isolation-ribosome-bound-nascent-polypeptides-vitro-to-identify

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides <em>in vitro</em> to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

The rate of translational elongation is non-uniform. mRNA secondary structure, codon usage and mRNA associated proteins may alter ribosome movement on the ...

using-secm-arrest-sequence-as-tool-to-isolate-ribosome-bound

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides

Extensive research has provided ample evidences suggesting that protein folding in the cell is a co-translational process1-5. However, the exact pathway ...

Cleveland State University

eIF4A &#x957F;&#x671F;&#x88AB;&#x4E3A;&#x6B7B;&#x6846; helicases &#x8BA4;&#x4E3A;&quot;&#x9EC4;&#x91D1;&#x6807;&#x51C6;&quot;&#x3002;&#x5728;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x53CD;&#x6620;&#x4E86;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9879;&#x76EE;&#xFF1A; &#x7B2C;&#x4E00;&#xFF0C;&#x5728;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x542F;&#x52A8; eIF4A &#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x662F;&#x6BD4;&#x8F83;&#x597D;&#x5730;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#xFF0C;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x751F;&#x5316;&#x7814;&#x7A76;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86; eIF4A &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x8981;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E; ATP &#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x6C34;&#x89E3; RNA &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C55;&#x5F00; RNA &#x53CC;&#x5DE5;&#x4EE5; ATP &#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6838;&#x9178;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x610F;&#x89C1;&#x4E3A;&#x751F;&#x5316;&#x4E00;&#x81F4;&#x6027;&#x5BA1;&#x67E5;&#x548C;&#x6839;&#x636E;&#x6B7B;&#x6846;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x53EF;&#x7528;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E5F;&#x89E3;&#x91CA;&#x3002;&#x88AB;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x975E;&#x845B;&#x4E0E;&#x845B;&#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x662F;&#x8F85;&#x52A9;&#x86CB;&#x767D;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;eIF4B&#x3001; eIF4G &#x548C; eIF4H&#xFF09; &#x5BF9;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x529B;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&quot;&#x771F;&#x6B63;&quot;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x4E3A; eIF4A &#x89E3;&#x65CB;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x662F;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x548C;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x5176;&#x4ED6;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x8FD8;&#x6D89;&#x53CA;&#x975E;&#x845B;&#x4F7F;&#x7528;&#x6216;&#x7565;&#x845B;&#x6B7B;&#x4EBA;&#x7BB1; helicases (&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x5408;&#x6210; RNA &#x62FC;&#x63A5;&#xFF09;&#x3002;

eIF4A&#xFF1A; &#x6B7B;&#x6846; helicases &#x7684;&#x6559;&#x7236;&#x3002;

eIF4A has long been considered the "gold standard" for DEAD box helicases. In large measure, this reflected two items: first, the role of eIF4A in protein synthesis initiation was relatively well established. Second, a wide variety of biochemical studies had established the ability of eIF4A to bind nucleic acids in an ATP-dependent manner, to hydrolyze ATP in an RNA-dependent manner, and to unwind RNA duplexes in an ATP-dependent manner. In this article, these basic observations are reviewed for biochemical consistency and also interpreted in light of the available crystal structures for DEAD box proteins. The role of non-processive vs. processive helicase activity in protein synthesis is discussed. Also examined is the influence of ancillary protein factors (eIF4B, eIF4G, and eIF4H) on this activity. Finally, the "real" role(s) for eIF4A helicase activity in protein synthesis is discussed and related to other circumstances that likely also involve the use of non-processive or slightly processive DEAD box helicases (ribosome biosynthesis, RNA splicing).

eIF4A: the godfather of the DEAD box helicases.

eIF4A a longtemps &eacute;t&eacute; consid&eacute;r&eacute; comme le &laquo; gold standard &raquo; pour les h&eacute;licases DEAD zone. Dans une large mesure, cela refl&egrave;te deux &eacute;l&eacute;ments : Premi&egrave;rement, le r&ocirc;le d&#39;eIF4A dans l&#39;initiation de la synth&egrave;se prot&eacute;ique a &eacute;t&eacute; relativement bien &eacute;tabli. Deuxi&egrave;mement, une grande vari&eacute;t&eacute; d&#39;&eacute;tudes biochimiques avait &eacute;tabli la capacit&eacute; d&#39;eIF4A de lier les acides nucl&eacute;iques de fa&ccedil;on d&eacute;pendante de l&#39;ATP, &agrave; hydrolyser l&#39;ATP de mani&egrave;re ARN-d&eacute;pendante et pour se d&eacute;tendre duplex RNA d&#39;une mani&egrave;re d&eacute;pendante de l&#39;ATP. Dans cet article, ces observations de base sont examin&eacute;es par souci de coh&eacute;rence biochimique et &eacute;galement interpr&eacute;t&eacute;es &agrave; la lumi&egrave;re des structures cristallines disponibles pour les prot&eacute;ines de la zone morte. On discute du r&ocirc;le de non-processive vs activit&eacute; h&eacute;licase processive dans la synth&egrave;se des prot&eacute;ines. &Eacute;galement examiner, c&#39;est l&#39;influence des facteurs de prot&eacute;ines auxiliaires (eIF4B, eIF4G et eIF4H) sur cette activit&eacute;. Enfin, le &laquo; vrai &raquo; r&ocirc;le (s) d&#39;activit&eacute; h&eacute;licase eIF4A dans la synth&egrave;se des prot&eacute;ines est discut&eacute;e et associ&eacute;e &agrave; d&#39;autres circonstances que probables aussi implique l&#39;utilisation de non-processive ou l&eacute;g&egrave;rement processive DEAD zone h&eacute;licases (la biosynth&egrave;se des ribosomes, &eacute;pissage de l&#39;ARN).

eIF4A : le parrain de la zone morte h&eacute;licases.

eIF4A: The Godfather of the Dead Box Helikasen.

eIF4A &egrave; stato a lungo considerato il &quot;gold standard&quot; per elicasi DEAD box. In larga misura, questo riflette due elementi: in primo luogo, il ruolo di eIF4A nell&#39;iniziazione di sintesi della proteina era relativamente ben consolidato. In secondo luogo, una vasta gamma di studi biochimici aveva stabilito la capacit&agrave; di legare gli acidi nucleici in modo ATP-dipendente, di idrolizzare ATP in maniera RNA-dipendente e per rilassarsi duplex RNA in modo ATP-dipendente eIF4A. In questo articolo, queste osservazioni fondamentali sono rivisti per coerenza biochimica e interpretate anche alla luce le strutture di cristallo disponibile per le proteine casella morti. Viene discusso il ruolo di processive vs attivit&agrave; di helicase processive nella sintesi proteica. Ha anche esaminato &egrave; l&#39;influenza di fattori ausiliari della proteina (eIF4B, eIF4G ed eIF4H) su questa attivit&agrave;. Infine, i ruoli &quot;reali&quot; per attivit&agrave; di helicase eIF4A nella sintesi proteica &egrave; discussa e correlati ad altre circostanze che probabilmente anche implicano l&#39;uso di non-processive o leggermente processive morti casella elicasi (biosintesi del ribosoma, RNA splicing).

eIF4A: il padrino dell&#39;elicasi DEAD box.

eIF4A &#x9577;&#x3044;&#x6B7B;&#x3093;&#x3067;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x300C;&#x30B4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9; &#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#x30C9;&#x300D;&#x3092;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x9805;&#x76EE;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#xFF1A; &#x307E;&#x305A;&#x3001;eIF4A &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x958B;&#x59CB;&#x3067;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x3088;&#x304F;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x306B;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x306F; ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x3001;RNA &#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x305F;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;ATP &#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x304A;&#x3088;&#x3073; RNA &#x4E8C;&#x91CD;&#x9396;&#x306F; ATP &#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x306B;&#x30A2;&#x30F3;&#x30EF;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x6838;&#x9178;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD; eIF4A &#x306E;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8A18;&#x4E8B;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x89B3;&#x6E2C;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x3092;&#x4FDD;&#x3064;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3057;&#x3001;&#x3082;&#x6B7B;&#x3093;&#x3060;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x7167;&#x3089;&#x3057;&#x3066;&#x89E3;&#x91C8;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30D6; &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30D6; &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5BFE;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x691C;&#x67FB;&#x3053;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x88DC;&#x52A9;&#x7684;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x56E0;&#x5B50; (eIF4B&#x3001;eIF4G&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; eIF4H) &#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;eIF4A &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x5408;&#x6210;&#x3067;&#x306E;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3057;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x4ED6;&#x306E;&#x4E8B;&#x60C5;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x300C;&#x672C;&#x7269;&#x300D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x975E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30D6;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x304B;&#x82E5;&#x5E72;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30D6;&#x6B7B;&#x8005;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC; (&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x751F;&#x5408;&#x6210; RNA &#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;)&#x3002;

eIF4A: &#x30C7;&#x30C3;&#x30C9; &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30FC;&#x30BC;&#x306E;&#x30B4;&#x30C3;&#x30C9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x3002;

eIF4A &#xAE34; &#xACE0;&#xB824; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; &quot;&#xAE08; &#xD45C;&#xC900;&quot; &#xC8FD;&#xC740; &#xC0C1;&#xC790; helicases&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;. &#xB300;&#xD615; &#xCE21;&#xC815;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294;&#xC774; &#xB450; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC774; &#xBC18;&#xC601;: &#xCCAB;&#xC9F8;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131; &#xAC1C;&#xC2DC;&#xC5D0; Eif4a&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC740; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC798; &#xC124;&#xB9BD;. &#xB458;&#xC9F8;, &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC0DD; &#xD654; &#xD559;&#xC801; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xD575; &#xC0B0; RNA&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; ATP hydrolyze&#xC640; ATP&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; RNA duplexes&#xC758; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC744; &#xD480;&#xACE0;&#xB294; ATP&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; Eif4a&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC124;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xCC30;&#xC744; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xC77C;&#xAD00;&#xC131;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xAC80;&#xD1A0; &#xD558; &#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xC8FD;&#xC740; &#xC0C1;&#xC790; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xD06C;&#xB9AC;&#xC2A4;&#xD0C8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xBE44;&#xCD94;&#xC5B4; &#xD574;&#xC11D;. &#xBE44; processive processive helicase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300;&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC774; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xC870; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC694;&#xC18C; (eIF4B, eIF4G, &#xBC0F; eIF4H)&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC774; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &quot;&#xC9C4;&#xC9DC;&quot; &#xC5ED;&#xD560; eIF4A helicase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB17C;&#xC758; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0C1;&#xD669;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;&#xB3C4;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; processive &#xB610;&#xB294; &#xC57D;&#xAC04; processive &#xC8FD;&#xC740; &#xC0C1;&#xC790; helicases (&#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;, RNA &#xC811;&#xD569;).

eIF4A: &#xC8FD;&#xC740; &#xC0C1;&#xC790; helicases&#xC758; &#xB300; &#xBD80;.

eIF4A durante mucho tiempo ha sido considerado el &quot;gold standard&quot; para helicasas de caja muertos. En gran medida, esto refleja dos elementos: en primer lugar, el papel de eIF4A en iniciaci&oacute;n de s&iacute;ntesis de prote&iacute;na fue relativamente bien establecido. En segundo lugar, una amplia variedad de estudios bioqu&iacute;micos hab&iacute;a establecido la capacidad de eIF4A de &aacute;cidos nucleicos se unen de una manera dependiente de ATP, para hidrolizar ATP en una forma dependiente de RNA y para relajarse d&uacute;plex RNA de una manera dependiente de ATP. En este art&iacute;culo, estas observaciones b&aacute;sicas son revisadas para garantizar consistencia bioqu&iacute;mico y tambi&eacute;n interpretadas a la luz de las estructuras de cristal disponibles para las prote&iacute;nas de caja muertos. Se discute el papel de no-procesual vs actividad helicasa procesual en la s&iacute;ntesis de prote&iacute;nas. Tambi&eacute;n es la influencia de factores auxiliares de la prote&iacute;na (eIF4B, eIF4G y eIF4H) en esta actividad. Finalmente, los roles &quot;reales&quot; para la actividad helicasa de eIF4A en la s&iacute;ntesis de prote&iacute;nas es discutida y se relaciona con otras circunstancias que probablemente tambi&eacute;n implican el uso de no-procesual o ligeramente procesual muertos caja helicasas (bios&iacute;ntesis de ribosomas, RNA empalme).

eIF4A: el padrino de las helicasas de caja muertos.

The [URE3] phenotype in Saccharomyces cerevisiae is caused by the inactive, altered (prion) form of the Ure2 protein (Ure2p), a regulator of nitrogen catabolism. Ure2p has two functional domains: an N-terminal domain necessary and sufficient for prion propagation and a C-terminal domain responsible for nitrogen regulation. We show here that the mRNA encoding Ure2p possesses an IRES (internal ribosome entry site). Internal initiation leads to the synthesis of an N-terminally truncated active form of the protein (amino acids 94-354) lacking the prion-forming domain. Expression of the truncated Ure2p form (94-354) mediated by the IRES element cures yeast cells of the [URE3] phenotype. We assume that the balance between the full-length and truncated (94-354) Ure2p forms plays an important role in yeast cell physiology and differentiation.

Internal initiation drives the synthesis of Ure2 protein lacking the prion domain and affects [URE3] propagation in yeast cells.

[URE3] &#x917F;&#x9152;&#x9175;&#x6BCD;&#x7531;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x5F15;&#x8D77;&#x8868;&#x578B;&#x6539;&#x53D8; &#xFF08;&#x670A;&#x75C5;&#x6BD2;&#xFF09; &#x5F62;&#x5F0F;&#x7684; Ure2 &#x86CB;&#x767D; (Ure2p) &#x7684;&#x6C2E;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;Ure2p &#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x529F;&#x80FD;&#x57DF;&#xFF1A; N &#x7AEF;&#x57DF;&#x5FC5;&#x8981;&#x548C;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x670A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4F20;&#x64AD;&#x548C; C &#x672B;&#x7AEF;&#x57DF;&#x8D1F;&#x8D23;&#x6C2E;&#x7D20;&#x8C03;&#x63A7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x5C55;&#x793A; mRNA &#x7F16;&#x7801; Ure2p &#x62E5;&#x6709; IRES &#xFF08;&#x5185;&#x90E8;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8FDB;&#x5165;&#x4F4D;&#x70B9;)&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x542F;&#x52A8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5408;&#x6210;&#x7684; N-&#x672B;&#x671F;&#x622A;&#x65AD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; &#xFF08;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178; 94-354&#xFF09; &#x7F3A;&#x4E4F;&#x670A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5F62;&#x6210;&#x57DF;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7A97;&#x7684;&#x4F53;&#x3002;[URE3] &#x8868;&#x578B;&#x7684; IRES &#x5143;&#x7D20;&#x6CBB;&#x6108;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x622A;&#x65AD; Ure2p &#x7A97;&#x4F53; (94-354&#xFF09; &#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5047;&#x5B9A;&#x5168;&#x957F;&#x548C;&#x622A;&#x65AD;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5E73;&#x8861; (94-354) Ure2p &#x5F62;&#x5F0F;&#x53D1;&#x6325;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7406;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x5185;&#x90E8;&#x542F;&#x52A8;&#x9A71;&#x52A8;&#x5668;&#x7684;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x670A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57DF; Ure2 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5408;&#x6210;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5F71;&#x54CD;&#x5728;&#x9175;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684; [URE3] &#x4F20;&#x64AD;&#x3002;

Le ph&eacute;notype [URE3] dans Saccharomyces cerevisiae est caus&eacute;e par les inactifs, modifi&eacute;e forme (prion) de la prot&eacute;ine Ure2 (Ure2p), un organisme de r&eacute;glementation du catabolisme de l&#39;azote. Ure2p a deux domaines fonctionnels : un domaine N-terminal n&eacute;cessaire et suffisant pour la propagation des prions et un domaine C-terminal responsable de la r&eacute;gulation de l&#39;azote. Nous montrons ici que l&#39;ARNm codant pour Ure2p poss&egrave;de un IRES (site d&#39;entr&eacute;e interne des ribosomes). Initiation interne conduit &agrave; la synth&egrave;se d&#39;un N-terminal tronqu&eacute; forme active de la prot&eacute;ine (acides amin&eacute;s 94-354) manque le domaine de la formation de prions. Expression de la forme tronqu&eacute;e de Ure2p (94-354) m&eacute;di&eacute;e par les cellules de levure IRES &eacute;l&eacute;ment thermalisme du ph&eacute;notype [URE3]. Nous supposons que l&#39;&eacute;quilibre entre la pleine longueur et tronqu&eacute; de formes Ure2p (94-354) joue un r&ocirc;le important dans la physiologie de cellules de levure et de la diff&eacute;renciation.

Initiation interne conduit &agrave; la synth&egrave;se de prot&eacute;ine Ure2 manque le domaine des prions et affecte la propagation [URE3] dans les cellules de levure.

Interne Initiation treibt die Synthese von Ure2 Protein ohne das Prion-Dom&#xE4;ne und betrifft [URE3] Propagierung in Hefe-Zellen.

Il fenotipo [URE3] in Saccharomyces cerevisiae &egrave; causata da inattivi, alterata forma (prioni) della proteina Ure2 (Ure2p), un regolatore del catabolismo dell&#39;azoto. Ure2p ha due domini funzionali: un dominio N-terminale necessario e sufficiente per la propagazione del prione e un dominio C-terminale responsabile per la regolamentazione dell&#39;azoto. Mostriamo qui che il mRNA codifica Ure2p possiede un&#39;IRES (internal ribosome entry site). Iniziazione interna conduce alla sintesi di un N-terminale troncato forma attiva della proteina (amminoacidi 94-354) manca il dominio prione-formante. Espressione della forma Ure2p troncata (94-354) mediata da cellule di lievito dei cure di IRES elemento del fenotipo [URE3]. Diamo per scontato che l&#39;equilibrio tra il full-length e troncato (94-354) Ure2p forme gioca un ruolo importante nella fisiologia delle cellule di lievito e differenziazione.

Iniziazione interna spinge la sintesi della proteina Ure2 manca il dominio da prioni e influisce sulla propagazione [URE3] in cellule di lievito.

&#x9175;&#x6BCD;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E; [URE3] &#x8868;&#x73FE;&#x578B; (&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;) &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; Ure2 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; (Ure2p)&#x3001;&#x7A92;&#x7D20;&#x7570;&#x5316;&#x306E;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x5909;&#x66F4;&#x3002;Ure2p &#x304C; 2 &#x3064;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;: &#x5FC5;&#x8981;&#x304B;&#x3064;&#x5341;&#x5206;&#x306A;&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x7A92;&#x7D20;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067; Ure2p &#x30A8;&#x30F3;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0; mRNA &#x306F; IRES &#xFF08;&#x5185;&#x90E8;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#xFF09; &#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x5185;&#x90E8;&#x958B;&#x59CB;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x306F; N &#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3001;&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3;&#x5F62;&#x6210;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA; &#xFF08;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178; 94-354&#xFF09; &#x306E;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;[IRES &#x8981;&#x7D20;&#x6CBB;&#x7642;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE; [URE3] &#x5F62;&#x8CEA;&#x304C;&#x5A92;&#x4ECB;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F; Ure2p &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0; (94-354) &#x306E;&#x5F0F;&#x3002;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x3068;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x30D5;&#x30EB;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B9;&#x3068;&#x5207;&#x308A;&#x6368;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9; (94-354&#xFF09; Ure2p &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x524D;&#x63D0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5185;&#x90E8;&#x958B;&#x59CB;&#x30D7;&#x30EA;&#x30AA;&#x30F3; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B20;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B; Ure2 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x99C6;&#x52D5;&#x3057;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B; [URE3] &#x4F1D;&#x64AD;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Saccharomyces cerevisiae &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;, &#xAE30;&#xC778; [URE3] &#xD615;&#xC758; Ure2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (Ure2p), &#xC9C8;&#xC18C; catabolism&#xC758; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; (&#xD504;&#xB9AC;&#xC628;) &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xBCC0;&#xACBD;. Ure2p&#xB294; 2 &#xAC1C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;: N &#xB9E8;&#xB05D; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xD504;&#xB9AC;&#xC628; &#xC804;&#xD30C; &#xBC0F; C &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC9C8;&#xC18C; &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5EC;&#xAE30; Ure2p &#xC778;&#xCF54;&#xB529; Mrna&#xB294; IRES (&#xB0B4;&#xBD80; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xD56D;&#xBAA9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;)&#xC744; &#xBCF4;&#xC720; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. N-&#xB9D0;&#xAE30;&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC5D0; &#xB0B4;&#xBD80; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xB9AC;&#xB4DC; &#xD504;&#xB9AC;&#xC628;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; (&#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; 94-354)&#xC758; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC798;&#xB9BD;&#xB2C8;&#xB2E4;. [URE3] &#xD615;&#xC758; IRES &#xC694;&#xC18C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xC798;&#xB9B0;&#xB41C; Ure2p &#xD615;&#xD0DC; (94-354)&#xC758; &#xC2DD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC804;&#xCCB4; &#xAE38;&#xC774; &#xC798;&#xB9B0; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xADE0;&#xD615; (94-354) Ure2p &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; &#xC7AC;&#xC0DD; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xB9AC;&#xD559; &#xBC0F; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xAC00;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB0B4;&#xBD80; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xD504;&#xB9AC;&#xC628; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; Ure2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD569;&#xC131;&#xC744; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; &#xD6A8; &#xBAA8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; [URE3] &#xC804;&#xD30C;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El fenotipo [URE3] en Saccharomyces cerevisiae es causada por los inactivos, alterado de forma (pri&oacute;n) de la prote&iacute;na Ure2 (Ure2p), un regulador del catabolismo del nitr&oacute;geno. Ure2p tiene dos dominios funcionales: un dominio N-terminal, necesario y suficiente para la propagaci&oacute;n del pri&oacute;n y un dominio c-terminal responsable de regulaci&oacute;n de nitr&oacute;geno. Aqu&iacute; mostramos que el mRNA codificaci&oacute;n Ure2p posee un IRES (sitio de entrada interna del ribosoma). Iniciaci&oacute;n interna conduce a la s&iacute;ntesis de un N-terminal hab&iacute;an truncado forma activa de la prote&iacute;na (amino&aacute;cidos 94-354) que carece del dominio de la formaci&oacute;n del pri&oacute;n. Expresi&oacute;n de la forma truncada de Ure2p (94-354) mediada por las c&eacute;lulas de levadura IRES elemento curaciones del fenotipo [URE3]. Suponemos que el equilibrio entre el cuerpo entero y truncado (94-354) Ure2p formas desempe&ntilde;a un papel importante en la diferenciaci&oacute;n y la fisiolog&iacute;a de la c&eacute;lula de levadura.

Iniciaci&oacute;n interna impulsa la s&iacute;ntesis de prote&iacute;na Ure2 que carece del dominio del pri&oacute;n y afecta a la propagaci&oacute;n de [URE3] en las c&eacute;lulas de levadura.

&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x4E86; thp-1 &#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &gamma; &#x6CBB;&#x7597;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4ECE; 60 &#x5E74;&#x4EE3;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x548C;&#x968F;&#x540E;&#x5E73;&#x79FB;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x94DC;&#x84DD;&#x86CB;&#x767D; (Cp) mRNA &#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; L13a &#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x57F9;&#x517B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E; Cp mRNA &#x6C89;&#x9ED8;&#x662F;&#x4F9D;&#x8D56; L13a &#x548C; L13a &#x7F3A;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x662F;&#x5168;&#x7403;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x4E3B;&#x7BA1;&#x3002;&#x4EBA;&#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE; U937 &#x7EC6;&#x80DE;&#x662F;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x67D3;&#x4E0E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; shRNA &#x5E8F;&#x5217;&#x4E3A; L13a &#x548C;&#x65E0;&#x6027;&#x7E41;&#x6B96;&#x9009;&#x5B9A;&#x4E3A; 98%&#x4EE5;&#x4E0A;&#x7684;&#x603B; L13a &#x8868;&#x8FBE;&#x5E9F;&#x9664;&#x3002;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6807;&#x8BB0;&#x8868;&#x660E; Cp &#x7FFB;&#x8BD1;&#x6551;&#x63F4;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;-&gamma; &#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x5E73;&#x79FB;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;L13a &#x67AF;&#x7AED;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x548C;&#x7AE0;&#x72EC;&#x7ACB;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x5185;&#x90E8;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x8FDB;&#x5165;&#x7F51;&#x7AD9; (IRES) &#x5143;&#x7D20;&#x6E90;&#x81EA;&#x4E8E; p27&#x3001; p53 &#x548C; SNAT2 mRNAs &#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53; RNA &#x7684;&#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x51CF;&#x5C11;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;L13a &#x7F3A;&#x9677;&#x578B;&#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x63A7;&#x5236;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53; RNA &#x52A0;&#x5DE5;&#x3001; polysome &#x5F62;&#x6210;&#x3001; &#x5168;&#x7403;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3001; &#x5E73;&#x79FB;&#x7684;&#x4FDD;&#x771F;&#x5EA6;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x6CA1;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6982;&#x5FF5;&#xFF0C;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x53EF;&#x8C03;&#x6574;&#x7FFB;&#x8BD1;&#x7BA1;&#x7406;&#x65E0;&#x5173;&#x7684;&#x56E0;&#x7D20;&#x53CA;&#x5176;&#x57FA;&#x5E95;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x5408;&#x6210;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4ED3;&#x5E93;&#x3002;&#x4E0E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x662F; L13a &#x540C;&#x6E90;&#x9175;&#x6BCD;&#x4E2D;&#x7684;&#x662F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6216;&#x7F3A;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x7B49;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x4E2D;&#x6709;&#x4E00;&#x4E2A;&#x89D2;&#x8272;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53EF;&#x6709;&#x53EF;&#x65E0;&#x7684; extra-ribosomal &#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x4F4E;&#x771F;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x6F14;&#x53D8; L13a&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; L13a &#x662F;&#x53EF;&#x6709;&#x53EF;&#x65E0;&#x7684;&#x89C4;&#x8303;&#x6838;&#x7CD6;&#x4F53;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x53EF;&#x7F3A;&#x5C11;&#x7684;&#x6709;&#x6548; rRNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;

Previously, we demonstrated that treatment of monocytic cells with IFN-gamma causes release of ribosomal protein L13a from the 60S ribosome and subsequent translational silencing of Ceruloplasmin (Cp) mRNA. Here, evidence using cultured cells demonstrates that Cp mRNA silencing is dependent on L13a and that L13a-deficient ribosomes are competent for global translational activity. Human monocytic U937 cells were stably transfected with two different shRNA sequences for L13a and clonally selected for more than 98% abrogation of total L13a expression. Metabolic labeling of these cells showed rescue of Cp translation from the IFN-gamma mediated translational silencing activity. Depletion of L13a caused significant reduction of methylation of ribosomal RNA and of cap-independent translation mediated by Internal Ribosome Entry Site (IRES) elements derived from p27, p53, and SNAT2 mRNAs. However, no significant differences in the ribosomal RNA processing, polysome formation, global translational activity, translational fidelity, and cell proliferation were observed between L13a-deficient and wild-type control cells. These results support the notion that ribosome can serve as a depot for releasable translation-regulatory factors unrelated to its basal polypeptide synthetic function. Unlike mammalian cells, the L13a homolog in yeast is indispensable for growth. Thus, L13a may have evolved from an essential ribosomal protein in lower eukaryotes to having a role as a dispensable extra-ribosomal function in higher eukaryotes.

Human ribosomal protein L13a is dispensable for canonical ribosome function but indispensable for efficient rRNA methylation.

Auparavant, nous avons d&#xE9;montr&#xE9; que le traitement des cellules monocytaires avec l&#x26;#39;IFN-gamma provoque la lib&#xE9;ration de la prot&#xE9;ine ribosomique L13a de la 60S du ribosome et silencieux translation ult&#xE9;rieure de c&#xE9;ruloplasmine (Cp) ARNm. Ici, la preuve en utilisant des cellules en culture d&#xE9;montre que l&#x26;#39;inhibition de l&#x26;#39;ARNm Cp d&#xE9;pend L13a et que les ribosomes L13a-d&#xE9;ficientes sont comp&#xE9;tents pour l&#x26;#39;activit&#xE9; de translation globale. Monocytaire humaine U937 cellules ont &#xE9;t&#xE9; transfect&#xE9;es de fa&#xE7;on stable avec deux s&#xE9;quences shRNA diff&#xE9;rentes pour L13a et clonage s&#xE9;lectionn&#xE9;s pour plus de 98% l&#x26;#39;abrogation de l&#x26;#39;expression L13a totale. Marquage m&#xE9;tabolique de ces cellules a montr&#xE9; de sauvetage de la traduction Cp de l&#x26;#39;activit&#xE9; m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;IFN-gamma silence translationnelle. L&#x26;#39;&#xE9;puisement des L13a caus&#xE9; une r&#xE9;duction significative de la m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ARN ribosomal et de Cap-ind&#xE9;pendante m&#xE9;di&#xE9;e par la traduction du site d&#x26;#39;entr&#xE9;e interne des ribosomes (IRES) &#xE9;l&#xE9;ments issus de p27, p53, et SNAT2 ARNm. Cependant, aucune diff&#xE9;rence significative dans le traitement de l&#x26;#39;ARN ribosomal, la formation, les polysomes mondiale activit&#xE9; translationnelle translation de fid&#xE9;lit&#xE9;, et la prolif&#xE9;ration cellulaire ont &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;es entre les cellules de contr&#xF4;le L13a-d&#xE9;ficientes et de type sauvage. Ces r&#xE9;sultats appuient l&#x26;#39;id&#xE9;e que ribosome peut servir de d&#xE9;p&#xF4;t pour les facteurs de traduction r&#xE9;glementaires lib&#xE9;rables sans rapport avec sa fonction de base polypeptide synth&#xE9;tique. Contrairement aux cellules de mammif&#xE8;res, l&#x26;#39;homologue chez la levure L13a est indispensable pour la croissance. Ainsi, L13a peuvent avoir &#xE9;volu&#xE9; &#xE0; partir d&#x26;#39;une prot&#xE9;ine essentielle ribosomique chez les eucaryotes inf&#xE9;rieurs &#xE0; avoir un r&#xF4;le en tant que dispensable extra-ribosomique fonction chez les eucaryotes sup&#xE9;rieurs.

Human L13a Ribosomal Protein n&#x26;#39;est pas indispensable pour la fonction des ribosomes canonique, mais indispensable pour la m&#xE9;thylation ARNR efficace

Zuvor wir gezeigt, dass Behandlung von monozyt&auml;ren Zellen mit IFN-Gamma Freisetzung von ribosomal Protein L13a aus den 60ern Ribosom und nachfolgende translational Unterdr&uuml;ckender Ceruloplasmin (Cp) mRNA bewirkt. Hier zeigt Beweise mit kultivierte Zellen, dass Cp mRNA silencing L13a abh&auml;ngt und L13a-defizienten Ribosomen f&uuml;r weltweite translationale Aktivit&auml;t zust&auml;ndig sind. Humanen monozyt&auml;ren U937 Zellen wurden die stabil mit zwei verschiedenen ShRNA-Sequenzen f&uuml;r L13a transfected und f&uuml;r mehr als 98 % klonal ausgew&auml;hlt Aufhebung der gesamten L13a Ausdruck. Metabolische Kennzeichnung dieser Zellen zeigte Rettung von Cp-&Uuml;bersetzung von IFN-Gamma, vermittelte translational silencing Aktivit&auml;t. Ersch&ouml;pfung der L13a verursacht erhebliche Reduzierung der Methylierung Ribosomale RNA und der GAP-unabh&auml;ngige &Uuml;bersetzung von internen Ribosom Eintrag Website (IRES) Elemente abgeleitet p27, p53 und SNAT2 mRNAs vermittelt. Jedoch wurden keine signifikanten Unterschiede in der Ribosomale RNA Verarbeitung Polysom Bildung, weltweite translationale Aktivit&auml;t, translational Treue und Zellproliferation zwischen L13a-defizienten und Wildtyp-Steuerelement Zellen beobachtet. Diese Resultate unterst&uuml;tzen das Konzept das Ribosom kann dienen als Depot f&uuml;r l&ouml;sbare &Uuml;bersetzung-regulatorische Faktoren, die nichts mit dessen basale Polypeptid synthetische Funktion. Im Gegensatz zu den S&auml;ugetier-Zellen ist die L13a homologe in der Hefe unverzichtbar f&uuml;r Wachstum. So kann L13a von eine wesentliche Proteinschmelzverfahrens bei niedrigeren Eukaryoten entwickelt haben, dass eine Rolle als entbehrlich extra-ribosomal Funktion in h&ouml;heren Eukaryotes.

Menschliche ribosomal Protein ist L13a f&uuml;r kanonische Ribosom Funktion entbehrlich, aber unverzichtbar f&uuml;r effiziente rRNA-Methylierung.

In precedenza, abbiamo dimostrato che trattamento delle cellule monocitica con IFN-gamma provoca il rilascio della proteina ribosomiale L13a dal ribosoma 60S e conseguente silenziamento traslazionale della ceruloplasmina (Cp) mRNA. Qui, utilizzando cellule coltivate le prove dimostrano che Cp mRNA silenziamento dipende L13a e che i ribosomi L13a-carenti sono competenti per attivit&agrave; traslazionale globale. Cellule U937 monocitica umane erano stabile transfected con due sequenze shRNA differenti per L13a e clonandosi selezionate per pi&ugrave; del 98% abrogazione totale L13a espressione. Etichettatura metabolica di queste cellule ha mostrate il salvataggio della traduzione Cp da IFN-gamma, mediata da attivit&agrave; traslazionale silenziamento. Deplezione di L13a causato una riduzione significativa della metilazione del RNA ribosomiale (rRNA) e della traduzione cap-indipendente mediata da Internal Ribosome Entry sito (IRES) elementi derivati da p27, p53 e SNAT2 mRNAs. Tuttavia, nessuna differenza significativa nella trasformazione di RNA ribosomiale, formazione Polisoma, attivit&agrave; traslazionale globale, fedelt&agrave; traslazionale e proliferazione delle cellule sono stata osservata tra L13a-carenti e selvaggio-tipo controllo celle. Questi risultati supportano la nozione che ribosoma pu&ograve; servire come deposito per rilasciabile traduzione-regolamentazione fattori estranei alla sua funzione sintetica del polipeptide basale. A differenza delle cellule di mammifero, l&#39;omologo di L13a nel lievito &egrave; indispensabile per la crescita. Cos&igrave;, L13a potrebbe essersi evoluto da una proteina ribosomiale essenziale negli eucarioti inferiori ad avere un ruolo in funzione extra-ribosomal superfluo negli eucarioti superiori.

Umana proteina ribosomiale L13a &egrave; superfluo per funzione canonica ribosoma, ma indispensabili per metilazione rRNA efficiente.

&#x4EE5;&#x524D;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;IFN-&#x3B3;&#x3068;&#x5358;&#x7403;&#x7CFB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x30BB;&#x30EB;&#x30ED;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30F3;&#xFF08;Cp&#xFF09;&#x306E;mRNA&#x306E;60S&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x7FFB;&#x8A33;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;L13a&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;Cp&#x306E;mRNA&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;L13a&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3001;L13a&#x6B20;&#x640D;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x7FFB;&#x8A33;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x5358;&#x7403;U937&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x7684;&#x306B;L13a 2&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;shRNA&#x914D;&#x5217;&#x3067;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x5408;&#x8A08;L13a&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;98&#xFF05;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x5EC3;&#x6B62;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x6A19;&#x8B58;&#x3067;&#x306F;&#x3001;IFN-&#x3B3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x7FFB;&#x8A33;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x6D3B;&#x52D5;&#x304B;&#x3089;CP&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x6551;&#x51FA;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; L13a&#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x306F;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;RNA&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x5185;&#x90E8;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x4FB5;&#x5165;&#x90E8;&#x4F4D;&#xFF08;IRES&#xFF09;P27&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x8981;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;p53&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;SNAT2&#x306E;mRNA&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30C3;&#x30D7;&#x975E;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;RNA&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x7FFB;&#x8A33;&#x6D3B;&#x6027;&#x3001;&#x7FFB;&#x8A33;&#x306E;&#x5FE0;&#x5B9F;&#x5EA6;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306F;&#x3001;L13a&#x6B20;&#x640D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x57FA;&#x5E95;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x5408;&#x6210;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x7FFB;&#x8A33;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x30C7;&#x30DD;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x6982;&#x5FF5;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x9175;&#x6BCD;&#x3067;L13a&#x76F8;&#x540C;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;L13a&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x7B49;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x4E0D;&#x8981;&#x4F59;&#x5206;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x4E0B;&#x7B49;&#x771F;&#x6838;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x5FC5;&#x9808;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x304B;&#x3089;&#x9032;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;L13a&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;rRNA&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6B63;&#x898F;&#x306E;&#x30EA;&#x30DC;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304C;&#x6B20;&#x304B;&#x305B;&#x306A;&#x3044;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#xC774;&#xC804;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; IFN-&#xAC10;&#xB9C8; monocytic &#xC140;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC; 60 &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xACFC; Ceruloplasmin (Cp) Mrna&#xC758; &#xD6C4;&#xC18D; &#xBCC0;&#xD658; &#xC785;&#xC744; ribosomal &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; l13a&#xC758; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xD558;&#xBA74; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xBC30;&#xC591;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC99D;&#xAC70; Cp mRNA &#xCE68;&#xBB35;&#xC740; l13a&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; L13a &#xBD88;&#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C;&#xC5D0; &#xC720;&#xB2A5;&#xD55C; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xBCC0;&#xD658; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04; monocytic U937 &#xC138;&#xD3EC; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; l13a&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; shRNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC640; &#xD398; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; clonally 98% &#xC774;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300;&#xD574; &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; &#xCD1D; L13a &#xC2DD;&#xC758; &#xD3D0;&#xC9C0;. IFN-&#xAC10;&#xB9C8;&#xC5D0;&#xC11C; Cp &#xBC88;&#xC5ED;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC; &#xB77C;&#xBCA8; &#xBCC0;&#xD658; silencing &#xD65C;&#xB3D9; &#xC911;&#xC7AC;. L13a&#xC758; &#xACE0;&#xAC08; ribosomal RNA&#xC758;&#xC640; &#xBAA8;&#xC790; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xBC88;&#xC5ED; p27, p53, SNAT2 Mrnas&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xB0B4;&#xBD80; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xD56D;&#xBAA9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; (IRES) &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC758; &#xB73B;&#xAE4A;&#xC740; &#xAC10;&#xC18C;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; RNA &#xCC98;&#xB9AC;, polysome &#xD615;&#xC131;, &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xBCC0;&#xD658; &#xC791;&#xC5C5;, &#xBCC0;&#xD658; &#xCDA9;&#xC2E4;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; L13a &#xACB0;&#xD54D; &#xBC0F; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC81C;&#xC5B4; &#xC140; &#xAC04;&#xC5D0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xB150;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xB294; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; releasable &#xBC88;&#xC5ED; &#xADDC;&#xC815; &#xC694;&#xC778; &#xAD00;&#xB828;&#xC774; &#xC5C6;&#xB294; &#xAE30;&#xC800; polypeptide &#xD569;&#xC131; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC11C;&#xBE44;&#xC2A4; &#xC13C;&#xD130;&#xB85C; &#xAC80;&#xC0C9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xD6A8; &#xBAA8;&#xC5D0; L13a &#xCCB4; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, L13a &#xB192;&#xC740; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0; extra-ribosomal &#xD568;&#xC218;&#xB85C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xB370; &#xB0AE;&#xC740; &#xC9C4;&#xD575;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; ribosomal &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C4;&#xD654; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; ribosomal &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; L13a &#xC815;&#xC2DD; &#xB9AC;&#xBCF4;&#xC19C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; rRNA &#xBA54; &#xD2F8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Anteriormente, hemos demostrado que el tratamiento de las c&#xE9;lulas monocitos con IFN-gamma provoca la liberaci&#xF3;n de la prote&#xED;na ribosomal L13a del silenciamiento 60S del ribosoma y el de traslaci&#xF3;n posterior de ceruloplasmina (Cp) de ARNm. Aqu&#xED;, las pruebas con c&#xE9;lulas cultivadas demuestra que el silenciamiento del ARNm Cp depende de L13a y que los ribosomas L13a deficientes son competentes para la actividad de traducci&#xF3;n global. Monoc&#xED;tica humana U937 c&#xE9;lulas fueron transfectadas establemente con dos secuencias diferentes para shRNA L13a y clonal seleccionado para la abrogaci&#xF3;n m&#xE1;s del 98% de expresi&#xF3;n L13a total. Etiquetado metab&#xF3;lica de estas c&#xE9;lulas mostraron rescate de traducci&#xF3;n Cp de la actividad silenciamiento de IFN-gamma mediada traslacional. El agotamiento de los L13a provoc&#xF3; una reducci&#xF3;n significativa de la metilaci&#xF3;n del ARN ribosomal y de la tapa independiente mediada por traducci&#xF3;n de sitio interno de entrada al ribosoma (IRES) elementos derivados de p27, p53, y mRNAs SNAT2. Sin embargo, no hubo diferencias significativas en el procesamiento del ARN ribosomal, la formaci&#xF3;n de polisomas, la actividad de traducci&#xF3;n global, la fidelidad, la traducci&#xF3;n y la proliferaci&#xF3;n celular se observaron entre las c&#xE9;lulas de control L13a deficientes y de tipo salvaje. Estos resultados apoyan la noci&#xF3;n de que el ribosoma puede servir como un dep&#xF3;sito para los factores de traducci&#xF3;n-normativos liberables no relacionadas con su funci&#xF3;n b&#xE1;sica polip&#xE9;ptido sint&#xE9;tico. A diferencia de las c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros, el hom&#xF3;logo L13a en la levadura es indispensable para el crecimiento. Por lo tanto, L13a pueden haber evolucionado a partir de una prote&#xED;na esencial de ribosomas en eucariotas inferiores a tener un papel como extra-prescindible ribosomal funci&#xF3;n en eucariotas superiores.

L13a prote&#xED;na ribosomal humano es prescindible para la funci&#xF3;n can&#xF3;nica ribosoma, pero indispensable para la metilaci&#xF3;n rRNA eficiente

Anton A. Komar

Center for Gene Regulation in Health and Disease,
Department of Biological,
Geological and Environmental Sciences,
Center for Gene Regulation in Health and Disease, Department of Biological, Geological and Environmental Sciences

Cleveland State University

Isolation of Ribosome Bound Nascent Polypeptides in vitro to Identify Translational Pause Sites Along mRNA

Using SecM Arrest Sequence as a Tool to Isolate Ribosome Bound Polypeptides