere le proteine fluorescenti verde e rosse. Misurazioni in vivo permettono alle cellule di essere rintracciati in condizioni fisiologiche nel pesce stesso nel corso del tempo, senza disegno campioni di sangue o sacrificare animali. Discutiamo anche le potenziali applicazioni di questo strumento nella ricerca biomedica. &copy; 2011 International Society for Advancement of Cytometry.

Una piattaforma ottica per cella di rilevamento in zebrafish adulto.

&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x764C;&#x3068;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;in vivo&#x3067;&#x306E;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;IVFC&#xFF09;&#x306B;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;LSCM&#xFF09;&#x3068;&#x8D70;&#x67FB;&#x578B;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x7D71;&#x5408;&#x5149;&#x5B66;&#x7CFB;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x900F;&#x660E;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5927;&#x4EBA;&#x306E;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#xFF08;&#x30AD;&#x30E3;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#xFF09;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x5FAA;&#x74B0;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x975E;&#x4FB5;&#x8972;&#x7684;&#x306A;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x7279;&#x306B;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x697D;&#x5668;&#x306E;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;IVFC&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5FAA;&#x74B0;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;&#x8239;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x9B5A;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4E8C;&#x91CD;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;/&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x7DD1;&#x8272;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8D64;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x9B5A;CD41-GFP/Gata1-DsRed&#x3067;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x697D;&#x5668;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x900F;&#x660E;&#x306A;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x6210;&#x4F53;&#x30AD;&#x30E3;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x8840;&#x7BA1;&#x7CFB;&#x3068;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x306E;&#x5FAA;&#x74B0;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; in vivo&#x3067;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3067;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x8840;&#x6DB2;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3092;&#x63CF;&#x753B;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3001;&#x52D5;&#x7269;&#x3092;&#x72A0;&#x7272;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x304B;&#x3051;&#x3066;&#x540C;&#x3058;&#x9B5A;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x697D;&#x5668;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#xA9;2011&#x56FD;&#x969B;&#x793E;&#x4F1A;&#x3002;

&#x30A2;&#x30C0;&#x30EB;&#x30C8;&#x30BC;&#x30D6;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x7528;&#x5149;&#x5B66;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;

&#xC131;&#xC778; zebrafish &#xC810;&#xC810; &#xC554;&#xACFC; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA8;&#xB378;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB808;&#xC774;&#xC800; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (LSCM) &#xAC80;&#xC0C9;&#xACFC; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBC0F; &#xC140; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xD750;&#xB984; cytometer (IVFC)&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; &#xAD11;&#xD559; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xBE44; &#xCE68;&#xB7B5; &#xC801; &#xB450; &#xBB38;&#xAD6C;&#xC758; &#xCD94;&#xC801; &#xBC0F; &#xAD11;&#xD559; &#xD22C;&#xBA85; &#xD558; &#xAC8C; &#xB420; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC131;&#xC778; zebrafish (casper) &#xC140; &#xC21C;&#xD658;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xAC8C; &#xC124;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC545;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; confocal &#xC601;&#xC0C1; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30; &#xC870;&#xC9C1; &#xBBF8;&#xC138; &#xC21C;&#xD658; IVFC&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC140;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC801;&#xD569; &#xD55C; &#xC120;&#xBC15;&#xC744; &#xCC3E;&#xC73C;&#xB824;&#xACE0; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xBC18; &#xAC00;&#xC774;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xC774;&#xC911; &#xBAA9;&#xC801;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD22C;&#xBA85; &#xD55C; &#xC131;&#xC778; zebrafish &#xCE90;&#xC2A4;&#xD37C; &#xD608;&#xAD00; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBC0F; CD41 GFP/Gata1 DsRed &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30; &#xC778; &#xC751;&#xC9D1;/&#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xB179;&#xC0C9;&#xACFC; &#xC801;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC21C;&#xD658; &#xC140;&#xC744; &#xCD94;&#xC801; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC545;&#xAE30;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. In vivo &#xCE21;&#xC815; &#xC140; &#xD608;&#xC561; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xADF8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xB098; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC744; &#xD76C;&#xC0DD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC774; &#xC9C0;&#xB0A8;&#xC5D0;, &#xAC19;&#xC740; &#xBB3C;&#xACE0;&#xAE30;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xC801;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC758;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xC545;&#xAE30;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &copy; 2011 &#xAD6D;&#xC81C; Cytometry&#xC758; &#xBC1C;&#xC804;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC0AC;&#xD68C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC131;&#xC778; zebrafish &#xCD94;&#xC801; &#xC140;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAD11;&#xD559; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;.

Adultos de pez cebra se emplea cada vez m&#xE1;s como un modelo en el c&#xE1;ncer y la investigaci&#xF3;n con c&#xE9;lulas madre. A continuaci&#xF3;n se describe un sistema &#xF3;ptico integrado que combina un microscopio confocal de barrido l&#xE1;ser (LSCM) y uno en el cit&#xF3;metro de flujo in vivo (IVFC) para la visualizaci&#xF3;n y cuantificaci&#xF3;n simult&#xE1;nea de la c&#xE9;lula. El sistema est&#xE1; configurado espec&#xED;ficamente para el seguimiento no invasivo de las c&#xE9;lulas fijas y circulantes en adultos de pez cebra (Casper) que han sido dise&#xF1;ados para ser &#xF3;pticamente transparente. Imagen confocal en este instrumento sirve al doble prop&#xF3;sito de visualizar la microestructura de tejidos de peces y una gu&#xED;a de imagen basado para localizar un recipiente adecuado para el an&#xE1;lisis cuantitativo de las c&#xE9;lulas circulantes por IVFC. Se demuestra la prueba inicial de este nuevo instrumento por la imagen del adulto transparente pez cebra casper vasculatura y el seguimiento de las c&#xE9;lulas que circulan en los peces transg&#xE9;nicos, cuyo CD41-GFP/Gata1-DsRed trombocitos / eritrocitos expresan las prote&#xED;nas fluorescentes verdes y rojas. En vivo mediciones permiten a las c&#xE9;lulas para ser rastreados en condiciones fisiol&#xF3;gicas en el mismo pez en el tiempo, sin sacar muestras de sangre o sacrificio de animales. Tambi&#xE9;n se discuten las posibles aplicaciones de este instrumento en la investigaci&#xF3;n biom&#xE9;dica. &#xA9; 2011 Sociedad Internacional para la Promoci&#xF3;n de la Citometr&#xED;a.

Pulin Li

Department of Hematology and Oncology

Children’s Hospital Boston

Retro-orbital Injection in Adult Zebrafish