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Preparation of Highly Coupled Rat Heart Mitochondria

The function of mitochondria in generation of cellular ATP in the process of oxidative phosphorylation is widely recognised. During the past decades there ...

University of Manchester

&#x7528;&#x901A;&#x9053;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x6297;&#x751F;&#x7D20; alamethicin permeabilize NADH &#x548C; ATP &#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x4F53;&#x79EF;&#x4EB2;&#x6C34;&#x6027;&#x57FA;&#x8D28;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x819C;&#x3002;Alamethicin &#x6CBB;&#x7597;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x663E;&#x793A;&#x9AD8;&#x9C7C;&#x85E4;&#x916E;&#x654F;&#x611F; NADH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x3001; NADH &#x918C;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x548C; oligomycin &#x654F;&#x611F;&#x548C;&#x4E0D;&#x654F;&#x611F; carboxyatractylate ATPase &#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;Alamethicin &#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x590D;&#x6742;&#x6211;&#x548C; ATPase &#x800C;&#x5916; submitochondrial &#x9897;&#x7C92;&#x4E2D;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x900F;&#x6027;&#x5316;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x6570;&#x91CF;&#x4E0A;&#x4FDD;&#x7559;&#x5176;&#x4E4C;&#x5934;&#x9178;&#x9176;&#x548C; iso &#x67E0;&#x6AAC;&#x9178;&#x8131;&#x6C22;&#x9176;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;Alamethicin &#x6CBB;&#x7597;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x7535;&#x955C;&#x663E;&#x793A;&#x5176;&#x5916;&#x90E8;&#x548C;&#x5185;&#x90E8;&#x7684;&#x819C;&#x7684;&#x4E0D;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3002;&#x4ECE;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x6210;&#x679C;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5EFA;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x8BE5; alamethicin &#x7528;&#x4E8E;&#x539F;&#x4F4D;&#x4F4D;&#x4E8E; intramitochondrially &#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;

Intramitochondrial &#x9176;&#x7684;&#x539F;&#x4F4D;&#x68C0;&#x6D4B;&#xFF1A; &#x4F7F;&#x7528; alamethicin &#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x589E;&#x9AD8;&#x3002;

The channel-forming antibiotic alamethicin was used to permeabilize mitochondrial membranes for the low molecular mass hydrophilic substrates NADH and ATP. Alamethicin-treated mitochondria show high rotenone-sensitive NADH oxidase, NADH-quinone reductase, and oligomycin-sensitive and carboxyatractylate-insensitive ATPase activities. Alamethicin does not affect Complex I and ATPase activities in inside-out submitochondrial particles. Permeabilized mitochondria quantitatively retain their aconitase and iso-citrate dehydrogenase activities. Electron microscopy of alamethicin-treated mitochondria reveals no disruption of their outer and inner membranes. From the results obtained it is recommended, that alamethicin be used for the in situ catalytic assay of intramitochondrially located enzymes.

In situ assay of the intramitochondrial enzymes: use of alamethicin for permeabilization of mitochondria.

L&#39;alam&eacute;thicine antibiotique formant le chenal a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour permeabilize des membranes mitochondriales pour les substrats hydrophiles de masse mol&eacute;culaires faibles NADH et ATP. Mitochondries trait&eacute;es alam&eacute;thicine show haute oxydase de NADH sensibles &agrave; la rot&eacute;none, NADH-quinone r&eacute;ductase et l&#39;oligomycine-d&eacute;pendantes et ind&eacute;pendantes de carboxyatractylate l&#39;activit&eacute; ATPase. Alam&eacute;thicine n&#39;affecte pas le complexe I et activit&eacute;s de l&#39;ATPase dans les particules submitochondriales inside-out. Mitochondries perm&eacute;abilis&eacute;es quantitativement conservent leur activit&eacute; d&eacute;shydrog&eacute;nase aconitase et iso-citrate. Mitochondries impr&eacute;gn&eacute;es d&#39;alam&eacute;thicine en microscopie &eacute;lectronique r&eacute;v&egrave;le sans interruption de leurs membranes externes et internes. D&#39;apr&egrave;s les r&eacute;sultats obtenus, il est recommand&eacute;, qu&#39;alam&eacute;thicine &ecirc;tre utilis&eacute; pour l&#39;essai in situ catalytique des enzymes intramitochondrially situ&eacute;.

Des essais in situ des enzymes intramitochondriale : utilisation d&#39;alam&eacute;thicine pour la perm&eacute;abilisation de mitochondries.

In-situ-Assay der Enzyme intramitochondrialen: von Alamethicin verwenden zur Permeabilisierung der Mitochondrien.

Il canale formando alamethicin antibiotico &egrave; stato utilizzato per permeabilizzare le membrane mitocondriali per i bassi molecolare substrati massa idrofilici NADH e ATP. Mitocondri Alamethicin trattati Visualizza alta rotenone sensibili NADH ossidasi, reduttasi NADH-chinone e attivit&agrave; ATPasi oligomycin-sensibili e carboxyatractylate-insensibile. Alamethicin non influisce sul complesso I e attivit&agrave; ATPasi in particelle submitochondrial inside-out. Permeabilized mitocondri quantitativamente conservano la loro attivit&agrave; di deidrogenasi aconitasi e iso-citrato. Microscopia elettronica dei mitocondri trattati alamethicin non rivela alcuna perturbazione delle loro membrane esterne ed interne. Dai risultati ottenuti si raccomanda, che alamethicin essere utilizzato per l&#39;analisi in situ catalitico degli enzimi di intramitochondrially si trova.

Analisi in situ degli enzimi intramitochondrial: uso di alamethicin per permeabilization dei mitocondri.

&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30B7;&#x30F3; &#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x819C;&#x306F;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x8CEA;&#x91CF;&#x89AA;&#x6C34;&#x6027;&#x57FA;&#x677F;&#x7528; NADH &#x3084; ATP &#x3092; permeabilize &#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30B7;&#x30F3;&#x6271;&#x308F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x30ED;&#x30C6;&#x30CE;&#x30F3;&#x654F;&#x611F; NADH &#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x3001;NADH &#x30AD;&#x30CE;&#x30F3;&#x306E;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x3068; carboxyatractylate &#x3092;&#x533A;&#x5225;&#x3057;&#x306A;&#x3044; ATPase &#x6D3B;&#x6027;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30B7;&#x30F3; &#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3057;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C9; &#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; submitochondrial &#x7C92;&#x5B50;&#x306E; ATPase &#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x30B0;&#x30EA;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306F;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x3001;&#x30A2;&#x30B3;&#x30CB;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068; iso &#x30AF;&#x30A8;&#x30F3;&#x9178;&#x8131;&#x6C34;&#x7D20;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30B7;&#x30F3;&#x6271;&#x308F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x3068;&#x5185;&#x5074;&#x306E;&#x819C;&#x306E;&#x4E2D;&#x65AD;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#x304B;&#x3089;&#x306F;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30B7;&#x30F3;&#x306B;&#x3042;&#x308B; intramitochondrially &#x9175;&#x7D20;&#x306E; in situ &#x89E6;&#x5A92;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5C3F;&#x7D20;&#x9175;&#x7D20;&#x306E; in situ &#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;: &#x30A2;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x900F;&#x904E;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xCC44;&#xB110; &#xD615;&#xC131; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C; alamethicin permeabilize ATP&#xC640; NADH &#xB0AE;&#xC740; &#xBD84;&#xC790; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xCE5C;&#xC218;&#xC131; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Alamethicin &#xB300;&#xC6B0; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xB192;&#xC740; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; NADH&#xC758; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C;, NADH quinone reductase &#xBC0F; oligomycin &#xAD6C;&#xBD84; &#xBC0F; carboxyatractylate&#xC744; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; ATPase &#xD65C;&#xB3D9; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Alamethicin&#xC5D0; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xB098; &#xACE0; &#xB0B4;&#xBD80;-&#xC544;&#xC6C3; submitochondrial &#xC785;&#xC790;&#xC5D0; ATPase &#xD65C;&#xB3D9;. Permeabilized &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xC591;&#xC801; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; aconitase&#xC640; iso &#xC2DC;&#xD2B8;&#xB974;&#xC0B0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Alamethicin &#xB300;&#xC6B0; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC758; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC758; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC678;&#xBD80;&#xC640; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB9C9; &#xC911;&#xB2E8;&#xC744; &#xC5C6;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xC5BB;&#xC740; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC744; &#xAD8C;&#xC7A5;, &#xADF8; alamethicin intramitochondrially&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xCD09;&#xB9E4; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Intramitochondrial &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xD604;&#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;: &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC758; permeabilization&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; alamethicin&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;.

El alamethicin antibi&oacute;tico formadoras de canal se utiliz&oacute; para permeabilizar las membranas mitocondriales para los sustratos hidrof&iacute;licos masa moleculares bajas NADH y ATP. Las mitocondrias tratados con Alamethicin muestran alta sensible a la rotenona NADH oxidasa, reductasa NADH-quinona y actividades de ATPasa Oligomicina sensible y carboxyatractylate-insensibles. Alamethicin no afecta el complejo I y actividades de la ATPasa en part&iacute;culas submitochondrial de adentro hacia afuera. Las mitocondrias permeabilized cuantitativamente conservan sus actividades de deshidrogenasa aconitasa y iso-citrato. La microscopia electr&oacute;nica de las mitocondrias tratados con alamethicin no revela interrupci&oacute;n de sus membranas externas e internas. De los resultados obtenidos se recomienda, que alamethicin ser utilizado para el ensayo in situ catal&iacute;tico de enzimas intramitochondrially situado.

Ensayo in situ de las enzimas intramitochondrial: uso de alamethicin para la permeabilizaci&oacute;n de la mitocondria.

&#x7A7A;&#x95F4;&#x5B89;&#x6392;&#x548C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4F9D;&#x8D56;&#x786B;&#x9187;&#x5728;&#x5B66;&#x4E60;&#x4F7F;&#x7528;&#x819C;&#x6E17;&#x900F; N-ethylmaleimide &#xFF08;NEM&#xFF09; &#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x975E;&#x7A7F;&#x900F;&#x6027;&#x9634;&#x79BB;&#x5B50; 5,5&#39;-dithiobis-(2-nitrobenzoate) &#xFF08;DTNB&#xFF09; &#x4F5C;&#x4E3A;&#x7279;&#x5B9A;&#x9176;&#x5728;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x548C;&#x5185;&#x5916; submitochondrial &#x7C92;&#x5B50; (SMP) &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x3002;&#x5C3C;&#x59C6;&#x548C; DTNB &#x8FC5;&#x901F;&#x6291;&#x5236;&#x505C;&#x4EA7;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6211;&#x5728; SMP &#x4E2D;&#x3002;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x6A2A;&#x6D41;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x800C;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x662F;&#x65E0;&#x52A8;&#x4E8E;&#x8877; DTNB&#x3002;&#x4E0B;&#x901A;&#x9053;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x6297;&#x751F;&#x7D20; alamethicin&#xFF0C;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x6211;&#x53D8;&#x5F97;&#x654F;&#x611F; DTNB&#x3002;&#x65E2;&#x4E0D;&#x79EF;&#x6781;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x53D6;&#x6D88;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x6211;&#x5728; SMP &#x6291;&#x5236;&#x6C27;&#x5316;&#x578B;&#x8C37;&#x80F1;&#x7518;&#x80BD; pH 8.0&#xFF0C;75 &#x5206;&#x949F; 10 &#x6BEB;&#x7C73;&#xFF09;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x4E3B;&#x52A8;&#x6D88;&#x9664; active &#x8FC7;&#x6E21;&#x5DEF;&#x57FA;&#x7EC4;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6211;&#x8FD9;&#x662F;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x6A2A;&#x6D41;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x5185;&#x90E8;&#x819C;&#x77E9;&#x9635;&#x63A5;&#x53E3;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x5305;&#x62EC;&#x6291;&#x5236;&#x7684;&#x5168;&#x9762;&#x4F9D;&#x8D56;&#x3001; ph &#x503C;&#x3001; &#x79BB;&#x5B50;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x548C;&#x819C;&#x53CC;&#x5C42;&#x6539;&#x6027;&#x5BF9;&#x5B9E;&#x73B0; DTNB &#x548C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6027;&#x6A21;&#x62DF;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x5730;&#x5F62;&#x548C;&#x5316;&#x5B66;&#x53CD;&#x5E94;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x8FC7;&#x6E21;&#x654F;&#x611F; SH-&#x7EC4;&#x4E2D;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; NADH&#xFF1A; &#x6CDB;&#x918C;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; (&#x590D;&#x6742;&#x6211;&#xFF09;&#x3002;

The spatial arrangement and chemical reactivity of the activation-dependent thiol in the mitochondrial Complex I was studied using the membrane penetrating N-ethylmaleimide (NEM) and non-penetrating anionic 5,5'-dithiobis-(2-nitrobenzoate) (DTNB) as the specific inhibitors of the enzyme in mitochondria and inside-out submitochondrial particles (SMP). Both NEM and DTNB rapidly inhibited the de-activated Complex I in SMP. In mitochondria NEM caused rapid inhibition of Complex I, whereas the enzyme activity was insensitive to DTNB. In the presence of the channel-forming antibiotic alamethicin, mitochondrial Complex I became sensitive to DTNB. Neither active nor de-activated Complex I in SMP was inhibited by oxidized glutathione (10 mM, pH 8.0, 75 min). The data suggest that the active/de-active transition sulfhydryl group of Complex I which is sensitive to inhibition by NEM is located at the inner membrane-matrix interface. These data include the sidedness dependency of inhibition, effect of pH, ionic strength, and membrane bilayer modification on enzyme reactivity towards DTNB and its neutral analogue.

Topography and chemical reactivity of the active-inactive transition-sensitive SH-group in the mitochondrial NADH:ubiquinone oxidoreductase (Complex I).

La disposition spatiale et la r&eacute;activit&eacute; chimique du thiol activation d&eacute;pendante du complexe mitochondrique j&#39;ai ai &eacute;t&eacute; &eacute;tudi&eacute; en utilisant la membrane p&eacute;n&eacute;trant N-&eacute;thylmal&eacute;imide (NEM) et non p&eacute;n&eacute;trantes 5,5&#39;-dithiobis-(2-nitrobenzoate) anionique (DTNB) comme les inhibiteurs sp&eacute;cifiques de l&#39;enzyme dans les mitochondries et les particules submitochondrial inside-out (SMP). Les NEM et DTNB rapidement inhibent le complexe d&eacute;sactiv&eacute; I en SMP. Dans les mitochondries, NEM a caus&eacute; une inhibition rapide du complexe I, alors que l&#39;activit&eacute; enzymatique est insensible aux DTNB. En pr&eacute;sence de l&#39;antibiotique alam&eacute;thicin formant le chenal, complexe mitochondrique, je suis devenu sensible aux DTNB. Complexe actif ni d&eacute;sactiv&eacute; que je dans SMP &eacute;tais inhib&eacute;e par le glutathion oxyd&eacute; (10 mM, pH 8,0, 75 min). Les donn&eacute;es sugg&egrave;rent que le groupe sulfhydryle de transition active/d&eacute;sactiver-active du complexe I qui est sensible &agrave; l&#39;inhibition par NEM se situe &agrave; l&#39;interface matrice-membrane interne. Ces donn&eacute;es comprennent la d&eacute;pendance de la partialit&eacute; de l&#39;inhibition, l&#39;effet du pH, force ionique et modification de bicouche membrane sur la r&eacute;activit&eacute; enzymatique vers DTNB et son analogue neutre.

R&eacute;activit&eacute; chimique et de la topographie du transition sensible actif-inactif SH-groupe dans l&#39;oxydor&eacute;ductase de NADH mitochondrique : ubiquinone (complexe I).

Die r&auml;umliche Anordnung und die chemische Reaktivit&auml;t der Aktivierung-abh&auml;ngige Thiol in der mitochondrialen Komplex, ich war mit die Membran durchdringen N-Ethylmaleimide (NEM) untersucht, und nicht penetrierender anionische 5,5&#39;-dithiobis-(2-nitrobenzoate) (DTNB) als die spezifischen Inhibitoren des Enzyms in Mitochondrien und Inside-Out-submitochondrial Partikel (SMP). NEM und DTNB schnell gehemmt deaktiviert Komplex ich SMP. In den Mitochondrien NEM verursacht rasche Hemmung des Komplexes, w&auml;hrend die Enzymaktivit&auml;t unempfindlich gegen DTNB war. In Anwesenheit der Kanal-bildenden Antibiotika Alamethicin mitochondriale Komplex wurde ich empfindlich auf DTNB. Weder aktiv noch deaktiviert-Komplex, die ich in SMP durch oxidierte Glutathion (10 mM, pH 8.0, 75 min.) gehemmt wurde. Die Daten zeigen, dass die aktiv/de-active &Uuml;bergang Sulfhydryl-Gruppe des Komplexes I sensiblen zur Hemmung von NEM liegt an der inneren Membran-Matrix-Schnittstelle. Diese Daten umfassen die K&ouml;rperh&auml;lfte Abh&auml;ngigkeit der Hemmung, Einflu&szlig; des pH-Wertes, Ionenst&auml;rke und Membran Bilayer Modifikation am Enzym Reaktionsf&auml;higkeit gegen&uuml;ber dem DTNB und seine neutrale analog.

Topographie und chemische Reaktivit&auml;t der aktiv-inaktiv &Uuml;bergang-Sensitive SH-Gruppe in die mitochondriale NADH: Ubiquinon-Oxidoreduktase (Komplex I).

La disposizione spaziale e la reattivit&agrave; chimica del tiolo di attivazione-dipendente del complesso mitocondriale &egrave; stato studiato utilizzando la membrana penetrante N-ethylmaleimide (NEM) e non penetrante 5,5&#39;-dithiobis-(2-nitrobenzoate) anionici (DTNB) come gli specifici inibitori dell&#39;enzima nei mitocondri e particelle submitochondrial inside-out (SMP). NEM sia DTNB rapidamente inibito il complesso disattivato in SMP. Nei mitocondri NEM ha causato la rapida inibizione del complesso I, considerando che l&#39;attivit&agrave; dell&#39;enzima &egrave; stato insensibile alle DTNB. Alla presenza del canale formando antibiotico alamethicin, complesso mitocondriale sono diventato sensibile alla DTNB. Complesso attivo n&eacute; disattivato in SMP ero inibito da glutatione ossidato (10 mM, pH 8.0, 75 min). I dati suggeriscono che il gruppo sulfidrilici transizione attiva-de active del complesso I cui &egrave; sensibile all&#39;inibizione da NEM &egrave; situato all&#39;interfaccia membrana-matrice interna. Questi dati includono la dipendenza osservata di inibizione, effetto del pH, forza ionica e modifica di doppio strato di membrana sulla reattivit&agrave; enzimatica verso DTNB e suo analogo neutro.

Topografia e prodotto chimico reattivit&agrave; del attivo inattivo transizione sensibile SH-gruppo dell&#39;ossidoriduttasi mitocondriale NADH: ubiquinone (complesso I).

&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x914D;&#x7F6E;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4F9D;&#x5B58;&#x30C1;&#x30AA;&#x30FC;&#x30EB; n-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;&#x30DE;&#x30EC;&#x30A4;&#x30DF;&#x30C9; &#xFF08;NEM&#xFF09; &#x3092;&#x6D78;&#x900F;&#x819C;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x3068;&#x975E;&#x8CAB;&#x901A;&#x30A2;&#x30CB;&#x30AA;&#x30F3;&#x6027; 5,5&#39;-dithiobis-(2-nitrobenzoate) (DTNB) &#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C9; &#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; submitochondrial &#x7C92;&#x5B50; (SMP) &#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;NEM &#x3068; DTNB &#x6025;&#x901F;&#x306B;&#x7121;&#x52B9;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F; SMP &#x3067;&#x79C1;&#x306F;&#x3002;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E; NEM &#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x963B;&#x6B62;, &#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306F; DTNB &#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3002;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30E1;&#x30C1;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F; DTNB &#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3082;&#x7121;&#x52B9;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x306A; SMP &#x3067;&#x306F;&#x9178;&#x5316;&#x578B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30BF;&#x30C1;&#x30AA;&#x30F3; (10 mM&#x3001;pH 8.0&#x3001;75 &#x5206;) &#x306B;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x9077;&#x79FB;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;/&#x30C9;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; sh &#x57FA;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x79C1;&#x306E; NEM &#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3057;&#x3066;&#x5185;&#x90E8;&#x819C;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x754C;&#x9762;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6291;&#x5236;&#x306E;&#x8868;&#x88CF;&#x5DEE;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x3001;pH&#x3001;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3068;&#x819C;&#x4E8C;&#x5206;&#x5B50;&#x819C;&#x4FEE;&#x98FE;&#x9175;&#x7D20;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027; DTNB &#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x4E2D;&#x7ACB;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x4E0A;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2; NADH: &#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30CE;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x9077;&#x79FB;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A; SH-&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x5730;&#x5F62;&#x3068;&#x5316;&#x5B66;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027; (&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x79C1;&#x306F;&#xFF09;&#x3002;

&#xACF5;&#xAC04; &#xBC30;&#xCE58; &#xBC0F; N-ethylmaleimide (NEM)&#xB97C; &#xAD00;&#xD1B5; &#xD558;&#xB294; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xBD80;&#xB294; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC885;&#xC18D; thiol&#xC758; &#xD654;&#xD559; &#xBC18;&#xC751;&#xC131; &#xBC0F; &#xBE44; &#xAD00;&#xD1B5; &#xC74C;&#xC774;&#xC628; 5,5&#39;-dithiobis-(2-nitrobenzoate) (DTNB) &#xD2B9;&#xC815; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBD80;-&#xC544;&#xC6C3; submitochondrial &#xC785;&#xC790; (SMP) &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB85C;. NEM &#xBC0F; DTNB &#xBE60;&#xB974;&#xAC8C; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560;&#xB41C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC800;&#xD574; SMP&#xC5D0; &#xB098;. &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; NEM &#xBC1C;&#xC0DD; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xB098;, &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; DTNB&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xBC18;&#xBA74;. &#xCC44;&#xB110; &#xD615;&#xC131; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C; alamethicin &#xC874;&#xC7AC; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; DTNB&#xC5D0; &#xACFC;&#xBBFC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD65C;&#xC131;&#xB3C4; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xD560; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; SMP&#xC5D0;&#xC11C; &#xB098; &#xC0B0;&#xD654; glutathione (10mm, pH 8.0, 75 &#xBD84;)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC561;&#xD2F0;&#xBE0C;/&#xB514; active &#xC804;&#xD658; sulfhydryl &#xADF8;&#xB8F9; &#xB0B4;&#xAC00; NEM&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;&#xB97C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xB294; &#xC788;&#xB294; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB9C9; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0;&#xB294; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC758; &#xD3B8;&#xC131; &#xC885;&#xC18D;&#xC131;, pH, &#xC774;&#xC628; &#xAC15;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; bilayer &#xC218;&#xC815; DTNB&#xC640;&#xC758; &#xC911;&#xB9BD; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD65C;&#xC131; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xC804;&#xD658; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; SH-&#xADF8;&#xB8F9; ubiquinone NADH &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;: oxidoreductase&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC9C0;&#xD615; &#xBC0F; &#xD654;&#xD559; &#xBC18;&#xC751; (&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB098;).

El arreglo espacial y la reactividad qu&iacute;mica de la activaci&oacute;n dependiente de tiol en el complejo mitocondrial estaba estudiado usando la membrana penetrante N-etilmaleimida (NEM) y no-penetrantes ani&oacute;nico 5,5&#39;-dithiobis-(2-nitrobenzoate) (DTNB) como los inhibidores espec&iacute;ficos de la enzima en las mitocondrias y las part&iacute;culas submitochondrial de adentro hacia afuera (SMP). NEM tanto DTNB r&aacute;pidamente inhibici&oacute;n el complejo desactivado en SMP. En la mitocondria NEM causado inhibici&oacute;n r&aacute;pida del complejo I, mientras que la actividad de la enzima fue insensible a DTNB. En presencia de la formaci&oacute;n de canal alamethicin antibi&oacute;tico, complejo mitocondrial fui sensible a DTNB. Complejo activo ni desactivado en SMP estaba inhibido por el glutati&oacute;n oxidado (10 mM, pH 8.0, 75 min). Los datos sugieren que el grupo sulfidrilo de activo/de-semi-activo transici&oacute;n del complejo I que es sensible a la inhibici&oacute;n por NEM se encuentra en la interfaz de la membrana interna-matriz. Estos datos incluyen la dependencia de la unilateralidad de la inhibici&oacute;n, el efecto del pH, fuerza i&oacute;nica y modificaci&oacute;n de membrana bicapa en la reactividad de la enzima hacia DTNB y su an&aacute;logo neutral.

Reactividad qu&iacute;mica y topograf&iacute;a del activo-inactivo transici&oacute;n sensible SH-grupo en la oxidorreductasa mitocondrial NADH: ubiquinona (complejo I).

&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x9EC4;&#x7D20;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178; (FMN) &#x4ECE;&#x6C27;&#x5316;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; NADH&#xFF1A; &#x6CDB;&#x918C;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6; &#xFF08;&#x590D;&#x6742;&#x6211;&#xFF09; &#x63CF;&#x8FF0;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x9176;&#xFF0C;&#x5373;&#x4E09;&#x3001; NADH&#xFF1A; hexaammineruthenium &#x9C7C;&#x85E4;&#x916E;&#x4E0D;&#x533A;&#x5206;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x548C;&#x9C7C;&#x85E4;&#x916E;&#x654F;&#x611F; NADH&#xFF1A; &#x918C;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x6027;&#x6D3B;&#x52A8;&#x4E0B;&#x964D;&#x65F6;&#x725B;&#x5FC3; submitochondrial &#x7C92;&#x5B50;&#x4E0E; NADH &#x5B75;&#x5316;&#x9C7C;&#x85E4;&#x916E;&#x6216;&#x6C30;&#x5316;&#x7269;&#x5728;&#x78B1;&#x6027; ph &#x503C;&#x3002;FMN &#x4FDD;&#x62A4;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5B8C;&#x5168;&#x6062;&#x590D; NADH &#x8BF1;&#x5BFC;&#x706D;&#x6D3B;&#x800C;&#x6838;&#x9EC4;&#x7D20;&#x548C;&#x9EC4;&#x7D20;&#x817A;&#x560C;&#x5464;&#x4E8C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4E0D;&#x8FD9;&#x6837;&#x505A;&#x3002;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x51CF;&#x5C11;&#x590D;&#x6742;&#x6211;&#x5927;&#x5927;&#x524A;&#x5F31;&#x4E86;&#x7684; FMN &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x86CB;&#x767D;&#x4ECE;&#x800C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5176;&#x89E3;&#x79BB;&#x65F6;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x5168;&#x9176;&#x8FD8;&#x80FD;&#x6BD4;&#x4E0E; K (d (&#x7EA6; 10(-8) M ph &#x503C; 10.0&#xFF09;&#x3002;

&#x4ECE;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x819C;&#x7ED1;&#x5B9A; NADH &#x9EC4;&#x7D20;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x53EF;&#x9006;&#x89E3;&#x79BB;&#xFF1A; &#x6CDB;&#x918C;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; (&#x590D;&#x6742;&#x6211;&#xFF09;&#x3002;

Conditions for the reversible dissociation of flavin mononucleotide (FMN) from the membrane-bound mitochondrial NADH:ubiquinone oxidoreductase (complex I) are described. The catalytic activities of the enzyme, i.e. rotenone-insensitive NADH:hexaammineruthenium III reductase and rotenone-sensitive NADH:quinone reductase decline when bovine heart submitochondrial particles are incubated with NADH in the presence of rotenone or cyanide at alkaline pH. FMN protects and fully restores the NADH-induced inactivation whereas riboflavin and flavin adenine dinucleotide do not. The data show that the reduction of complex I significantly weakens the binding of FMN to protein thus resulting in its dissociation when the concentration of holoenzyme is comparable with K(d ( approximately 10(-8)M at pH 10.0).

Reversible dissociation of flavin mononucleotide from the mammalian membrane-bound NADH: ubiquinone oxidoreductase (complex I).

Conditions pour la dissociation r&eacute;versible de la flavine mononucl&eacute;otide (FMN) de l&#39;oxydor&eacute;ductase membranaire mitochondriale NADH : ubiquinone (complexe I) sont d&eacute;crites. L&#39;activit&eacute; catalytique de l&#39;enzyme, c&#39;est-&agrave;-dire r&eacute;ductase insensible &agrave; la rot&eacute;none NADH : hexaammineruthenium III et sensibles &agrave; la rot&eacute;none NADH : quinone r&eacute;ductase diminue lorsque les particules submitochondriales coeur bovine sont incub&eacute;s avec NADH en pr&eacute;sence de rot&eacute;none ou de cyanure &agrave; pH alcalin. FMN prot&egrave;ge et restaure enti&egrave;rement l&#39;inactivation induite par le NADH, riboflavine et la flavine ad&eacute;nine dinucl&eacute;otide ne le font pas. Les donn&eacute;es montrent que la r&eacute;duction du complexe j&#39;ai affaiblit consid&eacute;rablement la liaison de la FMN &agrave; la prot&eacute;ine, ce qui entra&icirc;ne sa dissociation lorsque la concentration de l&#39;holoenzyme est comparable avec K (d (environ 10(-8) M &agrave; pH 10,0).

Une dissociation r&eacute;versible de la flavine mononucl&eacute;otide de la NADH membranaires mammif&egrave;res : oxydor&eacute;ductase d&#39;ubiquinone (complexe I).

Bedingungen f&uuml;r die reversible Dissoziation von Flavin Mononucleotide (FMN) von der Membrane-springen mitochondriale NADH: Ubiquinon-Oxidoreduktase (Komplex I) werden beschrieben. Die katalytische T&auml;tigkeit des Enzyms, d.h. Rotenon-unempfindliche NADH: Hexaammineruthenium III-Reduktase und Rotenon-Sensitive NADH: Chinon-Reduktase ablehnen wenn Rinder Herz Submitochondrial Partikel mit NADH in Anwesenheit von Rotenon oder Cyanid bei alkalischen pH-Wert inkubiert werden. FMN sch&uuml;tzt und die NADH-induzierte Inaktivierung vollst&auml;ndig wiederhergestellt, Riboflavin und Flavin-Adenin-Dinucleotid nicht. Die Daten zeigen, dass die Verringerung des Komplexes ich erheblich schw&auml;cht die Bindung von FMN zu Protein, wodurch sich seine Dissoziation, wenn die Konzentration der Erfahrung ist vergleichbar mit K (d (ca. 10(-8) M bei pH 10,0).

Reversible Dissoziation von Flavin-Mononucleotide aus der S&auml;ugetier-membrangebundener NADH: Ubiquinon-Oxidoreduktase (Komplex ich).

Condizioni per la dissociazione reversibile di flavina mononucleotide (FMN) dall&#39;ossidoriduttasi associato a membrana mitocondriale NADH: ubiquinone (complesso I) sono descritti. L&#39;attivit&agrave; catalitica dell&#39;enzima, cio&egrave; reduttasi rotenone-insensibile NADH: hexaammineruthenium III e rotenone sensibili NADH: chinone reduttasi declino quando particelle di cuore bovino submitochondrial vengono incubati con NADH in presenza di rotenone o cianuro a pH alcalino. FMN protegge e ripristina completamente l&#39;inattivazione indotta dal NADH mentre riboflavina e Flavina adenina dinucleotide non. I dati mostrano che la riduzione del complesso significativamente indebolisce il legame di FMN alla proteina conseguente sua dissociazione quando la concentrazione di esonucleasica &egrave; paragonabile con K (d (circa 10(-8) M a pH 10.0).

Reversibile dissociazione di flavina mononucleotide dal NADH membrana-limiti dei mammiferi: ossidoriduttasi ubichinone (complesso I).

&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CE;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#xFF08;FMN&#xFF09; &#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2; NADH: &#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30CE;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x53EF;&#x9006;&#x6027;&#x89E3;&#x96E2;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6; &#xFF08;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x79C1;&#x306F;&#xFF09; &#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Submitochondrial &#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x30A6;&#x30B7;&#x5FC3;&#x7B4B; NADH &#x304C;&#x30ED;&#x30C6;&#x30CE;&#x30F3;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B7;&#x30A2;&#x30F3;&#x5316;&#x30A2;&#x30EB;&#x30AB;&#x30EA;&#x306E; pH &#x3067;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5B75;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x30ED;&#x30C6;&#x30CE;&#x30F3;&#x7121;&#x4F9D;&#x5B58; NADH: hexaammineruthenium III &#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x3068;&#x30ED;&#x30C6;&#x30CE;&#x30F3;&#x654F;&#x611F; NADH: &#x30AD;&#x30CE;&#x30F3;&#x306E;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x89E6;&#x5A92;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;FMN &#x4FDD;&#x8B77;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;&#x3068;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3082;&#x306E;&#x304C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B; NADH &#x8A98;&#x8D77;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x524A;&#x6E1B;&#x306F;&#x5927;&#x5E45;&#x306E; FMN &#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30DB;&#x30ED;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C; K (d &#xFF08;&#x7D04; 10(-8) M ph 10.0)&#x3002; &#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x3068;&#x304D;&#x3053;&#x3046;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x5F31;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x53EF;&#x9006;&#x6027;&#x89E3;&#x96E2;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30D3;&#x30F3;&#x30E2;&#x30CE;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x54FA;&#x4E73;&#x985E;&#x306E;&#x819C;&#x7D50;&#x5408;&#x578B; NADH &#x304B;&#x3089;: &#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30CE;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20; (&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x79C1;&#x306F;&#xFF09;&#x3002;

Ubiquinone NADH: &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; oxidoreductase&#xC5D0;&#xC11C; &#xD50C; &#xB77C;&#xBE48; mononucleotide (FMN)&#xC758; &#xAC00;&#xC5ED; &#xBD84;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xAC74; (&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB098;)&#xC640; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC989;, NADH: hexaammineruthenium III&#xC5D0;&#xB85C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; reductase&#xC640;&#xB85C; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; NADH: quinone reductase &#xD6A8;&#xC18C;&#xC758; &#xCD09;&#xB9E4; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC18C; &#xC2EC;&#xC7A5; submitochondrial &#xC785;&#xC790;&#xB294;&#xB85C; &#xB610;&#xB294; &#xC54C;&#xCE7C;&#xB9AC; &#xC131; Ph&#xC5D0;&#xC11C; &#xCCAD;&#xC0B0;&#xAC00; &#xB9AC;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; NADH incubated &#xB54C; &#xAC70;&#xC808;. FMN &#xBCF4;&#xD638; &#xD558; &#xACE0; &#xB9AC; &#xBCF4; &#xD50C; &#xB77C;&#xBE48;&#xC640; &#xD50C; &#xB77C;&#xBE48; &#xC544;&#xB370;&#xB2CC; &#xB514;&#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC5C6;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; NADH &#xC720;&#xB3C4; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xC644;&#xBCBD; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF5;&#xC6D0;. &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xAC10;&#xC18C; &#xB0B4;&#xAC00; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC57D;&#xD654; holoenzyme &#xB18D;&#xB3C4; K (d (&#xC57D; 10(-8) M&#xC5D0; pH 10.0)&#xC640; &#xBE44;&#xAD50;&#xD560; &#xB54C; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; FMN&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;.

&#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB9C9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; NADH&#xC5D0;&#xC11C; &#xD50C; &#xB77C;&#xBE48; mononucleotide&#xC758; &#xAC00;&#xC5ED; &#xBD84;&#xB9AC;: ubiquinone oxidoreductase (&#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xB098;).

Condiciones para la disociaci&oacute;n reversible de flavina (FMN) de las oxidorreductasas unida a la membrana mitocondrial NADH: ubiquinona (complejo I) se describen. La actividad catal&iacute;tica de la enzima, es decir, reductasa rotenona-insensible NADH: hexaammineruthenium III y sensible a la rotenona NADH: quinona reductasa disminuyen cuando part&iacute;culas submitochondrial de coraz&oacute;n bovino se incuban con NADH en presencia de rotenona o cianuro en pH alcalino. FMN protege y restaura completamente la inactivaci&oacute;n inducida por NADH mientras que riboflavina y FLAVINA adenina dinucle&oacute;tido, no. Los datos muestran que la reducci&oacute;n del complejo significativamente debilita la Uni&oacute;n de la FMN a la prote&iacute;na, lo que resulta en su disociaci&oacute;n cuando la concentraci&oacute;n de holoenzyme es comparable con K (d (aproximadamente 10(-8) M a pH 10.0).

Irina Gostimskaya

Faculty of Life Sciences

University of Manchester

Preparation of Highly Coupled Rat Heart Mitochondria

Irina Gostimskaya

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University of Manchester

Preparation of Highly Coupled Rat Heart Mitochondria

Faculty of Life Sciences