in-vitro-assay-of-bacterial-adhesion-onto-mammalian-epithelial-cells

<em>In Vitro</em> Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

To cause infections, bacteria must colonize their host. Bacterial pathogens express various molecules or structures able to promote attachment to host ...

Groupe de Recherche sur les Maladies Infectieuses du Porc GREMIP, Faculte de medecine veterinaire

Bote Ribonucleoprotein Partikel (mRNPs) dienen zum transport von mRNAs entlang neuronalen Dendriten an ihren &Uuml;bersetzung. Zahlreiche mRNA-Bindung und regulatorischen Proteine innerhalb mRNPs Regeln fein das Schicksal gebunden-mRNAs. Ihre spezifische Kombination definiert verschiedene Arten von mRNPs, die wiederum mit bestimmten synaptischen Funktionen zusammenh&auml;ngen. Einer der diese mRNA-bindenen Proteine, Staufen2 (Stau2), wurde gezeigt, dass dendritische mRNAs entlang der Mikrotubuli zu transportieren. Seinen Niederschlag Ausdruck in Neuronen wurde gezeigt, um Wirbels&auml;ule Morphologie und synaptische Funktionen zu &auml;ndern. Um weiter die molekularen Mechanismen zu verstehen, durch die Stau2 synaptische Funktion in Neuronen moduliert, ist es wichtig, Identifizierung und Charakterisierung von Protein-Co-Faktoren, die das Schicksal der Stau2-haltigen mRNPs zu regulieren. Zu diesem Zweck wurde ein Proteomic-Ansatz verwendet, um co-Immunoprecipitated Proteine in Staufen2-haltigen mRNPs isoliert aus embryonalen Ratte Gehirn zu identifizieren. Der Proteomic-Ansatz identifiziert Proteine des Zytoskeletts (Alpha - und Beta-Tubulin) und RUFY3-mRNA-bindende Proteine (PABPC1, HnRNP H1, YB1 und hsc70), ein Protein, das schlecht charakterisiert. W&auml;hrend PABPC1 und YB1 Stau2-haltigen mRNPs durch RNAs zuordnen, hsc70 direkt an Stau2 gebunden ist und diese Interaktion wird durch ATP. PABPC1 und YB1 Proteine Puncta in Dendriten der embryonalen Ratte hippocampal Neuronen gebildet. Jedoch co-localized sie schlecht mit Stau2 in den gro&szlig;en dendritischen komplexen, was darauf hindeutet, dass sie eher Komponenten der mRNA Stau2-haltigen Teilchen sind. Alle zusammen, diese Ergebnisse sind ein weiterer Schritt in der Charakterisierung von Stau2-haltigen mRNPs in Neuronen und stellen neue Tools zu studieren und zu verstehen, wie Stau2-haltigen mRNPs transportiert, translationally zum Schweigen gebracht, w&auml;hrend des Transports und/oder lokal ge&auml;u&szlig;erten Bed&uuml;rfnissen der Zelle.

Molekulare Zusammensetzung der staufen2-haltigen Ribonucleoproteins in embryonalen Rattenhirn.

&#x4FE1;&#x4F7F;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x9897;&#x7C92; (mRNPs) &#x7528;&#x6765;&#x8FD0;&#x9001; mRNAs &#x6CBF;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6811;&#x7A81;&#x5BF9;&#x5176;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x3002;&#x65E0;&#x6570;&#x7684; mRNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x89C4;&#x7BA1;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5185; mRNPs &#x7CBE;&#x7EC6;&#x8C03;&#x8282;&#x7ED1;&#x5B9A; mRNAs &#x7684;&#x547D;&#x8FD0;&#x3002;&#x5176;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x7EC4;&#x5408;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E0D;&#x540C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x4E0E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x76F8;&#x5173;&#x7684; mRNPs&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; mRNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;Staufen2 &#x4E4B;&#x4E00; &#xFF08;Stau2&#xFF09;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A;&#x8FD0;&#x8F93;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x6CBF;&#x5FAE;&#x7BA1;&#x7684;&#x5206;&#x6CCC;&#x3002;&#x8868;&#x660E;&#x51FB;&#x5012;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x6539;&#x53D8;&#x810A;&#x67F1;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x4E86;&#x89E3;&#x7684; Stau2 &#x8C03;&#x8282;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7A81;&#x89E6;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x8981;&#x786E;&#x5B9A;&#x548C;&#x8FA8;&#x522B;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684; Stau2 &#x5305;&#x542B; mRNPs &#x547D;&#x8FD0;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x5408;&#x79DF;&#x3002;&#x4E3A;&#x6B64;&#xFF0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x67E5;&#x660E; co immunoprecipitated &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E2D;&#x542B;&#x6709; Staufen2 &#x7684; mRNPs &#x5206;&#x79BB;&#x80DA;&#x80CE;&#x5927;&#x9F20;&#x5927;&#x8111;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x5B66;&#x65B9;&#x6CD5;&#x786E;&#x5B9A; mRNA &#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D; (PABPC1&#xFF0C;hnRNP H1&#xFF0C;YB1 &#x548C; hsc70&#xFF09;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x5FAE;&#x7BA1; (&alpha;-&#x548C; &beta;-&#x86CB;&#x767D;) &#x548C; RUFY3 &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4E0D;&#x826F;&#x4E3A;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x867D;&#x7136; PABPC1 &#x548C; YB1 &#x5173;&#x8054;&#x901A;&#x8FC7; RNAs Stau2 &#x5305;&#x542B; mRNPs&#xFF0C;hsc70 &#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Stau2 &#x548C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7531; ATP &#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;PABPC1 &#x548C; YB1 &#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x80DA;&#x80CE;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6811;&#x7A81;&#x5F62;&#x6210; puncta&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5F88;&#x5DEE;&#x6B63;&#x4E0E; Stau2 &#x5927;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x800C;&#x662F;&#x542B;&#x6709; Stau2 &#x7684; mRNA &#x7C92;&#x5B50;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x4E2D;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x793A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E2D;&#x542B;&#x6709; Stau2 &#x7684; mRNPs &#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x548C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x6765;&#x7814;&#x7A76;&#x548C;&#x7406;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x8FD0;&#x3001; &#x7FFB;&#x8BD1;&#x5728;&#x8FD0;&#x8F93;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x4FDD;&#x6301;&#x6C89;&#x9ED8;&#x6216;&#x672C;&#x5730;&#x8868;&#x793A;&#x6839;&#x636E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x9700;&#x8981;&#x5305;&#x542B; Stau2 mRNPs&#x3002;

&#x80DA;&#x80CE;&#x5927;&#x9F20;&#x8111;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x542B;&#x6709; staufen2 &#x7684; ribonucleoproteins &#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;

Messenger ribonucleoprotein particles (mRNPs) are used to transport mRNAs along neuronal dendrites to their site of translation. Numerous mRNA-binding and regulatory proteins within mRNPs finely regulate the fate of bound-mRNAs. Their specific combination defines different types of mRNPs that in turn are related to specific synaptic functions. One of these mRNA-binding proteins, Staufen2 (Stau2), was shown to transport dendritic mRNAs along microtubules. Its knockdown expression in neurons was shown to change spine morphology and synaptic functions. To further understand the molecular mechanisms by which Stau2 modulates synaptic function in neurons, it is important to identify and characterize protein co-factors that regulate the fate of Stau2-containing mRNPs. To this end, a proteomic approach was used to identify co-immunoprecipitated proteins in Staufen2-containing mRNPs isolated from embryonic rat brains. The proteomic approach identified mRNA-binding proteins (PABPC1, hnRNP H1, YB1 and hsc70), proteins of the cytoskeleton (alpha- and beta-tubulin) and RUFY3 a poorly characterized protein. While PABPC1 and YB1 associate with Stau2-containing mRNPs through RNAs, hsc70 is directly bound to Stau2 and this interaction is regulated by ATP. PABPC1 and YB1 proteins formed puncta in dendrites of embryonic rat hippocampal neurons. However, they poorly co-localized with Stau2 in the large dendritic complexes suggesting that they are rather components of Stau2-containing mRNA particles. All together, these results represent a further step in the characterization of Stau2-containing mRNPs in neurons and provide new tools to study and understand how Stau2-containing mRNPs are transported, translationally silenced during transport and/or locally expressed according to cell needs.

Molecular composition of staufen2-containing ribonucleoproteins in embryonic rat brain.

Messenger particules ribonucl&#xE9;oprot&#xE9;iques (mRNP) sont utilis&#xE9;s pour transporter des ARNm long de dendrites neuronales &#xE0; leur site de la traduction. De nombreuses prot&#xE9;ines de liaison &#xE0; l&#x26;#39;ARNm et r&#xE9;glementaires au sein mRNP finement r&#xE9;gler le sort de bond-ARNm. Leur combinaison sp&#xE9;cifique d&#xE9;finit les diff&#xE9;rents types de mRNP qui &#xE0; leur tour sont li&#xE9;s &#xE0; des fonctions sp&#xE9;cifiques synaptiques. Une de ces prot&#xE9;ines ARNm-contraignants, Staufen2 (Stau2), a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pour le transport des ARNm le long des microtubules dendritiques. Son expression dans les neurones knockdown a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pour changer la morphologie du rachis et les fonctions synaptiques. Pour mieux comprendre les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires par lesquels Stau2 modulent la fonction synaptique dans les neurones, il est important d&#x26;#39;identifier et de caract&#xE9;riser les prot&#xE9;ines co-facteurs qui r&#xE9;gulent le sort de Stau2 contenant mRNP. &#xC0; cette fin, une approche prot&#xE9;omique a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour identifier les co-immunopr&#xE9;cipit&#xE9;es prot&#xE9;ines dans Staufen2 contenant mRNP isol&#xE9;es &#xE0; partir de cerveaux de rats embryonnaires. L&#x26;#39;approche prot&#xE9;omique identifi&#xE9; ARNm des prot&#xE9;ines de liaison (PABPC1, hnRNP H1, YB1 et hsc70), les prot&#xE9;ines du cytosquelette (alpha-et b&#xEA;ta-tubuline) et RUFY3 une prot&#xE9;ine mal caract&#xE9;ris&#xE9;. Alors que PABPC1 et YB1 associ&#xE9; avec Stau2 contenant mRNP par ARN, hsc70 est directement li&#xE9; &#xE0; Stau2 et cette interaction est r&#xE9;gie par l&#x26;#39;ATP. PABPC1 et YB1 prot&#xE9;ines form&#xE9; puncta dans les dendrites de neurones embryonnaires de rat hippocampe. Cependant, ils mal co-localis&#xE9;e avec Stau2 dans les complexes dendritiques grandes sugg&#xE9;rant qu&#x26;#39;ils sont plut&#xF4;t des composants de particules d&#x26;#39;ARNm Stau2 contenant. Tous ensemble, ces r&#xE9;sultats repr&#xE9;sentent une &#xE9;tape suppl&#xE9;mentaire dans la caract&#xE9;risation des Stau2 contenant mRNP dans les neurones et de fournir de nouveaux outils pour &#xE9;tudier et comprendre comment Stau2 contenant mRNP sont transport&#xE9;s, en translation silence pendant le transport et / ou localement selon les besoins exprim&#xE9;s cellulaires.

Composition mol&#xE9;culaire des Staufen2 contenant ribonucl&#xE9;oprot&#xE9;ines dans le cerveau de rat embryonnaire

Particelle ribonucleoproteina di Messenger (mRNPs) sono utilizzati per trasportare i mRNAs lungo dendriti neuronali al loro sito di traduzione. Numerose proteine mRNA-associazione e normative entro mRNPs regolano finemente il destino dei mRNAs associato. Loro combinazione specifica definisce diversi tipi di mRNPs che a loro volta sono legati a specifiche funzioni sinaptiche. Uno di questi mRNA-binding proteins, Staufen2 (Stau2), &egrave; stato indicato per trasporto dendritiche mRNAs lungo microtubuli. Sua espressione atterramento in neuroni &egrave; stato mostrato per cambiare la morfologia della colonna vertebrale e funzioni sinaptiche. Per capire ulteriormente i meccanismi molecolari con cui Stau2 modula la funzione sinaptica nei neuroni, &egrave; importante identificare e caratterizzare i cofattori di proteine che regolano il destino di mRNPs contenenti Stau2. A tal fine, &egrave; stato utilizzato un approccio proteomico per identificare le proteine co-immunoprecipitated in mRNPs contenenti Staufen2 isolato da cervelli embrionali di topo. L&#39;approccio proteomico identificato mRNA-binding proteins (PABPC1, hnRNP H1, YB1 e hsc70), proteine del citoscheletro (alfa e beta tubulina) e RUFY3 una proteina poco caratterizzata. Mentre PABPC1 e YB1 associare con mRNPs contenenti Stau2 attraverso RNAs, hsc70 &egrave; direttamente associato a Stau2 e questa interazione &egrave; regolata da ATP. Proteine PABPC1 e YB1 formano puncta nei dendriti dei neuroni hippocampal embrionali di topo. Co-ha tuttavia, sono scarsamente localizzato con Stau2 in grandi complessi dendritiche suggerendo che essi sono piuttosto componenti delle particelle Stau2-contenente mRNA. Tutti insieme, questi risultati rappresentano un passo ulteriore nella caratterizzazione di mRNPs contenenti Stau2 in neuroni e forniscono nuovi strumenti per studiare e capire come mRNPs Stau2-contenenti sono trasportati, translationally tacere durante il trasporto o localmente espressa secondo le esigenze delle cellule.

Composizione molecolare di staufen2 contenenti ribonucleoproteins nel cervello embrionale ratto.

&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E3;&#x30FC;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7C92;&#x5B50;&#xFF08;mRNPs&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3078;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6A39;&#x72B6;&#x7A81;&#x8D77;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;mRNA&#x3092;&#x8F38;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; mRNPs&#x5185;&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x306E;mRNA&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7D30;&#x304B;&#x304F;&#x30D0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;-mRNA&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;&#x9806;&#x756A;&#x306B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;mRNPs&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;mRNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;Staufen2&#xFF08;Stau2&#xFF09;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x6A39;&#x72B6;&#x7A81;&#x8D77;mRNA&#x3092;&#x8F38;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x3067;&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x5F0F;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30F3;&#x5F62;&#x614B;&#x3068;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;Stau2&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x3001;Stau2&#x542B;&#x6709;mRNPs&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x88DC;&#x52A9;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x3001;&#x80DA;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x8133;&#x304B;&#x3089;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;Staufen2&#x542B;&#x6709;mRNPs&#x306B;&#x5171;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30AA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;mRNA&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;PABPC1&#x3001;&#x306E;hnRNP H1&#x3001;YB1&#x3068;HSC70&#xFF09;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;&#x3B1;-&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x3B2;-&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EA;&#x30F3;&#xFF09;&#x3068;RUFY3&#x60AA;&#x3044;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; RNA&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;Stau2&#x542B;&#x6709;mRNPs&#x3068;PABPC1&#x3068;YB1&#x51C6;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x3001;HSC70&#x306F;&#x76F4;&#x63A5;Stau2&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;ATP&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; PABPC1&#x3068;YB1&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x80DA;&#x306E;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6A39;&#x72B6;&#x7A81;&#x8D77;&#x3067;&#x6D99;&#x70B9;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x60AA;&#x3044;&#x4EBA;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;Stau2&#x542B;&#x6709;mRNA&#x306E;&#x7C92;&#x5B50;&#x306E;&#x6210;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x6A39;&#x72B6;&#x932F;&#x4F53;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Stau2&#x3068;&#x5171;&#x5C40;&#x5728;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x304C;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;Stau2&#x542B;&#x6709;mRNPs&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x4E00;&#x6B69;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x52C9;&#x5F37;&#x3068;Stau2&#x542B;&#x6709;mRNPs&#x306F;&#x3001;&#x8F38;&#x9001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x5F8C;&#x8F38;&#x9001;&#x4E2D;&#x306B;&#x6C88;&#x9ED9;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5C40;&#x6240;&#x7684;&#x306B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30CB;&#x30FC;&#x30BA;&#x306B;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x80CE;&#x5150;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x8133;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;Staufen2&#x542B;&#x6709;&#x30EA;&#x30DC;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x7D44;&#x6210;

&#xBA54;&#xC2E0;&#xC800; ribonucleoprotein &#xC785;&#xC790; (mRNPs) &#xBC88;&#xC5ED;&#xC758; &#xC790;&#xC2E0;&#xC758; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB85C; &#xC2E0;&#xACBD; dendrites &#xB530;&#xB77C; mRNAs &#xC804;&#xC1A1; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. MRNPs &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; mRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC0F; &#xADDC;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC798;&#xAC8C; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; Mrnas&#xC758; &#xC6B4;&#xBA85; &#xC870;&#xC808;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; Mrnps&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; mRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, Staufen2 &#xC911; &#xD558;&#xB098; (Stau2), &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; mRNAs microtubules &#xB530;&#xB77C; &#xC218;&#xC1A1;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xB294; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xC2DD; &#xCC99;&#xCD94; &#xD615;&#xD0DC; &#xBC0F; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. Stau2&#xB294; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCC0;&#xC870; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB354; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; &#xACE0; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; Stau2 Mrnps&#xC758; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC744; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC694;&#xC778;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC704;&#xD574; proteomic &#xC811;&#xADFC; &#xBC30;&#xC544; &#xC950; &#xB450;&#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; Staufen2 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; Mrnps&#xC5D0; &#xACF5;&#xB3D9; immunoprecipitated &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Proteomic &#xC811;&#xADFC; &#xC800;&#xC870;&#xD55C; &#xD2B9;&#xC9D5;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; mRNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (PABPC1, hnRNP H1, YB1 &#xBC0F; hsc70), &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; cytoskeleton (&#xC54C;&#xD30C;-&#xBC0F; &#xBCA0;&#xD0C0;-tubulin)&#xACFC; rufy3&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;. PABPC1 &#xBC0F; YB1 RNAs &#xD1B5;&#xD574; mRNPs &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; stau2&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0;, &#xB3D9;&#xC548; hsc70 stau2&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xBC0F;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; ATP&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. PABPC1 &#xBC0F; YB1 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC30;&#xC544; &#xC950; hippocampal &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; dendrites puncta &#xD615;&#xC131;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xAC00;&#xB09C; &#xD558; &#xAC8C; &#xD070; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC624;&#xD788;&#xB824; Stau2 &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; mRNA &#xC785;&#xC790;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; stau2&#xC640; co-localized. &#xBAA8;&#xB450; &#xD568;&#xAED8; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; stau2&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; mRNPs &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xB2E8;&#xACC4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xACE0; &#xACF5;&#xBD80; &#xBC0F; mRNPs stau2&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC774;&#xC1A1;, translationally &#xC785; &#xB9C9; &#xC74C;&#xC744; &#xC804;&#xC1A1; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xB610;&#xB294; &#xB85C;&#xCEEC; &#xC140; &#xD544;&#xC694;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xD45C;&#xD604; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC30;&#xC544; &#xC950; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; staufen2 ribonucleoproteins&#xC758; &#xBD84;&#xC790; &#xAD6C;&#xC131;.

Mensajero de part&#xED;culas de ribonucleoprote&#xED;na (mRNPs) se utilizan para el transporte de los ARNm a lo largo de las dendritas neuronales a su sitio de la traducci&#xF3;n. Numerosas prote&#xED;nas de uni&#xF3;n a ARNm y de reglamentaci&#xF3;n dentro de mRNPs finamente regular el destino de determinado con el ARNm. Su combinaci&#xF3;n espec&#xED;fica define diferentes tipos de mRNPs que a su vez est&#xE1;n relacionados con las funciones espec&#xED;ficas sin&#xE1;pticas. Una de estas prote&#xED;nas de uni&#xF3;n a ARNm, Staufen2 (Stau2), se demostr&#xF3; que el transporte de mRNAs dendr&#xED;ticas largo de los microt&#xFA;bulos. Su expresi&#xF3;n desmontables en las neuronas se demostr&#xF3; que cambiar la morfolog&#xED;a columna y funciones sin&#xE1;pticas. Para comprender mejor los mecanismos moleculares por los cuales Stau2 modula la funci&#xF3;n sin&#xE1;ptica en las neuronas, es importante para identificar y caracterizar las prote&#xED;nas co-factores que regulan el destino de Stau2 contienen mRNPs. Para este fin, un enfoque prote&#xF3;mico se utiliz&#xF3; para identificar co-inmunoprecipitadas prote&#xED;nas en Staufen2 contienen mRNPs aisladas a partir de cerebros de ratas embrionarias. El enfoque prote&#xF3;mico identificaron las prote&#xED;nas de uni&#xF3;n del mRNA (PABPC1, hnRNP H1, YB1 y HSC70), las prote&#xED;nas del citoesqueleto (alfa y beta-tubulina) y RUFY3 una prote&#xED;na mal caracterizado. Mientras PABPC1 y YB1 asociado con Stau2 contienen mRNPs a trav&#xE9;s de ARN, HSC70 est&#xE1; directamente ligado a Stau2 y esta interacci&#xF3;n est&#xE1; regulada por la ATP. PABPC1 y YB1 prote&#xED;nas forman puntos lagrimales en las dendritas de las neuronas del hipocampo de ratas embrionarias. Sin embargo, mal co-localizada con Stau2 en los complejos dendr&#xED;ticas grandes que sugieren que son m&#xE1;s bien los componentes de las part&#xED;culas de mRNA Stau2 contienen. En conjunto, estos resultados representan un paso m&#xE1;s en la caracterizaci&#xF3;n de Stau2 contienen mRNPs en las neuronas y proporcionar nuevas herramientas para estudiar y comprender c&#xF3;mo Stau2 contienen mRNPs son transportados, en traslaci&#xF3;n silenciados durante el transporte y / o local expres&#xF3; de acuerdo a las necesidades de la c&#xE9;lula.

Composici&#xF3;n molecular de Staufen2 contienen Ribonucleoprote&#xED;nas en cerebro de rata embrionaria

Les bact&#xE9;ries vivent pour la plupart en tant que communaut&#xE9;s multicellulaires, m&#xEA;me si elles sont des organismes unicellulaires, mais les m&#xE9;canismes qui lient les bact&#xE9;ries individuelles ensemble, sont souvent mal compris. Le adh&#xE9;sine impliqu&#xE9;e dans l&#x26;#39;adh&#xE9;rence diffuse (AIDA-I) est une adh&#xE9;sine des souches d&#x26;#39;Escherichia coli diarrh&#xE9;og&#xE8;nes. AIDA-I est &#xE9;galement le m&#xE9;diateur bact&#xE9;rienne auto-agr&#xE9;gation et la formation de biofilms et pourrait donc &#xEA;tre important pour l&#x26;#39;organisation des communaut&#xE9;s d&#x26;#39;agents pathog&#xE8;nes. Utilisation de la prot&#xE9;ine purifi&#xE9;e et bact&#xE9;ries enti&#xE8;res, nous fournir une preuve directe que AIDA-I favorise l&#x26;#39;auto-agr&#xE9;gation en interagissant avec lui-m&#xEA;me. En utilisant diverses techniques biophysiques et biochimiques, nous avons observ&#xE9; un changement conformationnel de la prot&#xE9;ine au cours AIDA AIDA-interactions, le renforcement de la notion qu&#x26;#39;il s&#x26;#39;agit d&#x26;#39;une interaction hautement sp&#xE9;cifique. L&#x26;#39;auto-association de l&#x26;#39;AIDA-I est de haute affinit&#xE9;, mais peut &#xEA;tre modul&#xE9; par le chlorure de sodium. Nous observons que un sel biliaire, le d&#xE9;soxycholate de sodium, emp&#xEA;che &#xE9;galement AIDA-I oligom&#xE9;risation et bact&#xE9;riennes auto-agr&#xE9;gation. Ainsi, nous proposons que AIDA-I, et la plupart des autres susceptibles Autotransporteurs similaires tels que l&#x26;#39;antig&#xE8;ne 43 (Ag43) et Tiba, organiser les communaut&#xE9;s bact&#xE9;riennes de pathog&#xE8;nes &#xE0; travers un m&#xE9;canisme d&#x26;#39;auto-reconnaissance qui est sensible &#xE0; l&#x26;#39;environnement. Cela pourrait permettre aux bact&#xE9;ries de basculer entre les modes de vie multicellulaires et unicellulaires pour compl&#xE9;ter leur infection.

Changement de conformation dans un Autotransporteur auto-reconnaissance Modulation de cellules bact&#xE9;riennes cellule Interaction

&#x7EC6;&#x83CC;&#x4E3B;&#x8981;&#x751F;&#x6D3B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x591A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x793E;&#x533A;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x5B83;&#x4EEC;&#x662F;&#x5355;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5F80;&#x5F80;&#x4E0D;&#x751A;&#x4E86;&#x89E3;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5C06;&#x5355;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x8054;&#x7CFB;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x3002;&#x7C98;&#x9644;&#x7D20;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5F25;&#x6F2B;&#x9075;&#x5B88; &#xFF08;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#xFF09; &#x662F;&#x682A;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x9ECF;&#x9644;&#x7684; diarrheagenic&#x3002;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x8FD8;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7EC6;&#x83CC;&#x81EA;&#x52A8;&#x805A;&#x5408;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x793E;&#x533A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7EAF;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x6574;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x83CC;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8BC1;&#x660E;&#x8BE5;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x4E0E;&#x672C;&#x8EAB;&#x4EA4;&#x4E92;&#x6765;&#x63A8;&#x52A8;&#x81EA;&#x52A8;&#x805A;&#x5408;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5404;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x5728;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x4EA4;&#x4E92;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x52A0;&#x5F3A;&#x8FD9;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x975E;&#x5E38;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x6982;&#x5FF5;&#x3002;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x7684;&#x81EA;&#x7F14;&#x5408;-&#x662F;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7684;&#x4F46;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x6C2F;&#x5316;&#x94A0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x80C6;&#x76D0;&#x3001; &#x8131;&#x6C27;&#x80C6;&#x9178;&#x94A0;&#xFF0C;&#x8FD8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x9F50;&#x805A;&#x548C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x81EA;&#x52A8;&#x805A;&#x5408;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#xFF0C;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x4E00;&#x3001; &#x548C;&#x6700;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD; (Ag43) &#x7B49;&#x6297;&#x539F; 43 &#x5176;&#x4ED6;&#x7C7B;&#x4F3C; autotransporters &#x548C; TibA&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x5BF9;&#x73AF;&#x5883;&#x654F;&#x611F;&#x7684;&#x81EA;&#x6211;&#x8BA4;&#x77E5;&#x673A;&#x5236;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7FA4;&#x843D;&#x3002;&#x8FD9;&#x53EF;&#x4F7F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5355;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x751F;&#x6D3B;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x5B8C;&#x6210;&#x5176;&#x611F;&#x67D3;&#x4E4B;&#x95F4;&#x8FDB;&#x884C;&#x5207;&#x6362;&#x3002;

&#x81EA;&#x77E5;&#x8BC6; autotransporter &#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x8C03;&#x8282;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Bacteria mostly live as multicellular communities, although they are unicellular organisms, yet the mechanisms that tie individual bacteria together are often poorly understood. The adhesin involved in diffuse adherence (AIDA-I) is an adhesin of diarrheagenic Escherichia coli strains. AIDA-I also mediates bacterial auto-aggregation and biofilm formation and thus could be important for the organization of communities of pathogens. Using purified protein and whole bacteria, we provide direct evidence that AIDA-I promotes auto-aggregation by interacting with itself. Using various biophysical and biochemical techniques, we observed a conformational change in the protein during AIDA-AIDA interactions, strengthening the notion that this is a highly specific interaction. The self-association of AIDA-I is of high affinity but can be modulated by sodium chloride. We observe that a bile salt, sodium deoxycholate, also prevents AIDA-I oligomerization and bacterial auto-aggregation. Thus, we propose that AIDA-I, and most likely other similar autotransporters such as antigen 43 (Ag43) and TibA, organize bacterial communities of pathogens through a self-recognition mechanism that is sensitive to the environment. This could permit bacteria to switch between multicellular and unicellular lifestyles to complete their infection.

Conformation change in a self-recognizing autotransporter modulates bacterial cell-cell interaction.

Bakterien leben meist als Vielzellige Gemeinschaften, obwohl sie einzellige Organismen sind, noch die Mechanismen, die einzelne Bakterien miteinander zu verbinden sind oft schlecht verstanden. Die Adhesin beteiligt diffuse Einhaltung (AIDA-ich) ist ein Adhesin Diarrheagenic Escherichia-coli-St&auml;mme. AIDA-ich auch bakterielle Auto-Aggregation und Biofilm-Bildung vermittelt und k&ouml;nnte somit wichtig f&uuml;r die Organisation der Gemeinschaften von Krankheitserregern sein. Dank gereinigtes Protein und ganze Bakterien bieten wir direkte Beweise, dass AIDA-ich Auto-Aggregation durch die Interaktion mit selbst f&ouml;rdert. Mit verschiedenen biophysikalische und biochemische Techniken, beobachteten wir eine Konformations&auml;nderungen &Auml;nderung im Protein w&auml;hrend AIDA-AIDA-Interaktionen, St&auml;rkung des Begriffs, dass dies eine sehr spezifische Interaktion. Die Self-association von AIDA-ich hohe Affinit&auml;t ist aber von Natriumchlorid moduliert werden. Wir beobachten, dass ein Galle-Salz, Natrium deoxycholat, auch AIDA verhindert-ich Oligomerisierung und bakteriellen Auto-Aggregation. Daher schlagen wir vor, die AIDA-ich, und wahrscheinlich andere &auml;hnliche Autotransporters wie Antigen 43 (Ag43) und TibA, organisieren bakterielle Gemeinschaften von Krankheitserregern durch eine Selbsterkenntnis-Mechanismus, der empfindlich auf die Umwelt ist. Dies k&ouml;nnte die Bakterien zum Wechseln zwischen vielzelligen und einzelligen Lebensformen ihre Infektion abgeschlossen erm&ouml;glichen.

Konformation &auml;ndern in ein self-recognizing Autotransporter moduliert bakterielle Zell-Zell-Interaktion.

Batteri vivono principalmente come comunit&agrave; pluricellulari, anche se essi sono organismi unicellulari, ancora i meccanismi che legano insieme singoli batteri sono spesso mal compreso. Il adhesin coinvolto nell&#39;adesione diffusa (AIDA-I) &egrave; un adhesin di diarrheagenic ceppi di Escherichia coli. AIDA-ho anche media formazione auto-aggregazione e biofilm batterica e quindi potrebbe essere importante per l&#39;organizzazione delle Comunit&agrave; di agenti patogeni. Utilizzando proteine purificate e batteri interi, forniamo prove dirette che AIDA-promuove il auto-aggregazione interagendo con se stesso. Utilizzando varie tecniche di biochimiche e biofisiche, abbiamo osservato un cambiamento conformazionale nella proteina durante le interazioni di AIDA-AIDA, rafforzando l&#39;idea che questo &egrave; un interazione altamente specifici. Moltiplicava di AIDA-&egrave; di alta affinit&agrave;, ma pu&ograve; essere modulata da cloruro di sodio. Osserviamo che un sale biliare, sodio desossicolato, impedisce anche AIDA-mi auto-aggregazione oligomerizzazione e batterica. Cos&igrave;, noi proponiamo che AIDA-I e molto probabilmente altri simili autotransporters come antigene 43 (Ag43) e TibA, organizzare la comunit&agrave; batterica di patogeni attraverso un meccanismo di auto-riconoscimento che &egrave; sensibile all&#39;ambiente. Questo potrebbe permettere batteri per passare tra stili di vita unicellulari e pluricellulari per completare la loro infezione.

Cambiamento di conformazione in una self-recognizing autotransporter modula l&#39;interazione cellula-cellula batterica.

&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x304C;&#x3001;&#x591A;&#x5730;&#x57DF;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x304D;&#x308B;&#x3001;&#x307E;&#x3060;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x3092;&#x7D50;&#x3073;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x3073;&#x307E;&#x3093;&#x6027;&#x4ED8;&#x7740;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30C9;&#x30D8;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;AIDA-I&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x682A;&#x306E;&#x30A2;&#x30C9;&#x30D8;&#x30B7;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002; AIDA-I&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x81EA;&#x52D5;&#x96C6;&#x7D04;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x5171;&#x540C;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3057;&#x305F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x5168;&#x7D30;&#x83CC;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;AIDA  - &#x79C1;&#x306F;&#x81EA;&#x5206;&#x81EA;&#x8EAB;&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x96C6;&#x7D04;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x6982;&#x5FF5;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x3001;AIDA-AIDA&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AIDA-I&#x306E;&#x81EA;&#x5DF1;&#x4F1A;&#x5408;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x5869;&#x5316;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x80C6;&#x6C41;&#x9178;&#x5869;&#x3001;&#x30C7;&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x9178;&#x30CA;&#x30C8;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;AIDA-I&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30DE;&#x30FC;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x81EA;&#x52D5;&#x96C6;&#x7D04;&#x7D30;&#x83CC;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;AIDA-I&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x6297;&#x539F;43&#xFF08;Ag43&#xFF09;&#x304A;&#x3088;&#x3073;TIBA&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6700;&#x3082;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x4ED6;&#x306E;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;autotransporters&#x3001;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x81EA;&#x5DF1;&#x8A8D;&#x8B58;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x7FA4;&#x96C6;&#x3092;&#x6574;&#x7406;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x304C;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x5B8C;&#x4E86;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x591A;&#x3068;&#x5358;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D5;&#x30B9;&#x30BF;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x5207;&#x308A;&#x66FF;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;

&#x81EA;&#x5DF1;&#x8A8D;&#x8B58;Autotransporter&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;

&#xBE44;&#xB85D; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4;&#xB294; &#xC544;&#xC9C1; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB97C; &#xD568;&#xAED8; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC885;&#xC885; &#xC798;&#xBABB; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xB2E4;&#xC138;&#xD3EC; &#xACF5;&#xB3D9;&#xCCB4;&#xB85C; &#xC0B4;&#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD655;&#xC0B0; &#xBD80;&#xCC29;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; adhesin (&#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-&#xB09C;)&#xC740; diarrheagenic&#xC758; adhesin &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBCC0;&#xC885;. &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-&#xB610;&#xD55C; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC790;&#xB3D9; &#xC9D1;&#xACC4; &#xBC0F; biofilm &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xC0AC;&#xD68C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC21C;&#xD654; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xC804;&#xCCB4; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC9C1;&#xC811; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xADF8; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-&#xC790;&#xB3D9; &#xC9D1;&#xACC4; &#xC790;&#xCCB4;&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC2EC;&#xD3EC;&#xC9C0;&#xC5C4; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xAD00;&#xCC30; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC774;&#xAC83;&#xC774; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC778; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC1C;&#xB150;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; self-association-&#xB09C; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4;&#xC758; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5FC;&#xD654; &#xB098;&#xD2B8;&#xB968;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBCC0;&#xC870; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xB97C; &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB2F4; &#xC999; &#xC5FC;, &#xB098;&#xD2B8;&#xB968; deoxycholate &#xAD00;&#xCC30;-&#xB09C; oligomerization &#xBC0F; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC790;&#xB3D9; &#xC9D1;&#xACC4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC81C;&#xC548; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-&#xB0B4;&#xAC00;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xD56D; 43 &#xC6D0; &#xB4F1; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; autotransporters (Ag43)&#xC640; &#xCE58; &#xBC14;, &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC790;&#xAE30; &#xC778;&#xC2DD; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC758; &#xC138;&#xADE0; &#xCEE4;&#xBBA4;&#xB2C8;&#xD2F0;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xAC00; &#xB2E4;&#xC138;&#xD3EC; &#xACE0; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xD65C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC744; &#xC644;&#xB8CC; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC804;&#xD658; &#xD558; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Self-recognizing autotransporter&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654; &#xB098; &#xB780; &#xC138;&#xADE0; &#xC140; &#xC0C1;&#xD638; &#xBCC0;&#xC870;.

Las bacterias viven sobre todo en comunidades multicelulares, a pesar de que son organismos unicelulares, sin embargo, los mecanismos que vinculan las bacterias individuales en forma conjunta son a menudo mal entendido. La adhesina implicados en la adhesi&#xF3;n difusa (AIDA-I) es una adhesina de cepas de Escherichia coli diarreog&#xE9;nicas. AIDA-Yo tambi&#xE9;n media bacteriana de auto-agregaci&#xF3;n y la formaci&#xF3;n de biopel&#xED;culas y por lo tanto podr&#xED;a ser importante para la organizaci&#xF3;n de las comunidades de los agentes pat&#xF3;genos. Utilizando prote&#xED;na purificada y bacterias enteras, nos proporcionan pruebas directas de que AIDA-I promueve la auto-agregaci&#xF3;n al interactuar con ella misma. Utilizando diversas t&#xE9;cnicas biof&#xED;sicas y bioqu&#xED;micas, se observ&#xF3; un cambio conformacional en la prote&#xED;na durante la AIDA-AIDA interacciones, el fortalecimiento de la idea de que se trata de una interacci&#xF3;n muy espec&#xED;ficos. La auto-asociaci&#xF3;n de AIDA-I es de alta afinidad, pero puede ser modulada por cloruro de sodio. Se observa que una sal biliar, desoxicolato de sodio, tambi&#xE9;n evita que AIDA-I oligomerizaci&#xF3;n y bacterianas de auto-agregaci&#xF3;n. Por lo tanto, proponemos que AIDA-I, y la mayor&#xED;a de los probables Portaveh&#xED;culos otros similares como el ant&#xED;geno 43 (Ag43) y TIBA, organizar a las comunidades bacterianas de los pat&#xF3;genos a trav&#xE9;s de un mecanismo de auto-reconocimiento de que es sensible al medio ambiente. Esto podr&#xED;a permitir que las bacterias para cambiar entre los modos de vida multicelulares y unicelulares para completar su infecci&#xF3;n.

Cambio de conformaci&#xF3;n en un auto-reconocimiento de Portaveh&#xED;culos Modula bacteriana de la c&#xE9;lula-c&#xE9;lula la interacci&#xF3;n

F165(1) &#xFF08;&#x7F8E;&#x5B5A;&#xFF09; &#x548C; CS31A &#xFF08;&#x4E2D;&#x7535;&#xFF09; &#x7531;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x5408;&#x6210;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;&#x5173;&#x8054;&#x8179;&#x6CFB;&#x548C;&#x4ED4;&#x732A;&#x548C;&#x728A;&#x725B;&#x7684;&#x8D25;&#x8840;&#x75C7;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5C5E;&#x4E8E; P &#x76D1;&#x7BA1;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x548C;&#x8FD9;&#x79CD;&#x53D7;&#x9636;&#x6BB5;&#x53D8;&#x5316;&#x63A7;&#x5236;&#x4ECB;&#x5BFC; Lrp (&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x53CD;&#x5E94;&#x8C03;&#x8282;&#x86CB;&#x767D;&#xFF09; &#x548C;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x6784;&#x5411; PapI &#x540C;&#x6E90;&#x3002;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x878D;&#x5408;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x53CB;&#x6216; fooI &#x7684;&#x521B;&#x529E;&#x4EBA;&#x548C; lacZ &#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; Lrp &#x7684;&#x7F8E;&#x5B5A;&#x548C; fooI &#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x800C;&#x5B83;&#x538B;&#x6291;&#x4E2D;&#x7535;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x7F8E;&#x5B5A;&#x65B0;&#x9636;&#x6BB5;&#x53D8;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EDD;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x4E0A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E2D;&#x7535;&#x9636;&#x6BB5;&#x53D8;&#x5316;&#x5BFC;&#x81F4;&#x591A;&#x6570;&#x9636;&#x6BB5;&#x5173;&#x95ED;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x73AF;&#x5883;&#x7EBF;&#x7D22;&#x5BF9;&#x7F8E;&#x5B5A;&#x548C;&#x4E2D;&#x7535;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7279;&#x522B;&#x91CD;&#x89C6;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5DF2;&#x77E5;&#x53EF;&#x4ECB;&#x5BFC; Lrp&#x3002; &#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x6216;&#x91CD;&#x5927;&#x9547;&#x538B;&#x7684;&#x7F8E;&#x5B5A;&#x548C;&#x4E2D;&#x7535;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6709;&#x4EBA;&#x5728;&#x4F4E;&#x6E29;&#x5EA6;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5728; LB &#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x548C;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x3001; &#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#xFF0C;&#x6216;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x3002;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x9547;&#x538B; foo &#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E2D;&#x7535;&#x5B8C;&#x5168;&#x7531;&#x52A0;&#x6CD5;&#x8425;&#x5BBD;&#x5FC3;&#x3002;&#x6E17;&#x900F;&#x538B;&#x548C; ph &#x503C;&#x5DF2;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6CA1;&#x6709;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x548C; LB &#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x6291;&#x5236;&#x7F8E;&#x5B5A;&#x548C;&#x7535;&#x9636;&#x6BB5;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5728; OFF &#x9636;&#x6BB5;&#x9501;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x4F4E;&#x6E29;&#x6291;&#x5236;&#x7535;&#x76F8;&#x4F4D;&#x53D8;&#x5316;&#x548C;&#x6539;&#x53D8;&#x5F00;&#x5173;&#x9891;&#x7387;&#x7684;&#x7F8E;&#x5B5A;&#x65B0;&#x9636;&#x6BB5;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x591A;&#x4E2A;&#x9636;&#x6BB5;&#x5173;&#x95ED;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x6539;&#x53D8;&#x9636;&#x6BB5;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A; operons&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4E2D;&#x9636;&#x6BB5;&#x5173;&#x95ED;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x3002;&#x7F8E;&#x5B5A;&#x548C;&#x4E2D;&#x7535;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x6A21;&#x5F0F;&#x662F;&#x7B26;&#x5408;&#x5728;&#x4F4E;&#x8425;&#x517B;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x751A;&#x81F3;&#x5728;&#x4E2D;&#x7B49;&#x9178;&#x6027; ph &#x503C;&#x6216;&#x9AD8;&#x6E17;&#x900F;&#x538B;&#x7684; F165(1) &#x548C; CS31A &#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;

&#x7F8E;&#x5B5A;&#x548C;&#x4E2D;&#x7535;&#x7F16;&#x7801;&#x4E3A; F165(1) &#x548C; CS31A &#x7C98;&#x9644;&#x5206;&#x5B50;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x5BF9;&#x73AF;&#x5883;&#x6697;&#x793A;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

F165(1) (foo) and CS31A (clp) are bacterial adhesins synthesized by Escherichia coli strains associated with diarrhea and septicemia in piglets and calves. They belong to the P-regulatory family and as such are subject to a phase variation control mediated by Lrp (leucine responsive regulatory protein) and regulators homologous to PapI. Analysis of expression of transcriptional fusions between the fooB or fooI promoters and lacZ showed that Lrp is an activator of foo and fooI transcription, whereas it represses clp transcription. Furthermore, foo phase variation leads to a large majority of phase-ON cells, whereas clp phase variation leads to a majority of phase-OFF cells. We compared the influence of several environmental cues on foo and clp expression, with special attention to the effects of leucine and alanine known to be mediated by Lrp. Inhibition or significant repression of foo and clp transcription was observed at low temperature, in LB medium, and in the presence of glucose, alanine, or leucine. Glucose repression of foo but not of clp was totally relieved by addition of cAMP. Osmolarity and pH had little effect. Alanine but not leucine, and LB medium inhibited foo and clp phase variation, locking cells in the OFF phase. Low temperature inhibited clp phase variation and altered the switch frequency of foo phase variation, leading to more phase-OFF cells. Glucose altered the phase variation of both operons, increasing the number of phase-OFF cells in the population. The regulation pattern of foo and clp is consistent with F165(1) and CS31A production in low nutrient environments, even at moderately acidic pH or high osmolarity.

Influence of environmental cues on transcriptional regulation of foo and clp coding for F165(1) and CS31A adhesins in Escherichia coli.

F165(1) (foo) et CS31A (clp) sont des adh&eacute;sines bact&eacute;riennes synth&eacute;tis&eacute;es par les souches d&#39;Escherichia coli associ&eacute;s &agrave; diarrh&eacute;e et septic&eacute;mie chez les porcelets et les veaux. Ils appartiennent &agrave; la famille P-r&eacute;glementation et sont donc soumis &agrave; une phase de contr&ocirc;le de variation m&eacute;di&eacute;e par Lrp (prot&eacute;ine r&eacute;gulatrice sensible de leucine) et les organismes de r&eacute;glementation homologues &agrave; PapI. Analyse de l&#39;expression des fusions transcriptionnelles entre promoteurs fooB ou fooI et lacZ ont montr&eacute; que le Lrp est un activateur de la transcription de foo et fooI, alors qu&#39;il r&eacute;prime la transcription de la clp. En outre, variation de phase de foo conduit &agrave; une large majorit&eacute; de cellules de phase-ON, alors que la variation de phase clp m&egrave;ne &agrave; une majorit&eacute; de cellules de phase. Nous avons compar&eacute; l&#39;influence de plusieurs facteurs environnementaux sur l&#39;expression foo et clp, avec une attention particuli&egrave;re aux effets de la leucine et l&#39;alanine connus pour &ecirc;tre m&eacute;di&eacute; par l&#39;Inhibition Lrp. ou importante r&eacute;pression de la transcription de foo et clp a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e &agrave; basse temp&eacute;rature, dans le milieu LB et en pr&eacute;sence de glucose, d&#39;alanine ou de leucine. R&eacute;pression par le glucose de foo, mais pas du clp a &eacute;t&eacute; totalement soulag&eacute;e par l&#39;addition de cAMP. PH et l&#39;osmolarit&eacute; avaient peu d&#39;effet. Alanine mais pas leucine et LB support inhibe la variation de phase foo et clp, le verrouillage des cellules dans la phase d&#39;arr&ecirc;t. Basse temp&eacute;rature a inhib&eacute; la variation de phase clp et modifi&eacute; la fr&eacute;quence de commutation de variation de phase de foo, conduisant &agrave; plus de cellules de phase de d&eacute;collage. Glucose modifi&eacute; la variation de phase des deux op&eacute;rons, augmentation du nombre de cellules de phase dans la population. Le mod&egrave;le de r&egrave;glement de foo et clp est une production F165(1) et CS31A dans des environnements faibles en nutriments, m&ecirc;me &agrave; pH acide mod&eacute;r&eacute;ment ou osmolarit&eacute; &eacute;lev&eacute;e.

Influence des facteurs environnementaux sur la r&eacute;gulation transcriptionnelle de foo et clp codant pour F165(1) et CS31A adh&eacute;sines chez Escherichia coli.

Einfluss der Umweltreize auf transkriptionelle Regulation von foo und CLP-Codierung f&#xFC;r F165 (1) und CS31A Adh&#xE4;sine in Escherichia coli.

F165(1) (foo) e CS31A (clp) sono adesine batteriche sintetizzato da ceppi di Escherichia coli associate a diarrea e setticemia nei suinetti e vitelli. Essi appartengono alla famiglia P-regolamentazione e come tali sono soggetti ad una fase di controllo variazione mediata da Lrp (proteina di regolamentazione sensible a reagire della leucina) e regolatori omologhi ai PapI. Analisi dell&#39;espressione di transcriptional fusioni tra i promotori fooB o fooI e lacZ ha mostrato che Lrp &egrave; un attivatore di trascrizione foo e fooI, considerando che reprime la trascrizione del regolamento clp. Inoltre, foo fase variazione porta a una grande maggioranza di fase-ON celle, mentre la variazione di fase clp conduce ad una maggioranza di fase OFF cellule. Abbiamo confrontato l&#39;influenza di diversi stimoli ambientali sull&#39;espressione foo e clp, con particolare attenzione agli effetti della leucina e alanina, noto per essere mediata dalla Lrp. inibizione o significativa repressione della trascrizione foo e clp &egrave; stata osservata a bassa temperatura, in LB medium e in presenza di glucosio, alanina, leucina. Glucosio repressione di Pippo, ma non di clp era totalmente sollevato dall&#39;aggiunta dell&#39;accampamento. Osmolarit&agrave; e pH ha avuto poco effetto. Alanina, ma non della leucina e LB medium inibito foo e clp variazione di fase, blocco delle cellule in fase OFF. Bassa temperatura inibita la variazione di fase clp e alterato la frequenza di switch di variazione di fase foo, portando a pi&ugrave; celle di fase. Glucosio alterato la variazione di fase dei due operoni, aumentando il numero di fase OFF cellule nella popolazione. Lo schema di regolamento di foo e clp &egrave; coerenza con la produzione di F165(1) e CS31A in ambienti nutrienti Bassi, anche a pH moderatamente acidi o elevata osmolarit&agrave;.

Influenza di stimoli ambientali sulla regolazione trascrizionale del foo e clp codifica per F165(1) e CS31A adesine in Escherichia coli.

F165(1) (foo) &#x3068; CS31A (clp) &#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5408;&#x6210;&#x7D30;&#x83CC; &#xFF08;&#x30A2;&#x30C9;&#x30D8;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF09; &#x4E0B;&#x75E2;&#x3068;&#x8C5A;&#x3068;&#x5B50;&#x725B;&#x306E;&#x6557;&#x8840;&#x75C7;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F; P &#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306B;&#x5C5E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5BFE;&#x8C61;&#x3068;&#x4F4D;&#x76F8;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x5909;&#x52D5;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F; Lrp (&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF09; &#x3068;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF; PapI &#x306B;&#x76F8;&#x540C;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3002;Clp &#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; fooB &#x307E;&#x305F;&#x306F; fooI &#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068; lacZ &#x9593;&#x8EE2;&#x5199;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790; Lrp&#x3001;foo &#x3068; fooI &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;clp &#x4F4D;&#x76F8;&#x5909;&#x52D5;&#x76F8;&#x30AA;&#x30D5;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9; foo &#x4F4D;&#x76F8;&#x5909;&#x52D5;&#x76F8;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3; Lrp &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x963B;&#x5BB3;&#x306E;&#x4ECB;&#x5728;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x52B9;&#x679C;&#x306B;&#x7279;&#x5225;&#x306A;&#x95A2;&#x5FC3;&#x3067; foo &#x3068; clp &#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x74B0;&#x5883;&#x30AD;&#x30E5;&#x30FC;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x4F4E;&#x6E29;&#x3001;LB &#x5A92;&#x4F53;&#x3001;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; foo &#x3068; clp &#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F3E;&#x5727;&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x6291;&#x5727; foo &#x306E;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;clp &#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x4ED8;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x30DB;&#x30C3;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x3068; pH &#x306F;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066; &#x3002;&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;, &#x3068; LB &#x5A92;&#x4F53; OFF &#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067;&#x30BB;&#x30EB;&#x3092;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3001;foo &#x3068; clp &#x306E;&#x4F4D;&#x76F8;&#x5909;&#x52D5;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4F4E;&#x6E29; clp &#x4F4D;&#x76F8;&#x5909;&#x52D5;&#x3092;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x4F4D;&#x76F8;&#x30AA;&#x30D5;&#x8A73;&#x7D30;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3001;foo &#x4F4D;&#x76F8;&#x5909;&#x52D5;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x4F4D;&#x76F8;&#x5909;&#x52D5;&#x76F8;&#x30AA;&#x30D5; &#x30BB;&#x30EB;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x4E21;&#x65B9;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3002;Foo &#x3068; clp &#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;&#x9069;&#x5EA6;&#x306B;&#x9178;&#x6027; pH &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x9AD8;&#x6D78;&#x900F;&#x5727;&#x3067;&#x3082;&#x3001;&#x4F4E;&#x6804;&#x990A;&#x306E;&#x74B0;&#x5883;&#x3067; F165(1) &#x3068; CS31A &#x751F;&#x7523;&#x3068;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

Foo &#x3068; clp &#x5927;&#x8178;&#x83CC; &#xFF08;&#x30A2;&#x30C9;&#x30D8;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF09; F165(1) &#x3068; CS31A &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7B26;&#x53F7;&#x5316;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x8A00;&#x5916;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;

F165(1) (foo)&#xACFC; CS31A (clp) &#xC124;&#xC0AC;&#xC640; &#xC1A1;&#xC544;&#xC9C0;&#xC640; piglets&#xC5D0;&#xC11C; &#xD328; &#xD608; &#xC99D;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD569;&#xC131; &#xC138;&#xADE0; adhesins. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; P &#xADDC;&#xC81C; &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD558;&#xACE0; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C;&#xB294; &#xD3B8;&#xCC28; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC911;&#xC7AC; Lrp (&#xC2E0; &#xBC18;&#xC751; &#xADDC;&#xC81C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;)&#xC640; &#xB3D9;&#xC885; &#xBE60; &#xC090; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;. FooB &#xB610;&#xB294; fooI &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC0AC;&#xC774; lacZ transcriptional fusions&#xC758; &#xD45C;&#xD604;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; clp &#xC804;&#xC0AC; &#xB204;&#xB974;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; Lrp&#xB294; foo&#xC640; fooI &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, foo &#xC704;&#xC0C1; &#xD3B8;&#xCC28; &#xC704;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xC140;&#xC758; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218; &#xBC18;&#xBA74; clp &#xC704;&#xC0C1; &#xD3B8;&#xCC28; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218;&#xC758; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140;&#xC744; &#xB9AC;&#xB4DC; &#xB9AC;&#xB4DC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2E0; Lrp. &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558; &#xC5EC; &#xC911;&#xC7AC; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC5D0; &#xD2B9;&#xBCC4; &#xD55C; &#xC8FC;&#xC758;&#xC640; &#xD478;&#xC640; clp &#xC2DD;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD658;&#xACBD; &#xB2E8;&#xC11C;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xB610;&#xB294; foo&#xC640; clp &#xC804;&#xC0AC;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5B5;&#xC555; &#xC800;&#xC628; &#xD30C;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xB9E4;&#xCCB4; &#xBC0F; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9;, &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;, &#xB610;&#xB294; &#xC2E0; &#xC55E;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC5B5;&#xC555; foo&#xC758; &#xC544;&#xB2C8;&#xC9C0;&#xB9CC; clp&#xC758; &#xCEA0;&#xD504;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC758;&#xD574; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC548;&#xC2EC; &#xD588;&#xB2E4;. Osmolarity&#xACFC; &#xC0B0;&#xB3C4; &#xC870;&#xAE08; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCCE4;&#xB2E4;. &#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xB9CC; &#xC2E0;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD30C;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xB9E4;&#xCCB4; OFF &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC140; &#xC7A0;&#xAE08; foo&#xC640; clp &#xC704;&#xC0C1; &#xD3B8;&#xCC28; &#xC800;&#xD574;. &#xC800;&#xC628; clp &#xC704;&#xC0C1; &#xD3B8;&#xCC28;&#xB97C; &#xC800;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xD478; &#xC704;&#xC0C1; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xBCC0;&#xACBD;. &#xD3EC;&#xB3C4; &#xC140; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xAD6C; &#xC218;&#xB97C; &#xB298;&#xB9AC;&#xB294; &#xB450; operons&#xC758; &#xC704;&#xC0C1; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD;. Foo&#xC640; clp &#xADDC;&#xC815; &#xD328;&#xD134;&#xC740; &#xBE44;&#xAD50;&#xC801; &#xC0B0; &#xC131; pH &#xB610;&#xB294; &#xB192;&#xC740; osmolarity &#xC5D0;&#xC11C;&#xB3C4; &#xB0AE;&#xC740; &#xC601;&#xC591;&#xC18C; &#xD658;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; F165(1) &#xBC0F; CS31A &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Foo&#xC640; clp &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; F165(1) &#xBC0F; CS31A adhesins&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCF54;&#xB529;&#xC758; transcriptional &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xD658;&#xACBD; &#xB2E8;&#xC11C;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;.

F165(1) (foo) y CS31A (clp) son adhesinas bacterianas sintetizadas por cepas de Escherichia coli asociada con diarrea y septicemia en lechones y terneros. Pertenecen a la familia de P-regulador y como tal est&aacute;n sujetos a una fase control de variaci&oacute;n mediada por Lrp (prote&iacute;na reguladora de la respuesta de leucina) y reguladores hom&oacute;logos a PapI. An&aacute;lisis de la expresi&oacute;n de fusiones transcripcionales entre los promotores de fooB o fooI y lacZ demostr&oacute; que Lrp es un activador de la transcripci&oacute;n de foo y fooI, mientras que reprime la transcripci&oacute;n de clp. Adem&aacute;s, variaci&oacute;n de fase de foo conduce a una gran mayor&iacute;a de las c&eacute;lulas de la fase-ON, mientras que la variaci&oacute;n de fase de clp conduce a una mayor&iacute;a de fase de c&eacute;lulas. Se compar&oacute; la influencia de varias se&ntilde;ales ambientales en expresi&oacute;n foo y clp, con especial atenci&oacute;n a los efectos de leucina y alanina conocido ser mediado por la inhibici&oacute;n de la Lrp. o represi&oacute;n significativa de transcripci&oacute;n foo y clp observ&oacute; a baja temperatura, en medio LB y en presencia de glucosa, alanina y leucina. Represi&oacute;n de glucosa de foo pero no de clp fue totalmente aliviado por la adici&oacute;n de campamento. Osmolaridad y pH tuvieron poco efecto. Alanina pero no leucina y LB medio inhibido foo y clp variaci&oacute;n de fase, bloqueo de las c&eacute;lulas en la fase de apagado. Baja temperatura inhibe la variaci&oacute;n de fase de clp y hab&iacute;a alterado la frecuencia del interruptor de variaci&oacute;n de fase de foo, llevando a m&aacute;s c&eacute;lulas fase-OFF. Glucosa hab&iacute;a alterada la variaci&oacute;n de la fase de ambos operones, aumentando el n&uacute;mero de c&eacute;lulas de fase-OFF en la poblaci&oacute;n. El patr&oacute;n de regulaci&oacute;n de foo y clp es consistente con la producci&oacute;n de F165(1) y CS31A en ambientes de nutrientes bajos, incluso a pH moderadamente &aacute;cido o elevada osmolaridad.

Influencia de se&ntilde;ales ambientales en la regulaci&oacute;n transcripcional de foo y codificaci&oacute;n del clp para F165(1) y CS31A adhesinas en Escherichia coli.

&#x7F8E;&#x5B5A;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7F16;&#x7801; F165 1 &#x6BDB;&#x5C5E;&#x4E8E; P &#x76D1;&#x7BA1;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x5E76;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x5408;&#x6210;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x8D25;&#x8840;&#x75C7;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; Lrp &#x7F3A;&#x4E3B;&#x673A;&#x548C; lrp &#x57FA;&#x56E0;&#x4E0B;&#x963F;&#x62C9;&#x4F2F;&#x7CD6; pBAD &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x514B;&#x9686;&#x51FA;&#x6765;&#x7684;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x7F8E;&#x5B5A;&#x6309;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684; Lrp &#x5408;&#x6210;&#x91CF;&#x3002;L-&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x548C; L-&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5DF2;&#x5927;&#x5E45;&#x4E0B;&#x964D;&#x7F8E;&#x5B5A;&#x548C;&#x4FEE;&#x6539;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684; FooI &#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x7A33;&#x6001;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;Lrp C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x7A81;&#x53D8;&#x51CF;&#x5C11;&#x6216;&#x53D6;&#x6D88;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x5F71;&#x54CD; Lrp &#x8C03;&#x5236; F165 1 &#x7684;&#x538B;&#x5236;&#x6027;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

L-&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x548C; L-&#x4E19;&#x6C28;&#x9178;&#x5BF9;&#x7F8E;&#x5B5A;&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x4E3A; F1651&#xFF0C;Pap &#x540C;&#x7CFB;&#x7269; Lrp &#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

The foo operon encodes F165 1 fimbriae that belong to the P-regulatory family and are synthesized by septicemic Escherichia coli. Using an Lrp-deficient host and the lrp gene cloned under the arabinose pBAD promoter, we demonstrated that foo was transcribed proportionally to the amount of Lrp synthesized. L-leucine and L-alanine decreased drastically the steady-state transcription of foo and modified phase variation, independently of the presence of FooI. Specific mutations in the C-terminal region of Lrp reduced or abolished the repressive effect of these amino acids, indicating that they modulate F165 1 by affecting Lrp.

Influence of L-leucine and L-alanine on Lrp regulation of foo, coding for F1651, a Pap homologue.

L&#39;op&eacute;ron foo encode les fimbriae F165 1 qui appartiennent &agrave; la famille P-r&eacute;glementation et est synth&eacute;tis&eacute;s par septic&eacute;mique Escherichia coli. En utilisant un h&ocirc;te Lrp d&eacute;ficient et le g&egrave;ne de la lrp clon&eacute; sous le promoteur pBAD d&#39;arabinose, nous avons d&eacute;montr&eacute; que foo a &eacute;t&eacute; transcrit proportionnellement au montant de Lrp synth&eacute;tis&eacute;. L-leucine et L-alanine a consid&eacute;rablement diminuent la transcription stationnaire de foo et la variation de phase modifi&eacute;e, ind&eacute;pendamment de la pr&eacute;sence de FooI. Des mutations sp&eacute;cifiques dans la r&eacute;gion C-terminale de Lrp r&eacute;duit ou abolit l&#39;effet r&eacute;pressif de ces acides amin&eacute;s, ce qui indique qu&#39;ils modulent F165 1 en agissant sur le PLT.

Influence de la L-leucine et L-alanine sur la r&eacute;glementation de la Lrp de foo, codant pour la F1651, un homologue de Pap.

Einfluss von L-Leucin und L-Alanin auf Lrp Regulierung der foo, kodierend f&#xFC;r F1651, ein Pap-Homolog.

Foo operone codifica 1 F165 fimbriae che appartengono alla famiglia P-regolamentazione e sono sintetizzati dal setticemici Escherichia coli. Usando un host Lrp-carenti e lrp gene clonato sotto il promotore pBAD arabinosio, abbiamo dimostrato che foo &egrave; stato trascritto proporzionalmente alla quantit&agrave; di Lrp sintetizzato. L-leucina e L-alanina &egrave; diminuito drasticamente la trascrizione di steady-state di foo e variazione di fase modificate, indipendentemente dalla presenza di FooI. Specifiche mutazioni nella regione C-terminale di Lrp ridotto o abolito l&#39;effetto repressivo di questi aminoacidi, che indica che essi modulano F165 1 interessando Lrp.

Influenza di L-leucina e L-alanina su Lrp regolamento di foo, codifica per la F1651, un omologo Pap.

Foo &#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3; P &#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306B;&#x5C5E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x6557;&#x8840;&#x75C7;&#x6027;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5408;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B; F165 1 &#x306E;&#x7DDA;&#x6BDB;&#x3092;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Lrp &#x6B20;&#x4E4F;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073; lrp &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3; &#x30A2;&#x30E9;&#x30D3;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B9; pBAD &#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F; foo &#x306F;&#x5408;&#x6210; Lrp &#x306E;&#x91CF;&#x306B;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x3057;&#x305F;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;L-&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;l-&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3; foo &#x3068; FooI &#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x4F4D;&#x76F8;&#x5909;&#x52D5;&#x306E;&#x5B9A;&#x5E38;&#x72B6;&#x614B;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Lrp &#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x6E1B;&#x5C11;&#x307E;&#x305F;&#x306F; Lrp &#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F; F165 1 &#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x6291;&#x5727;&#x7684;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Lrp &#x898F;&#x5236; Pap &#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0; F1651 &#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; foo &#x306E; L-&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;l-&#x30A2;&#x30E9;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;

&#xD478; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xD398;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD569;&#xC131; &#xBC0F; P &#xADDC;&#xC81C; &#xAC00;&#xC871;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD558;&#xB294; F165 1 fimbriae&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Arabinose pBAD &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xC544;&#xB798; &#xBCF5;&#xC81C; Lrp &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC640; lrp &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; &#xD478; Lrp &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xAE08;&#xC561;&#xC744; &#xBE44;&#xB840;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCC0;&#xD558;&#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0;. L &#xC2E0; &#xBC0F; L-&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC; foo&#xC640; Fooi&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xBCC4;&#xAC1C;&#xB85C; &#xC218;&#xC815;&#xB41C; &#xC704;&#xC0C1; &#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xC815;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xD0DC; &#xC804;&#xC0AC; &#xB300;&#xD3ED; &#xAC10;&#xC18C;. Lrp&#xC758; C-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xBCC0;&#xC774; &#xAC10;&#xC18C; &#xB610;&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; Lrp &#xC601;&#xD5A5;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; F165 1 &#xBCC0;&#xC870;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0;&#xC758; &#xC5B5;&#xC555; &#xC801;&#xC778; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD3D0;&#xC9C0;.

Foo, F1651, Pap homologue &#xCF54;&#xB529;&#xC758; Lrp &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; L &#xC2E0; &#xBC0F; L-&#xC54C;&#xB77C;&#xB2CC;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;.

El oper&oacute;n de foo codifica F165 1 fimbrias que pertenecen a la familia de P-regulador y son sintetizadas por septic&eacute;mico Escherichia coli. Usando un host de Lrp-deficiente y el gen de la lrp clonado en el promotor de pBAD de arabinosa, demostramos que foo fue transcrito proporcionalmente a la cantidad de Lrp sintetizada. L-leucina y L-Alanina disminuyeron dr&aacute;sticamente la transcripci&oacute;n de estado estacionario de foo y variaci&oacute;n de fase modificada, independientemente de la presencia de FooI. Mutaciones espec&iacute;ficas en la regi&oacute;n c-terminal de Lrp reducci&oacute;n o hab&iacute;a suprimido el efecto represivo de estos amino&aacute;cidos, indicando que modula F165 1 afectando Lrp.

Influencia de la L-leucina y L-Alanina en Reglamento de Lrp de foo, codificaci&oacute;n para F1651, un hom&oacute;logo del Pap.

&#x5728;&#x5E9F;&#x6C34;&#x4E2D;&#x901A;&#x5E38;&#x9047;&#x5230;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x901A;&#x7528; 16S rRNA &#x548C; cpn60 &#x57FA;&#x56E0;&#x63A2;&#x9488;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x5C0F;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x82AF;&#x7247;&#x539F;&#x578B;&#x3002;&#x9664;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;wecE &#x7279;&#x5B9A;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x63A2;&#x9488;&#x88AB;&#x5217;&#x5165;&#x82AF;&#x7247;&#xFF0C;&#x63D0;&#x9AD8;&#x5176;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x5185;&#x7684;&#x5224;&#x522B;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x901A;&#x7528; PCR &#x5F15;&#x7269;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x653E;&#x5927;&#x7684; 16S rRNA&#x3001; cpn60 &#x548C; wecE &#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x548C;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#x529B;&#x94A9;&#x7AEF;&#x87BA;&#x65CB;&#x4F53;&#x9F20;&#x4F24;&#x5BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; DNA &#x6DF7;&#x5408;&#x7269; &#xFF08;&#x4E8C;&#x8FDB;&#x5236;&#xFF09; &#xFF1B; &#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x53D8;&#x533A;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x3001; &#x9F20;&#x4F24;&#x5BD2;&#x3001; S.&#x529B;&#x94A9;&#x7AEF;&#x87BA;&#x65CB;&#x4F53;&#x548C;&#x8036;&#x5C14;&#x68EE;&#x6C0F;&#x83CC;&#x5C0F;&#x80A0;&#x7ED3;&#x80A0;&#x708E;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4; DNA &#x6DF7;&#x5408;&#x7269; &#xFF08;&#x4E09;&#x5143;&#xFF09; &#xFF1B;&#x6216;&#x5E9F;&#x6C34;&#x603B; DNA&#x3002;&#x6269;&#x589E;&#x7684;&#x4EA7;&#x7269;&#x662F;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x548C;&#x6742;&#x4EA4;&#x539F;&#x578B;&#x82AF;&#x7247;&#x4E0A;&#x3002;&#x4F24;&#x5BD2;&#x4F30;&#x8BA1;&#x7EA6;&#x603B;&#x6570;&#x7684; 0.1%&#xFF08;&#xFF09; S.&#x529B;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;) S.&#x529B;&#x94A9;&#x7AEF;&#x87BA;&#x65CB;&#x4F53;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7075;&#x654F;&#x5EA6;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684; DNA &#x8DDF;&#x82AF;&#x7247;&#x6742;&#x4EA4;&#x3002;&#x539F;&#x578B;&#x7684;&#x654F;&#x611F;&#x6027;&#x53EF;&#x4EE5;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x6742;&#x4EA4;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x5206;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x5982; wecE &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x5206;&#x7C7B;&#x5B66;&#x6269;&#x589E;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x94FE;&#x53CD;&#x5E94;&#x9776;&#x5411;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x6269;&#x589E;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6709;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5F71;&#x54CD;&#x7ED9;&#x5B9A;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x9650;&#xFF0C;&#x968F;&#x7740;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x98D9;&#x5347;&#x5230;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x6837;&#x672C;&#x7684; PCR &#x504F;&#x89C1;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5229;&#x7528; DNA &#x5FAE;&#x9635;&#x5217;&#x7684;&#x6DF7;&#x5408;&#x79CD;&#x7FA4;&#x5185;&#x7684;&#x6C34;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E5F;&#x63D0;&#x9AD8; PCR &#x504F;&#x89C1;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;

&#x57FA;&#x4E8E;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x82AF;&#x7247;&#x6240;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x6C34;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

A small-oligonucleotide microarray prototype was designed with probes specific for the universal 16S rRNA and cpn60 genes of several pathogens that are usually encountered in wastewaters. In addition to these two targets, wecE-specific oligonucleotide probes were included in the microarray to enhance its discriminating power within the Enterobacteriaceae family. Universal PCR primers were used to amplify variable regions of 16S rRNA, cpn60, and wecE genes directly in Escherichia coli and Salmonella enterica serovar Typhimurium genomic DNA mixtures (binary); E. coli, S. enterica serovar Typhimurium, and Yersinia enterocolitica genomic DNA mixtures (ternary); or wastewater total DNA. Amplified products were fluorescently labeled and hybridized on the prototype chip. The detection sensitivity for S. enterica serovar Typhimurium was estimated to be on the order of 0.1% (10(4) S. enterica genomes) of the total DNA for the combination of PCR followed by microarray hybridization. The sensitivity of the prototype could be increased by hybridizing amplicons generated by PCR targeting genes specific for a bacterial subgroup, such as wecE genes, instead of universal taxonomic amplicons. However, there was evidence of PCR bias affecting the detection limits of a given pathogen as increasing amounts of a different pathogen were spiked into the test samples. These results demonstrate the feasibility of using DNA microarrays in the detection of waterborne pathogens within mixed populations but also raise the problem of PCR bias in such experiments.

Waterborne pathogen detection by use of oligonucleotide-based microarrays.

Un prototype de petit-oligonucleotide microarray a &eacute;t&eacute; con&ccedil;u avec des sondes sp&eacute;cifiques pour les g&egrave;nes universelle 16 s rRNA et cpn60 de plusieurs pathog&egrave;nes qui sont habituellement rencontr&eacute;es dans les eaux us&eacute;es. En plus de ces deux cibles, sondes oligonucl&eacute;otidiques sp&eacute;cifiques wecE faisaient parties de la biopuce pour renforcer son pouvoir discriminant au sein de la famille des Enterobacteriaceae. Des amorces PCR universelles ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s pour amplifier les r&eacute;gions variables des ARNr 16 s, cpn60 et wecE g&egrave;nes directement dans Escherichia coli et Salmonella enterica serovar Typhimurium genomic DNA m&eacute;langes (binaires) ; E. coli, S. enterica serovar Typhimurium et Yersinia enterocolitica genomic DNA m&eacute;langes (ternaires) ; ou l&#39;ADN total des eaux us&eacute;es. Produits amplifi&eacute;s ont &eacute;t&eacute; fluorescent &eacute;tiquet&eacute;s et hybrid&eacute;es sur la puce de prototype. La sensibilit&eacute; de la d&eacute;tection pour S. enterica serovar que Typhimurium &eacute;tait estim&eacute;e est de l&#39;ordre de 0,1 % (10 (4) les g&eacute;nomes S. enterica) du total ADN pour la combinaison du PCR suivie d&#39;hybridation de microarray. La sensibilit&eacute; du prototype pourrait &ecirc;tre augment&eacute;e en hybridant les amplicons g&eacute;n&eacute;r&eacute;s par les g&egrave;nes cibles de PCR sp&eacute;cifiques pour un sous-groupe de bact&eacute;ries, comme les g&egrave;nes wecE, au lieu des amplicons taxonomiques universels. Cependant, il y avait preuve de partialit&eacute; PCR touchant les limites de d&eacute;tection d&#39;un pathog&egrave;ne donn&eacute; que des quantit&eacute;s croissantes d&#39;un autre agent pathog&egrave;ne ont &eacute;t&eacute; fortifi&eacute;es dans les &eacute;chantillons d&#39;essai. Ces r&eacute;sultats d&eacute;montrent la faisabilit&eacute; de l&#39;utilisation de puces &agrave; ADN dans la d&eacute;tection des pathog&egrave;nes d&#39;origine hydrique au sein des populations mixtes mais aussi soul&egrave;vent le probl&egrave;me de biais PCR dans de telles exp&eacute;riences.

D&eacute;tection des pathog&egrave;nes d&#39;origine hydrique par utilisation de microarrays ax&eacute;e sur les oligonucl&eacute;otides.

Ein klein-Oligonukleotid-Microarray-Prototyp wurde mit spezifischen Sonden f&uuml;r die universelle 16S rRNA und cpn60 Gene von mehreren Erregern entwickelt, die in der Regel in Abw&auml;sser anzutreffen sind. Zus&auml;tzlich zu diesen zwei Zielen geh&ouml;rten WecE-spezifische Oligonukleotid Sonden in der Microarray zur Steigerung ihrer unterscheidenden macht innerhalb der Familie der Enterobakterien. Universale PCR Z&uuml;ndkapseln wurden verwendet, um Variable Regionen der 16S rRNA, cpn60 und WecE Gene direkt in Escherichia coli und Salmonella Enterica Serovar Typhimurium genomische DNA Mischungen (bin&auml;r); verst&auml;rken E. Coli, S. Enterica Serovar Typhimurium und Yersinia Enterocolitica genomische DNA Mischungen (tern&auml;rer); oder Abwasser gesamten DNA. Verst&auml;rkte Produkte wurden Leuchtstoff beschriftet und auf dem Prototyp-Chip hybridisiert. Die Erkennung Empfindlichkeit f&uuml;r S. Enterica Serovar Typhimurium gesch&auml;tzt wurde, in der Gr&ouml;&szlig;enordnung von 0,1 % (10 Absatz 4 S. Enterica Genome) des gesamten sein, gefolgt von Microarray-Hybridisierung DNA f&uuml;r die Kombination von PCR. Die Empfindlichkeit des Prototyps konnte durch Hybridisierung Amplicons generiert durch PCR gezielt Gene spezifisch f&uuml;r eine bakterielle Untergruppe, z. B. WecE Gene, statt universal taxonomische Amplicons erh&ouml;ht werden. Allerdings gab es Beweis f&uuml;r PCR-Vorurteil betrifft die Nachweisgrenzen der eines bestimmten Erregers zunehmende Mengen ein verschiedene Krankheitserreger in der Pr&uuml;fmuster gespickt waren. Diese Ergebnisse zeigen die Machbarkeit der Verwendung von DNA-Microarrays bei der Entdeckung von Wasserwegen Krankheitserreger innerhalb gemischter Bev&ouml;lkerung aber auch das Problem der PCR Vorspannung in solche Experimente zu erh&ouml;hen.

Wasserbasierte Erregernachweis durch Verwendung von Oligonukleotid-basierte Microarrays.

Un prototipo del piccolo oligonucleotide microarray &egrave; stato progettato con sonde specifiche per i geni universali 16S rRNA e cpn60 di diversi agenti patogeni che di solito vengono rilevati nelle acque reflue. Oltre a questi due obiettivi, sonde del oligonucleotide wecE specifici sono stati inclusi in microarray per aumentare il suo potere discriminante all&#39;interno della famiglia Enterobacteriaceae. Universali degli iniettori PCR sono stati utilizzati per amplificare le regioni variabili di rRNA 16S, cpn60 e geni wecE direttamente in Escherichia coli e Salmonella enterica sierotipo Typhimurium genomic DNA miscele (binari); E. coli, S. enterica sierotipo Typhimurium e Yersinia enterocolitica genomic DNA miscele (ternari); o DNA totale delle acque reflue. Prodotti amplificati fluorescente sono stati etichettati e ibridati sul prototipo di un chip. La sensibilit&agrave; di rilevamento per S. enterica sierotipo che typhimurium &egrave; stata stimata per essere dell&#39;ordine di 0,1% (genomi di recano S. enterica) del totale DNA per la combinazione di PCR seguita da ibridazione di microarray. La sensibilit&agrave; del prototipo potrebbe essere aumentata da ibridare sequenze amplificate generati da geni bersaglio PCR specifici per un sottogruppo batterico, quali geni wecE, invece di sequenze amplificate tassonomico universale. Tuttavia, non vi era prova di bias PCR che interessano i limiti di rilevazione di un determinato agente patogeno come quantit&agrave; crescenti di un agente patogeno diverso erano a spillo nei campioni di prova. Questi risultati dimostrano la fattibilit&agrave; di usando i microarrays del DNA nella rilevazione di agenti patogeni a base acquosa all&#39;interno di popolazioni miste ma anche sollevare il problema del bias PCR in tali esperimenti.

Rilevamento del patogeno a base acquosa mediante uso di microarrays del oligonucleotide-based.

&#x5C0F;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x30E6;&#x30CB;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B5;&#x30EB; 16S rRNA &#x3068; cpn60 &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x5EC3;&#x6C34;&#x306E;&#x767A;&#x751F;&#x901A;&#x5E38;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089; 2 &#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066; wecE &#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x8178;&#x5185;&#x7D30;&#x83CC;&#x79D1;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x5185;&#x5F01;&#x5225;&#x529B;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306B;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x666E;&#x904D;&#x7684;&#x306A; PCR &#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30FC; 16S rRNA&#x3001;cpn60&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; wecE &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3068;&#x30B5;&#x30EB;&#x30E2;&#x30CD;&#x30E9;&#x9D8F;&#x5375;&#x578B;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30C1;&#x30D5;&#x30B9;&#x83CC;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; DNA &#x6DF7;&#x5408; (&#x30D0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30EA;); &#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x53EF;&#x5909;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3001;S. flit &#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30C1;&#x30D5;&#x30B9;&#x83CC;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; Yersinia enterocolitica &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; DNA &#x6DF7;&#x5408; (&#x4E09;&#x9805;)&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6392;&#x6C34;&#x5408;&#x8A08; DNA&#x3002;&#x5897;&#x5E45;&#x7523;&#x7269;&#x86CD;&#x5149;&#x306B;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; &#x30C1;&#x30C3;&#x30D7;&#x306B;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x691C;&#x51FA;&#x611F;&#x5EA6; S. flit &#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30C1;&#x30D5;&#x30B9;&#x83CC;&#x5408;&#x8A08; 0.1% &#xFF08;10 (4) S. &#x9D8F;&#x5375;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#xFF09; &#x7A0B;&#x5EA6;&#x3068;&#x898B;&#x7A4D;&#x3082;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x305F;&#x3081; PCR &#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; DNA &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x4EA4;&#x914D;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x611F;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;PCR &#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7279;&#x5B9A;&#x30E6;&#x30CB;&#x30D0;&#x30FC;&#x30B5;&#x30EB;&#x5206;&#x985E; amplicons &#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306E; wecE &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F; amplicons &#x3092;&#x4EA4;&#x914D;&#x3057;&#x3066;&#x5897;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x91CF;&#x3092;&#x5897;&#x3084;&#x3057;&#x3066;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8; &#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306B;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x3044;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x9650;&#x754C;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B; PCR &#x5148;&#x5165;&#x89B3;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x6DF7;&#x5408;&#x96C6;&#x56E3;&#x5185;&#x6C34;&#x7CFB;&#x611F;&#x67D3;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; DNA &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5B9F;&#x73FE;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x304C;&#x3082;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; PCR &#x30D0;&#x30A4;&#x30A2;&#x30B9;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6C34;&#x7CFB;&#x611F;&#x67D3;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x691C;&#x51FA;&#x3002;

&#xC791;&#xC740; oligonucleotide microarray &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0; &#xD0C0;&#xC785; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; wastewaters&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC758; &#xBCF4;&#xD3B8;&#xC801;&#xC778; 16S Rrna&#xC640; cpn60 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBAA9;&#xD45C; &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; wecE &#xD2B9;&#xC815; oligonucleotide &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; Enterobacteriaceae &#xAC00;&#xC871; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC28;&#xBCC4; &#xC804;&#xB825; &#xAC15;&#xD654;&#xC5D0; microarray&#xC5D0; &#xD3EC;&#xD568; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC720;&#xB2C8;&#xBC84;&#xC124; PCR &#xB1CC;&#xAD00; 16S rRNA, cpn60, &#xBC0F; wecE &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC9C1;&#xC811; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xBC0F; &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; enterica serovar &#xD2F0; genomic DNA &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C; (&#xC774;&#xC9C4;); &#xAC00;&#xBCC0; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xD655;&#xB300; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;, S. enterica serovar &#xD2F0;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD398;&#xC2A4;&#xD2B8; enterocolitica genomic DNA &#xD63C;&#xD569;&#xBB3C; (3 &#xC9C4;); &#xB610;&#xB294; &#xD3D0;&#xC218; &#xCD1D; DNA&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC99D;&#xD3ED;&#xB41C; &#xC81C;&#xD488; &#xBD84;&#xB958; &#xB193;&#xC5EC;&#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0; &#xD0C0;&#xC785; &#xCE69;&#xC5D0; hybridized. S. enterica serovar &#xD2F0; &#xC804;&#xCCB4;&#xC758; 0.1% (10(4) S. enterica &#xC720;&#xC804;&#xC790;) &#xC21C;&#xC11C; &#xCD94;&#xC815; &#xD588;&#xB2E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC80;&#xCD9C; &#xAC10;&#xB3C4; PCR&#xC758; &#xC870;&#xD569;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; DNA microarray &#xAD50; &#xC7A1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB530; &#xB790; &#xB2E4;. &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0; &#xD0C0;&#xC785;&#xC758; &#xAC10;&#xB3C4; amplicons PCR &#xB300;&#xC0C1; &#xBC94;&#xC6A9; taxonomic amplicons &#xB300;&#xC2E0; wecE &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB4F1; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xD558;&#xC704; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xAD50;&#xBC30; &#xC2DC;&#xD0A4;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB2E4;&#xB978; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xAE08;&#xC561;&#xC740; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0; &#xC544;&#xAD70;&#xC73C;&#xB85C; &#xD2B9;&#xC815;&#xB41C; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xAC80;&#xCD9C; &#xD55C;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; PCR &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;&#xC758; &#xC99D;&#xAC70;&#xAC00; &#xC600;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; DNA microarrays &#xD63C;&#xD569;&#xB41C; &#xC778;&#xAD6C; &#xC774;&#xB0B4; waterborne &#xBCD1;&#xC6D0; &#xADE0;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC758; &#xD0C0;&#xB2F9;&#xC131;&#xC744; &#xC785;&#xC99D; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xB610;&#xD55C; &#xADF8;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; PCR &#xBC14;&#xC774;&#xC5B4;&#xC2A4;&#xC758; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC2DC;&#xD0AC;.

Oligonucleotide &#xAE30;&#xBC18; microarrays&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; waterborne &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xAC80;&#xCD9C;.

Un prototipo de microarray de peque&ntilde;o-oligonucle&oacute;tido fue dise&ntilde;ado con sondas espec&iacute;ficas para los genes universal 16S rRNA y cpn60 de varios agentes pat&oacute;genos que se encuentran generalmente en aguas residuales. Adem&aacute;s de estos dos objetivos, sondas de oligonucle&oacute;tidos espec&iacute;ficos de WEZE se incluyeron en el microarray para aumentar su poder discriminatorio dentro de la familia Enterobacteriaceae. Cebadores universales de PCR se utilizan para amplificar regiones variables de 16S rRNA, cpn60 y WEZE genes directamente en Escherichia coli y Salmonella enterica serovar Typhimurium genomic DNA mezclas (binarios); E. coli, S. enterica serovar Typhimurium y Yersinia enterocolitica genomic DNA mezclas (ternarios); o ADN total de aguas residuales. Productos amplificados fueron etiquetados fluorescencia y cruzado por hibridaci&oacute;n en el chip del prototipo. La sensibilidad de detecci&oacute;n de S. enterica serovar que typhimurium se estimaba que alrededor del 0.1% (genomas de 10 S. enterica) del total ADN para la combinaci&oacute;n de PCR seguida de hibridaci&oacute;n de microarrays. La sensibilidad del prototipo podr&iacute;a aumentarse mediante cruzamiento por hibridaci&oacute;n amplicones generados por genes objetivos de PCR espec&iacute;ficos para un subgrupo bacteriano, tales como los genes WEZE, en lugar de amplicones taxon&oacute;mica universal. Sin embargo, hubo pruebas de sesgo de la polimerizaci&oacute;n en cadena que afectan a los l&iacute;mites de detecci&oacute;n de un determinado pat&oacute;geno como cantidades cada vez mayores de un pat&oacute;geno diferente, se a&ntilde;adieron en las muestras de prueba. Estos resultados demuestran la viabilidad de la utilizaci&oacute;n de microarrays de DNA en la detecci&oacute;n de pat&oacute;genos transmitidas por el agua en poblaciones mixtas pero tambi&eacute;n plantean el problema del sesgo de la PCR en tales experimentos.

Detecci&oacute;n de pat&oacute;genos transmitidas por el agua por el uso de microarrays basadas en oligonucle&oacute;tidos.

Autotransporters &#x662F;&#x5355;&#x591A;&#x80BD;&#x7EC4;&#x6210;&#x7684;&#x8C03;&#x89E3;&#x6613;&#x4F4D;&#x7684;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x57DF;&#x5916;&#x819C;&#x6613;&#x4F4D;&#x57DF;&#x3002;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x57DF;&#x7684;&#x5468;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x72B6;&#x6001;&#x662F;&#x6709;&#x4E89;&#x8BAE;&#x7684;&#x3002;&#x7531;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x57DF;&#x5728;&#x5176;&#x6298;&#x53E0;&#x5C5E;&#x6027;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5468;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x7684;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x57DF;&#x5E72;&#x6270;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;

Cysteineless autotransporter &#x5BA2;&#x8FD0;&#x57DF;&#x7684;&#x5468;&#x8D28;&#x6298;&#x53E0;&#x5E72;&#x6270;&#x5176;&#x5916;&#x819C;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;

Autotransporters are single polypeptides consisting of an outer membrane translocation domain mediating the translocation of a passenger domain. The periplasmic folding state of the passenger domain is controversial. By comparisons of passenger domains differing in their folding properties, our results suggest that periplasmic folding of passenger domains interferes with translocation.

The periplasmic folding of a cysteineless autotransporter passenger domain interferes with its outer membrane translocation.

Autotransporteurs sont des polypeptides simples compos&#xE9;s d&#x26;#39;un domaine de translocation de membrane externe de m&#xE9;diation de la translocation d&#x26;#39;un domaine de passagers. L&#x26;#39;&#xE9;tat p&#xE9;riplasmique repliement du domaine passager est controvers&#xE9;e. Par des comparaisons de domaines passagers qui diff&#xE8;rent par leurs propri&#xE9;t&#xE9;s de pliage, nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que le pliage p&#xE9;riplasmique de domaines passagers interf&#xE8;re avec la translocation.

Le Folding p&#xE9;riplasmique d&#x26;#39;un domaine de passagers Autotransporteur Cysteineless interf&#xE8;re avec sa translocation Outer Membrane

Autotransporters sind einzelne Polypeptiden bestehend aus einer Au&szlig;enmembran Translokation-Dom&auml;ne, die Vermittlung der Umsiedlung einer Passagier-Dom&auml;ne. Periplasmatischen Faltreifen Bundesland der Passagier-Dom&auml;ne ist umstritten. Durch Vergleiche der Passagier Dom&auml;nen unterscheiden in ihren Falten Eigenschaften zufolge unsere Ergebnisse periplasmatischen Faltung des Passagier-Dom&auml;nen Translokation st&ouml;rt.

Seine &auml;u&szlig;ere Membran-Translokation behindert die periplasmatischen Faltung einer cysteineless Autotransporter-Passagier-Dom&auml;ne.

Autotransporters sono polipeptidi unico costituito da un dominio di traslocazione di membrana esterna mediando la traslocazione di un dominio del passeggero. Lo stato periplasmico pieghevole del dominio passeggero &egrave; controverso. Dal confronto dei domini passeggero differiscono nelle loro propriet&agrave; pieghevole, i nostri risultati suggeriscono che periplasmico pieghevole di domini passeggero interferisce con traslocazione.

Il pieghevole periplasmico di un dominio del passeggero cysteineless autotransporter interferisce con la sua traslocazione di membrana esterna.

Autotransporters&#x306F;&#x4E57;&#x5BA2;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x5916;&#x819C;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30ED;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x4E57;&#x5BA2;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x6298;&#x308A;&#x305F;&#x305F;&#x307F;&#x72B6;&#x614B;&#x304C;&#x7269;&#x8B70;&#x3092;&#x91B8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x6298;&#x308A;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3067;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x4E57;&#x5BA2;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x4E57;&#x5BA2;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

Cysteine&#x200B;&#x200B;less Autotransporter&#x65C5;&#x5BA2;&#x30C9;&#x200B;&#x200B;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307F;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x306E;&#x819C;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x308B;

Autotransporters&#xB294; &#xC2B9;&#xAC1D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC804; &#xC911;&#xC7AC; &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9; &#xC804; &#xC601;&#xC5ED;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xB41C; &#xB2E8;&#xC77C; polypeptides. &#xC2B9;&#xAC1D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; periplasmic &#xC811;&#xB294; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB294; &#xB17C;&#xB780;. &#xC811;&#xB294; &#xC18D;&#xC131;&#xC5D0; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2B9;&#xAC1D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xBE44;&#xAD50; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC804; &#xBC29;&#xD574; &#xC2B9;&#xAC1D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; periplasmic &#xC811;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cysteineless autotransporter &#xC2B9;&#xAC1D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; periplasmic &#xC811;&#xB294; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD; &#xB9C9; &#xC804;&#xC744; &#xBC29;&#xD574; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Portaveh&#xED;culos son polip&#xE9;ptidos individuales que consisten en un dominio de membrana externa translocaci&#xF3;n mediar en la translocaci&#xF3;n de un dominio de pasajeros. El estado peripl&#xE1;smico plegado del dominio pasajero es controvertido. En las comparaciones de los dominios de pasajeros que difieren en sus propiedades de plegado, nuestros resultados sugieren que el plegamiento de los dominios de pasajeros peripl&#xE1;smico interfiere con la traslocaci&#xF3;n.

El plegable peripl&#xE1;smico de un dominio de Portaveh&#xED;culos pasajeros ciste&#xED;na interfiere con su translocaci&#xF3;n de membrana externa

&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7C98;&#x9644;&#x7D20;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5F25;&#x6F2B;&#x9075;&#x5B88; &#xFF08;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#xFF09;&#xFF0C;&#x50CF;&#x8BB8;&#x591A;&#x5176;&#x4ED6; autotransporter &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5728; periplasm &#x4F5C;&#x4E3A;&#x53D1;&#x5E03;&#x5176;&#x79FB;&#x4F4D;&#x540E;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6027;&#x672F;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x5904;&#x7406;&#x8DE8;&#x5916;&#x819C;&#x3002;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6027;&#x5206;&#x89E3;&#x6210;&#x819C;&#x5D4C;&#x5165;&#x7684;&#x7247;&#x6BB5;&#x3001; AIDAc &#x548C;&#x80DE;&#x5916;&#x7247;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x9ECF;&#x9644;&#x3002;&#x540E;&#x8005;&#x4ECD;&#x7136;&#x4E0E;&#x5916;&#x819C;&#x4E0A;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x53D1;&#x8868;&#x7684;&#x70ED;&#x5904;&#x7406;&#x5DE5;&#x827A;&#x3002;&#x5F00;&#x88C2;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6027;&#x548C;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x53CA;&#x5176;&#x4F5C;&#x7528;&#x673A;&#x5236;-&#x6211;&#x4E0D;&#x4E86;&#x89E3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x5288;&#x88C2;&#x662F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7684; AIDA &#x7684;&#x91CF;-&#x6211;&#x7684;&#x5916;&#x819C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5206;&#x5B50;&#x5185; autoproteolytic &#x673A;&#x5236;&#x6216;&#x5288;&#x88C2;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7247;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x6210;&#x719F;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x548C; AIDAc&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5; cosolubilized &#x548C; copurified &#x5728;&#x6298;&#x53E0;&#x548C;&#x79EF;&#x6781;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x91CA;&#x653E;&#x4E86;&#x70ED;&#x5904;&#x7406;&#x7ED3;&#x679C;&#x4ECE;&#x5C55;&#x5F00;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x548C;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;-AIDAc &#x4E0E;&#x6211;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x53EA;&#x6709;&#x4E0D;&#x5B89;&#x53D8;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x9020; uncleavable &#x70B9;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#xFF0C;&#x90A3;&#x91CC;&#x53D8;&#x6210;&#x4E86;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x3001; &#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x7684;&#x9176;&#x5207;&#x4F4D;&#x70B9;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x9ECF;&#x9644;&#x3001; autoaggregation &#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x5F62;&#x6210;&#x533A;&#x5206;&#x5F00;&#x6765;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8C03;&#x89E3;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x5904;&#x7406;-&#x6211;&#x8FD9;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4E2D;&#x6240;&#x8D77;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x5904;&#x7406;&#x662F;&#x6CA1;&#x6709;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; autotransporter &#x9ECF;&#x9644;&#x4E2D;&#x5F25;&#x6F2B;&#x9075;&#x5B88;&#x6D89;&#x53CA;&#x591A;&#x4E2A;&#x51FD;&#x6570; &#xFF08;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#xFF09;&#x3002;

The Escherichia coli adhesin involved in diffuse adherence (AIDA-I), like many other autotransporter proteins, is released in the periplasm as a proprotein undergoing proteolytic processing after its translocation across the outer membrane. The proprotein is cleaved into a membrane-embedded fragment, AIDAc, and an extracellular fragment, the mature AIDA-I adhesin. The latter remains noncovalently associated with the outer membrane and can be released by heat treatment. The mechanism of cleavage of the proprotein and its role in the functionality of AIDA-I are not understood. Here, we show that cleavage is independent of the amount of AIDA-I in the outer membrane, suggesting an intramolecular autoproteolytic mechanism or a cleavage mediated by an unknown protease. We show that the two fragments, mature AIDA-I and AIDAc, can be cosolubilized and copurified in a folded and active conformation. We observed that the release by heat treatment results from the unfolding of AIDA-I and that the interaction of AIDA-I with AIDAc seems to be disturbed only by denaturation. We constructed an uncleavable point mutant of AIDA-I, where a serine of the cleavage site was changed into a leucine, and showed that adhesion, autoaggregation, and biofilm formation mediated by the mutant are indistinguishable from the wild-type levels. Lastly, we show that both proteins can mediate the invasion of cultured epithelial cells. Taken together, our experiments suggest that the proteolytic processing of AIDA-I plays a minor role in the functionality of this protein.

Proteolytic processing is not essential for multiple functions of the Escherichia coli autotransporter adhesin involved in diffuse adherence (AIDA-I).

Le Escherichia coli adh&#xE9;sine impliqu&#xE9;e dans l&#x26;#39;adh&#xE9;rence diffuse (AIDA-I), comme beaucoup d&#x26;#39;autres prot&#xE9;ines Autotransporteur, est lib&#xE9;r&#xE9; dans le p&#xE9;riplasme comme une proprot&#xE9;ine &#xE0; subir un traitement prot&#xE9;olytique apr&#xE8;s sa translocation &#xE0; travers la membrane externe. Proprot&#xE9;ine de type est cliv&#xE9; en un fragment de membrane-int&#xE9;gr&#xE9;, AIDAC, et un fragment extracellulaire, de la maturit&#xE9; AIDA-I adh&#xE9;sine. Celui-ci reste non covalente associ&#xE9;e &#xE0; la membrane ext&#xE9;rieure et peut &#xEA;tre lib&#xE9;r&#xE9;e par un traitement thermique. Le m&#xE9;canisme de clivage de la proprot&#xE9;ine et son r&#xF4;le dans la fonctionnalit&#xE9; de l&#x26;#39;AIDA-I ne sont pas compris. Ici, nous montrons que le clivage est ind&#xE9;pendant du montant de l&#x26;#39;AIDA-I dans la membrane externe, ce qui sugg&#xE8;re un m&#xE9;canisme autoprot&#xE9;olytique intramol&#xE9;culaire ou un clivage m&#xE9;di&#xE9; par une prot&#xE9;ase inconnue. Nous montrons que les deux fragments, mature AIDA-I et AIDAC, peuvent &#xEA;tre cosolubilized et copurified dans une conformation repli&#xE9;e et active. Nous avons observ&#xE9; que la lib&#xE9;ration par les r&#xE9;sultats de traitement thermique de l&#x26;#39;&#xE9;panouissement de l&#x26;#39;AIDA-I et que l&#x26;#39;interaction de l&#x26;#39;AIDA-I avec AIDAC semble &#xEA;tre troubl&#xE9; seulement par d&#xE9;naturation. Nous avons construit un point uncleavable mutant de l&#x26;#39;AIDA-I, o&#xF9; une s&#xE9;rine du site de clivage a &#xE9;t&#xE9; chang&#xE9; en une leucine, et a montr&#xE9; que l&#x26;#39;adh&#xE9;rence, autoaggregation, et la formation de biofilm m&#xE9;di&#xE9;e par le mutant ne se distinguent pas par rapport aux niveaux de type sauvage. Enfin, nous montrons que les deux prot&#xE9;ines peuvent servir de m&#xE9;diateur de l&#x26;#39;invasion de cellules &#xE9;pith&#xE9;liales en culture. Pris dans leur ensemble, nos exp&#xE9;riences sugg&#xE8;rent que le traitement prot&#xE9;olytique de l&#x26;#39;AIDA-I joue un r&#xF4;le mineur dans la fonctionnalit&#xE9; de cette prot&#xE9;ine.

Traitement prot&#xE9;olytique n&#x26;#39;est pas indispensable pour de multiples fonctions de l&#x26;#39;Escherichia Coli Autotransporteur Adhesin impliqu&#xE9;es dans l&#x26;#39;adh&#xE9;rence diffuse (AIDA-I)

&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x732A; diarrheagenic &#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x83CC;&#x682A;&#x8840;&#x6E05;&#x7EC4; PD20 O143 (AIDA-I(+)&#xFF0C;STb(+))&#xFF0C;PD20M &#x7A81;&#x53D8;&#x682A; &#xFF08;AIDA-I(-)&#x3001; STb(+)) &#x4ECE;&#x5E94;&#x53D8; PD20 &#x7531;&#x751F;&#x6210;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4EA4;&#x6362;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5168;&#x957F; aidA &#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x5F15;&#x5165;&#x5E94;&#x53D8; PD20M &#x751F;&#x6210;&#x8865;&#x5145;&#x7684;&#x5E94;&#x53D8; PD20C &#xFF08;pTaidA&#xFF0C;AIDA-I(+)&#xFF0C;STb(+))&#x3002;&#x975E;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x83CC;&#x682A; PD71 &#x88AB;&#x7528;&#x4F5C;&#x8D1F;&#x63A7;&#x5236;&#x3002;&#x6BCF;&#x4E00;&#x682A;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x63A5;&#x79CD;&#x5230;&#x751F;&#x732A;&#x901A;&#x8FC7;&#x80C3;&#x7BA1;&#x3002;&#x4E25;&#x91CD;&#x7684;&#x8179;&#x6CFB;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BC4;&#x4F30;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x80A0;&#x9053;&#x5B9A;&#x690D;&#x662F;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B66;&#x3001; &#x514D;&#x75AB;&#x7EC4;&#x5316; (&#x80A1;&#x4E1C;) &#x548C;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x955C; (TEM) &#x5305;&#x62EC;&#x514D;&#x75AB;&#x80F6;&#x4F53;&#x91D1;&#x7535;&#x955C; (&#x56FD;&#x9645;)&#x3002;&#x5BF9; HeLa &#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x7EC6;&#x83CC;&#x81EA;&#x52A8;&#x805A;&#x5408;&#x548C;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x7C98;&#x8FDE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x4E86;&#x4F53;&#x5916;&#x3002;&#x732A;&#x611F;&#x67D3;&#x83CC;&#x682A; PD20 &#x6216;&#x5F00;&#x53D1;&#x7684; PD20C &#x8179;&#x6CFB; 16 &#x548C; 28 h &#x540E;&#x63A5;&#x79CD;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x4E0E; PD20M &#x6216; PD71 &#x7684;&#x83CC;&#x682A;&#x6240;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x732A;&#x3002;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5B66;&#x3001; &#x80A1;&#x4E1C;&#x3001; &#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x955C;&#x548C;&#x56FD;&#x9645;&#x8003;&#x8BD5;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x91CD;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5B9A;&#x690D;&#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x6807;&#x8BB0;&#x4F53;&#x5185;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x682A;&#x682A; PD20 &#x6216; PD20C &#x4E0E; PD20M &#x6216; PD71 &#x7684;&#x83CC;&#x682A;&#x6240;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x732A;&#x611F;&#x67D3;&#x732A;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x4F53;&#x5916;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x663E;&#x793A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x660E;&#x663E;&#x5F25;&#x6F2B;&#x52A0;&#x5165;&#x589E;&#x5F3A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x81EA;&#x52A8;&#x805A;&#x5408;&#x548C;&#x91CD;&#x5927;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x5F62;&#x6210; &#xFF08;p &lt; 0.05&#xFF09; &#x7531; AIDA-I(+) &#x83CC;&#x682A;&#xFF0C;&#x4E0E; AIDA-I(-) &#x83CC;&#x682A;&#x76F8;&#x6BD4;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6240;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x662F;&#x80A0;&#x9053;&#x7684;&#x6B96;&#x6C11;&#x5316;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x7EC6;&#x83CC; autoaggregation &#x4E0E;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x8003;&#x8651;&#x53D1;&#x5C55;&#x8179;&#x6CFB;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x732A; diarrheagenic &#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6BD2;&#x529B;&#x884C;&#x5217;&#x5F0F;-&#x6211; (+) &#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; PD20 &#x4ED4;&#x732A;&#x3002;

&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x7684;&#x8D21;&#x732E;-&#x732A; diarrheagenic &#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x751F;&#x7269;&#x819C;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x732A;&#x80A0;&#x6B96;&#x6C11;&#x5316;&#x3002;

In order to evaluate the role of the AIDA-I of porcine diarrheagenic Escherichia coli strain PD20 serogroup O143 (AIDA-I(+), STb(+)), a mutant strain PD20M (AIDA-I(-), STb(+)) was generated from strain PD20 by an allelic exchange procedure. In addition, the full-length aidA gene was reintroduced into strain PD20M to generate the complemented strain PD20C (pTaidA, AIDA-I(+), STb(+)). A non-pathogenic E. coli strain PD71 was used as negative control. Each strain was inoculated to newborn pigs via stomach tube. Severity of diarrhea was evaluated clinically and intestinal colonization was assessed by histology, immunohistochemistry (IHC), and transmission electron microscopy (TEM) including immunogold electron microscopy (IGEM). The adhesion pattern to HeLa cells, bacterial auto-aggregation and biofilm formation were evaluated in vitro. Pigs infected with strains PD20 or PD20C developed diarrhea 16 and 28h after inoculation, respectively, in contrast to pigs infected with strains PD20M or PD71. Histology, IHC, TEM and IGEM examinations showed heavy bacterial colonization with biofilm formation in the large intestine, and marked in vivo expression of AIDA-I protein in pigs infected with strains PD20 or PD20C in contrast to pigs infected with strains PD20M or PD71. The in vitro assays showed marked diffuse adherence to HeLa cells, enhanced bacterial auto-aggregation and significant biofilm formation (p<0.05) by the AIDA-I(+) strains, when compared to AIDA-I(-) strains. These results demonstrate that expression of AIDA-I is essential for intestinal colonization and in vitro bacterial autoaggregation and biofilm formation. Thus, AIDA-I may be considered a significant virulence determinant in development of diarrhea caused by porcine diarrheagenic AIDA-I(+)E. coli PD20 in piglets.

Contribution of AIDA-I to the pathogenicity of a porcine diarrheagenic Escherichia coli and to intestinal colonization through biofilm formation in pigs.

Afin d&#x26;#39;&#xE9;valuer le r&#xF4;le de l&#x26;#39;AIDA-I d&#x26;#39;origine porcine coli souche Escherichia diarrh&#xE9;og&#xE8;nes PD20 s&#xE9;rogroupe O143 (AIDA-I (+), STB (+)), une souche mutante PD20M (AIDA-I (-), STB (+) ) a &#xE9;t&#xE9; g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; &#xE0; partir PD20 souche par une proc&#xE9;dure d&#x26;#39;&#xE9;change all&#xE9;lique. En outre, le g&#xE8;ne de pleine longueur Aida a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;introduit dans PD20M souche de g&#xE9;n&#xE9;rer la souche compl&#xE9;ment&#xE9;e PD20C (pTaidA, AIDA-I (+), STB (+)). Un non-pathog&#xE8;ne souche de E. coli PD71 a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; comme t&#xE9;moin n&#xE9;gatif. Chaque souche a &#xE9;t&#xE9; inocul&#xE9;e &#xE0; des porcs nouveau-n&#xE9;s par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;une sonde gastrique. La gravit&#xE9; de la diarrh&#xE9;e a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;valu&#xE9;e cliniquement et de la colonisation intestinale a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;valu&#xE9; par l&#x26;#39;histologie, l&#x26;#39;immunohistochimie (IHC), et la microscopie &#xE9;lectronique &#xE0; transmission (MET), y compris la microscopie &#xE9;lectronique immunologique (IGEM). Le mod&#xE8;le d&#x26;#39;adh&#xE9;rence aux cellules HeLa, la formation bact&#xE9;rienne auto-agr&#xE9;gation et le biofilm ont &#xE9;t&#xE9; &#xE9;valu&#xE9;s in vitro. Les porcs infect&#xE9;s avec des souches PD20 ou PD20C une diarrh&#xE9;e 16 et 28h apr&#xE8;s l&#x26;#39;inoculation, respectivement, &#xE0; la diff&#xE9;rence de porcs infect&#xE9;s par des souches PD20M ou PD71. Histologie, IHC, TEM et les examens ont montr&#xE9; iGEM lourde colonisation bact&#xE9;rienne avec formation d&#x26;#39;un biofilm dans le gros intestin, et marqu&#xE9; l&#x26;#39;expression in vivo des prot&#xE9;ines AIDA-I chez les porcs infect&#xE9;s par des souches PD20 ou PD20C en revanche pour les porcs infect&#xE9;s par des souches PD20M ou PD71. Les essais in vitro ont montr&#xE9; dans marqu&#xE9;e adh&#xE9;rence diffuse aux cellules HeLa, le renforcement de la formation de biofilms bact&#xE9;riens auto-agr&#xE9;gation et significative (p &#x26;lt;0,05) par l&#x26;#39;AIDA-I (+) des souches, par rapport &#xE0; AIDA-I (-) de souches. Ces r&#xE9;sultats d&#xE9;montrent que l&#x26;#39;expression de l&#x26;#39;AIDA-I est essentielle pour la colonisation intestinale et in vitro autoaggregation bact&#xE9;rienne et la formation de biofilm. Ainsi, AIDA-I peut &#xEA;tre consid&#xE9;r&#xE9;e comme un facteur de virulence important dans le d&#xE9;veloppement de la diarrh&#xE9;e caus&#xE9;e par porcine diarrh&#xE9;og&#xE8;nes AIDA-I (+) E. PD20 coli chez les porcelets.

Contribution de l&#x26;#39;AIDA-I de la pathog&#xE9;nicit&#xE9; d&#x26;#39;un Coli porcine Escherichia diarrh&#xE9;og&#xE8;nes et &#xE0; la colonisation intestinale par la formation de biofilms chez les porcs

Um die Rolle der AIDA zu beurteilen-ich Schweine Diarrheagenic Escherichia coli Stamm PD20 Serogruppe O143 (AIDA-I(+), STb(+)), ein mutant Stamm PD20M (AIDA-I(-), STb(+)) wurde von Stamm PD20 durch generiert eine allelische Umtauschverfahren. Dar&uuml;ber hinaus das in AidA-gen ausgewildert zu Stamm PD20M zum Generieren des erg&auml;nzten Stamm PD20C (pTaidA, AIDA-I(+), STb(+)). Ein nicht-pathogenen E. Coli Stamm PD71 diente als Negativkontrolle. Jeder Stamm wurde an Neugeborene Schweine &uuml;ber eine Magensonde verimpft. Schweregrad der Durchfall wurde klinisch evaluiert und intestinale Kolonisation wurde von Histologie, Immunhistochemie (IHC) und &Uuml;bertragung Elektronenmikroskopie (TEM) einschlie&szlig;lich Immunogold-Elektronenmikroskopie (IGEM) bewertet. Das Adh&auml;sion-Muster auf die HeLa-Zellen, bakterielle Auto-Aggregation und Biofilm-Bildung wurden in-vitro-ausgewertet. Mit infizierte Schweinen St&auml;mmen PD20 oder PD20C entwickelt Durchfall 16 und 28 h nach der Inokulation, bzw., im Gegensatz zu Schweine infiziert mit St&auml;mmen, PD20M oder PD71. Histologie, IHC, TEM und IGEM Untersuchungen zeigten schwere bakterielle Besiedlung mit Biofilm-Bildung im Dickdarm und markiert in-vivo Ausdruck der AIDA-ich Protein in mit St&auml;mmen PD20 oder PD20C im Gegensatz zu mit St&auml;mmen PD20M oder PD71 infizierten Schweinen infizierten Schweinen. Die in-vitro-Tests zeigte deutlichen diffusen Festhalten an HeLa-Zellen, verbesserte bakterielle Auto-Aggregation und bedeutende Biofilm-Bildung (p &lt; 0,05) durch die AIDA-I(+)-St&auml;mme, im Vergleich zu AIDA-I(-) St&auml;mme. Diese Ergebnisse zeigen, dass Ausdruck der AIDA-ich ist f&uuml;r intestinale Kolonisation und in-vitro-bakterielle Autoaggregation und Biofilm-Bildung. Damit AIDA-ich kann als bedeutende Virulenz bestimmender Faktor in der Entwicklung von Durchfall verursacht durch Schweine Diarrheagenic AIDA-ich (+) E. Coli PD20 bei Ferkeln.

Beitrag von AIDA-ich die Pathogenit&auml;t eine porcine Diarrheagenic Escherichia coli und intestinale Kolonisation durch Biofilm-Bildung bei Schweinen.

Al fine di valutare il ruolo dell&#39;Aida-I di porcino diarrheagenic Escherichia coli ceppo sierogruppo PD20 O143 (AIDA-I(+), STb(+)), un ceppo mutante PD20M (AIDA-I(-), STb(+)) &egrave; stato generato dal ceppo PD20 da una procedura di scambio allelica. Inoltre, il full-length gene aidA fu reintrodotto nel ceppo di PD20M per generare il ceppo integrato PD20C (pTaidA, AIDA-I(+), STb(+)). Un ceppo non patogeno e. coli PD71 fu usato come controllo negativo. Ogni sforzo &egrave; stato inoculato ai suini neonati tramite tubo di stomaco. Gravit&agrave; della diarrea &egrave; stata valutata clinicamente e colonizzazione intestinale &egrave; stato valutato da istologia, immunoistochimica (IHC) e trasmissione microscopia elettronica (TEM) tra cui immunogold electron microscopy (IGEM). Il modello di adesione alle cellule HeLa, auto-aggregazione batterica e la formazione di biofilm sono stati valutati in vitro. Suini infettate con ceppi PD20 o PD20C sviluppato diarrea 16 e 28 h dopo l&#39;inoculazione, rispettivamente, in contrasto con suini infettate con ceppi PD20M o PD71. Esami istologici, IHC, TEM e IGEM ha mostrato pesante colonizzazione batterica con formazione di biofilm nel grosso intestino e contrassegnato espressione in vivo di AIDA-I della proteina nei suini infettate con ceppi PD20 o PD20C in contrasto con suini infettate con ceppi PD20M o PD71. I saggi in vitro ha mostrato marcata diffusa adesione alle cellule HeLa, enhanced auto-aggregazione batterica e la formazione di biofilm significativa (p &lt; 0,05) da ceppi AIDA-I(+), rispetto ai ceppi AIDA-I(-). Questi risultati dimostrano che espressione di AIDA-I &egrave; essenziale per la colonizzazione intestinale e la formazione di autoaggregation e biofilm batterica in vitro. Cos&igrave;, AIDA-possa considerarsi un determinante di virulenza significativo nello sviluppo di diarrea causata da porcino diarrheagenic AIDA-I (+) e. coli PD20 nei suinetti.

Contributo di AIDA-I per la patogenicit&agrave; di un suino diarrheagenic Escherichia coli e di colonizzazione intestinale attraverso la formazione di biofilm in maiali.

&#x30D6;&#x30BF;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x682A;&#x306E;&#x8840;&#x6E05;&#x578B;O143 PD20&#xFF08;AIDA-I&#xFF08;+&#xFF09;&#x3001;STB&#xFF08;+&#xFF09;&#xFF09;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x682A;PD20M&#xFF08;AIDA-I&#xFF08;&#x306E;AIDA-I&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B; - &#xFF09;&#x3001;STB&#xFF08;+&#xFF09; &#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x4EA4;&#x63DB;&#x624B;&#x9806;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3072;&#x305A;&#x307F;PD20&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;AIDA&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x304C;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3072;&#x305A;&#x307F;PD20C&#x3092;&#xFF08;pTaidA&#x3001;AIDA-I&#xFF08;+&#xFF09;&#x3001;STB&#xFF08;+&#xFF09;&#xFF09;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3072;&#x305A;&#x307F;PD20M&#x306B;&#x518D;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x975E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x682A;PD71&#x306F;&#x3001;&#x30CD;&#x30AC;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5404;&#x83CC;&#x682A;&#x306F;&#x3001;&#x80C3;&#x30C1;&#x30E5;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x65B0;&#x751F;&#x5150;&#x30D6;&#x30BF;&#x306B;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E0B;&#x75E2;&#x306E;&#x91CD;&#x75C7;&#x5EA6;&#x306F;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x306B;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x8178;&#x306E;&#x690D;&#x6C11;&#x5730;&#x5316;&#x306F;&#x7D44;&#x7E54;&#x5B66;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x7D44;&#x7E54;&#x5316;&#x5B66;&#xFF08;IHC&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x514D;&#x75AB;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;IGEM&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x900F;&#x904E;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;TEM&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002; HeLa&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x3001;&#x81EA;&#x52D5;&#x96C6;&#x7D04;&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x5F62;&#x6210;&#x3078;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306F;in vitro&#x3067;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x682A;PD20M&#x307E;&#x305F;&#x306F;PD71&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30D6;&#x30BF;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x63A5;&#x7A2E;&#x5F8C;&#x4E0B;&#x75E2;16&#x3068;28H&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x682A;PD20&#x307E;&#x305F;&#x306F;PD20C&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30D6;&#x30BF;&#x3002;&#x7D44;&#x7E54;&#x3001;IHC&#x3001;TEM&#x3068;IGEM&#x691C;&#x67FB;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x91CD;&#x3044;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x5F62;&#x6210;&#x304C;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x83CC;&#x682A;PD20M&#x307E;&#x305F;&#x306F;PD71&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x30D6;&#x30BF;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x682A;PD20&#x307E;&#x305F;&#x306F;PD20C&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x305F;&#x8C5A;&#x306E;AIDA-I&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;in vivo&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; &#xFF08; - &#xFF09;&#x682A;&#x306E;in vitro&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3001;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x81EA;&#x52D5;&#x96C6;&#x7D04;&#x3068;AIDA-I&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;AIDA-I&#xFF08;+&#xFF09;&#x682A;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x305F;&#xFF08;p &#x26;lt;0.05&#xFF09;&#x3092;HeLa&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3073;&#x307E;&#x3093;&#x6027;&#x306E;&#x9075;&#x5B88;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;AIDA-I&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;&#x8178;&#x5185;&#x5B9A;&#x7740;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vitro&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;autoaggregation&#x3068;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;AIDA-I&#x306F;&#x3001;&#x30D6;&#x30BF;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;AIDA-I&#xFF08;+&#xFF09;E.&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x4E0B;&#x75E2;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x8C5A;&#x306E;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;PD20&#x3002;

&#x8C5A;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x30E0;&#x5F62;&#x6210;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30D6;&#x30BF;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8178;&#x7BA1;&#x5B9A;&#x7740;&#x3078;AIDA-I&#x306E;&#x5BC4;&#x4E0E;

&#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;-&#xB3FC;&#xC9C0; diarrheagenic &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; PD20 serogroup O143 (AIDA-I(+), STb(+)), PD20M &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; (AIDA-I(-), Stb(+))&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; PD20 &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAD50;&#xD658; &#xC808;&#xCC28;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615; &#xBCF4;&#xC644;&#xB41C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; pd20c&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; pd20m&#xC5D0; reintroduced &#xD588;&#xB2E4; (pTaidA, AIDA-I(+), STb(+)). &#xBE44; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; PD71 &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC81C;&#xC5B4;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778; &#xC704;&#xC7A5; &#xD29C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC13; &#xD0DC;&#xC5B4;&#xB09C; &#xB3FC;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC124;&#xC0AC;&#xC758; &#xC2EC;&#xAC01;&#xB3C4; &#xC784;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xC7A5; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xC870;&#xC9C1;&#xD559;, &#xAE30;&#xC220; (IHC) &#xBC0F; &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (TEM) immunogold &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; (IGEM) &#xB4F1;&#xC73C;&#xB85C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xD3EC;, &#xC138;&#xADE0; &#xC790;&#xB3D9; &#xC9D1;&#xACC4; &#xBC0F; biofilm &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xC811;&#xCC29; &#xD328;&#xD134; &#xCCB4; &#xC678; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB3FC;&#xC9C0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xBCC0;&#xC885; PD20 &#xB610;&#xB294; PD20C &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC124;&#xC0AC; 16&#xACFC; 28 h, &#xC811;&#xC885; &#xD6C4; &#xAC01;&#xAC01;, PD20M &#xB610;&#xB294; PD71 &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xB3FC;&#xC9C0;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC;. &#xC870;&#xC9C1;&#xD559;, IHC, &#xD3B8; &#xBC0F; IGEM &#xC2DC;&#xD5D8; &#xD070; &#xCC3D; &#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; biofilm &#xD615;&#xC131; &#xBB34;&#xAC70;&#xC6B4; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xBA70; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC2DD; &#xD45C;&#xC2DC;-&#xB09C; &#xB3FC;&#xC9C0; &#xC885;&#xC790; PD20 &#xB610;&#xB294; PD20C PD20M &#xB610;&#xB294; PD71 &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xB3FC;&#xC9C0;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;. &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900; &#xD5EC;&#xB7EC; &#xC140;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xD655;&#xC0B0; &#xC900;&#xC218; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC138;&#xADE0; &#xC790;&#xB3D9; &#xC9D1;&#xACC4; &#xBC0F; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; biofilm &#xD615;&#xC131; (p &lt; 0.05) AIDA-I(-) &#xBCC0;&#xC885;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; AIDA-I(+) &#xC885;&#xC790;&#xB85C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xADF8; &#xC2DD; &#xC785;&#xC99D;-&#xC7A5; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; &#xC138;&#xADE0; autoaggregation &#xBC0F; biofilm &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-&#xB3FC;&#xC9C0; diarrheagenic &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC124;&#xC0AC;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xB3C5;&#xC131; &#xD589;&#xB82C;&#xC2DD;&#xC744; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;-&#xB09C; (+) &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; PD20 piglets&#xC5D0;&#xC11C;.

&#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC;-&#xB3FC;&#xC9C0; diarrheagenic &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; pathogenicity &#xBC0F; &#xB3FC;&#xC9C0;&#xC5D0; biofilm &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC7A5; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;.

Con el fin de evaluar el papel de la AIDA-I de porcino cepa de Escherichia coli diarreog&#xE9;nica PD20 serogrupo O143 (AIDA-I (+), STB (+)), una cepa mutante PD20M (AIDA-I (-), STB (+) ) se gener&#xF3; a partir PD20 cepa por un procedimiento de intercambio al&#xE9;lico. Adem&#xE1;s, el gen de longitud completa aida fue reintroducido en PD20M cepa para generar la cepa complementada PD20C (pTaidA, AIDA-I (+), STB (+)). Un no-pat&#xF3;gena cepa de E. coli PD71 se utiliz&#xF3; como control negativo. Cada cepa se inocularon a los cerdos reci&#xE9;n nacidos a trav&#xE9;s de un tubo estomacal. La severidad de la diarrea fue evaluado cl&#xED;nicamente y se evalu&#xF3; la colonizaci&#xF3;n intestinal por medio de histolog&#xED;a, inmunohistoqu&#xED;mica (IHC), y microscop&#xED;a electr&#xF3;nica de transmisi&#xF3;n (TEM), incluyendo inmuno-microscop&#xED;a electr&#xF3;nica (IGEM). El patr&#xF3;n de adhesi&#xF3;n a c&#xE9;lulas HeLa, la formaci&#xF3;n bacteriana de auto-agregaci&#xF3;n y la biopel&#xED;cula se evalu&#xF3; in vitro. Los cerdos infectados con cepas PD20 o diarrea PD20C desarrollado 16 y 28h despu&#xE9;s de la inoculaci&#xF3;n, respectivamente, en contraste con los cerdos infectados con cepas PD20M o PD71. Histolog&#xED;a, inmunohistoqu&#xED;mica, TEM y los ex&#xE1;menes mostraron iGEM colonizaci&#xF3;n bacteriana pesada con la formaci&#xF3;n de biopel&#xED;culas en el intestino grueso, y marcado en la expresi&#xF3;n in vivo de la AIDA-I prote&#xED;na en cerdos infectados con cepas PD20 o PD20C en contraste con los cerdos infectados con cepas PD20M o PD71. Los ensayos in vitro mostraron en la adherencia marcada difusa de las c&#xE9;lulas HeLa, una mayor formaci&#xF3;n de biopel&#xED;culas bacterianas de auto-agregaci&#xF3;n y significativa (p &#x26;lt;0,05) por la AIDA-I (+) cepas, en comparaci&#xF3;n con AIDA-I (-) las cepas. Estos resultados demuestran que la expresi&#xF3;n de AIDA-I es esencial para la colonizaci&#xF3;n intestinal y en autoagregaci&#xF3;n bacteriano in vitro y la formaci&#xF3;n de biopel&#xED;culas. As&#xED;, AIDA-I puede ser considerado un determinante de virulencia importante en el desarrollo de la diarrea causada por porcino diarreog&#xE9;nica AIDA-I (+) E. E. PD20 en los lechones.

Contribuci&#xF3;n de la AIDA-I de la patogenicidad de un Escherichia coli y porcino diarreog&#xE9;nicas a trav&#xE9;s de la colonizaci&#xF3;n intestinal formaci&#xF3;n de biopel&#xED;culas en los cerdos

Autotransporters are simple systems that Gram-negative bacteria employ to secrete proteins to their surfaces or into the extracellular milieu. They consist of an N-terminal passenger domain and a C-terminal domain that is thought to insert into the outer membrane and mediate the secretion of the passenger domain. Despite the apparent simplicity of these secretion systems, their mechanism of translocation is still not completely understood. To study this mechanism, we used the AIDA-I autotransporter adhesin of Escherichia coli. We introduced mutations at several sites in a junction region of the passenger domain, close to the membrane-embedded domain. We observed that the mutations dramatically affected the biogenesis of AIDA-I. The same mutations, however, did not affect the translocation of a chimeric construct where MalE, the E. coli periplasmic maltose binding protein, replaced most of the passenger domain of AIDA-I. Our results emphasize the function of this region in the biogenesis of AIDA-I and suggest that it plays its role by interacting with and/or promoting folding of native passenger domains.

Mutations affecting the biogenesis of the AIDA-I autotransporter.

Autotransporters &#x662F;&#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9634;&#x6027;&#x83CC;&#x96C7;&#x7528;&#x5206;&#x6CCC;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5230;&#x5176;&#x8868;&#x9762;&#x6216;&#x80DE;&#x5916;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x7B80;&#x5355;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x5B83;&#x4EEC;&#x7531; N &#x7EC8;&#x7AEF;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x57DF;&#x548C; C &#x7EC8;&#x7AEF;&#x57DF;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x63D2;&#x5165;&#x5916;&#x819C;&#x548C;&#x8C03;&#x89E3;&#x5206;&#x6CCC;&#x7684;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x57DF;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5206;&#x6CCC;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x660E;&#x663E;&#x7B80;&#x5355;&#x8D77;&#x89C1;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x80FD;&#x5B8C;&#x5168;&#x7406;&#x89E3;&#x662F;&#x6613;&#x4F4D;&#x53CA;&#x5176;&#x673A;&#x7406;&#x3002;&#x4E3A;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD9;&#x4E00;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x91C7;&#x7528;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; autotransporter &#x9ECF;&#x9644;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4E86;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x57DF;&#xFF0C;&#x63A5;&#x8FD1;&#x819C;&#x5D4C;&#x5165;&#x57DF;&#x4EA4;&#x754C;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5730;&#x70B9;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7A81;&#x53D8;&#x6781;&#x5927;&#x5730;&#x5F71;&#x54CD;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;-&#x6211;&#x3002;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#xFF0C;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E0D;&#x5F71;&#x54CD;&#x7537;&#x6027;&#xFF0C;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x5468;&#x8D28;&#x9EA6;&#x82BD;&#x7CD6;&#x7ED3;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4EE3;&#x66FF;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x4E58;&#x5BA2;&#x57DF;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x7684;&#x5D4C;&#x5408;&#x4F53;&#x6784;&#x9020;&#x7684;&#x6613;&#x4F4D;-&#x6211;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5F3A;&#x8C03;&#x672C;&#x5730;&#x533A;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x51FD;&#x6570;-&#x6211;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x548C;/&#x6216;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x7684;&#x672C;&#x673A;&#x5BA2;&#x8FD0;&#x57DF;&#x6298;&#x53E0;&#x3002;

&#x5F71;&#x54CD;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x6211; autotransporter&#x3002;

Autotransporteurs sont des syst&#xE8;mes simples qui bact&#xE9;ries Gram-n&#xE9;gatives employer pour s&#xE9;cr&#xE9;ter des prot&#xE9;ines ou &#xE0; leurs surfaces dans le milieu extracellulaire. Ils sont constitu&#xE9;s d&#x26;#39;un domaine N-terminal de passagers et un domaine C-terminal qui est pens&#xE9; pour s&#x26;#39;ins&#xE9;rer dans la membrane externe et de m&#xE9;diation de la s&#xE9;cr&#xE9;tion du domaine de passagers. Malgr&#xE9; l&#x26;#39;apparente simplicit&#xE9; de ces syst&#xE8;mes de s&#xE9;cr&#xE9;tion, de leur m&#xE9;canisme de translocation est pas encore compl&#xE8;tement compris. Pour &#xE9;tudier ce m&#xE9;canisme, nous avons utilis&#xE9; le autotransporteur AIDA-I adh&#xE9;sine d&#x26;#39;Escherichia coli. Nous avons introduit des mutations dans plusieurs sites dans une r&#xE9;gion de jonction du domaine des passagers, &#xE0; proximit&#xE9; de la membrane de domaine incorpor&#xE9; dans. Nous avons observ&#xE9; que les mutations dramatiquement affect&#xE9; la biogen&#xE8;se de l&#x26;#39;AIDA-I. Les m&#xEA;mes mutations, cependant, n&#x26;#39;a pas d&#x26;#39;incidence sur la translocation d&#x26;#39;une construction chim&#xE9;rique o&#xF9; les hommes, la bact&#xE9;rie E. coli p&#xE9;riplasmique prot&#xE9;ine liant le maltose, a remplac&#xE9; la plupart du domaine de passagers de l&#x26;#39;AIDA-I. Nos r&#xE9;sultats mettent en &#xE9;vidence la fonction de cette r&#xE9;gion dans la biogen&#xE8;se de l&#x26;#39;AIDA-I et sugg&#xE8;rent qu&#x26;#39;il joue son r&#xF4;le en interagissant avec et / ou la promotion de pliage de domaines passagers indig&#xE8;nes.

Des mutations affectant la biogen&#xE8;se de la Autotransporteur AIDA-I

Autotransporters sind einfache Systeme, mit denen Gramnegative Bakterien absondern Proteine an ihrer Oberfl&auml;che oder in der extrazellul&auml;ren Milieu. Sie bestehen aus einer N-terminalen Passagier-Dom&auml;ne und einer C-terminalen Dom&auml;ne, die gedacht wird, legen Sie in die &auml;u&szlig;ere Membran und die Sekretion der Passagier-Dom&auml;ne zu vermitteln. Trotz der scheinbaren Einfachheit dieser Sekretion-Systeme wird ihre Mechanismus der Translokation noch nicht ganz verstanden. Um diesen Mechanismus zu studieren, verwendeten wir die AIDA-ich Autotransporter Adhesin Escherichia coli. Wir f&uuml;hrten die Mutationen an mehreren Standorten in einer Kreuzung der Passagier-Dom&auml;ne, in der N&auml;he der Membran eingebettete Dom&auml;ne. Wir beobachteten, dass die Mutationen drastisch die Biogenese von AIDA betroffen-ich. Die gleichen Mutationen, hatte jedoch keine Auswirkungen, auf die Translokation eines Chim&auml;ren Konstrukts, wobei M&auml;nnchen, die E. Coli periplasmatischen Maltose verbindliches Protein, die meisten der Passagier-Dom&auml;ne des AIDA ersetzt-ich. Unsere Ergebnisse unterstreichen die Funktion dieser Region in der Biogenese von AIDA-ich und schlage vor, dass er seine Rolle spielt, durch Interaktion mit und/oder F&ouml;rderung Faltreifen native Passagier-Domains.

Mutationen der Biogenese von der AIDA-ich Autotransporter.

Autotransporters sono sistemi semplici che utilizzano batteri Gram-negativi a secernere proteine alle loro superfici o in ambiente extracellulare. Sono costituiti da un dominio di N-terminal passeggeri e un dominio C-terminale che si &egrave; pensato di inserire nella membrana esterna e mediare la secrezione del dominio passeggeri. Nonostante l&#39;apparente semplicit&agrave; di questi sistemi di secrezione, il loro meccanismo di traslocazione &egrave; ancora non completamente capito. Per studiare questo meccanismo, abbiamo utilizzato l&#39;AIDA-I autotransporter adhesin di Escherichia coli. Abbiamo introdotto le mutazioni in diversi siti in una regione di giunzione del dominio passeggeri, nei pressi del dominio membrana incorporato. Abbiamo osservato che le mutazioni colpite drammaticamente la biogenesi di AIDA-I. Le mutazioni stesse, tuttavia, non hanno interessato la traslocazione di un costrutto chimerico dove il maschio, il maltosio periplasmico Escherichia coli binding protein, sostituito la maggior parte del dominio passeggero di AIDA-I. I nostri risultati sottolineano la funzione di questa regione nella biogenesi di AIDA-io e suggeriscono che esso svolge il suo ruolo di interagire con e/o promuovere pieghevole di domini nativi passeggeri.

Mutazioni che colpiscono la biogenesi dell&#39;AIDA-I autotransporter.

Autotransporters&#x306F;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x3084;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x74B0;&#x5883;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5206;&#x6CCC;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;N&#x672B;&#x7AEF;&#x4E57;&#x5BA2;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x5916;&#x819C;&#x306B;&#x633F;&#x5165;&#x3057;&#x3001;&#x4E57;&#x5BA2;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;C&#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5206;&#x6CCC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x898B;&#x304B;&#x3051;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3055;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306E;&#x305D;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x89E3;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;AIDA-I autotransporter&#x30A2;&#x30C9;&#x30D8;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x306B;&#x57CB;&#x3081;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x4E57;&#x5BA2;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x63A5;&#x5408;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x3092;&#x5C0E;&#x5165;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x5287;&#x7684;&#x306B;AIDA-I&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x3058;&#x5909;&#x7570;&#x304C;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x7537;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x30DA;&#x30EA;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E0;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;AIDA-I&#x306E;&#x4E57;&#x5BA2;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x305F;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;AIDA-I&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304A;&#x3088;&#x3073;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x4E57;&#x5BA2;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4FC3;&#x200B;&#x200B;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

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Autotransporters&#xB294; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xC138;&#xADE0; &#xBD84; &#xBE44; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74; &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xD658;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;. N-&#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC5EC;&#xAC1D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xACFC; &#xC678;&#xBD80; &#xB9C9;&#xC5D0; &#xB123;&#xACE0; &#xC5EC;&#xAC1D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC;&#xD560; &#xC0DD;&#xAC01; &#xD558;&#xB294; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBD84; &#xBE44; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xBA85;&#xBC31;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC21C;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xC804; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC544;&#xC9C1; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC774;&#xD574; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC774; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744;-&#xB0B4;&#xAC00; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; autotransporter adhesin. &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC2B9;&#xAC1D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB3C4;&#xC785; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xC18D;&#xC744; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30;-&#xB098;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xAC19;&#xC740; &#xBCC0;&#xC774; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0; &#xC54A; &#xC558; &#xC5B4; &#xC5B4;&#xB514; &#xB0A8;&#xC131;, &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; periplasmic &#x82BD; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xC2B9;&#xAC1D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xAD50;&#xCCB4; chimeric &#xAD6C;&#xBB38; &#xC804;-&#xB098;. &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xC18D;&#xC5D0;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC15;&#xC870; &#xD558;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;-&#xB09C; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBC0F;/&#xB610;&#xB294; &#xB124;&#xC774;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC2B9;&#xAC1D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC811;&#xB294; &#xD64D;&#xBCF4; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB2F4;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xC18D;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294;-&#xB09C; autotransporter.

Portaveh&#xED;culos son sistemas simples que bacterias Gram-negativas emplear para secretar prote&#xED;nas a sus superficies o en el medio extracelular. Se componen de un dominio N-terminal de pasajeros y un dominio C-terminal que est&#xE1; pensado para insertar en la membrana externa y mediar en la secreci&#xF3;n del dominio de pasajeros. A pesar de la aparente sencillez de estos sistemas de secreci&#xF3;n, su mecanismo de desplazamiento a&#xFA;n no se conoce completamente. Para estudiar este mecanismo, se utiliz&#xF3; el autotransporter adhesina AIDA-I de E. coli. Hemos introducido mutaciones en varios sitios en una regi&#xF3;n de uni&#xF3;n del dominio de pasajeros, cerca de la membrana de dominio embebido. Hemos observado que las mutaciones afectado dram&#xE1;ticamente la biog&#xE9;nesis de AIDA-I. Las mismas mutaciones, sin embargo, no afect&#xF3; a la translocaci&#xF3;n de una construcci&#xF3;n quim&#xE9;rica donde Male, la E. coli peripl&#xE1;smico prote&#xED;na de uni&#xF3;n a maltosa, sustituye la mayor parte del dominio de pasajeros de AIDA-I. Nuestros resultados enfatizan la funci&#xF3;n de esta regi&#xF3;n en la biog&#xE9;nesis de AIDA-I y sugieren que desempe&#xF1;a su papel mediante la interacci&#xF3;n con y / o la promoci&#xF3;n de plegado de los dominios de pasajeros nativos.

Las mutaciones que afectan a la biog&#xE9;nesis de la Portaveh&#xED;culos AIDA-I

&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7C98;&#x9644;&#x7D20;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5F25;&#x6F2B;&#x9075;&#x5B88; &#xFF08;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#xFF09; &#x662F;&#x5728;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5177;&#x4F53; heptosyltransferase &#x7F16;&#x7801;&#x90FD;&#x8D5E;&#x53F9;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4FEE;&#x6539;&#x548C;&#x53C2;&#x4E0E;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x51E0;&#x4E2A;&#x591A;&#x80BD;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x7684; heptoses &#x52A0;&#x6539;&#x6027;&#x8D28;&#x8C31;&#x6CD5;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x548C; N &#x672B;&#x7AEF;&#x6D4B;&#x5E8F;&#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x82CF;&#x6C28;&#x9178;&#x548C;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 15 &#x6B8B;&#x7559;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A;&#x8F74;&#x627F; heptoses&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x8868;&#x660E;&#x4E86;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x662F; O-&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;&#xFF0C;unglycosylated-&#x8868;&#x793A;&#x8F83;&#x5C0F;&#x7684;&#x6570;&#x989D;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x5176;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x70ED;&#x63D0;&#x53D6;&#x540E;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x8FF9;&#x8C61;&#x8868;&#x660E;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;&#xFF0C;unglycosylated-&#x662F;&#x5BF9;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x66F4;&#x52A0;&#x654F;&#x611F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BF1;&#x4F7F;&#x91CD;&#x8981; extracytoplasmic &#x5E94;&#x529B;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5982;&#x524D;&#x9762;&#x6240;&#x793A;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x6CE8;&#x610F;&#x5230;&#xFF0C;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x662F;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x6765;&#x8C03;&#x89E3;&#x4E0E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7C98;&#x9644;&#x6027;&#x4F46;&#x7EAF;&#x51C0;&#x6210;&#x719F;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x70E4;&#x74F7; GST &#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x8981;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x65E0;&#x8BBA;&#x662F;&#x5426;&#x662F;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x9700;&#x8981;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x4FDD;&#x6B63;&#x5E38;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x53EF;&#x80FD;&#x53EA;&#x6709;&#x95F4;&#x63A5;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x53CA;&#x5176;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

&#x94FE;&#x63A5; O &#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x786E;&#x4FDD;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5F25;&#x6F2B;&#x9075;&#x5B88; autotransporter &#x9ECF;&#x9644;&#x7684;&#x6B63;&#x5E38;&#x5F62;&#x6001;&#x3002;

The Escherichia coli adhesin involved in diffuse adherence (AIDA-I) is one of the few glycosylated proteins found in Escherichia coli. Glycosylation is mediated by a specific heptosyltransferase encoded by the aah gene, but little is known about the role of this modification and the mechanism involved. In this study, we identified several peptides of AIDA-I modified by the addition of heptoses by use of mass spectrometry and N-terminal sequencing of proteolytic fragments of AIDA-I. One threonine and 15 serine residues were identified as bearing heptoses, thus demonstrating for the first time that AIDA-I is O-glycosylated. We observed that unglycosylated AIDA-I is expressed in smaller amounts than its glycosylated counterpart and shows extensive signs of degradation upon heat extraction. We also observed that unglycosylated AIDA-I is more sensitive to proteases and induces important extracytoplasmic stress. Lastly, as was previously shown, we noted that glycosylation is required for AIDA-I to mediate adhesion to cultured epithelial cells, but purified mature AIDA-I fused to GST was found to bind in vitro to cells whether or not it was glycosylated. Taken together, our results suggest that glycosylation is required to ensure a normal conformation of AIDA-I and may be only indirectly necessary for its cell-binding function.

O-linked glycosylation ensures the normal conformation of the autotransporter adhesin involved in diffuse adherence.

Le Escherichia coli adh&#xE9;sine impliqu&#xE9;e dans l&#x26;#39;adh&#xE9;rence diffuse (AIDA-I) est l&#x26;#39;un des rares prot&#xE9;ines glycosyl&#xE9;es trouv&#xE9;s dans Escherichia coli. La glycosylation est m&#xE9;di&#xE9;e par une heptosyltransferase sp&#xE9;cifique cod&#xE9;e par le g&#xE8;ne aah, mais peu est connu sur le r&#xF4;le de cette modification et le m&#xE9;canisme impliqu&#xE9;. Dans cette &#xE9;tude, nous avons identifi&#xE9; plusieurs peptides de l&#x26;#39;AIDA-I modifi&#xE9;s par l&#x26;#39;ajout de heptoses par l&#x26;#39;utilisation de la spectrom&#xE9;trie de masse et s&#xE9;quen&#xE7;age N-terminal des fragments prot&#xE9;olytiques de l&#x26;#39;AIDA-I. Un thr&#xE9;onine et 15 r&#xE9;sidus s&#xE9;rine ont &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9;s comme heptoses palier, montrant ainsi pour la premi&#xE8;re fois que AIDA-I est O-glycosyl&#xE9;. Nous avons observ&#xE9; que non glycosyl&#xE9;e AIDA-I est exprim&#xE9; en plus petites quantit&#xE9;s que son homologue glycosyl&#xE9;e et montre des signes de d&#xE9;gradation de vastes sur l&#x26;#39;extraction de chaleur. Nous avons &#xE9;galement observ&#xE9; que non glycosyl&#xE9;e AIDA-I est plus sensible aux prot&#xE9;ases et induit le stress importante extracytoplasmique. Enfin, comme cela a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment, nous avons not&#xE9; que la glycosylation est n&#xE9;cessaire pour AIDA-I de la m&#xE9;diation adh&#xE9;sion &#xE0; des cultures de cellules &#xE9;pith&#xE9;liales, mais purifi&#xE9; maturit&#xE9; AIDA-I fusionn&#xE9;e &#xE0; la GST a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; &#xE0; se lier in vitro &#xE0; des cellules ou non, il a &#xE9;t&#xE9; glycosyl&#xE9;s. Pris dans leur ensemble, nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que la glycosylation est n&#xE9;cessaire pour assurer une conformation normale de l&#x26;#39;AIDA-I et peut &#xEA;tre que de mani&#xE8;re indirecte n&#xE9;cessaire pour sa cellule fonction de liaison.

O-glycosylation Assure la conformation normale de l&#x26;#39;adh&#xE9;sine Autotransporteur impliqu&#xE9;es dans l&#x26;#39;adh&#xE9;rence diffuse

Das Escherichia coli Adhesin beteiligt diffuse Einhaltung (AIDA-ich) ist eines der wenigen glykosylierter Proteine gefunden in Escherichia coli. Glykosylierung wird vermittelt durch eine bestimmte Heptosyltransferase der Aah-Gen codiert, aber wenig ist bekannt &uuml;ber die Rolle der &Auml;nderung und der Mechanismus beteiligt. In dieser Studie identifizierten wir verschiedene Peptide mit AIDA-ich modifiziert durch Zugabe von Heptosen durch Verwendung von Massenspektrometrie und N-terminale Sequenzierung proteolytische Fragmente von AIDA-ich. Ein Threonin und 15 Serin-R&uuml;ckst&auml;nde wurden als Lager Heptosen, damit demonstrieren f&uuml;r das erste Mal, dass AIDA-I ist O-glykosyliert. Wir beobachteten, dass Unglycosylated AIDA-ich dr&uuml;ckt sich in kleineren Mengen als sein Gegenst&uuml;ck mit HbA1c und zeigt umfangreiche Anzeichen einer Verschlechterung bei Hitze-Extraktion. Wir beobachten auch, dass Unglycosylated AIDA-ich ist empfindlicher gegen&uuml;ber Proteasen und wichtige extracytoplasmic Spannung induziert. Schlie&szlig;lich wie zuvor gezeigt wurde, wir haben festgestellt, dass Glycosylation ist erforderlich f&uuml;r die AIDA-ich Haftung auf kultivierten Epithelzellen, vermitteln aber gereinigt Reife AIDA-ich verschmolzen zu GST wurde festgestellt, dass binden an Zellen in vitro ob es glykosyliert war. Zusammen genommen, unsere Ergebnisse legen nahe, dass Glycosylation wird ben&ouml;tigt, um eine normale Konformation von AIDA zu gew&auml;hrleisten-ich und m&uuml;ssen u.u. nur indirekt f&uuml;r seine Zelle-Bindung-Funktion.

O-chromosomale Glycosylation sorgt f&uuml;r die normale Beschaffenheit der Autotransporter Adhesin diffuse Einhaltung beteiligt.

L&#39;Escherichia coli adhesin coinvolti nel diffondere aderenza (AIDA-I) &egrave; una delle poche proteine glicosilate trovate in Escherichia coli. Glicosilazione &egrave; mediata da un heptosyltransferase specifico codificato dal gene aah, ma poco si sa circa il ruolo di questa modifica e il meccanismo coinvolto. In questo studio, abbiamo identificato diversi peptidi di AIDA-modificato con l&#39;aggiunta di heptoses dall&#39;uso di spettrometria di massa e sequenziamento N-terminale di frammenti proteolitici di AIDA-I. 15 Residui di Serina e uno treonina sono stati identificati come cuscinetto heptoses, dimostrando cos&igrave; per la prima volta che AIDA-I &egrave; O-glicosilata. Abbiamo osservato che unglycosylated AIDA-I &egrave; espressa in quantit&agrave; minori rispetto al suo omologo glicosilata e vasto presenti segni di degrado su estrazione di calore. Abbiamo anche osservato che unglycosylated AIDA-I &egrave; pi&ugrave; sensibile alle proteasi e induce stress extracytoplasmic importante. Infine, come &egrave; stato mostrato in precedenza, abbiamo notato che glicosilazione &egrave; richiesta per AIDA-I a mediare l&#39;adesione alle cellule epiteliali in coltura, ma purificato matura AIDA-fuso a GST &egrave; stato trovato da associare in vitro di cellule o meno era glicosilata. Presi insieme, i nostri risultati suggeriscono che glicosilazione &egrave; necessaria per garantire una normale conformazione dell&#39;AIDA-I e pu&ograve; essere solo indirettamente necessarie per la sua funzione cella-associazione.

Glicosilazione O-linked assicura la normale conformazione del autotransporter adhesin coinvolti nell&#39;adesione diffusa.

&#x3073;&#x307E;&#x3093;&#x6027;&#x4ED8;&#x7740;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30A2;&#x30C9;&#x30D8;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;AIDA-I&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7CD6;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;heptosyltransferase&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3068;&#x95A2;&#x4E0E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8CEA;&#x91CF;&#x5206;&#x6790;&#x3068;AIDA-I&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5206;&#x89E3;&#x65AD;&#x7247;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x30B7;&#x30FC;&#x30AF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;heptoses&#x306E;&#x6DFB;&#x52A0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;AIDA-I&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x30B9;&#x30EC;&#x30AA;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;15&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;AIDA-I&#x306F;O-&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x8EF8;&#x53D7;heptoses&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;AIDA&#x306F;&#x3001;-I&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x91CF;&#x3067;&#x8868;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x71B1;&#x62BD;&#x51FA;&#x6642;&#x306E;&#x52A3;&#x5316;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5146;&#x5019;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x975E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;AIDA-I&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x3088;&#x308A;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5916;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x524D;&#x306B;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;AIDA-I&#x306F;&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x63A5;&#x7740;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;GST&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x79C1;&#x306F;&#x3001;AIDA&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x6CE8;&#x610F;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;in vitro&#x3067;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898B;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;AIDA-I&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x7D50;&#x5408;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x9593;&#x63A5;&#x7684;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

O-&#x7D50;&#x5408;&#x578B;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3073;&#x307E;&#x3093;&#x6027;&#x4ED8;&#x7740;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;Autotransporter&#x30A2;&#x30C9;&#x30D8;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4FDD;&#x8A3C;

&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; adhesin &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xD655;&#xC0B0; &#xC900;&#xC218; (&#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-&#xB098;) &#xBA87; &#xB2F9;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC544; &#xC9C4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC815; heptosyltransferase Glycosylation &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC57D;&#xAC04;&#xC774; &#xC218;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC; &#xC2DD;&#xBCC4;-&#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD30C;&#xD3B8;&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790; &#xC5F0;&#xC18D; &#xBC0F; &#xC9C8;&#xB7C9; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; heptoses &#xCD94;&#xAC00; &#xC218;&#xC815;-&#xB098;. &#xD55C; &#xD2B8;&#xB808;&#xC624;&#xB2CC; &#xBC0F; 15 &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; &#xBCA0;&#xC5B4;&#xB9C1; heptoses&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xB41C;, &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xCC98;&#xC74C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xADF8; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-O &#xB2F9;&#xD654;&#xB97C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; unglycosylated &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xB294; &#xAD00;&#xCC30;-&#xB2F9;&#xD654; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC791;&#xC740; &#xAE08;&#xC561;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xC5F4; &#xCD94;&#xCD9C; &#xC2DC; &#xC800;&#xD558; &#xB41C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC774;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xADF8; unglycosylated &#xC544;&#xC774; &#xB2E4; &#xAD00;&#xCC30;-&#xD504;&#xB85C; &#xD14C;&#xC544; &#xC81C;&#xC5D0; &#xB354; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xC774;&#xBA70; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; extracytoplasmic &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xB300;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xC801; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8; glycosylation&#xB294; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;-&#xB09C; &#xBC30;&#xC591;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC811;&#xCC29; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC815;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC219;&#xD55C; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-&#xB97C; &#xC735;&#xD569; GST &#xBC1C;&#xACAC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2F9;&#xD654;&#xB294; &#xC5EC;&#xBD80;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; glycosylation &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xC81C;&#xC548;-&#xB0B4;&#xAC00; &#xC140; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC04;&#xC811;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;&#xB9CC; &#xC788;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

O &#xC5F0;&#xACB0; glycosylation &#xD655;&#xC0B0; &#xBD80;&#xCC29;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; autotransporter adhesin&#xC758; &#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC7A5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La Escherichia coli adhesina implicados en la adhesi&#xF3;n difusa (AIDA-I) es una de las pocas prote&#xED;nas glicosiladas encontrados en E. coli. La glicosilaci&#xF3;n est&#xE1; mediada por una heptosyltransferase espec&#xED;fica codificada por el gen aah, pero poco se sabe sobre el papel de esta modificaci&#xF3;n y el mecanismo involucrado. En este estudio, se identificaron varios p&#xE9;ptidos de AIDA-I modificados por la adici&#xF3;n de heptosas mediante el uso de espectrometr&#xED;a de masas y secuenciaci&#xF3;n N-terminal de los fragmentos proteol&#xED;ticos de AIDA-I. Una treonina y 15 residuos de serina fueron identificados como heptosas cojinete, lo que demuestra por primera vez que AIDA-I es O-glicosilado. Hemos observado que no glicosilada AIDA-I se expresa en cantidades m&#xE1;s peque&#xF1;as que sus contrapartes glicosilada y muestra signos de degradaci&#xF3;n de amplias sobre la extracci&#xF3;n de calor. Tambi&#xE9;n se observ&#xF3; que no glicosilada AIDA-I es m&#xE1;s sensible a las proteasas e induce el estr&#xE9;s extracitopl&#xE1;smico importante. Por &#xFA;ltimo, como se ha mostrado anteriormente, hemos observado que la glicosilaci&#xF3;n se requiere para AIDA-I de la media en la adhesi&#xF3;n a c&#xE9;lulas epiteliales cultivadas, pero purificado madura AIDA-I fusionada a GST se encontr&#xF3; que se unen a las c&#xE9;lulas in vitro o no se glicosiladas. Tomados en conjunto, los resultados sugieren que la glicosilaci&#xF3;n es necesario para asegurar una conformaci&#xF3;n normal de AIDA-I y puede ser s&#xF3;lo indirectamente necesaria para su funci&#xF3;n de enlace de c&#xE9;lulas.

O-glicosilaci&#xF3;n Asegura que la conformaci&#xF3;n normal de la Portaveh&#xED;culos Adhesin Participa en adherencia difusa

&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x70ED;-&#x673A;&#x9876;&#x76D2;&#x662F;&#x4ED4;&#x732A;&#x8179;&#x6CFB;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x673A;&#x9876;&#x76D2;&#x662F;&#x663E;&#x793A;&#x5177;&#x4F53;&#x4E0E;&#x786B;&#x82F7;&#x8102; (3&#39;-sulfogalactosyl-&#x9170;&#x80FA;) &#x76EE;&#x524D;&#x4ED4;&#x732A;&#x7A7A;&#x80A0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;&#x5173;&#x4E8E;&#x673A;&#x9876;&#x76D2;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x786B;&#x82F7;&#x8102;&#x548C;&#x66F4;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x5BF9;&#x8FD9;&#x79CD;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x6291;&#x5236;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x57FA;&#x672C;&#x6570;&#x636E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x8868;&#x9762;&#x7B49;&#x79BB;&#x5B50;&#x4F53;&#x5171;&#x632F;&#x6280;&#x672F;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x786B;&#x82F7;&#x8102;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6; glycoshingolipids &#x4EE5;&#x524D;&#x663E;&#x793A;&#xFF0C;multiplate &#x7ED1;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x540C;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x80A0;&#x6BD2;&#x7D20;&#x4E0E;&#x4EA4;&#x4E92;&#x673A;&#x9876;&#x76D2;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x673A;&#x9876;&#x76D2;-&#x786B;&#x82F7;&#x8102;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x7814;&#x7A76;&#x4F7F;&#x7528;&#x514D;&#x8D39;&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x3001; &#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x786B;&#x9178;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#x548C;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x786B;&#x9178;&#x79F0;&#x4E3A; carragenan &#x7684; galactans&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x673A;&#x9876;&#x76D2;-&#x786B;&#x82F7;&#x8102;&#x4E92;&#x52A8; 2.4+/-0.61 nM &#x7684;&#x89E3;&#x79BB;&#x7684;&#x5E38;&#x6570;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x673A;&#x9876;&#x76D2;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x786B;&#x82F7;&#x8102;&#x4E0E;&#x66F4;&#x5927;&#x7684;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x6BD4;&#x5148;&#x524D;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3002;Lactoceramide &#x548C; glucoceramide &#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x66F4;&#x4F4E;&#x7684;&#x4EB2;&#x7F18;&#x5173;&#x7CFB;&#x3002;&#x673A;&#x9876;&#x76D2;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x786B;&#x82F7;&#x8102;&#x663E;&#x7136;&#x88AB;&#x6291;&#x5236;&#x7684; lambda carragenan &#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x7531;&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x3001; 4 &#x7B49; 4-&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x6216; 6 &#x7B49; 4-&#x534A;&#x4E73;&#x7CD6;&#x3002;&#x673A;&#x9876;&#x76D2;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x5176;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x88AB;&#x5B9E;&#x73B0;&#x4F7F;&#x7528; lambda carragenan picomolar &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7AE5;&#x5DE5; J2 &#x6587;&#x5316;&#x4E0E;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x8BE5; lambda carragenan &#x662F;&#x80FD;&#x591F;&#x6291;&#x5236;&#x673A;&#x9876;&#x76D2;&#x4E0E;&#x5173;&#x8054;&#x7684;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x589E;&#x9AD8;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x3002;

&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x673A;&#x9876;&#x76D2;&#x6BD2;&#x7D20;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x786B;&#x82F7;&#x8102;&#x548C; carragenan &#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Escherichia coli heat-STb is an important cause of diarrhea in piglets. STb was shown to interact specifically with sulfatide (3'-sulfogalactosyl-ceramide) present on the surface of epithelial cells of piglet jejunum. Basic data are lacking on STb binding to sulfatide in solution and more precisely on the possible inhibition of this interaction. Using surface plasmon resonance technology, we compare binding of STb to sulfatide and other glycoshingolipids previously shown, with a multiplate-binding assay, to also interact to various degrees with the enterotoxin. In addition, inhibition of STb-sulfatide binding was studied using free galactose, galactose-sulfate residues and a polymer of sulfated galactans known as carragenan. We determined a dissociation constant of 2.4+/-0.61 nM for the STb-sulfatide interaction. These data indicated that STb was binding to sulfatide with greater affinity than previously determined using radiolabeled toxin. Much lower affinities were observed for lactoceramide and glucoceramide. The binding of STb to sulfatide was clearly inhibited by lambda-carragenan but not by galactose, 4-SO(4)-galactose or 6-SO(4)-galactose. Inhibition of STb binding to its receptor was achieved using lambda-carragenan at picomolar concentrations. Then, using IPEC-J2 cells in culture and flow cytometry, we showed that lambda-carragenan was able to inhibit the permeabilization process associated with STb.

Escherichia coli STb toxin binding to sulfatide and its inhibition by carragenan.

Escherichia coli chaleur STB est une cause importante de diarrh&#xE9;e chez les porcelets. STb &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; &#xE0; interagir sp&#xE9;cifiquement avec sulfatide (3&#x26;#39;-sulfogalactosyl-c&#xE9;ramide) pr&#xE9;sente sur la surface des cellules &#xE9;pith&#xE9;liales de porcelets j&#xE9;junum. Les donn&#xE9;es de base font d&#xE9;faut sur STb se lier &#xE0; sulfatide en solution et plus pr&#xE9;cis&#xE9;ment sur l&#x26;#39;inhibition de cette interaction possible. Utilisation de r&#xE9;sonance plasmonique de surface de la technologie, nous comparons la liaison de STB &#xE0; glycoshingolipids sulfatides et d&#x26;#39;autres pr&#xE9;sent&#xE9;s auparavant, avec un dosage Multidisque contraignant, &#xE9;galement interagir &#xE0; des degr&#xE9;s divers avec l&#x26;#39;ent&#xE9;rotoxine. En outre, l&#x26;#39;inhibition de la STb-sulfatide liaison a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;aide du galactose libre, le galactose-sulfate et d&#x26;#39;un polym&#xE8;re de r&#xE9;sidus de galactanes sulfat&#xE9;s dits carragh&#xE9;nane. On d&#xE9;termine une constante de dissociation de 2,4 &#xB1; -0,61 nM pour l&#x26;#39;interaction STb-sulfatide. Ces donn&#xE9;es indiquent que STb &#xE9;tait contraignant pour sulfatide avec une plus grande affinit&#xE9; que pr&#xE9;c&#xE9;demment d&#xE9;termin&#xE9; en utilisant la toxine radiomarqu&#xE9;. Affinit&#xE9;s beaucoup plus faibles ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s pour lactoceramide et glucoceramide. La liaison de d&#xE9;codeur &#xE0; sulfatide est clairement inhib&#xE9;e par la lambda-carragh&#xE9;nane, mais pas par le galactose, le 4-SO (4) et du galactose ou 6-SO (4) et du galactose. L&#x26;#39;inhibition de la STb liant &#xE0; son r&#xE9;cepteur a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;e en utilisant la lambda-carragh&#xE9;nane &#xE0; des concentrations picomolaires. Puis, en utilisant l&#x26;#39;IPEC-J2 cellules en culture et cytom&#xE9;trie de flux, nous avons montr&#xE9; que la lambda-carragh&#xE9;nane est capable d&#x26;#39;inhiber le processus de perm&#xE9;abilisation associ&#xE9;e &#xE0; STb.

Toxine Escherichia Coli STb Liaison &#xE0; sulfatide et son inhibition par carragh&#xE9;nane

Escherichia coli Hitze-STb ist eine wichtige Ursache f&uuml;r Durchfall bei Ferkeln. STb zeigte sich speziell mit Sulfatide (3&#39;-Sulfogalactosyl-Ceramide) auf der Oberfl&auml;che der Epithelzellen der Ferkel Jejunum interagieren. Grunddaten fehlen auf STb Bindung an Sulfatide in L&ouml;sung und genauer auf die m&ouml;gliche Hemmung dieser Interaktion. Mit Oberfl&auml;chen Plasmon-Resonanz-Technologie, vergleichen wir die Bindung des STb Sulfatide und andere Glycoshingolipids zuvor gezeigt, mit einer Probe Multiplate-Bindung auch in unterschiedlichem Ma&szlig;e mit der Enterotoxin interagieren. Dar&uuml;ber hinaus wurde Hemmung der STb-Sulfatide Bindung mit freie Galaktose, Galaktose-Sulfat-R&uuml;ckst&auml;nde und ein Polymer der sulfatierte Galactans bekannt als Carragenan untersucht. Wir entschlossen eine Dissoziationskonstante 2.4+/-0.61 nm f&uuml;r die STb-Sulfatide Interaktion. Diese Daten zeigten, dass STb Sulfatide mit gr&ouml;&szlig;erer Affinit&auml;t als zuvor ermittelt radioaktive Toxin gebunden war. Viel niedrigeren Affinit&auml;ten wurden f&uuml;r Lactoceramide und Glucoceramide beobachtet. Die Bindung des STb Sulfatide wurde eindeutig von Lambda-Carragenan aber nicht von Galaktose, 4-SO 4-Galaktose oder 6-SO 4-Galaktose gehemmt. Hemmung der STb-Bindung an seinen Rezeptor wurde mithilfe von Lambda-Carragenan pikolomaren Konzentrationen erreicht. Damals zeigten mit IPEC-J2 Zellen in Kultur und Flow Cytometry, wir, dass die Lambda-Carragenan Permeabilization Prozesses, der mit STb hemmen konnte.

Escherichia coli STb Toxin Bindung Sulfatide und seine Hemmung durch Carragenan.

Escherichia coli calore-STb &egrave; un&#39;importante causa di diarrea nei suinetti. STb ha dimostrato di interagire specificatamente con solfatidi (3&#39;--sulfogalactosyl ceramide) presenti sulla superficie delle cellule epiteliali di Pimpi digiuno. Dati di base sono carenti su Associazione STb a sulfatidi nella soluzione e pi&ugrave; precisamente sull&#39;inibizione di questa interazione. Utilizzando la tecnologia di risonanza plasmonica di superficie, confrontiamo il grippaggio dei STb per solfatidi e altri glycoshingolipids precedentemente dimostrato, con un dosaggio multidisco-associazione, anche interagire a vari livelli con l&#39;enterotossina. Inoltre, inibizione di STb-solfatidi associazione &egrave; stata studiata utilizzando galattosio libero, residui di galattosio-solfato e un polimero di solfato galactans noto come carragenan. Abbiamo determinato una costante di dissociazione di 2.4+/-0.61 nM per l&#39;interazione di STb-sulfatidi. Questi dati hanno indicato che STb era vincolante per solfatidi con maggiore affinit&agrave; quanto stabilito in precedenza utilizzando tossina radioattivo. Molto bassa affinit&agrave; sono stati osservati per lactoceramide e glucoceramide. L&#39;associazione di STb solfatidi chiaramente era inibito da lambda-carragenan ma non da galattosio, 4-SO (4) - galattosio o 6-SO (4) - galattosio. L&#39;inibizione del legame STb al suo recettore &egrave; stato raggiunto utilizzando lambda-carragenan a concentrazioni picomolar. Quindi, utilizzando cellule IPEC-J2 in citometria a flusso e cultura, abbiamo mostrato che lambda-carragenan &egrave; stato in grado di inibire il processo permeabilization associato STb.

Escherichia coli STb tossina associazione a sulfatidi e sua inibizione da carragenan.

&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x71B1;STB&#x306F;&#x3001;&#x5B50;&#x8C5A;&#x306E;&#x4E0B;&#x75E2;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; STB&#x306F;&#x3001;&#x5B50;&#x8C5A;&#x5C0F;&#x8178;&#x306E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x4E0A;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30C9;&#xFF08;3&#x26;#39;-sulfogalactosyl-&#x30BB;&#x30E9;&#x30DF;&#x30C9;&#xFF09;&#x3068;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x57FA;&#x672C;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x6EB6;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x3067;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x6291;&#x5236;&#x306B;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;STB&#x306B;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8868;&#x9762;&#x30D7;&#x30E9;&#x30BA;&#x30E2;&#x30F3;&#x5171;&#x9CF4;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C6;&#x30ED;&#x30C8;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x5EA6;&#x306B;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x524D;&#x8FF0;&#x306E;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30C9;&#x3084;&#x4ED6;&#x306E;glycoshingolipids&#x306B;STB&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;STB-&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x7121;&#x6599;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9; - &#x786B;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA;&#x3068;carragenan&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x786B;&#x9178;&#x5316;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;STB-&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;2.4 + / -0.61 nM&#x306E;&#x89E3;&#x96E2;&#x5B9A;&#x6570;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;STB&#x304C;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x6A19;&#x8B58;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3067;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30C9;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306F;&#x3001;lactoceramide&#x3068;glucoceramide&#x304C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;STB&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x30E9;&#x30E0;&#x30C0;carragenan&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x3001;4-SO&#xFF08;4&#xFF09; - &#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x307E;&#x305F;&#x306F;6-SO&#xFF08;4&#xFF09; - &#x30AC;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;STB&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x306F;&#x3001;&#x30D4;&#x30B3;&#x30E2;&#x30EB;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3067;&#x30E9;&#x30E0;&#x30C0;carragenan&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x6587;&#x5316;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3067;IPEC-J2&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30E9;&#x30E0;&#x30C0;carragenan&#x304C;STB&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x900F;&#x904E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;STB&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C1;&#x30C9;&#x3078;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x6BD2;&#x7D20;&#x3068;Carragenan&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x6291;&#x5236;

&#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC5F4; STb piglets&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xC0AC;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC6D0;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. STb sulfatide &#xC138; &#xB77C;&#xB9C8; (3&#39;-sulfogalactosyl-&#xC774;&#xB4DC;) &#xB3FC;&#xC9C0; jejunum&#xC758; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xBCF8; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; STb &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC194;&#xB8E8;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; sulfatide &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB354; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C;. &#xD45C;&#xBA74; &#xD50C;&#xB77C;&#xC2A4;&#xBAAC; &#xACF5;&#xBA85; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; sulfatide &#xBC0F; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, &#xD568;&#xAED8; &#xD45C;&#xC2DC; multiplate &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xB610;&#xD55C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD559;&#xC704;&#xB97C; enterotoxin&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; glycoshingolipids Stb&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBE44;&#xAD50;. &#xB610;&#xD55C;, STb sulfatide &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC758; &#xC800;&#xD574; &#xBB34;&#xB8CC; galactose, galactose &#xD669;&#xC0B0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C; sulfated galactans carragenan&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xC758; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2F1;&#xAC00;&#xD3EC;&#xB974; &#xAD00;&#xAD11;&#xCCAD;-sulfatide &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 2.4+/-0.61 Nm&#xC758; &#xBD84;&#xB9AC; &#xC0C1;&#xC218; &#xACB0;&#xC815;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD45C;&#xC2DC; STb sulfatide &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBC29;&#xC0AC;&#xC120;&#xB41C; &#xB3C5; &#xC18C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD070; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD6E8;&#xC52C; &#xB0AE;&#xC740; affinities lactoceramide &#xBC0F; glucoceramide&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4;. Galactose, 4 &#xB4F1; (4)-galactose &#xB610;&#xB294; 6 &#xB4F1; (4)-galactose &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB78C;&#xB2E4; carragenan&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; sulfatide Stb&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xD588;&#xB2E4;. STb &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC800;&#xD574; &#xB78C;&#xB2E4; carragenan&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; picomolar &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD574;&#xB2F9; &#xB78C;&#xB2E4; carragenan Stb&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; permeabilization &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC788;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xC0B4;&#xD3B4;&#xBCF8; &#xBB38;&#xD654;&#xC640; &#xD750;&#xB984; cytometry IPEC J2 &#xC140;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;.

&#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; STb &#xB3C5; &#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; sulfatide&#xC640; carragenan&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8; &#xC5B5;&#xC81C;.

Escherichia coli STb calor es una causa importante de diarrea en los lechones. STb fue demostrado que interact&#xFA;an espec&#xED;ficamente con sulfatado (3&#x26;#39;-sulfogalactosyl-ceramida) presente en la superficie de las c&#xE9;lulas epiteliales de los lechones yeyuno. Datos b&#xE1;sicos carecen de la uni&#xF3;n a STb sulfatado presente en la soluci&#xF3;n y m&#xE1;s precisamente sobre la posible inhibici&#xF3;n de esta interacci&#xF3;n. Uso de tecnolog&#xED;a de resonancia de plasmones de superficie, se compara la uni&#xF3;n de receptor a glycoshingolipids sulfatado y otros anteriormente se&#xF1;aladas, con un ensayo multidisco vinculante, para interactuar tambi&#xE9;n en diversos grados con la enterotoxina. Adem&#xE1;s, la inhibici&#xF3;n de STB-sulfatado uni&#xF3;n se estudi&#xF3; con galactosa libre, los residuos de galactosa-sulfato y un pol&#xED;mero de galactanos sulfatados conocidos como carragenano. Se determin&#xF3; una constante de disociaci&#xF3;n de 2,4 &#xB1; -0,61 nM para la interacci&#xF3;n STB-sulfatado. Estos datos indicaron que era STb uni&#xF3;n a sulfatado con mayor afinidad que previamente determinada utilizando la toxina radiomarcada. Afinidades mucho m&#xE1;s bajos se observaron en lactoceramide y glucoceramide. La uni&#xF3;n de STB para sulfatado fue claramente inhibida por lambda-carragenano, pero no por galactosa, 4-SO (4)-galactosa o 6-SO (4)-galactosa. La inhibici&#xF3;n de la STb uni&#xF3;n a su receptor se logr&#xF3; utilizando lambda-carragenano en concentraciones picomolares. Luego, con el IPEC-J2 c&#xE9;lulas en cultivo y citometr&#xED;a de flujo, se demostr&#xF3; que lambda-carragenano fue capaz de inhibir el proceso de permeabilizaci&#xF3;n asociado con STB.

Escherichia coli toxina STb enlaces a sulfatado y su inhibici&#xF3;n por carragenina

&#x7C98;&#x9644;&#x7D20;&#x53C2;&#x4E0E;&#x5F25;&#x6F2B;&#x9075;&#x5B88; &#xFF08;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#xFF09; &#x662F;&#x5728;&#x4EBA;&#x548C;&#x732A;&#x5F15;&#x8D77;&#x8179;&#x6CFB;&#x7684;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x83CC;&#x682A;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230; autotransporter&#x3002;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x7531;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x9176;&#xFF0C;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x76F8;&#x5173; heptosyltransferase (&#x554A;) &#x7CD6;&#x5316;&#x3002;&#x90FD;&#x8D5E;&#x53F9;&#x57FA;&#x56E0;&#x662F;&#x7ACB;&#x5373;&#x4E0A;&#x6E38;&#x7684; aidA &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5B83;&#x4EEC;&#x5F62;&#x6210;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x90FD;&#x8D5E;&#x53F9;&#x548C; aidA &#x57FA;&#x56E0;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x9694;&#x79BB;&#x8868;&#x793A;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5047;&#x5B9A;&#x5BA3;&#x4F20;&#x5458; 149 &#x548C; 128 &#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x4E0A;&#x6E38;&#x7684;&#x554A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; qRT PCR&#xFF0C;&#x89C2;&#x5BDF;&#x90FD;&#x8D5E;&#x53F9;&#x548C; aidA &#x8F6C;&#x5F55;&#x589E;&#x957F;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x5728;&#x5E73;&#x7A33;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x5F00;&#x59CB;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x8FBE;&#x9075;&#x5FAA;&#x540C;&#x4E00;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x62A5;&#x544A;&#x57FA;&#x56E0;&#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x9694;&#x79BB;&#x7684;&#x554A;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x8C03;&#x8282;&#x5339;&#x914D;&#x6B64;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x8868;&#x8FBE;&#x6A21;&#x5F0F;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x8461;&#x8404;&#x7CD6;&#x662F;&#x963B;&#x904F;&#x7269;&#x548C;&#x517B;&#x5206;&#x7684;&#x9965;&#x997F;&#x4F1A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5242;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x5E94;&#x53D8;&#x548C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5B66;&#x4E60;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x90FD;&#x8D5E;&#x53F9;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x8F6C;&#x5F55;&#x4E3A;&#x987A;&#x6D88;&#x606F;&#x4ECE;&#x4E0A;&#x6E38;&#x90FD;&#x8D5E;&#x53F9;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x7B49;&#x517B;&#x5206;&#x9650;&#x5236;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x7684;&#x63A8;&#x52A8;&#x8005;&#x3002;

&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x589E;&#x957F;&#x7684;&#x9636;&#x6BB5;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x7CD6;&#x5316; autotransporter &#x9ECF;&#x9644; AIDA &#x7684;&#x64CD;&#x7EB5;&#x5B50;&#x7F16;&#x7801;-&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x6211;&#x3002;

The adhesin involved in diffuse adherence (AIDA-I) is an autotransporter found in pathogenic strains of Escherichia coli causing diarrhea in humans and pigs. The AIDA-I protein is glycosylated by a specific enzyme, the AIDA-associated heptosyltransferase (Aah). The aah gene is immediately upstream of the aidA gene, suggesting that they form an operon. However, the mechanisms of regulation of the aah and aidA genes are unknown. Using a clinical E. coli isolate expressing AIDA-I, we identified two putative promoters 149 and 128 nucleotides upstream of aah. Using qRT-PCR, we observed that aah and aidA are transcribed in a growth-dependent fashion, mainly at the start of the stationary phase. Western blotting confirmed that protein expression follows the same pattern. Using a fusion to a reporter gene, we observed that the regulation of the isolated aah promoter matched this transcription and expression pattern. Lastly, we found glucose to be a repressor and nutrient starvation to be an inducer. Taken together, our results suggest that, in the strain and the conditions we studied, aah-aidA is transcribed as a bicistronic message from a promoter upstream of aah, with maximal expression under conditions of nutrient limitation such as high cell density.

Growth-phase-dependent expression of the operon coding for the glycosylated autotransporter adhesin AIDA-I of pathogenic Escherichia coli.

Le adh&#xE9;sine impliqu&#xE9;e dans l&#x26;#39;adh&#xE9;rence diffuse (AIDA-I) est un autotransporteur trouv&#xE9; dans des souches pathog&#xE8;nes de Escherichia coli qui causent la diarrh&#xE9;e chez les humains et les porcs. La prot&#xE9;ine AIDA-I est glycosyl&#xE9; par une enzyme sp&#xE9;cifique, la heptosyltransferase AIDA-associ&#xE9; (Aah). Le g&#xE8;ne aah est imm&#xE9;diatement en amont du g&#xE8;ne aida, indiquant qu&#x26;#39;ils forment un op&#xE9;ron. Cependant, les m&#xE9;canismes de r&#xE9;gulation de l&#x26;#39;aah et les g&#xE8;nes aida sont inconnus. L&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;un coli cliniques E. isolat exprimant AIDA-I, nous avons identifi&#xE9; deux promoteurs putatifs 149 et 128 nucl&#xE9;otides en amont de l&#x26;#39;AAH. Utilisation de qRT-PCR, nous avons observ&#xE9; que aah et Aida sont transcrits dans un mode de croissance &#xE0; charge, surtout au d&#xE9;but de la phase stationnaire. Western blot a confirm&#xE9; que l&#x26;#39;expression des prot&#xE9;ines suit le m&#xEA;me sch&#xE9;ma. En utilisant une fusion &#xE0; un g&#xE8;ne rapporteur, nous avons observ&#xE9; que la r&#xE9;glementation de l&#x26;#39;aah isol&#xE9; promoteur adapt&#xE9; ce mod&#xE8;le de transcription et d&#x26;#39;expression. Enfin, nous avons trouv&#xE9; le glucose d&#x26;#39;&#xEA;tre une famine r&#xE9;presseur et d&#x26;#39;&#xE9;l&#xE9;ments nutritifs pour &#xEA;tre un inducteur. Pris dans leur ensemble, nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que, dans la souche et les conditions que nous avons &#xE9;tudi&#xE9;s, aah-AIDA est transcrit sous forme de message bicistronique &#xE0; partir d&#x26;#39;un promoteur en amont de l&#x26;#39;AAH, avec une expression maximale dans des conditions de limitation en nutriments tels que la densit&#xE9; cellulaire &#xE9;lev&#xE9;e.

Croissance-d&#xE9;pendant de la phase d&#x26;#39;expression de l&#x26;#39;op&#xE9;ron codant pour les Coli glyqu&#xE9;e Autotransporteur coli adh&#xE9;sine AIDA-I de pathog&#xE8;ne

Die Adhesin beteiligt diffuse Einhaltung (AIDA-ich) ist ein Autotransporter in pathogene St&auml;mme von Escherichia coli verursacht Durchfall bei Menschen und Schweinen gefunden. Die AIDA-ich Protein ist glykosyliert durch ein bestimmtes Enzym, die AIDA-assoziierte Heptosyltransferase (Aah). Das Aah-gen ist unmittelbar oberhalb der AidA-gen, was darauf hindeutet, dass sie ein Operon bilden. Die Mechanismen der Verordnung der Aah und AidA Gene sind jedoch unbekannt. Mit einer klinischen E. Coli isolieren auszudr&uuml;cken AIDA-ich, wir zwei vermeintliche Promotoren 149 und 128 Nukleotide stromaufw&auml;rts von Aah identifiziert. Mit qRT-PCR, beobachteten wir, dass Aah und AidA auf Wachstum-abh&auml;ngigen Weise, vor allem zu Beginn der station&auml;ren Phase transkribiert werden. Westliches Beflecken, best&auml;tigt, dass die Proteinexpression folgt das gleiche Muster. Mit eine Fusion zu einem Reporter-gen, beobachteten wir, dass die Verordnung des Projekttr&auml;gers isoliert Aah diese Transkription und Ausdruck Muster verglichen. Schlie&szlig;lich fanden wir Glucose zu einem Verdr&auml;nger und nahrhafte Hunger ein Induktor sein werden. Zusammengenommen empfehlen unsere Ergebnisse, die Belastung und die Bedingungen, die wir untersucht, Aah-AidA als eine Bicistronic Nachricht von F&ouml;rderer stromaufw&auml;rts von Aah, mit maximaler Ausdruck unter Bedingungen der N&auml;hrstoff Einschr&auml;nkung wie hohe Zelldichte transkribiert wird.

Wachstum-Phase-abh&auml;ngigen Ausdruck der Operon-Kodierung f&uuml;r die HbA1c Autotransporter Adhesin AIDA-ich pathogene Escherichia coli.

Il adhesin coinvolto nell&#39;adesione diffusa (AIDA-I) &egrave; un autotransporter trovato in ceppi patogeni di Escherichia coli che causano diarrea negli esseri umani e suini. L&#39;AIDA-I della proteina &egrave; glicosilata da un enzima specifico, l&#39;AIDA-associated heptosyltransferase (Aah). Il gene aah &egrave; immediatamente a monte del gene aidA, suggerendo che formano un operone. Tuttavia, i meccanismi di regolazione dei geni aah e aidA sono sconosciuti. Utilizzando un clinico e. coli isolare AIDA che esprimono-, abbiamo identificato due nucleotidi putativo promotori 149 e 128 a monte dell&#39;aah. Tramite qRT-PCR, abbiamo osservato che aah e aidA sono trascritti in maniera dipendente dalla crescita, soprattutto all&#39;inizio della fase stazionaria. Macchiarsi occidentale ha confermato che l&#39;espressione della proteina segue lo stesso modello. Utilizzando una fusione di un gene reporter, abbiamo osservato che il regolamento del promotore aah isolato ha trovato questo pattern di espressione e la trascrizione. Infine, abbiamo trovato il glucosio per essere un repressore e la fame dei nutrienti per essere un induttore. Presi insieme, i nostri risultati suggeriscono che il ceppo e le condizioni che abbiamo studiato, aah-aidA &egrave; trascritto come un messaggio di bicistronic da un promotore a Monte di aah, con massima espressione in condizioni di limitazione dei nutrienti quali cell ad alta densit&agrave;.

Crescita-fase-dependent espressione dell&#39;operone codifica per la glicosilata autotransporter adhesin AIDA-I di Escherichia coli patogeni.

&#x3073;&#x307E;&#x3093;&#x6027;&#x4ED8;&#x7740;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30A2;&#x30C9;&#x30D8;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;AIDA-I&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x3084;&#x8C5A;&#x306E;&#x4E0B;&#x75E2;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x682A;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;autotransporter&#x3067;&#x3059;&#x3002; AIDA-I&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;AIDA&#x95A2;&#x9023;heptosyltransferase&#xFF08;AAH&#xFF09;&#x3067;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C3;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;AIDA&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3059;&#x3050;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C3;&#x3068;AIDA&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; AIDA-I&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x81E8;&#x5E8A;&#x8A66;&#x9A13;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3092;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;2&#x3064;&#x200B;&#x200B;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;149&#x30A2;&#x30FC;&#x30C3;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;128&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5B9A;&#x91CF;RT-PCR&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C3;&#x3068;AIDA&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x9759;&#x6B62;&#x671F;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x5F62;&#x3067;&#x8EE2;&#x5199;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A6;&#x30A7;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x540C;&#x3058;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x5F93;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5B64;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C3;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x5236;&#x5FA1;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x767A;&#x73FE;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B5;&#x30FC;&#x306A;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x6804;&#x990A;&#x98E2;&#x9913;&#x306A;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x7D30;&#x80DE;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6804;&#x990A;&#x5236;&#x9650;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x6700;&#x5927;&#x9650;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x3067;&#x3001;&#x3072;&#x305A;&#x307F;&#x3068;&#x6211;&#x3005;&#x304C;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x3001;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C3;&#x3001;&#x30A2;&#x30A4;&#x30FC;&#x30C0;&#x306F;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C3;&#x306E;&#x4E0A;&#x6D41;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x6027;&#x30E1;&#x30C3;&#x30BB;&#x30FC;&#x30B8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;Autotransporter&#x30A2;&#x30C9;&#x30D8;&#x30B7;&#x30F3;AIDA-I&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x30AA;&#x30DA;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x6BB5;&#x968E;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x767A;&#x73FE;

&#xD655;&#xC0B0; &#xBD80;&#xCC29;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; adhesin (&#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-&#xB098;)&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xB3FC;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xC885;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD55C; autotransporter. &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-&#xB098;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; heptosyltransferase (&#xC544;) &#xD2B9;&#xC815; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2F9;&#xD654;. &#xC544; &#xC9C4;&#xC774; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xD615;&#xC131; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC989;&#xC2DC; &#xC5C5;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9BC;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC544;&#xC640; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC784;&#xC0C1; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACA9;&#xB9AC; &#xD45C;&#xD604; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-&#xB098;&#xB294;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC544;&#xC758; &#xB450; &#xC0C1; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; 149&#xC640; 128 &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xC0C1;&#xB958; &#xC2DD;&#xBCC4;. QRT PCR&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC544;&#xC640; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4; &#xACE0;&#xC815; &#xB41C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xC2DC;&#xC791;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC131;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD558;&#xAC8C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC11C;&#xC591; blotting &#xD655;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD45C;&#xC815; &#xAC19;&#xC740; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xB530;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9AC;&#xD3EC;&#xD130; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC735;&#xD569;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xC544; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC774; &#xC804;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xC2DD; &#xD328;&#xD134; &#xC77C;&#xCE58; &#xAD00;&#xCC30;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xB2F9; &#xC9C4;&#xC555; &#xBC0F; &#xC601;&#xC591; &#xAE30;&#xC544;&#xB294; &#xC720;&#xB3C4; &#xB420; &#xC218; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;, &#xAE34;&#xC7A5;&#xACFC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;-&#xC544;&#xC774; &#xB2E4; &#xC544;, &#xB192;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC00;&#xB3C4; &#xB4F1; &#xC601;&#xC591;&#xC18C; &#xC81C;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xC2DD;&#xC758; &#xC0C1;&#xB958; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; bicistronic &#xBA54;&#xC2DC;&#xC9C0;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC0AC;&#xD560;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC624; &#xD398;&#xB860; &#xB2F9;&#xD654; autotransporter adhesin &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCF54;&#xB529;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC885;&#xC18D; &#xC2DD;-&#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xB09C;.

La adhesina involucrados en la adherencia difusa (AIDA-I) es un autotransporter encuentra en las cepas pat&#xF3;genas de E. coli que causan diarrea en humanos y cerdos. La prote&#xED;na AIDA-I est&#xE1; glicosilada por una enzima espec&#xED;fica, la heptosyltransferase AIDA-asociado (aah). El gen aah es inmediatamente aguas arriba del gen aida, lo que sugiere que forman un oper&#xF3;n. Sin embargo, los mecanismos de regulaci&#xF3;n de la AAH y de los genes de aida son desconocidos. El uso de un cl&#xED;nicos de E. coli cepa expresar AIDA-I, se identificaron dos supuestos promotores 149 y 128 nucle&#xF3;tidos aguas arriba de la AAH. Usando QRT-PCR, se observ&#xF3; que aah y Aida se transcriben en una forma dependiente de crecimiento, principalmente en el comienzo de la fase estacionaria. Western Blot confirm&#xF3; que la expresi&#xF3;n de prote&#xED;nas sigue el mismo patr&#xF3;n. Usando una fusi&#xF3;n de un gen reportero, se observ&#xF3; que la regulaci&#xF3;n del promotor aislado aah coincidi&#xF3; con este patr&#xF3;n de transcripci&#xF3;n y expresi&#xF3;n. Por &#xFA;ltimo, hemos encontrado glucosa a ser una inanici&#xF3;n represor y nutrientes a ser un inductor. En conjunto, nuestros resultados sugieren que, en la cepa y las condiciones que hemos estudiado, aah-AIDA se transcribe como un mensaje bicistr&#xF3;nico partir de un promotor aguas arriba de la AAH, con la m&#xE1;xima expresi&#xF3;n bajo condiciones de limitaci&#xF3;n de nutrientes, tales como alta densidad celular.

El crecimiento de la fase dependiente de la expresi&#xF3;n del oper&#xF3;n que codifica para los glucosilada Portaveh&#xED;culos adhesina AIDA-I de Escherichia coli pat&#xF3;gena

&#x5F25;&#x6F2B;&#x6027;&#x9075;&#x5B88;&#x53C2;&#x4E0E;&#x9ECF;&#x9644;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; (&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x6211;&#xFF09; &#x662F;&#x4E00;&#x79CD;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5C5E;&#x4E8E;&#x5355;&#x4F53; autotransporters &#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x3002;&#x6B64;&#x7C98;&#x9644;&#x7D20;&#x53EF;&#x4EE5;&#x7CD6;&#x5316;&#x7684;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x76F8;&#x5173; heptosyltransferase (&#x554A;)&#x3002;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x9650;&#x4E8E;&#x80DE;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B;-&#x4E00;&#x3001; &#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x7F8E;&#x8FBE;&#x6210;&#x5171;&#x8BC6; 19-&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x548C;&#x9884;&#x8BA1;&#x5C06;&#x5F62;&#x6210; &beta;-&#x87BA;&#x65CB;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9634;&#x6027;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x67B8;&#x6A7C;&#x9178; rodentium &#x53D1;&#x73B0;&#x90FD;&#x8D5E;&#x53F9;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86;&#x963F;&#x4F9D;&#x8FBE; &#x300B; &#x6837;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7269;&#x79CD;&#x90FD;&#x8D5E;&#x53F9;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x7684;&#x7CD6;&#x5316;&#x3002;&#x7136;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x5E95;&#x7269;&#x8BC6;&#x522B;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x90FD;&#x8D5E;&#x53F9; heptosyltransferase&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x5BF9;&#x5E94;&#x4E8E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x590D;&#x5171;&#x8BC6; &#x300B; 19-&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x8BC6;&#x522B;&#x548C;&#x7CD6;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x554A;&#x3002;&#x8BF1;&#x53D8;&#x80B2;&#x79CD;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x90FD;&#x8D5E;&#x53F9;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x5178;&#x578B;&#x7684; &beta;-&#x87BA;&#x65CB;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5E8F;&#x5217;&#x7ED3;&#x6784;&#x6BCD;&#x9898;&#x3002;&#x540C;&#x610F;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x80DE;&#x6CE2;&#x6C0F;&#x6746;&#x83CC;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3; pertactin&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5171;&#x8BC6; 19-&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x5E8F;&#x5217;&#xFF0C;&beta; &#x87BA;&#x65CB;&#x591A;&#x80BD;&#x53EF;&#x7CD6;&#x5316;&#x7684;&#x554A;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x90FD;&#x8D5E;&#x53F9;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x65B0;&#x7684;&#x5927;&#x5BB6;&#x5EAD;&#xFF0C;&#x4FEE;&#x6539;&#x627F;&#x8BA4;&#x901A;&#x8FC7;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x7684;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D; O-&#x7CD6;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x7684;&#x539F;&#x578B;&#x3002;

&#x4E00;&#x65CF;&#x65B0;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; O-&#x7CD6;&#x57FA;&#x8F6C;&#x79FB;&#x9176;&#x7684;&#x8BC6;&#x522B;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6BCD;&#x9898;&#x3002;

The Escherichia coli Adhesin Involved in Diffuse Adherence (AIDA-I) is a multifunctional protein that belongs to the family of monomeric autotransporters. This adhesin can be glycosylated by the AIDA-associated heptosyltransferase (Aah). Glycosylation appears to be restricted to the extracellular domain of AIDA-I, which comprises imperfect repeats of a 19-amino-acid consensus sequence and is predicted to form a Î²-helix. Here, we show that Aah homologues can be found in many Gram-negative bacteria, including Citrobacter rodentium. We demonstrated that an AIDA-like protein is glycosylated in this species by the Aah homologue. We then investigated the substrate recognition mechanism of the E.â€ƒcoli Aah heptosyltransferase. We found that a peptide corresponding to one repeat of the 19-amino-acid consensus is sufficient for recognition and glycosylation by Aah. Mutagenesis studies suggested that, unexpectedly, Aah recognizes a structural motif typical of Î²-helices, but not a specific sequence. In agreement with this finding, we observed that the extracellular domain of the Bordetella pertussis pertactin, a Î²-helical polypeptide lacking the 19-amino-acid consensus sequence, could be glycosylated by Aah. Overall, our findings suggest that Aah represents the prototype of a new large family of bacterial protein O-glycosyltransferases that modify various substrates recognized through a structural motif.

A structural motif is the recognition site for a new family of bacterial protein O-glycosyltransferases.

Le Escherichia coli Adhesin impliqu&#xE9;es dans l&#x26;#39;adh&#xE9;rence diffuse (AIDA-I) est une prot&#xE9;ine multifonctionnelle qui appartient &#xE0; la famille de Autotransporteurs monom&#xE8;res. Cette adh&#xE9;sine peut &#xEA;tre glycosyl&#xE9; par l&#x26;#39;AIDA heptosyltransferase-associ&#xE9; (Aah). La glycosylation semble &#xEA;tre limit&#xE9;e au domaine extracellulaire de l&#x26;#39;AIDA-I, qui comprend r&#xE9;p&#xE9;titions imparfaites d&#x26;#39;une s&#xE9;quence consensus de 19 acides amin&#xE9;s et est pr&#xE9;vu pour former une &#x3B2;-h&#xE9;lice. Ici, nous montrons que Aah homologues peuvent &#xEA;tre trouv&#xE9;s dans de nombreuses bact&#xE9;ries Gram-n&#xE9;gatives, y compris rodentium Citrobacter. Nous avons d&#xE9;montr&#xE9; qu&#x26;#39;une prot&#xE9;ine AIDA-like est glycosyl&#xE9;e chez cette esp&#xE8;ce par l&#x26;#39;homologue Aah. Nous avons ensuite &#xE9;tudi&#xE9; le m&#xE9;canisme de la reconnaissance du substrat de la bact&#xE9;rie E. coli Aah heptosyltransferase. On a constat&#xE9; que un peptide correspondant &#xE0; l&#x26;#39;une r&#xE9;p&#xE9;tition du consensus 19-amino-acide est suffisante pour la reconnaissance et la glycosylation par Aah. Des &#xE9;tudes de mutag&#xE9;n&#xE8;se a sugg&#xE9;r&#xE9; que, de mani&#xE8;re inattendue, Aah reconna&#xEE;t un motif structural typique des &#xDF;-h&#xE9;lices, mais pas une s&#xE9;quence sp&#xE9;cifique. En accord avec cette constatation, nous avons observ&#xE9; que le domaine extracellulaire de la pertactine de Bordetella pertussis, un &#x3B2;-polypeptide h&#xE9;lico&#xEF;dal d&#xE9;pourvu de la s&#xE9;quence consensus de 19 acides amin&#xE9;s, pourrait &#xEA;tre glycosyl&#xE9; par Aah. Dans l&#x26;#39;ensemble, nos r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que Aah repr&#xE9;sente le prototype d&#x26;#39;une nouvelle famille de prot&#xE9;ines bact&#xE9;riennes grande O-glycosyltransf&#xE9;rases qui modifient divers substrats reconnus par un motif structural.

Un motif structural est le site de reconnaissance pour une nouvelle famille de prot&#xE9;ines bact&#xE9;riennes O-glycosyltransf&#xE9;rases

Das Escherichia coli Adhesin beteiligt Diffuse Einhaltung (AIDA-ich) ist ein multifunktionales Protein, das zur Familie der Monomer Autotransporters geh&ouml;rt. Diese Adhesin kann glykosyliert von der AIDA-assoziierte Heptosyltransferase (Aah) sein. Glykosylierung scheint auf der extrazellul&auml;ren Dom&auml;ne des AIDA beschr&auml;nkt zu sein-ich, die unvollkommene Wiederholungen ein 19-Aminos&auml;ure-Konsensus-Sequenz und wird voraussichtlich eine &beta;-Helix bilden. Hier zeigen wir, dass Aah Homologen in viele Gramnegative Bakterien, einschlie&szlig;lich Citrobacter Rodentium gefunden werden k&ouml;nnen. Wir gezeigt, dass ein Protein, das AIDA-wie HbA1c in dieser Art von Aah-Homolog. Wir untersuchten dann den Substrat-Anerkennung-Mechanismus der E. Coli-Aah-Heptosyltransferase. Wir fanden, dass ein Peptid, das entspricht einer Wiederholung des Konsenses 19-Aminos&auml;ure f&uuml;r Anerkennung und Glykosylierung von Aah ausreicht. Mutagenese Studien vorgeschlagen, dass unerwartet, Aah eine strukturelle Motiv, die typisch f&uuml;r &beta;-Helices, aber nicht in einer bestimmten Reihenfolge erkennt. Im Einvernehmen mit dieser Feststellung beobachteten wir, dass die extrazellul&auml;re Dom&auml;ne des Bordetella Pertussis Pertactin, ein &beta;-Kegelrad Polypeptid fehlt die 19-Aminos&auml;ure-Konsensus-Sequenz, HbA1c von Aah sein k&ouml;nnte. Unsere Einsch&auml;tzungen zufolge insgesamt Aah stellt den Prototyp einer neuen Gro&szlig;familie von bakteriellen Protein O-Glycosyltransferasen, die verschiedenen Substraten erkannt durch eine strukturelle Motiv &auml;ndern.

Eine strukturelle Motiv ist die Anerkennung-Website f&uuml;r eine neue Familie von bakteriellen Protein O-Glycosyltransferasen.

L&#39;Escherichia coli Adhesin coinvolti nell&#39;adesione diffusa (AIDA-I) &egrave; una proteina multifunzionale che appartiene alla famiglia dei autotransporters monomerico. Questo adhesin pu&ograve; essere glicosilata dall&#39;AIDA-associated heptosyltransferase (Aah). Glicosilazione sembra essere limitato al dominio extracellulare di AIDA-I, che comprende imperfette ripetizioni di una sequenza consenso 19-amminoacido ed &egrave; previsto per formare un &beta;-elica. Qui, ci mostra che i cromosomi omologhi Aah possono essere trovati in molti batteri Gram-negativi, tra cui Citrobacter rodentium. Abbiamo dimostrato che una proteina AIDA-come &egrave; glicosilata in questa specie dell&#39;omologo Aah. Abbiamo quindi studiato il meccanismo di riconoscimento del substrato dell&#39;heptosyltransferase di e. coli Aah. Abbiamo trovato che un peptide corrispondente a una ripetizione del consenso 19-amminoacido &egrave; sufficiente per il riconoscimento e la glicosilazione di Aah. Studi di mutagenesi ha suggerito che, inaspettatamente, Aah riconosce un motivo strutturale tipico del &beta;-eliche, ma non una specifica sequenza. D&#39;accordo con questa constatazione, abbiamo osservato che il dominio extracellulare della Bordetella pertussis pertactin, un polipeptide &beta;-elicoidale manca la sequenza di consenso 19-amminoacido, potrebbe essere glicosilata da Aah. Nel complesso, i nostri risultati suggeriscono che Aah rappresenta il prototipo di una nuova grande famiglia della proteina batterica O glycosyltransferases che modificare vari substrati riconosciuti attraverso un motivo strutturale.

Un motivo strutturale &egrave; il sito di riconoscimento per una nuova famiglia della proteina batterica O glycosyltransferases.

&#x3073;&#x307E;&#x3093;&#x6027;&#x4ED8;&#x7740;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x30A2;&#x30C9;&#x30D8;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;AIDA-I&#xFF09;&#x306F;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;autotransporters&#x306E;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x5C5E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30C9;&#x30D8;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#xFF08;AAH&#xFF09;AIDA&#x95A2;&#x9023;heptosyltransferase&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;19&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x3001;&#x3B2;-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;AIDA-I&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3042;&#x3042;&#x540C;&#x65CF;&#x30B7;&#x30C8;&#x30ED;&#x30D0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;rodentium&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x83CC;&#x3067;&#x767A;&#x898B;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;AIDA&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3042;&#x3042;&#x30DB;&#x30E2;&#x30ED;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7A2E;&#x3067;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3042;&#x3042;heptosyltransferase&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x8A8D;&#x8B58;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;19&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x306B;&#x76F8;&#x5F53;&#x3059;&#x308B;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306F;&#x3042;&#x3042;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3068;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x8A98;&#x767A;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E88;&#x671F;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x3001;&#x3042;&#x3042;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x3B2;-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x306E;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x83CC;&#x306E;&#x30DA;&#x30EB;&#x30BF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x3B2;-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;19&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x30B3;&#x30F3;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30B9;&#x914D;&#x5217;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x3001;&#x3042;&#x3042;&#x3067;&#x30B0;&#x30EA;&#x30B3;&#x30B7;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5168;&#x4F53;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3042;&#x3042;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3055;&#x308C;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x83CC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;O-&#x7CD6;&#x8EE2;&#x79FB;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x5927;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x69CB;&#x9020;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x65B0;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;O-&#x7CD6;&#x8EE2;&#x200B;&#x200B;&#x79FB;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x8A8D;&#x8B58;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;

&#xD655;&#xC0B0; &#xBD80;&#xCC29;&#xC5D0; &#xAD00;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; Adhesin &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; (&#xC544;&#xC774; &#xB2E4;-&#xB098;) monomeric autotransporters &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC5D0; &#xC18D;&#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC774; adhesin &#xC544;&#xC774; &#xB2E4; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; heptosyltransferase (&#xC544;)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2F9;&#xD654; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Glycosylation &#xC544;&#xC774; &#xB2E4;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xC81C;&#xD55C; &#xB420; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC778;&#xB2E4;-&#xB098;&#xB294; &#xBD88;&#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xBC18;&#xBCF5; 19 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; &#xC77C;&#xCE58; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &beta; &#xB098;&#xC120; &#xD615;&#xC131; &#xC804;&#xB9DD; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC544; homologues Citrobacter rodentium &#xB4F1; &#xB9CE;&#xC740; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC3E;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC544;&#xC774; &#xB2E4; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2F9;&#xD654; &#xC544; homologue&#xC774;&#xC774; &#xC885;&#xC871;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; &#xC544; heptosyltransferase&#xC758; &#xAE30;&#xD310; &#xC778;&#xC2DD; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD3A9; &#xD2F0; &#xB4DC;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; 19 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; &#xD569;&#xC758;&#xC758; &#xD55C; &#xBC18;&#xBCF5; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xC2DD;&#xACFC; glycosylation &#xC5EC; &#xC544;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC;. Mutagenesis &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC81C;&#xC548;, &#xC608;&#xAE30;&#xCE58; &#xC54A;&#xAC8C;, &#xC544; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &beta; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD2B9;&#xC815; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC778;&#xC2DD;. &#xC774; &#xCC3E;&#xB294; &#xACC4;&#xC57D; Bordetella &#xBC31; pertactin, &beta; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCEEC; polypeptide 19 &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC0B0; &#xC77C;&#xCE58; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBD80;&#xC871;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC544;&#xB85C; &#xB2F9;&#xD654; &#xB420; &#xC218;&#xB97C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC544; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xAE30;&#xD310; &#xAD6C;&#xC870; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC778;&#xC2DD; &#xC218;&#xC815; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; O glycosyltransferases&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0; &#xD0C0;&#xC785;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAD6C;&#xC870; &#xC8FC;&#xC81C;&#xB294; &#xC138;&#xADE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; O-glycosyltransferases&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC81C;&#xD488;&#xAD70;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC778;&#xC2DD; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La Escherichia coli Adhesin Participa en la adhesi&#xF3;n difusa (AIDA-I) es una prote&#xED;na multifuncional que pertenece a la familia de Portaveh&#xED;culos monom&#xE9;ricas. Esta adhesina puede ser glicosilada por el heptosyltransferase AIDA-asociado (AAH). Glicosilaci&#xF3;n parece estar restringida al dominio extracelular de AIDA-I, que comprende repeticiones imperfectas de una secuencia de consenso 19-amino-&#xE1;cido y se prev&#xE9; para formar una &#x3B2;-h&#xE9;lice. Aqu&#xED;, mostramos que Aah hom&#xF3;logos se pueden encontrar en muchas bacterias Gram-negativas, incluyendo Citrobacter rodentium. Hemos demostrado que una prote&#xED;na de AIDA-al igual que est&#xE1; glicosilada en esta especie por el hom&#xF3;logo Aah. Estamos entonces a analizar el mecanismo de reconocimiento de sustrato de la E. coli Aah heptosyltransferase. Hemos encontrado que un p&#xE9;ptido correspondiente a una repetici&#xF3;n del consenso 19-amino-&#xE1;cido es suficiente para el reconocimiento y la glicosilaci&#xF3;n por Aah. Estudios de mutag&#xE9;nesis sugerido que, inesperadamente, Aah reconoce un motivo estructural t&#xED;pico de beta-h&#xE9;lices, pero no una secuencia espec&#xED;fica. De acuerdo con este hallazgo, se observ&#xF3; que el dominio extracelular de la pertactina Bordetella pertussis, una &#x3B2;-helicoidal polip&#xE9;ptido carece de la secuencia consenso 19-amino-&#xE1;cido, podr&#xED;a estar glicosilados por Aah. En general, nuestros resultados sugieren que Aah representa el prototipo de una nueva familia grande de prote&#xED;nas bacterianas O-glicosiltransferasas que modifican varios sustratos reconocidos a trav&#xE9;s de un motivo estructural.

Frederic Berthiaume

Universite de Montreal

Groupe de Recherche sur les Maladies Infectieuses du Porc GREMIP, Faculte de medecine veterinaire

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

Frederic Berthiaume

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Universite de Montreal

Groupe de Recherche sur les Maladies Infectieuses du Porc GREMIP, Faculte de medecine veterinaire

In Vitro Assay of Bacterial Adhesion onto Mammalian Epithelial Cells

Universite de Montreal