establishing-primary-adult-fibroblast-cultures-from-rodents

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents

The importance of using primary cells, rather than cancer cell lines, for biological studies is becoming widely recognized.  Primary cells are preferred ...

University of Rochester

Sirtuin 6 (SIRT6) &#x662F;&#x9175;&#x6BCD;&#x5316;&#x9176; 2 &#x4E59;&#x9170;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x540C;&#x6E90;&#x3002;SIRT6 &#x4E3A;&#x6709;&#x7F3A;&#x9677;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x906D;&#x53D7;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x7684;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; SIRT6 &#x62DB;&#x8058;&#x5230; DNA &#x53CC;&#x94FE;&#x65AD;&#x88C2; &#xFF08;DSBs&#xFF09; &#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x548C;&#x523A;&#x6FC0; DSB &#x4FEE;&#x590D;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7; nhej &#x548C;&#x540C;&#x6E90;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; SIRT6 &#x7269;&#x7406;&#x8054;&#x805A; [&#x4E8C;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7; (ADP)-&#x6838;&#x7CD6;] &#x805A;&#x5408;&#x9176; 1 (PARP1) &#x548C;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559; 521 &#x5355;&#x6676;&#x7845;-ADP-ribosylates PARP1&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x523A;&#x6FC0; PARP1 &#x805A;-ADP-ribosylase &#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x52A0;&#x5F3A; DSB &#x4FEE;&#x590D;&#x4E0B;&#x6C27;&#x5316;&#x5E94;&#x6FC0;&#x3002;

SIRT6 &#x901A;&#x8FC7;&#x6FC0;&#x6D3B; PARP1 &#x4FC3;&#x8FDB; DNA &#x4FEE;&#x590D;&#x80C1;&#x8FEB;&#x4E0B;&#x3002;

Sirtuin 6 (SIRT6) is a mammalian homolog of the yeast Sir2 deacetylase. Mice deficient for SIRT6 exhibit genome instability. Here, we show that in mammalian cells subjected to oxidative stress SIRT6 is recruited to the sites of DNA double-strand breaks (DSBs) and stimulates DSB repair, through both nonhomologous end joining and homologous recombination. Our results indicate that SIRT6 physically associates with poly[adenosine diphosphate (ADP)-ribose] polymerase 1 (PARP1) and mono-ADP-ribosylates PARP1 on lysine residue 521, thereby stimulating PARP1 poly-ADP-ribosylase activity and enhancing DSB repair under oxidative stress.

SIRT6 promotes DNA repair under stress by activating PARP1.

Sirtuin 6 (SIRT6) est un homologue chez les mammif&#xE8;res de la d&#xE9;ac&#xE9;tylase de levure Sir2. Les souris d&#xE9;ficientes pour SIRT6 instabilit&#xE9; du g&#xE9;nome exposition. Ici, nous montrons que dans les cellules de mammif&#xE8;res soumis &#xE0; un stress oxydatif SIRT6 est recrut&#xE9; pour les sites de l&#x26;#39;ADN double-brin (CDB) et stimule la r&#xE9;paration de l&#x26;#39;ORD, &#xE0; la fois par non homologue end joining et la recombinaison homologue. Nos r&#xE9;sultats indiquent que SIRT6 s&#x26;#39;associe physiquement avec le poly [ad&#xE9;nosine diphosphate (ADP)-ribose] polym&#xE9;rase 1 (PARP1) et mono-ADP-ribosylates PARP1 sur les r&#xE9;sidus lysine 521, ce qui stimule PARP1 poly-ADP-ribosylase activit&#xE9; et l&#x26;#39;am&#xE9;lioration de l&#x26;#39;ORD au titre de r&#xE9;paration oxydatif contrainte.

SIRT6 favorise la r&#xE9;paration d&#x26;#39;ADN sous contrainte par Activation PARP1

Sirtuine 6 (SIRT6) ist ein S&auml;ugetier-Homolog von der Hefe Sir2-Deacetylase. M&auml;use f&uuml;r SIRT6 mangelhaft ausstellen Genom Instabilit&auml;t. Hier zeigen wir, dass in den S&auml;ugetier-Zellen oxidativen Stress ausgesetzt SIRT6 zu den Seiten von Br&uuml;chen der DNA-Doppel-Strang (DSBs) rekrutiert ist und stimuliert die DSB-Reparatur, durch nonhomologous Ende beitreten und Homologe Rekombination. Unsere Ergebnisse zeigen, dass SIRT6 physisch mit Poly associates [Adenosindiphosphat (ADP)-Ribose] Polymerase 1 (PARP1) und Mono-ADP-Ribosylates-PARP1 auf Lysin R&uuml;ckstand 521, wodurch PARP1 Poly-ADP-Ribosylase Belebung und Verbesserung der DSB reparieren unter oxidativer Stress.

SIRT6 f&ouml;rdert die DNA-Reparatur unter Stress durch die Aktivierung von PARP1.

Sirtuine 6 (SIRT6) &egrave; un mammifero omologo di deacetylase il lievito Sir2. Topi carenti per SIRT6 presentano instabilit&agrave; del genoma. Qui, ci mostrano che in cellule di mammifero sottoposte a stress ossidativo SIRT6 &egrave; reclutato per i siti di interruzioni di DNA double-strand (DSBs) e stimola la riparazione DSB, attraverso unirsi nonhomologous fine e la ricombinazione omologa. I nostri risultati indicano che SIRT6 associa fisicamente poli [adenosina difosfato (ADP)-ribosio] polimerasi 1 (PARP1) e mono-ADP-ribosylates PARP1 su residui di lisina 521, quindi stimolando PARP1 poli-ADP-ribosylase attivit&agrave; e rafforzare il DSB riparare sotto stress ossidativo.

SIRT6 promuove la riparazione del DNA sotto stress attivando PARP1.

&#x30B5;&#x30FC;&#x30C1;&#x30E5;&#x30A4;&#x30F3;6&#xFF08;SIRT6&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;Sir2&#x8131;&#x30A2;&#x30BB;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; SIRT6&#x5C55;&#x793A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6B20;&#x640D;&#x3057;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;SIRT6&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x4E2D;&#x3067;DNA&#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x5207;&#x65AD;&#xFF08;DSB&#x306E;&#xFF09;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x52DF;&#x96C6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x63A5;&#x5408;&#x975E;&#x76F8;&#x540C;&#x672B;&#x7AEF;&#x3068;&#x76F8;&#x540C;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;DSB&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;PARP1&#x30DD;&#x30EA;-ADP-ribosylase&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x3001;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x4E0B;&#x306B;DSB&#x306E;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;1&#xFF08;PARP1&#xFF09;&#x3001;&#x30E2;&#x30CE;-ADP-ribosylates PARP1&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;521&#x4E0A;&#x306B;&#x30DD;&#x30EA;[&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E8C;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;ADP&#xFF09; - &#x30EA;&#x30DC;&#x30FC;&#x30B9;]&#x3067;&#x305D;&#x306E;SIRT6&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306B;&#x4EF2;&#x9593;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3002;

SIRT6&#x306F;&#x3001;PARP1&#x3092;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x4E0B;&#x3067;&#x306F;DNA&#x4FEE;&#x5FA9;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;

Sirtuin 6 (SIRT6)&#xC740; &#xD6A8; Sir2 deacetylase&#xC758; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xCCB4;. Sirt6&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACB0;&#xD54D; &#xC0DD;&#xC950; &#xAC8C;&#xB188; &#xBD88;&#xC548;&#xC815;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBC1B;&#xAC8C; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; SIRT6 DNA &#xC774;&#xC911; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098;&#xB204;&#xAE30; (DSBs)&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xCDA9; &#xBC0F; DSB &#xC218;&#xB9AC; nonhomologous &#xCD5C;&#xC885; &#xD569;&#xB958;&#xC640; &#xB3D9;&#xC885; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC790;&#xADF9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; SIRT6 &#xD3F4; &#xB9AC;&#xC640;&#xC5D0; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; [&#xC544;&#xB370;&#xB178;&#xC2E0; diphosphate (ADP)-ribose] &#xD6A8;&#xC18C; 1 (PARP1) &#xBC0F; lysine &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; 521&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB178;-ADP-ribosylates PARP1, &#xADF8;&#xB85C; &#xC778;&#xD558;&#xC5EC; PARP1 &#xD3F4; &#xB9AC;-ADP-ribosylase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xACE0; &#xAC15;&#xD654; DSB &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;.

SIRT6 parp1&#xC744; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; DNA &#xBCF5;&#xAD6C;&#xB97C; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Sirtuin 6 (SIRT6) es un hom&#xF3;logo de mam&#xED;feros de la levadura de deacetilasa Sir2. Los ratones deficientes de SIRT6 la inestabilidad del genoma de exhibici&#xF3;n. En este sentido, muestran que en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero sometidas a estr&#xE9;s oxidativo SIRT6 se recluta a los sitios de ADN de doble filamento se rompe (DSBs) y estimula la reparaci&#xF3;n de DSB, tanto a trav&#xE9;s de la uni&#xF3;n y no hom&#xF3;loga finales de recombinaci&#xF3;n hom&#xF3;loga. Nuestros resultados indican que SIRT6 f&#xED;sica se asocia con poli [adenosina difosfato (ADP)-ribosa] polimerasa 1 (PARP1) y mono-ADP-ribosylates PARP1 el residuo de lisina 521, estimulando as&#xED; PARP1 poli-ADP-ribosylase actividad y mejorar la reparaci&#xF3;n del OSD en la oxidaci&#xF3;n estr&#xE9;s.

Amita Vaidya

Department of Biology

University of Rochester

Establishing Primary Adult Fibroblast Cultures From Rodents