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Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant

Viral infections cause morbidity and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. We and others have successfully ...

Baylor College of Medicine

Adoptively &#x8F6C;&#x79FB;&#x80BF;&#x7624;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE; (Ctl) &#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x4F5C;&#x7528;&#x88AB;&#x53D7;&#x5230;&#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x5185;&#x5C55;&#x5F00;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x6709;&#x9650;&#x3002;&#x653F;&#x5E9C;&#x5F53;&#x5C40;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; 2 (IL-2) &#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x514B;&#x670D;&#x8FD9;&#x4E00;&#x5C40;&#x9650;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x6BD2;&#x6027;&#x548C;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x5305;&#x62EC;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x6269;&#x5927;&#x9650;&#x5236;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6218;&#x7565;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x4EF7;&#x503C;&#x3002;&#x53D1;&#x73B0;&#x662F;&#x5426;&#x7531;&#x81EA;&#x5DF1;&#x7684; Ctl &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EF;&#x80FD;&#x514B;&#x670D;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9650;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7231;&#x6CFC;&#x65AF;&#x5766;&#x5DF4;&#x5C14;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; Ctl (EBV Ctl) &#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2 &#x548C;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-15 &#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2 &#x6216;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-15 &#x589E;&#x52A0; EBV Ctl &#x4F53;&#x5916;&#x548C;&#x4F53;&#x5185;&#x4E25;&#x91CD;&#x8054;&#x5408;&#x514D;&#x75AB;&#x7F3A;&#x9677;&#x75C5; (SCID) &#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x6269;&#x5C55;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5BFC; Ctl &#x5C3D;&#x7BA1;&#x4E25;&#x683C;&#x6297;&#x539F;&#x4F9D;&#x8D56;&#xFF0C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x5217;&#x5165;&#x81EA;&#x6740;&#x57FA;&#x56E0;&#x5904;&#x7406; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x81EA;&#x4E3B;&#x589E;&#x957F;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x578B;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x86CB;&#x767D;&#x9176; 9 &#x81EA;&#x6740;&#x57FA;&#x56E0;&#x5C06;&#x7EB3;&#x5165;&#x5141;&#x8BB8;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0; Ctl &#x6709;&#x6548;&#x6D88;&#x9664;&#x540E;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x5316;&#x5B66;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x4E8C;&#x805A;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E86;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x548C;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3002;

&#x5171;&#x63D0;&#x9AD8;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x5B89;&#x5168;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x81EA;&#x6740;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;

The antitumor effect of adoptively transferred tumor-specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is impaired by the limited capacity of these cells to expand within the tumor microenvironment. Administration of interleukin 2 (IL-2) has been used to overcome this limitation, but the systemic toxicity and the expansion of unwanted cells, including regulatory T cells, limit the clinical value of this strategy. To discover whether transgenic expression of lymphokines by the CTLs themselves might overcome these limitations, we evaluated the effects of transgenic expression of IL-2 and IL-15 in our model of Epstein Barr Virus-specific CTLs (EBV-CTLs). We found that transgenic expression of IL-2 or IL-15 increased the expansion of EBV-CTLs both in vitro and in vivo in a severe combined immunodeficiency disease (SCID) mouse model and enhanced antitumor activity. Although the proliferation of these cytokine genes transduced CTLs remained strictly antigen dependent, clinical application of this approach likely requires the inclusion of a suicide gene to deal with the potential development of T-cell mutants with autonomous growth. We found that the incorporation of an inducible caspase-9 suicide gene allowed efficient elimination of transgenic CTLs after exposure to a chemical inducer of dimerization, thereby increasing the safety and feasibility of the approach.

Co-expression of cytokine and suicide genes to enhance the activity and safety of tumor-specific cytotoxic T lymphocytes.

L&#39;effet antitumoral de Moutschen transf&eacute;r&eacute;s sp&eacute;cifique T cytotoxiques (CTL) est alt&eacute;r&eacute;e par la capacit&eacute; limit&eacute;e de ces cellules &agrave; d&eacute;velopper dans le microenvironnement de la tumeur. Administration de l&#39;interleukine 2 (il-2) a &eacute;t&eacute; utilis&eacute;e pour surmonter cette limitation, mais la toxicit&eacute; syst&eacute;mique et l&#39;expansion des cellules ind&eacute;sirables, y compris les lymphocytes T r&eacute;gulateurs, limitent l&#39;utilit&eacute; clinique de cette strat&eacute;gie. Pour d&eacute;couvrir si l&#39;expression transg&eacute;nique de lymphokines par les CTL pourrait surmonter ces limites, nous avons &eacute;valu&eacute; les effets de l&#39;expression transg&eacute;nique d&#39;il-2 et IL-15 dans notre mod&egrave;le de CTL sp&eacute;cifiques Epstein Barr Virus (EBV-CTL). Nous avons trouv&eacute; qu&#39;expression transg&eacute;nique de IL-2 ou IL-15 accrue l&#39;expansion de l&#39;EBV-CTL in vitro et in vivo dans un mod&egrave;le murin de d&eacute;ficit immunitaire combin&eacute; s&eacute;v&egrave;re (DICS) de la maladie et une activit&eacute; antitumorale. Bien que la prolif&eacute;ration de ces g&egrave;nes de cytokines transduites CTL est rest&eacute;e strictement antig&egrave;ne d&eacute;pendant, l&#39;application clinique de cette approche probable requiert l&#39;insertion d&#39;un g&egrave;ne suicide pour faire face &agrave; l&#39;apparition potentielle de lymphocytes mutants avec une croissance autonome. Nous avons trouv&eacute; que l&#39;incorporation d&#39;un g&egrave;ne inductible caspase-9 suicide permet une &eacute;limination efficace des CTL transg&eacute;niques apr&egrave;s exposition &agrave; un inducteur chimique de dim&eacute;risation, augmentant ainsi la s&eacute;curit&eacute; et la faisabilit&eacute; de l&#39;approche.

Co-expression des g&egrave;nes de cytokines et de suicide pour renforcer l&#39;activit&eacute; et la s&eacute;curit&eacute; des lymphocytes T cytotoxiques de tumeur sp&eacute;cifique.

Die antitumor-Wirkung von adoptively &uuml;bertragenen tumorspezifische cytotoxische T-Lymphozyten (CTLs) wird durch die begrenzte Kapazit&auml;t dieser Zellen die Tumor-Mikromilieu Expansionsm&ouml;glichkeiten beeintr&auml;chtigt. Verwaltung von Interleukin 2 (Il-2) wurde verwendet, um diese Einschr&auml;nkung zu umgehen, aber die systemische Toxizit&auml;t und der Ausbau der unerw&uuml;nschten Zellen, einschlie&szlig;lich der regulatorische T-Zellen, die klinische Grenzwert dieser Strategie. Um herauszufinden, ob transgene Ausdruck von Lymphokinen durch die CTLs sich diese Einschr&auml;nkungen &uuml;berwinden k&ouml;nnte, werteten wir die Auswirkungen der transgene Ausdruck Il und IL-15 in unserem Modell des Epstein-Barr-Virus-spezifischen CTLs (EBV-CTLs). Wir fanden, dass transgene Ausdruck Il oder IL-15 den Ausbau des EBV-CTLs in vitro und in vivo eine schwere kombinierte Immundefizienz (SCID)-Krankheit-Mausmodell erh&ouml;ht und antitumor-Aktivit&auml;t verbesserte. Obwohl die Verbreitung dieser Zytokin-Gene transduzierten blieb CTLs Antigen abh&auml;ngigen, klinische Anwendung dieses Ansatzes, die wahrscheinlich die Einbeziehung eines Selbstmord-Gens zu bew&auml;ltigen, die m&ouml;gliche Entwicklung von T-Zell-Mutanten mit autonomen Wachstum erfordert. Wir fanden, dass die Einbeziehung der ein durch Induktion Caspase-9-Selbstmord-gen erlaubt effiziente Beseitigung von transgenen CTLs nach Exposition gegen&uuml;ber einem chemischen Induktor der Dimerisierung, und erh&ouml;ht die Sicherheit und Realisierbarkeit des Ansatzes.

Koexpression von Cytokine und Selbstmord-gen zur Verbesserung der Aktivit&auml;t und Sicherheit der tumorspezifische cytotoxische T-Lymphozyten.

L&#39;effetto antitumorale dei linfociti T citotossici (CTL), adoptively trasferiti tumore-specifici &egrave; alterato dalla capienza limitata di queste cellule per espandere all&#39;interno del microambiente tumorale. Amministrazione dell&#39;interleuchina-2 (IL-2) &egrave; stato utilizzato per superare questo limite, ma la tossicit&agrave; sistemica e l&#39;espansione delle cellule indesiderabili, comprese le cellule T regolatorie, limitare il valore clinico di questa strategia. Per scoprire se espressione transgenica di linfochine da CTL si potrebbe superare queste limitazioni, abbiamo valutato gli effetti dell&#39;espressione transgenica del-2 e IL 15 nel nostro modello di CTL specifici per Epstein Barr Virus (EBV-CTL). Abbiamo trovato che espressione transgenica di IL-2 o IL 15 aumentato l&#39;espansione dell&#39;EBV-CTL in vitro e in vivo in un modello murino di immunodeficienza combinata grave (SCID) malattia e rafforzata attivit&agrave; antitumorale. Anche se la proliferazione di questi geni delle citochine transduced CTL &egrave; rimasto rigorosamente antigene dipendente, applicazione clinica di questo approccio probabilmente richiede l&#39;inserimento di un gene suicida a trattare con il potenziale di sviluppo di mutanti della T-cellula con crescita autonoma. Abbiamo trovato che l&#39;incorporazione di un gene inducibile caspase-9 suicidio consentito efficiente eliminazione di CTL transgenici dopo esposizione a un induttore chimico di dimerizzazione, aumentando cos&igrave; la sicurezza e la fattibilit&agrave; dell&#39;approccio.

Co-Expression dei geni delle citochine e suicidio per migliorare l&#39;attivit&agrave; e la sicurezza dei linfociti T citotossici specifici per tumore.

&#x9069;&#x5FDC;&#x7684;&#x8EE2;&#x9001;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x816B;&#x760D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027; T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403; (Ctl) &#x306E;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x52B9;&#x679C;&#x5185;&#x816B;&#x760D;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x3092;&#x5C55;&#x958B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5BB9;&#x91CF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x640D;&#x306A;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7BA1;&#x7406;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3; 2 (IL-2) &#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x3092;&#x514B;&#x670D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5168;&#x8EAB;&#x6BD2;&#x6027;&#x3068;&#x5236;&#x5FA1;&#x6027; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x4E0D;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6226;&#x7565;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x4FA1;&#x5024;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x767A;&#x73FE;&#x30EA;&#x30F3;&#x30DB;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3; Ctl &#x81EA;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x9650;&#x754C;&#x3092;&#x514B;&#x670D;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E; IL-2 &#x3068; IL 15 &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x30A8;&#x30D7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30A4;&#x30F3; &#x30D0;&#x30FC;&#x30EB; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x56FA;&#x6709;&#x306E; Ctl (EBV Ctl) &#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; IL-2 &#x307E;&#x305F;&#x306F; IL 15 &#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x767A;&#x73FE;&#x304C; EBV Ctl in vitro &#x304A;&#x3088;&#x3073; in vivo &#x91CD;&#x75C7;&#x8907;&#x5408;&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x75BE;&#x60A3; (SCID) &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x5897;&#x52A0;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x304C; Ctl &#x306F;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x5FDC;&#x7528;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x81EA;&#x5F8B;&#x7684;&#x306A;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x81EA;&#x6BBA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5305;&#x542B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6297;&#x539F;&#x6B8B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B89;&#x5168;&#x3068;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x578B;&#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; 9 &#x81EA;&#x6BBA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5B9A;&#x6B3E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF; Ctl &#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x9664;&#x53BB;&#x5316;&#x5B66;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B5;&#x306E;&#x30C0;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5316;&#x3001;&#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x304C;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x6D3B;&#x52D5;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027; T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x81EA;&#x6BBA;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;

Adoptively &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; cytotoxic T &#xC138;&#xD3EC; (Ctl) antitumor &#xD6A8;&#xACFC; &#xC885;&#xC591; microenvironment &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC7A5; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC6A9;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC190;&#xC0C1; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8; 2&#xC758; &#xAD00;&#xB9AC; (&#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2)&#xC774;&#xC774; &#xC81C;&#xD55C;&#xC744; &#xADF9;&#xBCF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xB3C5;&#xC131; &#xBC0F; &#xADDC;&#xC81C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6D0;&#xCE58; &#xC54A;&#xB294; &#xC140;&#xC758; &#xD655;&#xC7A5; &#xC81C;&#xD55C;&#xC774; &#xC804;&#xB7B5;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xAC00;&#xCE58;. &#xC2A4;&#xC2A4;&#xB85C; Ctl&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; lymphokines&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC2DD; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD55C;&#xACC4;&#xB97C; &#xADF9;&#xBCF5; &#xC218; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xC5E1; &#xC2A4;&#xD0C0;&#xC778; &#xBC14; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD2B9;&#xC815; Ctl (EBV Ctl)&#xC758; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2&#xC640; IL-15&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC2DD;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2 &#xB610;&#xB294; IL-15&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC2DD; EBV-Ctl &#xCCB4; &#xC678; &#xACE0; &#xC2EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xD569; &#xB41C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xACB0;&#xD54D; &#xC9C8;&#xD658; (SCID) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xD655;&#xC7A5; &#xC99D;&#xAC00; antitumor &#xD65C;&#xB3D9; &#xAC15;&#xD654;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0;&#xCE74;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD655;&#xC0B0; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; Ctl &#xB0A8;&#xC544; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C;&#xC774; &#xC811;&#xADFC; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC790;&#xC728; &#xC131;&#xC7A5; T &#xC138;&#xD3EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xB2E4;&#xB8E8;&#xB294; &#xC790;&#xC0B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC885;&#xC18D; &#xD56D; &#xC6D0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; caspase-9 &#xC790;&#xC0B4;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; dimerization&#xC758; &#xD654;&#xD559; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB178;&#xCD9C; &#xB41C; &#xD6C4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; Ctl&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xAC70;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368; &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xACE0; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xD0C0;&#xB2F9;&#xC131;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xBC1C;&#xACAC;.

&#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; cytotoxic T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC548;&#xC804;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; cytokine&#xACFC; &#xC790;&#xC0B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; co-expression.

El efecto antitumoral de los linfocitos eventualmente transferidos tumor-espec&iacute;ficos citot&oacute;xicos T (CTLs) se deteriora por la limitada capacidad de estas c&eacute;lulas para ampliar en el microambiente tumoral. Administraci&oacute;n de interleucina 2 (IL-2) se ha utilizado para superar esta limitaci&oacute;n, pero la toxicidad sist&eacute;mica y la expansi&oacute;n de las c&eacute;lulas no deseadas, incluyendo las c&eacute;lulas T reguladoras, limitan la utilidad cl&iacute;nica de esta estrategia. Para descubrir si la expresi&oacute;n transg&eacute;nica de linfocinas por los CTLs podr&iacute;a superar estas limitaciones, evaluamos los efectos de la expresi&oacute;n transg&eacute;nica de IL-2 y de IL-15 en nuestro modelo de CTLs espec&iacute;ficos Virus Epstein Barr (EBV-listas CTL). Encontramos que la expresi&oacute;n transg&eacute;nica de IL-2 o IL-15 aument&oacute; la expansi&oacute;n de EBV-CTLs tanto in vitro como in vivo en un modelo murino de inmunodeficiencia combinada severa (SCID) de la enfermedad y mayor actividad antitumoral. Aunque la proliferaci&oacute;n de estos genes de citoquinas transduced CTLs segu&iacute;a siendo estrictamente ant&iacute;geno dependiente, la aplicaci&oacute;n cl&iacute;nica de este enfoque probablemente requiere la inclusi&oacute;n de un gene del suicidio para tratar con el potencial desarrollo de mutantes del T-cell con crecimiento aut&oacute;nomo. Encontramos que la incorporaci&oacute;n de un gene del suicidio de caspase-9 inducible permite la eliminaci&oacute;n eficiente de transg&eacute;nicos CTLs despu&eacute;s de la exposici&oacute;n a un qu&iacute;mico inductor de dimerizaci&oacute;n, aumentando as&iacute; la seguridad y la viabilidad del enfoque.

Coexpresi&oacute;n de genes de citocinas y suicidio para mejorar la actividad y la seguridad de los linfocitos T citot&oacute;xicos tumorales.

&#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; cytotoxic T &#xC138;&#xD3EC; (Ctl)&#xC758; &#xC785;&#xC591; &#xC804;&#xC1A1; &#xC545;&#xC131; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1D;&#xAD00;&#xC801;&#xC778; &#xC784;&#xC0C1; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. Adoptively &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; Ctl&#xC744; &#xC99D;&#xC2DD;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC874; &#xC6B0;&#xC704;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB3C4;&#xC804; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; lymphodepletion&#xC640; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; interleukin-2 (&#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2)&#xC758; &#xD604;&#xC7AC; CTL &#xC0DD;&#xC874;&#xACFC; &#xC785;&#xC591; &#xC804;&#xC1A1; &#xD6C4; &#xD655;&#xC7A5;&#xC744; &#xAC1C;&#xC120; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC790;&#xC8FC; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xCE21;&#xBA74; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xADDC;&#xC81C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-7 &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xAD00;&#xB9AC; &#xB418;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; homeostatic cytokine&#xC740;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-7 &#xC21C;&#xC9C4;&#xD55C; &#xBC0F; &#xBA54;&#xBAA8;&#xB9AC; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xD655;&#xC7A5;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; IL-7 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC54C;&#xD30C; &#xCCB4;&#xC778; (IL 7Ralpha) Ctl&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC774;&#xC774; cytokine&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5;&#xC740; &#xAC78;&#xB85C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Ctl &#xC720;&#xC804;&#xC790; IL 7Ralpha &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131; &#xB610;&#xB294; &#xC885;&#xC18D;&#xC131;, &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xC218;&#xC815; &#xC5C6;&#xC774; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xAC10;&#xB9C8; (gammac) &#xCCB4;&#xC778; cytokines &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0;&#xC774; &#xC870;&#xC791;&#xC758; IL-7&#xC774; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xADF8; &#xC7AC;&#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xC218;&#xC815;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC740; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC6D0;&#xCE58; &#xC54A;&#xB294; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC5C6;&#xC774; Ctl&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xD655;&#xB300;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-7 &#xC751;&#xB2F5; &#xBCF5;&#xC6D0; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; cytotoxic T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;.

&#x7EE7;&#x8F6C;&#x8F93;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE; (Ctl) &#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x5BA2;&#x89C2;&#x6076;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x5411; adoptively &#x8F6C;&#x79FB; Ctl &#x63D0;&#x4F9B;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x751F;&#x5B58;&#x4F18;&#x52BF;&#x7684;&#x9009;&#x9879;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6311;&#x6218;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6539;&#x5584;&#x5176;&#x529F;&#x6548;&#x3002;&#x4E3B;&#x673A; lymphodepletion &#x548C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20; 2 (IL-2) &#x7684;&#x7BA1;&#x7406;&#x76EE;&#x524D;&#x7528;&#x6765;&#x63D0;&#x9AD8; CTL &#x751F;&#x5B58;&#x548C;&#x6269;&#x5927;&#x540E;&#x7EE7;&#x8F6C;&#x8F93;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5F80;&#x5F80;&#x4E0E;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x8D1F;&#x9762;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x53EF;&#x80FD;&#x589E;&#x52A0; T &#x89C4;&#x7BA1;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-7 &#x662F;&#x5B89;&#x5168;&#x65B9;&#x5F0F;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7BA1;&#x7406;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6052;&#x4E45;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5F3A;&#x52B2;&#x6269;&#x5F20;&#x7684;&#x5929;&#x771F;&#x548C;&#x8BB0;&#x5FC6; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-7&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-7 &#x53D7;&#x4F53; &alpha; &#x94FE; &#xFF08;IL 7Ralpha&#xFF09; &#x7531; Ctl &#x7684;&#x6392;&#x9664;&#x4E86;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5230;&#x6B64;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x53EF;&#x4EE5;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970; Ctl&#xFF0C;&#x91CD;&#x65B0;&#x8868;&#x8FBE;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-7Ralpha&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x8FD9;&#x79CD;&#x64CD;&#x7EB5;&#x8FD8;&#x539F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x5230;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-7 &#x65E0;&#x660E;&#x663E;&#x4FEE;&#x6539;&#x5176;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6216;&#x4F9D;&#x8D56;&#x9879;&#xFF0C;&#x548C;&#x800C;&#x4E0D;&#x66F4;&#x6539;&#x5176;&#x54CD;&#x5E94;&#x5176;&#x4ED6;&#x5E38;&#x89C1;&#x4F3D;&#x739B; (gammac) &#x94FE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x53EF;&#x80FD;&#x5141;&#x8BB8;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x6269;&#x5F20;&#x7684; Ctl&#xFF0C;&#x65E0;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2 &#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x6709;&#x5BB3;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x80BF;&#x7624;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FD8;&#x539F;&#x53CD;&#x5E94;&#x5230;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-7 &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x64CD;&#x7EB5;&#x3002;

Adoptive transfer of antigen-specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs) can induce objective clinical responses in patients with malignant diseases. The option of providing a proliferative and survival advantage to adoptively transferred CTLs remains a challenge to improve their efficacy. Host lymphodepletion and administration of recombinant interleukin-2 (IL-2) are currently used to improve CTL survival and expansion after adoptive transfer, but these approaches are frequently associated with significant side effects and may increase proliferation of T regulatory cells. IL-7 is a crucial homeostatic cytokine that has been safely administered as a recombinant protein. However, while IL-7 induces robust expansion of naive and memory T lymphocytes, the lack of expression of the IL-7 receptor alpha chain (IL-7Ralpha) by CTLs precludes their response to this cytokine. We found that CTLs can be genetically modified to re-express IL-7Ralpha, and that this manipulation restores the response of these cells to IL-7 without apparent modification of their antigen specificity or dependency, and without changing their response to other common gamma (gammac) chain cytokines. This approach may allow selective expansion of CTLs without the unwanted effects associated with IL-2.

Genetic manipulation of tumor-specific cytotoxic T lymphocytes to restore responsiveness to IL-7.

Le transfert adoptif de lymphocytes sp&#xE9;cifiques de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne T cytotoxiques (CTL) peut induire des r&#xE9;ponses objectives cliniques chez les patients atteints de maladies malignes. La possibilit&#xE9; de fournir un avantage prolif&#xE9;ratif et la survie de CTL adoptive transf&#xE9;r&#xE9;s reste un d&#xE9;fi d&#x26;#39;am&#xE9;liorer leur efficacit&#xE9;. Lymphodepletion h&#xF4;te et l&#x26;#39;administration de l&#x26;#39;interleukine-2 recombinante (IL-2) sont actuellement utilis&#xE9;s pour am&#xE9;liorer la survie et l&#x26;#39;expansion de CTL apr&#xE8;s transfert adoptif, mais ces approches sont souvent associ&#xE9;es &#xE0; des effets secondaires importants et peuvent augmenter la prolif&#xE9;ration de cellules r&#xE9;gulatrices T. IL-7 est une cytokine cruciale hom&#xE9;ostatique qui a &#xE9;t&#xE9; administr&#xE9; en toute s&#xE9;curit&#xE9; comme une prot&#xE9;ine recombinante. Cependant, alors que l&#x26;#39;IL-7 induit une expansion robuste des lymphocytes T na&#xEF;fs et de la m&#xE9;moire, le manque d&#x26;#39;expression de la cha&#xEE;ne alpha du r&#xE9;cepteur IL-7 (IL-7Ralpha) par les CTL emp&#xEA;che leur r&#xE9;ponse &#xE0; cette cytokine. Nous avons trouv&#xE9; que les CTL peuvent &#xEA;tre g&#xE9;n&#xE9;tiquement modifi&#xE9;s pour re-express IL-7Ralpha, et que cette manipulation restaure la r&#xE9;ponse de ces cellules &#xE0; l&#x26;#39;IL-7 sans modification apparente de leur sp&#xE9;cificit&#xE9; antig&#xE9;nique ou de d&#xE9;pendance, et sans changer leur r&#xE9;ponse &#xE0; d&#x26;#39;autres gamma commune ( gammac) cytokines cha&#xEE;ne. Cette approche peut permettre l&#x26;#39;expansion s&#xE9;lective de CTL, sans les effets ind&#xE9;sirables associ&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;IL-2.

Manipulation g&#xE9;n&#xE9;tique de la tumeur-lymphocytes T cytotoxiques sp&#xE9;cifiques pour restaurer la r&#xE9;activit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;IL-7

Adoptiven Transfer von Antigen-spezifische zytotoxische T-Lymphozyten (CTLs) kann Objektive klinische Reaktionen bei Patienten mit b&ouml;sartigen Erkrankungen ausl&ouml;sen. Die Option f&uuml;r einen proliferativen und &Uuml;berleben Vorteil auf der adoptively &uuml;bertragenen CTLs bleibt eine Herausforderung, ihre Wirksamkeit zu verbessern. Host Lymphodepletion und Verwaltung von rekombinantes Interleukin-2 (Il-2) sind derzeit zur Verbesserung der CTL &uuml;berleben und Expansion nach adoptiven Transfer, aber diese Ans&auml;tze sind h&auml;ufig mit erheblichen Nebenwirkungen verbunden und k&ouml;nnen die Verbreitung von regulatorischen T-Zellen erh&ouml;hen. IL-7 ist eine entscheidende hom&ouml;ostatische Cytokine, die sicher als rekombinantes Protein verabreicht wurde. W&auml;hrend IL-7 kr&auml;ftige Ausweitung der Naive und Speicher T-Lymphozyten induziert, schlie&szlig;t das Fehlen des Ausdrucks der IL-7-Rezeptor alpha-Kette (IL-7Ralpha) von CTLs jedoch ihre Reaktion auf diese Cytokine. Wir fanden CTLs k&ouml;nnen genetisch ver&auml;ndert werden, um die re-express IL-7Ralpha, und dass diese Manipulation die Antwort dieser Zellen zu IL-7 ohne offensichtliche &Auml;nderung ihrer Antigen-Spezifit&auml;t oder Abh&auml;ngigkeit und &auml;ndern ihre Reaktion auf andere gemeinsame Gamma (Gammac) Kette Zytokine wiederherstellt. Dieser Ansatz kann ohne die unerw&uuml;nschten Auswirkungen im Zusammenhang mit Il selektiven Ausbau CTLs.

Genmanipulation tumorspezifische cytotoxische T-Lymphozyten Reaktionsf&auml;higkeit zu IL-7 wiederherstellen.

Trasferimento adottivo di linfociti di T citotossici antigene-specifiche (CTL) pu&ograve; indurre oggettive risposte cliniche in pazienti con malattie maligne. L&#39;opzione di fornire un vantaggio proliferativo e la sopravvivenza di CTL adoptively trasferite rimane una sfida per migliorare la loro efficacia. Host lymphodepletion e la somministrazione di interleuchina-2 ricombinante (IL-2) sono attualmente utilizzati per migliorare la sopravvivenza del CTL e l&#39;espansione dopo il trasferimento adottivo, ma questi approcci sono frequentemente associati a significativi effetti collaterali e possono aumentare la proliferazione delle cellule regolatorie T. IL-7 &egrave; una citochina fondamentale omeostatica che &egrave; stata somministrata in modo sicuro come una proteina ricombinante. Tuttavia, mentre IL-7 induce robusta espansione dell&#39;ingenuo e linfociti T di memoria, la mancanza di espressione di IL-7 recettore alfa catena (IL 7Ralpha) da CTL preclude loro risposta a questa citochina. Abbiamo trovato che CTL pu&ograve; essere geneticamente modificato per riesprimerlo IL-7Ralpha, e che questa manipolazione ripristina la risposta di queste cellule per IL-7, senza apparente modificazione della loro specificit&agrave; antigenica o dipendenza e senza modificare la loro risposta alle altre comuni citochine catena gamma (gammac). Questo approccio pu&ograve; consentire l&#39;espansione selettiva di CTL senza gli effetti indesiderati associati con IL-2.

Manipolazione genetica dei linfociti T citotossici, tumore-specifici per ripristinare la reattivit&agrave; di IL-7.

&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#xFF08;CTL&#xFF09;&#x306E;&#x990A;&#x5B50;&#x79FB;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x60AA;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x3067;&#x5BA2;&#x89B3;&#x7684;&#x306A;&#x81E8;&#x5E8A;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x990A;&#x5B50;&#x306B;&#x8EE2;&#x9001;&#x3059;&#x308B;CTL&#x3092;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30AA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6709;&#x52B9;&#x6027;&#x3092;&#x5411;&#x4E0A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8AB2;&#x984C;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3;-2&#xFF08;IL-2&#xFF09;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;lymphodepletion&#x3068;&#x7BA1;&#x7406;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x990A;&#x5B50;&#x79FB;&#x5165;&#x5F8C;&#x3001;CTL&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x3068;&#x62E1;&#x5F35;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x91CD;&#x5927;&#x306A;&#x526F;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x5236;&#x5FA1;&#x6027;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; IL-7&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x5168;&#x306B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6295;&#x4E0E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; IL-7&#x306F;&#x30CA;&#x30A4;&#x30FC;&#x30D6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E1;&#x30E2;&#x30EA;&#x30FC;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x62E1;&#x5F35;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;CTL&#x306B;&#x3088;&#x308A;IL-7&#x30EC;&#x30BB;&#x30D7;&#x30BF;&#x30FC;&#x3B1;&#x9396;&#xFF08;IL-7Ralpha&#xFF09;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x6392;&#x9664;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3084;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x660E;&#x767D;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x6709;&#x7121;&#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;IL-7&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7279;&#x7570;&#x7684;CTL&#x304C;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x518D;&#x767A;&#x73FE;IL-7Ralpha&#x306B;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30AC;&#x30F3;&#x30DE;&#x7DDA;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5FDC;&#x7B54;&#xFF08;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001; gammac&#xFF09;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;IL-2&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x4E0D;&#x8981;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;CTL&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x62E1;&#x5927;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

IL-7&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x3092;&#x5FA9;&#x5143;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x64CD;&#x4F5C;

La transferencia adoptiva de ant&#xED;genos espec&#xED;ficos de los linfocitos T citot&#xF3;xicos (CTL) puede inducir respuestas objetivas cl&#xED;nicos en pacientes con enfermedades malignas. La opci&#xF3;n de proporcionar una ventaja proliferativa y la supervivencia de linfocitos T citot&#xF3;xicos adoptiva transferidos sigue siendo un desaf&#xED;o para mejorar su eficacia. Lymphodepletion host y administraci&#xF3;n de interleucina-2 (IL-2) se utilizan actualmente para mejorar la supervivencia y la expansi&#xF3;n de CTL despu&#xE9;s de la transferencia adoptiva, pero estos m&#xE9;todos son frecuentemente asociados con efectos secundarios significativos y puede aumentar la proliferaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas T reguladoras. IL-7 es una citocina fundamental homeost&#xE1;tico que se ha administrado de forma segura como una prote&#xED;na recombinante. Sin embargo, mientras que la IL-7 induce robusta expansi&#xF3;n de los linfocitos T v&#xED;rgenes y la memoria, la falta de expresi&#xF3;n de la cadena alfa del receptor de IL-7 (IL-7Ralpha) por CTL se opone a su respuesta a esta citoquina. Se encontr&#xF3; que el CTL pueden ser gen&#xE9;ticamente modificados para re-expresan IL-7Ralpha, y que esta manipulaci&#xF3;n restaura la respuesta de estas c&#xE9;lulas a la IL-7 sin modificaci&#xF3;n aparente de su especificidad de ant&#xED;geno o dependencia, y sin cambiar su respuesta a otra gamma com&#xFA;n ( gammac) citoquinas cadena. Este enfoque puede permitir la expansi&#xF3;n selectiva de CTL sin los efectos indeseables asociados con la IL-2.

La manipulaci&#xF3;n gen&#xE9;tica de los tumores espec&#xED;ficos de linfocitos T citot&#xF3;xicos para restaurar la sensibilidad a la IL-7

&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x7387;&#x548C;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x5728;&#x5F02;&#x57FA;&#x56E0;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D; (&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;) &#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x3002;&#x9884;&#x9632;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x8FD9;&#x4E9B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x751F;&#x4EA7;&#x548C;&#x5145;&#x6EE1;&#x7231;&#x6CFC;&#x65AF;&#x5766;-&#x5DF4;&#x5C14;&#x75C5;&#x6BD2; (EBV)&#x3001; &#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2; (CMV) &#x548C;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2; (Adv) &#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE; (Ctl)&#xFF0C;&#x6240;&#x793A;&#x6CE8;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C0F;&#x6570;&#x76EE;&#x6FC0;&#x589E;&#x4F53;&#x5185;&#x548C;&#x4FDD;&#x62A4;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x4FB5;&#x5BB3;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6709;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x9F13;&#x821E;&#x7684;&#x6210;&#x679C;&#xFF0C;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x91C7;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x505A;&#x6CD5;&#x9700;&#x8981;&#x6750;&#x6599;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x75C5;&#x6BD2; (EBV)&#x3001; &#x6602;&#x8D35;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5206;&#x7EA7;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x548C;&#x5236;&#x9020;&#x957F;&#x671F; &#xFF08;8-12 &#x5468;&#xFF09; &#x671F;&#x95F4;&#x53D7;&#x5230;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x6709;&#x5185;&#x6297;&#x539F;&#x6E90;&#x6027;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6297;&#x539F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7ADE;&#x4E89;&#x7EC6;&#x80DE; (Apc)&#xFF0C;&#x9650;&#x5236;&#x6269;&#x5C55;&#x5230;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EE3;&#x7406;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x5BF9;&#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3001; EBV&#x3001; &#x6D45;&#x6EE9;&#xFF0C;&#x5E7F;&#x544A;&#x4ECE;&#x514D;&#x75AB;&#x663E;&#x6027;&#x548C; subdominant &#x75C5;&#x6BD2;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x8FDB;&#x884C;&#x7F16;&#x7801;&#x7684; DNA &#x8D28;&#x7C92;&#x4E0E;&#x63CF;&#x8FF0;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5373;&#x91C7;&#x7528; DNA &#x7684;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Dc) nucleofection&#x5728; 10 &#x5929;&#x5185;&#xFF0C;&#x6B64;&#x65B9;&#x6CD5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86; multivirus &#x65E0;&#x529F; Ctl&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F; alloreactivity&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8BC1;&#x660E; nucleofected DC &#x523A;&#x6FC0;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7ED3;&#x5408;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; (&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma;&#xFF09; &#x6355;&#x83B7;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x751F;&#x4EA7;&#x51FA;&#x66F4;&#x5FEB;&#x901F; multivirus CTL &#x4EA7;&#x54C1;&#x6CBB;&#x7597;&#x6025;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; CTL &#x4EE3;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5E94;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x548C;&#x9002;&#x7528;&#x6027;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7597;&#x6CD5;&#x3002;

Nucleofection &#x7684; Dc &#x5728;&#x514D;&#x75AB;&#x635F;&#x5BB3;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x4E2D;&#x751F;&#x6210;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E; Multivirus &#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5BF9;&#x9884;&#x9632;&#x6216;&#x6CBB;&#x7597;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;

Viral infections cause morbidity and mortality in allogeneic hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. To prevent and treat these, we have produced and infused cytotoxic T lymphocytes (CTLs) with specificity for Epstein-Barr virus (EBV), cytomegalovirus (CMV), and adenovirus (Adv), and shown that small numbers of infused cells proliferate in vivo and protect against all three viruses. Despite these encouraging results, broader implementation of this approach is limited by the need for infectious virus material (EBV), expensive production of clinical grade adenoviral vectors, and a prolonged (8-12 weeks) period of manufacture. There is also competition between virus-derived antigens within antigen-presenting cells (APCs), limiting extension to additional agents. We now describe an approach that uses DNA nucleofection of dendritic cells (DCs) with DNA plasmids that encode a range of immunodominant and subdominant viral antigens from CMV, EBV, BK, and Adv. Within 10 days, this methodology provides multivirus-reactive CTLs that lack alloreactivity. We further demonstrate that nucleofected DC stimulation can be combined with interferon-gamma (IFN-gamma) capture technology to produce even more rapid multivirus-CTL products for treatment of acute infection. These CTL generation procedures should increase the feasibility and applicability of T-cell therapy.

Nucleofection of DCs to generate Multivirus-specific T cells for prevention or treatment of viral infections in the immunocompromised host.

Les infections virales entra&#xEE;nent une morbidit&#xE9; et de mortalit&#xE9; dans une allogreffe de cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques (HSCT). Pour pr&#xE9;venir et traiter celles-ci, nous avons produit et infus&#xE9; lymphocytes T cytotoxiques (CTL) avec une sp&#xE9;cificit&#xE9; pour le virus d&#x26;#39;Epstein-Barr (EBV), le cytom&#xE9;galovirus (CMV), et l&#x26;#39;ad&#xE9;novirus (Adv), et montr&#xE9; que de petits nombres de cellules infus&#xE9;es prolif&#xE8;rent in vivo et de protection contre les trois virus. Malgr&#xE9; ces r&#xE9;sultats encourageants, plus large mise en &#x153;uvre de cette approche est limit&#xE9;e par le besoin de mat&#xE9;riel virus infectieux (EBV), la production co&#xFB;teuse de cliniques de qualit&#xE9; des vecteurs ad&#xE9;noviraux, et une p&#xE9;riode prolong&#xE9;e (8-12 semaines) p&#xE9;riode de fabrication. Il ya aussi la concurrence entre les d&#xE9;riv&#xE9;s de virus au sein des antig&#xE8;nes cellules pr&#xE9;sentatrices d&#x26;#39;antig&#xE8;ne (CPA), en limitant l&#x26;#39;extension aux agents suppl&#xE9;mentaires. Nous allons maintenant d&#xE9;crire une approche qui utilise nucl&#xE9;ofection ADN des cellules dendritiques (DC) avec des plasmides d&#x26;#39;ADN qui codent pour une gamme de sous-dominante et immunodominants antig&#xE8;nes viraux de CMV, EBV, BK, et Adv. Dans les 10 jours, cette m&#xE9;thode fournit multivirus-r&#xE9;actifs CTL qui n&#x26;#39;ont pas allor&#xE9;activit&#xE9;. Nous avons en outre d&#xE9;montrer que la stimulation nucleofected DC peut &#xEA;tre associ&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;interf&#xE9;ron-gamma (IFN-gamma) technologie de capture de produire encore plus rapides multivirus-CTL produits pour le traitement de l&#x26;#39;infection aigu&#xEB;. Ces proc&#xE9;dures de g&#xE9;n&#xE9;ration de CTL devrait accro&#xEE;tre la faisabilit&#xE9; et l&#x26;#39;applicabilit&#xE9; des T-th&#xE9;rapie cellulaire.

Nucl&#xE9;ofection des PED pour g&#xE9;n&#xE9;rer Multivirus cellules T sp&#xE9;cifiques pour la pr&#xE9;vention ou traitement des infections virales chez l&#x26;#39;h&#xF4;te immunod&#xE9;prim&#xE9;

Virale Infektionen verursachen Morbidit&auml;t und Mortalit&auml;t in allogene h&auml;matopoetische Stammzelltransplantation (HSCT) Empf&auml;nger. Um zu verhindern, und diese zu behandeln, haben wir produziert und cytotoxische T-Lymphozyten (CTLs) mit Spezifit&auml;t f&uuml;r Epstein - Barr-Virus (EBV), Zytomegalie-Virus (CMV) und Adenoviren (Adv) infundiert und gezeigt, dass eine kleine Gruppe Infusion Zellen in-vivo vermehren und gegen alle drei Viren sch&uuml;tzen. Trotz dieser ermutigenden Ergebnissen ist breitere Umsetzung dieses Ansatzes begrenzt durch die Notwendigkeit einer ansteckenden Virus Material (EBV), teure Herstellung von klinischen Grad adenoviral Vektoren und einen l&auml;ngeren (8-12 Wochen) Zeitraum der Herstellung. Es gibt auch Wettbewerb zwischen den Virus-abgeleitet von Antigenen im Antigen-pr&auml;sentierende Zellen (APC), Begrenzung der Erweiterung f&uuml;r weitere Wirkstoffe. Wir beschreiben nun einen Ansatz, der verwendet DNA Nucleofection von dendritischen Zellen (DCs) mit DNA-Plasmide, die eine Reihe von viralen Antigenen immundominante und Subdominante von CMV, EBV, BK und Adv. codieren Innerhalb von 10 Tagen bietet diese Methodik Multivirus-reaktives CTLs, dass fehlende Alloreactivity. Weiter zeigen wir, dass Nucleofected DC Stimulation mit Interferon-Gamma (IFN-Gamma)-Capture-Technologie zur Herstellung noch schnellere Multivirus-CTL-Produkte f&uuml;r die Behandlung der akuten Infektion kombiniert werden kann. Diese CTL-Generierung-Verfahren sollte die Machbarkeit und Anwendbarkeit der T-Zell-Therapie erh&ouml;hen.

Nucleofection DCs Multivirus-spezifische T-Zellen zur Pr&auml;vention oder Behandlung von viralen Infektionen im immungeschw&auml;chten Wirt zu generieren.

Le infezioni virali causano morbilit&agrave; e mortalit&agrave; nel trapianto di cellule staminali emopoietiche allogeniche destinatari (HSCT). Per prevenire e curare questi, abbiamo prodotto e infuso di linfociti T citotossici (CTL) con specificit&agrave; per il virus di Epstein - Barr (EBV), citomegalovirus (CMV) e adenovirus (Adv) e dimostrato che un piccolo numero di cellule infuse proliferazione in vivo e protegge contro tutti i tre virus. Nonostante questi risultati incoraggianti, pi&ugrave; ampia attuazione di questo approccio &egrave; limitato dalla necessit&agrave; per un periodo prolungato (8-12 settimane) di fabbricazione materiale infettivo virus (EBV) e costosa produzione di vettori adenovirali grado clinico. C&#39;&egrave; anche la concorrenza tra gli antigeni derivati da virus all&#39;interno di presentanti l&#39;antigene cellule (APC), limitando l&#39;estensione agli agenti supplementari. Descriviamo ora un approccio che utilizza nucleofection del DNA delle cellule dendritiche (DCs) con plasmidi di DNA che codificano una serie di antigeni virali immunodominanti e sottodominante da CMV, EBV, BK e ADV. Entro 10 giorni, questa metodologia fornisce CTL multivirus-reattivo che alloreactivity mancanza. Noi dimostrare ulteriormente che nucleofected DC stimolazione pu&ograve; essere combinata con la tecnologia di acquisizione di interferone-gamma (IFN-gamma) per produrre prodotti di multivirus-CTL ancora pi&ugrave; rapidi per il trattamento dell&#39;infezione acuta. Queste procedure di generazione CTL dovrebbero aumentare la fattibilit&agrave; e l&#39;applicabilit&agrave; della terapia della T-cellula.

Nucleofection di DCs per generare cellule T Multivirus-specifico per la prevenzione o il trattamento di infezioni virali in pazienti immunocompromessi host.

&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x7A2E;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#xFF08;HSCT&#xFF09;&#x306E;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x3067;&#x306E;&#x7F79;&#x60A3;&#x7387;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3068;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x751F;&#x7523;&#x3068;Epstein-Barr&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;EBV&#xFF09;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30AC;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;CMV&#xFF09;&#x3001;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;ADV&#xFF09;&#x306E;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#xFF08;CTL&#xFF09;&#x304C;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x304C;in vivo&#x3067;&#x5897;&#x6B96;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;3&#x3064;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6709;&#x671B;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5B9F;&#x88C5;&#x306F;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x6027;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6750;&#x6599;&#xFF08;EBV&#xFF09;&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x306A;&#x751F;&#x7523;&#x3001;&#x88FD;&#x9020;&#x306E;&#x5EF6;&#x9577;&#xFF08;8-12&#x9031;&#x9593;&#xFF09;&#x306E;&#x671F;&#x9593;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;APC&#xFF09;&#x5185;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x3001;&#x9593;&#x306E;&#x7AF6;&#x4E89;&#x3082;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;CMV&#x3001;EBV&#x3001;BK&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x524D;&#x58F2;&#x304B;&#x3089;&#x514D;&#x75AB;&#x3068;&#x4E0B;&#x5C5E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;DNA&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;DNA&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#xFF08;DCS&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 10&#x65E5;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x306F;&#x540C;&#x7A2E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;multivirus&#x53CD;&#x5FDC;&#x6027;CTL&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x305D;&#x306E;nucleofected&#x76F4;&#x6D41;&#x523A;&#x6FC0;&#x304C;&#x6025;&#x6027;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;multivirus-CTL&#x88FD;&#x54C1;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3059;&#x308B;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x3080;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;-&#x3B3;&#xFF08;IFN-&#x3B3;&#xFF09;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;CTL&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x624B;&#x9806;&#x306F;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3068;&#x9069;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x514D;&#x75AB;&#x4E0D;&#x5168;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x4E88;&#x9632;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;Multivirus&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;DC&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;

&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC6D0;&#xC778; &#xBCD1; &#xC801; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC640; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960; allogeneic &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; (HSCT) &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;. &#xBC29;&#xC9C0; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xACE0; &#xACE0; &#xC5E1; &#xC2A4;&#xD0C0;&#xC778;-&#xBC14; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (EBV), &#xC138;&#xD3EC; (CMV), &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (Adv)&#xC73C;&#xB85C; cytotoxic T &#xC138;&#xD3EC; (Ctl)&#xB97C; &#xC8FC;&#xC785; &#xD558; &#xACE0;, &#xC0DD;&#xAE34;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC791;&#xC740; &#xC22B;&#xC790; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xACA9; &#xC99D; &#xD558; &#xACE0; &#xBAA8;&#xB4E0; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD45C;&#xC2DC;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACE0;&#xBB34;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xAD6C;&#xD604; &#xC804;&#xC5FC; &#xC131; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (EBV) &#xC790;&#xB8CC;, &#xC784;&#xC0C1; &#xB4F1;&#xAE09; adenoviral &#xBCA1;&#xD130;&#xC758; &#xBE44;&#xC2FC; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xC81C;&#xC870; &#xAE30;&#xAC04;&#xC758; &#xC5F0;&#xC7A5;&#xB41C; (8-12 &#xC8FC;)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD30C;&#xC0DD; &#xAC04;&#xC758; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4; &#xC138;&#xD3EC; (Apc) &#xCD94;&#xAC00; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD655;&#xC7A5;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; CMV, EBV, &#xBCF4; &#xB9AC;, &#xBC0F; &#xBD80;.&#xC5D0;&#xC11C; immunodominant &#xBC0F; subdominant &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD558;&#xC5EC; DNA &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC640; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DCs)&#xC758; DNA nucleofection&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xC2DD; &#xC124;&#xBA85; 10 &#xC77C; &#xC774;&#xB0B4;&#xC5D0;&#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xB860; &#xADF8; &#xBD80;&#xC871; alloreactivity multivirus &#xBC18;&#xC751;&#xC131; Ctl&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; nucleofected DC &#xC790;&#xADF9; &#xAE09;&#xC131; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xB354;&#xC6B1; &#xBE60;&#xB978; multivirus CTL &#xC81C;&#xD488;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860;-&#xAC10;&#xB9C8; (IFN-&#xAC10;&#xB9C8;) &#xCEA1;&#xCC98; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xACB0;&#xD569;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; CTL &#xC0DD;&#xC131; &#xC808;&#xCC28; &#xD0C0;&#xB2F9;&#xC131; &#xBC0F; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xC801;&#xC6A9; &#xC99D;&#xAC00; &#xD55C;&#xB2E4;.

Dc Nucleofection-immunocompromised &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC608;&#xBC29; &#xB610;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; Multivirus &#xAD00;&#xB828; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Las infecciones virales causan morbilidad y mortalidad en el trasplante alog&#xE9;nico de c&#xE9;lulas madre hematopoy&#xE9;ticas (HSCT). Para prevenir y tratar estos, se han producido y se infunden los linfocitos T citot&#xF3;xicos (CTL) con especificidad para el virus Epstein-Barr (VEB), citomegalovirus (CMV) y adenovirus (ADV), y han demostrado que un peque&#xF1;o n&#xFA;mero de c&#xE9;lulas infundidas proliferan en vivo y proteger contra los tres virus. A pesar de estos alentadores resultados, una implementaci&#xF3;n m&#xE1;s amplia de este enfoque est&#xE1; limitado por la necesidad de material de virus infeccioso (VEB), la producci&#xF3;n costosa de vectores adenovirales cl&#xED;nicos de calidad, y una prolongada (8-12 semanas) periodo de fabricaci&#xF3;n. Tambi&#xE9;n existe la competencia entre los derivados de virus ant&#xED;genos en las c&#xE9;lulas presentadoras de ant&#xED;geno (APC), lo que limita la extensi&#xF3;n a los agentes adicionales. Ahora describir un enfoque que utiliza nucleofection ADN de las c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas (DC) con los pl&#xE1;smidos de ADN que codifican una serie de ant&#xED;genos v&#xED;ricos inmunodominantes y subdominantes de CMV, EBV, BK, y Adv. Dentro de 10 d&#xED;as, esta metodolog&#xED;a ofrece multivirus reactiva CTL que carecen de alorreactividad. Adem&#xE1;s, demuestran que la estimulaci&#xF3;n nucleofected DC puede ser combinado con interfer&#xF3;n-gamma (IFN-gamma) la tecnolog&#xED;a de captura para producir a&#xFA;n m&#xE1;s r&#xE1;pidos CTL multivirus-productos para el tratamiento de la infecci&#xF3;n aguda. Estos procedimientos de generaci&#xF3;n de CTL debe aumentar la viabilidad y aplicabilidad de las c&#xE9;lulas T terapia.

Nucleofection de pa&#xED;ses en desarrollo para generar Multivirus c&#xE9;lulas T espec&#xED;ficas para la prevenci&#xF3;n o el tratamiento de infecciones v&#xED;ricas en el hu&#xE9;sped inmunocomprometido

Optimale Umsetzung einer adoptiven T-Zell-Therapie bei Krebs erfordert wahrscheinlich mehrere und Genver&auml;nderungen die Infusion T-Zellen und ihre Nachkommen beibehalten, sodass sie von Tumor-Websites Heimat und Tumorzellen zu erkennen, Tumor immun ausweichen Strategien &uuml;berwinden und unbehelligt. Retrovirale Vektoren leicht zur&uuml;ckwirken T-Zellen und integrieren Sie in das Host-Zelle-Genom, sondern haben eine begrenzte Kapazit&auml;t f&uuml;r multigene einlegen und Cotransduction und sind unerschwinglich, klinische Besoldungsgruppe zu produzieren. Genetische Ver&auml;nderung von T-Zellen, die mit Transposonen als Plasmide zu integrieren ist eine attraktive Alternative wegen der erh&ouml;hten Einfachheit und Produktionskosten. Von verf&uuml;gbaren Transposonen PiggyBac hat, die h&ouml;here Transposase T&auml;tigkeit und gr&ouml;&szlig;eren Frachtkapazit&auml;t und bewerten wir jetzt PiggyBac f&uuml;r potenzielle Adoptiveltern Therapien mit prim&auml;ren T-Zellen. PiggyBac Transposonen vermittelt stabile Genexpression in etwa 20 % der prim&auml;ren T-Zellen ohne Auswahl. Behandlung und Pflege von T-Zellen mit Interleukin-15 stabile Transgenexpression bis zu ca. 40 % erh&ouml;ht und Ausdruck wurde durch mehrere Protokolle der Expansion &uuml;ber 9 Wochen in Kultur aufrechtzuerhalten. Wir demonstrieren die gleichzeitige Integration von 2 unabh&auml;ngigen Transposonen in 20 % der T-Zellen, einer Frequenz, die Auswahl an transgenen Oberfl&auml;che Marker (abgeschnittene CD19) auf &uuml;ber 85 % gesteigert werden konnte. PiggyBac konnte auch liefern Transposonen von bis zu 13 kb mit 10,000-fold Ausbau der transduzierten T-Zellen in der Kultur, und schlie&szlig;lich zeigen wir Lieferung eines funktionalen Selbstmord-Gens (iCasp9). PiggyBac Transposonen k&ouml;nnen somit verwendet werden, die mehrere integrierte transgene Ausdr&uuml;cken, die wahrscheinlich f&uuml;r den weiteren Erfolg der T-Zell-Therapie notwendig werden.

Optimierung der PiggyBac-Transposon-System f&uuml;r die dauerhafte genetische Ver&auml;nderung von menschlichen T-Lymphozyten.

Implementazione ottimale della terapia di cellule T adottiva per cancro richieder&agrave; probabilmente pi&ugrave; e mantenuto modificazioni genetiche delle cellule T infuse e loro progenie, in modo che ospita siti tumorali e riconoscere le cellule tumorali, superare le strategie di evasione immune tumore e rimanere al sicuri. Vettori retrovirali prontamente trasducono le cellule T e integrano nel genoma della cellula ospite, ma hanno una capacit&agrave; limitata per inserimento multigene e cotransduction e sono proibitivamente costosi da produrre a livello clinico. Modificazione genetica delle cellule T utilizzando trasposoni, come integrare i plasmidi &egrave; un&#39;alternativa interessante a causa della maggiore semplicit&agrave; e costi di produzione. Di trasposoni disponibile, piggyBac ha il pi&ugrave; alto permettono attivit&agrave; e maggiore capacit&agrave; di carico, e valutiamo ora piggyBac per potenziali terapie adottive con primarie delle cellule T. PiggyBac trasposoni mediata espressione genica stabile in circa il 20% di cellule T primarie senza selezione. Trattamento e la manutenzione delle cellule T con interleuchina-15 aumentata espressione del transgene stabile fino a circa il 40% ed espressione era sostenuta attraverso registri multipli di espansione per oltre 9 settimane in coltura. Dimostriamo integrazione simultanea di 2 trasposoni indipendente nel 20% delle cellule T, una frequenza che potrebbe essere aumentato di oltre l&#39;85% dalla selezione di un marcatore di superficie transgenico (CD19 troncato). PiggyBac potrebbe anche fornire trasposoni di fino a 13 kb con 10,000-fold espansione delle cellule trasdotte T nella cultura e infine noi dimostrare la consegna di un gene funzionale suicidio (iCasp9). PiggyBac trasposoni quindi possono essere usati per esprimere i transgeni pi&ugrave; integrata che saranno probabilmente necessario per il pi&ugrave; ampio successo della terapia della T-cellula.

Ottimizzazione del sistema transposon PiggyBac per la modificazione genetica sostenuta di linfociti T umani.

&#x4F18;&#x5316;&#x6267;&#x884C;&#x6536;&#x517B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7597;&#x6CD5;&#x6CBB;&#x7597;&#x764C;&#x75C7;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x9700;&#x8981;&#x591A;&#x548C;&#x4FDD;&#x6301;&#x6CE8;&#x5165;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x540E;&#x4EE3;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5230;&#x80BF;&#x7624;&#x7F51;&#x7AD9;&#x9996;&#x9875;&#x548C;&#x8BC6;&#x522B;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x514B;&#x670D;&#x80BF;&#x7624;&#x514D;&#x75AB;&#x9003;&#x9038;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4FDD;&#x6301;&#x5B89;&#x5168;&#x3002;&#x9006;&#x8F6C;&#x5F55;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x968F;&#x65F6;&#x6362;&#x80FD;&#x5668; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6574;&#x5408;&#x5230;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x4F46;&#x9176;&#x63D2;&#x5165;&#x4E0E;&#x5171;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x6709;&#x9650;&#xFF0C;&#x8D39;&#x7528;&#x6602;&#x8D35;&#xFF0C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7EA7;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6574;&#x5408;&#x8D28;&#x7C92;&#x7684;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x9020;&#x7531;&#x4E8E;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x7B80;&#x5355;&#x6027;&#x548C;&#x751F;&#x4EA7;&#x6210;&#x672C;&#x7684;&#x662F;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x3002;&#x53EF;&#x7528;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#xFF0C;piggyBac &#x5177;&#x6709;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x8F6C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x8D27;&#x8FD0;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x8BC4;&#x4EF7; piggyBac &#x6F5C;&#x5728;&#x517B;&#x7597;&#x6CD5;&#x4E0E;&#x4E3B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;PiggyBac &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E2D;&#x5927;&#x7EA6; 20%&#x7684;&#x4E3B; T &#x6CA1;&#x6709;&#x4EFB;&#x4F55;&#x9009;&#x62E9;&#x3002;&#x6CBB;&#x7597;&#x548C;&#x4FDD;&#x517B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-15 &#x589E;&#x52A0;&#x5927;&#x7EA6; 40%&#x7684;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x6301;&#x7EED;&#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x957F;&#x5C06;&#x8D85;&#x8FC7; 9 &#x5468;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x65E5;&#x5FD7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x540C;&#x65F6;&#x96C6;&#x6210;&#x7684; 2 &#x72EC;&#x7ACB;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x5728; 20%&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x53EF;&#x9009;&#x62E9;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x6807;&#x5FD7; (&#x622A;&#x65AD; CD19&#xFF09; &#x589E;&#x52A0;&#x5230; 85%&#x4EE5;&#x4E0A;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x3002;PiggyBac &#x8FD8;&#x80FD;&#x591F;&#x5B58;&#x8D2E;&#x6269;&#x5F20;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x7684;&#x8FBE; 13 kb&#xFF0C;&#x6700;&#x540E;&#x6211;&#x4EEC;&#x6F14;&#x793A;&#x529F;&#x80FD;&#x81EA;&#x6740;&#x57FA;&#x56E0; (iCasp9)&#x3002;PiggyBac &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x56E0;&#x6B64;&#x53EF;&#x80FD;&#x7528;&#x4E8E;&#x8868;&#x793A;&#x591A;&#x4E2A;&#x7EFC;&#x5408;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x6210;&#x529F;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6301;&#x7EED;&#x57FA;&#x56E0;&#x6539;&#x9020; PiggyBac &#x8F6C;&#x5EA7;&#x5B50;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x4F18;&#x5316;&#x3002;

Optimal implementation of adoptive T-cell therapy for cancer will likely require multiple and maintained genetic modifications of the infused T cells and their progeny so that they home to tumor sites and recognize tumor cells, overcome tumor immune evasion strategies, and remain safe. Retroviral vectors readily transduce T cells and integrate into the host cell genome, but have a limited capacity for multigene insertion and cotransduction and are prohibitively expensive to produce at clinical grade. Genetic modification of T cells using transposons as integrating plasmids is an attractive alternative because of the increased simplicity and cost of production. Of available transposons, piggyBac has the higher transposase activity and larger cargo capacity, and we now evaluate piggyBac for potential adoptive therapies with primary T cells. PiggyBac transposons mediated stable gene expression in approximately 20% of primary T cells without selection. Treatment and maintenance of T cells with interleukin-15 increased stable transgene expression up to approximately 40% and expression was sustained through multiple logs of expansion for over 9 weeks in culture. We demonstrate simultaneous integration of 2 independent transposons in 20% of T cells, a frequency that could be increased to over 85% by selection of a transgenic surface marker (truncated CD19). PiggyBac could also deliver transposons of up to 13 kb with 10,000-fold expansion of transduced T cells in culture and finally we demonstrate delivery of a functional suicide gene (iCasp9). PiggyBac transposons may thus be used to express the multiple integrated transgenes that will likely be necessary for the broader success of T-cell therapy.

Optimization of the PiggyBac transposon system for the sustained genetic modification of human T lymphocytes.

Mise en &oelig;uvre optimale d&#39;adoptif th&eacute;rapie de lymphocytes T pour le cancer n&eacute;cessitera probablement multiple et maintenu les modifications g&eacute;n&eacute;tiques des cellules T infus&eacute;es et leur prog&eacute;niture, afin qu&#39;ils abritent sites tumoraux et reconnaissent les cellules tumorales, surmonter les strat&eacute;gies d&#39;&eacute;vasion immunitaire de tumeur et restent en s&eacute;curit&eacute;. Vecteurs r&eacute;troviraux facilement transduce des lymphocytes T et int&egrave;grent dans le g&eacute;nome de la cellule h&ocirc;te, mais ont une capacit&eacute; limit&eacute;e pour insertion multig&eacute;nique et co-transduction et sont trop co&ucirc;teuses &agrave; produire de grade clinique. La modification g&eacute;n&eacute;tique des cellules T &agrave; l&#39;aide de transposons comme int&eacute;grant des plasmides est une alternative int&eacute;ressante en raison de la simplicit&eacute; accrue et des co&ucirc;ts de production. PiggyBac a la transposase une activit&eacute; plus &eacute;lev&eacute;e et la plus grande capacit&eacute; de chargement de transposons disponibles, et nous &eacute;valuons maintenant piggyBac pour des th&eacute;rapies potentielles adoptifs avec des cellules primaires de T. Les transposons de PiggyBac v&eacute;hicul&eacute;e par expression du g&egrave;ne stable chez environ 20 % des cellules de T primaires sans s&eacute;lection. Traitement et entretien des cellules T avec l&#39;interleukine-15 a augment&eacute; l&#39;expression de transg&egrave;nes stable jusqu&#39;&agrave; environ 40 % et l&#39;expression a &eacute;t&eacute; soutenue par plusieurs journaux d&#39;expansion pendant plus de 9 semaines en culture. Nous d&eacute;montrons l&#39;int&eacute;gration simultan&eacute;e de 2 transposons ind&eacute;pendants dans 20 % des lymphocytes T, une fr&eacute;quence qui pourrait &ecirc;tre port&eacute;e &agrave; plus de 85 % par la s&eacute;lection d&#39;un marqueur de surface transg&eacute;nique (CD19 tronqu&eacute;e). PiggyBac pourrait &eacute;galement livrer les transposons de jusqu&#39;&agrave; 13 Ko 10,000-fold expansion of transduits T cells in culture et finalement, nous d&eacute;montrons la livraison d&#39;un g&egrave;ne fonctionnel suicide (iCasp9). Les transposons PiggyBac peuvent ainsi servir &agrave; exprimer plusieurs transg&egrave;nes int&eacute;gr&eacute;s qui seront probablement n&eacute;cessaires pour le plus large succ&egrave;s de la th&eacute;rapie de lymphocytes.

Optimisation du syst&egrave;me de transposon PiggyBac pour la modification g&eacute;n&eacute;tique soutenue des lymphocytes T humains.

&#x990A;&#x5B50; T &#x7D30;&#x80DE;&#x7642;&#x6CD5;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x5B9F;&#x88C5;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x8907;&#x6570;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x30DB;&#x30FC;&#x30E0;&#x3057;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3057;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x514D;&#x75AB;&#x56DE;&#x907F;&#x6226;&#x7565;&#x3092;&#x514B;&#x670D;&#x3057;&#x3001;&#x5B89;&#x5168;&#x306B;&#x6B8B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306E;&#x6CE8;&#x5165;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x5B50;&#x5B6B;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6539;&#x5909;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Retroviral &#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x30D8;&#x30C3;&#x30B8;&#x30DB;&#x30C3;&#x30B0;&#x3057;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306B;&#x3001;&#x7D71;&#x5408;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x591A;&#x91CD;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x65CF;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x3068; cotransduction &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x5BB9;&#x91CF;&#x3092;&#x6301;&#x3061;&#x3001;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x3067;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30C9;&#x306E;&#x7D71;&#x5408;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x6539;&#x5909;&#x306F;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x4EE3;&#x66FF;&#x306F;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3055;&#x3068;&#x751F;&#x7523;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30B6;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x8CA8;&#x7269;&#x5BB9;&#x91CF;&#x3001;piggyBac &#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4ECA; piggyBac &#x4E3B;&#x306A; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x990A;&#x5B50;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3002;PiggyBac &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x539F;&#x767A; T &#x7D30;&#x80DE;&#x9078;&#x629E;&#x306A;&#x3057;&#x306E;&#x7D04; 20% &#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6CBB;&#x7642;&#x3068;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C6;&#x30CA;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30ED;&#x30A4;&#x30AD;&#x30F3; 15 T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x7D04; 40 &#xFF05; &#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x5F0F;&#x306F;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x30ED;&#x30B0;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x3067; 9 &#x9031;&#x9593;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x6301;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;2 &#x72EC;&#x7ACB;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E; 20 &#xFF05; &#x306B; 85 &#xFF05; &#x4EE5;&#x4E0A;&#x306F;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x8868;&#x9762;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC; (&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F; CD19) &#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x7D71;&#x5408;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PiggyBac &#x306F;&#x307E;&#x305F; 13 kb &#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x306E; 10,000 &#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x6211;&#x3005; &#x914D;&#x4FE1;&#x6A5F;&#x80FD;&#x81EA;&#x6BBA;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; (iCasp9) &#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PiggyBac &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C; T &#x7D30;&#x80DE;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x6210;&#x529F;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7D71;&#x5408; transgenes express &#x4F7F;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

PiggyBac &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30BE;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x30D2;&#x30C8; T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3002;

&#xC554;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC785;&#xC591; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xAD6C;&#xD604; &#xB2E4;&#xC911; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xC885;&#xC591; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xD648; &#xBC0F; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC778;&#xC2DD;, &#xC885;&#xC591; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD68C;&#xD53C; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xADF9;&#xBCF5; &#xACE0; &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xC9C0; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC0DD;&#xAE34;&#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC790;&#xC190;&#xC758; &#xC720;&#xC804; &#xC218;&#xC815; &#xC720;&#xC9C0;. Retroviral &#xBCA1;&#xD130; &#xC27D;&#xAC8C; transduce T &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xAC8C;&#xB188;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; multigene &#xC0BD;&#xC785; &#xBC0F; cotransduction&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xBC0F; prohibitively &#xBE44;&#xC2FC; &#xC784;&#xC0C1; &#xB4F1;&#xAE09;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294;. &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD569;&#xC73C;&#xB85C; transposons&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xC99D;&#xAC00; &#xB2E8;&#xC21C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBE44;&#xC6A9; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xB300;&#xC548; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; transposons&#xC758; Piggybac&#xB294; &#xB354; &#xB192;&#xC740; transposase &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xD070; &#xD654;&#xBB3C; &#xC6A9;&#xB7C9;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC9C0;&#xAE08; piggyBac &#xAE30;&#xBCF8; T &#xC140;&#xACFC; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC785;&#xC591; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD3C9;&#xAC00;. PiggyBac transposons &#xC911;&#xC7AC; &#xC120;&#xD0DD; &#xC5C6;&#xC774; &#xAE30;&#xBCF8; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC57D; 20%&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;. &#xCE58;&#xB8CC; &#xBC0F; &#xC778;&#xD130; &#xB8E8; &#xD0A8;-15 T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC218; &#xC548;&#xC815; transgene &#xC2DD; &#xC57D; 40%&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DD; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; 9 &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD655;&#xC7A5; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB85C;&#xADF8;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C0;&#xC18D; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 2 &#xB3C5;&#xB9BD; transposons 20 %t &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xD45C;&#xBA74; &#xB9C8;&#xCEE4; (&#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; CD19)&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; 85% &#xC774;&#xC0C1; &#xC99D;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xD1B5;&#xD569;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. PiggyBac &#xB610;&#xD55C; transposons 13 kb &#xCD5C;&#xB300;&#xC758; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; transduced T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; 10,000-fold &#xD655;&#xC7A5;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xBC0F; &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBC30;&#xB2EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC790;&#xC0B4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; (iCasp9)&#xC758; &#xC124;&#xBA85;. PiggyBac transposons &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC131;&#xACF5;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD1B5;&#xD569;&#xB41C; transgenes&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; PiggyBac transposon &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;.

Aplicaci&oacute;n &oacute;ptima de la terapia de c&eacute;lulas T adoptiva para c&aacute;ncer requerir&aacute; m&uacute;ltiple y mantenido modificaciones gen&eacute;ticas de las c&eacute;lulas T infundidas y sus cr&iacute;as para que alberga sitios de tumor y reconocer las c&eacute;lulas del tumor, superar las estrategias de evasi&oacute;n inmune del tumor y permanecer seguros. Vectores retrovirales f&aacute;cilmente transducen las c&eacute;lulas T e integrar&aacute;n en el genoma de la c&eacute;lula hu&eacute;sped, pero tienen una capacidad limitada para la inserci&oacute;n multig&eacute;nica y cotransduction y son prohibitivas producir en grado cl&iacute;nico. La modificaci&oacute;n gen&eacute;tica de las c&eacute;lulas T usando transposones como integraci&oacute;n de pl&aacute;smidos es una alternativa atractiva debido a la mayor simplicidad y costo de producci&oacute;n. De transposones disponibles, piggyBac tiene la mayor actividad de la transposasa y mayor capacidad de carga, y ahora evaluamos piggyBac terapias adoptivos potenciales con las c&eacute;lulas T primarias. Transposones PiggyBac mediaron expresi&oacute;n g&eacute;nica estable en aproximadamente el 20% de las c&eacute;lulas T primarias sin selecci&oacute;n. Tratamiento y mantenimiento de las c&eacute;lulas T con interleucina-15 aumentan la expresi&oacute;n del transg&eacute;n estable hasta aproximadamente el 40% y expresi&oacute;n fue sostenido a trav&eacute;s de m&uacute;ltiples registros de expansi&oacute;n para m&aacute;s de 9 semanas en cultura. Demostramos la integraci&oacute;n simult&aacute;nea de 2 transposones independientes en 20% de las c&eacute;lulas T, una frecuencia que podr&iacute;a aumentar a m&aacute;s del 85% por la selecci&oacute;n de un marcador de superficie transg&eacute;nico (CD19 truncado). PiggyBac tambi&eacute;n podr&iacute;a entregar transposones de hasta 13 kb con 10,000-fold expansi&oacute;n de c&eacute;lulas T transduced en cultura y finalmente demostramos la entrega de un gene del suicidio funcional (iCasp9). Transposones PiggyBac as&iacute; pueden utilizarse para expresar los m&uacute;ltiples transgenes integrados que probablemente ser&aacute;n necesarios para el &eacute;xito general de la terapia de c&eacute;lulas T.

Optimizaci&oacute;n del sistema transpos&oacute;n PiggyBac para la modificaci&oacute;n gen&eacute;tica sostenido de linfocitos T humanos.

Adoptiven T-Zell-Therapien k&ouml;nnen Objektive klinische Reaktionen bei Patienten mit h&auml;matologischen und soliden Tumoren produzieren. Genmanipulation von T-Lymphozyten wurde als ein Mittel zur Steigerung der Potenz und dem Bereich dieser Anti-Tumor-Aktivit&auml;t vorgeschlagen. Wir nun &uuml;berpr&uuml;fen, wie eine Kupplung Ausdruck von transgenen Rezeptoren mit Gegenma&szlig;nahmen gegen potente Tumor immun ausweichen Strategien in pr&auml;klinischen Modellen sehr effektiv erweist und beschreiben, wie diese Ans&auml;tze in Versuchspersonen evaluiert werden.

Immuntherapie der menschlichen Krebserkrankungen mit Gen ver&auml;ndert T-Lymphozyten.

Le terapie con cellule T adottiva &egrave; in grado di produrre risposte obiettive cliniche in pazienti con neoplasie ematologiche e solide. Manipolazione genetica dei linfociti T &egrave; stato proposto come un mezzo per aumentare la potenza e la gamma di questa attivit&agrave; anti-tumorale. Abbiamo ora esaminare come espressione dei recettori transgenici di accoppiamento con contromisure contro strategie di evasione immune tumore potente sta dimostrando altamente efficacia in modelli preclinici e descrivere come questi approcci sono essere valutati nei soggetti umani.

Immunoterapia dei tumori umani usando il gene modificato linfociti T.

&#x9886;&#x517B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7597;&#x6CD5;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4EA7;&#x751F;&#x5BA2;&#x89C2;&#x8840;&#x6DB2;&#x548C;&#x56FA;&#x4F53;&#x80BF;&#x7624;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x64CD;&#x4F5C;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x63D0;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x6548;&#x80FD;&#x548C;&#x6B64;&#x6297;&#x80BF;&#x7624;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x624B;&#x6BB5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x68C0;&#x8BA8;&#x5982;&#x4F55;&#x8026;&#x5408;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x70C8;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x514D;&#x75AB;&#x9003;&#x9038;&#x7684;&#x6218;&#x7565;&#x5BF9;&#x7B56;&#x8BC1;&#x660E;&#x6781;&#x4E3A;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x524D;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63CF;&#x8FF0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x4EBA;&#x4F53;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x764C;&#x75C7;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x4FEE;&#x6539; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Adoptive T cell therapies can produce objective clinical responses in patients with hematologic and solid malignancies. Genetic manipulation of T lymphocytes has been proposed as a means of increasing the potency and range of this anti-tumor activity. We now review how coupling expression of transgenic receptors with countermeasures against potent tumor immune evasion strategies is proving highly effective in pre-clinical models and describe how these approaches are being evaluated in human subjects.

Immunotherapy of human cancers using gene modified T lymphocytes.

Th&eacute;rapies cellulaires de T adoptif peuvent produire des r&eacute;ponses cliniques objectives de patients atteints de tumeurs solides et h&eacute;matologiques. La manipulation g&eacute;n&eacute;tique des lymphocytes T a &eacute;t&eacute; propos&eacute;e comme un moyen d&#39;augmenter la puissance et la port&eacute;e de cette activit&eacute; anti-tumorale. Nous avons maintenant examiner comment l&#39;expression des r&eacute;cepteurs transg&eacute;niques de couplage avec les mesures de lutte contre les strat&eacute;gies d&#39;&eacute;vasion immunitaire de tumeur puissant s&#39;av&egrave;re tr&egrave;s efficace dans des mod&egrave;les pr&eacute;cliniques et d&eacute;crire comment ces approches sont &eacute;valu&eacute;s chez des sujets humains.

Immunoth&eacute;rapie des cancers humains &agrave; l&#39;aide de g&egrave;nes modifi&eacute;s des lymphocytes T.

&#x990A;&#x5B50; T &#x7D30;&#x80DE;&#x7642;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x6DB2;&#x3068;&#x56FA;&#x4F53;&#x306E;&#x60AA;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5BA2;&#x89B3;&#x7684;&#x81E8;&#x5E8A;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306F;&#x52B9;&#x529B;&#x3068;&#x3053;&#x306E;&#x6297;&#x816B;&#x760D;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x624B;&#x6BB5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;.&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4ECA;&#x3067;&#x5BFE;&#x7B56;&#x3092;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x514D;&#x75AB;&#x56DE;&#x907F;&#x6226;&#x7565;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AF;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x524D;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x3067;&#x8A3C;&#x660E;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306F; T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#xC785;&#xC591; T &#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD608;&#xC561;&#xD559; &#xBC0F; &#xACE0;&#xCCB4; &#xC545;&#xC131; &#xC885;&#xC591;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1D;&#xAD00;&#xC801;&#xC778; &#xC784;&#xC0C1; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC0DD;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xD798; &#xBC0F; &#xC548;&#xD2F0; &#xC885;&#xC591; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xB294; &#xC218;&#xB2E8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC774;&#xC81C; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C;&#xC744; &#xC804; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xBA85;&#xC740; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC885;&#xC591; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD68C;&#xD53C; &#xC804;&#xB7B5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xCC45;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xC2DD; &#xCEE4;&#xD50C;&#xB9C1; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC778;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB418;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Immunotherapy &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC554; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC218;&#xC815;.

Terapias con c&eacute;lulas madre adoptiva T pueden producir respuestas cl&iacute;nicas objetivas en pacientes con malignidades hematol&oacute;gicas y s&oacute;lidas. Manipulaci&oacute;n gen&eacute;tica de los linfocitos T se ha propuesto como un medio de aumentar la potencia y el alcance de esta actividad antitumoral. Ahora repasamos c&oacute;mo expresi&oacute;n de receptores transg&eacute;nicos de acoplamiento con contramedidas contra estrategias de evasi&oacute;n inmune potente tumor resulta altamente eficaz en modelos precl&iacute;nicos y describir c&oacute;mo estos enfoques est&aacute;n siendo evaluados en seres humanos.

Inmunoterapia de los c&aacute;nceres humanos con genes modificados los linfocitos T.

&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE; (Ctl) &#x7684;&#x8FC7;&#x7EE7;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5236;&#x9020;&#x88AB;&#x53D7;&#x9650;&#x5236;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x548C;&#x751F;&#x4EA7;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x4E0E;&#x5927;&#x91CF;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x6761;&#x4EF6;&#x662F;&#x4E25;&#x683C;&#x7684;&#x548C;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x53EA;&#x53D6;&#x5F97; 2 &#x5398;&#x7C73;&#x4E95;&#x5728;&#x54EA;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x6709;&#x9650;&#x7684;&#x6C14;&#x4F53;&#x4EA4;&#x6362;&#x3001; &#x517B;&#x5206;&#x53CA;&#x5E9F;&#x7269;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x751F;&#x7269;&#x53CD;&#x5E94;&#x5668;&#x5F00;&#x53D1;&#x6765;&#x514B;&#x670D;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x95EE;&#x9898;&#x5F80;&#x5F80;&#x662F;&#x590D;&#x6742;&#x3001; &#x6602;&#x8D35;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x603B;&#x662F;&#x6709;&#x5229;&#x4E8E; CTL &#x589E;&#x957F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; Ctl &#x8FDB;&#x884C; 7 &#x81F3; 10 &#x5206;&#x90E8; poststimulation&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709;&#x5728;&#x6587;&#x5316;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x5468;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x9884;&#x671F;&#x7684; CTL &#x6570;&#x5B57;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x91CD;&#x65B0;&#x521B;&#x5EFA;&#x6587;&#x5316;&#x6761;&#x4EF6;&#x5728;&#x573A;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x7B2C;&#x4E00;&#x5468;&#x4F4E;&#x9891;&#x7387;&#x548C;&#x9AD8;&#x9891;&#x7387;&#x7684;&#x8FDB;&#x7EB8;&#x5668;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;-&#x6211;&#x4EEC;&#x90FD;&#x80FD;&#x591F;&#x589E;&#x52A0; CTL &#x6269;&#x5C55;&#x5230;&#x9884;&#x671F;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x8868;&#x578B;&#x6216;&#x51FD;&#x6570;&#x80FD;&#x6301;&#x7EED;&#x51E0;&#x4E2A;&#x661F;&#x671F;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;24 &#x4E95;&#x724C;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x8FC7;&#x591A;&#xFF0C;&#x6587;&#x5316;&#x6240;&#x9700;&#x5A92;&#x4F53;&#x4E0D;&#x65AD;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x65AD;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x548C;&#x5236;&#x9020;&#x6210;&#x672C;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA1;&#x7B97;&#x65B0;&#x578B;&#x6C14;&#x4F53;&#x6E17;&#x900F;&#x6587;&#x5316;&#x8BBE;&#x5907; (G-&#x96F7;&#x514B;&#x65AF;&#xFF09; &#x5141;&#x8BB8;&#x6C14;&#x4F53;&#x4EA4;&#x6362;&#x53D1;&#x751F;&#x8C6A;&#x653E;&#xFF0C;&#x6309;&#x4E0A;&#x8FF0;&#x4ECB;&#x8D28;&#x7684;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x57FA;&#x5730;&#x7684;&#x6709;&#x673A;&#x7845;&#x819C;&#x3002;&#x6B64;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x652F;&#x6301;&#x6269;&#x5927;&#x7684; CTL&#xFF0C;&#x5B9E;&#x9645;&#x4E0A;&#x540C;&#x65F6;&#x51CF;&#x5C11;&#x6240;&#x9700;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x4EBA;&#x5458;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x8FBE; 20 &#x500D;&#x5730;&#x589E;&#x52A0;&#x7531;&#x8F93;&#x51FA;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6269;&#x589E;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6269;&#x5F20;&#x662F;&#x4E0D;&#x662F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#xFF0C;&#x800C;&#x662F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4F18;&#x5316;&#x540C;&#x65F6;&#x964D;&#x4F4E;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x548C;&#x6210;&#x672C;&#x7684; CTL &#x5236;&#x9020;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7597;&#x6CD5;&#x66F4;&#x5BB9;&#x6613;&#x589E;&#x52A0; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F93;&#x51FA;&#x3002;

&#x4F7F;&#x7528;&#x6C14;&#x4F53;&#x6E17;&#x900F;&#x8FC5;&#x901F;&#x6269;&#x5C55; cultureware (G-Rex&#xFF09; &#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x524D;&#x548C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x52A0;&#x901F;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;

The clinical manufacture of antigen-specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs) for adoptive immunotherapy is limited by the complexity and time required to produce large numbers with the desired function and specificity. The culture conditions required are rigorous, and in some cases only achieved in 2-cm wells in which cell growth is limited by gas exchange, nutrients, and waste accumulation. Bioreactors developed to overcome these issues tend to be complex, expensive, and not always conducive to CTL growth. We observed that antigen-specific CTLs undergo 7 to 10 divisions poststimulation. However, the expected CTL numbers were achieved only in the first week of culture. By recreating the culture conditions present during this first week-low frequency of antigen-specific T cells and high frequency of feeder cells-we were able to increase CTL expansion to expected levels that could be sustained for several weeks without affecting phenotype or function. However, the number of 24-well plates needed was excessive and cultures required frequent media changes, increasing complexity and manufacturing costs. Therefore, we evaluated novel gas-permeable culture devices (G-Rex) with a silicone membrane at the base allowing gas exchange to occur uninhibited by the depth of the medium above. This system effectively supports the expansion of CTL and actually increases output by up to 20-fold while decreasing the required technician time. Importantly, this amplified cell expansion is not because of more cell divisions but because of reduced cell death. This bioprocess optimization increased T-cell output while decreasing the complexity and cost of CTL manufacture, making cell therapy more accessible.

Accelerated production of antigen-specific T cells for preclinical and clinical applications using gas-permeable rapid expansion cultureware (G-Rex).

La fabrication clinique de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne des lymphocytes T cytotoxiques (CTL) pour une immunoth&#xE9;rapie adoptive est limit&#xE9;e par la complexit&#xE9; et le temps requis pour produire un grand nombre avec la fonction souhait&#xE9;e et la sp&#xE9;cificit&#xE9;. Les conditions de culture n&#xE9;cessaires sont rigoureux, et dans certains cas seulement obtenus en 2-cm puits dans lesquels la croissance des cellules est limit&#xE9;e par l&#x26;#39;&#xE9;change de gaz, les nutriments et l&#x26;#39;accumulation de d&#xE9;chets. Bior&#xE9;acteurs d&#xE9;velopp&#xE9;s pour surmonter ces probl&#xE8;mes ont tendance &#xE0; &#xEA;tre complexe, co&#xFB;teux, et pas toujours propice &#xE0; la croissance CTL. Nous avons observ&#xE9; que l&#x26;#39;antig&#xE8;ne des CTL sp&#xE9;cifiques de subir poststimulation 7 &#xE0; 10 divisions. Toutefois, les num&#xE9;ros de CTL attendus ont &#xE9;t&#xE9; atteints que dans la premi&#xE8;re semaine de la culture. En recr&#xE9;ant les conditions de culture pr&#xE9;sents lors de cette premi&#xE8;re semaine de basse fr&#xE9;quence de cellules T sp&#xE9;cifiques de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne et haute fr&#xE9;quence de desserte des cellules, nous &#xE9;tions en mesure d&#x26;#39;accro&#xEE;tre l&#x26;#39;expansion de CTL &#xE0; des niveaux attendus qui pourraient &#xEA;tre subies pendant plusieurs semaines sans affecter le ph&#xE9;notype ou la fonction. Toutefois, le nombre de plaques &#xE0; 24 puits n&#xE9;cessaires &#xE9;tait excessive et des cultures n&#xE9;cessaire de fr&#xE9;quents changements de m&#xE9;dias, ce qui augmente la complexit&#xE9; et les co&#xFB;ts de fabrication. Par cons&#xE9;quent, on &#xE9;valu&#xE9; nouveaux dispositifs de culture perm&#xE9;able aux gaz (G-Rex) avec une membrane de silicone &#xE0; la base permettant l&#x26;#39;&#xE9;change de gaz de se produire sans inhibition par la profondeur du milieu ci-dessus. Ce syst&#xE8;me soutient efficacement l&#x26;#39;expansion de CTL et augmente effectivement la production de pr&#xE8;s de 20 fois tout en diminuant le temps requis technicien. Surtout, cette expansion cellulaire amplifi&#xE9; n&#x26;#39;est pas parce que des divisions cellulaires plus mais &#xE0; cause de la mort cellulaire r&#xE9;duite. Cette optimisation des bioproc&#xE9;d&#xE9;s augment&#xE9; T-cellule de sortie tout en diminuant la complexit&#xE9; et le co&#xFB;t de fabrication CTL, ce qui rend la th&#xE9;rapie cellulaire plus accessible.

La production acc&#xE9;l&#xE9;r&#xE9;e de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne des cellules T sp&#xE9;cifiques pour les applications pr&#xE9;cliniques et cliniques utilisant le gaz perm&#xE9;able Cultureware expansion rapide (G-Rex)

Die klinische Herstellung von Antigen-spezifische zytotoxische T-Lymphozyten (CTLs) f&uuml;r Adoptive Immuntherapie eingeschr&auml;nkt durch die Komplexit&auml;t und der Zeitaufwand f&uuml;r die gro&szlig;e Zahlen mit der gew&uuml;nschten Funktion und Spezifit&auml;t ergeben. Die Kultur-Voraussetzungen sind strenge und in einigen F&auml;llen nur in 2-cm-Brunnen in welche Zelle erreicht wird Wachstum durch Gasaustausch, N&auml;hrstoffe und &uuml;berfl&uuml;ssige Anh&auml;ufung begrenzt. Bioreaktoren entwickelt, um diese Probleme zu &uuml;berwinden sind komplex, teuer und nicht immer f&ouml;rderlich f&uuml;r CTL-Wachstum. Wir beobachteten, dass Antigen-spezifischen CTLs 7 bis 10 Divisionen Poststimulation unterziehen. Die erwarteten CTL-Nummern wurden jedoch nur in der ersten Woche der Kultur erreicht. Durch Neuerstellung der Kultur Bedingungen darstellen, w&auml;hrend dieser ersten Woche-Niederfrequenz von Antigen-spezifische T-Zellen und hohe Frequenz der Feeder-Zellen-konnten wir CTL-Erweiterung zu erwartete Niveau zu erh&ouml;hen, die f&uuml;r mehrere Wochen aufrecht erhalten werden konnte ohne Ph&auml;notyp oder Funktion zu beeinflussen. Jedoch war die Zahl der 24-Well-Platten ben&ouml;tigt &uuml;berm&auml;&szlig;ige und Kulturen h&auml;ufig Medien &Auml;nderungen erforderlich, steigende Komplexit&auml;t und Fertigungskosten. Deshalb werteten wir neuartige Gas-durchl&auml;ssigen Kultur-Ger&auml;te (G-Rex) mit einer Silikon-Membran an der Basis, so dass Gasaustausch auftritt ungehemmt durch die Tiefe des Mediums oben. Dieses System effektiv unterst&uuml;tzt den Ausbau der CTL und tats&auml;chlich bessere Ergebnisse durch bis zu 20-fach beim Verringern der erforderlichen Techniker-Zeit. Wichtiger ist diese verst&auml;rkte Zelle Expansion nicht wegen weitere Zellteilungen aber wegen eingeschr&auml;nkter Zelltod. Diese Bioprozess-Optimierung erh&ouml;hte T-Zell-Ausgabe beim verringern die Komplexit&auml;t und die Kosten der CTL-Herstellung, Zelltherapie mehr zug&auml;nglich zu machen.

Beschleunigte Produktion von Antigen-spezifische T-Zellen f&uuml;r pr&auml;klinische und klinische Anwendungen mit Gas-durchl&auml;ssigen rasche Expansion Cultureware (G-Rex).

Clinica fabbricazione di citotossici linfociti T antigene-specifiche (CTL) per adoptive immunoterapia &egrave; limitata dalla complessit&agrave; e il tempo richiesto per produrre grandi numeri con la funzione desiderata e specificit&agrave;. Le condizioni di coltura richieste sono rigorose, e in alcuni casi raggiunti solo in pozzi di 2 cm nella quale cella crescita &egrave; limitata da scambio di gas, nutrienti e accumulo di rifiuti. Bioreattori sviluppate per superare questi problemi tendono ad essere complesso, costoso e non sempre favorevole alla crescita di CTL. Abbiamo osservato che l&#39;antigene-specifici CTL subiscono poststimulation 7 a 10 divisioni. Tuttavia, i numeri CTL attesi sono stati conseguiti solo nella prima settimana della cultura. Ricreando la cultura condizioni presenti durante questa prima settimana-bassa frequenza di cellule T antigene-specifiche e ad alta frequenza di cellule di alimentatore-siamo stati in grado di aumentare l&#39;espansione CTL ai livelli attesi che poteva essere sostenuta per diverse settimane senza influire sul fenotipo o funzione. Tuttavia, il numero di piastre 24 pozzetti necessari &egrave; stata eccessivo e culture necessarie modifiche frequenti media, aumentando la complessit&agrave; e i costi di produzione. Quindi, abbiamo valutato dispositivi romanzo cultura gas-permeabile (G-Rex) con una membrana in silicone alla base che consenta lo scambio di gas si verifichino disinibita dalla profondit&agrave; del mezzo di cui sopra. Questo sistema supporta efficacemente l&#39;espansione di CTL e in realt&agrave; aumenta l&#39;uscita di fino a 20 volte diminuendo il tempo tecnico richiesto. Questa espansione cellulare amplificato &egrave; importante, &egrave; non per ulteriori divisioni cellulari ma a causa di morte cellulare ridotto. Questa ottimizzazione bioprocess aumentato delle cellule T uscita diminuendo la complessit&agrave; e il costo di fabbricazione CTL, rendere pi&ugrave; accessibile la terapia cellulare.

Accelerata produzione di cellule T antigene-specifiche per le applicazioni di studi precliniche e cliniche mediante gas-permeabile rapida espansione cultureware (G-Rex).

&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x88FD;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x990A;&#x5B50;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#xFF08;CTL&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x6240;&#x671B;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x3067;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x6570;&#x5024;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3068;&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x57F9;&#x990A;&#x6761;&#x4EF6;&#x306F;&#x53B3;&#x683C;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3001;&#x30AC;&#x30B9;&#x4EA4;&#x63DB;&#x3001;&#x6804;&#x990A;&#x7D20;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5EC3;&#x68C4;&#x7269;&#x306E;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;2cm&#x306E;&#x4E95;&#x6238;&#x3067;&#x306E;&#x307F;&#x9054;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x514B;&#x670D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30EA;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x96D1;&#x3001;&#x9AD8;&#x4FA1;&#x3067;&#x3001;CTL&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306B;&#x5FC5;&#x305A;&#x3057;&#x3082;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x50BE;&#x5411;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;CTL&#x306F;&#x3001;7&#x304B;&#x3089;10&#x306E;&#x90E8;&#x9580;&#x306E;poststimulation&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;CTL&#x756A;&#x53F7;&#x306F;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x9031;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30C0;&#x30FC;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x9AD8;&#x3044;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x9031;&#x306B;&#x4F4E;&#x5468;&#x6CE2;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x57F9;&#x990A;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x518D;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3084;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x6570;&#x9031;&#x9593;&#x6301;&#x7D9A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x671F;&#x5F85;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;CTL&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5FC5;&#x8981;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;24&#x30A6;&#x30A7;&#x30EB;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x904E;&#x5EA6;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x6587;&#x5316;&#x304C;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3068;&#x88FD;&#x9020;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3001;&#x983B;&#x7E41;&#x306A;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30AC;&#x30B9;&#x4EA4;&#x63DB;&#x306F;&#x3001;&#x4E0A;&#x8A18;&#x306E;&#x57F9;&#x5730;&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x306B;&#x5236;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30B3;&#x30FC;&#x30F3;&#x819C;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x898F;&#x30AC;&#x30B9;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x88C5;&#x7F6E;&#xFF08;G-&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF09;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306B;CTL&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x6280;&#x8853;&#x8005;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x5B9F;&#x969B;&#x306B;20&#x500D;&#x306B;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x51FA;&#x529B;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5897;&#x5E45;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x305F;&#x3081;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x88C2;&#x304C;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; CTL&#x88FD;&#x9020;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3068;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x524A;&#x6E1B;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x7642;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B7;&#x30D6;&#x30EB;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x51FA;&#x529B;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

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&#xC785;&#xC591; immunotherapy&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; cytotoxic T &#xC138;&#xD3EC; (Ctl)&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC81C;&#xC870; &#xC6D0;&#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4; &#xC218;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xBB38;&#xD654; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xACE0; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xC140;&#xC5D0; 2 cm &#xC6B0;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2EC;&#xC131; &#xC131;&#xC7A5; &#xAC00;&#xC2A4; &#xAD50;&#xD658;, &#xC601;&#xC591;&#xC18C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD3D0;&#xAE30;&#xBB3C; &#xCD95;&#xC801;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Bioreactors &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xADF9;&#xBCF5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBE44;&#xC2F8;&#xACE0; &#xD56D;&#xC0C1; CTL &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xACF5;&#xD5CC; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xD5A5;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; Ctl 7 ~ 10 &#xC0AC;&#xB2E8; poststimulation &#xBC1B; &#xB2E4; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC608;&#xC0C1;&#xB41C; CTL &#xC22B;&#xC790; &#xBB38;&#xD654;&#xC758; &#xCCAB; &#xC8FC;&#xB9CC;&#xC5D0; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC870;&#xAC74; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; T &#xC140;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC8FC; &#xB0AE;&#xC740; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xAC00; &#xACE0; &#xD53C;&#xB354; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xAE30;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xD604;&#xC7AC; &#xBB38;&#xD654;&#xB97C; &#xC7AC;&#xD604; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368;-CTL &#xD655;&#xC7A5; &#xD615; &#xB610;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xBA87; &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xC9C0;&#xC18D; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xC608;&#xC0C1;&#xB41C; &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xB192;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, 24-&#xC798; &#xC811;&#xC2DC; &#xD544;&#xC694; &#xC218;&#xB294; &#xACFC;&#xB3C4; &#xD55C; &#xACE0; &#xBB38;&#xD654; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC790;&#xC8FC; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4; &#xBCC0;&#xACBD;, &#xC99D;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xACFC; &#xC81C;&#xC870; &#xBE44;&#xC6A9;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAC00;&#xC2A4; &#xD22C;&#xACFC;&#xC131; &#xBB38;&#xD654; &#xC7A5;&#xCE58; (G-&#xB809;&#xC2A4;) &#xC704;&#xC758; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC758; &#xAE4A;&#xC774; &#xC758;&#xD574; &#xB178;&#xACE8;&#xC801;&#xC778; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xAC00;&#xC2A4; &#xAD50;&#xD658;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2E4;&#xB9AC;&#xCF58; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC774; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; CTL&#xC758; &#xD655;&#xC7A5;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0; &#xC2E4;&#xC81C;&#xB85C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xAE30;&#xC220;&#xC790; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC774; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xCD5C;&#xB300; 20-fold&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD9C;&#xB825;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740;,&#xC774; &#xC99D;&#xD3ED;&#xB41C; &#xC140; &#xD655;&#xC7A5;&#xC740; &#xAC10;&#xC18C; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC8FD;&#xC74C; &#xB54C;&#xBB38;&#xC774; &#xC544;&#xB2C8;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB54C;&#xBB38;&#xC774; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C;. &#xC774; bioprocess &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; CTL &#xC81C;&#xC870;, &#xC138;&#xD3EC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB354; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD558;&#xB294; &#xBE44;&#xC6A9;&#xACFC; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; T-&#xC140; &#xCD9C;&#xB825;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00;.

&#xAC00;&#xC2A4; &#xD22C;&#xACFC;&#xC131; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xD655;&#xC7A5; cultureware (G-&#xB809;&#xC2A4;)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804; &#xC784;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xC784;&#xC0C1; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC18D;&#xB41C;.

La fabricaci&#xF3;n cl&#xED;nica de ant&#xED;genos espec&#xED;ficos de linfocitos T citot&#xF3;xicos (CTL) para la inmunoterapia adoptiva est&#xE1; limitada por la complejidad y el tiempo requerido para producir un gran n&#xFA;mero con la funci&#xF3;n deseada y la especificidad. Las condiciones de cultivo requeridas son rigurosos, y en algunos casos s&#xF3;lo alcanzados en 2-cm pocillos en los que se limita el crecimiento celular por el intercambio de gases, nutrientes, y la acumulaci&#xF3;n de residuos. Biorreactores desarrollados para superar estos problemas tienden a ser complejos, costosos y no siempre es propicio para el crecimiento de CTL. Hemos observado que los ant&#xED;genos espec&#xED;ficos de linfocitos T citot&#xF3;xicos someterse a posest&#xED;mulo de 7 a 10 divisiones. Sin embargo, los n&#xFA;meros de CTL se espera s&#xF3;lo se lograron en la primera semana de la cultura. Al recrear las condiciones de cultivo presentes en esta primera semana de baja frecuencia de c&#xE9;lulas T ant&#xED;geno-espec&#xED;ficos y de alta frecuencia de alimentaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas-hemos sido capaces de incrementar la expansi&#xF3;n de CTL a los niveles esperados que podr&#xED;an perdurar durante varias semanas, sin afectar el fenotipo o funci&#xF3;n. Sin embargo, el n&#xFA;mero de placas de 24 pocillos necesarios era excesiva y las culturas requieren cambios frecuentes de los medios de comunicaci&#xF3;n, el aumento de la complejidad y los costes de fabricaci&#xF3;n. Por lo tanto, se evaluaron nuevos permeables al gas dispositivos de cultivo (G-Rex) con una membrana de silicona en la base que permite el intercambio de gases que se produzca desinhibido por la profundidad del medio anterior. Este sistema respalda efectivamente la expansi&#xF3;n de los CTL y en realidad aumenta la producci&#xF3;n hasta en un 20 veces mientras que disminuye el tiempo t&#xE9;cnico requerido. Es importante destacar que esta expansi&#xF3;n de c&#xE9;lulas amplificadas no se debe a divisiones celulares m&#xE1;s pero a causa de la muerte celular reducida. Esta optimizaci&#xF3;n de bioprocesos aumento de c&#xE9;lulas T de salida, mientras que la disminuci&#xF3;n de la complejidad y el coste de fabricaci&#xF3;n de CTL, por lo que la terapia celular sea m&#xE1;s accesible.

La producci&#xF3;n acelerada de los ant&#xED;genos espec&#xED;ficos de c&#xE9;lulas T para aplicaciones precl&#xED;nicos y cl&#xED;nicos que utilizan gas permeable Cultureware expansi&#xF3;n r&#xE1;pida (G-REX)

La quimioterapia convencional y la radioterapia producen beneficios marginales de supervivencia en el c&#xE1;ncer de p&#xE1;ncreas, lo que subraya la necesidad de nuevas terapias. El objetivo de este estudio es desarrollar una c&#xE9;lula T de adopci&#xF3;n de enfoques de transferencia a los tumores diana que expresan el ant&#xED;geno prost&#xE1;tico de c&#xE9;lulas madre (LCSP), un ant&#xED;geno asociado al tumor que frecuentemente se expresa en las c&#xE9;lulas de c&#xE1;ncer de p&#xE1;ncreas.

Engineered las c&#xE9;lulas T para el tratamiento del c&#xE1;ncer pancre&#xE1;tico

&#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xD654;&#xD559; &#xC694;&#xBC95;&#xACFC; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120; &#xCE58;&#xB8CC; &#xBE44; &#xBC1C;&#xD55C; &#xC694;&#xBC95;&#xC758; &#xD544;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558;&#xB294; &#xCDCC;&#xC7A5;&#xC554;&#xC5D0; &#xD55C;&#xACC4; &#xC0DD;&#xC874; &#xD61C;&#xD0DD;&#xC744; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xD560;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xBAA9;&#xC801;&#xC740; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xD56D; &#xC6D0; (PSCA) &#xC790;&#xC8FC; &#xCDCC;&#xC7A5;&#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB300;&#xC0C1; &#xC885;&#xC591;&#xC744; &#xC785;&#xC591; T &#xC140; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;.

&#xCDCC;&#xC7A5;&#xC554; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC124;&#xACC4; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#x5E38;&#x89C4;&#x5316;&#x7597;&#x548C;&#x653E;&#x5C04;&#x6CBB;&#x7597;&#x4EA7;&#x751F;&#x5728;&#x80F0;&#x817A;&#x764C;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x65B0;&#x5F3A;&#x8C03;&#x8FB9;&#x9645;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x5229;&#x76CA;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x5236;&#x5B9A;&#x76EE;&#x6807;&#x8868;&#x793A;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x539F; (&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x539F;)&#xFF0C;&#x7ECF;&#x5E38;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x80F0;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x76F8;&#x5173;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x6536;&#x517B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x79FB;&#x529E;&#x6CD5;&#x3002;

T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x80F0;&#x817A;&#x764C;&#x3002;

Conventional chemotherapy and radiotherapy produce marginal survival benefits in pancreatic cancer, underscoring the need for novel therapies. The aim of this study is to develop an adoptive T cell transfer approach to target tumours expressing prostate stem cell antigen (PSCA), a tumour-associated antigen that is frequently expressed by pancreatic cancer cells.

Engineered T cells for pancreatic cancer treatment.

La chimioth&#xE9;rapie et la radioth&#xE9;rapie conventionnelle des avantages de survie marginales dans le cancer du pancr&#xE9;as, ce qui souligne la n&#xE9;cessit&#xE9; pour de nouvelles th&#xE9;rapies. Le but de cette &#xE9;tude est de d&#xE9;velopper une approche T adoptive cellule de transfert &#xE0; cibler les tumeurs exprimant l&#x26;#39;antig&#xE8;ne de cellule souche prostatique (PSCA), un antig&#xE8;ne associ&#xE9; &#xE0; une tumeur qui est souvent exprim&#xE9; par les cellules du cancer du pancr&#xE9;as.

Ing&#xE9;nierie des cellules T pour le traitement du cancer du pancr&#xE9;as

Konventionelle Chemotherapie und Bestrahlungen produzieren marginal-&Uuml;berlebensvorteile bei Bauchspeicheldr&uuml;senkrebs, unterstreicht die Notwendigkeit f&uuml;r neuartige Therapien. Ziel dieser Studie ist, entwickeln ein adoptiven T-Zell-Transfer-Konzept f&uuml;r Ziel Tumore Ausdruck Prostata Stammzell-Antigen (PSCA), ein Tumor-assoziierte Antigen, der h&auml;ufig von Bauchspeicheldr&uuml;senkrebs Zellen ausgedr&uuml;ckt wird.

Manipulierte T-Zellen f&uuml;r die Behandlung von Bauchspeicheldr&uuml;senkrebs.

La radioterapia e la chemioterapia convenzionale di produrre benefici di sopravvivenza marginale nel cancro del pancreas, sottolineando la necessit&agrave; di nuove terapie. Lo scopo di questo studio &egrave; quello di sviluppare un approccio di trasferimento adottivo T cell per tumori destinazione esprimere antigene prostata cellule staminali (PSCA), un antigene tumore-associato che viene frequentemente espressa dalle cellule di cancro al pancreas.

Cellule T ingegnerizzate per il trattamento del cancro del pancreas.

&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x3084;&#x653E;&#x5C04;&#x7DDA;&#x7642;&#x6CD5;&#x306F;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3001;&#x81B5;&#x81D3;&#x764C;&#x3067;&#x306F;&#x9650;&#x754C;&#x751F;&#x5B58;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306F;&#x3001;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x6297;&#x539F;&#xFF08;PSCA&#xFF09;&#x3001;&#x983B;&#x7E41;&#x306B;&#x81B5;&#x81D3;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x95A2;&#x9023;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x3092;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x990A;&#x5B50;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x9001;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x81B5;&#x81D3;&#x304C;&#x3093;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x305F;T&#x7D30;&#x80DE;

&#x867D;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x6CBB;&#x7597;&#x7231;&#x6CFC;&#x65AF;&#x5766;-&#x5DF4;&#x5C14;&#x75C5;&#x6BD2; (EBV)-&#x7279;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE; (Ctl) &#x53EF;&#x4EE5;&#x6CBB;&#x7597; EBV &#x76F8;&#x5173;&#x970D;&#x5947;&#x91D1;&#x548C;&#x975E;&#x970D;&#x5947;&#x91D1;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624; (HL/&#x975E;&#x970D;&#x5947;&#x91D1;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;)&#xFF0C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x80BF;&#x7624;&#x7684; 50%&#x4EE5;&#x4E0A;&#x662F; EBV &#x6D88;&#x6781;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x63CF;&#x8FF0;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x6211;&#x4EEC;&#x80FD;&#x591F;&#x59CB;&#x7EC8;&#x5982;&#x4E00;&#x5730;&#x751F;&#x6210;&#xFF0C;&#x5728;&#x5355;&#x4E2A;&#x884C;&#xFF0C;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5230;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x975E;&#x75C5;&#x6BD2;&#x80BF;&#x7624;&#x76F8;&#x5173;&#x6297;&#x539F; (TAAs) &#x4EBA;&#x7C7B; HL/NHL&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5B58;&#x6D3B;&#x7D20;&#xFF0C;&#x6CD5;&#x5E08;-A4&#x3001; &#x6ED1;&#x819C;&#x8089;&#x7624; X &#x6240;&#x8868;&#x793A;&#x7684; Ctl &#x8868;&#x8FBE;&#x6297;&#x539F;&#x5728;&#x9ED1;&#x8272;&#x7D20;&#x7624; (PRAME) &#x548C;&#x7EBD;&#x7EA6;-ESO-1 (SSX2)&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECE;&#x4E5D;&#x70B9;&#x4E5D;&#x4E2A;&#x5065;&#x5EB7;&#x6350;&#x52A9;&#x56FD;&#x548C;&#x4E94;&#x4E2A;&#x516B;&#x4E2A;&#x7684;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x60A3;&#x8005;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x8BBA;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6297;&#x539F; (HLA) &#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x8FD9;&#x4E9B; Ctl&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x91CD;&#x65B0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5927;&#x4E9A;&#x9488;&#x5BF9; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6269;&#x589E;&#xFF0C;&#x7531;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Dc) &#x4E0E;&#x523A;&#x6FC0;&#x8109;&#x51B2;&#x91CD;&#x53E0;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x9009;&#x4E0B;&#x4F18;&#x5316;&#x7684; Th1 &#x5206;&#x5316;&#x6297;&#x539F;&#x3001; prosurvival/&#x589E;&#x6B96;&#x548C; Treg &#x7EC6;&#x80DE;&#x6291;&#x5236;&#x56E0;&#x5B50;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x5E93;&#x3002;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x884C;&#x7684; CD4(+) &#x548C; CD8(+)&#xFF0C;polycytokine &#x751F;&#x4EA7;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x9488;&#x5BF9;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x8868;&#x4F4D;&#x4E0E;&#x5BF9;&#x81EA;&#x4F53;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6EB6;&#x6D3B;&#x6027;&#x4E0A;&#x6240;&#x9009;&#x7684; TAAs&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x4F17;&#x591A;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5F02;&#x6027;&#x4F5C;&#x7269;&#x8F93;&#x6DB2;&#x53EF;&#x5EF6;&#x957F; CTL &#x7597;&#x6CD5;&#x5BF9;&#x6CBB;&#x7597;&#x751A;&#x81F3; EBV &#x8D1F;&#x9762; HL &#x548C;&#x975E;&#x970D;&#x5947;&#x91D1;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x7684;&#x597D;&#x5904;&#x3002;

&#x540C;&#x65F6;&#x9488;&#x5BF9;&#x591A;&#x4E2A;&#x80BF;&#x7624;&#x76F8;&#x5173;&#x6297;&#x539F;&#x6CBB;&#x7597; EBV &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8D1F;&#x9762;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x3002;

Although immunotherapy with Epstein-Barr virus (EBV)-specific cytotoxic T lymphocytes (CTLs) can treat EBV-associated Hodgkin and non-Hodgkin lymphoma (HL/NHL), more than 50% of such tumors are EBV negative. We now describe an approach that allows us to consistently generate, in a single line, CTLs that recognize a wide spectrum of nonviral tumor-associated antigens (TAAs) expressed by human HL/NHL, including Survivin, MAGE-A4, Synovial sarcoma X (SSX2), preferentially expressed antigen in melanoma (PRAME) and NY-ESO-1. We could generate these CTLs from nine of nine healthy donors and five of eight lymphoma patients, irrespective of human leukocyte antigen (HLA) type. We reactivated TAA-directed T cells ex vivo, by stimulation with dendritic cells (DCs) pulsed with overlapping peptide libraries spanning the chosen antigens in the presence of an optimized Th1-polarizing, prosurvival/proliferative and Treg inhibitory cytokine combination. The resultant lines of CD4(+) and CD8(+), polycytokine-producing T cells are directed against a multiplicity of epitopes expressed on the selected TAAs, with cytolytic activity against autologous tumor cells. Infusion of such multispecific monocultures may extend the benefits of CTL therapy to treatment even of EBV negative HL and NHL.

Cytotoxic T lymphocytes simultaneously targeting multiple tumor-associated antigens to treat EBV negative lymphoma.

Bien que l&#x26;#39;immunoth&#xE9;rapie par le virus Epstein-Barr virus (EBV)-lymphocytes T cytotoxiques sp&#xE9;cifiques (CTL) peut traiter associ&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;EBV de Hodgkin et les lymphomes non hodgkiniens (HL / LNH), plus de 50% de ces tumeurs sont EBV n&#xE9;gative. Nous allons maintenant d&#xE9;crire une approche qui nous permet de fa&#xE7;on constante, sur une seule ligne, CTL qui reconnaissent un large &#xE9;ventail de non-viraux antig&#xE8;nes associ&#xE9;s aux tumeurs (TAA) exprim&#xE9;s par les activit&#xE9;s humaines HL / LNH, y compris la survivine, MAGE-A4, le sarcome synovial X ( SSX2), pr&#xE9;f&#xE9;rentiellement exprim&#xE9; l&#x26;#39;antig&#xE8;ne dans le m&#xE9;lanome (PRAME) et NY-ESO-1. Nous pourrions g&#xE9;n&#xE9;rer ces CTL de neuf de neuf donneurs sains et cinq des huit patients atteints de lymphome, ind&#xE9;pendamment de l&#x26;#39;antig&#xE8;ne des leucocytes humains (HLA) de type. On r&#xE9;activ&#xE9; ANT-T dirig&#xE9;e cellules ex vivo, par stimulation avec des cellules dendritiques) puls&#xE9;es avec chevauchement des banques de peptides couvrant les antig&#xE8;nes choisis en pr&#xE9;sence d&#x26;#39;une optimis&#xE9;e Th1-polarisant, combinaison cytokine prosurvival / prolif&#xE9;rative et Treg inhibitrice. Les lignes r&#xE9;sultantes de CD4 (+) et CD8 (+), polycytokine producteurs de cellules T sont dirig&#xE9;s contre une multiplicit&#xE9; d&#x26;#39;&#xE9;pitopes exprim&#xE9;s sur les AVA s&#xE9;lectionn&#xE9;s, ayant une activit&#xE9; cytolytique contre des cellules tumorales autologues. Infusion de ces monocultures multisp&#xE9;cifiques peuvent &#xE9;tendre les avantages de la th&#xE9;rapie CTL &#xE0; un traitement, m&#xEA;me de l&#x26;#39;EBV n&#xE9;gative HL et NHL.

Les lymphocytes T cytotoxiques ciblant simultan&#xE9;ment des multiples antig&#xE8;nes associ&#xE9;s aux tumeurs EBV pour traiter lymphome n&#xE9;gatif

Obwohl Immuntherapie mit Epstein - Barr-Virus (EBV)-spezifische zytotoxische T-Lymphozyten (CTLs) k&ouml;nnen behandeln, EBV-assoziierter Hodgkin und non-Hodgkin-Lymphom (HL/NHL), mehr als 50 % dieser Tumoren sind EBV negativ. Wir beschreiben nun ein Konzept, das erlaubt uns, konsequent, in einer einzelnen Zeile Zertifikatsvertrauenslisten generieren, die ein breites Spektrum an nonviral Tumor-assoziierte Antigene (TAAs) durch menschliche HL/NHL, einschlie&szlig;lich Survivin, MAGE-A4, Synovialsarkom X ausgedr&uuml;ckt zu erkennen (SSX2), bevorzugt ausgedr&uuml;ckt Antigen in Melanom (PRAME) und NY-ESO-1. Wir k&ouml;nnten diese CTLs aus neun neun gesunde Spender und f&uuml;nf der acht Lymphom-Patienten, unabh&auml;ngig von human Leukocyte Antigen (HLA) Art generieren. Wir erneut unter der Regie von TAA T-Zellen ex Vivo, durch Stimulation mit dendritischen Zellen (DCs) gepulst mit &uuml;berlappenden Peptid Bibliotheken die gew&auml;hlten Antigene in Anwesenheit eines optimierten Th1-Polfilter, prosurvival/proliferative und Treg hemmende Zytokin Kombination aktiviert. Die resultierenden Linien von CD4(+) und CD8(+), Polycytokine-Herstellung von T-Zellen richten sich gegen eine Vielzahl von Epitopes auf die ausgew&auml;hlten TAAs mit Keiko Aktivit&auml;t gegen autologe Tumorzellen ausgedr&uuml;ckt. Infusion von solchen multispecific Monokulturen kann die Vorteile der CTL-Therapie zur Behandlung sogar der EBV negative HL und NHL verl&auml;ngern.

Cytotoxische T-Lymphozyten, die gleichzeitig f&uuml;r mehrere Tumor-assoziierte Antigene EBV zu behandeln negative Lymphom.

Anche se l&#39;immunoterapia con virus di Epstein - Barr (EBV)-specifici linfociti T citotossici (CTL) possono trattare EBV-associated Hodgkin e linfoma non-Hodgkin (NHL/HL), oltre il 50% di tali tumori sono EBV negativo. Descriviamo ora un approccio che ci permette di generare costantemente, in una sola riga, CTL che riconoscono un ampio spettro di antigeni virali di tumore-associati (TAA) espresso da HL/NHL umana, tra cui il sarcoma sinoviale Survivin, MAGE-A4, X (SSX2), preferenzialmente espressi dell&#39;antigene nel melanoma (Alberto) e NY-ESO-1. Noi potremmo generare queste CTL da nove di nove donatori sani e cinque degli otto pazienti di linfoma, a prescindere dal tipo di human leukocyte antigen (HLA). Abbiamo riattivato TAA-regia T cellule ex vivo, dalla stimolazione con le cellule dendritiche (DCs) pulsato con librerie di peptidi che abbracciano la scelti degli antigeni in presenza di un Th1-polarizzazione ottimizzato, prosurvival/proliferativa e Treg citochina inibitoria combinazione di sovrapposizione. Le conseguenti linee di CD4(+) e di cellule, cellule T che producono polycytokine sono diretti contro una molteplicit&agrave; di epitopi espressi su TAAs selezionati, con attivit&agrave; citolitica contro le cellule tumorali autologhe. Infusione di tali multispecific monocolture possa estendere i benefici della terapia CTL al trattamento anche di EBV negativo HL e NHL.

Linfociti T citotossici targeting simultaneamente pi&ugrave; antigeni tumore-associati per il trattamento di EBV negativo linfoma.

Epstein-Barr&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;EBV&#xFF09;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#xFF08;CTL&#xFF09;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;EBV&#x95A2;&#x9023;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x3068;&#x975E;&#x30DB;&#x30B8;&#x30AD;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#xFF08;HL / NHL&#xFF09;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x816B;&#x760D;&#x306E;50&#xFF05;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x304C;EBV&#x9670;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x884C;&#x3067;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x30B5;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D3;&#x30F3;&#x3001;MAGE-A4&#x3001;&#x6ED1;&#x819C;&#x8089;&#x816B;X&#xFF08;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30D2;&#x30C8;HL / NHL&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x975E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6027;&#x816B;&#x760D;&#x95A2;&#x9023;&#x6297;&#x539F;&#xFF08;TAA&#xFF09;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;CTL&#x304C;SSX2&#xFF09;&#x3001;&#x512A;&#x5148;&#x7684;&#x306B;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30FC;&#x30DE;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#xFF08;PRAME&#xFF09;&#x53CA;&#x3073;NY-ESO-1&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x6297;&#x539F;&#xFF08;HLA&#xFF09;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;9&#x5065;&#x5EB7;&#x306A;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x306E;9&#x3068;8&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;5&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;CTL&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Th1&#x7D30;&#x80DE;&#x504F;&#x5149;&#x3001;&#x5897;&#x6B96;/ prosurvival&#x3068;Treg&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x6027;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x30B9;&#x30D1;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x91CD;&#x8907;&#x3092;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x3057;&#x305F;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;DC&#xFF09;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;TAA&#x4E3B;&#x5C0E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;ex vivo&#x3067;&#x518D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;CD4&#x306E;&#x7DDA;&#xFF08;+&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;CD8&#xFF08;+&#xFF09;&#x306F;&#x3001;polycytokine-&#x7523;&#x751F;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x591C;&#x9593;&#x4EE3;&#x7406;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30D4;&#x30C8;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x5411;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x591A;&#x91CD;&#x30E2;&#x30CE;&#x30AB;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E3;&#x30FC;&#x306E;&#x6CE8;&#x5165;&#x3067;&#x3082;EBV&#x9670;&#x6027;HL&#x3068;NHL&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;CTL&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x3001;EBV&#x9670;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x3092;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x95A2;&#x9023;&#x6297;&#x539F;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;

&#xBE44;&#xB85D; &#xC5E1; &#xC2A4;&#xD0C0;&#xC778;-&#xBC14; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (EBV)&#xC640; immunotherapy-Hodgkin EBV &#xAD00;&#xB828; &#xBC0F; &#xBE44; Hodgkin &#xB9BC;&#xD504; &#xC885; (HL/NHL) &#xD2B9;&#xC815; cytotoxic T &#xC138;&#xD3EC; (Ctl)&#xC744; &#xCE58;&#xB8CC;&#xD560; &#xC218;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC885;&#xC591;&#xC758; 50%&#xB294; EBV &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xD55C; &#xC904;, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; HL/NHL, Survivin, &#xB9C8;&#xC220;&#xC0AC;-A4, &#xD65C; &#xC561; &#xC721; &#xC885; X&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xD45C;&#xD604; nonviral &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; &#xD56D; &#xC6D0; (&#xB2E4;&#xC2DC;)&#xC758; &#xB113;&#xC740; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC744; &#xC778;&#xC2DD; &#xD558;&#xB294; Ctl&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xAD00; &#xB418; &#xAC8C; &#xC0DD;&#xC131; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC811;&#xADFC; (SSX2) &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD751;&#xC0C9; &#xC885; (PRAME) &#xBC0F; &#xB274;&#xC695; &#xC18C;&#xC7AC; 1 &#xD56D; &#xC6D0; &#xD45C;&#xD604;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 9 9 &#xBA85;&#xC758; &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790;&#xC758; 5 &#xC778;&#xAC04; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; &#xD56D; &#xC6D0; (HLA) &#xD615;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; 8 &#xBA85;&#xC758; &#xB9BC;&#xD504; &#xC885; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; Ctl&#xC744; &#xC0DD;&#xC131;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2E4;&#xC2DC; ex vivo, &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (DCs)&#xC640; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;&#xB7EC;&#xB9AC; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; Th1 &#xD3B8;&#xAD11; &#xC874;&#xC7AC; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0;, prosurvival/&#xC99D;&#xC2DD; &#xBC0F; Treg &#xAE08;&#xC9C0; cytokine &#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCE5C; &#xACB9;&#xCE58;&#xB294; &#xD384;&#xC2A4; TAA &#xAC10;&#xB3C5; T&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC904; CD4(+)&#xC640; CD8(+)&#xC758; polycytokine &#xC0DD;&#xC0B0; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD5CC; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; cytolytic &#xC791;&#xC5C5;&#xC5D0; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; epitopes &#xBCF5;&#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xB3C5;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; multispecific monocultures&#xC758; &#xC8FC;&#xC785;&#xB3C4; EBV &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; HL&#xC640; NHL&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; CTL &#xCE58;&#xB8CC; &#xD61C;&#xD0DD;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; &#xD56D; &#xC6D0; EBV &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; cytotoxic T &#xC138;&#xD3EC; &#xB9BC;&#xD504; &#xC885; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778;.

A pesar de la inmunoterapia con virus de Epstein-Barr (VEB)-espec&#xED;fica de linfocitos T citot&#xF3;xicos (CTL) se puede tratar asociada al EBV de Hodgkin y linfoma no Hodgkin (LH / NHL), m&#xE1;s del 50% de estos tumores son VEB negativa. Ahora describir un enfoque que nos permite generar consistentemente, en una sola l&#xED;nea, CTL que reconocen una amplia gama de virales ant&#xED;genos asociados a tumores (TAA) expresadas por el ser humano HL / NHL, incluyendo Survivin, MAGE-A4, el sarcoma sinovial X ( SSX2), expresa preferentemente el ant&#xED;geno en el melanoma (PRAME) y NY-ESO-1. Podr&#xED;amos generar estos CTL desde las nueve de nueve donantes sanos y cinco de ocho pacientes con linfoma, con independencia del ant&#xED;geno leucocitario humano (HLA). Hemos reactivado TAA-dirigida c&#xE9;lulas T ex vivo, por estimulaci&#xF3;n con c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas (DCS) pulsadas con superposici&#xF3;n bibliotecas de p&#xE9;ptidos que abarcan los ant&#xED;genos seleccionados en presencia de un optimizado Th1 polarizante, combinaci&#xF3;n de citocinas prosurvival / proliferativa y TREG inhibitorio. Las l&#xED;neas resultantes de CD4 (+) y CD8 (+), produciendo polycytokine-c&#xE9;lulas T se dirigen contra una multiplicidad de ep&#xED;topes expresados &#x200B;&#x200B;en los AAT seleccionados, con actividad citol&#xED;tica contra c&#xE9;lulas tumorales aut&#xF3;logas. La infusi&#xF3;n de estos monocultivos multiespec&#xED;ficos pueden extender los beneficios de la terapia de CTL para el tratamiento incluso de EBV negativos HL y la NHL.

Al mismo tiempo los linfocitos T citot&#xF3;xicos como objetivo varios ant&#xED;genos asociados a tumores para tratar el linfoma EBV negativo

Aunque ex vivo ampliadas de las c&eacute;lulas T son actualmente ampliamente utilizadas en los ensayos precl&iacute;nicos y cl&iacute;nicos, la complejidad de fabricaci&oacute;n sigue siendo un importante obst&aacute;culo para una aplicaci&oacute;n m&aacute;s amplia. En esta revisi&oacute;n se discuten los protocolos actuales para el ex vivo expansi&oacute;n de virus - y tumorales T c&eacute;lulas y describir nuestra experiencia en optimizaci&oacute;n de fabricaci&oacute;n utilizando un matraz de cultura est&aacute;tica permeables al gas (G-Rex). Este dispositivo innovador ha revolucionado el proceso de fabricaci&oacute;n por lo que nos permite aumentar el rendimiento de la c&eacute;lula disminuyendo la frecuencia de la manipulaci&oacute;n de c&eacute;lulas y el tiempo de cultivo in vitro. Resulta que ahora se utiliza en la fabricaci&oacute;n buena pr&aacute;ctica salas (GMP) para la producci&oacute;n de c&eacute;lulas cl&iacute;nica en nuestra instituci&oacute;n, as&iacute; como muchos otros en los Estados Unidos y en todo el mundo.

Optimizaci&oacute;n fabricaci&oacute;n de virus y tumor-T c&eacute;lulas espec&iacute;ficas.

&#x867D;&#x7136;&#x524D;&#x4F53;&#x5185;&#x6269;&#x5927;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x76EE;&#x524D;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x4E8E;&#x4E34;&#x5E8A;&#x524D;&#x548C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BD5;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x5236;&#x9020;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x4ECD;&#x7136;&#x662F;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x4E00;&#x5927;&#x969C;&#x788D;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x6B21;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x5F53;&#x524D;&#x534F;&#x8BAE;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x4E8B;&#x540E;&#x4F53;&#x5916;&#x6269;&#x589E;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5E76;&#x63CF;&#x8FF0;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x5236;&#x9020;&#x4F18;&#x5316;&#x4F7F;&#x7528;&#x900F;&#x6C14;&#x7684;&#x9759;&#x6001;&#x57F9;&#x517B;&#x74F6; (G-Rex&#xFF09; &#x7684;&#x7ECF;&#x9A8C;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x521B;&#x65B0;&#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#x5DF2;&#x901A;&#x8FC7;&#x5141;&#x8BB8;&#x6211;&#x4EEC;&#x589E;&#x52A0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x91CF;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x51CF;&#x5C11;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x64CD;&#x4F5C;&#x53CA;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x65F6;&#x95F4;&#x9891;&#x7387;&#x9769;&#x547D;&#x6027;&#x7684;&#x5236;&#x4F5C;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x5B83;&#x662F;&#x73B0;&#x5728;&#x6B63;&#x5728;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E2D;&#x826F;&#x597D;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x5B9E;&#x8DF5;&#x6211;&#x4EEC;&#x673A;&#x6784;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x4EA7; &#xFF08;GMP&#xFF09; &#x8BBE;&#x65BD;&#x4EE5;&#x53CA;&#x8BB8;&#x591A;&#x5176;&#x4ED6;&#x4EBA;&#x5728;&#x7F8E;&#x56FD;&#x548C;&#x4E16;&#x754C;&#x5404;&#x5730;&#x3002;

&#x4F18;&#x5316;&#x5236;&#x9020;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Although ex vivo expanded T cells are currently widely used in pre-clinical and clinical trials, the complexity of manufacture remains a major impediment for broader application. In this review we discuss current protocols for the ex vivo expansion of virus- and tumor-specific T cells and describe our experience in manufacture optimization using a gas-permeable static culture flask (G-Rex). This innovative device has revolutionized the manufacture process by allowing us to increase cell yields while decreasing the frequency of cell manipulation and in vitro culture time. It is now being used in good manufacturing practice (GMP) facilities for clinical cell production in our institution as well as many others in the US and worldwide.

Optimization manufacture of virus- and tumor-specific T cells.

Bien qu&#39;ex vivo &eacute;largis des lymphocytes T sont actuellement largement utilis&eacute;s dans les essais pr&eacute;cliniques et cliniques, la complexit&eacute; de fabrication demeure un obstacle majeur pour une application plus large. Dans cette revue, nous discutons les protocoles actuels pour l&#39;ex vivo expansion du virus de tumeur sp&eacute;cifique et T cells et d&eacute;crire notre exp&eacute;rience dans l&#39;optimisation de la fabrication &agrave; l&#39;aide d&#39;un flacon de culture statique perm&eacute;able au gaz (G-Rex). Ce dispositif innovant a r&eacute;volutionn&eacute; le processus de fabrication de ce qui nous permet d&#39;augmenter le rendement de la cellule tout en diminuant la fr&eacute;quence de manipulation de la cellule et le temps de culture in vitro. Il est maintenant utilis&eacute; dans la fabrication de la bonne pratique des installations (GMP) pour la production de cellules cliniques dans notre institution ainsi que beaucoup d&#39;autres aux &Eacute;tats-Unis et dans le monde.

Optimisation de la fabrication de cellules et de tumeur-sp&eacute;cifique au virus T.

Obwohl ex Vivo die erweiterte T-Zellen derzeit weithin in vorklinischen und klinischen Studien verwendet werden, bleibt die Komplexit&auml;t der Herstellung ein wesentliches Hindernis f&uuml;r breitere Anwendung. In diesen Bericht diskutieren wir aktuelle Protokolle f&uuml;r die Ex Vivo Expansion von Virus - und Tumor-spezifischer T-Zellen und beschreiben unsere Erfahrung in der Herstellung-Optimierung, die mit einen Gas-durchl&auml;ssigen statische Kultur-Kolben (G-Rex). Dieses innovative Ger&auml;t revolutioniert den Prozess der Herstellung erlauben es uns, Zelle Ertr&auml;ge beim Verringern der H&auml;ufigkeit der Zelle Manipulation und in-vitro-Kulturzeit zu erh&ouml;hen. Es ist nun verwendet wird, in der guten Herstellungspraxis (GMP) Einrichtungen f&uuml;r klinische Zellproduktion in unserer Institution &uuml;ben sowie viele andere in den USA und weltweit.

Optimierung Herstellung von Virus und Tumor-spezifische T-Zellen.

Anche se ex vivo espanse cellule T sono attualmente ampiamente utilizzate in studi preclinici e clinici, la complessit&agrave; di fabbricazione rimane un ostacolo importante per la pi&ugrave; ampia applicazione. In questa recensione parleremo attuali protocolli per l&#39;ex vivo espansione del virus e tumore-specifiche T cellule e descrivere la nostra esperienza nella fabbricazione di ottimizzazione utilizzando un pallone di coltura statica gas-permeabile (G-Rex). Questo innovativo dispositivo ha rivoluzionato il processo di fabbricazione da che ci permette di aumentare le rese delle cellule diminuendo la frequenza di manipolazione di cellule e di tempo della coltura in vitro. &Egrave; ora utilizzato nella fabbricazione di buona pratica strutture (GMP) per la produzione di cella clinico nella nostra istituzione cos&igrave; come molti altri negli Stati Uniti e in tutto il mondo.

Ottimizzazione produzione di cellule e tumore-specifici per il virus T.

Ex vivo &#x5C55;&#x958B;&#x3057;&#x305F; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x5E83;&#x304F;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x3068;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x88FD;&#x9020;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x306F;&#x3088;&#x308A;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x969C;&#x5BB3;&#x306B;&#x6B8B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E; ex vivo &#x62E1;&#x5F35;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7279;&#x7570;&#x3068;&#x816B;&#x760D; T &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3057;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7D4C;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30AC;&#x30B9;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x9759;&#x7684;&#x57F9;&#x990A;&#x7528;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B9;&#x30B3; (G-Rex) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x88FD;&#x9020;&#x306E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9769;&#x65B0;&#x7684;&#x306A;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x88FD;&#x9020;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x7D30;&#x80DE;&#x64CD;&#x4F5C;&#x3068; in vitro &#x57F9;&#x990A;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x983B;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x9593;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53CE;&#x7A6B;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x826F;&#x3044;&#x88FD;&#x9020;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7DF4;&#x7FD2;&#x4ECA; &#xFF08;GMP&#xFF09; &#x5F53;&#x65BD;&#x8A2D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30BB;&#x30EB;&#x751F;&#x7523;&#x8A2D;&#x5099;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x7C73;&#x56FD;&#x3068;&#x4E16;&#x754C;&#x4E2D;&#x3002;

&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x816B;&#x760D;&#x56FA;&#x6709;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x88FD;&#x9020;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Ex vivo &#xD655;&#xC7A5; &#xB41C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C; &#xC870;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;, &#xC81C;&#xC870;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC5D0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC694; &#xC7A5;&#xC560;&#xBB3C;&#xC774; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB9AC;&#xBDF0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xB17C;&#xC758; &#xC804; &#xBE44;&#xBCF4; &#xD655;&#xC7A5;&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; T &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xAC00;&#xC2A4; &#xD22C;&#xACFC;&#xC131; &#xC815;&#xC801; &#xBB38;&#xD654; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4; &#xD06C; (G-&#xB809;&#xC2A4;)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC81C;&#xC870; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACBD;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD601;&#xC2E0;&#xC801;&#xC778; &#xC7A5;&#xCE58; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC140; &#xC870;&#xC791; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xAC04; &#xBE48;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC140; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xB7C9; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC81C;&#xC870; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xD601;&#xBA85; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xAD50;&#xC721; &#xAE30;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC784;&#xC0C1; &#xC140; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC124; (GMP) &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E4;&#xB978; &#xBBF8;&#xAD6D; &#xBC0F; &#xC804;&#xC138;&#xACC4; &#xC5F0;&#xC2B5; &#xC88B;&#xC740; &#xC81C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418; &#xACE0;.

&#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xC885;&#xC591; &#xAD00;&#xB828; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC81C;&#xC870;.

&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x5171;&#x540C;&#x7684;&#x793E;&#x4F1A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x4ECD;&#x5F02;&#x57FA;&#x56E0;&#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x672F;&#x540E;&#x7684;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x548C;&#x53D1;&#x75C5;&#x7387;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5B89;&#x5168;&#x5730;&#x9632;&#x6B62;&#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2; (CMV)&#x3001; &#x7231;&#x6CFC;&#x65AF;&#x5766;-&#x5DF4;&#x5C14;&#x75C5;&#x6BD2; (EBV) &#x548C;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E09;&#x540D;&#x7591;&#x532A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5236;&#x9020;&#x7684;&#x4E2A;&#x522B; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x6BCF;&#x4E00;&#x79CD;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x65E0;&#x6CD5;&#x627F;&#x53D7;&#x5728;&#x65F6;&#x95F4;&#x548C;&#x6210;&#x672C;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x79CD;&#x75C5;&#x6BD2;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x5355;&#x4E00;&#x6587;&#x5316;&#x80CC;&#x666F;&#x4E0B;&#x4F7F;&#x7528;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; EBV &#x8F6C;&#x5316; B &#x6C38;&#x751F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A; (LCLs)&#xFF0C;&#x4E24;&#x8005; pp65 &#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3001; &#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8F6C;&#x67D3;&#x5236;&#x6210;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x9012;&#x5448;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;Trivirus &#x7279;&#x5B9A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x4EA7;&#x751F;&#x5065;&#x5EB7;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6350;&#x732E;&#x8005;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9884;&#x9632;&#x548C;&#x6CBB;&#x7597;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x4E09;&#x79CD;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x5728;&#x6307;&#x5B9A;&#x7684;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#xFF0C;&#x6536;&#x4EF6;&#x4EBA;&#x65E0;&#x5173;&#x3001; &#x90E8;&#x5206;-HLA &#x76F8;&#x5408;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E09;&#x65B9;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x4FE1;&#x606F;&#x548C;&#x7269;&#x6D41; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5236;&#x9020;&#x3002;

&#x751F;&#x4EA7;&#x826F;&#x597D;&#x5236;&#x9020;&#x5B9E;&#x8DF5;&#x7EA7;&#x5177;&#x4F53;&#x7231;&#x6CFC;&#x65AF;&#x5766;-&#x5DF4;&#x5C14;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3001; &#x5DE8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x6BD2;&#x548C;&#x817A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x9884;&#x9632;&#x6216;&#x6CBB;&#x7597;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6027;&#x611F;&#x67D3; post-allogeneic &#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

Infections with a range of common community viruses remain a major cause of mortality and morbidity after allogeneic hematopoietic stem cell transplantation. T cells specific for cytomegalovirus (CMV), Epstein-Barr virus (EBV) and adenoviruses can safely prevent and infections with these three most common culprits, but the manufacture of individual T cell lines for each virus would be prohibitive in terms of time and cost. We have demonstrated that T cells specific for all three viruses can be manufactured in a single culture using monocytes and EBV-transformed B lymphoblastoid cell lines (LCLs), both transduced with an adenovirus vector expressing pp65 of CMV, as antigen-presenting cells. Trivirus-specific T cell lines produced from healthy stem cell donors could prevent and treat infections with all three viruses, not only in the designated recipient, but in unrelated, partially-HLA-matched third party recipients. We now provide the details and logistics of T cell manufacture.

Production of good manufacturing practice-grade cytotoxic T lymphocytes specific for Epstein-Barr virus, cytomegalovirus and adenovirus to prevent or treat viral infections post-allogeneic hematopoietic stem cell transplant.

Les infections &#xE0; un &#xE9;ventail de virus de la communaut&#xE9; communes restent une cause majeure de mortalit&#xE9; et de morbidit&#xE9; apr&#xE8;s une allogreffe de cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques. Lymphocytes T sp&#xE9;cifiques pour le cytom&#xE9;galovirus (CMV), virus Epstein-Barr (EBV) et les ad&#xE9;novirus peuvent pr&#xE9;venir en toute s&#xE9;curit&#xE9; et les infections avec ces trois coupables les plus communs, mais la fabrication de diff&#xE9;rents lign&#xE9;es de cellules T pour chaque virus serait prohibitif en termes de temps et le co&#xFB;t . Nous avons d&#xE9;montr&#xE9; que les cellules T sp&#xE9;cifiques pour les trois virus peuvent &#xEA;tre fabriqu&#xE9;s dans une culture unique &#xE0; l&#x26;#39;aide des monocytes et des transform&#xE9;es par EBV lignes cellulaires lymphoblasto&#xEF;des B (LCL), &#xE0; la fois transduites avec un vecteur ad&#xE9;novirus exprimant pp65 du CMV, comme cellules pr&#xE9;sentatrices d&#x26;#39;antig&#xE8;ne. Trivirus-lign&#xE9;es de cellules T sp&#xE9;cifiques produites &#xE0; partir de donneurs sains de cellules souches pourrait pr&#xE9;venir et traiter les infections avec les trois virus, non seulement dans la personne d&#xE9;sign&#xE9;e, mais en ind&#xE9;pendants, partiellement HLA-appari&#xE9;s des tiers b&#xE9;n&#xE9;ficiaires. Nous fournissons maintenant les d&#xE9;tails et la logistique de fabrication de cellules T.

Production de bonnes pratiques de fabrication de qualit&#xE9; lymphocytes T cytotoxiques sp&#xE9;cifiques d&#x26;#39;Epstein-Barr, le cytom&#xE9;galovirus et l&#x26;#39;ad&#xE9;novirus en vue de pr&#xE9;venir ou de traiter des infections virales post-transplantation allog&#xE9;nique de cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques

Infektionen mit einer Reihe von gemeinsamen Gemeinschaft Viren bleiben eine der Hauptursachen f&uuml;r Morbidit&auml;t und Mortalit&auml;t nach allogener h&auml;matopoetischer Stammzelltransplantation. T-Zellen spezifisch f&uuml;r Zytomegalievirus (CMV), Epstein - Barr-Virus (EBV) und Adenoviren sicher verhindern kann und Infektionen mit diesen drei h&auml;ufigsten Schuldigen, aber die Herstellung von individuellen T-Zell-Linien f&uuml;r jeden Virus w&auml;re unerschwinglich hinsichtlich Zeit und Kosten. Wir haben bewiesen, dass T-Zellen bestimmte, f&uuml;r alle drei Viren innerhalb einer einzigen Kultur mit Monozyten und EBV-transformierten B Lymphoblastoidzellen Zelllinien (Sammelverkehre), beide mit ein Adenovirus-Vektor Ausdr&uuml;cken pp65 von CMV, septischen gefertigt werden k&ouml;nnen wie Antigen-pr&auml;sentierenden Zellen. Trivirus-spezifische T-Zell-Linien hergestellt aus gesunden Stammzellen-Spender k&ouml;nnten verhindern und mit allen drei Viren, Infektionen zu behandeln, nicht nur in der bestimmten Empf&auml;nger, sondern auch in unabh&auml;ngigen, teilweise HLA-passende Dritter Empf&auml;nger. Wir bieten jetzt die Details und die Logistik der T-Zell-Herstellung.

Produktion der guten Herstellungspraxis Praxis-Grade cytotoxische T-Lymphozyten, die spezifisch f&uuml;r Epstein - Barr-Virus, Zytomegalie-Virus und Adenoviren, Verh&uuml;tung oder Behandlung von viralen Infektionen post-allogeneic h&auml;matopoetische Stammzelltransplantation.

Infezioni con una gamma di comuni virus comunit&agrave; rimangono delle principali cause di mortalit&agrave; e morbilit&agrave; dopo trapianto di cellule staminali emopoietiche allogeniche. Infezioni con questi tre colpevoli pi&ugrave; comuni, ma la produzione delle variet&agrave; di cellula T individuale per ogni virus e cellule T specifiche per citomegalovirus (CMV), adenovirus e virus di Epstein - Barr (EBV) pu&ograve; impedire in modo sicuro sarebbe proibitive in termini di tempo e costi. Abbiamo dimostrato che T cellule specifiche per tutti i tre virus possono essere realizzati in una singola lingua utilizzando monociti e B trasformati dal EBV linfoblastoidi cell lines (LCLs), entrambi transduced con un vettore di adenovirus esprimendo pp65 del CMV, cellule presentanti l&#39;antigene come. Linee di cellule T specifiche Trivirus prodotte da donatori sani di cellule staminali potrebbero prevenire e trattare le infezioni con tutti i tre virus, non solo nel destinatario designato, ma a terzi estranei, parzialmente HLA-corrispondenza dei destinatari. Ora forniamo i dettagli e la logistica di produzione delle cellule T.

Produzione di good manufacturing practice-grade linfociti T citotossici specifici per il virus Epstein - Barr, citomegalovirus e adenovirus per prevenire o trattare le infezioni virali trapianto di cellule staminali ematopoietiche post-allogeneic.

&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x306F;&#x540C;&#x7A2E;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x5F8C;&#x306E;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7F79;&#x60A3;&#x7387;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x539F;&#x56E0;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30AC;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;CMV&#xFF09;&#x3001;&#x30A8;&#x30D7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30A4;&#x30F3; - &#x30D0;&#x30FC;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF08;EBV&#xFF09;&#x3068;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306F;&#x5B89;&#x5168;&#x306B;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x539F;&#x56E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x611F;&#x67D3;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x500B;&#x3005;&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306E;&#x88FD;&#x9020;&#x306F;&#x6642;&#x9593;&#x3068;&#x30B3;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x9762;&#x3067;&#x9AD8;&#x984D;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x5358;&#x7403;&#x53CA;&#x3073;EBV&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;B&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x82BD;&#x7403;&#x69D8;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#xFF08;LCL&#x3092;&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x3067;&#x88FD;&#x9020;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x793A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;CMV&#x306E;pp65&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x5C0E;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5065;&#x5EB7;&#x306A;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x7523;Trivirus&#x7279;&#x7570;&#x7684;T&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x306F;&#x3001;&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;HLA&#x9069;&#x5408;&#x30B5;&#x30FC;&#x30C9;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x53D7;&#x4FE1;&#x8005;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3067;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x9632;&#x304E;&#x3001;&#x6271;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4ECA;&#x3001;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x88FD;&#x9020;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x3068;&#x7269;&#x6D41;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#x540C;&#x7A2E;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x4E88;&#x9632;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6CBB;&#x7642;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30A8;&#x30D7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30A4;&#x30F3; - &#x30D0;&#x30FC;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30AC;&#x30ED;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30C7;&#x30CE;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x512A;&#x826F;&#x88FD;&#x9020;&#x5B9F;&#x8DF5;&#x30B0;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x751F;&#x7523;

&#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xCEE4;&#xBBA4;&#xB2C8;&#xD2F0; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; allogeneic &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xC2DD; &#xD6C4; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960;&#xACFC; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xB960;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; &#xB0A8;&#xC544; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. T&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC138;&#xD3EC; (CMV), &#xC5E1; &#xC2A4;&#xD0C0;&#xC778;-&#xBC14; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; (EBV)&#xC640; adenoviruses &#xBC29;&#xC9C0; &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xAC8C; &#xC218; &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBC94;&#xC778; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAC01; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC1C;&#xBCC4; T &#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC758; &#xC81C;&#xC870;&#xC640; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC;&#xAC04;&#xACFC; &#xBE44;&#xC6A9; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE08;&#xC9C0; &#xB420; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBAA8;&#xB450; &#xC138; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; monocytes CMV, pp65 &#xD45C;&#xD604; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCA1;&#xD130; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBAA8;&#xB450; EBV &#xBCC0;&#xD615; B lymphoblastoid &#xC140; &#xB77C;&#xC778; (LCLs)&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBB38;&#xD654; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xADF8; T &#xC138;&#xD3EC; &#xAD00;&#xB828; &#xC99D;&#xBA85; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xC73C;&#xB85C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xC138;&#xD3EC;. Trivirus &#xD2B9;&#xC815; T &#xC140; &#xB77C;&#xC778; &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC5C6;&#xB294;, &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;-HLA &#xC77C;&#xCE58; &#xD0C0;&#xC0AC; &#xBC1B;&#xB294; &#xC0AC;&#xB78C;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xB4E0; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC138;&#xBD80; &#xC0AC;&#xD56D; &#xBC0F; T &#xC140; &#xC81C;&#xC870;&#xC758; &#xBB3C;&#xB958;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC88B;&#xC740; &#xC81C;&#xC870; &#xAD00;&#xD589; &#xAE09;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0; cytotoxic T &#xC138;&#xD3EC; &#xC5E1; &#xC2A4;&#xD0C0;&#xC778;-&#xBC14; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;, &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xC544; &#xB370; &#xB178; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xAC10;&#xC5FC; post-allogeneic &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xC774;&#xC2DD; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815;.

Las infecciones con una amplia gama de virus comunes de la comunidad siguen siendo una causa importante de mortalidad y morbilidad despu&#xE9;s de trasplante alog&#xE9;nico de c&#xE9;lulas madre hematopoy&#xE9;ticas. Las c&#xE9;lulas T espec&#xED;ficas para citomegalovirus (CMV), virus de Epstein-Barr (EBV) y adenovirus con seguridad puede prevenir infecciones y con estos tres culpables m&#xE1;s comunes, pero la fabricaci&#xF3;n de las l&#xED;neas individuales de c&#xE9;lulas T para cada virus ser&#xED;a prohibitivo en t&#xE9;rminos de tiempo y costo . Hemos demostrado que las c&#xE9;lulas T espec&#xED;ficas para todas las tres virus puede ser fabricado en una sola cultura mediante monocitos y transformadas con EBV l&#xED;neas de c&#xE9;lulas linfoblastoides B (LCLS), ambos transducidas con un vector de adenovirus que expresan pp65 de CMV, como c&#xE9;lulas presentadoras de ant&#xED;geno. Trivirus espec&#xED;ficos de l&#xED;neas de c&#xE9;lulas T saludables producidos a partir de los donantes de c&#xE9;lulas madre podr&#xED;a prevenir y tratar infecciones con los tres virus, no s&#xF3;lo en el receptor designado, pero no relacionados, en parte-HLA compatible de terceros beneficiarios. Ahora ofrecemos los detalles y la log&#xED;stica de fabricaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas T.

La producci&#xF3;n de Good Manufacturing Practice grado-linfocitos T citot&#xF3;xicos espec&#xED;ficos para el virus Epstein-Barr, citomegalovirus y adenovirus para prevenir o tratar infecciones virales post-trasplante alog&#xE9;nico de c&#xE9;lulas madre hematopoy&#xE9;ticas

Juan F. Vera

Center for Cell and Gene Therapy

Baylor College of Medicine

Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant