production-lentiviral-vectors-for-transducing-cells-from-central

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

Efficient gene delivery in the central nervous system (CNS) is important in studying gene functions, modeling neurological diseases and developing ...

Washington University School of Medicine

&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684; CpG &#x5E8F;&#x5217;&#x4E2D;&#x7684; cytosines &#x662F;&#x5728;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8868;&#x89C2;&#x9057;&#x4F20;&#x8C03;&#x63A7;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x5728;&#x764C;&#x75C7;&#x3001; de novo &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x690D;&#x7269;&#xFF0C;&#x77ED; RNAs &#x540C;&#x6E90; DNA &#x5E8F;&#x5217;&#x5DF2;&#x77E5;&#x542F;&#x52A8; de novo &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;&#x8C03;&#x67E5;&#x662F;&#x5426;&#x77ED;&#x53D1;&#x5939; Rna &#xFF08;shRNAs&#xFF09; &#x4E5F;&#x53EF;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x542F;&#x52A8;&#x5668;&#x7684; de novo &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x793A;&#x77ED;&#x53D1;&#x5939; Rna &#x5BF9; CpG &#x5C9B;&#x5728;&#x5185;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x548C;&#x65E9;&#x671F;&#x4EBA;&#x7C7B; RASSF1A &#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x8865;&#x5145;&#x3002;&#x800C;&#x5728;&#x4E00;&#x4E9B;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x884C;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982; HeLa&#xFF0C;RASSF1A unmethylated &#x548C;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x79EF;&#x6781; RASSF1A &#x5C06;&#x7F16;&#x7801;&#x662F;&#x5728;&#x591A;&#x79CD;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x764C;&#x75C7;&#xFF0C;hypermethylated &#x7684;&#x5047;&#x5B9A;&#x6291;&#x764C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; shRNAs RASSF1A &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x6216;&#x65E9;&#x671F;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#x4E92;&#x8865;&#x53EF;&#x4EE5;&#x76F4;&#x63A5; de novo DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x548C;&#x90E8;&#x5206;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x5728;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F4E;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x7A9D;&#x85CF;&#x56DB;&#x4E2A;&#x4E2D;&#x592E;&#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#x4E0E;&#x76EE;&#x6807; shRNA &#x4E0D;&#x80FD;&#x76F4;&#x63A5;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x3002;&#x63D0;&#x4EA4;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x901A;&#x8FC7; DNA &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5728;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x6311;&#x8845;&#x6F5C;&#x5728;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x77ED;&#x53D1;&#x5939; RNA &#x9488;&#x5BF9;&#x80DE;&#x5627;&#x5576; (CpG) &#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5728;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D; RASSF1A &#x57FA;&#x56E0;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x3002;

Methylation of cytosines in CpG motifs is an important mechanism for epigenetic regulation of gene expression in mammalian cells. The initiating event(s) for de novo methylation in mammalian cells, particularly in cancer, is unknown. In plants, short RNAs homologous to DNA sequences are known to initiate de novo methylation. To investigate whether short hairpin RNAs (shRNAs) may also serve as initiators for de novo methylation in human cells we have expressed short hairpin RNAs complementary to the CpG island including the promoter and early transcribed regions of the human RASSF1A gene. RASSF1A encodes a putative tumor suppressor that is hypermethylated in a variety of human cancers, whereas in some human cell lines, such as HeLa, RASSF1A is unmethylated and transcriptionally active. We demonstrate that shRNAs complementary to the RASSF1A promoter or early transcribed regions can direct low levels of de novo DNA methylation and partial gene silencing in HeLa cells. In contrast, an shRNA harboring four central mismatches with the target cannot direct such methylation. The results presented suggest provocative potential mechanisms for transcriptional gene silencing via DNA methylation in cancer cells.

Short hairpin RNA-directed cytosine (CpG) methylation of the RASSF1A gene promoter in HeLa cells.

La m&#xE9;thylation de cytosines dans des motifs CpG est un m&#xE9;canisme important pour la r&#xE9;gulation &#xE9;pig&#xE9;n&#xE9;tique de l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes dans les cellules de mammif&#xE8;res. L&#x26;#39;&#xE9;v&#xE9;nement initiateur (s) pour la m&#xE9;thylation de novo dans les cellules de mammif&#xE8;res, en particulier dans le cancer, est inconnue. Chez les plantes, les ARN courts homologues &#xE0; des s&#xE9;quences d&#x26;#39;ADN sont connus pour d&#xE9;clencher la m&#xE9;thylation de novo. Afin de d&#xE9;terminer si les ARN en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux courts (shRNA) peut aussi servir comme initiateurs pour la m&#xE9;thylation de novo dans les cellules humaines que nous avons exprim&#xE9;es ARN en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux courts compl&#xE9;mentaires &#xE0; l&#x26;#39;&#xEE;lot CpG, y compris le promoteur et au d&#xE9;but de r&#xE9;gions transcrites du g&#xE8;ne humain RASSF1A. RASSF1A code pour un suppresseur de tumeur putatif qui est hyperm&#xE9;thyl&#xE9;e dans une vari&#xE9;t&#xE9; de cancers humains, alors que dans certaines lign&#xE9;es cellulaires humaines, telles que HeLa, RASSF1A est non m&#xE9;thyl&#xE9; et transcriptionnellement actif. Nous d&#xE9;montrons que shRNA compl&#xE9;mentaires au promoteur ou au d&#xE9;but de RASSF1A r&#xE9;gions transcrites peuvent diriger de faibles niveaux de m&#xE9;thylation d&#x26;#39;ADN de novo et le silen&#xE7;age g&#xE9;nique partielle dans les cellules HeLa. En revanche, un shRNA h&#xE9;berger quatre centrales inad&#xE9;quations avec la cible ne peut pas diriger une telle m&#xE9;thylation. Les r&#xE9;sultats pr&#xE9;sent&#xE9;s sugg&#xE8;rent provocatrices des m&#xE9;canismes potentiels pour gene silencing transcriptionnel via m&#xE9;thylation de l&#x26;#39;ADN dans les cellules canc&#xE9;reuses.

Court en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux d&#x26;#39;ARN dirig&#xE9;e Cytosine (CpG) m&#xE9;thylation du promoteur du g&#xE8;ne dans les cellules HeLa RASSF1A

Kurze Haarnadel-RNA-gerichtete Cytosin (CpG) Methylierung des RASSF1A Gen-Promotor in HeLa-Zellen.

La metilazione di cytosines in motivi CpG &egrave; un importante meccanismo per la regolazione epigenetica dell&#39;espressione genica in cellule di mammifero. Gli eventi di avvio per de novo metilazione nelle cellule dei mammiferi, in particolare nel cancro, sono sconosciuto. Nelle piante, breve RNAs omologhe alle sequenze del DNA sono noti per avviare de novo metilazione. Per indagare se short hairpin RNAs (shRNAs) pu&ograve; anche fungere da iniziatori per de novo metilazione nelle cellule umane abbiamo espresso short hairpin RNAs complementari all&#39;isola CpG compreso il promotore e primi regioni trascritti del gene umano RASSF1A. RASSF1A codifica un soppressore tumorale putativo che &egrave; hypermethylated in una variet&agrave; di tumori umani, considerando che in alcune linee cellulari umane, come ad esempio HeLa, RASSF1A &egrave; transcriptionally active e non metilato. Dimostriamo che shRNAs complementari al promotore di RASSF1A o prime regioni trascritti pu&ograve; dirigere bassi livelli di metilazione del DNA di de novo e silenziamento genico parziale in cellule HeLa. Al contrario, un shRNA harboring quattro disadattamento centrale con l&#39;obiettivo non pu&ograve; dirigere tale metilazione. I risultati presentati suggeriscono provocatori possibili meccanismi per silenziamento genico transcriptional tramite metilazione del DNA nelle cellule tumorali.

Metilazione Short hairpin RNA-diretto citosina (CpG) del promotore del gene RASSF1A in cellule HeLa.

CpG&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306E;&#x30B7;&#x30C8;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30A8;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A7;&#x30CD;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30AF;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x764C;&#x306E;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;de novo&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF08;s&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x690D;&#x7269;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x76F8;&#x540C;DNA&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;RNA&#x306F;&#x3001;de novo&#x306E;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x77ED;&#x3044;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;RNA&#xFF08;shRNA&#xFF09;&#x3082;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;de novo&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306E;&#x30A4;&#x30CB;&#x30B7;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x50CD;&#x304F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;RASSF1A&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x8EE2;&#x5199;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x542B;&#x3080;CpG&#x30A2;&#x30A4;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C9;&#x3068;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;&#x77ED;&#x9396;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;RNA&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; RASSF1A&#x306F;&#x3001;HeLa&#x7D30;&#x80DE;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3067;&#x306F;&#x3001;RASSF1A&#x306F;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x764C;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x63A8;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x6291;&#x5236;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;RASSF1A&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x65E9;&#x671F;&#x306B;&#x8EE2;&#x5199;&#x9818;&#x57DF;&#x3068;&#x76F8;&#x88DC;&#x7684;&#x306A;shRNA&#x306E;&#x306F;&#x306E;de novo DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3068;HeLa&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4F4E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;4&#x3064;&#x306E;&#x4E2D;&#x592E;&#x306E;&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x3092;&#x62B1;&#x3044;shRNA&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x6307;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;DNA&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x5F8C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6311;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

HeLa&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RASSF1A&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;RNA&#x6307;&#x5411;&#x6027;&#x30B7;&#x30C8;&#x30B7;&#x30F3;&#xFF08;CPG&#xFF09;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;

&#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; CpG &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; cytosines&#xC758; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; epigenetic &#xADDC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC554;, &#xD2B9;&#xD788;&#xC5D0; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2DC;&#xC791; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xC54C; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC2DD;&#xBB3C;, &#xC9E7;&#xC740; RNAs DNA &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB3D9;&#xC885; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xB97C; &#xC2DC;&#xC791;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9E7;&#xC740; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; RNAs (shRNAs) &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD08;&#xAE30;&#xC790;&#xB3C4;&#xB3C4; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC5EC;&#xBD80;&#xB97C; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9E7;&#xC740; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; Rnas&#xB97C; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xB4F1; &#xCD08;&#xAE30; &#xBCA0;&#xB080;&#xB41C; &#xC601;&#xC5ED; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; RASSF1A &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; CpG &#xC12C;&#xC5D0; &#xBB34;&#xB8CC;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD5EC;&#xB7EC;, &#xB4F1; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778; rassf1a&#xB294; unmethylated &#xBC0F; transcriptionally &#xD65C;&#xC131; RASSF1A &#xC778;&#xAC04; &#xC554;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; hypermethylated&#xC740; &#xC0C1; &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C;&#xAE30;&#xB97C; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. ShRNAs RASSF1A &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xB610;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; &#xBCA0;&#xB080;&#xB41C; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xBB34;&#xB8CC; &#xB4DC; &#xB178; &#xBCF4; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654; &#xBC0F; &#xBD80;&#xBD84; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35; HeLa &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC911;&#xC559; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58;&#xB97C; &#xC740;&#xB2C9; &#xD55C; shRNA &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xB97C; &#xC9C1;&#xC811; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC81C;&#xC2DC; &#xACB0;&#xACFC; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; DNA &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; transcriptional &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE68;&#xBB35;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C4;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

HeLa &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; RASSF1A &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xD5E4;&#xC5B4;&#xD540; RNA &#xAC10;&#xB3C5; &#xC2DC; (&#xD3EC;&#xC7A5; &#xC18C;&#xBE44;&#xC7AC;) &#xBA54; &#xD2F8; &#xD654;.

La metilaci&#xF3;n de las citosinas en motivos CpG es un mecanismo importante para la regulaci&#xF3;n epigen&#xE9;tica de la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero. El evento inicial (s) para la metilaci&#xF3;n de novo en c&#xE9;lulas de mam&#xED;feros, en particular en el c&#xE1;ncer, se desconoce. En las plantas, ARN cortos hom&#xF3;logas a las secuencias de ADN son conocidos para iniciar la metilaci&#xF3;n de novo. Para investigar si los ARN horquilla corta (shRNAs) puede servir tambi&#xE9;n como iniciadores para la metilaci&#xF3;n de novo en c&#xE9;lulas humanas que han expresado ARN horquilla corta complementarios a la isla CpG incluyendo el promotor y las primeras regiones transcritas del gen humano RASSF1A. RASSF1A codifica un supresor tumoral putativo que es hypermethylated en una variedad de c&#xE1;nceres humanos, mientras que en algunas l&#xED;neas celulares humanas, tales como HeLa, se unmethylated RASSF1A y activo transcripcionalmente. Se demuestra que shRNAs complementarias al promotor RASSF1A o primeras regiones transcritas puede dirigir los bajos niveles de metilaci&#xF3;n de ADN novo y el silenciamiento de genes parcial en c&#xE9;lulas HeLa. Por el contrario, una shRNA albergar cuatro desajustes centrales con el objetivo no puede dirigir la metilaci&#xF3;n tal. Los resultados presentados sugieren provocativas posibles mecanismos para el silenciamiento transcripcional de genes a trav&#xE9;s de la metilaci&#xF3;n del ADN en las c&#xE9;lulas cancerosas.

Corto horquilla de ARN dirigida por citosina (CPG) La metilaci&#xF3;n del promotor del gen RASSF1A en c&#xE9;lulas HeLa

&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4EA4;&#x4ED8; siRNA &#x548C; shRNA &#x57FA;&#x56E0;&#x7F16;&#x7801;&#x5230;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x548C;&#x4E3B;&#x3002;

Lentiviral vector delivery of siRNA and shRNA encoding genes into cultured and primary hematopoietic cells.

Livraison vecteur lentiviral de siRNA et shRNA dans des g&#xE8;nes codant de culture et de la Premi&#xE8;re cellules h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques

Lentiviralen Vektors Verabreichung von siRNA und shRNA kodierenden Gene in kultivierte und prim&#xE4;ren h&#xE4;matopoetischen Zellen.

Consegna del vettore lentivirale di siRNA e shRNA codifica geni nelle cellule ematopoietiche colture e primarie.

&#x57F9;&#x990A;&#x3057;&#x3001;&#x521D;&#x4EE3;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;siRNA&#x3084;shRNA&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30EA;&#x30FC;

Lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xBC30;&#xB2EC; siRNA shRNA &#xAD50;&#xC591; &#xBC0F; &#xC8FC; &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC778;&#xCF54;&#xB529;

Entrega del vector lentiviral siRNA y shRNA genes de codificaci&#xF3;n en las c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas cultivadas y Primaria

RNA &#x5E72;&#x6270;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; Rna (siRNAs) &#x8F93;&#x5165; RNA &#x8BF1;&#x5BFC;&#x6C89;&#x9ED8;&#x590D;&#x6742;&#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x7684;&#x963F;&#x8033;&#x6208;&#x82F1;&#x96C4; 2 &#x86CB;&#x767D;&#x6307;&#x5BFC;&#x7684;&#x76EE;&#x6807; RNA &#x88C2;&#x89E3;&#x3002;&#x5F53;&#x5E94;&#x7528; siRNAs &#x6216;&#x8868;&#x793A;&#x5C0F;&#x53D1;&#x5939; RNAs &#xFF08;shRNAs&#xFF09; &#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x5316;&#x7684;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20; &#xFF08;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#xFF09; &#x54CD;&#x5E94;&#x5F15;&#x8D77;&#x91CD;&#x5927;&#x5173;&#x6CE8;&#x3002;&#x5408;&#x6210; siRNAs &#x7A9D;&#x85CF;&#x67D0;&#x4E9B;&#x56FE;&#x6848;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x514D;&#x75AB;&#x5E94;&#x7B54;&#x65F6;&#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x9F20;&#x6807;&#x548C;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x5355;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x6D46;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6837;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; (Pdc) &#x548C; nonplasmacytoid &#x7B49;&#x4EBA;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6811;&#x7A81;&#x72B6;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;mDCs&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E0E; Pol III &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x8868;&#x793A; shRNAs &#x5728;&#x5C0F;&#x5B66; /cd34 + &#x7956;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8102;&#x8D28;&#x4EA4;&#x4ED8; siRNAs &#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x6B64;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x8102;&#x8D28;&#x4EA4;&#x4ED8; siRNAs &#x662F;&#x70C8;&#x6027;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x8F6E;&#x7684; IFNalpha &#x548C; I &#x578B;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x800C;&#x76F8;&#x540C;&#x5E8F;&#x5217;&#x8868;&#x793A;&#x6B65;&#x4E4B;&#x9065;&#x65F6;&#x662F; nonimmunostimulatory&#x3002;

ShRNAs /cd34 + &#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7A33;&#x5B9A;&#x8868;&#x8FBE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x907F;&#x514D;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x4F53;&#x5916;&#x7684; siRNAs &#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x3002;

RNA interference occurs when cytoplasmic small interfering RNAs (siRNAs) enter the RNA-induced silencing complex and one strand guides cleavage of the target RNA by the Argonaute 2 protein. A significant concern when applying siRNAs or expressing small hairpin RNAs (shRNAs) in human cells is activation of the interferon (IFN) response. Synthetic siRNAs harboring certain motifs can induce an immune response when delivered to mouse and human immune cells such as peripheral blood mononuclear cells, monocytes, plasmacytoid dendritic cells (pDCs) and nonplasmacytoid dendritic cells (mDCs). In the present study we have tested the immunostimulatory effects of lipid-delivered siRNAs versus Pol III promoter-expressed shRNAs in primary CD34+ progenitor-derived hematopoietic cells. We show that in this system, lipid-delivered siRNAs are potent inducers of IFNalpha and type I IFN gene expression, whereas the same sequences when expressed endogenously are nonimmunostimulatory.

Stable expression of shRNAs in human CD34+ progenitor cells can avoid induction of interferon responses to siRNAs in vitro.

ARN interf&#xE9;rence se produit lorsque cytoplasmiques de petits ARN interf&#xE9;rents (siRNA) entrer dans le complexe RNA silencing induit et un brin guides de clivage de l&#x26;#39;ARN cible par l&#x26;#39;Argonaute 2 protein. Une pr&#xE9;occupation importante lors de l&#x26;#39;application des siRNA ou d&#x26;#39;exprimer des ARN en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux (shRNA petits) dans les cellules humaines est l&#x26;#39;activation de l&#x26;#39;interf&#xE9;ron (IFN) de r&#xE9;ponse. SiRNA synth&#xE9;tiques abritant certains motifs peuvent induire une r&#xE9;ponse immunitaire lors de la livraison &#xE0; la souris et les cellules immunitaires humaines telles que les cellules mononucl&#xE9;&#xE9;es du sang p&#xE9;riph&#xE9;rique, les monocytes, cellules dendritiques plasmacyto&#xEF;des (pDC) et nonplasmacytoid cellules dendritiques (MDC). Dans la pr&#xE9;sente &#xE9;tude, nous avons test&#xE9; les effets immunostimulants de lipides livr&#xE9;s siRNA contre Pol III promoteur exprim&#xE9;es dans shRNA primaires prog&#xE9;nitrices CD34 + d&#xE9;riv&#xE9;s de cellules h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques. Nous montrons que dans ce syst&#xE8;me, les lipides livr&#xE9;s siRNA sont de puissants inducteurs de IFNalpha et de type I expression des g&#xE8;nes IFN, alors que les m&#xEA;mes s&#xE9;quences lorsqu&#x26;#39;elles sont exprim&#xE9;es de mani&#xE8;re endog&#xE8;ne sont nonimmunostimulatory.

Une expression stable de shRNA dans l&#x26;#39;homme CD34 + de cellules prog&#xE9;nitrices peuvent &#xE9;viter l&#x26;#39;induction de r&#xE9;ponses interf&#xE9;ron siRNA dans In Vitro

RNA-Interferenz tritt auf, wenn der zytoplasmatischen kleine interferierender RNAs (SiRNAs) geben Sie den RNA-induced Schweigen zu komplex und ein Strang Spaltung der Ziel-RNA durch das Argonaut-2-Protein f&uuml;hrt. Eine erhebliche Sorge, wenn die SiRNAs anwenden oder zum Ausdruck bringen kleine Haarnadel RNAs (ShRNAs) in den menschlichen Zellen Aktivierung der Interferon (IFN) Antwort ist. Synthetische SiRNAs beherbergen bestimmte Motive kann eine Immunantwort bei Maus und menschliche Immunzellen wie peripheren mononukle&auml;ren Blutzellen, Monozyten, Plasmacytoid dendritische Zellen (pDCs) und Nonplasmacytoid dendritische Zellen (MDC) hervorrufen. In der vorliegenden Studie haben wir die immunstimulierendes Wirkungen von Lipid-geliefert SiRNAs gegen Pol III Projekttr&auml;ger ausgedr&uuml;ckt ShRNAs in prim&auml;ren CD34 + Stammvater gewonnenen h&auml;matopoetischen Zellen untersucht. Wir zeigen, dass in diesem System Lipid-geliefert SiRNAs potente Induktoren der IFNalpha sind und Typ I IFN-Genexpression, w&auml;hrend die gleichen Sequenzen endogen ausgedr&uuml;ckt sind Nonimmunostimulatory.

Stabile Ausdruck von ShRNAs in menschlichen CD34 + Vorl&auml;uferzellen kann Induktion von Interferon Antworten zu SiRNAs in-vitro-vermeiden.

Interferenza del RNA si verifica quando citoplasmatica piccolo RNAs d&#39;interferenza (siRNAs) immettere il RNA-induced silencing complex e un filo guida clivaggio del target RNA dalla proteina Argonaute 2. Una preoccupazione significativa quando applicando siRNA o esprimendo tornante piccolo RNAs (shRNAs) nelle cellule umane &egrave; l&#39;attivazione della risposta di interferone (IFN). SiRNA sintetici harboring determinati motivi possono indurre una risposta immunitaria quando consegnato al mouse e cellule immunitarie umane come cellule mononucleate di sangue periferico, monociti, plasmacytoid le cellule dendritiche (pDCs) e nonplasmacytoid dendritiche cells (MDC). Nel presente studio abbiamo testato gli effetti immunostimolante del lipido-consegnato siRNAs versus Pol III promotore-espresso shRNAs in primarie CD34 + progenitrici ematopoietiche cellule derivate. Mostriamo che in questo sistema, lipido-consegnato siRNAs sono potenti induttori di IFNalpha ed espressione del gene IFN di tipo I, considerando che le stesse sequenze quando espresso in modo endogeno sono nonimmunostimulatory.

Espressione stabile di shRNAs in cellule umane CD34 + progenitore pu&ograve; evitare di induzione di risposte di interferone a siRNA in vitro.

&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;siRNA&#xFF09;&#x304C;RNA&#x8A98;&#x5C0E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30CE;&#x30FC;&#x30C8;2&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6A19;&#x7684;RNA&#x306E;&#x4E00;&#x65B9;&#x306E;&#x9396;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C9;&#x5207;&#x65AD;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;RNA&#x5E72;&#x6E09;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; siRNA&#x3092;&#x9069;&#x7528;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;RNA&#xFF08;shRNA&#xFF09;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x95A2;&#x5FC3;&#x4E8B;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#xFF08;IFN&#xFF09;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3084;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x5358;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x5358;&#x7403;&#x3001;&#x5F62;&#x8CEA;&#x7D30;&#x80DE;&#x69D8;&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;PDC&#xFF09;&#x3068;nonplasmacytoid&#x6A39;&#x72B6;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;MDC&#xFF09;&#x304C;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x914D;&#x4FE1;&#x6642;&#x306B;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x4FDD;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x5408;&#x6210;siRNA&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;CD34 +&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;Pol III&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;shRNA&#x5BFE;&#x8102;&#x8CEA;&#x3088;&#x308A;siRNA&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x540C;&#x3058;&#x914D;&#x5217;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;&#x5185;&#x751F;&#x7684;&#x306B;nonimmunostimulatory&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8102;&#x8CEA;&#x3088;&#x308A;siRNA&#x306F;IFNalpha&#x3068;I&#x578B;IFN&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;CD34 +&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;shRNA&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x767A;&#x73FE;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x306E;siRNA&#x306B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30ED;&#x30F3;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;

RNA &#xAC04;&#xC12D; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC791;&#xC740; &#xBC29;&#xD574; RNAs (siRNAs) &#xC785;&#xB825; RNA &#xC720;&#xB3C4; 2 Argonaute &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB300;&#xC0C1; RNA&#xC758; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC744; &#xAC00;&#xC774;&#xB4DC; &#xC785;&#xC744; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD558; &#xACE0; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2E5;. Sirnas&#xB97C; &#xC801;&#xC6A9; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC791;&#xC740; &#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; RNAs (shRNAs) &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xB294; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; (IFN) &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB54C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAD00;&#xC2EC;&#xC0AC; &#xD2B9;&#xC815; &#xC8FC;&#xC81C;&#xB97C; &#xD488;&#xACE0; &#xD569;&#xC131; siRNAs &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (mDCs) &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBC0F; &#xB9D0; &#xCD08; &#xD608;&#xC561; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC;, monocytes, plasmacytoid &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; (pDCs)&#xC640; nonplasmacytoid &#xB4F1; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xBCF8; CD34 + &#xC2DC; &#xC870; &#xC720;&#xB798; &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; Pol III &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xD45C;&#xD604; shRNAs &#xB300; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xBC30;&#xB2EC; Sirnas&#xC758; immunostimulatory &#xD6A8;&#xACFC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xC9C8; &#xC804;&#xB2EC; siRNAs Ifnalpha&#xC758; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; inducers&#xB294; &#xC785;&#xB825; &#xB098; IFN &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;, &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; endogenously &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xBC18;&#xBA74; nonimmunostimulatory&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; CD34 + Shrnas&#xC758; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC2DD; siRNAs &#xCCB4; &#xC678; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xB860; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xC720;&#xB3C4; &#xD53C;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La interferencia de ARN ocurre cuando citoplasm&#xE1;ticos peque&#xF1;os RNAs de interferencia (siRNAs) entrar en el complejo de silenciamiento inducido por ARN y una cadena de divisi&#xF3;n de las gu&#xED;as de ARN diana de la prote&#xED;na Argonauta 2. Una preocupaci&#xF3;n importante en la aplicaci&#xF3;n siRNAs o expresando peque&#xF1;os ARN de horquilla (shRNAs) en las c&#xE9;lulas humanas es la activaci&#xF3;n del interfer&#xF3;n (IFN) de respuesta. SiRNAs sint&#xE9;ticos que albergan ciertos motivos pueden inducir una respuesta inmune cuando se entrega al rat&#xF3;n y las c&#xE9;lulas inmunes como las c&#xE9;lulas mononucleares de sangre perif&#xE9;rica, los monocitos, c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas plasmocitoides (PDC) y nonplasmacytoid c&#xE9;lulas dendr&#xED;ticas (mDCs). En el presente estudio se han probado los efectos inmunoestimulantes de los l&#xED;pidos entregados siRNAs contra Pol III promotor expresadas shRNAs en primarias CD34 + derivadas de c&#xE9;lulas progenitoras, las c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas. Se demuestra que en este sistema, los l&#xED;pidos entregados siRNAs son potentes inductores de IFNalpha tipo I y la expresi&#xF3;n de genes de IFN, mientras que las mismas secuencias cuando son expresadas end&#xF3;genamente nonimmunostimulatory.

Expresi&#xF3;n estable de shRNAs en humanos CD34 + c&#xE9;lulas progenitoras se puede evitar la inducci&#xF3;n de las respuestas de interfer&#xF3;n de siRNAs en Vitro

&#x7EC4;&#x5408;&#x7597;&#x6CD5;&#x4E3A;&#x6CBB;&#x7597;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x66F4;&#x6539;&#x4E86;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x5728;&#x53D1;&#x8FBE;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x6297;&#x75C5;&#x6BD2;&#x836F;&#x7269;&#x7EC4;&#x5408;&#x5728;&#x54EA;&#x91CC;&#x73B0;&#x6210;&#x7684;&#x8BFE;&#x7A0B;&#x3002;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x5C55;&#xFF0C;&#x6709;&#x5316;&#x7597;&#x5305;&#x62EC;&#x6BD2;&#x6027;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x8010;&#x836F;&#x7684;&#x51FA;&#x73B0;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x9020;&#x8840;&#x57FA;&#x56E0;&#x7597;&#x6CD5;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x50CF;&#x5316;&#x7597;&#xFF0C;&#x5E94; combinatorially &#x7528;&#x57FA;&#x56E0;&#x7597;&#x6CD5;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x56E0;&#x6B64;&#x5DF2;&#x5408;&#x5E76;&#x4E3A;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x9AA8;&#x5E72;&#x5230;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x8FDB;&#x884C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8FBE;/&#x51AF;&#x5206;&#x6CCC;&#x3001; &#x6838;&#x4EC1;&#x7684;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x8BF1;&#x9975;&#xFF0C;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x548C;&#x56FA;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; Tat &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x548C;&#x6838;&#x9176;&#x539F;&#x5219;&#x6027;&#x548C;&#x75C5;&#x6BD2;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7528;&#x4E8E;&#x8702;&#x7A9D;&#x6761;&#x76EE;&#x7684; CCR5 &#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x77ED;&#x53D1;&#x5939; RNA &#x901A;&#x8FC7; RNAi&#x3002;&#x8FD9;&#x4E09;&#x79CD;&#x7EC4;&#x5408;&#x5DF2;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x975E;&#x5E38;&#x6709;&#x6548;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5728;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#xFF0C;&#x76EE;&#x524D;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x8F68;&#x9053;&#x4E0A;&#x3002;

Rnai &#x6280;&#x672F;&#x4E0E;&#x6838;&#x9176;&#x548C;&#x7126;&#x6CB9;&#x8BF1;&#x9975;&#x5BF9;&#x6CBB;&#x7597;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x6CBB;&#x7597;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x3002;

Combinatorial therapies for the treatment of HIV infection have changed the course of the AIDS epidemic in developed nations where the antiviral drug combinations are readily available. Despite this progress, there are many problems associated with chemotherapy for AIDS including toxicities and emergence of viral mutants resistant to the drugs. Our goal has been the development of a hematopoietic gene therapy treatment for HIV infection. Like chemotherapy, gene therapy for treatment of HIV infection should be used combinatorially. We have thus combined three different inhibitory genes for treatment of HIV infection into a single lentiviral vector backbone. The inhibitory agents engage RNAi via a short hairpin RNA targeting HIV tat/rev mRNAs, a nucleolar localizing decoy that binds and sequesters the HIV Tat protein, and a ribozyme that cleaves and downregulates the CCR5 chemokine receptor used by HIV for cellular entry. This triple combination has proven to be highly effective for inhibiting HIV replication in primary hematopoietic cells, and is currently on track for human clinical application.

RNAi in combination with a ribozyme and TAR decoy for treatment of HIV infection in hematopoietic cell gene therapy.

Th&#xE9;rapies combinatoires pour le traitement de l&#x26;#39;infection par le VIH ont chang&#xE9; le cours de l&#x26;#39;&#xE9;pid&#xE9;mie de sida dans les pays d&#xE9;velopp&#xE9;s o&#xF9; les combinaisons de m&#xE9;dicaments antiviraux sont facilement disponibles. Malgr&#xE9; ces progr&#xE8;s, il ya de nombreux probl&#xE8;mes associ&#xE9;s &#xE0; la chimioth&#xE9;rapie pour les toxicit&#xE9;s et SIDA, y compris l&#x26;#39;&#xE9;mergence de mutants viraux r&#xE9;sistants aux m&#xE9;dicaments. Notre objectif a &#xE9;t&#xE9; le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;un traitement par th&#xE9;rapie g&#xE9;nique h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tique l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH. Comme la chimioth&#xE9;rapie, la th&#xE9;rapie g&#xE9;nique pour le traitement de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH doit &#xEA;tre utilis&#xE9; de fa&#xE7;on combinatoire. Nous avons donc combin&#xE9; trois diff&#xE9;rents g&#xE8;nes inhibiteurs pour le traitement de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH dans un squelette de vecteur lentiviral unique. Les agents inhibiteurs engager ARNi en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux d&#x26;#39;ARN par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;un court de ciblage tat du VIH / rev ARNm, un leurre nucl&#xE9;olaire localisation qui les lie et s&#xE9;questre la prot&#xE9;ine Tat du VIH, et un ribozyme qui clive et r&#xE9;gule &#xE0; la baisse le r&#xE9;cepteur de chimiokine CCR5 utilis&#xE9; par le VIH pour l&#x26;#39;entr&#xE9;e cellulaire. Cette triple combinaison s&#x26;#39;est av&#xE9;r&#xE9;e tr&#xE8;s efficace pour inhiber la r&#xE9;plication du VIH dans des cellules primaires h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques, et est actuellement sur la bonne voie pour l&#x26;#39;application clinique humaine.

ARNi en combinaison avec un ribozyme et Decoy TAR pour le traitement de l&#x26;#39;infection &#xE0; VIH en th&#xE9;rapie cellulaire h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tique Gene

Kombinatorische Therapien zur Behandlung der HIV-Infektion haben den Lauf der AIDS-Epidemie in entwickelten Nationen ver&auml;ndert, wo die Virostatikum-Kombinationen verf&uuml;gbar sind. Trotz dieser Fortschritte gibt es viele Probleme im Zusammenhang mit Chemotherapie f&uuml;r AIDS einschlie&szlig;lich Toxizit&auml;ten und Entstehung der viralen Mutanten, die resistent gegen die Medikamente. Unser Ziel war die Entwicklung einer h&auml;matopoetischen gen-Therapie-Behandlung f&uuml;r HIV-Infektion. Wie Chemotherapie sollten combinatorially Gentherapie zur Behandlung der HIV-Infektion verwendet werden. Wir haben also drei verschiedene hemmende Gene zur Behandlung der HIV-Infektion in einem einzigen Lentiviralen Vektor-Backbone kombiniert. Die hemmenden Agenten engagieren RNAi &uuml;ber eine kurze Haarnadel-RNA, HIV Tat/Umdrehung mRNAs, ein nukleol&auml;res Lokalisierung von K&ouml;der, der bindet und das HIV-Tat-Protein, Sequester und ein Ribozym, das spaltet und Downregulates den CCR5-Chemokin-Rezeptor von HIV f&uuml;r zellul&auml;re Eintrag verwendet. Diese dreifache Kombination erweist sich als sehr wirksam f&uuml;r die HIV-Replikation in prim&auml;ren blutbildender Zellen hemmt und ist derzeit auf der Strecke f&uuml;r die menschliche klinische Anwendung.

RNAi in Kombination mit einem Ribozym und TAR K&ouml;der zur Behandlung der HIV-Infektion in h&auml;matopoetischen Zellen Gentherapie.

Combinatoriale terapie per il trattamento dell&#39;infezione da HIV hanno cambiato il corso dell&#39;epidemia di AIDS nei paesi sviluppati, dove la combinazioni di farmaci antivirali sono prontamente disponibili. Nonostante questo progresso, ci sono molti problemi associati alla chemioterapia per AIDS tra cui tossicit&agrave; e comparsa di mutanti virali resistenti ai farmaci. Il nostro obiettivo &egrave; stato lo sviluppo di un trattamento di terapia genica ematopoietiche per l&#39;infezione da HIV. Come la chemioterapia, terapia genica per il trattamento dell&#39;infezione da HIV deve essere utilizzata combinatoriamente. Cos&igrave; abbiamo combinato tre diversi geni inibitori per il trattamento dell&#39;infezione da HIV in una spina dorsale singolo vettore lentivirale. Gli agenti inibitori impegnano RNAi attraverso una short hairpin RNA targeting HIV mRNAs tat/rev, un richiamo di localizzazione nucleolare che lega e sequestra la proteina Tat di HIV, e un ribozima che fende e sottoregola la CCR5 chemokine receptor utilizzata dall&#39;HIV per cellulare entry. Questa tripla combinazione ha dimostrato di essere altamente efficace per inibire la replicazione di HIV in cellule ematopoietiche primarie ed &egrave; attualmente in pista per applicazione clinica umana.

RNAi in combinazione con un ribozima e richiamo di catrame per il trattamento dell&#39;infezione da HIV in terapia genica delle cellule ematopoietiche.

HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x7D44;&#x5408;&#x305B;&#x7642;&#x6CD5;&#x306F;&#x3001;&#x6297;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x85AC;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x304C;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x5165;&#x624B;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x5148;&#x9032;&#x56FD;&#x3067;&#x30A8;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x6D41;&#x884C;&#x306E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x6BD2;&#x6027;&#x3084;&#x85AC;&#x5264;&#x306B;&#x8010;&#x6027;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x51FA;&#x73FE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30A8;&#x30A4;&#x30BA;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x306B;&#x4F34;&#x3046;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x306F;&#x3001;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5316;&#x5B66;&#x7642;&#x6CD5;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x5408;&#x305B;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x3053;&#x3067;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6291;&#x5236;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306F;&#x3001;HIV TAT / rev&#x306E;mRNA&#x304C;&#x3001;HIV Tat&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x9694;&#x96E2;&#x3057;&#x6838;&#x5C0F;&#x4F53;&#x306E;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AB;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BA;&#x30C7;&#x30B3;&#x30A4;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3092;HIV&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;CCR5&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x3092;&#x5207;&#x65AD;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x3092;&#x6A19;&#x7684;&#x3068;&#x77ED;&#x9396;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;RNA&#x3092;&#x7D4C;&#x7531;&#x3057;&#x3066;RNAi&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;HIV&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x6709;&#x52B9;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x5FDC;&#x7528;&#x306B;&#x5411;&#x3051;&#x3066;&#x9806;&#x8ABF;&#x306B;&#x73FE;&#x5728;&#x306F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;HIV&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30EA;&#x30DC;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;TAR&#x30C7;&#x30B3;&#x30A4;&#x3068;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;RNAi

&#xC870;&#xD569; &#xC694;&#xBC95; HIV &#xAC10;&#xC5FC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD56D; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC57D;&#xBB3C; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; &#xAD6D;&#xAC00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xC720;&#xD589; &#xBCD1;&#xC758; &#xCF54;&#xC2A4;&#xB97C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xB3C5;&#xC131; &#xBC0F; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131;&#xC758; &#xCD9C;&#xD604; &#xB4F1; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD654;&#xD559; &#xC694;&#xBC95;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB9CE;&#xC740; &#xBB38;&#xC81C;&#xAC00; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870; &#xD608; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC774;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD654;&#xD559; &#xC694;&#xBC95;, &#xCC98;&#xB7FC; combinatorially HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB2E8;&#xC77C; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xBC31;&#xBCF8;&#xC73C;&#xB85C; HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xACB0;&#xD569;. &#xAE08;&#xC9C0; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8; RNAi HIV &#xBB38;&#xC2E0;/&#xD68C;&#xC804; mRNAs, &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xACE0; HIV Tat &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; sequesters&#xB294; nucleolar &#xB85C;&#xCEEC;&#xB77C;&#xC774;&#xC81C;&#xC774;&#xC158; &#xBBF8;&#xB07C;&#xC640; &#xACE0;&#xB300;&#xC758; ribozyme downregulates CCR5 chemokine &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC138;&#xD3EC; &#xD56D;&#xBAA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; HIV&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xD305; &#xC9E7;&#xC740; &#xD5E4;&#xC5B4;&#xD540; RNA &#xD1B5;&#xD574; &#xCC38;&#xC5EC;. &#xC774; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xC870;&#xD569;&#xACFC; HIV &#xBCF5;&#xC81C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xD6A8;&#xACFC;&#xC801;&#xC778; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC785;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD604;&#xC7AC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B8;&#xB799; &#xC774;&#xB2E4;.

RNAi ribozyme &#xBC0F; &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;&#xC5D0; HIV &#xAC10;&#xC5FC;&#xC758; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xD0C0;&#xB974; &#xBBF8;&#xB07C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;.

Terapias combinatorias para el tratamiento de la infecci&#xF3;n por el VIH han cambiado el curso de la epidemia del SIDA en los pa&#xED;ses desarrollados, donde las combinaciones de medicamentos antivirales est&#xE1;n disponibles. A pesar de este progreso, hay muchos problemas asociados con la quimioterapia para el SIDA, incluyendo la toxicidad y la aparici&#xF3;n de virus mutantes resistentes a los medicamentos. Nuestro objetivo ha sido el desarrollo de un tratamiento de terapia g&#xE9;nica hematopoy&#xE9;ticas de la infecci&#xF3;n por VIH. Como la quimioterapia, la terapia g&#xE9;nica para el tratamiento de la infecci&#xF3;n por VIH se debe utilizar combinatoria. As&#xED; pues, hemos combinado tres genes diferentes inhibidores para el tratamiento de la infecci&#xF3;n por VIH en un vector columna vertebral lentiviral sola. Los agentes inhibidores de RNAi participar a trav&#xE9;s de un ARN de horquilla corta que atacan al virus tat / ARNm de revoluciones, un se&#xF1;uelo nucleolar localizaci&#xF3;n que se une y secuestra la prote&#xED;na Tat del VIH, y una ribozima que escinde y regula a la baja el receptor de quimiocinas CCR5 utilizado por el VIH para la entrada celular. Esta triple combinaci&#xF3;n ha demostrado ser muy eficaz para inhibir la replicaci&#xF3;n del VIH en las c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas primarias, y est&#xE1; en camino para la aplicaci&#xF3;n cl&#xED;nica humana.

ARNi en combinaci&#xF3;n con una ribozima y Decoy TIE para el tratamiento de la infecci&#xF3;n por VIH en la terapia g&#xE9;nica de c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas

&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x5F97;&#x4EE5;&#x6362;&#x80FD;&#x5668;&#x975E;&#x5206;&#x88C2;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4FDD;&#x6301;&#x6301;&#x7EED;&#x957F;&#x671F;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5927;&#x8111;&#x3001; &#x809D;&#x810F;&#x3001; &#x808C;&#x8089;&#x3001; &#x9020;&#x8840;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x529F;&#x67D3;&#x7684;&#x591A;&#x79CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C5E;&#x6027;&#x4F7F;&#x5165;&#x54FA;&#x4E73;&#x52A8;&#x7269;&#x7EC6;&#x80DE;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA (siRNA) &#x57FA;&#x56E0;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x6709;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x8F66;&#x8F86;&#x3002;Rna &#x805A;&#x5408;&#x9176; III (Pol III) &#x53D1;&#x8D77;&#x4EBA;&#x4E3A;&#x8868;&#x793A;&#x4ECE;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684; siRNAs &#x6700;&#x5E38;&#x7528;&#x3002;Pol III &#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8F83;&#x5C0F;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x4F7F;&#x7528;&#x7B80;&#x5355;&#x5730;&#x7EC8;&#x6B62;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x77ED;&#x7EF5;&#x5EF6;&#x7684;&#x7F8E;&#x56FD;&#x5B83;&#x662F;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x9AA8;&#x5E72;&#x6765;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684; siRNAs &#x6216; siRNAs &#x7ED3;&#x5408;&#x5176;&#x4ED6;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E2D;&#x5305;&#x542B;&#x51E0;&#x4E2A; Pol III &#x8868;&#x8FBE;&#x76D2;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7AE0;&#x7531;&#x57FA;&#x4E8E;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x4FC3;&#x8FDB; Pol III siRNAs &#x7684;&#x4EA4;&#x4ED8;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6DB5;&#x76D6;&#x77E2;&#x91CF;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3001; &#x751F;&#x4EA7;&#x3001; &#x548C;&#x6838;&#x67E5;&#x7684; siRNA &#x8868;&#x8FBE;&#x53CA;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x7AE0;&#x5E94;&#x9700;&#x8981;&#x957F;&#x671F;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x7684; siRNAs &#x7684;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x4E8E;&#x77E2;&#x91CF;&#x7684;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x6216;&#x5236;&#x5B9A;&#x57FA;&#x4E8E; siRNA &#x7684;&#x529E;&#x6CD5;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x57FA;&#x56E0;&#x7597;&#x6CD5;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x975E;&#x5E38;&#x6709;&#x7528;&#x3002;

Lentiviral vectors are able to transduce non-dividing cells and maintain sustained long-term expression of the transgenes. Many cell types including brain, liver, muscle, and hematopoietic stem cells have been successfully transduced with lentiviral vectors carrying a variety of genes. These properties make lentiviral vectors attractive vehicles for delivering small interfering RNA (siRNA) genes into mammalian cells. RNA polymerase III (Pol III) promoters are most commonly used for expressing siRNAs from lentiviral vectors. Pol III promoters are relatively small, have high activity, and use simple termination signals of short stretches of U. It is possible to include several Pol III expression cassettes in a single lentiviral vector backbone to express different siRNAs or to combine siRNAs with other transgenes. This chapter describes the delivery of Pol III promoted siRNAs by HIV-based lentiviral vectors and covers vector design, production, and verification of siRNA expression and function. This chapter should be useful for establishing a lentiviral vector-based delivery of siRNAs in experiments that require long-term gene knockdown or developing siRNA-based approaches for gene therapy applications.

Les vecteurs lentiviraux sont capables de transduire des cellules ne se divisent pas et maintenir soutenue &#xE0; long terme l&#x26;#39;expression des transg&#xE8;nes. De nombreux types cellulaires, y compris le cerveau, le foie, les muscles et les cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques ont &#xE9;t&#xE9; avec succ&#xE8;s transduits avec des vecteurs lentiviraux porteurs d&#x26;#39;une vari&#xE9;t&#xE9; de g&#xE8;nes. Ces propri&#xE9;t&#xE9;s en font des vecteurs lentiviraux des v&#xE9;hicules attractifs pour la livraison de petits ARN interf&#xE9;rents (siARN) dans les g&#xE8;nes des cellules de mammif&#xE8;res. ARN polym&#xE9;rase III (Pol III) sont les promoteurs les plus couramment utilis&#xE9;s pour exprimer des siRNA &#xE0; partir de vecteurs lentiviraux. Promoteurs pol III sont relativement petits, ont une activit&#xE9; &#xE9;lev&#xE9;e, et d&#x26;#39;utiliser des signaux de terminaison de simples &#xE9;tirements courts de U. Il est possible d&#x26;#39;inclure plusieurs cassettes d&#x26;#39;expression Pol III dans un squelette vecteur lentiviral unique pour exprimer des siRNA ou de combiner diff&#xE9;rents siRNA avec d&#x26;#39;autres transg&#xE8;nes. Ce chapitre d&#xE9;crit la prestation de Pol III promu siRNA par le VIH &#xE0; base de vecteurs lentiviraux et couvre la conception de vecteurs, la production, et la v&#xE9;rification d&#x26;#39;expression siARN et la fonction. Ce chapitre devrait &#xEA;tre utile pour &#xE9;tablir une base de vecteurs lentiviraux livraison de siRNA dans des exp&#xE9;riences qui n&#xE9;cessitent inactivation g&#xE9;nique &#xE0; long terme ou le d&#xE9;veloppement de siARN approches fond&#xE9;es sur des applications de th&#xE9;rapie g&#xE9;nique.

Lentivirale Vektoren sind nicht teilenden Zellen zur&uuml;ckwirken und nachhaltige langfristige Ausdruck von der transgenen pflegen k&ouml;nnen. Viele Zelltypen, einschlie&szlig;lich Gehirn, Leber, Muskel und hematopoietic Stammzellen haben erfolgreich mit Lentiviralen Vektoren, die Durchf&uuml;hrung einer Vielzahl von Genen ausgestrahlt wurde. Diese Eigenschaften machen Lentiviralen Vektoren attraktive Fahrzeuge f&uuml;r die Lieferung von kleinen interferierender RNA (SiRNA) Gene in den S&auml;ugetier-Zellen. RNA-Polymerase III (Pol III) Veranstalter werden am h&auml;ufigsten verwendet, um auszudr&uuml;cken SiRNAs von Lentiviralen Vektoren. Pol III Promotoren sind relativ klein, haben hohen Aktivit&auml;t und verwenden einfache K&uuml;ndigung Signale &uuml;ber kurze Strecken von U. Es ist m&ouml;glich, mehrere Pol III Ausdruck Kassetten in einen einzelnen lentiviralen Vektor-Backbone verschiedenen SiRNAs auszudr&uuml;cken oder SiRNAs mit anderen transgenen zu kombinieren. Dieses Kapitel beschreibt die Lieferung von Pol III gef&ouml;rdert SiRNAs durch HIV-basierte Lentiviralen Vektoren und deckt Vektor-Design, Produktion und Pr&uuml;fung von SiRNA Ausdruck und Funktion. Dieses Kapitel sollte n&uuml;tzlich zur Einsetzung von lentiviralen Vektor-basierte Lieferung von SiRNAs in Experimenten, die langfristige gen Niederschlag erfordern oder SiRNA-basierte Ans&auml;tze f&uuml;r gen-Therapie-Anwendungen entwickelt.

Lentiviralen Vektor-Lieferung von SiRNA und ShRNA-Kodierung Gene in kultivierten und prim&auml;re blutbildender Zellen.

Vettori lentivirali sono in grado di trasdurre non dividere celle e mantenere sostenuta a lungo termine espressione dei transgeni. Molti tipi di cellule tra cui cervello, fegato, muscolo e cellule staminali ematopoietiche sono state con successo transduced con vettori lentivirali che trasportano una variet&agrave; di geni. Queste caratteristiche rendono attraente veicoli vettori lentivirali per la consegna di piccoli geni interferenti di RNA (siRNA) nelle cellule di mammiferi. Promotori di RNA polimerasi III (Pol III) sono pi&ugrave; comunemente utilizzati per esprimere siRNA da vettori lentivirali. Pol III promotori sono relativamente piccole, hanno un&#39;elevata attivit&agrave; e utilizzare segnali di terminazione semplice dei brevi tratti di U. &Egrave; possibile includere diverse cassette di espressione Pol III in una spina dorsale singolo vettore lentivirale per esprimere diversi siRNA o per siRNA si combinano con altri transgeni. Questo capitolo descrive la consegna di siRNA Pol III promosso da vettori lentivirali basati su HIV e copre vector design, produzione e verifica dei siRNA espressione e funzione. Questo capitolo dovrebbe essere utile per stabilire una consegna basati su vettori lentivirale di siRNA in esperimenti che richiedono atterramento genica a lungo termine o lo sviluppo di approcci basati su siRNA per applicazioni di terapia genica.

&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x975E;&#x5206;&#x88C2;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5F62;&#x8CEA;&#x5C0E;&#x5165;&#x200B;&#x200B;&#x3068;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6301;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8133;&#x3001;&#x809D;&#x81D3;&#x3001;&#x7B4B;&#x8089;&#x3001;&#x9020;&#x8840;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x7A2E;&#x3005;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x54FA;&#x4E73;&#x52D5;&#x7269;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#xFF08;siRNA&#xFF09;&#x3092;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9B45;&#x529B;&#x7684;&#x306A;&#x8ECA;&#x3092;&#x4F5C;&#x308B;&#x3002; RNA&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;III&#xFF08;POL III&#xFF09;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304C;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;siRNA&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; pol III&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x6BD4;&#x8F03;&#x7684;&#x5C0F;&#x3055;&#x304F;&#x3001;&#x9AD8;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x6709;&#x3057;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;siRNA&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3001;&#x4ED6;&#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;siRNA&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6027;Pol III&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x308B;U&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x7D42;&#x4E86;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7AE0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;HIV&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6027;Pol III&#x6607;&#x9032;&#x306E;siRNA&#x306E;&#x30C7;&#x30EA;&#x30D0;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3001;&#x751F;&#x7523;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;siRNA&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x691C;&#x8A3C;&#x3092;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7AE0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9577;&#x671F;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3092;&#x8981;&#x6C42;&#x3057;&#x305F;&#x308A;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x7528;&#x9014;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;siRNA&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;siRNA&#x306E;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x914D;&#x4FE1;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6709;&#x7528;&#x3067;&#x306A;&#x3051;&#x308C;&#x3070;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

Lentiviral &#xBCA1;&#xD130; transduce &#xBE44; &#xBD84;&#xC5F4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; transgenes&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xC2DD; &#xC720;&#xC9C0; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB1CC;, &#xAC04;, &#xADFC;&#xC721;, &#xBC0F; &#xC870; &#xD608; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9CE;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xC720;&#xD615; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC6B4;&#xBC18; lentiviral &#xBCA1;&#xD130;&#xC640; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC788; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC18D;&#xC131; &#xD655;&#xC778; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA (siRNA)&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xCC28;&#xB7C9;. Rna &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; (Pol III) III &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; lentiviral &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0;&#xC11C; Sirnas&#xB97C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Pol III &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC740; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC791;&#xC740;, &#xB192;&#xC740; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xBBF8;&#xC758; &#xC9E7;&#xC740; &#xBED7; &#xAE30;&#xC758; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xC885;&#xB8CC; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2E8;&#xC77C; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xBC31;&#xBCF8; &#xB2E4;&#xB978; siRNAs &#xC775;&#xC2A4;&#xD504;&#xB808;&#xC2A4; &#xB610;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; transgenes siRNAs &#xACB0;&#xD569;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xB7EC; Pol III &#xC2DD; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xAC00;&#xB2A5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; HIV&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; lentiviral &#xBCA1;&#xD130;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2B9;&#xC9C4; Pol III Sirnas&#xC758; &#xBC30;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xBCA1;&#xD130; &#xB514;&#xC790;&#xC778;, &#xC0DD;&#xC0B0;&#xACFC; siRNA &#xD45C;&#xD604;&#xACFC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC80;&#xC99D;&#xC744; &#xCEE4;&#xBC84;. &#xC774; &#xC7A5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xB294; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0;&#xC11C; Sirnas&#xC758; lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xAE30;&#xBC18; &#xBC30;&#xB2EC; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xAC70;&#xB098; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC; &#xC6A9; siRNA &#xAE30;&#xBC18; &#xC811;&#xADFC;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC720;&#xC6A9; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Lentiviral vectores son capaces de transducir c&#xE9;lulas no divisorias y mantener sostenida a largo plazo expresi&#xF3;n de los transgenes. Muchos tipos de c&#xE9;lulas, incluyendo el cerebro, el h&#xED;gado, los m&#xFA;sculos y las c&#xE9;lulas madre hematopoy&#xE9;ticas han sido exitosamente transducidas con vectores lentivirales que llevan una variedad de genes. Estas propiedades hacen que los vectores lentivirales veh&#xED;culos atractivos para la entrega de peque&#xF1;os ARN de interferencia (siRNA) de genes en c&#xE9;lulas de mam&#xED;fero. ARN polimerasa III (Pol III) a los promotores son los m&#xE1;s utilizados para expresar siRNAs de lentiviral vectores. Pol III promotores son relativamente peque&#xF1;as, tienen una alta actividad, y el uso de se&#xF1;ales simples de terminaci&#xF3;n de los tramos cortos de U. Es posible incluir varios casetes de expresi&#xF3;n Pol III en la columna vertebral vector lentiviral &#xFA;nico para expresar diferentes siRNAs o para combinar con siRNAs otros transgenes. En este cap&#xED;tulo se describe la entrega de Pol III promovido siRNAs por el VIH basados &#x200B;&#x200B;en vectores lentivirales y cubre el dise&#xF1;o de vectores, producci&#xF3;n y verificaci&#xF3;n de la expresi&#xF3;n de siRNA y funci&#xF3;n. Este cap&#xED;tulo debe ser &#xFA;til para el establecimiento de un vector lentiviral basado en la entrega de siRNAs en los experimentos que requieren a largo plazo ca&#xED;da de genes o en desarrollo basadas en los enfoques de siRNA para aplicaciones de terapia g&#xE9;nica.

The anti-multiple myeloma (MM) efficacy of bortezomib has led to the development of other proteasome inhibitors (PI), including CEP-18770 which has shown anti-MM effects in preclinical studies. However, the efficacy of orally (PO) or intravenously (IV) administered CEP-18770 in multiple MM models and in combination with conventional anti-MM therapies has not been evaluated. Herein, we show that CEP-18770 combined with melphalan or bortezomib induces synergistic inhibition of MM cell viability in vitro. In MM xenograft models, the addition of CEP-18770 IV to melphalan completely prevented the growth of both melphalan-sensitive and melphalan-resistant tumours. The combination of CEP-18770 IV and bortezomib induced complete regression of bortezomib-sensitive tumours and markedly delayed progression of bortezomib-resistant tumours compared to treatment with either agent alone. Single agent CEP-18770 PO also showed marked anti-MM effects in these xenograft models. These studies provide strong preclinical rationale for further development of this novel PI in the treatment of MM as a monotherapy as well as combined with either melphalan or bortezomib.

The proteasome inhibitor CEP-18770 enhances the anti-myeloma activity of bortezomib and melphalan.

&#x6C89;&#x9ED8;&#x6682;&#x65F6;&#x7CBE;&#x786E;&#x7684;&#x65F6;&#x5C1A;&#x57FA;&#x56E0;&#x6307;&#x5B9A;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x5C06;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8C03;&#x67E5;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x795E;&#x7ECF;&#x8BA1;&#x7B97;&#x3001; &#x884C;&#x4E3A;&#x548C;&#x75C5;&#x75C7;&#x56E0;&#x679C;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x673A;&#x4F1A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x5149;&#x9A71;&#x52A8;&#x5916;&#x5411;&#x8D28;&#x5B50;&#x6CF5;&#x7684;&#x7C7B;&#x7684;&#x6210;&#x5458;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8C03;&#x89E3;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x3001; &#x5B89;&#x5168;&#x3001; &#x591A;&#x80A4;&#x8272;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x6D3B;&#x52A8;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0; archaerhodopsin-3 (&#x62F1;) &#x4ECE; Halorubrum sodomense &#x4F7F;&#x9644;&#x8FD1;-100%&#x6C89;&#x9ED8;&#x9192;&#x8111;&#x5185;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x75C5;&#x6BD2;&#x5F0F;&#x8868;&#x793A;&#x9F20;&#x6807;&#x76AE;&#x8D28;&#x548C;&#x4E0E;&#x9EC4;&#x706F;&#x7167;&#x660E;&#x65F6;&#x3002;&#x62F1;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x4F4E;&#x5149;&#x7684;&#x529B;&#x91CF;&#xFF0C;&#x5728;&#x51E0;&#x4E2A;&#x51E0;&#x767E;&#x76AE;&#x5B89;&#x7684;&#x7535;&#x6D41;&#xFF0C;&#x5E76;&#x652F;&#x6301;&#x795E;&#x7ECF;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7535;&#x6D41;&#x63A5;&#x8FD1; 900 pA &#x5728;&#x5149;&#x80FD;&#x4F53;&#x5185;&#x5BB9;&#x6613;&#x5B9E;&#x73B0;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x62F1;&#x81EA;&#x53D1;&#x5730;&#x4ECE;&#x5149;&#x517B;&#x706D;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5149;&#x54CD;&#x5E94;&#x8FDB;&#x5165;&#x957F;&#x671F;&#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x56FD;&#x5BB6;&#x7684;&#x5149;&#x9A71;&#x52A8;&#x6C2F;&#x6CF5;&#x6062;&#x590D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5C5E;&#x6027;&#x662F;&#x62F1;&#x7684;&#x9002;&#x5F53;&#x8C03;&#x89E3;&#x91CD;&#x5927;&#x8111;&#x5377;&#x4ECE;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x5149;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x3002;&#x62F1;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E5F;&#x88AB;&#x5BB9;&#x5FCD;&#x56E0;&#x4E3A; ph &#x503C;&#x8FDC;&#x8DB3;&#x521B;&#x5EFA;&#x7684;&#x62F1;&#x7167;&#x660E;&#x90FD;&#x6700;&#x5C0F;&#x5316;&#x7684;&#x75CA;&#x6108;&#x673A;&#x5236;&#x4ECB;&#x5BFC; channelrhodopsins &#x6216;&#x81EA;&#x7136;&#x7A57;&#x5C04;&#x51FB;&#x76F8;&#x82E5;&#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x7A81;&#x51FA;&#x5982;&#x4F55;&#x8D28;&#x5B50;&#x6CF5;&#x751F;&#x6001;&#x548C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x591A;&#x6837;&#x6027;&#x53EF;&#x80FD;&#x652F;&#x6301;&#x65B0;&#x7684;&#x521B;&#x65B0;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x84DD;&#x7EFF;&#x8272;&#x5149;&#x4EA7;&#x7248;&#x8D28;&#x5B50;&#x6CF5;&#x4ECE;&#x9ED1;&#x80EB;&#x75C5; (Mac) &#x771F;&#x83CC;&#x53EF;&#x4EE5;&#xFF0C;&#x5F53;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#xFF0C;&#x8868;&#x793A;&#x542F;&#x7528;&#x795E;&#x7ECF;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x84DD;&#x706F;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x4F7F;&#x65C1;&#x8FB9;&#x5176;&#x4ED6;&#x53D1;&#x8FBE;&#x56FD;&#x5BB6;&#x8BD5;&#x5242;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x84DD;&#x4E0E;&#x7EA2;&#x5149;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x795E;&#x7ECF;&#x79CD;&#x7FA4;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;&#x5149;&#x9A71;&#x52A8;&#x8D28;&#x5B50;&#x6CF5;&#x56E0;&#x6B64;&#x4EE3;&#x8868;&#x4E86;&#x9AD8;&#x6027;&#x80FD;&#x548C;&#x7528;&#x9014;&#x6781;&#x5176;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x7535;&#x538B;&#x548C;&#x79BB;&#x5B50;&#x8C03;&#x5236;&#x5668;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x5927;&#x81F4;&#x5C06;&#x542F;&#x7528;&#x65B0;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x79D1;&#x5B66;&#x3001; &#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3001; &#x795E;&#x7ECF;&#x548C;&#x7CBE;&#x795E;&#x75C5;&#x8C03;&#x67E5;&#x7C7B;&#x3002;

&#x9AD8;&#x6027;&#x80FD;&#x57FA;&#x56E0;&#x9776;&#x5411;&#x5149;&#x795E;&#x7ECF;&#x6C89;&#x9ED8;&#x7684;&#x5149;&#x9A71;&#x52A8;&#x8D28;&#x5B50;&#x6CF5;&#x3002;

The ability to silence the activity of genetically specified neurons in a temporally precise fashion would provide the opportunity to investigate the causal role of specific cell classes in neural computations, behaviours and pathologies. Here we show that members of the class of light-driven outward proton pumps can mediate powerful, safe, multiple-colour silencing of neural activity. The gene archaerhodopsin-3 (Arch) from Halorubrum sodomense enables near-100% silencing of neurons in the awake brain when virally expressed in the mouse cortex and illuminated with yellow light. Arch mediates currents of several hundred picoamps at low light powers, and supports neural silencing currents approaching 900 pA at light powers easily achievable in vivo. Furthermore, Arch spontaneously recovers from light-dependent inactivation, unlike light-driven chloride pumps that enter long-lasting inactive states in response to light. These properties of Arch are appropriate to mediate the optical silencing of significant brain volumes over behaviourally relevant timescales. Arch function in neurons is well tolerated because pH excursions created by Arch illumination are minimized by self-limiting mechanisms to levels comparable to those mediated by channelrhodopsins or natural spike firing. To highlight how proton pump ecological and genomic diversity may support new innovation, we show that the blue-green light-drivable proton pump from the fungus Leptosphaeria maculans (Mac) can, when expressed in neurons, enable neural silencing by blue light, thus enabling alongside other developed reagents the potential for independent silencing of two neural populations by blue versus red light. Light-driven proton pumps thus represent a high-performance and extremely versatile class of 'optogenetic' voltage and ion modulator, which will broadly enable new neuroscientific, biological, neurological and psychiatric investigations.

High-performance genetically targetable optical neural silencing by light-driven proton pumps.

La capacit&#xE9; de r&#xE9;duire au silence l&#x26;#39;activit&#xE9; des neurones g&#xE9;n&#xE9;tiquement sp&#xE9;cifi&#xE9;es d&#x26;#39;une mani&#xE8;re temporellement pr&#xE9;cise donnerait l&#x26;#39;occasion d&#x26;#39;&#xE9;tudier le r&#xF4;le causal de classes de cellules sp&#xE9;cifiques dans les calculs de neurones, les comportements et les pathologies. Ici, nous montrons que les membres de la classe de la lumi&#xE8;re des pompes &#xE0; protons vers l&#x26;#39;ext&#xE9;rieur peut servir de m&#xE9;diateur puissant, coffre-fort, multi-couleur silence de l&#x26;#39;activit&#xE9; neuronale. Le g&#xE8;ne archaerhodopsin-3 (Arc) &#xE0; partir de Halorubrum sodomense permet silencing% pr&#xE8;s-100 de neurones dans le cerveau &#xE9;veill&#xE9; quand virale exprim&#xE9;e dans le cortex de la souris et &#xE9;clair&#xE9;e par une lumi&#xE8;re jaune. Fait office de m&#xE9;diateur Arc courants de plusieurs centaines de picoamps &#xE0; des puissances de lumi&#xE8;re faible, et soutient les courants silencieux de neurones de pr&#xE8;s de 900 pA &#xE0; des puissances de lumi&#xE8;re facilement r&#xE9;alisables in vivo. En outre, l&#x26;#39;Arche r&#xE9;cup&#xE8;re spontan&#xE9;ment de la lumi&#xE8;re d&#xE9;pend de l&#x26;#39;inactivation, la diff&#xE9;rence des pompes de chlorure de lumi&#xE8;re qui entrent dans entra&#xEE;n&#xE9;s de longue dur&#xE9;e des &#xE9;tats inactifs en r&#xE9;ponse &#xE0; la lumi&#xE8;re. Ces propri&#xE9;t&#xE9;s de l&#x26;#39;Arche sont appropri&#xE9;s pour arbitrer le silence optique de volumes c&#xE9;r&#xE9;braux importants par rapport aux &#xE9;chelles de temps pertinentes comportemental. Fonction de l&#x26;#39;Arche dans les neurones est bien tol&#xE9;r&#xE9; parce excursions pH cr&#xE9;&#xE9;es par l&#x26;#39;&#xE9;clairage Arc sont minimis&#xE9;s par l&#x26;#39;auto-limitation de m&#xE9;canismes &#xE0; des niveaux comparables &#xE0; ceux m&#xE9;di&#xE9;e par channelrhodopsins ou naturelle de tir pic. Pour mettre en &#xE9;vidence comment la diversit&#xE9; &#xE9;cologique et la pompe &#xE0; protons g&#xE9;nomique peut soutenir l&#x26;#39;innovation nouvelle, nous montrons que la pompe &#xE0; protons bleu-vert lumi&#xE8;re pouvant &#xEA;tre entra&#xEE;n&#xE9; &#xE0; partir du champignon Leptosphaeria maculans (Mac) peut, lorsqu&#x26;#39;elle est exprim&#xE9;e dans les neurones, de neurones permettent silence par la lumi&#xE8;re bleue, permettant ainsi aux c&#xF4;t&#xE9;s d&#x26;#39;autres r&#xE9;actifs d&#xE9;velopp&#xE9;s, le potentiel pour faire taire ind&#xE9;pendante de deux populations de neurones par la lumi&#xE8;re bleue et des rouges. Pompes &#xE0; protons lumi&#xE8;re pilot&#xE9;s repr&#xE9;sentent donc une classe de haute performance et extr&#xEA;mement polyvalent de la tension &#xBB;optog&#xE9;n&#xE9;tique &#x26;#39;et le modulateur d&#x26;#39;ions, qui sera largement permettre de nouvelles neuroscientifiques, biologiques, examens neurologiques et psychiatriques.

Haute performance pour le ciblage g&#xE9;n&#xE9;tiquement Silencing neural optique par pompes &#xE0; protons lumi&#xE8;re pilot&#xE9;s par

Die F&auml;higkeit, die Aktivit&auml;t von genetisch angegebenen Neuronen in zeitlich pr&auml;zise Weise Schweigen br&auml;chte die M&ouml;glichkeit, die kausale Rolle bestimmte Zelle Klassen in neuronalen Berechnungen, Verhaltensweisen und Krankheiten untersuchen. Hier zeigen wir, dass Mitglieder der Licht-gesteuerte nach au&szlig;en Protonen-Pumpen-Klasse leistungsstark, sicher, Multiple-Farbe zum Schweigen der neuronalen Aktivit&auml;t vermitteln k&ouml;nnen. Die gen Archaerhodopsin-3 (Arch) von Halorubrum Sodomense erm&ouml;glicht es, in der N&auml;he von 100 % zum Schweigen von Neuronen im Gehirn wach wenn Viral in der Maus Rinde zum Ausdruck und beleuchtet mit gelbem Licht. Bogen vermittelt Str&ouml;me von mehreren hundert Picoamps bei niedrigen hellen M&auml;chte und neuronale silencing Str&ouml;mungen, die Ann&auml;herung an 900 pA bei leicht erreichbare in Vivo Licht M&auml;chte unterst&uuml;tzt. Dar&uuml;ber hinaus stellt Arch spontan aus Licht-abh&auml;ngige Inaktivierung, im Gegensatz zu Licht-gesteuerte Chlorid-Pumpen, die langlebige inaktive Staaten als Reaktion auf Licht geben Sie. Diese Eigenschaften des Bogens eignen sich die optische Unterdr&uuml;ckender signifikante Gehirn B&auml;nde &uuml;ber Ihrem relevanten Fristen zu vermitteln. Bogen-Funktion in Neuronen ist gut vertr&auml;glich, da pH-Wert Ausfl&uuml;ge erstellt von Arch Beleuchtung durch selbstbegrenzend Mechanismen auf ein Niveau vergleichbar mit denen von Channelrhodopsine oder nat&uuml;rliche Spitze feuern vermittelt minimiert werden. Um zu markieren, wie Proton Pumpe &ouml;kologische und genomische Vielfalt kann neue Innovationen zu unterst&uuml;tzen, wir zeigen, dass die blau-gr&uuml;ne Licht-fahrfertige Protonenpumpe aus dem Pilz Leptosphaeria Maculans (Mac), ausgedr&uuml;ckt in Neuronen, k&ouml;nnen neuronale Unterdr&uuml;ckender durch blaues Licht, wodurch neben anderen Reagenzien entwickelt das Potenzial zum unabh&auml;ngigen Schweigen zu zwei neuronalen Populationen von Blue gegen rotes Licht. Licht-gesteuerte Proton Pumpen bilden also eine leistungsstarke und &auml;u&szlig;erst vielseitige Klasse von &#39;Optogenetic&#39; Spannung und Ion Modulator, die im gro&szlig;en und ganzen neue neurowissenschaftliche, biologische, neurologische und psychiatrische Untersuchungen erm&ouml;glichen.

Hochleistungs-genetisch targetable optische neuronale Unterdr&uuml;ckender durch Licht-gesteuerte Protonen-Pumpen.

La capacit&agrave; di silenzio l&#39;attivit&agrave; dei neuroni geneticamente specificati in maniera precisa temporaneamente fornirebbe la possibilit&agrave; di indagare il ruolo causale delle classi cellulari specifici calcoli neurali, comportamenti e patologie. Qui vi mostriamo che membri della classe delle pompe del protone esterno luce-driven possono mediare multi-colore, sicuro e potente silenziamento dell&#39;attivit&agrave; neurale. Il gene archaerhodopsin-3 (arco) da Halorubrum sodomense permette di vicino 100% silenziamento dei neuroni nel cervello sveglio quando viralmente espresso nella corteccia del mouse ed illuminato con luce gialla. Arco da intermediario correnti di parecchie centinaia picoamps a basse luce poteri e supporta correnti silenziamento neurale si avvicina 900 pA a luce poteri facilmente realizzabile in vivo. Inoltre, arco recupera spontaneamente da inattivazione dipendente dalla luce, a differenza delle pompe di luce-driven cloruro che entrare long-lasting stati inattivi in risposta alla luce. Queste propriet&agrave; dell&#39;arco sono appropriate mediare il silenziamento ottico di volumi significativi cervello sopra comportamentale pertinenti risoluzioni. Funzione arco nei neuroni &egrave; ben tollerata perch&eacute; escursioni di pH creati da arco illuminazione sono minimizzati dai meccanismi di auto-limitanti a livelli paragonabili a quelli mediati da channelrhodopsins o cottura naturale spike. Per evidenziare come protone pompa ecologica e genomic diversit&agrave; pu&ograve; sostenere nuova innovazione, ci mostrano che il blu-verde pompa protonica luce-guidabile da fungo Leptosphaeria maculans (Mac), quando espresso nei neuroni, consentono neurale silenziamento di luce blu, permettendo cos&igrave; al fianco di altri sviluppati reagenti il potenziale per la tacitazione indipendente delle due popolazioni neurali da blue rispetto a luce rossa. Pompa protonica luce-driven rappresenta quindi una classe ad alte prestazioni ed estremamente versatile di modulatore tensione e ione &#39;optogenetic&#39;, che sostanzialmente consentir&agrave; nuove indagini neuroscientifiche, biologiche, neurologiche e psichiatriche.

High-performance geneticamente indirizzabile ottico neurale silenziamento di pompa protonica luce-driven.

&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x6B63;&#x78BA;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x306B;&#x6307;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x9ED9;&#x3089;&#x305B;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x8A08;&#x7B97;&#x3001;&#x884C;&#x52D5;&#x3084;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x56E0;&#x679C;&#x7684;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3067;&#x3042;&#x308D;&#x3046;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x99C6;&#x52D5;&#x578B;&#x306E;&#x5916;&#x5074;&#x306B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x30E1;&#x30F3;&#x30D0;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x3001;&#x5B89;&#x5168;&#x3067;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x8272;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x9EC4;&#x8272;&#x306E;&#x5149;&#x3067;&#x7167;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;Halorubrum sodomense&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;archaerhodopsin-3&#xFF08;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C1;&#xFF09;&#x304C;&#x76EE;&#x3092;&#x899A;&#x307E;&#x3057;&#x3001;&#x8133;&#x5185;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x307B;&#x307C;100&#xFF05;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C1;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x5149;&#x30D1;&#x30EF;&#x30FC;&#x3067;&#x6570;&#x767E;&#x30D4;&#x30B3;&#x30A2;&#x30F3;&#x30DA;&#x30A2;&#x306E;&#x96FB;&#x6D41;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x9054;&#x6210;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5149;&#x306E;&#x529B;&#x3067;900 pA&#x306E;&#x306B;&#x8FD1;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x795E;&#x7D4C;&#x6291;&#x5236;&#x96FB;&#x6D41;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C1;&#x306F;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306B;&#x5149;&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x306A;&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3059;&#x308B;&#x5149;&#x99C6;&#x52D5;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C9;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#x3068;&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x3001;&#x5149;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x304B;&#x3089;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x884C;&#x52D5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x6642;&#x9593;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x8133;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x5149;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x304C;&#x9069;&#x5207;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C1;&#x7167;&#x660E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F5C;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;pH&#x306E;&#x9060;&#x8DB3;&#x304C;channelrhodopsins&#x3084;&#x5929;&#x7136;&#x30B9;&#x30D1;&#x30A4;&#x30AF;&#x767A;&#x706B;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x5A92;&#x4ECB;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x81EA;&#x5DF1;&#x5236;&#x9650;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306B;&#x6291;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30FC;&#x30C1;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5FCD;&#x5BB9;&#x6027;&#x306F;&#x826F;&#x597D;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#x751F;&#x614B;&#x5B66;&#x3068;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x304C;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x6280;&#x8853;&#x9769;&#x65B0;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5F37;&#x8ABF;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x771F;&#x83CC;Leptosphaeria maculans&#xFF08;Mac&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x9752;&#x7DD1;&#x8272;&#x306E;&#x5149;&#x99C6;&#x52D5;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x3001;&#x9752;&#x8272;&#x5149;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x795E;&#x7D4C;&#x6291;&#x5236;&#x3092;&#x30A4;&#x30CD;&#x30FC;&#x30D6;&#x30EB;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x4ED6;&#x306E;&#x5148;&#x9032;&#x8A66;&#x85AC;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x9752;&#x3068;&#x8D64;&#x306E;&#x5149;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;2&#x3064;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;&#x5149;&#x99C6;&#x52D5;&#x578B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B; &#x26;#39;optogenetic &#x26;quot;&#x96FB;&#x5727;&#x3068;&#x5E83;&#x304F;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x79D1;&#x5B66;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7CBE;&#x795E;&#x306E;&#x8ABF;&#x67FB;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x5909;&#x8ABF;&#x5668;&#x3001;&#x9AD8;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x3068;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x591A;&#x5F69;&#x306A;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5149;&#x99C6;&#x52D5;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30F3;&#x30DD;&#x30F3;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9AD8;&#x30D1;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30DE;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x53EF;&#x80FD;&#x5149;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E9;&#x30EB;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;

Temporally &#xC815;&#xD655;&#xD55C; &#xD328;&#xC158; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xCE68;&#xBB35; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC2E0;&#xACBD; &#xACC4;&#xC0B0;, &#xD589;&#xB3D9; &#xBC0F; pathologies&#xC5D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC140; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC758; &#xC6D0;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xD68C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBE5B; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xBC14;&#xAE65;&#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xD38C;&#xD504;&#xC758; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC758; &#xBA64;&#xBC84; &#xAC15;&#xB825;, &#xC548;&#xC804; &#xD558; &#xACE0;, &#xB2E4;&#xC911; &#xCEEC;&#xB7EC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC785;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC;&#xD560; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; archaerhodopsin-3 (&#xC544;&#xCE58;) Halorubrum sodomense&#xC5D0;&#xC11C;-100% &#xADFC;&#xCC98; virally &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558; &#xACE0; &#xB178;&#xB780; &#xBE5B;&#xC73C;&#xB85C; &#xC870;&#xBA85; &#xD560; &#xB54C; &#xAE68;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xB1CC;&#xC758; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC785;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC544;&#xCE58; &#xB0AE;&#xC740; &#xBE5B; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBA87; &#xBC31; picoamps&#xC758; &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC811;&#xADFC; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xBCBC;&#xC6B4; &#xD798; &#xBE44;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xC27D;&#xAC8C; &#xB2EC;&#xC131;&#xC5D0; 900 pA &#xC2E0;&#xACBD; silencing &#xC804;&#xB958;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC544;&#xCE58; &#xBE5B;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC624;&#xB7AB;&#xB3D9;&#xC548; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC785;&#xB825; &#xD558;&#xB294; &#xC5FC;&#xD654; &#xBB3C; &#xBE5B; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xD38C;&#xD504;&#xC640;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xBE5B;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC544;&#xCE58;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC18D;&#xC131;&#xC740; behaviourally &#xAD00;&#xB828; timescales &#xC774;&#xC0C1; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xB450;&#xB1CC; &#xBCFC;&#xB968;&#xC758; &#xAD11;&#xD559; &#xC785;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC544;&#xCE58; &#xD568;&#xC218; &#xC218;&#xC900; channelrhodopsins &#xB610;&#xB294; &#xC790;&#xC5F0; &#xC2A4;&#xD30C;&#xC774;&#xD06C; &#xBC1C;&#xC0AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC911;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xADF8; &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xC790;&#xAE30; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC544;&#xCE58; &#xC870;&#xBA85;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9CC;&#xB4E0; pH &#xACAC;&#xD559; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD654; &#xD558;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC798; &#xC6A9;&#xB0A9;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xD38C;&#xD504; &#xC0DD;&#xD0DC; &#xBC0F; &#xAC8C;&#xB188; &#xB2E4;&#xC591;&#xC131; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD601;&#xC2E0;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xAC15;&#xC870;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBE14;&#xB8E8; &#xADF8;&#xB9B0; &#xC1FC; &#xADE0; Leptosphaeria maculans (Mac)&#xC5D0;&#xC11C; &#xBE5B; drivable &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xD38C;&#xD504; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;, &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xBA74; &#xD478;&#xB978; &#xBE5B;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC785;&#xC744;, &#xBE14;&#xB8E8; &#xB808;&#xB4DC; &#xBE5B; &#xB300; &#xB450; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC785;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; &#xC2DC; &#xC57D;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xD568;&#xAED8; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;. &#xBE5B; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xD38C;&#xD504; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; neuroscientific, &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;, &#xC2E0;&#xACBD;&#xD559; &#xBC0F; &#xC815;&#xC2E0; &#xC870;&#xC0AC; &#xD558;&#xBA74; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD558; &#xAC8C;&#xB294; &#39;optogenetic&#39; &#xC804;&#xC555; &#xBC0F; &#xC774;&#xC628; &#xBCC0;&#xC870;&#xAE30;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC131;&#xB2A5;&#xACFC; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACE0;&#xC131;&#xB2A5; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD0C0;&#xAC9F;&#xC744; &#xAD11;&#xD559; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC785;&#xC744; &#xBE5B; &#xAD6C;&#xB3D9; &#xC591;&#xC131;&#xC790; &#xD38C;&#xD504;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;.

La capacidad de silenciar la actividad de las neuronas gen&#xE9;ticamente especificados de manera temporal precisa proporcionar&#xED;a la oportunidad de investigar el papel causal de las clases espec&#xED;ficas de c&#xE9;lulas neuronales en los c&#xE1;lculos, los comportamientos y patolog&#xED;as. Aqu&#xED; nos muestran que los miembros de la clase de la luz impulsados &#x200B;&#x200B;por bombas de protones hacia el exterior puede mediar potente, seguro, de color m&#xFA;ltiple silenciamiento de la actividad neuronal. El gen archaerhodopsin-3 (Arco) de Halorubrum sodomense permite a casi el 100% de silenciamiento de neuronas en el cerebro despierto cuando de forma viral se expresa en la corteza cerebral del rat&#xF3;n y se ilumina con luz amarilla. Media en Arch corrientes de varios cientos de picoamperios a los poderes de poca luz, y apoya las corrientes nerviosas de silenciamiento que se acercan a 900 Pa poderes de la luz f&#xE1;cilmente alcanzables in vivo. Adem&#xE1;s, Arch. espont&#xE1;neamente se recupera de la luz dependiente de la inactivaci&#xF3;n, a diferencia de las bombas de cloruro inducidas por la luz que entran duraderos estados inactivos en respuesta a la luz. Estas propiedades de Arco son apropiados para mediar en el silenciamiento &#xF3;ptica de los vol&#xFA;menes cerebrales m&#xE1;s importantes escalas de tiempo conductualmente relevantes. Funci&#xF3;n de Arco en las neuronas es bien tolerada debido a las excursiones de pH creadas por la iluminaci&#xF3;n Arco se reducen al m&#xED;nimo por la auto-limitaci&#xF3;n de los mecanismos a niveles comparables a aquellas mediadas por channelrhodopsins o de tiro natural de espiga. Para poner de relieve c&#xF3;mo la diversidad ecol&#xF3;gica y la bomba de protones gen&#xF3;mica puede apoyar la innovaci&#xF3;n nueva, nos muestran que la luz azul-verde-manejable la bomba de protones de la maculans hongos Leptosphaeria (Mac) puede, cuando se expresan en las neuronas, permite silenciar los nervios por la luz azul, lo que permite junto con otros reactivos desarrollados el potencial de silenciamiento independientes de dos poblaciones neuronales por la luz azul contra rojo. Inducidas por la luz bombas de protones por lo tanto representan una clase de alto rendimiento y extremadamente vers&#xE1;til de la tensi&#xF3;n &#x26;#39;optogen&#xE9;tica&#x26;#39; y un modulador de iones, que en general permitir&#xE1; nuevas investigaciones neurocient&#xED;ficas, biol&#xF3;gicas, neurol&#xF3;gicas y psiqui&#xE1;tricas.

De alto rendimiento gen&#xE9;ticamente dirigibles silenciamiento &#xF3;ptica neuronal por las bombas de protones inducidas por la luz

&#x5236;&#x5B9A;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x75C5;&#x4EBA;&#x5F80;&#x5F80;&#x88AB;&#x79FB;&#x690D;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x53D1;&#x5C55;&#x4E2D;&#x56FD;&#x5BB6;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7597;&#x6CD5;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x6CBB;&#x7597;&#x7684;&#x56DB;&#x4E2A;&#x75C5;&#x4EBA;&#x4E5F;&#x5F97;&#x5230;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970;&#x5468;&#x8FB9;&#x8840;&#x6E90;&#x6027; (CD34(+)) &#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E09;&#x4E2A;&#x57FA;&#x4E8E; RNA &#x7684;&#x6297; hiv &#x5076; (&#x8FBE;/&#x51AF;&#x77ED;&#x53D1;&#x5939; RNA&#x3001; &#x7126;&#x6CB9;&#x8BF1;&#x9975;&#x548C; CCR5 &#x6838;&#x9176;)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x5206;&#x6790;&#x663E;&#x793A;&#x5176;&#x9020;&#x8840;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x4E0E; nontransduced &#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x6BD4;&#x6CA1;&#x6709;&#x5DEE;&#x5F02;&#x3002;&#x4F53;&#x5916;&#x6297; hiv &#x5076;&#x6210;&#x529F;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x4F30;&#x8BA1;&#x662F;&#x6700;&#x521D;&#x9AD8;&#x8FBE; 22%&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0B;&#x964D;&#x5927;&#x7EA6; 1%&#x81F3;&#x8D85;&#x8FC7; 4 &#x5468;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x3002;&#x4F26;&#x7406;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x6240;&#x9700;&#x75C5;&#x4EBA;&#x88AB;&#x79FB;&#x690D;&#x6709;&#x4ECE;&#x75C5;&#x4EBA;&#x7684;&#x673A;&#x91C7;&#x83B7;&#x5F97;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x65E0;&#x6CD5;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;11&#xFF0C;&#x767D;&#x5929;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x6210;&#x529F;&#x5730;&#x79FB;&#x690D;&#x5728;&#x6240;&#x6709;&#x56DB;&#x4E2A;&#x6CE8;&#x5165;&#x75C5;&#x4EBA;&#x548C;&#x6709;&#x6CA1;&#x6709;&#x610F;&#x5916;&#x7684;&#x8F93;&#x6CE8;&#x76F8;&#x5173;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;&#x5728;&#x591A;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C31;&#x7CFB;&#x4E2D;&#x7684;&#x6301;&#x4E45;&#x6027;&#x77E2;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x6709;&#x4EBA;&#x5230;&#x5728;&#x4F4E;&#x6C34;&#x5E73;&#x8FBE; 24 &#x4E2A;&#x6708;&#xFF0C;&#x5982;&#x88AB;&#x5F15;&#x8FDB;&#x5C0F;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6270; RNA &#x548C;&#x6838;&#x9176;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x7A33;&#x5B9A;&#x77E2;&#x91CF;&#x8868;&#x8FBE;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8840;&#x6DB2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4FEE;&#x9970;&#x7684;&#x81EA;&#x4F53;&#x9020;&#x8840;&#x7956;&#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x672F;&#x540E;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; RNA &#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6CBB;&#x7597;&#x5E73;&#x53F0;&#x7684;&#x5F00;&#x53D1;&#x3002;

&#x57FA;&#x4E8E; RNA &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6162;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x4FEE;&#x9970;&#x7684; CD34(+) &#x7EC6;&#x80DE;&#x79FB;&#x690D;&#x6CBB;&#x7597;&#x4E0E;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7624;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2;&#x6CBB;&#x7597;&#x3002;

AIDS patients who develop lymphoma are often treated with transplanted hematopoietic progenitor cells. As a first step in developing a hematopoietic cell-based gene therapy treatment, four patients undergoing treatment with these transplanted cells were also given gene-modified peripheral blood-derived (CD34(+)) hematopoietic progenitor cells expressing three RNA-based anti-HIV moieties (tat/rev short hairpin RNA, TAR decoy, and CCR5 ribozyme). In vitro analysis of these gene-modified cells showed no differences in their hematopoietic potential compared with nontransduced cells. In vitro estimates of successful expression of the anti-HIV moieties were initially as high as 22% but declined to approximately 1% over 4 weeks of culture. Ethical study design required that patients be transplanted with both gene-modified and unmanipulated hematopoietic progenitor cells obtained from the patient by apheresis. Transfected cells were successfully engrafted in all four infused patients by day 11, and there were no unexpected infusion-related toxicities. Persistent vector expression in multiple cell lineages was observed at low levels for up to 24 months, as was expression of the introduced small interfering RNA and ribozyme. Therefore, we have demonstrated stable vector expression in human blood cells after transplantation of autologous gene-modified hematopoietic progenitor cells. These results support the development of an RNA-based cell therapy platform for HIV.

RNA-based gene therapy for HIV with lentiviral vector-modified CD34(+) cells in patients undergoing transplantation for AIDS-related lymphoma.

Les malades du sida qui d&#xE9;veloppent un lymphome sont souvent trait&#xE9;s avec transplant&#xE9; des cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques. Comme une premi&#xE8;re &#xE9;tape dans l&#x26;#39;&#xE9;laboration d&#x26;#39;une base de cellules h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques traitement par th&#xE9;rapie g&#xE9;nique, quatre patients subissant un traitement avec ces cellules transplant&#xE9;es ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; donn&#xE9;e g&#xE8;ne modifi&#xE9; p&#xE9;riph&#xE9;riques d&#xE9;riv&#xE9;s du sang (CD34 (+)) des cellules prog&#xE9;nitrices h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques exprimant trois &#xE0; base d&#x26;#39;ARN anti-VIH fractions (TAT / rev en &#xE9;pingle &#xE0; cheveux courts ARN, TAR leurre, et CCR5 ribozyme). L&#x26;#39;analyse in vitro de ces cellules modifi&#xE9;es g&#xE9;n&#xE9;tiquement n&#x26;#39;ont montr&#xE9; aucune diff&#xE9;rence dans leur potentiel h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tique par rapport &#xE0; des cellules nontransduced. Dans les estimations in vitro de l&#x26;#39;expression r&#xE9;ussie des fractions anti-VIH &#xE9;taient initialement plus &#xE9;lev&#xE9; que 22%, mais a baiss&#xE9; d&#x26;#39;environ 1% de plus de 4 semaines de culture. Conception de l&#x26;#39;&#xE9;tude &#xE9;thique n&#xE9;cessaire que les patients soient transplant&#xE9;s avec &#xE0; la fois des g&#xE8;nes modifi&#xE9;s et non manipul&#xE9;e cellules souches h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques provenant du patient par aph&#xE9;r&#xE8;se. Les cellules transfect&#xE9;es ont &#xE9;t&#xE9; greff&#xE9;es avec succ&#xE8;s dans tous les quatre patients perfus&#xE9;s par jour 11, et il n&#x26;#39;y avait pas inattendues li&#xE9;es &#xE0; la perfusion toxicit&#xE9;s. Le vecteur d&#x26;#39;expression persistante dans plusieurs lign&#xE9;es cellulaires a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e &#xE0; de faibles niveaux pour un maximum de 24 mois, comme cela a &#xE9;t&#xE9; l&#x26;#39;expression de la pr&#xE9;sente petits ARN interf&#xE9;rents et ribozyme. Par cons&#xE9;quent, nous avons d&#xE9;montr&#xE9; le vecteur d&#x26;#39;expression stable dans les cellules sanguines humaines apr&#xE8;s transplantation autologue de g&#xE8;nes modifi&#xE9;s des cellules prog&#xE9;nitrices h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques. Ces r&#xE9;sultats appuient le d&#xE9;veloppement d&#x26;#39;une plate-forme &#xE0; base d&#x26;#39;ARN de th&#xE9;rapie cellulaire pour le VIH.

Th&#xE9;rapie g&#xE9;nique &#xE0; base d&#x26;#39;ARN du VIH avec Lentiviral Vecteur modifi&#xE9; CD34 (+) des cellules dans patients subissant une transplantation de lymphome li&#xE9; au sida

Pacientes con SIDA que desarrollan linfoma son tratados con las c&#xE9;lulas progenitoras hematopoy&#xE9;ticas trasplantadas. Como un primer paso en el desarrollo de una c&#xE9;lula hematopoy&#xE9;tica tratamiento basado en terapia g&#xE9;nica, cuatro pacientes sometidos a tratamiento con estas c&#xE9;lulas trasplantadas se les dio tambi&#xE9;n gen modificado con perif&#xE9;ricos derivados de sangre-(CD34 (+)) c&#xE9;lulas progenitoras hematopoy&#xE9;ticas que expresan tres ARN basado anti-VIH fracciones (TAT / rev corta horquilla de ARN, se&#xF1;uelo TAR y ribozima CCR5). En el an&#xE1;lisis in vitro de estas c&#xE9;lulas modificadas gen-no mostraron diferencias en su potencial hematopoy&#xE9;tico en comparaci&#xF3;n con las c&#xE9;lulas nontransduced. En las estimaciones de la expresi&#xF3;n in vitro con &#xE9;xito de los restos de anti-VIH fueron inicialmente tan alta como 22%, pero disminuy&#xF3; a aproximadamente el 1% de m&#xE1;s de 4 semanas de cultivo. El dise&#xF1;o del estudio &#xE9;tico requiere que los pacientes se trasplantaron con ambos genes modificados y no manipulado c&#xE9;lulas progenitoras hematopoy&#xE9;ticas obtenidas a partir de la paciente por af&#xE9;resis. Las c&#xE9;lulas transfectadas se injertado con &#xE9;xito en los cuatro pacientes infundidos por el d&#xED;a 11, y no hubo imprevistos relacionados con la infusi&#xF3;n toxicidades. Vector de expresi&#xF3;n persistente en m&#xFA;ltiples linajes celulares se observ&#xF3; en niveles bajos durante un m&#xE1;ximo de 24 meses, al igual que la expresi&#xF3;n de la introdujeron peque&#xF1;os ARN de interferencia y la ribozima. Por lo tanto, hemos demostrado vector de expresi&#xF3;n estable en c&#xE9;lulas sangu&#xED;neas humanas despu&#xE9;s del trasplante de aut&#xF3;logos modificados gen-c&#xE9;lulas progenitoras hematopoy&#xE9;ticas. Estos resultados apoyan el desarrollo de una plataforma basada en el ARN celular terapia para el VIH.

Basada en el ARN Terapia g&#xE9;nica para el VIH con el vector lentiviral modificado con CD34 (+) Las c&#xE9;lulas de pacientes sometidos a trasplante de relacionada con el SIDA Linfoma

AIDS-Patienten, die Lymphom zu entwickeln sind oft mit allogener h&auml;matopoetischer Vorl&auml;uferzellen behandelt. Als ersten Schritt bei der Entwicklung einer h&auml;matopoetischen Zellen basierender gen-Therapie erhielten vier Patienten die Behandlung mit diesen transplantierten Zellen auch Gen-modifizierte periphere Blut abgeleitet (CD34(+)) h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen drei Anti-HIV-RNA-basierte Adsorptionseigenschaften (Tat/u kurze Haarnadel RNA, TAR K&ouml;der und CCR5 Ribozym) zum Ausdruck zu bringen. In-vitro-Analyse dieser gen ver&auml;nderten Zellen zeigte keine Unterschiede in ihrem h&auml;matopoetischen Potential im Vergleich zu nontransduced Zellen. In-vitro-Sch&auml;tzungen der Ausdruck von der Anti-HIV-Adsorptionseigenschaften erfolgreich waren anf&auml;nglich immerhin 22 % sank auf etwa 1 % &uuml;ber 4 Wochen Kultur Ethische Studiendesign ben&ouml;tigt, dass Patienten mit beiden gen-modifiziert und Zellebene h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen, die die vom Patienten durch Apherese transplantiert werden. Transfected Zellen wurden erfolgreich bei allen vier Patienten Infusion von Tag 11 Abbau, und es gab keine unerwarteten Infusion-bezogene Toxizit&auml;ten. Persistente Vektor Ausdruck in mehrere &Uuml;bertragungslinien der Zelle wurde auf niedrigem Niveau f&uuml;r bis zu 24 Monaten beobachtet, als Ausdruck der eingef&uuml;hrten small interfering RNA und Ribozym war. Daher haben wir stabile Vektor Ausdruck in menschlichen Blutzellen nach der Transplantation von autologen Gen-modifizierte h&auml;matopoetischen Vorl&auml;uferzellen gezeigt. Diese Ergebnisse unterst&uuml;tzen die Entwicklung einer Zelle RNA-basierte Therapie Plattform f&uuml;r HIV.

RNA-basierten Gentherapie f&uuml;r HIV mit Lentiviralen Vektor-modifizierte CD34(+) Zellen bei Patienten Transplantation zur AIDS-Bek&auml;mpfung-Lymphoms.

Pazienti affetti da AIDS che sviluppano il linfoma sono spesso trattati con le cellule progenitrici ematopoietiche trapiantate. Come primo passo nello sviluppo di un trattamento di terapia genica basate sulle cellule ematopoietiche, quattro pazienti sottoposti a trattamento con queste cellule trapiantate erano anche dato gene modificato derivato dal sangue (CD34(+)) progenitrici ematopoietiche cellule periferiche che esprimono tre moiety anti-HIV RNA-based (tat/rev short hairpin RNA decoy TAR e ribozima CCR5). Analisi in vitro di queste cellule modificate gene ha mostrato alcuna differenza nella loro potenziale ematopoietico confrontato con cellule nontransduced. Stime in vitro di successo expression le moiety anti-HIV sono stati inizialmente alte come il 22% ma &egrave; diminuita di circa l&#39;1% oltre 4 settimane della cultura. Disegno dello studio etico richiesto che i pazienti da trapiantare con entrambe le cellule progenitrici ematopoietiche gene modificato e manipolate ottenute dal paziente mediante aferesi. Celle transfected sono stata trapiantate con successo in tutti e quattro i pazienti infusi di giorno 11, e non c&#39;erano nessun imprevisto tossicit&agrave; correlati a infusione. Espressione vettoriale persistente in molteplici linee cellulari &egrave; stato osservato a livelli bassi fino a 24 mesi, come era espressione del introdotto piccolo RNA interferente e ribozima. Pertanto, abbiamo dimostrato stabile vettore espressione in cellule del sangue umane dopo il trapianto di cellule autologhe progenitrici ematopoietiche gene modificato. Questi risultati supportano lo sviluppo di una piattaforma di terapia cellulare basata su RNA dell&#39;HIV.

Terapia genica basata su RNA HIV con lentivirali vector-modificato CD34(+) cellule nei pazienti sottoposti a trapianto per linfomi AIDS-correlati.

&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30A4;&#x30BA;&#x60A3;&#x8005;&#x306F;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x79FB;&#x690D;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x51E6;&#x7406;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x79FB;&#x690D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;4&#x4EBA;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x304C;&#x3001;3&#x3064;&#x306E;RNA&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x6297;HIV&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x7531;&#x6765;&#xFF08;CD34&#xFF08;+&#xFF09;&#xFF09;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x90E8;&#x5206;&#xFF08;TAT /&#x56DE;&#x8EE2;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x30C8;&#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;RNA&#x3001;TAR&#x30C7;&#x30B3;&#x30A4;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;CCR5&#x30EA;&#x30DC;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#xFF09;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;in vitro&#x89E3;&#x6790;&#x3067;nontransduced&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x9020;&#x8840;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306E;&#x5DEE;&#x3092;&#x793A;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; in vitro&#x3067;&#x306E;&#x6297;HIV&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x6B63;&#x5E38;&#x306A;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x5024;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306F;22&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x307B;&#x3069;&#x9AD8;&#x304F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x6587;&#x5316;&#x306E;4&#x9031;&#x9593;&#x3067;&#x7D04;1&#xFF05;&#x306B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x502B;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x7814;&#x7A76;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x60A3;&#x8005;&#x306F;&#x30A2;&#x30D5;&#x30A7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x60A3;&#x8005;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x3068;unmanipulated&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x79FB;&#x690D;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;11&#x65E5;&#x3067;4&#x3064;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x79FB;&#x690D;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4E88;&#x671F;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x70B9;&#x6EF4;&#x95A2;&#x9023;&#x6BD2;&#x6027;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x5E72;&#x6E09;RNA&#x3068;&#x30EA;&#x30DC;&#x30B6;&#x30A4;&#x30E0;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x7CFB;&#x5217;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x5F0F;&#x306F;&#x3001;24&#x30F6;&#x6708;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x4F4E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x81EA;&#x5DF1;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6539;&#x5909;&#x9020;&#x8840;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x79FB;&#x690D;&#x5F8C;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x8840;&#x6DB2;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x5F0F;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;HIV&#x306E;RNA&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x7642;&#x6CD5;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

AIDS&#x95A2;&#x9023;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x816B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x79FB;&#x690D;&#x60A3;&#x8005;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C1;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3067;&#x4FEE;&#x98FE;&#x3055;&#x308C;&#x305F;CD34&#xFF08;+&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;HIV&#x306E;RNA&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6CBB;&#x7642;

&#xB9BC;&#xD504; &#xC885; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xD658;&#xC790;&#xAC00; &#xC885;&#xC885; &#xC774;&#xC2DD;&#xB41C; hematopoietic &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xCC98;&#xB9AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. Hematopoietic &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBC18; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC694;&#xBC95; &#xCE58;&#xB8CC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB85C;, 4 &#xBA85;&#xC758; &#xD658;&#xC790; &#xB4E4;&#xC774; &#xC774;&#xC2DD;&#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB85C; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB97C; &#xBC1B;&#xACE0; &#xB610;&#xD55C; &#xBC1B;&#xC558;&#xB2E4; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC815; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xD608;&#xC561; &#xC720;&#xB798; (CD34(+)) hematopoietic &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC; 3 RNA &#xAE30;&#xBC18; anti-HIV moieties (&#xBB38;&#xC2E0;/&#xD68C;&#xC804; &#xC9E7;&#xC740; &#xD5E4;&#xC5B4;&#xD540; RNA, &#xD0C0;&#xB974; &#xBBF8;&#xB07C; &#xBC0F; CCR5 ribozyme)&#xC744; &#xD45C;&#xD604;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC218;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xC11D; nontransduced &#xC140;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC870; &#xD608; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC5D0; &#xCC28;&#xC774;&#xAC00; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. Anti-HIV moieties&#xC758; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xC2DD;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xACAC;&#xC801; &#xCC98;&#xC74C; 22%&#xB85C; &#xB192;&#xC740; &#xD588;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBB38;&#xD654; 4 &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xC57D; 1%&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C;. &#xC724;&#xB9AC;&#xC801;&#xC778; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xC131;&#xBD84;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD658;&#xC790; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xC5BB;&#xC740; &#xB450; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC218;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; unmanipulated hematopoietic &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xD658;&#xC790; &#xC774;&#xC2DD; &#xB420; &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Transfected &#xC138;&#xD3EC; &#xD558;&#xB8E8; 11, &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBAA8;&#xB4E0; 4 &#xBA85;&#xC758; &#xC0DD;&#xAE34;&#xB41C; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0; engrafted &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC804;&#xD600; &#xC608;&#xC0C1;&#xCE58; &#xBABB;&#xD55C; &#xC8FC;&#xC785; &#xAD00;&#xB828; &#xB3C5;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC140; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC5D0; &#xC601;&#xAD6C; &#xBCA1;&#xD130; &#xC2DD; &#xB3C4;&#xC785;&#xB41C; &#xB41C; &#xC791;&#xC740; &#xAC04;&#xC12D; RNA ribozyme &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; &#xB0AE;&#xC740; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD5C;&#xB300; 24 &#xAC1C;&#xC6D4;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD5CC; &#xC9C4; &#xC218;&#xC815; hematopoietic &#xC870;&#xC0C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC774;&#xC2DD; &#xD6C4; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xBCA1;&#xD130; &#xC2DD;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; hiv RNA &#xAE30;&#xBC18; &#xC140; &#xCE58;&#xB8CC; &#xD50C;&#xB7AB;&#xD3FC;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Lentiviral &#xBCA1;&#xD130; &#xC218;&#xC815; CD34(+) &#xC140; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988; &#xAD00;&#xB828; &#xB9BC;&#xD504; &#xC885;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC774;&#xC2DD; &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; hiv RNA &#xAE30;&#xBC18; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xCE58;&#xB8CC;.

To explore the molecular mechanism of continuous monoculture problem by constructing the cDNA libraries of continuous monoculture Rehmannia glutinosa.

[Construction and analysis of suppression subtractive cDNA libraries of continuous monoculture Rehmannia glutinosa].

Epigenetic mechanisms regulating leukemia stem cells (LSCs) are an attractive target for therapy of blood cancers. Here, we report that conditional knockout of the DNA methyltransferase Dnmt1 blocked development of leukemia, and haploinsufficiency of Dnmt1 was sufficient to delay progression of leukemogenesis and impair LSC self-renewal without altering normal hematopoiesis. Haploinsufficiency of Dnmt1 resulted in tumor suppressor gene derepression associated with reduced DNA methylation and bivalent chromatin marks. These results suggest that LSCs depend on not only active expression of leukemogenic programs, but also DNA methylation-mediated silencing of bivalent domains to enforce transcriptional repression.

Mingjie Li

Department of Neurology and Hope Center for Neurological Disorders

Washington University School of Medicine

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

Mingjie Li

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Neurology and Hope Center for Neurological Disorders

Washington University School of Medicine

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

Department of Neurology and Hope Center for Neurological Disorders