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Live Cell Response to Mechanical Stimulation Studied by Integrated Optical and Atomic Force Microscopy

To understand the mechanism by which living cells sense mechanical forces, and how they respond and adapt to their environment, a new technology able to ...

Texas A&M Health Science Center

Texas A&M University

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Integrins are an important class of receptors for extracellular matrix proteins that can mediate both force transmission, by virtue of their connections with the cell matrix and cytoskeleton; and signal transduction, resulting from the assemblages of signaling proteins that associate with focal contacts. Consequently, integrins have been proposed to be the mechanosensor in vascular smooth muscle and endothelial cells and to play a central role in mechanotransduction. In this regard, mechanical force is an important stimulus for many vascular functions, including contractile and relaxation processes,proliferation, migration, attachment, and cell phenotype determination. Collectively, these functions define physiological properties of the vasculature such as control of blood flow, capillary pressure,permeability, and peripheral vascular resistance, and play a role in pathophysiological processes like hypertension, diabetes, and arteriosclerosis. Our knowledge concerning how integrins sense and transduce physical forces into cellular signals and which integrins are involved is incomplete. Compared to other cell surface receptors, integrins have a relatively low affinity for their binding sites on the extracellular matrix and their affinity can be regulated. These characteristics of integrin-ligand interaction may facilitate dynamic processes such as cell migration, cell remodeling, and contractile activation in response to external forces. Important questions remain concerning the nature and origin of integrin-mediated signaling in the vascular wall.

Integrins and regulation of the microcirculation: from arterioles to molecular studies using atomic force microscopy.

Les int&eacute;grines sont une classe importante des r&eacute;cepteurs des prot&eacute;ines de la matrice extracellulaire qui peuvent m&eacute;dier les deux transmission de force, en raison de leurs liens avec la matrice cellulaire et le cytosquelette ; et transduction du signal, r&eacute;sultant de l&#39;assemblages des prot&eacute;ines qui associent &agrave; focales contacts de signalisation. Par cons&eacute;quent, les int&eacute;grines ont &eacute;t&eacute; propos&eacute;s d&#39;&ecirc;tre le mechanosensor dans le muscle lisse vasculaire et les cellules endoth&eacute;liales et de jouer un r&ocirc;le central dans la m&eacute;canotransduction. &Agrave; cet &eacute;gard, force m&eacute;canique est un stimulant important pour nombreuses fonctions vasculaires, y compris contractile et processus de relaxation, prolif&eacute;ration, migration, attachement et d&eacute;termination du ph&eacute;notype cellulaire. Collectivement, ces fonctions d&eacute;finissent des propri&eacute;t&eacute;s physiologiques du syst&egrave;me vasculaire comme le contr&ocirc;le de la circulation sanguine, pression capillaire, la perm&eacute;abilit&eacute; et la r&eacute;sistance vasculaire p&eacute;riph&eacute;rique et jouent un r&ocirc;le dans les processus physiopathologiques comme l&#39;hypertension, de diab&egrave;te et d&#39;art&eacute;rioscl&eacute;rose. Nos connaissances concernant comment les int&eacute;grines d&eacute;tectent et transduce des forces physiques en signaux cellulaires et les int&eacute;grines jouent un r&ocirc;le est incompl&egrave;te. Par rapport aux autres r&eacute;cepteurs de surface cellulaire, int&eacute;grines ont une affinit&eacute; assez faible pour leurs sites de liaison sur la matrice extracellulaire et leur affinit&eacute; peut &ecirc;tre r&eacute;gl&eacute;e. Ces caract&eacute;ristiques de l&#39;interaction de l&#39;int&eacute;grine-ligand peuvent faciliter les processus dynamiques comme la migration cellulaire, cellule remodelage et activation contractile en r&eacute;ponse &agrave; des forces ext&eacute;rieures. Des questions importantes demeurent en ce qui concerne la nature et l&#39;origine de l&#39;int&eacute;grine-mediated signaling in la paroi vasculaire.

Les int&eacute;grines et la r&eacute;glementation de la microcirculation : des art&eacute;rioles &agrave; des &eacute;tudes mol&eacute;culaires &agrave; l&#39;aide de la microscopie &agrave; force atomique.

Integrine und Regulation der Mikrozirkulation: von Arteriolen auf molekulare Untersuchungen mittels Rasterkraftmikroskopie.

Le integrine sono un&#39;importante classe di recettori per le proteine della matrice extracellulare che possono mediare sia trasmissione di forza, in virt&ugrave; della loro connessioni con la matrice cellulare e citoscheletro; e segnale di trasduzione, risultanti da assemblaggi di proteine che si associano con contatti focali di segnalazione. Di conseguenza, le integrine sono state proposte per essere il mechanosensor nella muscolatura liscia vascolare e delle cellule endoteliali e per giocare un ruolo centrale nella mechanotransduction. A questo proposito, forza meccanica &egrave; uno stimolo importante per molte funzioni vascolari, tra cui contrattile e i processi di rilassamento, proliferazione, migrazione, attaccamento e determinazione del fenotipo delle cellule. Collettivamente, queste funzioni definiscono le propriet&agrave; fisiologiche del sistema vascolare come il controllo del flusso di sangue, pressione capillare, permeabilit&agrave; e resistenze vascolari periferiche e giocano un ruolo nei processi fisiopatologici come ipertensione, diabete e arteriosclerosi. La nostra conoscenza riguardo a come le integrine senso e trasducono segnali cellulari le forze fisiche e che le integrine sono coinvolti &egrave; incompleta. Rispetto ad altri recettori di superficie delle cellule, le integrine sono una relativamente bassa affinit&agrave; per i siti di legame sulla matrice extracellulare e loro affinit&agrave; pu&ograve; essere regolata. Queste caratteristiche dell&#39;interazione ligando-integrina possono facilitare i processi dinamici quali migrazione cellulare, cellulare rimodellamento e attivazione contrattile in risposta alle forze esterne. Domande importanti rimangono per quanto riguarda la natura e l&#39;origine dell&#39;integrina-mediata segnalazione nella parete vascolare.

Le integrine e regolamento del microcircolo: da arteriole a studi molecolari mediante microscopia a forza atomica.

&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x63A5;&#x7D9A;&#x30BB;&#x30EB; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x304A;&#x304B;&#x3052;&#x3067;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x529B;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x5668;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3001;&#x7126;&#x70B9;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306E;&#x9023;&#x7D61;&#x5148;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x308B;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x7FA4;&#x96C6;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x3058;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CE; &#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x3084;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3068;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CE;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C0;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x7DE9;&#x548C;&#x904E;&#x7A0B;&#x3001;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x79FB;&#x884C;&#x3001;&#x6DFB;&#x4ED8;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x523A;&#x6FC0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x3066;&#x8840;&#x7BA1;&#x8840;&#x6D41;&#x3001;&#x6BDB;&#x7D30;&#x7BA1;&#x5727;&#x529B;&#x3001;&#x900F;&#x6C34;&#x6027;&#x3001;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x7BA1;&#x62B5;&#x6297;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x9AD8;&#x8840;&#x5727;&#x3001;&#x7CD6;&#x5C3F;&#x75C5;&#x3001;&#x52D5;&#x8108;&#x786C;&#x5316;&#x306E;&#x75C5;&#x614B;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x611F;&#x899A;&#x3057;&#x3001;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x529B;&#x306B;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x4F1D;&#x9054;&#x3057;&#x3066;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x306F;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x4F4E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x4E0A;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x898F;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x52D5;&#x3001;&#x6539;&#x9020;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x53CE;&#x7E2E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;&#x529B;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8CEA;&#x554F;&#x306F;&#x81EA;&#x7136;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x3092;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x306B;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x6B8B;&#x308B;&#x3002;

&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x5FAA;&#x74B0;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;: &#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5206;&#x5B50;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x52D5;&#x8108;&#x304B;&#x3089;&#x3002;

Integrins &#xC140; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC640; cytoskeleton; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB355;&#xD0DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC15;&#xC81C; &#xC804;&#xC1A1; &#xBAA8;&#xB450;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB294; &#xBC0F; &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xD658;, &#xC2E0;&#xD638; &#xCD08;&#xC810; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; assemblages&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD608;&#xAD00; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC;&#xACFC; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xB294; mechanosensor &#xD558; &#xACE0; mechanotransduction &#xC911;&#xC2EC; &#xC5ED;&#xD560; integrins &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xC640; &#xAD00;&#xB828;, &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD798; &#xB9CE;&#xC740; &#xC218;&#xCD95; &#xB4F1; &#xD608;&#xAD00; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xC774;&#xC644; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;, &#xD655;&#xC0B0;, &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C;, &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xD604; &#xD615; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC790;&#xADF9; &#xC774;&#xB2E4;. &#xCD1D;&#xCE6D; &#xD558; &#xC5EC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD568;&#xC218; &#xD608;&#xAD00;&#xC758; &#xD608;&#xC561;&#xC758; &#xD750;&#xB984;, &#xBAA8; &#xC138;&#xAD00; &#xC555;&#xB825;, &#xCE68;&#xD22C;&#xC131;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB9D0; &#xCD08; &#xD608;&#xAD00; &#xC800;&#xD56D; &#xC81C;&#xC5B4; &#xB4F1;&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD558; &#xACE0; &#xACE0;&#xD608;&#xC555;, &#xB2F9;&#xB1E8;&#xBCD1;, &#xB3D9;&#xB9E5; &#xACBD;&#xD654; &#xC99D; &#xAC19;&#xC740; pathophysiological &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5ED;&#xD560;. &#xC5B4;&#xB5A4; integrins &#xAD00;&#xB828; integrins &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xACFC; transduce &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801;&#xC778; &#xD798;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC744; &#xC644;&#xB8CC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; integrins &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC744; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB41C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Integrin ligand &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD2B9;&#xC131; &#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158;, &#xC140; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;, &#xC678;&#xBD80; &#xC138;&#xB825;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xCD95; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB4F1; &#xB3D9;&#xC801; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC790;&#xC5F0;&#xACFC; &#xD608;&#xAD00; &#xBCBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E0;&#xD638; integrin &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xAE30;&#xC6D0;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC740; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;.

Integrins &#xACE0;&#xB294; &#xBBF8;&#xC138; &#xD608;&#xAD00;&#xC758; &#xADDC;&#xC81C;: arterioles &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC790; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;.

Las integrinas son una clase importante de receptores para prote&iacute;nas de matriz extracelular que pueden mediar tanto transmisi&oacute;n de fuerza, en virtud de sus conexiones con la matriz celular y citoesqueleto; y la se&ntilde;al de transducci&oacute;n, resultantes de los ensambles de se&ntilde;alizaci&oacute;n de las prote&iacute;nas que se asocian con contactos focales. En consecuencia, se han propuesto ser el mechanosensor en c&eacute;lulas endoteliales y musculares lisas vasculares y desempe&ntilde;ar un papel central en la mecanotransducci&oacute;n integrinas. En este sentido, la fuerza mec&aacute;nica es un est&iacute;mulo importante para muchas funciones vasculares, incluyendo contr&aacute;ctil y procesos de relajaci&oacute;n, proliferaci&oacute;n, migraci&oacute;n, fijaci&oacute;n y determinaci&oacute;n del fenotipo de la c&eacute;lula. Colectivamente, estas funciones definen propiedades fisiol&oacute;gicas de la vasculatura como control de flujo de la sangre, presi&oacute;n capilar, permeabilidad y la resistencia vascular perif&eacute;rica y desempe&ntilde;an un papel en los procesos fisiopatol&oacute;gicos como hipertensi&oacute;n, diabetes y arteriosclerosis. Nuestro conocimiento sobre c&oacute;mo las integrinas sensaci&oacute;n y transducen fuerzas f&iacute;sicas en se&ntilde;ales celulares y que integrinas participan es incompleta. Comparado con otros receptores de superficie celular, integrinas tienen una afinidad relativamente baja para sus sitios de Uni&oacute;n en la matriz extracelular y su afinidad puede ser regulado. Estas caracter&iacute;sticas de interacci&oacute;n ligando-integrina pueden facilitar procesos din&aacute;micos tales como la migraci&oacute;n celular y remodelaci&oacute;n de la c&eacute;lula contr&aacute;ctil activaci&oacute;n en respuesta a fuerzas externas. Queda la pregunta importante en cuanto a la naturaleza y el origen de la integrina mediada por se&ntilde;alizaci&oacute;n en la pared vascular.

Las integrinas y regulaci&oacute;n de la microcirculaci&oacute;n: de arteriolas para estudios moleculares mediante microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica.

&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7528;&#x6765;&#x8C03;&#x67E5;&#x5BF9;&#x7EC4;&#x80FA;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x708E;&#x6027;&#x4ECB;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5F15;&#x8D77;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x589E;&#x9AD8;&#x548C;&#x8840;&#x7BA1;&#x6E17;&#x6F0F;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x63A2;&#x9488;&#x90FD;&#x6807;&#x6709;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x7528;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x901A;&#x8FC7;&#x91CF;&#x5316;&#x6253;&#x7834;&#x5355;&#x4E00;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;-&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x503A;&#x5238;&#x6240;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x529B;&#x7684; alpha5beta1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x548C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x3002;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x53D8;&#x5316;&#x3001; &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6982;&#x7387;&#x548C;&#x7C98;&#x9644;&#x529B;&#x4E4B;&#x524D;&#x548C;&#x4E4B;&#x540E;&#x5BF9;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC4;&#x80FA;&#x6CBB;&#x7597;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x76D1;&#x6D4B;&#x3002;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5730;&#x5F62;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8868;&#x660E;&#x7EC4;&#x80FA;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6536;&#x7F29;&#x3002;&#x5C40;&#x90E8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x521A;&#x5EA6;&#x548C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6982;&#x7387;&#x7EC4;&#x80FA;&#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x4E24;&#x500D;&#x3002;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x7834;&#x88C2;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D; alpha5beta1-&#x5355;&#x4E00;&#x503A;&#x5238;&#x90E8;&#x961F;&#x4ECE; 34.0 + /-0.5 pN &#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x52A0;&#x5230; 39 + /-1 pN &#x7EC4;&#x80FA;&#x6CBB;&#x7597;&#x540E;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x8BD5;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x8BA4; alpha5beta1-&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x3002;&#x4E0B;&#x7C98;&#x9644;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x6982;&#x7387;&#x51CF;&#x5C11;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; GRGDdSP &gt; 50%&#x800C; alpha5beta1 &#x548C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7C98;&#x9644;&#x529B;&#x4ECD;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;-&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x5BF9;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5916;&#x90E8;&#x5316;&#x5B66;&#x8C03;&#x89E3;&#x5458;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x66F4;&#x6539;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BB0;&#x5F55;&#x4E0B;&#x6765;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5BF9;&#x6D3B;&#x7684;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;

&#x7EC4;&#x80FA;&#x5BF9;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Atomic force microscopy was used to investigate the cellular response to histamine, one of the major inflammatory mediators that cause endothelial hyperpermeability and vascular leakage. AFM probes were labeled with fibronectin and used to measure binding strength between alpha5beta1 integrin and fibronectin by quantifying the force required to break single fibronectin-integrin bonds. The cytoskeletal changes, binding probability, and adhesion force before and after histamine treatment on endothelial cells were monitored. Cell topography measurements indicated that histamine induces cell shrinkage. Local cell stiffness and binding probability increased twofold after histamine treatment. The force necessary to rupture single alpha5beta1-fibronectin bond increased from 34.0 +/- 0.5 pN in control cells to 39 +/- 1 pN after histamine treatment. Experiments were also conducted to confirm the specificity of the alpha5beta1-fibronectin interaction. In the presence of soluble GRGDdSP the probability of adhesion events decreased >50% whereas the adhesion force between alpha5beta1 and fibronectin remained unchanged. These data indicate that extracellular matrix-integrin interactions play an important role in the endothelial cell response to changes of external chemical mediators. These changes can be recorded as direct measurements on live endothelial cells by using atomic force microscopy.

Histamine effects on endothelial cell fibronectin interaction studied by atomic force microscopy.

Microscopie &agrave; force atomique a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour &eacute;tudier la r&eacute;ponse cellulaire &agrave; l&#39;histamine, un des m&eacute;diateurs inflammatoires majeurs qui causent l&#39;hyperperm&eacute;abilit&eacute; endoth&eacute;liale et une fuite vasculaire. Sondes AFM ont &eacute;t&eacute; marqu&eacute;s avec la fibronectine et utilis&eacute;s pour mesurer la force de liaison entre l&#39;int&eacute;grine alpha5beta1 et la fibronectine en quantifiant la force n&eacute;cessaire pour briser les liaisons de l&#39;int&eacute;grine fibronectine unique. Les changements cytosquelettiques, probabilit&eacute; de liaison et adh&eacute;rence vigueur avant et apr&egrave;s traitement de l&#39;histamine sur les cellules endoth&eacute;liales ont &eacute;t&eacute; surveill&eacute;s. Cellule topographie mesures indiquent que l&#39;histamine induit de r&eacute;tr&eacute;cissement de la cellule. Probabilit&eacute; de rigidit&eacute; et de liaison cellulaire locale a augment&eacute; de double apr&egrave;s le traitement de l&#39;histamine. La force n&eacute;cessaire &agrave; liaison unique alpha5beta1-fibronectine rupture pass&eacute;e de 34,0 +/-0,5 pN dans les cellules t&eacute;moins &agrave; 39 +/-1 pN apr&egrave;s traitement de l&#39;histamine. Exp&eacute;riences ont &eacute;t&eacute; &eacute;galement men&eacute;es afin de confirmer la sp&eacute;cificit&eacute; de l&#39;interaction d&#39;alpha5beta1-la fibronectine. En pr&eacute;sence de GRGDdSP soluble diminue la probabilit&eacute; d&#39;&eacute;v&eacute;nements adh&eacute;sion &gt; 50 % alors que la force d&#39;adh&eacute;rence entre l&#39;alpha5beta1 et la fibronectine est demeur&eacute;e inchang&eacute;e. Ces donn&eacute;es indiquent que des interactions int&eacute;grine-matrice extracellulaire jouent un r&ocirc;le important dans la r&eacute;ponse des cellules endoth&eacute;liales aux changements de m&eacute;diateurs chimiques externes. Ces modifications peuvent &ecirc;tre enregistr&eacute;es comme des mesures directes sur direct cellules endoth&eacute;liales en utilisant atomiques &agrave; force.

Effets de l&#39;histamine sur l&#39;interaction de la fibronectine de cellules endoth&eacute;liales &eacute;tudi&eacute; par microscopie &agrave; force atomique.

Histamin-Wirkung auf Endothelzellen Fibronektin Interaktion mittels Rasterkraftmikroskopie untersucht.

Microscopia a forza atomica &egrave; stata utilizzata per studiare la risposta cellulare all&#39;istamina, uno dei principali Mediatori infiammatori che causano perdite vascolari e iperpermeabilit&agrave; endoteliale. Sonde AFM sono state etichettate con la fibronectina e usate per misurare la forza di associazione tra alpha5beta1 integrina e fibronectina da quantificare la forza necessaria per rompere i legami singoli fibronectina-integrina. Le modifiche del citoscheletro, probabilit&agrave; di associazione e adesione forza prima e dopo trattamento dell&#39;istamina sulle cellule endoteliali sono stati monitorati. Le misurazioni di topografia cella indicato che l&#39;istamina induce la contrazione delle cellule. Cellula locale rigidit&agrave; e associazione probabilit&agrave; aumentata duplice dopo trattamento di istamina. La forza necessaria a rottura legame singolo alpha5beta1-fibronectina aumentata da 34,0 + /-0,5 pN in cellule di controllo a 39 + 1 pN dopo trattamento di istamina. Inoltre sono stati condotti esperimenti per confermare la specificit&agrave; dell&#39;interazione alpha5beta1-fibronectina. In presenza di GRGDdSP solubile diminuita la probabilit&agrave; di eventi di adesione &amp;gt; 50% mentre la forza di adesione tra alpha5beta1 e fibronectina &egrave; rimasto invariato. Questi dati indicano che le interazioni matrice extracellulare-integrina svolgono un ruolo importante nella risposta ai cambiamenti dei mediatori chimici esterni delle cellule endoteliali. Questi cambiamenti possono essere registrati come misurazioni dirette sulle cellule endoteliali dal vivo utilizzando atomiche force microscopia.

Effetti dell&#39;istamina sull&#39;interazione di fibronectina delle cellule endoteliali studiato da microscopia a forza atomica.

&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x5185;&#x76AE;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8840;&#x7BA1;&#x6F0F;&#x51FA;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x708E;&#x75C7;&#x306E;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30D2;&#x30B9;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;AFM &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; &#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x7D46;&#x3092;&#x7834;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x529B;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068; alpha5beta1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;, &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x78BA;&#x7387;&#x53CA;&#x3073;&#x63A5;&#x7740;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x3068;&#x5F8C;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D2;&#x30B9;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x6CBB;&#x7642;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x76E3;&#x8996;&#x529B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EB;&#x5730;&#x5F62;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x30D2;&#x30B9;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x304C;&#x7D30;&#x80DE;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB; &#x30BB;&#x30EB;&#x525B;&#x6027;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x78BA;&#x7387; 2 &#x500D;&#x30D2;&#x30B9;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7834;&#x88C2;&#x5358;&#x4E00; alpha5beta1 &#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x50B5;&#x5238;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x529B; 34.0 &plusmn; 0.5 pN &#x5236;&#x5FA1;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089; 39 1 pN +/-&#x30D2;&#x30B9;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x6CBB;&#x7642;&#x5F8C;&#x5897;&#x52A0;&#x3002;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306F;&#x307E;&#x305F; alpha5beta1 &#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x63A5;&#x7740;&#x4E8B;&#x8C61;&#x306E;&#x78BA;&#x7387;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027; GRGDdSP &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x76EE; alpha5beta1 &#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x7C98;&#x7740;&#x529B;&#x306B;&#x6B8B;&#x3063;&#x305F;&#x4E00;&#x65B9; 50 &#xFF05; &#x3092;&#x636E;&#x3048;&#x7F6E;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;-&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5916;&#x90E8;&#x5316;&#x5B66;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x518D;&#x751F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x76F4;&#x63A5;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x8A18;&#x9332;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8840;&#x7BA1;&#x5185;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x30D2;&#x30B9;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3002;

&#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC870;&#xC0AC; &#xB0B4; &#xD53C; hyperpermeability&#xACFC; &#xD608;&#xAD00; &#xB204;&#xC218; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xC8FC;&#xC694; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790; &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xD788; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xBBFC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD734;&#xB300; &#xC804;&#xD654; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. AFM &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; fibronectin &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xB85C; &#xC9C0;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB2E8;&#xC77C; fibronectin integrin &#xCC44;&#xAD8C;&#xC744; &#xD734;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD798;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; alpha5beta1 integrin&#xACFC; fibronectin &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAC15;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Cytoskeletal &#xBCC0;&#xACBD; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD655;&#xB960;&#xACFC; &#xC811;&#xCC29; &#xAC15;&#xC81C;&#xB85C; &#xC804;&#xACFC; &#xD6C4; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD788; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xBBFC; &#xCE58;&#xB8CC; &#xAC10;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC140; &#xC9C0;&#xD615; &#xCE21;&#xC815; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD788; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xBBFC; &#xC140; &#xC218; &#xCD95;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB85C;&#xCEEC; &#xC140; &#xAC15;&#xC131; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD655;&#xB960; &#xC99D;&#xAC00; &#xD788; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xBBFC; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD30C;&#xC5F4; &#xB2E8;&#xC77C; alpha5beta1 fibronectin &#xBCF8;&#xB4DC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD798; &#xD788; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xBBFC; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6C4; 1 pN + 39 &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xC140; 0.5 pN + 34.0&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB610;&#xD55C; alpha5beta1 fibronectin &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778;&#xC744; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; GRGDdSP &#xC811;&#xCC29; &#xC0AC;&#xAC74;&#xC758; &#xD655;&#xB960; &#xAC10;&#xC18C; &#xC874;&#xC7AC; &amp;gt; 50 %alpha5beta1 &#xBC0F; fibronectin &#xC0AC;&#xC774; &#xC811;&#xCC29; &#xD798;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; integrin &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC678;&#xBD80; &#xD654;&#xD559; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790;&#xC758; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC7AC;&#xC0DD;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6D0;&#xC790;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xCE21;&#xC815; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC15;&#xC81C;&#xB85C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC6A9;&#xC740; &#xAE30;&#xB85D;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB0B4; &#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; fibronectin &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xACF5;&#xBD80;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD788; &#xC2A4;&#xD0C0; &#xBBFC; &#xD6A8;&#xACFC;.

Microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica fue utilizado para investigar la respuesta celular a la histamina, uno de los principales mediadores inflamatorios causantes de hiperpermeabilidad endotelial y salida vascular. Sondas de AFM fueron etiquetadas con la fibronectina y utilizadas para medir la fuerza de uni&oacute;n entre la integrina alpha5beta1 y fibronectina cuantificando la fuerza requerida para romper los enlaces solo fibronectina-integrina. El citoesqueleto cambios, probabilidad de atascamiento y adherencia fuerza antes y despu&eacute;s de tratamiento de la histamina en las c&eacute;lulas endoteliales fueron monitoreados. Mediciones de topograf&iacute;a de c&eacute;lulas indican que la histamina induce la contracci&oacute;n de la c&eacute;lula. Probabilidad de rigidez y enlace celular local aument&oacute; el doble despu&eacute;s del tratamiento de la histamina. La fuerza necesaria para ruptura solo alpha5beta1-fibronectina bonos aument&oacute; de 34,0 +/-0,5 pN en las c&eacute;lulas del control a 39 +/-1 pN despu&eacute;s del tratamiento de la histamina. Tambi&eacute;n se realizaron experimentos para confirmar la especificidad de la interacci&oacute;n alpha5beta1-fibronectina. En presencia de GRGDdSP soluble, disminuye la probabilidad de eventos de adherencia &gt; 50% mientras que la fuerza de adhesi&oacute;n entre alpha5beta1 y fibronectina permaneci&oacute; sin cambios. Estos datos indican que las interacciones de la matriz extracelular-integrina juegan un papel importante en la respuesta de la c&eacute;lula endotelial a cambios de mediadores qu&iacute;micos externos. Estos cambios pueden grabarse como mediciones directas en vivos c&eacute;lulas endoteliales utilizando at&oacute;micas fuerza microscopia.

Efectos de la histamina en interacci&oacute;n de fibronectina celular endotelial estudiadas por microscopia de fuerza at&oacute;mica.

&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28; (ECM) &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x529B;&#x5B66;&#x6027;&#x80FD;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x7126;&#x7C98;&#x8FDE;&#xFF0C;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x529B;&#x5B66;&#x4F20;&#x9012;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x75BE;&#x75C5;&#x4E2D;&#x7279;&#x522B;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x610F;&#x4E49;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x521D;&#x59CB;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D; (FN) &#x89E3;&#x9664;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x529B;&#x548C;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x6D3B;&#x52A8;-alpha5beta1 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F7F;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; &#xFF08;AFM&#xFF09;&#x3002;&#x5B83;&#x88AB;&#x5047;&#x5B9A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x521D;&#x59CB;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x662F;&#x5BF9;&#x968F;&#x540E;&#x7C98;&#x7740;&#x5927;&#x4F1A;&#x5F88;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;FN-&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7C98;&#x8FDE;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x5730;&#x963B;&#x6B62;&#x4E86;&#x7531; alpha5 &#x548C; beta1 &#x6574;&#x5408;&#x4EE5;&#x53CA; rgd &#x80BD;&#x6297;&#x4F53;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x6297;&#x4F53;&#x5BF9; alpha4-&#x548C; beta3-&#x6574;&#x5408;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; FN &#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; alpha5beta1&#x3002;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230; 39 + /-8 pN &#x7279;&#x6027;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x90E8;&#x961F;&#x5E76;&#x5C06;&#x5176;&#x89E3;&#x91CA;&#x4E3A;&#x8868;&#x793A; FN alpha5beta1 &#x5355;&#x7C98;&#x7ED3;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x3002;&#x575A;&#x6301;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6982;&#x7387;&#xFF09; FN &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x5927;&#x4E3A;&#x964D;&#x4F4E;&#x4E86;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x62EE;&#x6297;&#x5242;&#x3001; &#x8840;&#x6E05;&#x9965;&#x997F;&#x548C;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x884D;&#x751F;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;PDGF&#xFF09;-BB&#xFF0C;&#x800C;&#x6EB6;&#x8840;&#x78F7;&#x8102;&#x9178; (LPA) &#x589E;&#x52A0; FN &#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6709;&#x4EBA;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x89E3;&#x51B3;&#x89E3;&#x9664;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x90E8;&#x961F;&#x6CA1;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x540E;&#x53C2;&#x4E0E;&#xFF0C;&#x9700;&#x8981;&#x8D76;&#x51FA; FN &#x6D82;&#x5C42;&#x73E0;&#x4ECE;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x529B;&#x589E;&#x52A0;&#x6697;&#x793A;&#x7C98;&#x8FDE;&#x548C;/&#x6216;&#x66F4;&#x6539;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x4EB2;&#x548C;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x63A5;&#x89E6;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;LPA &#x589E;&#x5F3A;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x800C;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x51CF;&#x5C11;&#x5B83;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x56E0;&#x7D20;&#x4E5F;&#x5F71;&#x54CD;&#x5230; multimolecular &#x7126;&#x8054;&#x7CFB;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x662F;&#x8868;&#x5F81;&#x6574;&#x5408; ECM &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x529B;&#x5B66;&#x6027;&#x80FD;&#x53CA;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x6709;&#x529B;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x53EF;&#x8FC5;&#x901F;&#x8C03;&#x8282;&#x529F;&#x80FD;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684; alpha5beta1 &#x548C;&#x91CD;&#x70B9;&#x8054;&#x7CFB;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7814;&#x7A76;&#x529B;&#x5B66;&#x6027;&#x80FD;&#x7684;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x548C; alpha5beta1-&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x5BF9;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

The mechanical properties of integrin-extracellular matrix (ECM) interactions are important for the mechanotransduction of vascular smooth muscle cells (VSMC), a process that is associated with focal adhesions, and can be of particular significance in cardiovascular disease. In this study, we characterized the unbinding force and binding activity of the initial fibronectin (FN)-alpha5beta1 interaction on the surface of VSMC using atomic force microscopy (AFM). It is postulated that these initial binding events are important to the subsequent focal adhesion assembly. FN-VSMC adhesions were selectively blocked by antibodies against alpha5- and beta1-integrins as well as RGD-containing peptides but not by antibodies against alpha4- and beta3-integrins, indicating that FN primarily bound to alpha5beta1. A characteristic unbinding force of 39 +/- 8 pN was observed and interpreted to represent the FN-alpha5beta1 single-bond strength. The ability of FN to adhere to VSMC (binding probability) was significantly reduced by integrin antagonists, serum starvation, and platelet-derived growth factor (PDGF)-BB, whereas lysophosphatidic acid (LPA) increased FN binding. However, no significant change in the resolved unbinding force was observed. After engagement, the force required to dislodge the FN-coated bead from VSMC increased with increasing of contact time, suggesting a time-dependent increase in number of adhesions and/or altered binding affinity. LPA enhanced this process, whereas PDGF reduced it, suggesting that these factors also affect the multimolecular process of focal contact assembly. Thus AFM is a powerful tool for the characterization of the mechanical properties of integrin-ECM interactions and their regulation. Our results indicate that the functional activity of alpha5beta1 and focal contact assembly can be rapidly regulated.

Mechanical properties of the interaction between fibronectin and alpha5beta1-integrin on vascular smooth muscle cells studied using atomic force microscopy.

Les propri&eacute;t&eacute;s m&eacute;caniques des interactions int&eacute;grine-extracellulaire (ECM) sont importantes pour la m&eacute;canotransduction de cellules de muscle lisse vasculaire (CMLV), un processus qui est associ&eacute;e &agrave; des adh&eacute;rences focales, et peuvent &ecirc;tre d&#39;une importance particuli&egrave;re dans les maladies cardiovasculaires. Dans cette &eacute;tude, nous avons caract&eacute;ris&eacute; l&#39;activit&eacute; sans engagement de force et de la liaison de la fibronectine initiale (FN)-interaction d&#39;alpha5beta1 sur la surface des cellules &agrave; l&#39;aide de la microscopie &agrave; force atomique (AFM). Il est postul&eacute; que ces &eacute;v&eacute;nements de liaison initiale sont importantes pour l&#39;Assembl&eacute;e de l&#39;adh&eacute;rence focale ult&eacute;rieures. Les adh&eacute;rences FN-CMLV bloqua s&eacute;lectivement par des anticorps contre alpha5 - et beta1-int&eacute;grines ainsi que des peptides RGD contenant mais pas par les anticorps contre alpha4-beta3-int&eacute;grines et, ce qui indique que les FN li&eacute; principalement &agrave; alpha5beta1. Une force sans engagement caract&eacute;ristique de 39 +/-8 pN a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e et interpr&eacute;t&eacute;e pour repr&eacute;senter la force de liaison simple FN-alpha5beta1. La capacit&eacute; du FN &agrave; adh&eacute;rer &agrave; la CMLV (probabilit&eacute; de liaison) est significativement r&eacute;duite par les antagonistes de l&#39;int&eacute;grine, s&eacute;rum et facteur de croissance d&eacute;riv&eacute; des plaquettes (PDGF)-BB, tandis que l&#39;acide lysophosphatidique (LPA) a augment&eacute; de liaison des FN. Toutefois, aucun changement significatif dans la force sans engagement r&eacute;solue a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e. Apr&egrave;s l&#39;engagement, la force n&eacute;cessaire pour d&eacute;loger le talon FN-enduit de CMLV a augment&eacute; avec l&#39;augmentation du temps de contact, ce qui sugg&egrave;re une augmentation d&eacute;pendant du temps nombre d&#39;adh&eacute;sions et/ou d&#39;affinit&eacute; de liaison modifi&eacute;e. LPA am&eacute;lior&eacute; ce processus, alors que le PDGF r&eacute;duit, ce qui sugg&egrave;re que ces facteurs affectent &eacute;galement le processus multimol&eacute;culaire de regroupement de contact focal. AFM est donc un outil puissant pour la caract&eacute;risation des propri&eacute;t&eacute;s m&eacute;caniques des interactions int&eacute;grine-ECM et leur r&egrave;glement. Nos r&eacute;sultats indiquent que l&#39;activit&eacute; fonctionnelle du alpha5beta1 et Assembl&eacute;e contact focale peut &ecirc;tre r&eacute;glement&eacute;e rapidement.

Les propri&eacute;t&eacute;s m&eacute;caniques de l&#39;interaction entre l&#39;int&eacute;grine alpha5beta1 sur les cellules musculaires lisses vasculaires et de fibronectine a &eacute;tudi&eacute; &agrave; l&#39;aide de la microscopie &agrave; force atomique.

Mechanische Eigenschaften der Interaktion zwischen Fibronektin und alpha5beta1-Integrin auf vaskul&#xE4;re glatte Muskelzellen untersuchten mittels Rasterkraftmikroskopie.

Le propriet&agrave; meccaniche delle interazioni integrina-extracellulare (ECM) sono importanti per la mechanotransduction delle cellule muscolari lisce vascolari (VSMC), un processo che &egrave; associato con adesioni focali, e possono essere di particolare importanza nelle malattie cardiovascolari. In questo studio, abbiamo caratterizzato l&#39;attivit&agrave; di forza e associazione non vincolante dell&#39;iniziale della fibronectina (FN)-interazione alpha5beta1 sulla superficie delle VSMC mediante microscopia a forza atomica (AFM). &Egrave; postulato che questi eventi di associazione iniziale sono importanti per l&#39;assemblea successiva adesione focale. Aderenze FN-VSMC selettivamente erano bloccati da anticorpi contro alpha5 e beta1 integrine cos&igrave; come i peptidi RGD-contenente ma non da anticorpi contro alpha4 - e beta3-integrine, che indica che FN principalmente associata a alpha5beta1. Una caratteristica forza non vincolante di 39 + 8 pN &egrave; stata osservata e interpretata per rappresentare la forza del singolo legame di FN-alpha5beta1. La capacit&agrave; di aderire alle VSMC (probabilit&agrave; di associazione) FN &egrave; stato ridotto significativamente da antagonisti dell&#39;integrina, fame di siero e fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGF)-BB, mentre l&#39;acido lysophosphatidic (LPA) aumentata associazione FN. Tuttavia, &egrave; stato osservato alcun cambiamento significativo nella forza non vicolante risolta. Dopo il fidanzamento, la forza necessaria per sloggiare il tallone FN-rivestito da VSMC &egrave; aumentato con l&#39;aumento del tempo di contatto, suggerendo un aumento dipendente dal tempo in numero di adesioni e/o affinit&agrave; di legame alterato. LPA enhanced questo processo, considerando che PDGF &egrave; ridotta, suggerendo che questi fattori incidono anche il processo di multimolecular dell&#39;Assemblea contatto focale. AFM &egrave; quindi un potente strumento per la caratterizzazione delle propriet&agrave; meccaniche delle interazioni integrina-ECM e loro regolamento. I nostri risultati indicano che l&#39;attivit&agrave; funzionale dei alpha5beta1 e montaggio contatto focale pu&ograve; essere regolato rapidamente.

Propriet&agrave; meccaniche dell&#39;interazione tra fibronectina e alpha5beta1-integrina su cellule muscolari lisce vascolari studiata mediante microscopia a forza atomica.

&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; (ECM) &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CE;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C0;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF09; &#x7126;&#x70B9;&#x63A5;&#x7740;&#x6591;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x610F;&#x7FA9;&#x306E;&#x5FC3;&#x8840;&#x7BA1;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;, &#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x89E3;&#x9664;&#x306E;&#x529B;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x6D3B;&#x52D5;&#x521D;&#x671F;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; (FN) &#x306E;&#x7279;&#x5FB4;-&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (AFM) &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B; alpha5beta1 &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x7126;&#x70B9;&#x63A5;&#x7740;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x4EEE;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;FN &#x7D30;&#x80DE;&#x7652;&#x7740;&#x306F; alpha5 &#x3068; beta1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066; RGD &#x542B;&#x6709;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x4F53;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x6297;&#x4F53;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B; &alpha; 4- &#x3068; beta3 - FN &#x4E3B;&#x306B; alpha5beta1 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;39 8 PN +/-&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x7684;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x89E3;&#x9664;&#x529B;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x3001;FN alpha5beta1 &#x5358;&#x4E00;&#x7D50;&#x5408;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x89E3;&#x91C8;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE; (&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x78BA;&#x7387;) &#x306B;&#x6E96;&#x62E0;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306E; FN &#x306F;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x62EE;&#x6297;&#x85AC;&#x3084;&#x8840;&#x6E05;&#x98E2;&#x9913;&#x3001;&#x8840;&#x5C0F;&#x677F;&#x7531;&#x6765;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50; (PDGF) &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F;-BB&#x3001;FN &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30EA;&#x30BE;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30B8;&#x30F3;&#x9178; &#xFF08;LPA&#xFF09; &#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x89E3;&#x6C7A;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x89E3;&#x9664;&#x529B;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5A5A;&#x7D04;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;FN &#x30B3;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x3092;&#x53D6;&#x308A;&#x9664;&#x304F;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x529B;&#x306E;&#x7652;&#x7740;&#x3084;&#x5909;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;&#x6570;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x4F9D;&#x5B58;&#x578B;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x6642;&#x9593;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3002;LPA &#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x5F37;&#x5316;&#x3001;PDGF &#x305D;&#x308C;&#x3001;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x6E1B;&#x5C11;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB; &#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8; &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E; multimolecular &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066; AFM &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3; ECM &#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;Alpha5beta1 &#x3068;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB; &#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8; &#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068; alpha5beta1-&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x6027;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x691C;&#x8A0E;&#x3002;

Integrin &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; (ECM) &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131; &#xD608;&#xAD00; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC; (VSMC), &#xCD08;&#xC810; &#xC720;&#xCC29;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB41C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; mechanotransduction&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xBA70; &#xC2EC;&#xD608; &#xAD00; &#xC9C8;&#xD658;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC758;&#xBBF8;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; fibronectin (FN)&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD574;&#xC81C; &#xD798; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC791;&#xC5C5; &#xD2B9;&#xC9D5;-&#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (AFM)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; VSMC&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; alpha5beta1 &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCD08;&#xAE30; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB294; &#xD6C4;&#xC18D; &#xCD08;&#xC810; &#xC811;&#xCC29; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; postulated&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. FN VSMC &#xC720;&#xCC29; &#xB41C; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; alpha4-&#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; beta3-integrins, FN alpha5beta1&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB428;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; alpha5 &#xBC0F; beta1 integrins&#xB85C; RGD &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC28;&#xB2E8; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. 8 PN + 39&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD574;&#xC81C; &#xD798; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558; &#xACE0; FN alpha5beta1 &#xB2E8;&#xC77C; &#xBCF8;&#xB4DC; &#xAC15;&#xB3C4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xD574;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4;. VSMC (&#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD655;&#xB960;)&#xC744; &#xC900;&#xC218; &#xD558;&#xB294; FN&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; integrin &#xAE38; &#xD56D; &#xC81C;, &#xD608; &#xCCAD; &#xAE30;&#xC544;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD608;&#xC18C;&#xD310; &#xC720;&#xB798; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; (PDGF)&#xB85C; &#xD06C;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4;-BB, lysophosphatidic &#xC0B0; (LPA) FN &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD655;&#xC778; &#xB41C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD574;&#xC81C; &#xD798;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xAC00; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xCC38;&#xC5EC;, &#xD6C4; VSMC&#xC5D0;&#xC11C; FN &#xCF54;&#xD305; &#xBE44;&#xB4DC;&#xB97C; &#xAEBC;&#xB0B4; &#xB824; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD798; &#xC720;&#xCC29; &#xB610;&#xB294; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC218;&#xAC00; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; &#xC811;&#xCD09; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8; &#xC99D;&#xAC00; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. LPA &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC694;&#xC778; &#xB610;&#xD55C; &#xCD08;&#xC810; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; multimolecular &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; PDGF, &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; AFM integrin ECM &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xD2B9;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; alpha5beta1 &#xBC0F; &#xCD08;&#xC810; &#xCEE8;&#xD0DD;&#xD2B8; &#xBD80;&#xD488;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC2E0;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xD1B5;&#xC81C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Fibronectin&#xACFC; &#xD608;&#xAD00; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; alpha5beta1-integrin &#xC0AC;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;.

Las propiedades mec&aacute;nicas de las interacciones de la matriz extracelular de la integrina (ECM) son importantes para la mecanotransducci&oacute;n de c&eacute;lulas musculares lisas vasculares (VSMC), un proceso que est&aacute; asociado con adherencias focales, y pueden ser de particular importancia en las enfermedades cardiovasculares. En este estudio, hemos caracterizado la actividad desvinculaci&oacute;n de fuerza y Uni&oacute;n de la fibronectina inicial (FN)-interacci&oacute;n alpha5beta1 en la superficie de la Coevoluci&oacute;n con microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica (AFM). Se postula que estos eventos de enlace inicial son importantes para la Asamblea de adhesi&oacute;n focal posterior. Adherencias de FN-Coevoluci&oacute;n selectivamente fueron bloqueadas por los anticuerpos contra alpha5 - y beta1-integrinas, as&iacute; como p&eacute;ptidos que contienen RGD pero no por anticuerpos contra alpha4 - y beta3-integrinas, indicando que el FN principalmente vinculadas a alpha5beta1. Una caracter&iacute;stica fuerza desvinculaci&oacute;n de 39 +/-8 pN fue observada e interpretada para representar la fuerza de la solo-enlace de FN-alpha5beta1. La capacidad de adherirse a VSMC (probabilidad de enlace) de FN se redujo significativamente con los antagonistas de la integrina, el hambre de suero y factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF)-BB, mientras que el &aacute;cido lisofosfat&iacute;dico (LPA) aument&oacute; vinculante de FN. Sin embargo, se observ&oacute; un cambio significativo en la fuerza de desvinculaci&oacute;n resuelto. Despu&eacute;s de compromiso, la fuerza necesaria para desplazar el grano FN-revestida de Coevoluci&oacute;n aument&oacute; con el aumento del tiempo de contacto, lo que sugiere un aumento de time-dependent en n&uacute;mero de adhesiones o afinidad alterada. LPA hab&iacute;a mejorado este proceso, mientras que redujo PDGF, sugiriendo estos factores tambi&eacute;n afectan el proceso multimoleculares de Asamblea contacto focal. As&iacute; AFM es una poderosa herramienta para la caracterizaci&oacute;n de las propiedades mec&aacute;nicas de las interacciones de la integrina-ECM y su regulaci&oacute;n. Nuestros resultados indican que la actividad funcional de alpha5beta1 y reuni&oacute;n de contacto focal puede regularse r&aacute;pidamente.

Propiedades mec&aacute;nicas de la interacci&oacute;n de fibronectina y alpha5beta1-integrinas en las c&eacute;lulas de m&uacute;sculo liso vascular estudiaron mediante microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica.

&#x65B0;&#x578B;&#x6DF7;&#x5408;&#x6210;&#x50CF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6784;&#x9020;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; &#xFF08;AFM&#xFF09; &#x7ED3;&#x5408;&#x63D0;&#x4F9B;&#x9AD8;&#x7A7A;&#x95F4;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x5E94;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6587;&#x4E66; (NanoFluor &#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF09; &#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x91CD;&#x70B9;&#x653E;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x90E8;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x673A;&#x68B0;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x53CD;&#x5E94;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E0E;&#x529B;&#x5B66;&#x4F20;&#x9012;&#x3002;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5141;&#x8BB8;&#x7684;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7814;&#x7A76;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x6982;&#x7387;&#x3001; &#x7C98;&#x9644;&#x529B;&#x548C;&#x7EC6;&#x89C2;&#x529B;&#x5B66;&#x5C5E;&#x6027;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x800C;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5141;&#x8BB8;&#x8584;&#x7247;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5728; coverslip &#x7EC6;&#x80DE;&#x63A5;&#x53E3;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x4F7F;&#x7528;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149; &#xFF08;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;&#xFF09; &#x548C;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (IRM) &#x7126;&#x7C98;&#x8FDE;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x8054;&#x5408;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x663E;&#x793A;&#x5728;&#x6839;&#x5C16;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x523A;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x529B;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x9AA8;&#x67B6;&#x54CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x57FA;&#x5E95;&#x8868;&#x9762;&#x53EF;&#x5B9E;&#x65F6;&#x76D1;&#x6D4B;&#x91CD;&#x70B9;&#x8054;&#x7CFB;&#x91CD;&#x7EC4;&#x3002;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8FD8;&#x914D;&#x5907;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x673A;&#x68B0; NanoFluor &#x5BF9;&#x9F50;&#x5408;&#x6210;&#x798F;&#x65AF;&#x7279;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB; &#xFF08;&#x97F3;&#x54C1;&#xFF09; &#x53CC;&#x6444;&#x50CF;&#x5934;&#x91C7;&#x96C6;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86;&#x7EFC;&#x5408;&#x7684; NanoFluor &#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5176;&#x7279;&#x6027;&#x3001; &#x5E94;&#x7528;&#x548C;&#x5C40;&#x9650;&#x6027;&#x3002;

&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x591A;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x7EFC;&#x5408;&#x7684;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x76D1;&#x6D4B;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;

A novel hybrid imaging system is constructed integrating atomic force microscopy (AFM) with a combination of optical imaging techniques that offer high spatial resolution. The main application of this instrument (the NanoFluor microscope) is the study of mechanotransduction with an emphasis on extracellular matrix-integrin-cytoskeletal interactions and their role in the cellular responses to changes in external chemical and mechanical factors. The AFM allows the quantitative assessment of cytoskeletal changes, binding probability, adhesion forces, and micromechanical properties of the cells, while the optical imaging applications allow thin sectioning of the cell body at the coverslip-cell interface, permitting the study of focal adhesions using total internal reflection fluorescence (TIRF) and internal reflection microscopy (IRM). Combined AFM-optical imaging experiments show that mechanical stimulation at the apical surface of cells induces a force-generating cytoskeletal response, resulting in focal contact reorganization on the basal surface that can be monitored in real time. The NanoFluor system is also equipped with a novel mechanically aligned dual camera acquisition system for synthesized Forster resonance energy transfer (FRET). The integrated NanoFluor microscope system is described, including its characteristics, applications, and limitations.

Atomic force-multi-optical imaging integrated microscope for monitoring molecular dynamics in live cells.

Un hybride nouveau syst&egrave;me d&#39;imagerie est construit en int&eacute;grant la microscopie &agrave; force atomique (AFM) avec une combinaison de techniques d&#39;imagerie optiques offrant une r&eacute;solution spatiale &eacute;lev&eacute;e. Le principal de l&#39;application de cet instrument (le microscope NanoFluor) est l&#39;&eacute;tude de la m&eacute;canotransduction avec une emphase sur les interactions cytosquelettiques-int&eacute;grine-matrice extracellulaires et leur r&ocirc;le dans les r&eacute;ponses cellulaires aux changements dans les facteurs chimiques et m&eacute;caniques externes. L&#39;AFM permet l&#39;&eacute;valuation quantitative des changements cytosquelettiques, contraignant probabilit&eacute;, forces d&#39;adh&eacute;rence et microm&eacute;caniques propri&eacute;t&eacute;s des cellules, tandis que les applications d&#39;imagerie optiques permettent une coupe mince du corps cellulaire &agrave; l&#39;interface de la lamelle couvre-objet-cellule, permettant l&#39;&eacute;tude des adh&eacute;rences focales en microscopie de r&eacute;flexion interne (IRM) et de la fluorescence de r&eacute;flexion totale interne (FRBR). AFM-optique combin&eacute;s des exp&eacute;riences d&#39;imagerie montrent que la stimulation m&eacute;canique &agrave; la surface apicale des cellules provoque une r&eacute;ponse du cytosquelette g&eacute;n&eacute;ratrices de force, ce qui entra&icirc;ne une r&eacute;organisation contact focale sur la surface terri&egrave;re qui peut &ecirc;tre surveill&eacute;e en temps r&eacute;el. Le NanoFluor syst&egrave;me est &eacute;galement &eacute;quip&eacute; d&#39;un roman m&eacute;caniquement align&eacute; syst&egrave;me double cam&eacute;ra d&#39;acquisition pour le transfert d&#39;&eacute;nergie par r&eacute;sonance synth&eacute;tis&eacute;e Forster (FRET). Le syst&egrave;me int&eacute;gr&eacute; de microscope NanoFluor est d&eacute;crite, y compris ses caract&eacute;ristiques, applications et limites.

Atomic force-multi-imagerie int&eacute;gr&eacute;e microscope optique pour la surveillance de la dynamique mol&eacute;culaire dans des cellules vivantes.

Eine neuartige Hybrid-imaging-System wird konstruiert, Integration von Rasterkraftmikroskopie (AFM) mit einer Kombination aus optischen bildgebender Verfahren, die hohen r&auml;umlichen Aufl&ouml;sung bieten. Die wichtigste Anwendung dieses Instruments (NanoFluor-Mikroskop) ist das Studium der Mechanotransduction mit Betonung der extrazellul&auml;ren Matrix-Integrin-Zytoskelett Interaktionen und ihre Rolle bei der zellul&auml;ren Reaktionen auf &Auml;nderungen der chemische und mechanische Fremdeinwirkungen. Die AFM kann die quantitative Bewertung Zytoskelett &Auml;nderungen, Wahrscheinlichkeit, Adh&auml;sion Kr&auml;fte und mikromechanische Eigenschaften der Zellen, w&auml;hrend die optischen imaging-Anwendungen erm&ouml;glichen, d&uuml;nnen Schnitte der Zellk&ouml;rper an der Schnittstelle Deckglas-Zelle erlaubt das Studium der fokalen Adh&auml;sionen mit Totalreflexion Fluoreszenz (TIRF) und Totalreflexion Mikroskopie (IRM). Kombinierte AFM-optische Bildgebung Experimente zeigen, dass mechanische Stimulation an der apikalen Oberfl&auml;che der Zellen induziert eine Kraft schaffende Zytoskelett-Antwort, was zu fokalen Kontakt Reorganisation auf die basale Fl&auml;che, die in Echtzeit &uuml;berwacht werden kann. Das NanoFluor System auch mit einem Roman mechanisch ist ausgestattet ausgerichtet dual-Kamera-Erfassungssystem f&uuml;r synthetisierte Forster Resonanz Energietransfer (FRET). Das integrierte NanoFluor-Mikroskop-System wird beschrieben, einschlie&szlig;lich Eigenschaften, Anwendungen und Einschr&auml;nkungen.

Atomare Kraft-Multi-Bildgebung integrierte Lichtmikroskop zur &Uuml;berwachung der Molekulardynamik in lebenden Zellen.

Un romanzo ibrido sistema di imaging &egrave; costruito integrando la microscopia a forza atomica (AFM) con una combinazione di tecniche di imaging ottici che offrono elevata risoluzione spaziale. L&#39;applicazione principale di questo strumento (il microscopio NanoFluor) &egrave; lo studio di mechanotransduction con un&#39;enfasi sulle interazioni extracellulare matrix-integrina-citoscheletriche e il loro ruolo nelle risposte cellulari alle variazioni di fattori chimici e meccanici esterni. L&#39;AFM consente la valutazione quantitativa dei cambiamenti citoscheletrici, associazione probabilit&agrave;, le forze di adesione e propriet&agrave; micromeccaniche delle cellule, mentre le applicazioni di imaging ottiche permettono sottile di sezionamento del corpo cellulare all&#39;interfaccia coprioggetto-cellula, permettendo lo studio delle aderenze focale mediante fluorescenza riflessione interna totale (TIRF) e microscopia di riflessione interna totale (IRM). Combinato AFM-optical imaging esperimenti mostrano che la stimolazione meccanica alla superficie apicale delle cellule induce una risposta forza generatrice del citoscheletro, con conseguente riorganizzazione contatto focale sulla superficie basale che pu&ograve; essere monitorata in tempo reale. Il sistema &egrave; dotato anche un romanzo meccanicamente NanoFluor allineato sistema acquisizione doppia fotocamera per sintetizzato Forster resonance energy transfer (FRET). Il sistema integrato di microscopio NanoFluor &egrave; descritto, comprese le sue caratteristiche, applicazioni e limitazioni.

Atomic force-multi-imaging integrato microscopio ottico per il monitoraggio di dinamica molecolare in cellule vive.

&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x65B0;&#x898F;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (AFM) &#x306F;&#x9AD8;&#x7A7A;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x5149;&#x5B66;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E3B;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x697D;&#x5668; (NanoFluor &#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;) &#x30E1;&#x30AB;&#x30CE;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C0;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x91CD;&#x70B9;&#x3092;&#x7F6E;&#x3044;&#x3066;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5916;&#x90E8;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30FB;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x8981;&#x56E0;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x3059;&#x3002;AFM &#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x8584;&#x5207;&#x7247;&#x7D30;&#x80DE;&#x4F53; coverslip &#x30BB;&#x30EB;&#x754C;&#x9762;&#x3067;&#x306E;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x8A31;&#x53EF;&#x304C;&#x78BA;&#x7387;&#x3001;&#x63A5;&#x7740;&#x529B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x5168;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149; &#xFF08;TIRF) &#x3068;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x306E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x691C;&#x67FB; (IRM) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7126;&#x70B9;&#x63A5;&#x7740;&#x6591;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306E; AFM &#x5149;&#x5B66;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x5B9F;&#x9A13;&#x9802;&#x7AEF;&#x8868;&#x9762;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x529B;&#x5B66;&#x523A;&#x6FC0;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB; &#x30B3;&#x30F3;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C8;&#x518D;&#x7DE8;&#x304C;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x76E3;&#x8996;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x57FA;&#x5E95;&#x9762;&#x306B;&#x7D42;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x529B;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3082;&#x3068;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3092;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306B;&#x642D;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; NanoFluor &#x30C7;&#x30E5;&#x30A2;&#x30EB; &#x30AB;&#x30E1;&#x30E9;&#x96C6;&#x9332;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x5408;&#x6210;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5; (FRET) &#x3092;&#x63C3;&#x3048;&#x3002;&#x7D71;&#x5408; NanoFluor &#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x305D;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x3001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5236;&#x9650;&#x4E8B;&#x9805;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x5149;&#x5B66;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D71;&#x5408;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3002;

&#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD558;&#xC774;&#xBE0C;&#xB9AC;&#xB4DC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB192;&#xC740; &#xACF5;&#xAC04; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xAD11;&#xD559; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xC220; &#xC870;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (AFM)&#xC744; &#xD1B5;&#xD569; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC545;&#xAE30; (NanoFluor &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;)&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC740; mechanotransduction &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; integrin cytoskeletal &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC911;&#xC810;&#xC640; &#xC678;&#xBD80; &#xD654;&#xD559; &#xBC0F; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC774;&#xB2E4;. AFM &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD655;&#xB960;, &#xC811;&#xCC29; &#xD798; &#xBC0F; micromechanical &#xC18D;&#xC131;&#xC740; &#xC140;&#xC758; &#xAD11;&#xD559; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xD5C8;&#xC6A9; coverslip &#xC140; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xC2DC;&#xCCB4;&#xC758; &#xC587;&#xC740; &#xB2E8;&#xBA74; &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD615;&#xAD11; (TIRF) &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (IRM)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD08;&#xC810; &#xC720;&#xCC29;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD5C8;&#xC6A9; cytoskeletal &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; AFM &#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC140;&#xC758; &#xAF2D;&#xB300;&#xAE30; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC790;&#xADF9; &#xD798; &#xC0DD;&#xC131; cytoskeletal &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xC800; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810; &#xBB38;&#xC758; &#xC870;&#xC9C1; &#xAC1C;&#xD3B8;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xC720;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC;. NanoFluor &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC18C;&#xC124;&#xC744; &#xAC16;&#xCD94;&#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xD569;&#xC131;&#xB41C; &#xD3EC;&#xC2A4;&#xD130; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; (FRET)&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xB4C0;&#xC5BC; &#xCE74;&#xBA54;&#xB77C; &#xC218;&#xC9D1; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC815;&#xB82C;. &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; NanoFluor &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131; &#xBC0F; &#xC751;&#xC6A9;, &#xD55C;&#xACC4;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xBA40;&#xD2F0; &#xAD11;&#xD559; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;.

Un nuevo h&iacute;brido sistema de imagen se construye integraci&oacute;n de microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica (AFM) con una combinaci&oacute;n de t&eacute;cnicas de imagen &oacute;pticas que ofrecen alta resoluci&oacute;n espacial. La principal aplicaci&oacute;n de este instrumento (el microscopio NanoFluor) es el estudio de mecanotransducci&oacute;n con &eacute;nfasis en las interacciones matriz-integrina-citoesqueleto extracelulares y su papel en las respuestas celulares a los cambios en los factores externos de la qu&iacute;micos y mec&aacute;nicos. La AFM permite la evaluaci&oacute;n cuantitativa de los cambios del citoesqueleto, vinculante probabilidad, las fuerzas de adhesi&oacute;n y micromechanical propiedades de las c&eacute;lulas, mientras que las aplicaciones de im&aacute;genes &oacute;pticas permiten seccionamiento delgada del cuerpo celular en la interfaz de cubreobjetos-celular, permitiendo el estudio de adherencias focales mediante fluorescencia de reflexi&oacute;n interna total (TIRF) y microscop&iacute;a de reflexi&oacute;n interna (IRM). Experimentos de proyecci&oacute;n de imagen AFM-&oacute;ptica combinados muestran que la estimulaci&oacute;n mec&aacute;nica en la superficie apical de las c&eacute;lulas induce una respuesta citoesqueleto generadoras de fuerza, dando por resultado la reorganizaci&oacute;n contacto focal en la superficie basal que puede ser monitoreada en tiempo real. El NanoFluor sistema tambi&eacute;n est&aacute; equipado con una novela mec&aacute;nicamente alineados sistema de adquisici&oacute;n de doble c&aacute;mara para la transferencia de energ&iacute;a de resonancia de Forster sintetizada (FRET). Se describe el sistema de microscopio de NanoFluor integrado, incluyendo sus caracter&iacute;sticas, aplicaciones y limitaciones.

At&oacute;mica Microscopio fuerza-multi-&oacute;ptico de imagen integrado para monitorizaci&oacute;n din&aacute;mica molecular en c&eacute;lulas vivas.

&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x7684;&#x4E00;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D;&#x79F0;&#x4E3A;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x5982;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x56FA;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282;&#x8840;&#x538B;&#x3001; &#x7EC4;&#x7EC7;&#x8840;&#x6D41;&#x91CF;&#x548C;&#x8840;&#x7BA1;&#x91CD;&#x6784;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3002;&#x6574;&#x5408;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x662F;&#x5176;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x6765;&#x8C03;&#x89E3;&#x4F20;&#x529B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x7C98;&#x7740; (FA) &#x70B9;&#x4E2D;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53CA;&#x5176;&#x8FDE;&#x63A5;&#x7684;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8D1F;&#x8D23;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x591A;&#x6837;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28; (ECM) &#x7C98;&#x9644;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x67E5;&#x660E;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x548C;&#x76D1;&#x6D4B;&#x53CA;&#x5176;&#x4E0E;&#x5404;&#x79CD;&#x914D;&#x4F53;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#x76EE;&#x7684;&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8058;&#x8BF7;&#x8868;&#x9762;&#x589E;&#x5F3A;&#x62C9;&#x66FC;&#x5149;&#x8C31; &#xFF08;SERS&#xFF09; &#x6765;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x4F7F;&#x7528;&#x62C9;&#x66FC;&#x6765;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230; nanomolar &#x6D53;&#x5EA6;&#x5236;&#x5EA6;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x548C;&#x533A;&#x5206;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x3001; alphaVbeta3 &#x548C; alpha5beta1&#xFF0C;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x536B;&#x751F;&#x5385;&#xFF09; &#x4E2D;&#x6240;&#x5B58;&#x5728;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x9884;&#x8BA1;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x589E;&#x5F3A;&#x62C9;&#x66FC;&#x5149;&#x8C31;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5C06;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6F84;&#x6E05;&#x751F;&#x7406;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x7684;&#x591A;&#x79CD;&#x73B0;&#x8C61;&#x4E2D;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x914D;&#x4F53;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x673A;&#x7406;&#x3002;

&#x8868;&#x9762;&#x589E;&#x5F3A;&#x62C9;&#x66FC;&#x5149;&#x8C31;&#x7528;&#x4E8E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

Current research has revealed the importance of a class of cell surface proteins called integrins in various vital physiological functions such as blood clotting, regulation of blood pressure, tissue blood flow, and vascular remodeling. The key to integrin functionality is its ability to mediate force transmission by interacting with the extracellular matrix and cytoskeleton. In addition, they play a role in signal transduction via their connection with the proteins in focal adhesion (FA) points. To understand the complex mechanism of cell-cell and cell-extracellular matrix (ECM) adhesion that is responsible for these diverse biochemical interactions, it is necessary to identify the integrins on cells and monitor their interaction with various ligands. To this end, for the first time, we employ surface-enhanced Raman spectroscopy (SERS) to detect integrins. The results show the capability using SERS to detect the integrins to the nanomolar concentration regime and to distinguish between two different kinds of integrins, alphaVbeta3 and alpha5beta1, that are present in vascular smooth muscle cells (VSMCs). It is anticipated that the SERS approach will potentially help elucidate the mechanism of integrin-ligand interactions in a variety of phenomena of physiological importance.

Use of surface-enhanced Raman spectroscopy for the detection of human integrins.

La recherche actuelle a r&eacute;v&eacute;l&eacute; l&#39;importance d&#39;une classe de prot&eacute;ines de surface de cellules appel&eacute;e int&eacute;grines dans diff&eacute;rentes fonctions physiologiques vitales comme la coagulation sanguine, la r&eacute;gulation de la tension art&eacute;rielle, le d&eacute;bit sanguin tissulaire et le remodelage vasculaire. La cl&eacute; de l&#39;int&eacute;grine fonctionnalit&eacute; est sa capacit&eacute; de provoquer la transmission de la force en interagissant avec la matrice extracellulaire et le cytosquelette. En outre, ils jouent un r&ocirc;le dans la transduction du signal via leur connexion avec les prot&eacute;ines en points d&#39;adh&eacute;rence focale (FA). Pour comprendre le m&eacute;canisme complex de cellules et d&#39;adh&eacute;rence cellule-extracellulaire (ECM) qui est responsable de ces interactions biochimiques vari&eacute;es, il est n&eacute;cessaire d&#39;identifier les int&eacute;grines sur les cellules et de surveiller leur interaction avec les diff&eacute;rents ligands. &Agrave; cette fin, pour la premi&egrave;re fois, nous utilisons la spectroscopie de Raman exalt&eacute;e de surface (SERS) pour d&eacute;tecter les int&eacute;grines. Les r&eacute;sultats montrent la capacit&eacute; &agrave; l&#39;aide de SERS pour d&eacute;tecter les int&eacute;grines au r&eacute;gime de concentrations nanomolaires et faire la distinction entre deux types diff&eacute;rents d&#39;int&eacute;grines, alphaVbeta3 et alpha5beta1, qui sont pr&eacute;sents dans les cellules de muscle lisse vasculaire (CMLV). Il est pr&eacute;vu que l&#39;approche &laquo; sers &raquo; potentiellement aidera &agrave; &eacute;lucider le m&eacute;canisme des interactions int&eacute;grine-ligand dans une vari&eacute;t&eacute; de ph&eacute;nom&egrave;nes d&#39;importance physiologique.

Utilisation de la spectroscopie de Raman exalt&eacute;e de surface pour la d&eacute;tection des int&eacute;grines humaines.

Aktuelle Forschung hat die Bedeutung einer Klasse der Zelle Oberfl&auml;che Proteine genannt Integrine in verschiedenen physiologischen Lebensfunktionen wie Blutgerinnung, Regulierung von Blutdruck, Durchblutung des Gewebes und vaskul&auml;re remodeling ergeben. Der Schl&uuml;ssel zur Integrin-Funktionalit&auml;t ist seine F&auml;higkeit, Kraft&uuml;bertragung durch die Interaktion mit der extrazellul&auml;ren Matrix und Zytoskeletts zu vermitteln. Dar&uuml;ber hinaus spielen sie eine Rolle in der Signaltransduktion &uuml;ber ihre Verbindung mit der Proteine in fokale Adh&auml;sion (FA) Punkte. Um den komplexen Mechanismus der Zell-Zell und Zelle-extrazellul&auml;ren Matrix (ECM)-Haftung, die f&uuml;r diese unterschiedlichen biochemischen Interaktionen zu verstehen, ist es notwendig die Integrine auf Zellen zu identifizieren und &uuml;berwachen ihre Wechselwirkung mit verschiedenen Liganden. Zu diesem Zweck setzen wir zum ersten Mal Surface enhanced Raman-Spektroskopie (SERS), Integrine zu erkennen. Die Ergebnisse zeigen die F&auml;higkeit mit SERS, die Integrine des Nanomolar Konzentration Regimes zu erkennen und zu unterscheiden zwei verschiedene Arten von Integrine, alphaVbeta3 und alpha5beta1, die in vaskul&auml;ren glatten Muskelzellen (VSMCs) vorhanden sind. Es wird erwartet, dass der SERS-Ansatz potenziell hilft den Mechanismus der Integrin-Ligand-Interaktionen in einer Vielzahl von Ph&auml;nomenen der physiologischen Bedeutung zu erhellen.

Verwendung von Surface enhanced Raman-Spektroskopie zur Erkennung von menschlichen Integrine.

La ricerca attuale ha rivelato l&#39;importanza di una classe di proteine della superficie cellulare chiamato integrine in varie funzioni fisiologiche vitali come la coagulazione del sangue, regolazione della pressione sanguigna, il flusso di sangue tessuto e rimodellamento vascolare. La chiave per la funzionalit&agrave; dell&#39;integrina &egrave; la sua capacit&agrave; di mediare la forza di trasmissione tramite l&#39;interazione con la matrice extracellulare e citoscheletro. Inoltre, giocano un ruolo nella trasduzione del segnale mediante la loro connessione con le proteine in punti di adesione focale (FA). Per comprendere il complesso meccanismo della cellula-cellula e cellula-extracellulare (ECM) adesione che &egrave; responsabile di queste interazioni biochimiche diverse, &egrave; necessario identificare le integrine sulle cellule e monitorare la loro interazione con ligandi diversi. A tal fine, per la prima volta, ci avvaliamo di superficie-enhanced spettroscopia Raman (SERS) per rilevare le integrine. I risultati mostrano la capacit&agrave; usando SERS per rilevare le integrine per il regime di concentrazione nanomolari e per distinguere tra due diversi tipi di integrine, alphaVbeta3 e alpha5beta1, che sono presenti nelle cellule muscolari lisce vascolari (VSMCs). Si prevede che l&#39;approccio SERS potenzialmente aiuter&agrave; delucidare il meccanismo delle interazioni di integrina-ligand in una variet&agrave; di fenomeni di importanza fisiologica.

Uso della spettroscopia Raman superficie ottimizzata per la rilevazione delle integrine umane.

&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x8840;&#x6DB2;&#x51DD;&#x56FA;, &#x8840;&#x5727;, &#x7D44;&#x7E54;&#x8840;&#x6D41;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8840;&#x7BA1;&#x30EA;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306A;&#x3069;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x751F;&#x7406;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3067;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x8868;&#x9762;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3078;&#x306E;&#x30AD;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x529B;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x7126;&#x70B9;&#x63A5;&#x7740; &#xFF08;FA&#xFF09; &#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x306A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30E9;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x62C5;&#x3046;&#x7D30;&#x80DE;-&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; (ECM) &#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;&#x5404;&#x7A2E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x8868;&#x9762;&#x5897;&#x5F37;&#x30E9;&#x30DE;&#x30F3; &#xFF08;SERS&#xFF09; &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C; SERS &#x30CA;&#x30CE;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x4F53;&#x5236;&#x3078;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x3068;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE; (VSMCs) &#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;alphaVbeta3&#x3001;alpha5beta1&#x3001;&#x9593;&#x306E;&#x533A;&#x5225;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SERS &#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x73FE;&#x8C61;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x6A5F;&#x69CB;&#x89E3;&#x660E;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xD604;&#xC7AC; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD608;&#xC561; &#xC751;&#xACE0;, &#xD608;&#xC555;, &#xC870;&#xC9C1; &#xD608; &#xB958; &#xBC0F; &#xAD00; &#xB9AC; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; &#xB4F1; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; integrins &#xB77C;&#xB294; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xBC1D;&#xD614;&#xB2E4;. Integrin &#xAE30;&#xB2A5; &#xD0A4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8;&#xACFC; cytoskeleton &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC15;&#xC81C;&#xB85C; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xCD08;&#xC810; &#xC811;&#xCC29; (FA) &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD568;&#xAED8; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560;. &#xC140; &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC;-&#xAE30;&#xC9C8; (ECM) &#xC811;&#xCC29;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC140;&#xC5D0; integrins &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; ligands&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC704;&#xD574; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD45C;&#xBA74; &#xAC15;&#xD654; &#xB77C;&#xB9CC; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; (SERS) integrins &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xACE0;&#xC6A9;. &#xACB0;&#xACFC; SERS&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; nanomolar &#xB18D;&#xB3C4; &#xC815;&#xAD8C;&#xC5D0; integrins &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xD608;&#xAD00; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC; (VSMCs)&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; integrins, alphaVbeta3 &#xBC0F; alpha5beta1, &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC885;&#xB958; &#xC0AC;&#xC774; &#xAD6C;&#xBCC4; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. SERS &#xBC29;&#xBC95; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD604;&#xC0C1;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; integrin ligand &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBA85;&#xB8CC; &#xD558; &#xAC8C; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB41C;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; integrins&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD45C;&#xBA74; &#xAC15;&#xD654; &#xB77C;&#xB9CC; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;.

La investigaci&oacute;n actual ha puesto de manifiesto la importancia de una clase de prote&iacute;nas de la superficie celular llamadas integrinas en varias funciones fisiol&oacute;gicas vitales tales como coagulaci&oacute;n, regulaci&oacute;n de la presi&oacute;n arterial, flujo de la sangre del tejido y remodelado vascular. La clave para la funcionalidad de la integrina es su capacidad para mediar la transmisi&oacute;n de fuerza interactuando con la matriz extracelular y citoesqueleto. Adem&aacute;s, juegan un papel en la transducci&oacute;n de la se&ntilde;al mediante su conexi&oacute;n con las prote&iacute;nas en puntos de adhesi&oacute;n focal (FA). Para entender el complejo mecanismo de la c&eacute;lula y la adherencia de la matriz celular-extracelular (MEC) que es responsable de estas diversas interacciones bioqu&iacute;micas, es necesario identificar las integrinas en las c&eacute;lulas y controlar su interacci&oacute;n con diversos ligandos. Para ello, empleamos por primera vez, superficie mejorada de espectroscop&iacute;a Raman (SERS) para detectar las integrinas. Los resultados muestran la capacidad de usar SERS para detectar las integrinas al r&eacute;gimen nanomolar concentraci&oacute;n y distinguir entre dos tipos diferentes de integrinas, Alfavbeta3 y alpha5beta1, que est&aacute;n presentes en las c&eacute;lulas de m&uacute;sculo liso vascular (VSMCs). Se prev&eacute; que el enfoque SERS potencialmente ayudar&aacute; a aclarar el mecanismo de las interacciones de la integrina-ligando en una variedad de fen&oacute;menos de importancia fisiol&oacute;gica.

Uso de espectroscop&iacute;a Raman superficie mejorada para la detecci&oacute;n de las integrinas humanas.

&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x4E86;&#x5F02;&#x786B;&#x6C30;&#x9178;-&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x86CB;&#x767D;&#x6A21;&#x677F;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x6C34;&#x76F8;&#x5206;&#x5B50;&#x5370;&#x8FF9;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x7269; (HydroMIP) &#x6218;&#x7565;&#x3002;&#x9996;&#x6B21;&#x62A5;&#x9053;&#x662F;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x7B7E;&#x6A21;&#x677F;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x968F;&#x540E;&#x7684;&#x667A;&#x80FD;&#x6750;&#x6599;&#x663E;&#x793A; HydroMIP &#x62E5;&#x6709;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x5B58;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;nonimprinted &#x7684;&#x63A7;&#x5236;&#x805A;&#x5408;&#x7269; (HydroNIP) &#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;&#x5F02;&#x786B;&#x6C30;&#x9178;-&#x6210;&#x50CF;&#x5370;&#x8FF9;&#x7684; HydroMIP &#x4F7F;&#x7528;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x63CF;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x539F;&#x4F4D;&#x8131;&#x7684;&#x89D2;&#x5EA6;&#x663E;&#x793A;&#x7684;&#x5370;&#x8FF9;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x767D;&#x86CB;&#x767D;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x4E4B;&#x524D;&#x548C;&#x4E4B;&#x540E; &#xFF08;&#x4F7F;&#x7528; 10%(w/v) SDS/10%&#x918B;&#x9178;&#x6EB6;&#x6DB2;&#xFF09; &#x7684;&#x6A21;&#x677F;&#x6D17;&#x8131;&#x5370;&#x8FF9;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x8367;&#x5149;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E5F;&#x62A5;&#x544A;&#x725B;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D; (&#x725B;&#x8840;&#x7EA2;&#x86CB;&#x767D;) &#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x5370;&#x8FF9; HydroMIP &#x4F7F;&#x7528;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x63CF;&#x8FF0;&#x6A21;&#x677F;&#x6D17;&#x8131;&#x540E;&#x81EA;&#x4F53;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x6C34;&#x76F8;&#x5206;&#x5B50;&#x5370;&#x8FF9;&#x8BAE;&#x5B9A;&#x4E66;&#x548C;&#x6587;&#x6863;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x5728;&#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x6A21;&#x677F;/&#x68C0;&#x6D4B;&#x548C;&#x6210;&#x50CF;&#x6218;&#x7565;&#x7684;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;

&#x91CF;&#x5316;&#x548C;&#x5171;&#x7126;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5206;&#x5B50;&#x5370;&#x8FF9;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x3002;

We have employed FITC--albumin as the protein template molecule in an aqueous phase molecular imprinted polymer (HydroMIP) strategy. For the first time, the use of a fluorescently labeled template is reported, with subsequent characterization of the smart material to show that the HydroMIP possesses a significant molecular memory in comparison to that of the nonimprinted control polymer (HydroNIP). The imaging of the FITC--albumin imprinted HydroMIP using confocal microscopy is described, with the in situ removal of the imprinted protein displayed in terms of observed changes in the fluorescence of the imprinted polymer, both before and after template elution (using a 10% SDS/10% AcOH (w/v) solution). We also report the imaging of a bovine hemoglobin (BHb) imprinted HydroMIP using two-photon confocal microscopy and describe the effects of template elution upon protein autofluorescence. The findings further contribute to the understanding of aqueous phase molecular imprinting protocols and document the use of fluorescence as a useful tool in template labeling/detection and novel imaging strategies.

Quantification and confocal imaging of protein specific molecularly imprinted polymers.

Nous avons utilis&eacute; la FITC--albumine comme la mol&eacute;cule de prot&eacute;ine mod&egrave;le dans une strat&eacute;gie de phase aqueuse molecular imprinted polymer (HydroMIP). Pour la premi&egrave;re fois, l&#39;utilisation d&#39;un mod&egrave;le de fluorescent &eacute;tiquet&eacute; est signal&eacute;e, avec caract&eacute;risation ult&eacute;rieure du mat&eacute;riel intelligent pour montrer que l&#39;HydroMIP poss&egrave;de une m&eacute;moire mol&eacute;culaire significative par rapport &agrave; celle du polym&egrave;re contr&ocirc;le nonimprinted (HydroNIP). L&#39;imagerie de la FITC--albumine HydroMIP imprim&eacute; &agrave; l&#39;aide de la microscopie confocale est d&eacute;crite, avec la suppression in situe de la prot&eacute;ine imprim&eacute;e affich&eacute;e en termes de changements observ&eacute;s dans la fluorescence du polym&egrave;re imprim&eacute;, tant avant qu&#39;apr&egrave;s l&#39;&eacute;lution de gabarit (&agrave; l&#39;aide d&#39;une solution SDS/10% AcOH (p/v) de 10 %). Nous avons &eacute;galement rapport imprim&eacute; de l&#39;imagerie d&#39;une h&eacute;moglobine bovine (BHb) HydroMIP &agrave; l&#39;aide de la microscopie confocale biphotonique et d&eacute;crire les effets d&#39;&eacute;lution de mod&egrave;le &agrave; la prot&eacute;ine autofluorescence. Les r&eacute;sultats contribuent &agrave; la compr&eacute;hension des protocoles empreinte mol&eacute;culaire phase aqueuse et de document, l&#39;utilisation de la fluorescence est un outil utile dans le mod&egrave;le d&#39;&eacute;tiquetage/d&eacute;tection et roman strat&eacute;gies d&#39;imagerie.

Quantification et imagerie confocale des prot&eacute;ines sp&eacute;cifiques mol&eacute;culairement imprim&eacute; des polym&egrave;res.

Wir haben FITC--Albumin als das Protein-Vorlage-Molek&uuml;l in einer w&auml;ssrigen Phase-Molekulare eingepr&auml;gten Polymer (HydroMIP)-Strategie eingesetzt. Zum ersten Mal wird die Verwendung einer Leuchtstoff beschriftetem Vorlage berichtet, mit nachfolgenden Charakterisierung des smart Materials zu zeigen, dass die HydroMIP einen deutlichen molekularen Speicher im Vergleich zu den nonimprinted Steuerelement-Polymer (HydroNIP) besitzt. Die Bildgebung der IRB--beobachtet Albumin aufgedruckten HydroMIP mit confocal Mikroskopie beschrieben, mit der in-situ Beseitigung des eingepr&auml;gten Proteins angezeigt an wird &Auml;nderungen in die Fluoreszenz des eingepr&auml;gten Polymers, sowohl vor als auch nach Vorlage Elution (mit eine 10 % SDS/10% AcOH (w/V) L&ouml;sung). Wir berichten, dass die Bildgebung eine bovine H&auml;moglobin (BHb) HydroMIP mit zwei-Photonen confocal Mikroskopie eingepr&auml;gt und beschreiben die Auswirkungen der Vorlage Elution nach Protein Autofluoreszenz. Die Ergebnisse weiter dazu beitragen, das Verst&auml;ndnis der w&auml;ssrigen Phase molecular Imprinting-Protokolle und Dokument die Verwendung von Fluoreszenz als n&uuml;tzliches Instrument in Vorlage-Kennzeichnung/Erkennung und Roman imaging Strategien.

Quantifizierung und konfokale imaging spezifische Proteine molekular imprinted Polymere.

Noi abbiamo impiegato FITC - albumina come la molecola proteica modello nella strategia di polimero impronta molecolare (HydroMIP) fase acquosa. Per la prima volta, viene segnalato l&#39;uso di un modello di etichettato fluorescente, con conseguente caratterizzazione del materiale intelligente per mostrare che il HydroMIP possiede una significativa memoria molecolare rispetto a quella del polimero controllo nonimprinted (HydroNIP). L&#39;imaging di FITC - albumina HydroMIP impresso utilizzando la microscopia confocale &egrave; descritto, con la rimozione in situ della proteina impressa visualizzata in termini di osservati cambiamenti in fluorescenza del polimero stampato, sia prima che dopo eluizione modello (usando una soluzione al 10% AcOH SDS/10% (w/v)). Abbiamo anche segnalare che l&#39;imaging di un emoglobina bovina (BHb) impresse HydroMIP mediante microscopia confocale del due-fotone e descrivere gli effetti di eluizione modello su proteina autofluorescenza. Risultati ulteriormente contribuiscono alla comprensione della fase acquosa imprinting molecolare protocolli e documenti l&#39;uso della fluorescenza come uno strumento utile nel modello rilevazione etichettatura e romanzo strategie di imaging.

Quantificazione e imaging confocal di proteine specifiche molecolarmente impresse polimeri.

&#x6211;&#x3005; FITC--&#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x5206;&#x5B50;&#x306F;&#x6C34;&#x76F8;&#x5206;&#x5B50;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50; (HydroMIP) &#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x306B;&#x5206;&#x985E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;HydroMIP nonimprinted &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC; &#xFF08;HydroNIP&#xFF09; &#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x30B9;&#x30DE;&#x30FC;&#x30C8;&#x6750;&#x6599;&#x306E;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30EA;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;FITC--&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A2;&#x30EB;&#x30D6;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x523B;&#x5370; HydroMIP &#x306F;&#x306E;&#x9762;&#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E; in situ &#x9664;&#x53BB;&#x3068;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x3001;&#x3068;&#x5F8C; &#xFF08;10 &#xFF05; SDS/10% &#x9162;&#x9178; (w/v) &#x30BD;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#xFF09; &#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x6EB6;&#x51FA;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082;&#x725B;&#x30D8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30ED;&#x30D3;&#x30F3; (BHb) &#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; 2 &#x5149;&#x5B50;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; HydroMIP &#x523B;&#x5370;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x86CD;&#x5149;&#x8981;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x6EB6;&#x51FA;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x6240;&#x898B;&#x306F;&#x6C34;&#x76F8;&#x5206;&#x5B50;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3068;&#x30C9;&#x30AD;&#x30E5;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x86CD;&#x5149;&#x30C6;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8; &#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;/&#x691C;&#x51FA;&#x3068;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6226;&#x7565;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3068;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x7279;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; &#x30A4;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30C8;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; FITC-&#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xBD84;&#xC790; &#xC218;&#xC131; &#xC704;&#xC0C1; &#xBD84;&#xC790; &#xAC01; &#xC778;&#xB41C; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; (HydroMIP) &#xC804;&#xB7B5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC73C;&#xB85C; &#xACE0;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD99;&#xC77C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xB41C; &#xC11C;&#xC2DD; &#xD30C;&#xC77C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; Hydromip&#xC744; nonimprinted &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; (HydroNIP)&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC2A4;&#xB9C8;&#xD2B8; &#xC7AC;&#xB8CC;&#xC758; &#xD6C4;&#xC18D; &#xBB18;&#xC0AC;&#xC640; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. FITC-&#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC54C; &#xBD80; &#xBBFC; &#xCC0D;&#xD78C;&#xB41C; HydroMIP confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC0D;&#xD78C;&#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xCE21;&#xBA74; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC81C;&#xAC70;&#xC640; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xCC28;&#xC785; (10% SDS/10% AcOH (w/v) &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;) &#xC804;&#xD6C4;&#xC5D0; &#xB458; &#xB2E4; &#xAC01; &#xC778;&#xB41C; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xBCC0;&#xD654; &#xAD00;&#xCC30;. &#xB610;&#xD55C; &#xC18C; &#xD5E4;&#xBAA8;&#xAE00;&#xB85C;&#xBE48; (BHb) &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAC01; &#xC778; HydroMIP 2 &#xAD11;&#xC790; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; autofluorescence &#xB530;&#xB77C; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xCC28;&#xC785;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC124;&#xBA85;. &#xACB0;&#xACFC; &#xCD94;&#xAC00; &#xC218;&#xC131; &#xC704;&#xC0C1; &#xBD84;&#xC790; &#xAC01; &#xC778; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xBC0F; &#xBB38;&#xC11C; &#xD15C;&#xD50C;&#xB9BF; &#xB77C;&#xBCA8;/&#xAC80;&#xC0C9; &#xBC0F; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC804;&#xB7B5; &#xC18C;&#xC124;&#xC5D0; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xD615;&#xAD11;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC;&#xD560;.

&#xC815;&#xB7C9;&#xD654; &#xBC0F; confocal &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBD84;&#xC790;&#xB85C; &#xAC01; &#xC778; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790;.

Hemos empleado FITC - alb&uacute;mina como la mol&eacute;cula de la plantilla de prote&iacute;na en una estrategia de pol&iacute;mero impreso molecular (HydroMIP) de la fase acuosa. Por primera vez, se divulga el uso de una plantilla de fluorescencia etiquetado, con posterior caracterizaci&oacute;n de los materiales inteligentes para mostrar que el HydroMIP posee una memoria molecular significativa en comparaci&oacute;n con el pol&iacute;mero de control nonimprinted (HydroNIP). La proyecci&oacute;n de imagen de la FITC - alb&uacute;mina HydroMIP impreso usando microscopia confocal se describe, con la eliminaci&oacute;n in situ de la prote&iacute;na impresa aparece en t&eacute;rminos de cambios observados en la fluorescencia del pol&iacute;mero impreso, tanto antes como despu&eacute;s de eluci&oacute;n de la plantilla (usando una soluci&oacute;n SDS/10% AcOH (w/v) de 10%). Tambi&eacute;n Divulgamos que la proyecci&oacute;n de imagen de una hemoglobina bovina (BHb) impreso HydroMIP usando microscopia confocal de dos fotones y describir los efectos de la eluci&oacute;n de la plantilla sobre la prote&iacute;na autofluorescencia. Los resultados m&aacute;s contribuyen a la comprensi&oacute;n de los protocolos de impresi&oacute;n molecular de fase acuosa y documentar el uso de la fluorescencia como una herramienta &uacute;til en la plantilla de etiquetado/detecci&oacute;n y estrategias de la proyecci&oacute;n de imagen de la novela.

Cuantificaci&oacute;n e imagen confocal de la prote&iacute;na espec&iacute;fica molecularmente imprimen pol&iacute;meros.

&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04; &#xFF08;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;) &#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x5174;&#x594B;&#x548C;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x8367;&#x5149;&#x672C;&#x819C;&#x9644;&#x8FD1;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x79CD;&#x690D;&#x7684;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x7684;&#x6D3B;&#x6216;&#x56FA;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x65F6;&#x53D1;&#x751F;&#x5149;&#x4ECE;&#x9AD8;&#x5C48;&#x5149;&#x4ECB;&#x8D28; &#xFF08;&#x5982;&#x73BB;&#x7483;&#xFF09; &#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x4F4E;&#x5C48;&#x5149;&#x4ECB;&#x8D28;&#x4E0A; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3001; &#x6C34;&#xFF09; &#x7684;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x73B0;&#x8C61;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x603B;&#x7684;&#x6D88;&#x901D;&#x573A;&#x53CD;&#x6620;&#x5149;&#x5174;&#x594B;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x8D28;&#x63A5;&#x53E3;&#x548C;&#x4F34;&#x968F;&#x7740;&#x4F59;&#x4E0B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x79EF;&#x6700;&#x5C0F;&#x7684;&#x66B4;&#x9732;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x9AD8;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x5EA6;&#x8367;&#x5149;&#x56FE;&#x50CF;&#xFF0C;&#x5177;&#x6709;&#x5F88;&#x4F4E;&#x7684;&#x80CC;&#x666F;&#x548C;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6CA1;&#x6709;&#x7684;&#x7126;&#x5916;&#x5149;&#x3001; &#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x8868;&#x9762;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x5149;&#x8C31;&#x7684;&#x7406;&#x60F3;&#x9009;&#x62E9;&#x3002;&#x8FD9;&#x80A1;&#x5448;&#x73B0;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x7B80;&#x660E;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3001; &#x6587;&#x4E66;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x539F;&#x5219;&#x3002;

&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04; &#xFF08;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;) &#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;

Total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy represents a method of exciting and visualizing fluorophores present in the near-membrane region of live or fixed cells grown on coverslips. TIRF microscopy is based on the total internal reflection phenomenon that occurs when light passes from a high-refractive medium (e.g., glass) into a low-refractive medium (e.g., cell, water). The evanescent field produced by total internally reflected light excites the fluorescent molecules at the cell-substrate interface and is accompanied by minimal exposure of the remaining cell volume. This technique provides high-contrast fluorescence images, with very low background and virtually no out-of-focus light, ideal for visualization and spectroscopy of single-molecule fluorescence near a surface. This unit presents, in a concise manner, the principle of operation, instrument diversity, and TIRF microscopy applications for the study of biological samples.

Total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy.

La microscopie de fluorescence (FRBR) r&eacute;flexion totale interne repr&eacute;sente une m&eacute;thode d&#39;excitant et la visualisation des fluorophores pr&eacute;sents dans la r&eacute;gion pr&egrave;s de la membrane des cellules vivantes ou fixes cultiv&eacute;es sur des lamelles couvre-objet. Microscope TIRF repose sur le ph&eacute;nom&egrave;ne de r&eacute;flexion totale interne qui se produit lorsque la lumi&egrave;re passe d&#39;un milieu de r&eacute;fraction &eacute;lev&eacute; (p. ex., verre) dans un milieu de r&eacute;fraction faible (p. ex., cellule, eau). Le champ &eacute;vanescent produit par total en interne refl&egrave;te la lumi&egrave;re excite les mol&eacute;cules fluorescentes &agrave; l&#39;interface de la cellule-substrat et est accompagn&eacute;e d&#39;une exposition minimale du volume cellulaire restants. Cette technique fournit des images de fluorescence contrast&eacute;, avec tr&egrave;s faible bruit de fond et pratiquement aucun out-of-focus lumi&egrave;re, id&eacute;al pour la visualisation et la spectroscopie de fluorescence de la mol&eacute;cule unique pr&egrave;s d&#39;une surface. Cet appareil pr&eacute;sente, de mani&egrave;re concise, le principe de fonctionnement, la diversit&eacute; de l&#39;instrument et les applications de microscopie FRBR pour l&#39;&eacute;tude d&#39;&eacute;chantillons biologiques.

Microscopie &agrave; fluorescence (FRBR) r&eacute;flexion interne totale.

Totalreflexion Fluoreszenzmikroskopie (TIRF) stellt eine Methode spannende und Visualisierung Fluorophore in der Region nahe-Membran live oder festen Zellen auf Deckgl&auml;sern angebaut. TIRF-Mikroskopie basiert auf der Totalreflexion-Ph&auml;nomen, das auftritt, wenn Licht von einem hohen refraktiven Medium (z.B. Glas) dringt in ein niedrig-Refraktive Medium (z. B. Zelle, Wasser). Feld fl&uuml;chtig produziert von insgesamt intern reflektiert Licht reizt die fluoreszierende Molek&uuml;le an der Zelle-Substrat-Schnittstelle und wird begleitet von minimaler Exposition des verbleibenden Zelle Volumens. Dieses Verfahren bietet kontrastreiche Fluoreszenzbilder, mit sehr niedrigen Hintergrund und praktisch keine Out-of-Focus Licht, Ideal f&uuml;r Visualisierung und Spektroskopie der Einzelmolek&uuml;l-Fluoreszenz in der N&auml;he einer Oberfl&auml;che. Diese Einheit stellt auf pr&auml;gnante Weise das Prinzip der Gesch&auml;ftsbetrieb Instrument Vielfalt und TIRF-Mikroskopie-Anwendungen f&uuml;r die Untersuchung von biologischen Proben.

Totalreflexion, Fluoreszenzmikroskopie (TIRF).

Microscopia di fluorescenza (TIRF) riflessione interna totale rappresenta un metodo di eccitante e la visualizzazione di fluorofori presenti nella regione vicino a membrana diretta o fisse cellule coltivate su vetrini coprioggetti. Microscopia TIRF &egrave; basata sul fenomeno della riflessione interna totale che si verifica quando la luce passa da un mezzo rifrangente-alto (per esempio, vetro) in un mezzo rifrangente-basso (ad es., cella, acqua). Il campo evanescente prodotto internamente da totale riflette luce eccita le molecole fluorescenti all&#39;interfaccia cellula-substrato ed &egrave; accompagnata da esposizione minima del volume delle cellule rimanenti. Questa tecnica offre immagini ad alto contrasto fluorescenza, con sfondo molto bassa e praticamente non out-of-focus light, ideale per la visualizzazione e la spettroscopia di fluorescenza di singola molecola vicino a una superficie. Questa unit&agrave; presenta, in modo conciso, il principio di funzionamento, diversit&agrave; dello strumento e le applicazioni di microscopia TIRF per lo studio dei campioni biologici.

Microscopia di fluorescenza (TIRF) riflessione interna totale.

&#x5168;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149; &#xFF08;TIRF) &#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x30A8;&#x30AD;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x3001;fluorophores coverslips &#x306B;&#x80B2;&#x3063;&#x305F;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x56FA;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x819C;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x578B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;&#x9AD8;&#x5C48;&#x6298;&#x7387;&#x306E;&#x5A92;&#x4F53; &#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#xFF09; &#x304B;&#x3089;&#x5149;&#x3092;&#x901A;&#x904E;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x4F4E;&#x5C48;&#x6298;&#x7387;&#x306E;&#x5A92;&#x8CEA; &#xFF08;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x3001;&#x6C34;&#xFF09; &#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x5185;&#x90E8;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x73FE;&#x8C61;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5408;&#x8A08;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5185;&#x90E8;&#x7684;&#x306B;&#x751F;&#x6210;&#x3001;&#x8FD1;&#x63A5;&#x5834;&#x5149;&#x86CD;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x30BB;&#x30EB;&#x57FA;&#x677F;&#x754C;&#x9762;&#x3092;&#x8208;&#x596E;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB; &#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x9732;&#x51FA;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x53CD;&#x6620;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x80CC;&#x666F;&#x3068;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x4E0A;&#x306A;&#x3044;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AB;&#x30B9; &#x30E9;&#x30A4;&#x30C8;&#x3001;&#x7406;&#x60F3;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x8868;&#x9762;&#x8FD1;&#x508D;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x86CD;&#x5149;&#x5206;&#x5149;&#x306E;&#x9AD8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x86CD;&#x5149;&#x753B;&#x50CF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3001;&#x697D;&#x5668;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x3068;&#x751F;&#x7269;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x7528;&#x9014;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x539F;&#x5247;&#x306F;&#x3001;&#x7C21;&#x6F54;&#x306B;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5168;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149; &#xFF08;TIRF) &#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3002;

&#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; (TIRF) &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xD765;&#xBBF8;&#xC9C4;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xD558;&#xB294; fluorophores coverslips&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xBC30; &#xD558;&#xB294; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xB610;&#xB294; &#xACE0;&#xC815; &#xC140; &#xB9C9; &#xADFC;&#xCC98; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. TIRF &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xB0AE;&#xC740; &#xAD74;&#xC808; &#xB9E4;&#xCCB4; (&#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xC140;, &#xBB3C;)&#xB85C; &#xBE5B;&#xC774; &#xAD74;&#xC808; &#xB9E4;&#xCCB4; (&#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, &#xC720;&#xB9AC;)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xB2EC; &#xB420; &#xB54C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD604;&#xC0C1;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xC791;&#xD55C; &#xC0AC;&#xB77C;&#xC838;&#xAC00; &#xD544;&#xB4DC; &#xBC18;&#xC601; &#xBE5B; &#xD734;&#xB300;&#xD3F0; &#xAE30;&#xD310; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC790;&#xADF9; &#xD558; &#xACE0; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xC140; &#xBCFC;&#xB968;&#xC758; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xB178;&#xCD9C;&#xC744; &#xB3D9;&#xBC18;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; &#xBC30;&#xACBD; &#xD558; &#xACE0; &#xC0AC;&#xC2E4;&#xC0C1; &#xB354; &#xC544;&#xC6C3; &#xD3EC;&#xCEE4;&#xC2A4; &#xB77C;&#xC774;&#xD2B8;, &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; &#xD615;&#xAD11; &#xD45C;&#xBA74; &#xADFC;&#xCC98;&#xC758; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;&#xC5D0; &#xC774;&#xC0C1;&#xC801; &#xB192;&#xC740;-&#xBC18;&#xBA74; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC704; &#xC791;&#xC5C5;, &#xC545;&#xAE30; &#xC131;&#xACFC; TIRF &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC751;&#xC6A9; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xC6D0;&#xCE59; &#xAC04;&#xACB0;&#xD55C; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xBB3C; &#xD55C;&#xB2E4;.

&#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; (TIRF) &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Microscop&iacute;a de fluorescencia (TIRF) de reflexi&oacute;n interna total representa un m&eacute;todo de emocionante y visualizar fluor&oacute;foros presentes en la regi&oacute;n cerca de la membrana de vivos o fijas las c&eacute;lulas cultivadas en cubreobjetos. Microscop&iacute;a TIRF se basa en el fen&oacute;meno de reflexi&oacute;n interna total que se produce cuando la luz pasa de un medio de alto refracci&oacute;n (por ejemplo, vidrio) en un medio bajo-refractivo (p. ej., celular, agua). El campo evanescente producido por total internamente refleja luz excita las mol&eacute;culas fluorescentes en la interfase c&eacute;lula-sustrato y es acompa&ntilde;ada por la exposici&oacute;n m&iacute;nima del volumen celular restantes. Esta t&eacute;cnica proporciona im&aacute;genes de fluorescencia de alto contraste, con el fondo muy bajo y pr&aacute;cticamente no fuera de foco luz, ideal para la visualizaci&oacute;n y la espectroscopia de fluorescencia de una sola mol&eacute;cula cerca de una superficie. Esta unidad presenta, de manera concisa, el principio de funcionamiento, la diversidad de instrumentos y aplicaciones de microscop&iacute;a TIRF para el estudio de muestras biol&oacute;gicas.

Microscop&iacute;a de fluorescencia (TIRF) de reflexi&oacute;n interna total.

&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; &#xFF08;AFM&#xFF09; &#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x7814;&#x7A76;&#x751F;&#x7269;&#x6837;&#x54C1;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x56FE;&#x50CF;&#x8868;&#x9762;&#x4E0B;&#x6DB2;&#x4F53;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x60AC;&#x81C2;&#x63D0;&#x793A;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x7269;&#x7406;&#x4EA4;&#x4E92;&#x8FD0;&#x4F5C;&#x3002;&#x63D0;&#x793A;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x5206;&#x5B50;&#x95F4;&#x7684;&#x7C98;&#x9644;&#x90E8;&#x961F;&#x88AB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E3A;&#x60AC;&#x81C2;&#x6881;&#x6320;&#x5EA6;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7528;&#x60AC;&#x81C2;&#x63D0;&#x793A;&#xFF0C;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5177;&#x6709;&#x539F;&#x5B50;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63A2;&#x8BA8;&#x5728;&#x751F;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x76EE;&#x524D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x662F;&#x76F4;&#x63A5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3001; &#x673A;&#x68B0;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x8FD9;&#x80A1;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3001; &#x64CD;&#x4F5C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3001; &#x6837;&#x54C1;&#x5236;&#x5907;&#x548C;&#x77ED;&#x5BA1;&#x67E5;&#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x6709;&#x7528;&#x63D0;&#x793A;&#x3002;

&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; &#xFF08;AFM&#xFF09;&#x3002;

The atomic force microscope (AFM) is an important tool for studying biological samples due to its ability to image surfaces under liquids. The AFM operates by physical interaction of a cantilever tip with the molecules on the cell surface. Adhesion forces between the tip and cell surface molecules are detected as cantilever deflections. Thus, the cantilever tip can be used to image live cells with atomic resolution and to probe single molecular events in living cells under physiological conditions. Currently, this is the only technique available that directly provides structural, mechanical, and functional information at high resolution. This unit presents the basic AFM components, modes of operation, useful tips for sample preparation, and a short review of AFM applications in microbiology.

Atomic force microscopy (AFM).

Le microscope &agrave; force atomique (AFM) est un outil important pour l&#39;&eacute;tude des &eacute;chantillons biologiques en raison de sa capacit&eacute; &agrave; surfaces d&#39;image sous liquides. L&#39;AFM fonctionne en interaction physique d&#39;une pointe en porte-&agrave;-faux avec les mol&eacute;cules sur la surface de la cellule. Forces d&#39;adh&eacute;rence entre les mol&eacute;cules de surfaces pointe et cellulaire sont d&eacute;tect&eacute;s comme d&eacute;viations en porte-&agrave;-faux. Ainsi, la pointe en porte-&agrave;-faux peut &ecirc;tre utilis&eacute;e pour l&#39;image des cellules vivantes pr&eacute;sentant la r&eacute;solution atomique et sonder des &eacute;v&eacute;nements mol&eacute;culaires uniques dans les cellules vivantes dans des conditions physiologiques. Actuellement, c&#39;est la seule technique disponible qui assure directement l&#39;information structurale, m&eacute;canique et fonctionnelle &agrave; haute r&eacute;solution. Cet appareil pr&eacute;sente les composants de base AFM, les modes de fonctionnement, les conseils utiles pour la pr&eacute;paration de l&#39;&eacute;chantillon et un bref examen des demandes de l&#39;AFM en microbiologie.

Microscopie &agrave; force atomique (AFM).

Das Rasterkraftmikroskop (AFM) ist ein wichtiges Instrument f&uuml;r die Untersuchung von biologischer Proben wegen seiner F&auml;higkeit, Bildoberfl&auml;chen unter Fl&uuml;ssigkeiten. Die AFM funktioniert durch physische Interaktion ein Freischwinger-Tipp mit der Molek&uuml;le auf der Zelloberfl&auml;che. Adh&auml;sion Kr&auml;fte zwischen der Spitze und Zelle Oberfl&auml;che Molek&uuml;le werden als freitragende Durchbiegungen erkannt. So kann der Freischwinger-Tipp zum lebenden Zellen mit atomarer Aufl&ouml;sung Bild und Untersuchung der einzelnen molekularen Ereignisse in lebenden Zellen unter physiologischen Bedingungen verwendet werden. Derzeit ist dies die einzige Technik zur Verf&uuml;gung, die strukturelle, mechanische und funktionelle Informationen mit hoher Aufl&ouml;sung direkt bereitstellt. Diese Einheit stellt die AFM-Basiskomponenten, Betriebsarten, n&uuml;tzliche Tipps f&uuml;r die Probenvorbereitung und ein kurzer &Uuml;berblick &uuml;ber AFM-Anwendungen in Mikrobiologie.

Rasterkraftmikroskopie (AFM).

Il microscopio a forza atomica (AFM) &egrave; un importante strumento per lo studio di campioni biologici a causa della sua capacit&agrave; di superfici immagine sotto liquidi. L&#39;AFM opera di interazione fisica di una punta a sbalzo con le molecole sulla superficie delle cellule. Le forze di adesione tra le molecole di superficie delle cellule e punta vengono rilevate come deviazioni a sbalzo. Cos&igrave;, la punta a sbalzo pu&ograve; essere utilizzata per immagine cellule vive con risoluzione atomica e sonda singoli eventi molecolari in cellule viventi in condizioni fisiologiche. Attualmente, questa &egrave; l&#39;unica tecnica disponibile che fornisce direttamente informazioni strutturali, meccaniche e funzionali ad alta risoluzione. Questa unit&agrave; presenta i componenti base di AFM, modalit&agrave; di funzionamento, consigli utili per la preparazione del campione e una breve rassegna delle applicazioni AFM in microbiologia.

Microscopia a forza atomica (AFM).

&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (AFM) &#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x8868;&#x9762;&#x4E0B;&#x306E;&#x6DB2;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x751F;&#x4F53;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;&#x52C9;&#x5F37;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;AFM &#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30D0;&#x30FC; &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x5206;&#x5B50;&#x3067;&#x52D5;&#x4F5C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x5206;&#x5B50;&#x9593;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x529B;&#x306F;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30D0;&#x30FC;&#x305F;&#x308F;&#x307F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30AB;&#x30F3;&#x30C1;&#x30EC;&#x30D0;&#x30FC; &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x539F;&#x5B50;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306E;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x76F4;&#x63A5;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3001;&#x53CA;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8; AFM &#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x52D5;&#x4F5C;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3001;&#x5F79;&#x306B;&#x7ACB;&#x3064;&#x30D2;&#x30F3;&#x30C8;&#x8A66;&#x6599;&#x8ABF;&#x88FD;&#x53CA;&#x3073; AFM &#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x30C8; &#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3067;&#x30D7;&#x30EC;&#x30BC;&#x30F3;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; &#xFF08;AFM&#xFF09;&#x3002;

&#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (AFM) &#xC561;&#xCCB4; &#xC544;&#xB798; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC0D8;&#xD50C; &#xACF5;&#xBD80;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. AFM&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC790;&#xC640; &#xCE94;&#xD2F8;&#xB808;&#xBC84; &#xB05D;&#xC758; &#xBB3C;&#xB9AC;&#xC801; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB3D9;&#xC791; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xD301; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xBA74; &#xBD84;&#xC790; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC811;&#xCC29; &#xBD80;&#xB294; &#xCE94;&#xD2F8;&#xB808;&#xBC84; &#xBC14;&#xB85C;&#xC7A1;&#xB294;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC678;&#xD314;&#xBCF4; &#xD301; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558; &#xACE0; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140; &#xC6D0;&#xC790; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;, &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC9C1;&#xC811; &#xB192;&#xC740; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;, &#xAE30;&#xACC4; &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; &#xAE30;&#xC220;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB2E8;&#xC704; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; AFM &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;, &#xB3D9;&#xC791; &#xBAA8;&#xB4DC;, &#xC0D8;&#xD50C; &#xC900;&#xBE44; &#xBC0F; AFM &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xAC80;&#xD1A0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xD301;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (AFM)&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El microscopio de fuerza at&oacute;mica (AFM) es una herramienta importante para el estudio de muestras biol&oacute;gicas debido a su capacidad para superficies de imagen con l&iacute;quidos. La AFM funciona por interacci&oacute;n f&iacute;sica de una punta de voladizo con las mol&eacute;culas en la superficie celular. Las fuerzas de adhesi&oacute;n entre las punta y c&eacute;lula mol&eacute;culas superficiales son detectadas como desviaciones de voladizo. As&iacute;, la punta de voladizo puede utilizarse para obtener im&aacute;genes de c&eacute;lulas vivas con resoluci&oacute;n at&oacute;mica y sondear solos eventos moleculares en las c&eacute;lulas vivas bajo condiciones fisiol&oacute;gicas. Actualmente, se trata de la &uacute;nica t&eacute;cnica disponible que proporciona directamente informaci&oacute;n estructural, mec&aacute;nica y funcional en alta resoluci&oacute;n. Esta unidad presenta los componentes b&aacute;sicos de la AFM, modos de operaci&oacute;n, consejos &uacute;tiles para la preparaci&oacute;n de la muestra y una breve rese&ntilde;a de las aplicaciones de la AFM en microbiolog&iacute;a.

Microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica (AFM).

&#x673A;&#x68B0;&#x529B;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x548C;&#x8BB8;&#x591A;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x5305;&#x62EC;&#x6536;&#x7F29;&#x3001; &#x589E;&#x6B96;&#x3001; &#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x7C98;&#x9644;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x4ECE;&#x90E8;&#x961F;&#x901A;&#x8FC7;&#x7126;&#x7C98;&#x8FDE;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4EE5;&#x5916;&#x7684;&#x4F20;&#x8F93;&#x63A7;&#x5236;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7C98;&#x8FDE;&#x7F51;&#x7AD9;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#xFF0C;&#x5E76;&#x542F;&#x52A8;&#x6539;&#x53D8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x6805;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x5176;&#x4E2D;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x89C9;&#x673A;&#x68B0;&#x90E8;&#x961F;&#xFF0C;&#x548C;&#x5982;&#x4F55;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5E94;&#x4ED8;&#x548C;&#x9002;&#x5E94;&#x5176;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x662F;&#x53D1;&#x5C55;&#x65B0;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x8C03;&#x67E5;&#x5728;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149; &#xFF08;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;&#xFF09; &#x548C;&#x9AD8;&#x901F;&#x65CB;&#x8F6C;&#x78C1;&#x76D8; (&#x6D88;&#x9632;) &#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x9AD8;&#x65F6;&#x7A7A;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; &#xFF08;AFM&#xFF09; &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EB3;&#x7C73;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x5F62;&#x8C8C;&#x548C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5E94;&#x7528;&#x548C;&#x6D4B;&#x91CF;&#x9AD8;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x7684;&#x673A;&#x68B0;&#x529B;&#x3002;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x662F;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x5B83;&#x4E3A;&#x9AD8;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x5EA6;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x63D0;&#x4F9B;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x5206;&#x5B50;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C; coverslip &#x63A5;&#x53E3;&#x7D27;&#x90BB; z &#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x9AD8;&#x3002;&#x6D88;&#x9632;&#x5904;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5728;&#x5B9E;&#x65F6;&#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5141;&#x8BB8;&#x5FEB;&#x901F;&#x4E09;&#x7EF4;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;&#x7EFC;&#x5408;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x662F;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x9002;&#x7528;&#x5728;&#x4EFB;&#x4F55;&#x8D34;&#x58C1;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5206;&#x5B50;&#x52A8;&#x6001;&#x7814;&#x7A76;&#x5141;&#x8BB8;&#x76F4;&#x63A5;&#x5149;&#x5B66;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x673A;&#x68B0;&#x523A;&#x6FC0;&#x53CD;&#x5E94;&#x5B9E;&#x65F6;&#x7684;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x3002;

&#x7EFC;&#x5408;&#x529B;&#x5316;&#x5B66;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7814;&#x7A76;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5B9E;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;

Mechanical force is an important stimulus and determinant of many vascular smooth muscle cell functions including contraction, proliferation, migration, and cell attachment. Transmission of force from outside the cell through focal adhesions controls the dynamics of these adhesion sites and initiates intracellular signaling cascades that alter cellular behavior. To understand the mechanism by which living cells sense mechanical forces, and how they respond and adapt to their environment, a critical first step is to develop a new technology to investigate cellular behavior at subcellular level that integrates an atomic force microscope (AFM) with total internal reflection fluorescence (TIRF) and fast-spinning disk (FSD) confocal microscopy, providing high spatial and temporal resolution. AFM uses a nanosensor to measure the cell surface topography and can apply and measure mechanical force with high precision. TIRF microscopy is an optical imaging technique that provides high-contrast images with high z-resolution of fluorescently labeled molecules in the immediate vicinity of the cell-coverslip interface. FSD confocal microscopy allows rapid 3-D imaging throughout the cell in real time. The integrated system is broadly applicable across a wide range of molecular dynamic studies in any adherent live cells, allowing direct optical imaging of cell responses to mechanical stimulation in real time.

Integrated microscopy for real-time imaging of mechanotransduction studies in live cells.

La force m&#xE9;canique est un stimulant important et d&#xE9;terminant de nombreux lisses vasculaires fonctions des cellules musculaires dont la contraction, la prolif&#xE9;ration, la migration et la fixation des cellules. Transmission de la force de l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur de la cellule par des adh&#xE9;rences focales contr&#xF4;le de la dynamique de ces sites d&#x26;#39;adh&#xE9;sion et initie cascades de signalisation intracellulaire qui modifient le comportement cellulaire. Pour comprendre le m&#xE9;canisme par lequel les cellules vivantes sens des forces m&#xE9;caniques, et comment ils r&#xE9;agissent et s&#x26;#39;adaptent &#xE0; leur environnement, une premi&#xE8;re &#xE9;tape essentielle est de d&#xE9;velopper une nouvelle technologie pour &#xE9;tudier le comportement cellulaire au niveau subcellulaire, qui int&#xE8;gre un microscope &#xE0; force atomique (AFM) avec un total fluorescence &#xE0; r&#xE9;flexion interne (FRBR) et rotations rapides du disque (DSE) microscopie confocale, offrant une haute r&#xE9;solution spatiale et temporelle. AFM utilise une nanocapteur pour mesurer la topographie de la surface cellulaire et peuvent appliquer et de mesurer la force m&#xE9;canique de haute pr&#xE9;cision. Microscopie TIRF est une technique d&#x26;#39;imagerie optique qui fournit des images &#xE0; contraste &#xE9;lev&#xE9; &#xE0; haute r&#xE9;solution du z mol&#xE9;cules marqu&#xE9;es par fluorescence dans le voisinage imm&#xE9;diat de l&#x26;#39;interface cellulaire lamelle. DSE microscopie confocale permet rapide imagerie 3-D dans la cellule en temps r&#xE9;el. Le syst&#xE8;me int&#xE9;gr&#xE9; est largement applicable dans un large &#xE9;ventail de la biologie mol&#xE9;culaire des &#xE9;tudes dynamiques dans toutes les cellules vivantes adh&#xE9;rentes, ce qui permet l&#x26;#39;imagerie optique directe de la r&#xE9;ponse cellulaire &#xE0; une stimulation m&#xE9;canique en temps r&#xE9;el.

Microscopie int&#xE9;gr&#xE9; pour imagerie en temps r&#xE9;el des &#xE9;tudes m&#xE9;canotransduction dans les cellules vivantes

Mechanische Kraft ist ein wichtiger Anreiz und Determinante vieler vaskul&auml;rer Glatter Muskelzellen-Zelle-Funktionen einschlie&szlig;lich Kontraktion, Proliferation, Migration und Zelladh&auml;sion. Kraft&uuml;bertragung von au&szlig;erhalb der Zelle durch fokale Adh&auml;sionen steuert die Dynamik dieser Adh&auml;sion-Sites und initiiert intrazellul&auml;re signalisierende Kaskaden, die zellul&auml;re Verhalten zu &auml;ndern. Um den Mechanismus zu verstehen, mit dem lebende Zellen sp&uuml;ren mechanische Kr&auml;fte, und wie sie reagieren und an ihre Umgebung anpassen, ist ein entscheidender erster Schritt zur Entwicklung einer neuen Technologie um zellul&auml;re Verhalten subzellul&auml;re Ebene zu untersuchen, die einem Rasterkraftmikroskop (AFM) mit Totalreflexion Fluoreszenz (TIRF) und schnell drehenden Scheibe (FSD) confocal Mikroskopie, Bereitstellung hohen r&auml;umlichen und zeitlichen Aufl&ouml;sung integriert. AFM wird ein Nanosensor verwendet, um die Oberfl&auml;chentopographie der Zelle zu messen und k&ouml;nnen anwenden und mechanische Kraft mit hoher Pr&auml;zision zu messen. TIRF-Mikroskopie ist eine optische bildgebendes Verfahren, das kontrastreiche Bilder mit hoher Z-Aufl&ouml;sung Leuchtstoff beschriftetem Molek&uuml;le in unmittelbarer N&auml;he der Zelle-Deckglas-Schnittstelle bereitstellt. FSD confocal Mikroskopie erm&ouml;glicht schnelle 3-d-Bildgebung in der Zelle in Echtzeit. Das integrierte System gilt im gro&szlig;en und ganzen in einem breiten Spektrum der molekularen dynamische Studien in adh&auml;renten Zellen Leben, erm&ouml;glicht direkte optische Bildgebung der Zelle Antworten auf mechanische Stimulation in Echtzeit.

Integrierte Mikroskopie f&uuml;r Echtzeit Mechanotransduction Studien in lebenden Zellen.

Forza meccanica &egrave; un importante stimolo e determinante di molte funzioni cellulari muscolari lisce vascolari tra cui contrazione, proliferazione, migrazione e attaccamento di cella. Trasmissione di forza dall&#39;esterno della cellula attraverso adesioni focali controlla la dinamica di questi siti di adesione e avvia cascate di segnalazione intracellulare che alterano il comportamento cellulare. Per comprendere il meccanismo mediante il quale le cellule viventi senso forze meccaniche, e come rispondere e adattarsi al loro ambiente, un primo passo fondamentale &egrave; quello di sviluppare una nuova tecnologia per analizzare il comportamento cellulare a livello subcellulare che integra un microscopio a forza atomica (AFM) con fluorescenza riflessione interna totale (TIRF) e microscopia confocale fast-filatura disco (FSD), fornendo ad alta risoluzione spaziale e temporale. AFM utilizza un nanosensore per misurare la topografia della superficie delle cellule e pu&ograve; applicare e misurare la forza meccanica ad alta precisione. TIRF microscopia &egrave; una tecnica di imaging ottica che fornisce immagini ad alto contrasto con z-risoluzione elevata di molecole fluorescente contrassegnati nelle immediate vicinanze dell&#39;interfaccia cellula-vetrino coprioggetti. Microscopia confocale FSD permette rapido imaging 3D in tutta la cellula in tempo reale. Il sistema integrato &egrave; ampiamente applicabile in una vasta gamma di studi dinamici molecolare in qualsiasi aderente cellule vive, permettendo direct imaging ottico delle risposte cellulari alla stimolazione meccanica in tempo reale.

Microscopia integrata per l&#39;imaging in tempo reale di studi mechanotransduction in cellule vive.

&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x529B;&#x306F;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3001;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x904A;&#x8D70;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x523A;&#x6FC0;&#x3068;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x63A5;&#x7740;&#x6591;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x529B;&#x306E;&#x4F1D;&#x9054;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x632F;&#x308B;&#x821E;&#x3044;&#x200B;&#x200B;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x529B;&#x3092;&#x611F;&#x77E5;&#x3059;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x9069;&#x5FDC;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x5408;&#x8A08;&#x3067;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;AFM&#xFF09;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x6319;&#x52D5;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5185;&#x90E8;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#xFF08;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#xFF09;&#x3068;&#x9AD8;&#x901F;&#x56DE;&#x8EE2;&#x3059;&#x308B;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#xFF08;FSD&#xFF09;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x3044;&#x7A7A;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3068;&#x6642;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; AFM&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8868;&#x9762;&#x5F62;&#x72B6;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x30CA;&#x30CE;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x9AD8;&#x7CBE;&#x5EA6;&#x3067;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x529B;&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B9;&#x30EA;&#x30C3;&#x30D7;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x3059;&#x3050;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;Z-&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3067;&#x9AD8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x306A;&#x753B;&#x50CF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6280;&#x8853;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; FSD&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;3-D&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x3067;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x5149;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x4EFB;&#x610F;&#x306E;&#x4ED8;&#x7740;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x3066;&#x5E83;&#x304F;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CE;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;

&#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD798;&#xC5D0;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC790;&#xADF9; &#xBC0F; &#xC218;&#xCD95;, &#xD655;&#xC0B0;, &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xC140; &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9CE;&#xC740; &#xD608;&#xAD00; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xACB0;&#xC815;. &#xCD08;&#xC810; &#xC720;&#xCC29;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC140; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD798;&#xC758; &#xC804;&#xC1A1; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC811;&#xCC29; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC2E0;&#xD638; &#xACC4;&#xACE1; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC791;. &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xD798;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC774; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xBC18;&#xC751; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC801;&#xC751; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4; &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD615;&#xAD11; (TIRF) &#xBC0F; &#xACE0;&#xC18D; &#xD68C;&#xC804; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; (FSD) confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;, &#xB192;&#xC740; &#xACF5;&#xAC04; &#xBC0F; &#xC2DC;&#xAC04; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (AFM) &#xD1B5;&#xD569; subcellular &#xC218;&#xC900; &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294;. AFM&#xB294; nanosensor&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC140; &#xD45C;&#xBA74; &#xC9C0;&#xD615; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xC801;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xB192;&#xC740; &#xC815;&#xBC00;&#xB3C4;&#xB85C; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD798;&#xC744; &#xCE21;&#xC815;. TIRF &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xC140; coverslip &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xBC14;&#xB85C; &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xB193;&#xC5EC;&#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xB192;&#xC740; z-&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xAD11;&#xD559; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE30;&#xC220;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. FSD confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C; &#xC140;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC601;&#xC0C1;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC740; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04;&#xC73C;&#xB85C; &#xC140; &#xBC18;&#xC751; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xAD11;&#xD559; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBD80;&#xCC29; &#xD55C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC790; &#xB3D9;&#xC801; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xB113;&#xC740; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC801;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xC140;&#xC5D0; mechanotransduction &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xD569; &#xB41C; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;.

La fuerza mec&#xE1;nica es un est&#xED;mulo importante y determinante de muchas funciones vasculares del m&#xFA;sculo liso de c&#xE9;lulas incluyendo la contracci&#xF3;n, la proliferaci&#xF3;n, la migraci&#xF3;n y la adhesi&#xF3;n celular. La transmisi&#xF3;n de la fuerza desde fuera de la c&#xE9;lula a trav&#xE9;s de adhesiones focales controla la din&#xE1;mica de estos sitios de adhesi&#xF3;n e inicia cascadas de se&#xF1;alizaci&#xF3;n intracelulares que alteran el comportamiento celular. Para entender el mecanismo por el cual las c&#xE9;lulas vivas sentir las fuerzas mec&#xE1;nicas, y c&#xF3;mo responder y adaptarse a su entorno, un primer paso fundamental es desarrollar una nueva tecnolog&#xED;a para investigar el comportamiento celular a nivel subcelular, que integra un microscopio de fuerza at&#xF3;mica (AFM) con un total reflexi&#xF3;n interna de fluorescencia (TIRF) y en r&#xE1;pida rotaci&#xF3;n del disco (FSD) microscop&#xED;a confocal, proporcionando una alta resoluci&#xF3;n espacial y temporal. AFM utiliza un nanosensor para medir la topograf&#xED;a de la superficie celular y se puede aplicar y medir la fuerza mec&#xE1;nica con alta precisi&#xF3;n. Microscop&#xED;a TIRF es una t&#xE9;cnica de imagen &#xF3;ptico que proporciona im&#xE1;genes de alto contraste con alto z resoluci&#xF3;n de mol&#xE9;culas marcadas fluorescentemente en la vecindad inmediata de la interfaz de c&#xE9;lulas cubreobjetos. Microscop&#xED;a confocal FSD permite un r&#xE1;pido 3-D a trav&#xE9;s del celular en tiempo real. El sistema integrado es ampliamente aplicable a trav&#xE9;s de una amplia gama de estudios moleculares din&#xE1;micos en cualquier c&#xE9;lulas vivas adherentes, permitiendo una imagen &#xF3;ptica directa de las respuestas celulares a la estimulaci&#xF3;n mec&#xE1;nica en tiempo real.

Microscop&#xED;a Integrado de im&#xE1;genes en tiempo real de Estudios mecanotransducci&#xF3;n en c&#xE9;lulas vivas

&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; &#xFF08;AFM&#xFF09; &#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x8C03;&#x67E5; alpha5beta1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x548C;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D; (FN) &#x4E0B;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x63A2;&#x9488;&#x90FD;&#x6807;&#x6709; FN &#x548C;&#x7528;&#x6765;&#x8861;&#x91CF; alpha5beta1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4E0E; FN &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x901A;&#x8FC7;&#x91CF;&#x5316;&#x6253;&#x7834;&#x5355;&#x4E00; FN-&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x503A;&#x5238;&#x4E0A;&#x7684;&#x88C5;&#x8F7D;&#x7387; (100 10,000 pN/s) &#x751F;&#x7406;&#x8303;&#x56F4;&#x6240;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x529B;&#x3002;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x7834;&#x88C2;&#x5355;&#x4E00; alpha5beta1 FN &#x952E;&#x529B;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x4E24;&#x500D;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x7684;&#x88C5;&#x8F7D;&#x7387;&#x8C03;&#x67E5;&#x5236;&#x5EA6;&#x3002;Mg(2+) &#x548C;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x53D8;&#x5316;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x53C2;&#x6570;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x548C;&#x8C03;&#x5236;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x80FD;&#x6E90;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9A7B;&#x7559;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5916;&#x90E8;&#x7684;&#x79BB;&#x5B50;&#x73AF;&#x5883;&#x5F71;&#x54CD;&#x5B9A;&#x4E49;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x529B;&#x5B66;&#x53C2;&#x6570;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5728;&#x52A8;&#x6001;&#x529B;&#x5B66;&#x73AF;&#x5883;&#x5982;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x4E2D;&#xFF0C;FN &#x548C; alpha5beta1 &#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x70ED;&#x529B;&#x5B66;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5C5E;&#x6027;&#x4E0D;&#x540C;&#x672C;&#x5730;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x8D1F;&#x8F7D;&#x548C;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x66F4;&#x6539;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6D3B;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F4;&#x63A5;&#x6D4B;&#x91CF;&#x8BB0;&#x5F55;&#x4E0B;&#x6765;&#x3002;

Mg2 + &#x8C03;&#x8282;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6574;&#x5408;&#x7D20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Atomic force microscopy (AFM) was used to investigate the interaction between alpha5beta1 integrin and fibronectin (FN) in the presence of divalent cations. AFM probes were labeled with FN and used to measure binding strength between alpha5beta1 integrin and FN by quantifying the force required to break single FN-integrin bonds on a physiological range of loading rates (100-10,000 pN/s). The force necessary to rupture single alpha5beta1-FN bond increased twofold over the regime of loading rates investigated. Changes in Mg(2+) and Ca(2+) concentration affected the thermodynamical parameters of the interaction and modulated the binding energy. These data indicate that the external ionic environment in which vascular smooth muscle cells reside, influences the mechanical parameters that define the interaction between the extracellular matrix and integrins. Thus, in a dynamic mechanical environment such as the vascular wall, thermodynamic binding properties between FN and alpha5beta1 integrin vary in relation to locally applied loads and divalent cations concentrations. These changes can be recorded as direct measurements on live smooth muscle cells by using AFM.

Mg2+ modulates integrin-extracellular matrix interaction in vascular smooth muscle cells studied by atomic force microscopy.

Microscopie &agrave; force atomique (AFM) a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour &eacute;tudier l&#39;interaction entre l&#39;int&eacute;grine alpha5beta1 et la fibronectine (FN) en pr&eacute;sence de cations divalents. Sondes AFM ont &eacute;t&eacute; marqu&eacute;s avec le FN et utilis&eacute;s pour mesurer la force de la liaison entre l&#39;int&eacute;grine alpha5beta1 et FN en quantifiant la force n&eacute;cessaire pour briser les liaisons de FN-int&eacute;grine unique sur une plage physiologique du chargement de taux (100-10 000 AP/s). La force n&eacute;cessaire &agrave; liaison unique alpha5beta1-FN rupture augment&eacute;e double sur le r&eacute;gime de chargement tarifs &eacute;tudi&eacute;s. Les variations de concentration de Mg(2+) et Ca(2+) affect&eacute; les param&egrave;tres thermodynamiques de l&#39;interaction et modulation de l&#39;&eacute;nergie de liaison. Ces donn&eacute;es indiquent que l&#39;environnement ionique o&ugrave; r&eacute;sident les cellules musculaires lisses vasculaires, influence les param&egrave;tres m&eacute;caniques qui d&eacute;finissent l&#39;interaction entre la matrice extracellulaire et les int&eacute;grines. Ainsi, dans un environnement dynamique m&eacute;canique tels que la paroi vasculaire, propri&eacute;t&eacute;s thermodynamiques liaison entre FN et alpha5beta1 int&eacute;grine varient en ce qui concerne les charges appliqu&eacute;es localement et des concentrations de cations divalents. Ces modifications peuvent &ecirc;tre enregistr&eacute;es sous des mesures directes sur les fibres musculaires lisses vivants &agrave; l&#39;aide d&#39;AFM.

Mg2 + module l&#39;interaction de l&#39;int&eacute;grine-extracellulaire dans les cellules musculaires lisses vasculaires &eacute;tudi&eacute; par microscopie &agrave; force atomique.

Rasterkraftmikroskopie (AFM) wurde verwendet, um die Interaktion zwischen alpha5beta1-Integrin und Fibronektin (FN) in Anwesenheit von bivalente Kationen zu untersuchen. AFM-Sonden wurden mit FN und Bindungsst&auml;rke zwischen alpha5beta1-Integrin und FN gemessen durch Quantifizierung erforderliche Kraft, um einzelne FN-Integrin-Anleihen auf vielf&auml;ltige physiologische laden Preise (100-10.000 pN/s) zu brechen. Die Kraft zu Bruch einzelner alpha5beta1-FN Bond erh&ouml;ht zweifache gegen&uuml;ber dem Regime des Ladens Preise untersucht. Ver&auml;nderungen im Mg(2+) und Ca(2+) Konzentration beeinflusst die thermodynamische Parameter der Interaktion und moduliert die Bindungsenergie. Diese Daten zeigen, dass die externe Ionische Umgebung in denen vaskul&auml;ren glatten Muskelzellen befinden, beeinflusst die mechanische Parameter, die die Interaktion zwischen der extrazellul&auml;ren Matrix und Integrine zu definieren. So in einem dynamischen mechanischen Umfeld wie der Gef&auml;&szlig;wand variieren thermodynamische Bindungseigenschaften zwischen FN und alpha5beta1 Integrin in Bezug auf lokal aufgebrachten Lasten und bivalente kationen-Konzentrationen. Diese &Auml;nderungen k&ouml;nnen als direkte Messungen am Leben glatten Muskelzellen aufgenommen werden, mithilfe von AFM.

MG2 + moduliert Integrin-extrazellul&auml;ren Matrix Interaktion in vaskul&auml;ren glatten Muskelzellen von Rasterkraftmikroskopie studiert.

Microscopia a forza atomica (AFM) &egrave; stata utilizzata per studiare l&#39;interazione tra alpha5beta1 integrina e fibronectina (FN) in presenza di cationi divalenti. Sonde AFM sono state etichettate con FN e usate per misurare la forza di associazione tra alpha5beta1 integrina e FN di quantificare la forza necessaria per rompere i legami di FN-integrina singoli su un range fisiologico di caricamento tariffe (100-10.000 pN/s). La forza necessaria a rottura legame singolo alpha5beta1-FN aumentato duplice sopra il regime di caricamento tariffe indagati. Cambiamenti nella concentrazione di Mg(2+) e Ca(2+) influenzato i parametri termodinamici dell&#39;interazione e modulato l&#39;energia di legame. Questi dati indicano che l&#39;ambiente esterno ionico in cui risiedono le cellule muscolari lisce vascolari, influenza i parametri meccanici che definiscono l&#39;interazione tra la matrice extracellulare e le integrine. Cos&igrave;, in un ambiente dinamico meccanico come la parete vascolare, propriet&agrave; termodinamiche associazione fra FN e alpha5beta1 integrina variano in relazione a carichi applicati localmente e concentrazioni di cationi divalenti. Questi cambiamenti possono essere registrati come misurazioni dirette su cellule muscolari lisce diretta mediante AFM.

MG2 + modula l&#39;interazione della matrice extracellulare dell&#39;integrina nelle cellule muscolari lisce vascolari studiato da microscopia a forza atomica.

&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (AFM) &#x306F; alpha5beta1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; (FN) 2&#x4FA1;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;AFM &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; FN &#x3068;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x91D1;&#x984D; &#xFF08;100-10,000 pN/&#x79D2;&#xFF09; &#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x7BC4;&#x56F2;&#x306B; 1 &#x3064;&#x306E; FN &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x50B5;&#x5238;&#x3092;&#x7834;&#x308B;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x529B;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068; alpha5beta1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068; FN &#x306E;&#x9593;&#x7D50;&#x5408;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7834;&#x88C2;&#x5358;&#x4E00; alpha5beta1 FN &#x50B5;&#x5238;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x529B;&#x4E8C;&#x91CD;&#x8ABF;&#x67FB;&#x6599;&#x91D1;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x8FBC;&#x307F;&#x306E;&#x653F;&#x6A29;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Mg(2+) &#x3068;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x5916;&#x90E8;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x74B0;&#x5883;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x52D5;&#x7684;&#x529B;&#x5B66;&#x74B0;&#x5883;&#x8840;&#x7BA1;&#x58C1;&#x306A;&#x3069;&#x3067;&#x306F;&#x3001;FN &#x3068; alpha5beta1 &#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x9593;&#x71B1;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30EB;&#x3067;&#x9069;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8377;&#x91CD;&#x3068; 2&#x4FA1;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x306E;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8A18;&#x9332;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Mg 2 + &#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30B0;&#x30EA;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (AFM) alpha5beta1 integrin fibronectin divalent &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; (FN)&#xC758; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. AFM &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; FN&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB85C;&#xB529; &#xC18D;&#xB3C4; (100-10000 pN/s)&#xC758; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xC77C; FN integrin &#xCC44;&#xAD8C;&#xC744; &#xD734;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD798;&#xC744; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; alpha5beta1 integrin&#xACFC; FN &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAC15;&#xB3C4; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD30C;&#xC5F4; &#xB2E8;&#xC77C; alpha5beta1 FN &#xBCF8;&#xB4DC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD798; &#xC99D;&#xAC00; &#xC870;&#xC0AC; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB85C;&#xB529;&#xC758; &#xC815;&#xAD8C; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC774;&#xB2E4;. Mg(2+) &#xBC0F; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xD654; &#xBD84;&#xC790;&#xB9CC; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD558; &#xACE0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xBCC0;&#xC870;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xD608;&#xAD00; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC704;&#xCE58; &#xC678;&#xBD80; &#xC774;&#xC628; &#xD658;&#xACBD; &#xC601;&#xD5A5; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8; integrins &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD608;&#xAD00; &#xBCBD; &#xB4F1; &#xB3D9;&#xC801; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xD658;&#xACBD;, FN&#xACFC; alpha5beta1 integrin &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC5F4;&#xC5ED;&#xD559;&#xC801; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC18D;&#xC131; &#xB85C;&#xCEEC;&#xB85C; &#xC801;&#xC6A9; &#xB41C; &#xD558; &#xC911; &#xBC0F; divalent &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xB18D;&#xB3C4; &#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; AFM&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xCE21;&#xC815;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xB85D;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Mg2 + integrin &#xAE30;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xD608;&#xAD00; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xC870;.

Microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica (AFM) fue utilizado para investigar la interacci&oacute;n entre la integrina alpha5beta1 y fibronectina (FN) en presencia de cationes divalentes. Sondas de AFM fueron etiquetadas con FN y utilizadas para medir la fuerza de uni&oacute;n entre la integrina alpha5beta1 y FN mediante la cuantificaci&oacute;n de la fuerza requerida para romper los enlaces de FN-integrina solos en un rango fisiol&oacute;gico de carga tarifas (100-10.000 pN/s). La fuerza necesaria para ruptura solo alpha5beta1-FN bonos aumentado doble en el r&eacute;gimen de carga tarifas investigados. Cambios en la concentraci&oacute;n de mg y CA afectaron los par&aacute;metros termodin&aacute;micas de la interacci&oacute;n y modulan de la energ&iacute;a de enlace. Estos datos indican que el ambiente i&oacute;nico externo en el que residen las c&eacute;lulas de m&uacute;sculo liso vascular, influye en los par&aacute;metros mec&aacute;nicos que definen la interacci&oacute;n entre la matriz extracelular y las integrinas. As&iacute;, en un entorno din&aacute;mico mec&aacute;nico como la pared vascular, propiedades termodin&aacute;micas vinculante entre integrina FN y alpha5beta1 var&iacute;an en lo referente a cargas aplicadas localmente y las concentraciones de cationes divalentes. Estos cambios pueden grabarse como mediciones directas en las c&eacute;lulas del m&uacute;sculo liso vivo utilizando AFM.

MG2 + modula la interacci&oacute;n de la matriz extracelular de la integrina en c&eacute;lulas de m&uacute;sculo liso vascular estudiado por microscop&iacute;a de fuerza at&oacute;mica.

&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;) &#x5BF9;&#x5B83;&#x4EEC;&#x9A7B;&#x7559;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x673A;&#x68B0;&#x6D3B;&#x52A8;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x9002;&#x5E94;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28; (ECM) &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x4E00;&#x7EA7;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x65E8;&#x5728;&#x5206;&#x6790;&#x5BF9; RhoA &#x8BF1;&#x5BFC;&#x673A;&#x68B0;&#x4FE1;&#x53F7;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x63A7;&#x5236;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x548C;&#x9ECF;&#x7740;&#x5F62;&#x6210; ECM &#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x8F6C;&#x67D3; RhoA &#x6784;&#x9020; &#xFF08;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3001; &#x6D88;&#x6781;&#x6216;&#x79EF;&#x6781;&#x4E00;&#x663E;&#x6027;&#xFF09; &#x548C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; ECM &#x86CB;&#x767D;&#x7528;&#x4F5C;&#x886C;&#x5E95;&#x4E0A;&#x9540; (&#x80F6;&#x539F;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x8FDE;&#x63A5;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x80F6;&#x539F;&#x56DB;&#x6211;&#x548C;&#x5C42;&#x7C98;&#x8FDE;&#x86CB;&#x767D;&#xFF09; &#x6216;&#x805A;-l-&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x53D8;&#x5316;&#x88AB;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x5168;&#x5185;&#x53CD;&#x5C04;&#x8367;&#x5149; &#xFF08;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;) &#x955C;&#xFF0C;&#x88AB;&#x72EC;&#x7ACB;&#x5730;&#x4F7F;&#x7528;&#x548C;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x9644;&#x7740;&#x529B;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x53CA;&#x5370;&#x8FF9;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; ECM &#x6709;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4F20;&#x64AD;&#x3001; &#x7C98;&#x9644;&#x548C;&#x5F62;&#x6001;&#x4E0E;&#x8C03;&#x8282; RhoA &#x4FE1;&#x53F7;&#x76F4;&#x63A5;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;RhoA &#x6D3B;&#x52A8;&#x5927;&#x5927;&#x5F71;&#x54CD;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x548C;&#x7126;&#x7C98;&#x8FDE;&#x91CD;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5728;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x4E2D;&#x65BD;&#x52A0;&#x7684; ECM&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5728;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE; RhoA &#x6D3B;&#x52A8;&#x8C03;&#x5236;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E94;&#x529B;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x548C; FA &#x5F62;&#x6210; 5 h&#xFF0C;&#x5728;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x800C;&#x663E;&#x8457;&#x6291;&#x5236;&#x5F55;&#x5728; 24 h &#x540E;&#x9540;&#x4E0A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; ECM&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86; ECM &#x8C03;&#x8282;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x54CD;&#x5E94;&#x673A;&#x68B0;&#x523A;&#x6FC0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x751F;&#x5316;&#x4FE1;&#x53F7;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9002;&#x5E94;&#x672C;&#x5730;&#x7684;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;

&#x5BF9; RhoA &#x4FE1;&#x53F7;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

Morphological adaptations of vascular smooth muscle cells (VSMC) to the mechanically active environment in which they reside, are mediated by direct interactions with the extracellular matrix (ECM) which induces physiological changes at the intracellular level. This study aimed to analyze the effects of the ECM on RhoA-induced mechanical signaling that controls actin organization and focal adhesion formation. VSMC were transfected with RhoA constructs (wild type, dominant negative or constitutively active) and plated on different ECM proteins used as substrate (fibronectin, collagen IV, collagen I, and laminin) or poly-l-lysine as control. Morphological changes of the VSMC were detected by fluorescence confocal microscopy and total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy, and were independently verified using adhesion assays and Western blot analysis. Our results showed that the ECM has an important role in cell spreading, adhesion and morphology with a direct effect on modulating RhoA signaling. RhoA activity significantly affected the stress fibers and focal adhesions reorganization, but in a context imposed by the ECM. Thus, RhoA activity modulation in VSMC induced an increased activation of stress fibers and FA formation at 5h, while a significant inhibition was recorded at 24h after plating on the different ECM. Our findings provide biophysical evidence that ECM modulates VSMC response to mechanical stimuli inducing intracellular biochemical signaling involved in cellular adaptation to the local microenvironment.

Extracellular matrix effect on RhoA signaling modulation in vascular smooth muscle cells.

Adaptations morphologiques des cellules musculaires lisses vasculaires (CMLV) &#xE0; l&#x26;#39;environnement m&#xE9;canique active dans laquelle ils r&#xE9;sident, sont m&#xE9;di&#xE9;s par des interactions directes avec la matrice extracellulaire (MEC), qui entra&#xEE;ne des changements physiologiques au niveau intracellulaire. Cette &#xE9;tude visait &#xE0; analyser les effets de l&#x26;#39;ECM RhoA induite par la signalisation m&#xE9;canique qui contr&#xF4;le l&#x26;#39;organisation d&#x26;#39;actine et la formation d&#x26;#39;adh&#xE9;sion focale. CMLV ont &#xE9;t&#xE9; transfect&#xE9;es avec des constructions de type sauvage (RhoA, dominant n&#xE9;gatif ou constitutivement active) et plaqu&#xE9; sur les prot&#xE9;ines ECM diff&#xE9;rents utilis&#xE9;s comme substrat (fibronectine, le collag&#xE8;ne IV, collag&#xE8;ne I, et de la laminine) ou poly-L-lysine comme t&#xE9;moin. Les modifications morphologiques de la CMLV ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;es par microscopie confocale de fluorescence et de fluorescence &#xE0; r&#xE9;flexion interne totale (TIRF) microscopie, et ont &#xE9;t&#xE9; v&#xE9;rifi&#xE9;es de fa&#xE7;on ind&#xE9;pendante en utilisant des tests d&#x26;#39;adh&#xE9;rence et de l&#x26;#39;analyse Western blot. Nos r&#xE9;sultats ont montr&#xE9; que l&#x26;#39;ECM a un r&#xF4;le important dans la cellule d&#x26;#39;&#xE9;talement, d&#x26;#39;adh&#xE9;rence et de la morphologie avec un effet direct sur RhoA signalisation modulant. L&#x26;#39;activit&#xE9; de RhoA significativement affect&#xE9; les fibres de stress et de convergence de r&#xE9;organisation des adh&#xE9;rences, mais dans un contexte impos&#xE9; par l&#x26;#39;ECM. Ainsi, modulation de l&#x26;#39;activit&#xE9; de RhoA dans les CMLV induit une activation accrue de fibres de stress et de la formation FA &#xE0; 5h, tandis qu&#x26;#39;une inhibition significative a &#xE9;t&#xE9; enregistr&#xE9;e &#xE0; 24h apr&#xE8;s le placage sur l&#x26;#39;ECM diff&#xE9;rente. Nos r&#xE9;sultats fournissent la preuve biophysique qui module la r&#xE9;ponse ECM CMLV aux stimuli m&#xE9;caniques induisant intracellulaires de signalisation biochimiques impliqu&#xE9;s dans l&#x26;#39;adaptation cellulaire au micro-environnement local.

Effet matrice extracellulaire sur RhoA signalisation de modulation dans les cellules vasculaires musculaires lisses

Morphologische Anpassungen der vaskul&auml;ren glatten Muskelzellen (VSMC), die mechanisch aktive Umgebung, in dem sie wohnen, vermittelt durch direkte Interaktionen mit der extrazellul&auml;ren Matrix (ECM), die physiologische Ver&auml;nderungen auf der intrazellul&auml;ren Ebene hervorruft. Diese Studie soll analysieren die Auswirkungen von ECM auf RhoA-induzierten mechanischen signalisieren, die Aktin-Organisation und fokale Adh&auml;sion Bildung kontrolliert. VSMC wurden die transfected mit RhoA Konstrukte (Wildtyp, dominante negative oder konstitutiv aktiv) und plattiert auf verschiedenen ECM-Proteine, die als Substrat verwendet (Fibronektin, Kollagen IV, Kollagen I und Laminin) oder Poly-l-Lysin als Steuerelement. Morphologische Ver&auml;nderungen von der VSMC wurden durch konfokale Fluoreszenzmikroskopie und Totalreflexion Fluoreszenzmikroskopie (TIRF) erkannt und anhand von Adh&auml;sion Assays und Western-Blot-Analyse wurden unabh&auml;ngig &uuml;berpr&uuml;ft. Unsere Ergebnisse zeigten, dass das ECM eine wichtige Rolle bei der Ausbreitung von Zelle, Adh&auml;sion und Morphologie mit einen direkten Einfluss auf die Modulierung RhoA Signalisierung hat. RhoA Aktivit&auml;t erheblich betroffen, die Spannung Fasern und fokalen Adh&auml;sionen Reorganisation, aber in einem Kontext auferlegten ECM. So induziert RhoA Aktivit&auml;t Modulation in VSMC eine erh&ouml;hte Aktivierung von Spannung Fasern und FA-Formation bei 5 h, w&auml;hrend eine signifikante Hemmung an 24 h nach der &Uuml;berzug auf die verschiedenen ECM aufgezeichnet wurde. Unsere Ergebnisse belegen biophysikalische, dass ECM VSMC Reaktion auf mechanische Reize moduliert, die fehlertr&auml;chtige intrazellul&auml;ren biochemischen Signalisierung an zellul&auml;re Anpassung an die lokalen Mikromilieu beteiligt.

Extrazellul&auml;ren Matrix Effekt auf RhoA Signalisierung Modulation im vaskul&auml;ren glatten Muskelzellen.

Adattamenti morfologici delle cellule muscolari lisce vascolari (VSMC) all&#39;ambiente meccanicamente attivo in cui risiedono, sono mediate dall&#39;interazione dirette con la matrice extracellulare (ECM) che induce cambiamenti fisiologici a livello intracellulare. Questo studio finalizzato ad analizzare gli effetti dell&#39;ECM su RhoA-indotto meccanico segnalando che controlla organizzazione actina e formazione di adesione focale. VSMC erano transfected con costrutti RhoA (wild type, dominante negativo o costitutivamente attive) e placcato su diverse proteine ECM utilizzate come substrato (fibronectina, collagene IV, collagene I e laminina) o poli-l-lisina come controllo. Cambiamenti morfologici delle VSMC sono state rilevate da microscopia confocale a fluorescenza e microscopia di fluorescenza (TIRF) riflessione interna totale e sono stati verificati in modo indipendente utilizzando dosaggi di adesione e analisi Western blot. I nostri risultati hanno mostrato che l&#39;ECM ha un ruolo importante nella diffusione delle cellule, adesione e morfologia con un effetto diretto sulla modulazione RhoA segnalazione. RhoA attivit&agrave; significativamente colpite le fibre di stress e la riorganizzazione di adesioni focali, ma in un contesto imposto dall&#39;ECM. Cos&igrave;, modulazione attivit&agrave; RhoA nelle VSMC indotta da un&#39;aumentata attivazione delle fibre di stress e FA formazione a 5 h, mentre un&#39;inibizione significativa &egrave; stata registrata a 24 h dopo la placcatura su ECM differenti. I nostri risultati forniscono prove biofisiche che ECM modula la risposta VSMC agli stimoli meccanici indurre segnalazione intracellulare di biochimica coinvolta nell&#39;adattamento cellulare per il microambiente locale.

Effetto matrice extracellulare RhoA segnalazione modulazione nelle cellule muscolari lisce vascolari.

&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x304C;&#x4F4F;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x308B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x74B0;&#x5883;&#x3078;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;VSMC&#xFF09;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x9069;&#x5FDC;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;ECM&#xFF09;&#x3068;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3068;&#x63A5;&#x7740;&#x6591;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;RhoA&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x3001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;ECM&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x76EE;&#x7684;&#x3068;&#x3057;&#x305F;&#x3002; VSMC&#x306F;&#x3001;RhoA&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#xFF08;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x3001;&#x6052;&#x5E38;&#x7684;&#x306B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30CA;&#x30B9;&#x306E;&#x512A;&#x6027;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#xFF09;&#x3068;&#x57FA;&#x677F;&#xFF08;&#x30D5;&#x30A3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30CD;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3001;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;IV&#x3001;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3;I&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E9;&#x30DF;&#x30CB;&#x30F3;&#xFF09;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;-L-&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5225;&#x306E;ECM&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x4E0A;&#x306B;&#x30E1;&#x30C3;&#x30AD;&#x3067;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x3002; VSMC&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x86CD;&#x5149;&#xFF08;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#xFF09;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x63A5;&#x7740;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;ECM&#x304C;&#x5909;&#x8ABF;RhoA&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30BB;&#x30EB;&#x62E1;&#x6563;&#x3001;&#x63A5;&#x7740;&#x3068;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x62C5;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002; RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x3068;&#x63A5;&#x7740;&#x6591;&#x306E;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x5185;&#x3067;ECM&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8AB2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;ECM&#x4E0A;&#x306B;&#x3081;&#x3063;&#x304D;&#x5F8C;24&#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x8A18;&#x9332;&#x3055;&#x308C;&#x3064;&#x3064;&#x3001;VSMC&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RhoA&#x6D3B;&#x6027;&#x5909;&#x8ABF;&#x306F;&#x3001;5H&#x3067;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC;&#x3068;FA&#x5F62;&#x6210;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;ECM&#x304C;&#x5C40;&#x6240;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9069;&#x5FDC;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7684;&#x306A;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;VSMC&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x8840;&#x7BA1;&#x5E73;&#x6ED1;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RhoA&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x5909;&#x8ABF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;

&#xAE30;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD65C;&#xC131; &#xD658;&#xACBD; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294;, &#xD608;&#xAD00; &#xD3C9;&#xD65C; &#xADFC; &#xC138;&#xD3EC; (VSMC)&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC744; &#xAC01; &#xC0C9; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC9C8; (ECM)&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; Rhoa&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC2E0;&#xD638; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC870;&#xC9C1;&#xACFC; &#xCD08;&#xC810; &#xC811;&#xCC29; &#xB825; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD558;&#xB294; ECM&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; &#xBAA9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;. VSMC &#xD398; &#xD588;&#xB2E4; RhoA &#xAD6C;&#xBB38; (&#xC640;&#xC77C;&#xB4DC; &#xD0C0;&#xC785;, &#xC74C;&#xC218; &#xB610;&#xB294; constitutively &#xD65C;&#xC131; &#xC9C0;&#xBC30;) &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; ECM &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xAE08; (fibronectin, &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; IV, &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; laminin) &#xB610;&#xB294; &#xD3F4; &#xB9AC;-l-&#xB9AC; &#xC2E0; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xB85C;. VSMC&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBCC0;&#xD654; &#xD615;&#xAD11; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xBC0F; &#xCD1D; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBC18;&#xC0AC; (TIRF) &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xBC0F; &#xC811;&#xCC29; &#xB825; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBC0F; &#xC11C;&#xCABD; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; ECM&#xC740; &#xC140; &#xD655;&#xC0B0;, &#xC811;&#xCC29; &#xBC0F; RhoA &#xC2E0;&#xD638; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. RhoA &#xD65C;&#xB3D9; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xCD08;&#xC810; &#xC720;&#xCC29; &#xAC1C;&#xD3B8;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; ECM&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD80;&#xACFC;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, VSMC&#xC5D0;&#xC11C; RhoA &#xD65C;&#xB3D9; &#xBCC0;&#xC870; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC800;&#xD574;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; ECM&#xC5D0; &#xB3C4;&#xAE08; &#xD6C4; 24 h&#xC5D0; &#xAE30;&#xB85D; &#xD558;&#xBA74;&#xC11C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC12C;&#xC720; &#xBC0F; 5 h FA &#xD615;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC720;&#xB3C4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; ECM &#xB85C;&#xCEEC; microenvironment &#xC140;&#xB8F0;&#xB7EC; &#xC801;&#xC751;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xC720;&#xB3C4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xD638;&#xB294; &#xAE30;&#xACC4;&#xC801; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; VSMC &#xC751;&#xB2F5; &#xBCC0;&#xC870; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;.

RhoA &#xD608;&#xAD00; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xADFC;&#xC721; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBCC0;&#xC870; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xAE30;&#xC9C8;.

Adaptaciones morfol&#xF3;gicas de c&#xE9;lulas musculares lisas vasculares (CMLV) en el medio ambiente mec&#xE1;nicamente activo en el que residen, son mediadas por la interacci&#xF3;n directa con la matriz extracelular (MEC), que induce cambios fisiol&#xF3;gicos a nivel intracelular. Este estudio tuvo como objetivo analizar los efectos de la ECM en RhoA inducida por la se&#xF1;alizaci&#xF3;n mec&#xE1;nica que controla la organizaci&#xF3;n de la actina y la formaci&#xF3;n de adhesi&#xF3;n focal. CMLV fueron transfectadas con construcciones RhoA (tipo salvaje, dominante negativa o activa constitutivamente) y chapada en prote&#xED;nas ECM diferentes utilizados como sustrato (fibronectina, col&#xE1;geno IV, col&#xE1;geno I, y laminina) o poli-l-lisina como control. Los cambios morfol&#xF3;gicos de la CMLV fueron detectados por microscop&#xED;a de fluorescencia confocal y microscop&#xED;a de reflexi&#xF3;n interna total de fluorescencia (TIRF), y fueron verificados de forma independiente utilizando los ensayos de adhesi&#xF3;n y el an&#xE1;lisis de Western blot. Nuestros resultados mostraron que el ECM tiene un papel importante en la propagaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas, la adhesi&#xF3;n y la morfolog&#xED;a con un efecto directo sobre la modulaci&#xF3;n de la se&#xF1;alizaci&#xF3;n de RhoA. La actividad de RhoA afectado significativamente las fibras de estr&#xE9;s y la reorganizaci&#xF3;n adhesiones focales, pero en un contexto impuesto por el MEC. Por lo tanto, la modulaci&#xF3;n de la actividad de RhoA en las CMLV indujo un aumento de la activaci&#xF3;n de fibras de estr&#xE9;s y la formaci&#xF3;n de la FA a las 5h, mientras que una inhibici&#xF3;n significativa se registr&#xF3; a las 24 horas despu&#xE9;s de placas en el ECM diferente. Nuestros resultados proporcionan pruebas biof&#xED;sicas que ECM modula la respuesta a los est&#xED;mulos mec&#xE1;nicos CMLV induciendo intracelulares de se&#xF1;alizaci&#xF3;n bioqu&#xED;micos implicados en la adaptaci&#xF3;n celular al microambiente local.

Andreea Trache

Department of Systems Biology and Translational Medicine,
College of Medicine,
Cardiovascular Research Institute,
Department of Systems Biology and Translational Medicine, College of Medicine, Cardiovascular Research Institute

Texas A&M Health Science Center

Live Cell Response to Mechanical Stimulation Studied by Integrated Optical and Atomic Force Microscopy