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Dendra2 Photoswitching through the Mammary Imaging Window

In the last decade, intravital microscopy of breast tumors in mice and rats at single-cell resolution1-4  has resulted in important insights into ...

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Time-Resolved Fluorescence Imaging and Analysis of Cancer Cell Invasion in the 3D Spheroid Model

The invasion of cancer cells from the primary tumor into the adjacent healthy tissues is an early step in metastasis. Invasive cancer cells pose a major ...

Albert Einstein College of Medicine - Yeshiva University

Temple University

Fox Chase Cancer Center

&#x6211;&#x4EEC;&#x6765;&#x5206;&#x6790;&#x5E76;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x5BF9;&#x6297;&#x759F;&#x836F;&#x7269;&#x6D3B;&#x52A8;&#x65B0; Pcr &#x4E3A;&#x57FA;&#x7840;&#x677F;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x62A5;&#x544A;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x662F;&#x901F;&#x5EA6;&#x5FEB;&#x5F97;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x662F;&#x52B3;&#x52A8;&#x5BC6;&#x96C6;&#x578B;&#x7684;&#x548C;&#x6BD4;&#x5E38;&#x89C4;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x540C;&#x4F4D;&#x7D20;&#x793A;&#x8E2A; &#xFF08;&#x4F8B;&#x5982;&#xFF0C;&#x6B21;&#x9EC4;&#x560C;&#x5464; [3 H] &#x548C; [3 H] &#x4E59;&#x9187;&#x80FA;&#xFF09; &#x4FBF;&#x5B9C;-&#x6839;&#x636E;&#x5316;&#x9A8C;&#x6216;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x4E73;&#x9178;&#x8131;&#x6C22;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x663E;&#x8457;&#x63D0;&#x9AD8;&#x4E86;&#x6297;&#x759F;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x73B0;&#x52AA;&#x529B;&#x53EF;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x3002;

&#x65B0;&#x9896;&#x3001; &#x5FEB;&#x901F;&#x548C;&#x5EC9;&#x4EF7;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x6297;&#x759F;&#x836F;&#x7269;&#x7597;&#x6548;&#x3002;

We report on the development of a new SYBR Green I-based plate assay for analyzing the activities of antimalarial drugs against intraerythrocytic Plasmodium falciparum. This assay is considerably faster, less labor-intensive, and less expensive than conventional radiotracer (e.g., [3H]hypoxanthine and [3H]ethanolamine)-based assays or P. falciparum lactate dehydrogenase activity-based assays. The assay significantly improves the pace at which antimalarial drug discovery efforts may proceed.

Novel, rapid, and inexpensive cell-based quantification of antimalarial drug efficacy.

Nous rapportons sur le d&eacute;veloppement d&#39;un nouveau test de plaque de base j&#39;ai SYBR Green pour analyser les activit&eacute;s des antipalud&eacute;ens contre intra-&eacute;rythrocytaire Plasmodium falciparum. Ce dosage est consid&eacute;rablement plus rapide, moins fastidieuse et moins cher que les traceurs classiques (p. ex., l&#39;hypoxanthine [3 H] et [3 H] &eacute;thanolamine)-selon les essais ou analyses activit&eacute; P. falciparum lactate d&eacute;shydrog&eacute;nase. Le test am&eacute;liore consid&eacute;rablement le rythme auquel les efforts de d&eacute;couverte de m&eacute;dicaments antipaludiques peuvent proc&eacute;der.

Nouvelle, rapide et peu co&ucirc;teuse &agrave; base de cellules quantification l&#39;efficacit&eacute; des m&eacute;dicaments antipaludiques.

Neuartige, schnelle und kosteng&#xFC;nstige zellbasierte Quantifizierung der Wirksamkeit Antimalariamittel.

Riportiamo sullo sviluppo di un nuovo dosaggio di sono basati su piastra SYBR Green per analizzare l&#39;attivit&agrave; dei farmaci antimalarici contro intraerythrocytic Plasmodium falciparum. Questo dosaggio &egrave; notevolmente pi&ugrave; veloce, meno dispendioso e meno costosi di quelli convenzionali cos&igrave; (per esempio, [3h] hypoxanthine ed etanolamina [3h])-based assays o p. falciparum deidrogenasi del lattato activity-based assays. Il dosaggio migliora significativamente il ritmo al quale gli sforzi di scoperta di farmaci antimalarici possono procedere.

Romanzo, rapida e poco costosa cell-based quantificazione dell&#39;efficacia del farmaco antimalarico.

&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x6297;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x85AC;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30B5;&#x30A4;&#x30D0;&#x30FC; &#x30B0;&#x30EA;&#x30FC;&#x30F3; &#x30FB; &#x30D9;&#x30FC;&#x30B9; &#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x6CD5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;.&#x3053;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1;&#x306F;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x901F;&#x304F;&#x3001;&#x5C11;&#x306A;&#x3044;&#x52B4;&#x529B;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x30EB;&#x30B3;&#x30FC;&#x30B9; (&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;&#x3001;[3 H] &#x30D2;&#x30DD;&#x30AD;&#x30B5;&#x30F3;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30A8;&#x30BF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3; [3 H]) &#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5B89;&#x4FA1;&#x3067;&#x3059;-&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x4E73;&#x9178;&#x8131;&#x6C34;&#x7D20;&#x9175;&#x7D20;&#x6D3B;&#x6027;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x8A66;&#x91D1;&#x3002;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x6297;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x85AC;&#x3078;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x7D44;&#x307F;&#x3092;&#x9032;&#x3081;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x30DA;&#x30FC;&#x30B9;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5411;&#x4E0A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5C0F;&#x8AAC;&#x30FB;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064;&#x5B89;&#x4FA1;&#x306A;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x6297;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x85AC;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; intraerythrocytic Plasmodium falciparum&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; SYBR &#xADF8;&#xB9B0; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; &#xB098; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C;. &#xC774; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD788; &#xBE60;&#xB974;&#xACE0;, &#xB35C; &#xB178;&#xB3D9; &#xC9D1;&#xC57D;&#xC801;&#xC778; &#xACE0; (&#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, [3h] hypoxanthine&#xC640; [3h] ethanolamine) &#xAE30;&#xC874;&#xC758; radiotracer &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB35C; &#xBE44;&#xC2FC;-&#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xB610;&#xB294; P. falciparum &#xC816; &#xC0B0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAE30;&#xBC18; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC57D;&#xBB3C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB178;&#xB825; &#xC9C4;&#xD589; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC18D;&#xB3C4; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC18C;&#xC124; &#xBE60;&#xB974;&#xACE0; &#xC800;&#xB834; &#xD55C; &#xC140; &#xAE30;&#xBC18; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC57D;&#xBB3C; &#xD6A8;&#xB2A5;&#xC758;.

Divulgamos sobre el desarrollo de un nuevo ensayo de placa I-basado de SYBR Green para analizar las actividades de los medicamentos antimal&aacute;ricos contra intraerythrocytic Plasmodium falciparum. Este ensayo es considerablemente m&aacute;s r&aacute;pido, menos trabajo y menos costosa que la radiosonda convencional (por ejemplo, hipoxantina [3 H] y etanolamina [3 H])-basado en ensayos o por p. falciparum lactato deshidrogenasa actividad ensayos. El ensayo mejora significativamente el ritmo en que los esfuerzos de descubrimiento de medicamentos antimal&aacute;ricos pueden proceder.

Novela, r&aacute;pida y de bajo costo basadas en c&eacute;lulas cuantificaci&oacute;n de eficacia de los medicamentos antimal&aacute;ricos.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49; Nipkow &#x65CB;&#x8F6C;&#x78C1;&#x76D8;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; &#xFF08;SDCM&#xFF09; &#x4E3A;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x83B7;&#x5F97;&#x4E09;&#x7EF4; (3D) &#x968F;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5728;&#x8840;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x6446;&#x52A8;&#x6D3B;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#xFF0C;&#x5E38;&#x89C4;&#x6FC0;&#x5149;&#x626B;&#x63CF;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; z &#x5806;&#x6808;&#x6570;&#x636E;&#x91CD;&#x5EFA;&#x540E;&#x4EA7;&#x751F;&#x6A21;&#x7CCA;&#x7684; 3D &#x56FE;&#x50CF;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x5728;&#x9AD8; x SDCM &#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5728;&#x51E0;&#x767E;&#x6BEB;&#x79D2;&#x4E3A;&#x5355;&#x4F4D;&#xFF09;&#xFF0C;&#x53EF;&#x83B7;&#x5F97; y &#x548C; z &#x7684;&#x51B3;&#x8BAE;&#x3001; &#x6D3B;&#x5BC4;&#x751F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x65B9;&#x9762;&#x53EF;&#x4EE5;&#x662F;&#x5F88;&#x591A;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x89E3;&#x51B3;&#x751F;&#x7406;&#x4E0A;&#x6709;&#x610F;&#x4E49;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x3002;&#x5728;&#x672C;&#x6587;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A; 3D DIC &#x900F;&#x5149;&#x7387;&quot;z &#x5806;&#x6808;&quot;&#x5F62;&#x8C61;&#x7684;&#x6D3B;&#x7684;&#x759F;&#x75BE;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x91CF;&#x5316;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x8272;&#x7D20; (Hz) &#x5185;&#x751F;&#x6D3B;&#x4EA7;&#x751F;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x6D88;&#x5316;&#x6CE1;&#xFF0C;&#x5728;&#x751F;&#x7406;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9E;&#x65F6;&#x540C;&#x6B65;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x548C;&#x524A;&#x5C16;&#x7684; DIC z &#x5806;&#x6808;&#x7D20;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x63D0;&#x51FA;&#x5BF9;&#x6C2F;&#x55B9;&#x654F;&#x611F; &#xFF08;CQS&#xFF09; &#x4E0E;&#x8010; (CQR) &#x759F;&#x75BE;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B; Hz &#x589E;&#x957F;&#x7387;&#x9996;&#x6B21;&#x5B9A;&#x91CF;&#x4F53;&#x5185;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x6570;&#x636E;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x83CC;&#x682A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; pfcrt transfectants CQR &#x8D4B;&#x4E88;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; pfcrt &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x5B58;&#x5728;&#x548C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x6709;&#x5173;&#x751F;&#x7406;&#x5242;&#x91CF;&#x7684;&#x6C2F;&#x55B9; (CQ) &#x548C;&#x7EF4;&#x62C9;&#x5E15;&#x7C73; (VPL) &#x5206;&#x6790; Hz &#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x7387;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4ECE;&#x800C;&#x63D0;&#x51FA;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x9884;&#x6D4B;&#x4ECE; CQ &#x836F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x77E5;&#x540D;&#x60E0;&#x8A89;&#x5047;&#x8BBE;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4F53;&#x5185;&#x91CF;&#x5316;&#x3002;&#x4E0B;&#x9762;&#x7684;&#x6587;&#x4EF6; [Gligorijevic&#xFF0C;B.&#x4E2D;, &#x5357;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x5927;&#x5B66; (2006 &#x5E74;) &#x751F;&#x5316; 45&#xFF0C;pp 12411 12423]&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x83B7;&#x5F97;&#x6D3B;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x901A;&#x8FC7; SDCM DV &#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x56FE;&#x50CF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4E0E; CQR &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684; CQS &#x91CF;&#x5316; DV &#x5377;&#x3002;

&#x65CB;&#x8F6C;&#x78C1;&#x76D8;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x3002;1.&#x836F;&#x7269;&#x654F;&#x611F;&#x4E0E;&#x6297;&#x759F;&#x75BE;&#x7684;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x8272;&#x7D20;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x3002;

We have customized a Nipkow spinning disk confocal microscope (SDCM) to acquire three-dimensional (3D) versus time data for live, intraerythrocytic malarial parasites. Since live parasites wiggle within red blood cells, conventional laser scanning confocal microscopy produces blurred 3D images after reconstruction of z stack data. In contrast, since SDCM data sets at high x, y, and z resolution can be acquired in hundreds of milliseconds, key aspects of live parasite cellular biochemistry can be much better resolved on physiologically meaningful times scales. In this paper, we present the first 3D DIC transmittance "z stack" images of live malarial parasites and use those to quantify hemozoin (Hz) produced within the living parasite digestive vacuole, under physiologic conditions. Using live synchronized cultures and voxel analysis of sharpened DIC z stacks, we present the first quantitative in vivo analysis of the rate of Hz growth for chloroquine sensitive (CQS) versus resistant (CQR) malarial parasites. We present data for laboratory strains, as well as pfcrt transfectants expressing a CQR conferring mutant pfcrt gene. We also analyze the rate of Hz growth in the presence and absence of physiologically relevant doses of chloroquine (CQ) and verapamil (VPL) and thereby present the first in vivo quantification of key predictions from the well-known Fitch hypothesis for CQ pharmacology. In the following paper [Gligorijevic, B., et al. (2006) Biochemistry 45, pp 12411-12423], we acquire fluorescent images of live parasite DV via SDCM and use those to quantify DV volume for CQS versus CQR parasites.

Spinning disk confocal microscopy of live, intraerythrocytic malarial parasites. 1. Quantification of hemozoin development for drug sensitive versus resistant malaria.

Nous avons personnalis&eacute; un Nipkow filature microscope confocal de disque (SDCM) afin d&#39;acqu&eacute;rir en trois dimensions (3D) par rapport aux donn&eacute;es en temps direct, intra-&eacute;rythrocytaire paludisme parasites. Puisque les parasites vivants se tortiller dans les globules rouges, laser conventionnel, microscopie confocale &agrave; balayage produit des images 3D floues apr&egrave;s reconstruction de donn&eacute;es de pile de z. En revanche, depuis SDCM les ensembles de donn&eacute;es &agrave; haute x, y et z de r&eacute;solution peuvent &ecirc;tre acquises dans des centaines de millisecondes, les aspects essentiels de la biochimie cellulaire parasite direct peuvent &ecirc;tre beaucoup mieux r&eacute;solus sur fois physiologiquement significatives &eacute;chelles. Dans cet article, nous pr&eacute;sentons la premi&egrave;re transmission de la DIC 3D &laquo; z empiler &raquo; les images de parasites palud&eacute;ens vivants et ceux qui permet de quantifier h&eacute;mozo&iuml;ne (Hz) produite au sein de la vie la vacuole digestive parasite, dans des conditions physiologiques. &Agrave; l&#39;aide de cultures vivantes de synchronis&eacute; et analyse de voxel de chemin&eacute;es de z DIC aiguis&eacute;es, nous pr&eacute;sentons la premi&egrave;re analyse in vivo quantitative du taux de croissance de Hz pour la chloroquine sensible (CQS) contre les parasites palud&eacute;ens r&eacute;sistants (CQR). Nous pr&eacute;sentons des donn&eacute;es pour les souches de laboratoire, ainsi que pfcrt transfectants exprimant un g&egrave;ne mutant pfcrt attributive de CQR. Nous avons &eacute;galement analyser le taux de croissance de Hz en pr&eacute;sence et en absence de doses physiologiquement pertinents de la chloroquine (CQ) et le v&eacute;rapamil (VPL) et ainsi pr&eacute;senter la premi&egrave;re quantification in vivo des principales pr&eacute;dictions de l&#39;hypoth&egrave;se de Fitch bien connu pour la pharmacologie de CQ. Dans le document suivant [Gligorijevic, b., et coll. (2006) biochimie 45, pp 12411-12423], nous acqu&eacute;rir les images fluorescentes de parasites vivants DV via SDCM et les utiliser pour quantifier le volume DV pour CQS contre parasites CQR.

Filature de microscopie confocale disque de parasites palud&eacute;ens de direct, intra-&eacute;rythrocytaire. 1. Quantification du d&eacute;veloppement h&eacute;mozo&iuml;ne pour m&eacute;dicaments sensibles contre le paludisme r&eacute;sistant.

Wir haben eine Nipkow Disk Konfokales Mikroskop (SDCM) Spinnen, um dreidimensionale (3D) versus Zeitdaten f&uuml;r Leben, Intraerythrocytic Malariagebiete Parasiten zu erwerben angepasst. Da Leben Parasiten innerhalb der roten Blutk&ouml;rperchen wackeln, produziert konventionelle Laser scanning konfokale Mikroskopie verschwommene Bilder 3D nach Rekonstruktion des Z-Stapel-Daten. Im Gegensatz dazu k&ouml;nnen seit SDCM-Datens&auml;tze bei hohen X, y und Z-Aufl&ouml;sung k&ouml;nnen Hunderte von Millisekunden erworben werden, Schwerpunkteder Leben Parasit Zellul&auml;re Biochemie viel besser gel&ouml;st auf physiologisch sinnvolle Mal skaliert. In diesem Papier, wir pr&auml;sentieren den ersten 3D DIC Transmission &quot;Z-Stapel&quot; Bilder Leben Malariagebiete Parasiten und verwenden Sie die Quantifizierung der Hemozoin (Hz) innerhalb der lebenden Parasiten verdauungsf&ouml;rdernden Vakuole, unter physiologischen Bedingungen. Mit lebenden synchronisierte Kulturen und Voxel-Analyse der gesch&auml;rften DIC-Z-Stapel, pr&auml;sentieren wir die erste quantitative in-vivo-Analyse der Hz Wachstumsrate f&uuml;r Chloroquin sensible (CQS) gegen&uuml;ber resistent (CQR) Malariagebiete Parasiten. Wir stellen Daten f&uuml;r Labor-St&auml;mme, sowie Pfcrt Transfektanten, ein CQR Gemeinschaftspatentsachen mutant Pfcrt gen. Wir auch die Wachstumsrate der Hz in der Anwesenheit und Abwesenheit von physiologisch relevanten Dosen von Chloroquin (CQ) und Verapamil (VPL) analysieren und pr&auml;sentieren und damit die erste in-vivo Quantifizierung der wichtigsten Vorhersagen aus der bekannten Fitch-Hypothese f&uuml;r CQ-Pharmakologie. In dem folgenden Aufsatz [Gligorijevic, B., Et Al. (2006) Biochemie-45, pp 12411-12423], wir fluoreszierende Bilder live-Parasiten DV &uuml;ber SDCM zu erwerben und verwenden Sie die DV-Band f&uuml;r CQS gegen&uuml;ber CQR Parasiten zu quantifizieren.

Drehenden Scheibe confocal Mikroskopie Leben, Intraerythrocytic Malariagebiete Parasiten. 1. Quantifizierung der Hemozoin Entwicklung f&uuml;r Medikament empfindlich gegen resistente Malaria.

Noi abbiamo personalizzato un Nipkow filatura microscopio confocale disco (SDCM) per acquisire tridimensionale (3D) rispetto a dati in tempo per vivere, intraerythrocytic parassiti malarici. Poich&eacute; i parassiti vivi muovere all&#39;interno dei globuli rossi, laser convenzionali, microscopia confocale a scansione produce immagini sfocate 3D dopo la ricostruzione dei dati dello stack z. Al contrario, dal set di dati SDCM all&#39;altezza x, y e z risoluzione pu&ograve; essere acquisita in centinaia di millisecondi, aspetti fondamentali della biochimica cellulare parassita dal vivo possono essere molto meglio risolti sui tempi fisiologicamente significative scale. In questa carta, noi presentare la prima trasmissione 3D DIC &laquo;pila z&raquo; immagini di parassiti malarici dal vivo e utilizzare quelli per quantificare emozoina (Hz) prodotta all&#39;interno del vivente vacuolo digestivo parassita, in condizioni fisiologiche. Usando live culture sincronizzate e analisi voxel di stack di z DIC affilato, vi presentiamo la prima analisi quantitativa in vivo del tasso di crescita Hz per clorochino sensibile (CQS) versus resistente ai parassiti malarici (CQR). Vi presentiamo i dati per ceppi di laboratorio, nonch&eacute; pfcrt transfettanti esprimendo un gene mutante pfcrt conferimento CQR. Analizziamo anche il tasso di crescita Hz in presenza e in assenza di fisiologicamente rilevanti dosi di clorochina (CQ) e verapamil (VPL) e quindi presentare la prima quantificazione in vivo delle predizioni chiave dall&#39;ipotesi di Fitch ben noto per la farmacologia CQ. Nella carta seguente [Gligorijevic, b., et al (2006) 45 biochimica, pp 12411-12423], noi acquisire immagini fluorescenti del parassita dal vivo DV via SDCM e utilizzare quelli per quantificare il volume DV per CQS contro parassiti CQR.

Filatura microscopia confocal disco dei parassiti malarici vivi, intraerythrocytic. 1. Quantificazione dello sviluppo di emozoina per sensibile contro la malaria resistenti al farmaco.

&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (SDCM) &#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E; 3 &#x6B21;&#x5143; (3 D) &#x6642;&#x9593;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x5BFE;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3059;&#x308B;&#x7D21;&#x7E3E; Nipkow &#x3092;&#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30DE;&#x30A4;&#x30BA;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x5185;&#x3092;&#x5C0F;&#x523B;&#x307F;&#x306B;&#x52D5;&#x304F;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; z &#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x5F8C; 3 D &#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x307C;&#x3084;&#x3051;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;SDCM &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044; x &#x304B;&#x3089; y&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; z &#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x6570;&#x767E;&#x30DF;&#x30EA;&#x79D2;&#x3067;&#x53D6;&#x5F97;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7D30;&#x80DE;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x5074;&#x9762;&#x304C;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x3044;&#x89E3;&#x6C7A;&#x306B;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x610F;&#x5473;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x56DE;&#x3092;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x300C;z &#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x300D;&#x753B;&#x50CF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6; &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E; 3 d DIC &#x900F;&#x904E;&#x7387;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x5185;&#x751F;&#x6D3B;&#x3092;&#x751F;&#x7523; hemozoin (Hz) &#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x6D88;&#x5316;&#x6DB2;&#x80DE;&#x751F;&#x7406;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x3002;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x540C;&#x671F;&#x6587;&#x5316;&#x3084;&#x5C16;&#x3063;&#x305F; DIC z &#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x30DC;&#x30AF;&#x30BB;&#x30EB;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30AD;&#x30F3;&#x6A5F;&#x5BC6; (CQS) &#x8010;&#x6027; (CQR) &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5BFE;&#x306E; Hz &#x6210;&#x9577;&#x7387;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5B9F;&#x9A13;&#x5BA4;&#x306E;&#x7DCA;&#x5F35;&#x3068;&#x3057;&#x3066; CQR &#x6388;&#x4E0E;&#x5909;&#x7570; pfcrt &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50; pfcrt &#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3; &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;Hz &#x6210;&#x9577;&#x7387;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x4E0D;&#x5728;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30AD;&#x30F3;&#x3068;&#x30D9;&#x30E9;&#x30D1;&#x30DF;&#x30EB; (VPL) &#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x7528;&#x91CF;&#x3067;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3082;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30AD;&#x30FC;&#x4E88;&#x6E2C; CQ &#x85AC;&#x7406;&#x5B66;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3088;&#x304F;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C1;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E; in vivo &#x3067;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6B21;&#x306E;&#x8AD6;&#x6587;&#x3067;&#x306F; [Gligorijevic, B.&#x3001;et al. (2006) pp 12411 12423 &#x751F;&#x5316;&#x5B66; 45]&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B; DV SDCM &#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x753B;&#x50CF;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3057;&#x3001;DV &#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E; CQS CQR &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5BFE;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D21;&#x7E3E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x89B3;&#x5BDF;1. &#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5BFE;&#x6A5F;&#x5BC6;&#x7528; hemozoin &#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;, intraerythrocytic &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 3 &#xCC28;&#xC6D0; (3D) &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC640; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC5BB;&#xC73C;&#xB824;&#xACE0; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (SDCM) &#xD68C;&#xC804; Nipkow &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; &#xC9C0;&#xC815;&#xD55C;. &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC740; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD754;&#xB4E4;&#xAE30;, &#xC774;&#xD6C4; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xB808;&#xC774;&#xC800; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; z &#xC2A4;&#xD0DD; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC758; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD6C4; &#xD750;&#xB9AC;&#xAC8C; 3D &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xB192;&#xC740; x&#xC5D0;&#xC11C; SDCM &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC138;&#xD2B8;, &#xC774;&#xD6C4; &#xC218;&#xBC31; &#xBC00;&#xB9AC;&#xCD08;&#xC758; y, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; z &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC5BB;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;, &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xCE21;&#xBA74; &#xC21C;&#xC218; &#xC758;&#xBBF8; &#xC788;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xD574;&#xACB0; &#xB354; &#xB9CE;&#xC774; &#xD655;&#xC7A5; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC885;&#xC774;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC; &#xCD5C;&#xCD08;&#xC758; 3D DIC &#xD22C;&#xACFC;&#xC728; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &quot;z &#xC2A4;&#xD0DD;&quot; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACC4;&#xB7C9; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; (Hz)&#xB294; &#xC0DD;&#xD65C; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801;&#xC778; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC18C;&#xD654; &#xACF5;&#xD3EC;. &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xB41C; &#xBB38;&#xD654;&#xC640; &#xB0A0;&#xCE74;&#xB86D;&#xAC8C; DIC z &#xC2A4;&#xD0DD; voxel &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xD074;&#xB85C;&#xB85C;&#xD038; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; (CQS) &#xC800;&#xD56D; (CQR) &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xB300;&#xC758; hz&#xC5D0;&#xC11C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC591;&#xC801; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xBD84;&#xC11D;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC73C;&#xB85C; pfcrt transfectants CQR &#xBD80;&#xC5EC; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; pfcrt &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD45C;&#xD604; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB610;&#xD55C; &#xC874;&#xC7AC;&#xC640; &#xD074;&#xB85C;&#xB85C;&#xD038; (CQ) &#xBC0F; verapamil (VPL)&#xC758; &#xC21C;&#xC218; &#xAD00;&#xB828; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; Hz &#xC131;&#xC7A5; &#xC18D;&#xB3C4; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; CQ &#xC57D;&#xB9AC;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC798; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; &#xD53C;&#xCE58; &#xAC00;&#xC124;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xC694; &#xC608;&#xCE21;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; in vivo &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC;. &#xB2E4;&#xC74C; &#xC885;&#xC774;&#xC5D0; [Gligorijevic, B., &#xC678;. (2006) &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; 45, pp 12411 12423], &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; SDCM &#xD1B5;&#xD574; DV&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC218;&#xC9D1; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; CQR &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xB300; DV &#xBCFC;&#xB968; CQS&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC99;&#xB3C4;.

&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;, intraerythrocytic &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xC2A4; &#xD53C;&#xB2DD; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;. 1. &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xB300; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;.

Nosotros hemos modificado para requisitos particulares un Nipkow spinning microscopio confocal de disco (SDCM) para adquirir tridimensional (3D) versus cronol&oacute;gicas para vivo, intraerythrocytic par&aacute;sitos pal&uacute;dicos. Puesto que vivo par&aacute;sitos se mueva dentro de gl&oacute;bulos rojos, l&aacute;ser convencional, microscop&iacute;a confocal produce im&aacute;genes borrosas 3D despu&eacute;s de la reconstrucci&oacute;n de datos pila de z. En contraste, desde SDCM conjuntos de datos en alto x, y y z resoluci&oacute;n pueden adquirirse en cientos de milisegundos, aspectos fundamentales de la bioqu&iacute;mica celular del par&aacute;sito vivo pueden ser mucho mejor resuelta en tiempos fisiol&oacute;gicamente significativas escala. En este trabajo, presentamos la primera transmisi&oacute;n 3D de DIC im&aacute;genes &quot;pila z&quot; de par&aacute;sitos pal&uacute;dicos vivos y utilizarlos leucocito-asociado de la malaria (Hz) producido en la vida de cuantificar vacuola digestiva del par&aacute;sito, en condiciones fisiol&oacute;gicas. Mediante el an&aacute;lisis de voxel de pilas de z DIC afiladas y cultivos vivos sincronizados, presentamos el primer an&aacute;lisis cuantitativo en vivo de la tasa de crecimiento de Hz para cloroquina sensible (CQS) contra los par&aacute;sitos de malaria resistentes (CQR). Presentamos los datos para las cepas de laboratorio, as&iacute; como pfcrt transfectants que expresan un gen mutante pfcrt que confiere de CQR. Tambi&eacute;n analizamos la tasa de crecimiento de Hz en presencia y ausencia de dosis fisiol&oacute;gicamente relevantes de cloroquina (CQ) y verapamilo (PEV) y as&iacute; presentar la primera cuantificaci&oacute;n en vivo de predicciones claves de la conocida hip&oacute;tesis de Fitch para farmacolog&iacute;a CQ. En el siguiente documento [Gligorijevic, B., et al (2006) bioqu&iacute;mica 45, pp 12411-12423], que adquirir im&aacute;genes fluorescentes de par&aacute;sito vivo DV via SDCM y los utilizamos para cuantificar el volumen DV para CQS contra par&aacute;sitos CQR.

Giro microscopia confocal de disco de vivo, intraerythrocytic par&aacute;sitos pal&uacute;dicos. 1. Cuantificaci&oacute;n de desarrollo leucocito-asociado de malaria para sensibles frente a la malaria resistente a medicamentos.

&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x6587;&#x4EF6; [Gligorijevic&#xFF0C;B.&#x4E2D;, &#x5357;&#x5DE5;&#x4E1A;&#x5927;&#x5B66; &#xFF08;2006 &#x5E74;&#xFF09; &#x7B2C; 45 &#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66;&#xFF0C;pp 12400 12410]&#x3001; &#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x4E86;&#x65CB;&#x8F6C;&#x78C1;&#x76D8; &#xFF08;SDCM&#xFF09; &#x7684;&#x5171;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49; Nipkow &#x548C; DIC &#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x8272;&#x7D20;&#x53CA;&#x5176;&#x521D;&#x6B65;&#x5E94;&#x7528;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x751F;&#x6D3B;&#x3001; &#x540C;&#x6B65;&#xFF0C;&#x5E76;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x759F;&#x75BE;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x6587;&#x4EF6;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8;&#x751F;&#x7269;&#x53D1;&#x751F;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x6D88;&#x5316;&#x6CE1; (DV)&#xFF0C;&#x4F53;&#x79EF;&#x548C; ph &#x503C;&#x8C03;&#x8282;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x524D;&#x51E0;&#x6B21;&#x62A5;&#x544A;&#x66FE;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7A81;&#x53D8; PfCRT &#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6C2F;&#x55B9;&#x6297;&#x6027; (CQR)&#xFF0C;&#x4E5F;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x9178;&#x5316;&#x7684; DV&#x3002;&#x7531;&#x4E8E; ph &#x503C;&#x548C;&#x97F3;&#x91CF;&#x8C03;&#x8282;&#x6709;&#x7740;&#x7ECF;&#x5E38;&#x7684;&#x8054;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x60F3;&#x77E5;&#x9053;&#x662F;&#x5426; DV &#x7684;&#x97F3;&#x91CF;&#x5DEE;&#x5F02;&#x53EF;&#x80FD;&#x4E0E; CQR &#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; SDCM z &#x5806;&#x6808;&#x7684;&#x5FEB;&#x901F;&#x91C7;&#x96C6;&#x4E0E; DV&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x4F7F;&#x7528;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x70B9;&#x7684;&#x8FED;&#x4EE3;&#x53CD;&#x5377;&#x79EF;&#x5185;&#x5316;&#x4E3A; OGd &#x540C;&#x6B65;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x4F20;&#x64AD;&#x804C;&#x80FD;&#xFF0C;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5E76; HB3 &#xFF08;CQS&#xFF09;&#xFF0C;Dd2 &#x7684; DV &#x5377; (CQR &#x901A;&#x8FC7;&#x836F;&#x7269;&#x9009;&#x62E9;&#xFF09;&#xFF0C;GCO3 &#xFF08;CQS&#xFF09; &#x548C; GCO3/C3(Dd2) &#xFF08;&#x901A;&#x8FC7;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; pfcrt &#x8F6C;&#x67D3; CQR&#xFF09; &#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD; CQS &#x54C1;&#x79CD;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A; CQR &#x682A;&#x663E;&#x793A; DV &#x91CF;&#x5927;&#x5927;&#x589E;&#x52A0;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#x53D1;&#x5C55;&#x9636;&#x6BB5;&#x8FDB;&#x5165;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E00;&#x76F4;&#x4FDD;&#x6301;&#xFF0C;&#x76F4;&#x5230;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#x6B96;&#x8FB9;&#x754C;&#x3002;&#x9178;&#x5EA6;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684; DV pH &#x662F;&#x627E;&#x5230; CQR &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x5FEB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5668;&#x5F62;&#x6210;&#x6574;&#x4E2A;&#x6ECB;&#x517B;&#x4F53;&#x9636;&#x6BB5;&#x4ECD;&#x7136;&#x5B58;&#x5728;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x8BA8; DV &#x540E; ATP &#x8017;&#x7AED;&#x3001; hypo-&#x548C;&#x9AD8;&#x6E17;&#x4F11;&#x514B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8FC5;&#x901F;&#x64A4;&#x79BB;&#x7684;&#x704C;&#x6D17;&#x6DB2;&#x6C2F;&#x91CF;&#x548C; ph &#x503C;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; PfCRT &#x7A81;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4; CQR &#x8FD8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6539;&#x53D8; DV &#x97F3;&#x91CF;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;

&#x65CB;&#x8F6C;&#x78C1;&#x76D8;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x3002;2.&#x4FEE;&#x6539;&#x540E;&#x7684;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x97F3;&#x91CF;&#x8C03;&#x63A7;&#x6297;&#x836F;&#x6027;&#x759F;&#x75BE;&#x3002;

In the previous paper [Gligorijevic, B., et al. (2006) Biochemistry 45, pp 12400-12410], we reported on a customized Nipkow spinning disk confocal microscopy (SDCM) system and its initial application to DIC imaging of hemozoin within live, synchronized, intraerythrocytic Plasmodium falciparum malarial parasites. In this paper, we probe the biogenesis as well as the volume and pH regulation of the parasite digestive vacuole (DV), using the fluorescence imaging capabilities of the system. Several previous reports have suggested that mutant PfCRT protein, which causes chloroquine resistance (CQR) in P. falciparum, also causes increased acidification of the DV. Since pH and volume regulation are often linked, we wondered whether DV volume differences might be associated with CQR. Using fast acquisition of SDCM z stacks for synchronized parasites with OGd internalized into the DV, followed by iterative deconvolution using experimental point spread functions, we quantify the volume of the DV for live, intraerythrocytic HB3 (CQS), Dd2 (CQR via drug selection), GCO3 (CQS), and GCO3/C3(Dd2) (CQR via transfection with mutant pfcrt) malarial parasites as they develop within the human red blood cell. We find that relative to both CQS strains, both CQR strains show significantly increased DV volume as the organelle forms upon entry into the trophozoite stage of development and that this persists until the trophozoite-schizont boundary. A more acidic DV pH is found for CQR parasites as soon as the organelle forms and persists throughout the trophozoite stage. We probe DV volume and pH changes upon ATP depletion, hypo- and hypertonic shock, and rapid withdrawal of perfusate chloride. Taken together, these data suggest that the PfCRT mutations that cause CQR also lead to altered DV volume regulation.

Spinning disk confocal microscopy of live, intraerythrocytic malarial parasites. 2. Altered vacuolar volume regulation in drug resistant malaria.

Dans le document pr&eacute;c&eacute;dent [Gligorijevic, b., et coll. (2006) biochimie 45, pp 12400-12410], nous avons signal&eacute; sur un Nipkow personnalis&eacute; filage syst&egrave;me de microscopie confocale (SDCM) disque et sa premi&egrave;re application &agrave; l&#39;imagerie de la DIC d&#39;h&eacute;mozo&iuml;ne dans live, synchronis&eacute;, les parasites palud&eacute;ens intra-&eacute;rythrocytaire Plasmodium falciparum. Dans cet article, nous sonder la biogen&egrave;se ainsi que le r&egrave;glement de volume et le pH de la vacuole digestive du parasite (DV), &agrave; l&#39;aide de la fluorescence des capacit&eacute;s du syst&egrave;me d&#39;imagerie. Plusieurs pr&eacute;c&eacute;dents rapports ont sugg&eacute;r&eacute; que la prot&eacute;ine mutante de PfCRT, qui provoque la r&eacute;sistance &agrave; la chloroquine (CQR) de P. falciparum, provoque &eacute;galement acidification accrue de la DV. R&eacute;gulation pH et volume sont souvent li&eacute;s, nous nous sommes demand&eacute; si les diff&eacute;rences de volume DV pourraient &ecirc;tre associ&eacute;s &agrave; CQR. &Agrave; l&#39;aide de l&#39;acquisition rapide des piles de z SDCM pour la propagation de parasites synchronis&eacute;es avec les autres minist&egrave;res internalis&eacute;s dans le DV, suivie de d&eacute;convolution it&eacute;rative, en utilisant le point exp&eacute;rimental fonctions, nous quantifier le volume de la DV pour vivre, intra-&eacute;rythrocytaire HB3 (CQS), Dd2 (CQR via la s&eacute;lection de m&eacute;dicaments), GCO3 (CQS) et GCO3/C3(Dd2) (CQR par transfection avec mutant pfcrt) parasites palud&eacute;ens comme ils se d&eacute;veloppent dans les globules rouges humains. Nous trouvons que, par rapport &agrave; ces deux souches CQS, les deux souches CQR montrent significativement accru volume DV comme l&#39;organite forme d&egrave;s l&#39;entr&eacute;e dans le stade trophozo&iuml;te de d&eacute;veloppement et que cela persiste jusqu&#39;&agrave; la limite du trophozo&iuml;te-schizonte. Un pH plus acide de la DV est trouv&eacute; pour parasites CQR d&egrave;s l&#39;organite forme et persiste tout au long de l&#39;&eacute;tape de trophozo&iuml;tes. Nous sonde DV modifications de volume et le pH lors de la d&eacute;pl&eacute;tion de l&#39;ATP, hypo - et choc hypertonique et retrait rapide du perfusat chlorure. Pris ensemble, ces r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que les mutations PfCRT qui causent CQR &eacute;galement entra&icirc;ner r&eacute;gulation du volume DV alt&eacute;r&eacute;e.

Filature de microscopie confocale disque de parasites palud&eacute;ens de direct, intra-&eacute;rythrocytaire. 2. R&egrave;glement alt&eacute;r&eacute;e volume vacuolaire de paludisme r&eacute;sistantes aux m&eacute;dicament.

In der fr&uuml;heren Papier [Gligorijevic, B., Et Al. (2006) Biochemie-45, pp 12400-12410], berichteten wir &uuml;ber eine angepasste Nipkow Spinnerei Datentr&auml;gersystem confocal Mikroskopie (SDCM) und ihrer ersten Anwendung um DIC Bildgebung der Hemozoin innen leben, synchronisiert, Intraerythrocytic Plasmodium Falciparum Malariagebiete Parasiten. In diesem Papier sondieren wir die Biogenese sowie die Lautst&auml;rke und pH-Wert Regulierung der Parasit verdauungsf&ouml;rdernden Vakuole (DV), mit Hilfe der Fluoreszenz-imaging-Funktionen des Systems. Mehrere fr&uuml;here Berichte haben vorgeschlagen, sich mutant PfCRT-Protein, das Chloroquin-Resistenz (CQR) in p. Falciparum verursacht, dass eine erh&ouml;hte S&auml;uerung von der DV. Da pH-Wert und Volume-Verordnung sind oft verkn&uuml;pft, wunderten wir uns, ob DV Lautst&auml;rkeunterschiede CQR zugeordnet sein k&ouml;nnen. Mit schnellen Erwerb der SDCM Z-Stapel f&uuml;r synchronisierte Parasiten mit OGd verinnerlicht in DV, gefolgt von iterativen Entwindung &uuml;ber experimentelle Point Funktionen verbreiten, quantifizieren wir das Volumen der DV f&uuml;r Leben, Intraerythrocytic HB3 (CQS), Dd2 (CQR &uuml;ber Droge-Auswahl), GCO3 (CQS) und GCO3/C3(Dd2) (CQR &uuml;ber Transfektion mit mutant Pfcrt) Malariagebiete Parasiten wie sie innerhalb der menschlichen roten Blutk&ouml;rperchen entwickeln. Wir finden, dass relativ beide CQS-St&auml;mmen, beide CQR-St&auml;mme deutlich gestiegenen DV-Band zeigen, wie die Organellen beim Eintritt in das Entwicklungsstadium Trophozoit bildet und dies bis der Trophozoit-Schizont-Grenze bleibt. Der mehr saurer pH-Wert von DV ist f&uuml;r CQR Parasiten gefunden, sobald die Organellen bildet und w&auml;hrend der Trophozoit-B&uuml;hne bleibt. Wir sondieren DV Band und pH-&Auml;nderungen auf ATP-Verarmung, Hypo- und hypertonen Schock und schnelle R&uuml;cknahme Perfusat Chlorid. Zusammen genommen, zufolge diese Daten die PfCRT-Mutationen, die CQR f&uuml;hren auch zu ver&auml;nderten DV Volumenregulation f&uuml;hren.

Drehenden Scheibe confocal Mikroskopie Leben, Intraerythrocytic Malariagebiete Parasiten. 2. Ge&auml;nderte vacuolar Volumenregulation in Medikamenten resistenten Malaria.

Nel libro precedente [Gligorijevic, b., et al (2006) 45 biochimica, pp 12400-12410], abbiamo riportato su un personalizzato Nipkow filatura disco di sistema di microscopia confocale (SDCM) e sua applicazione iniziale a imaging DIC di emozoina interno vivono, sincronizzato, parassiti malarici intraerythrocytic Plasmodium falciparum. In questa carta, si sonda la biogenesi, cos&igrave; come la regolazione di volume e pH del vacuolo digestivo parassita (DV), utilizzando la funzionalit&agrave; del sistema di imaging di fluorescenza. Diversi rapporti precedenti hanno suggerito che PfCRT proteina mutante, che causa p. falciparum clorochino-resistenza (CQR), provoca anche aumentata acidificazione del DV. Dal momento che la regolazione del pH e volume sono spesso legati, ci siamo chiesti se le differenze di volume DV potrebbero essere associate con CQR. Utilizzo veloce acquisizione di stack z SDCM per parassiti sincronizzate con OGd interiorizzato in DV, seguito da deconvoluzione iterativa usando punto sperimentale diffuse funzioni, noi quantificare il volume di DV per intraerythrocytic live, HB3 (CQS), Dd2 (CQR tramite selezione di droga), GCO3 (CQS) e GCO3/C3(Dd2) (CQR tramite transfezione con mutante pfcrt) parassiti malarici come si sviluppano all&#39;interno del globulo rosso umano. Troviamo che, rispetto a entrambi i ceppi CQS, entrambi i ceppi CQR mostrano significativamente aumentato volume DV come l&#39;organello forma al momento dell&#39;ingresso nella fase di sviluppo trofozoite e che questa persiste fino al confine schizonte trofozoite. Un pH pi&ugrave; acido DV &egrave; trovato per parassiti CQR appena l&#39;organello forme e persiste per tutta la fase del trofozoite. Noi della sonda DV cambiamenti di volume e pH alla deplezione di ATP, IPO - e ipertonica shock e rapido ritiro del perfusato cloruro. Presi insieme, questi dati suggeriscono che le mutazioni PfCRT che causano CQR anche portano a alterata regolazione di volume DV.

Filatura microscopia confocal disco dei parassiti malarici vivi, intraerythrocytic. 2. Regolamento alterato volume vacuolar nella malaria resistenti al farmaco.

&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x8AD6;&#x6587;&#x3067;&#x306F; [Gligorijevic, B.&#x3001;et al. (2006) pp 12400 12410 &#x751F;&#x5316;&#x5B66; 45]&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x56DE;&#x8EE2;&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (SDCM) &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0; &#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30DE;&#x30A4;&#x30BA;&#x3055;&#x308C;&#x305F; Nipkow &#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x5831;&#x544A;&#x304A;&#x3088;&#x3073; hemozoin &#x306E; DIC &#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3078;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x5FDC;&#x7528;&#x5185;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x540C;&#x671F;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B; falciparum &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;, &#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x6D88;&#x5316;&#x6DB2;&#x80DE; (DV) &#x306E;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30E0;&#x304A;&#x3088;&#x3073; pH &#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306F;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30AD;&#x30F3;&#x8010;&#x6027; (CQR) &#x3067;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x304C;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3001;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x306E; PfCRT &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3082; DV &#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306E;&#x9178;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;PH&#x3001;&#x97F3;&#x91CF;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3092;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x4EE5;&#x6765;&#x3001;DV &#x306E;&#x97F3;&#x91CF;&#x5DEE;&#x53D6;&#x3063;&#x4ED8;&#x304D;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x7591;&#x554F;&#x306B;&#x601D;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x540C;&#x671F;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3067;&#x5B9F;&#x9A13;&#x70B9;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30C7;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DC;&#x30EA;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x53CD;&#x5FA9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;DV &#x306B;&#x5185;&#x9762;&#x5316; OGd &#x3092;&#x5E83;&#x3052;&#x3001;&#x95A2;&#x6570; SDCM z &#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x9AD8;&#x901F;&#x53D6;&#x5F97;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403; HB3 (CQS) dd2 &#x306F;&#x306E; DV &#x306E;&#x91CF;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3059;&#x308B; &#xFF08;&#x85AC;&#x5264;&#x9078;&#x629E;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; CQR) GCO3 (CQS) &#x3068; GCO3/C3(Dd2) (CQR &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x5909;&#x7570; pfcrt &#x7D4C;&#x7531;) &#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x5F7C;&#x3089;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x5185;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x4E21; CQS &#x7CFB;&#x7D71;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x4E21; CQR &#x7CFB;&#x7D71; DV &#x306E;&#x91CF;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x866B;&#x5782;&#x6BB5;&#x968E;&#x306B;&#x5165;&#x308B;&#x6642;&#x7D30;&#x80DE;&#x5668;&#x5B98;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x866B;&#x5782;&#x30B7;&#x30BE;&#x30F3;&#x30C8;&#x5883;&#x754C;&#x304C;&#x7D9A;&#x304F;&#x3088;&#x3046;&#x30B7;&#x30E7;&#x30FC;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3060;&#x3051;&#x65E9;&#x304F;&#x3001;&#x30AA;&#x30EB;&#x30AC;&#x30CD;&#x30E9;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x866B;&#x5782;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x5168;&#x4F53;&#x304C;&#x7D9A;&#x304F;&#x3088;&#x308A;&#x9178;&#x6027;&#x306E; DV pH CQR &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x304C;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; DV &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; ATP &#x306E;&#x67AF;&#x6E07;&#x3001;&#x30CF;&#x30A4;&#x30DD; - &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9AD8;&#x5F35;&#x30B7;&#x30E7;&#x30C3;&#x30AF;&#x3068;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x64A4;&#x9000;&#x306E;&#x9AD8;&#x5869;&#x5869;&#x5316;&#x7269;&#x91CF;&#x3068; pH &#x5909;&#x5316;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3082;&#x306E; CQR &#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059; PfCRT &#x5909;&#x7570;&#x5909;&#x8CEA;&#x306E; DV &#x5BB9;&#x7A4D;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x304A;&#x52E7;&#x3081;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D21;&#x7E3E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x89B3;&#x5BDF;2. &#x5909;&#x66F4;&#x5F8C;&#x306E;&#x6DB2;&#x80DE;&#x5BB9;&#x7A4D;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306B;&#x3002;

&#xC774;&#xC804; &#xB17C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC11C; [Gligorijevic, B., &#xC678;. (2006) &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; 45, pp 12400 12410], &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; &#xC815;&#xC758; Nipkow &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; (SDCM) &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xD68C;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC640; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC758; DIC &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xC548;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0B4;&#xACE0;, &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654;, intraerythrocytic Plasmodium falciparum &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;. &#xC774; &#xB17C;&#xBB38;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC18C;&#xD654; &#xACF5;&#xD3EC; (DV)&#xC758; &#xBCFC;&#xB968; &#xBC0F; pH &#xC870;&#xC808;&#xC73C;&#xB85C; &#xC11C;&#xB294; &#xC18D; &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;. &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC774;&#xC804; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C; P. falciparum &#xD074;&#xB85C;&#xB85C;&#xD038; &#xC800;&#xD56D; (CQR)&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; PfCRT &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740;&#xB294; DV&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC0B0;&#xC131;&#xD654;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. PH &#xBC0F; &#xBCFC;&#xB968; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC740; &#xC885;&#xC885; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC73C;&#xBBC0;&#xB85C; DV &#xBCFC;&#xB968; &#xCC28;&#xC774; CQR&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294;&#xC9C0; &#xAD81;&#xAE08; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB4A4;&#xC5D0; &#xBC18;&#xBCF5; deconvolution &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; DV&#xC5D0; &#xB0B4; &#xBA74; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xBD80;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xB41C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xD655;&#xC0B0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; SDCM z &#xC2A4;&#xD0DD;&#xC758; &#xBE60;&#xB978; &#xC218;&#xC9D1;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;, intraerythrocytic (CQS HB3) Dd2 DV&#xC758; &#xBCFC;&#xB968; &#xACC4;&#xB7C9; (&#xC57D;&#xBB3C; &#xC120;&#xD0DD;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; CQR), GCO3 (CQS) &#xBC0F; GCO3/C3(Dd2) (CQR &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; pfcrt&#xACFC; transfection &#xD1B5;&#xD574;) &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xCC98;&#xB7FC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB450; CQS &#xC885;&#xC790;&#xB97C; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xB450; CQR &#xAE34;&#xC7A5; &#xC1FC; &#xCC3E;&#xC744; DV &#xC591;&#xC774; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD2B8;&#xB294; &#xAC1C;&#xBC1C; trophozoite &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC9C4;&#xC785; &#xC2DC;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; trophozoite schizont &#xACBD;&#xACC4;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC9C0;&#xC18D; &#xB418;. &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xC0B0; &#xC131; DV Ph&#xB294; &#xD2B8;&#xB294; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; trophozoite &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xC9C0;&#xC18D; CQR &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; DV ATP &#xACE0;&#xAC08;, hypo-&#xC640; &#xACE0; &#xCDA9;&#xACA9; &#xBC0F; perfusate &#xC5FC;&#xD654;&#xC758; &#xAE09;&#xC18D; &#xD55C; &#xCCA0;&#xC218;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xBCFC;&#xB968; &#xBC0F; pH &#xBCC0;&#xD654;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; CQR &#xC6D0;&#xC778; PfCRT &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB610;&#xD55C; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; DV &#xBCFC;&#xB968; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;, intraerythrocytic &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xC2A4; &#xD53C;&#xB2DD; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;. 2. &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; vacuolar &#xBCFC;&#xB968; &#xC870;&#xC808; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;.

En el anterior documento [Gligorijevic, B., et al (2006) bioqu&iacute;mica 45, pp 12400-12410], nos inform&oacute; sobre un modificado para requisitos particulares Nipkow spinning sistema de microscop&iacute;a confocal (SDCM) disco y dentro de su aplicaci&oacute;n inicial en proyecci&oacute;n de imagen de DIC de leucocito-asociado de malaria en vivo, sincronizado, par&aacute;sitos pal&uacute;dicos de intraerythrocytic Plasmodium falciparum. En este trabajo, nos sondeo la biog&eacute;nesis, as&iacute; como la regulaci&oacute;n del volumen y el pH de la vacuola digestiva del par&aacute;sito (DV), utilizando la capacidad del sistema de la proyecci&oacute;n de imagen de fluorescencia. Varios informes anteriores han sugerido que la prote&iacute;na PfCRT mutante, que causa resistencia a la cloroquina (CQR) en p. falciparum, tambi&eacute;n causa mayor acidificaci&oacute;n de la DV. Puesto que la regulaci&oacute;n del pH y volumen a menudo est&aacute;n vinculados, nos preguntamos si las diferencias de volumen DV podr&iacute;an estar asociadas con CQR. Uso de r&aacute;pida adquisici&oacute;n de pilas de z SDCM para par&aacute;sitos sincronizados con OGd interiorizado en el DV, seguido de deconvoluci&oacute;n iterativo usando punto experimental separ&oacute; las funciones, cuantificar el volumen de la DV para intraerythrocytic vivo, HB3 (CQS), Dd2 (CQR mediante selecci&oacute;n de drogas), GCO3 (CQS) y GCO3/C3(Dd2) (CQR mediante transfecci&oacute;n con mutante pfcrt) par&aacute;sitos pal&uacute;dicos que desarrollar dentro de la c&eacute;lula de sangre roja humana. Encontramos que en relaci&oacute;n con ambas cepas CQS, ambas cepas CQR muestran significativamente mayor volumen DV como el org&aacute;nulo forma al entrar en la fase de trofozoito de desarrollo y que persiste hasta el l&iacute;mite de trofozoito-esquizonte. Un pH m&aacute;s &aacute;cido de DV se encuentra para par&aacute;sitos CQR tan pronto como el org&aacute;nulo forma y persiste a lo largo de la fase de trofozoito. Nos sonda DV cambios de volumen y pH al agotamiento de ATP, hypo - y descarga hipert&oacute;nica y el retiro r&aacute;pido de soluci&oacute;n de cloruro. Tomados en conjunto, estos datos sugieren que las mutaciones de PfCRT causantes CQR tambi&eacute;n conducen a la regulaci&oacute;n de volumen DV alterada.

Giro microscopia confocal de disco de vivo, intraerythrocytic par&aacute;sitos pal&uacute;dicos. 2. Regulaci&oacute;n del volumen vacuolar altered paludismo farmacorresistente.

&#x6211;&#x4EEC;&#x5148;&#x524D;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49; Nipkow &#x65CB;&#x8F6C;&#x78C1;&#x76D8;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; &#xFF08;SDCM&#xFF09; &#x83B7;&#x5F97; 4 D &#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x759F;&#x539F;&#x866B; [Gligorijevic B&#xFF0C;McAllister R&#xFF0C;Urbach JS&#xFF0C;Roepe&#xFF0C;PD.&#x65CB;&#x8F6C;&#x78C1;&#x76D8;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x3002;1.&#x836F;&#x7269;&#x654F;&#x611F;&#x4E0E;&#x6297;&#x759F;&#x75BE;&#x7684;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x8272;&#x7D20;&#x53D1;&#x5C55;&#x7684;&#x91CF;&#x5316;&#x3002;&#x751F;&#x7269;&#x5316;&#x5B66; 2006&#x5E74; &#xFF1B; 45:12400-10]&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; (CQ) &#x6C2F;&#x55B9;&#x6CBB;&#x7597;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x53D6;&#x5F97;&#x7684;&#x8FDB;&#x5C55;&#x548C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x6BD2;&#x6027;&#x53EF;&#x80FD;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x6765;&#x7684; post-schizogony&#x3002;&#x73B0;&#x5728;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; SDCM&#xFF0C;&#x540C;&#x6B65;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x548C;&#x8FDE;&#x7EED;&#x4E0E;&#x4E38;&#x836F;&#x7269;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x8C03;&#x67E5;&#x9636;&#x6BB5;&#x7279;&#x5B9A; CQ &#x52A0;&#x836F;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x5C55;&#x8BA1;&#x6570;&#x88C2;&#x6B96;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D; 3D &#x65B0;&#x9896;&#x3001; &#x975E;&#x5E38;&#x5FEB;&#x901F;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7136;&#x540E;&#x91CF;&#x5316;&#x88C2;&#x6B96;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x548C;&#x6D3B;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x6587;&#x5316;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x9636;&#x6BB5;&#x4E0E; CQ &#x8109;&#x51B2;&#x548C;&#x627E;&#x5230;&#x6212;&#x6307;&#x4E38;&#x6CBB;&#x7597;&#x5F71;&#x54CD;&#x6838;&#x53F8;&#x7684;&#x591A;&#x91CD;&#x6027;&#x7684;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x8272;&#x7D20; (Hz) &#x751F;&#x4EA7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x91CF;&#x5316; parasitemia &#x548C;&#x88C2;&#x6B96;&#x5B50;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x4EE5;&#x540E;&#x7684;&#x5468;&#x671F;&#x4E38; CQ &#x66B4;&#x9732;&#x540E;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0; CQ &#x6BD2;&#x6027;&#x7684;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x662F;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x6765;&#x7684; post-schizogony&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&quot;&#x5EF6;&#x8FDF;&#x6B7B;&#x4EA1;&quot;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x6211;&#x4EEC;&#x6BD4;&#x8F83; CQ &#x654F;&#x611F; &#xFF08;CQS&#xFF09; &#x4E0E; &#xFF08;CQR) &#x8010;&#x836F;&#x83CC;&#x682A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA; transfectants &#x7684; CQR &#x901A;&#x8FC7;&#x5F15;&#x5165;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; PfCRT.&#x4EE4;&#x4EBA;&#x60CA;&#x8BB6;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x5230; PfCRT &#x8D4B;&#x4E88;&#x7BA1;&#x7406;&#x975E;&#x5E38;&#x73AF;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6D88;&#x5316;&#x6CE1;&#x672A;&#x5F62;&#x6210;&#xFF0C;&#x540C;&#x65F6;&#x88C2;&#x6B96;&#x4F53;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; Hz &#x751F;&#x4EA7;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x9AD8;&#x539F; CQ &#x6297;&#x6027;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x5F3A;&#x5236; CQ &#x836F;&#x7406;&#x5B66;&#x548C; CQR &#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x518D;&#x601D;&#x8003;&#x3002;

&#x9636;&#x6BB5;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6C2F;&#x55B9;&#x6297;&#x6027;&#x548C;&#x6C2F;&#x55B9;&#x6BD2;&#x6027;&#x901A;&#x8FC7;&#x65CB;&#x8F6C;&#x78C1;&#x76D8;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x900F;&#x9732;&#x3002;

We previously customized a Nipkow spinning disk confocal microscope (SDCM) to acquire 4D data for live, intraerythrocytic malarial parasites [Gligorijevic B, McAllister R, Urbach JS, Roepe, PD. Spinning disk confocal microscopy of live, intraerythrocytic malarial parasites. 1. Quantification of hemozoin development for drug sensitive versus resistant malaria. Biochemistry 2006;45:12400-10]. We reported that chloroquine (CQ) treatment did not appear to affect progress through the cell cycle, and suggested that toxicity may be manifested post-schizogony. We now use SDCM, synchronized cell culture and continuous vs. bolus drug dosing to investigate stage specific CQ effects in detail. We develop a novel, extremely rapid method for counting schizont nuclei in 3D. We then quantify schizont nuclei and hemozoin (Hz) production for live parasite cultures pulsed with CQ at different stages in the cell cycle and find that bolus treatment of rings affects the multiplicity of nuclear division. We quantify parasitemia and merozoite development in subsequent cycles following bolus CQ exposure and find that a portion of CQ toxicity is manifested post-schizogony as "delayed death". Using these methods and others we compare CQ sensitive (CQS) vs. resistant (CQR) strains as well as transfectants that are CQR via introduction of mutant PfCRT. Surprisingly, we find that PfCRT confers resistance to CQ administered at the very early ring stage of development, wherein a digestive vacuole is not yet formed, as well as at the schizont stage, wherein Hz production is thought to plateau. Taken together, these data force a rethinking of CQ pharmacology and the mechanism of CQR.

Stage independent chloroquine resistance and chloroquine toxicity revealed via spinning disk confocal microscopy.

Nous avons personnalis&eacute; pr&eacute;c&eacute;demment un microscope confocal de Nipkow tourne disque (SDCM) d&#39;acqu&eacute;rir des donn&eacute;es de 4D pour direct, parasites d&#39;intra-&eacute;rythrocytaire palud&eacute;ens [Gligorijevic B, McAllister R, Urbach JS, Roepe, microscopie confocale de filature PD. disque de parasites palud&eacute;ens de direct, intra-&eacute;rythrocytaire. 1. Quantification du d&eacute;veloppement h&eacute;mozo&iuml;ne pour m&eacute;dicaments sensibles contre le paludisme r&eacute;sistant. Biochimie 2006 ; 45:12400-10]. Nous avons signal&eacute; que le traitement de la chloroquine (CQ) ne semble pas affecter la progression dans le cycle cellulaire et a sugg&eacute;r&eacute; que la toxicit&eacute; peut &ecirc;tre manifest&eacute; post-schizogony. Nous utilisons maintenant SDCM, culture de cellules synchronis&eacute;es et continu vs drogues bolus dosage afin d&#39;&eacute;tudier la sc&egrave;ne sp&eacute;cifique CQ effets en d&eacute;tail. Nous d&eacute;veloppons une m&eacute;thode innovatrice et extr&ecirc;mement rapide pour le comptage des noyaux schizonte en 3D. Ensuite, nous quantifions les noyaux schizonte et production d&#39;h&eacute;mozo&iuml;ne (Hz) pour des parasites vivants cultures puls&eacute; avec CQ &agrave; des stades diff&eacute;rents du cycle cellulaire et de trouver que le traitement d&#39;un bolus d&#39;anneaux affecte la multiplicit&eacute; de la division nucl&eacute;aire. Nous quantifier la parasit&eacute;mie et m&eacute;rozo&iuml;te d&eacute;veloppement dans les cycles suivants apr&egrave;s un bolus CQ exposition et trouver qu&#39;une partie de la toxicit&eacute; de la CQ est manifeste et post-schizogony comme &laquo; retard&eacute; la mort &raquo;. En utilisant ces m&eacute;thodes et autres que nous comparons CQ sensible (CQS) contre les souches r&eacute;sistantes (CQR) ainsi que les transfectants qu&#39;&eacute;taient &eacute;tonnamment CQR l&#39;introduction du mutant PfCRT., nous trouvons que PfCRT conf&egrave;re une r&eacute;sistance &agrave; la CQ administr&eacute; au stade tr&egrave;s pr&eacute;coce du d&eacute;veloppement, dans laquelle une vacuole digestive n&#39;est pas encore form&eacute;e, anneau, ainsi qu&#39;au stade schizonte, dans laquelle la production Hz est pens&eacute;e pour plateau. Pris ensemble, ces donn&eacute;es forcent repenser pharmacologie CQ et le m&eacute;canisme de CQR.

Sc&egrave;ne ind&eacute;pendante de la chloroquine r&eacute;sistance et la chloroquine toxicit&eacute; r&eacute;v&eacute;l&eacute;e par microscopie confocale disque de filature.

Wir kundenspezifische zuvor ein Nipkow drehenden Scheibe Konfokales Mikroskop (SDCM) 4D Daten zu erwerben f&uuml;r Leben, Intraerythrocytic Malariagebiete Parasiten [Gligorijevic B, McAllister R, Urbach JS, Roepe, PD-Spinning Disk confocal Mikroskopie Leben, Intraerythrocytic Malariagebiete Parasiten. 1. Quantifizierung der Hemozoin Entwicklung f&uuml;r Medikament empfindlich gegen resistente Malaria. Biochemie 2006; 45:12400-10]. Wir berichtet, dass Chloroquin (CQ) Behandlung nicht erscheint im Verlauf des Zellzyklus zu beeinflussen, und vorgeschlagen, dass Toxizit&auml;t manifestierten Post-schizogony sein kann. Wir verwenden jetzt SDCM, synchronisierte Zellkultur und kontinuierliche vs. Bolus Medikament Dosierung zur B&uuml;hne besonderen CQ Untersuchung Effekte im Detail. Wir entwickeln eine neuartige, extrem schnelle Methode zum z&auml;hlen der Schizont Kerne in 3D. Wir quantifizieren dann Schizont Kerne und Hemozoin (Hz)-Produktion f&uuml;r Leben Parasit Kulturen gepulst mit CQ in verschiedenen Phasen des Zellzyklus und feststellen, dass Bolus Behandlung der Ringe die Multiplizit&auml;t der nuklearen Bereich betrifft. Wir Parasitemia und Merozoite Entwicklung in den nachfolgenden Zyklen nach Bolus-CQ-Exposition zu quantifizieren und feststellen, dass ein Teil der CQ Toxizit&auml;t manifestierten Post-schizogony als &quot;verz&ouml;gert Tod&quot; ist. Verwenden diese Methoden und andere vergleichen wir CQ empfindliche (CQS) vs. Resistenzen (CQR) sowie Transfektanten, die &uuml;berraschend CQR durch Einf&uuml;hrung der Mutant PfCRT. sind, finden wir, dass PfCRT Resistenz gegen CQ verabreicht, die sehr fr&uuml;h Ring &uuml;ber Entwicklung verleiht, worin ein verdauungsf&ouml;rdernden Vakuole nicht noch gebildet wird, sowie Zeitpunkt der Schizont, worin Hz Produktion gedacht ist, um plateau. Zusammen genommen, erzwingen diese Daten ein Umdenken in der CQ-Pharmakologie und der Mechanismus der CQR.

B&uuml;hne unabh&auml;ngige Chloroquin Resistenz und Chloroquin Toxizit&auml;t offenbart &uuml;ber Spinnen Disk confocal Mikroskopie.

Abbiamo precedentemente personalizzato un Nipkow filatura disco microscopio confocale (SDCM) per acquisire dati D 4 per vivere, intraerythrocytic parassiti malarici [Gligorijevic B, McAllister R, Urbach JS, Roepe, microscopia confocal di filatura PD disco dei parassiti malarici vivi, intraerythrocytic. 1. Quantificazione dello sviluppo di emozoina per sensibile contro la malaria resistenti al farmaco. Biochimica 2006; 45:12400-10]. Abbiamo segnalato il trattamento clorochina (CQ) non sembra influenzare i progressi attraverso il ciclo cellulare che ha suggerito che la tossicit&agrave; pu&ograve; essere manifestata post-schizogony. Usiamo ora SDCM, coltura cellulare sincronizzato e continuo vs droga bolo dosaggio per indagare la fase CQ specifici effetti in dettaglio. Sviluppiamo un metodo estremamente rapido, romanzo per conteggio nuclei schizonte in 3D. Abbiamo quindi quantificare schizonte nuclei e produzione di emozoina (Hz) per vivere parassita culture pulsato con CQ nelle diverse fasi del ciclo cellulare e trovare che trattamento bolo degli anelli colpisce la molteplicit&agrave; della divisione nucleare. Noi quantificare lo sviluppo parassitemia e merozoite in cicli successivi dopo bolo CQ esposizione e trovare che una porzione di tossicit&agrave; CQ &egrave; manifestata post-schizogony come &quot;morte in ritardo&quot;. Utilizzando questi metodi e altri che confrontiamo CQ sensibili (CQS) vs ceppi resistenti (CQR) cos&igrave; come transfettanti che sono sorprendentemente CQR tramite introduzione del mutante PfCRT., troviamo che PfCRT conferisce resistenza a CQ somministrato nella fase di anello molto precoce dello sviluppo, in cui un vacuolo digestivo non &egrave; ancora formato, cos&igrave; come nella fase schizonte, in cui si pensa che Hz produzione plateau. Presi insieme, questi dati forzano un ripensamento della farmacologia CQ e il meccanismo di CQR.

Fase indipendente clorochina resistenza e clorochina tossicit&agrave; ha rivelata tramite microscopia confocal disco di filatura.

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x4EE5;&#x524D; Nipkow &#x56DE;&#x8EE2;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1; (SDCM) 4 D &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3059;&#x308B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7528; [Gligorijevic B&#x3001;&#x30DE;&#x30AB;&#x30EA;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC; R&#x3001;Urbach JS Roepe&#x3001;&#x8A0E;&#x56DE;&#x8EE2;&#x306E;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x3002; &#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30DE;&#x30A4;&#x30BA;1. &#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5BFE;&#x6A5F;&#x5BC6;&#x7528; hemozoin &#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x5B66; 2006&#x5E74;; 45:12400-10]&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30AD;&#x30F3;&#x6CBB;&#x7642;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x9032;&#x884C;&#x306B;&#x306F;&#x5F71;&#x97FF;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x6BD2;&#x6027;&#x660E;&#x3089;&#x304B; post-schizogony &#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4ECA; SDCM&#x3001;&#x540C;&#x671F;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x9023;&#x7D9A;&#x30DC;&#x30FC;&#x30E9;&#x30B9;&#x85AC;&#x7269;&#x5BFE;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x7279;&#x5B9A; CQ &#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6295;&#x4E0E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30BE;&#x30F3;&#x30C8;&#x6838; 3 D &#x3067;&#x6570;&#x3048;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x6025;&#x901F;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;[&#x30B7;&#x30BE;&#x30F3;&#x30C8;&#x6838;&#x3068;&#x6587;&#x5316; CQ &#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x30D1;&#x30EB;&#x30B9;&#x3057;&#x3001;&#x30DC;&#x30FC;&#x30E9;&#x30B9;&#x6CBB;&#x7642;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6838;&#x90E8;&#x9580;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x6027;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7528; hemozoin (Hz) &#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x30DC;&#x30FC;&#x30E9;&#x30B9; CQ &#x66B4;&#x9732;&#x5F8C;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x7387;&#x3068;&#x30E1;&#x30ED;&#x30BE;&#x30A4;&#x30C8;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3092;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3057;&#x3001;CQ &#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x304C;&#x300C;&#x9045;&#x5EF6;&#x6B7B;&#x300D;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B; post-schizogony &#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3068;&#x4ED6;&#x306E;&#x6211;&#x3005; &#x306F; CQ &#x6A5F;&#x5BC6; (CQS) &#x8010;&#x6027; (CQR) &#x3068;&#x3057;&#x3066; CQR &#x5909;&#x7570; PfCRT&#x3002; &#x306E;&#x5C0E;&#x5165;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9A5A;&#x304F;&#x307B;&#x3069;&#x3044;&#x308B;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EA;&#x30F3;&#x5BFE;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;PfCRT CQ &#x524D;&#x8A18; Hz &#x751F;&#x7523;&#x9AD8;&#x539F;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B7;&#x30BE;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x521D;&#x671F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x524D;&#x8A18;&#x6D88;&#x5316;&#x6DB2;&#x80DE;&#x306F;&#x307E;&#x3060;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3001;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x6295;&#x4E0E;&#x3078;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x53D6;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F; CQ &#x85AC;&#x7406;&#x3068; CQR &#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x518D;&#x8003;&#x3092;&#x5F37;&#x5236;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x56DE;&#x8EE2;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x30B9;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B8;&#x72EC;&#x7ACB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30AD;&#x30F3;&#x62B5;&#x6297;&#x6027;&#x3068;&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30AD;&#x30F3;&#x6BD2;&#x6027;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xB9DE;&#xAC8C; Nipkow &#xD68C;&#xC804; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (SDCM) 4d &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC5BB;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;, intraerythrocytic &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; [Gligorijevic B, McAllister R, Urbach JS, Roepe, &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;, intraerythrocytic &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; PD. &#xD68C;&#xC804; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;. 1. &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xB300; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;. &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; 2006; 45:12400-10]. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD074;&#xB85C;&#xB85C;&#xD038; (CQ) &#xCE58;&#xB8CC; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xB3C5;&#xC131; &#xAC01; &#xC131;&#xB41C; post-schizogony &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC9C0;&#xAE08; SDCM, &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; bolus &#xB9C8;&#xC57D; &#xB300; &#xC5F0;&#xC18D; &#xC790;&#xC138;&#xD558;&#xAC8C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC870;&#xC0AC; &#xB2E8;&#xACC4; &#xD2B9;&#xC815; CQ&#xB97C; &#xBA39;&#xC774; &#xC9C0;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 3d&#xC5D0;&#xC11C; schizont &#xD575;&#xC744; &#xACC4;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; &#xC18C;&#xC124;, &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBE60;&#xB978; &#xBC29;&#xBC95; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; schizont &#xD575; &#xBC0F; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; (Hz) &#xC0DD;&#xC0B0; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; CQ&#xC640; &#xD384;&#xC2A4; &#xBB38;&#xD654;&#xC640; &#xBC18;&#xC9C0;&#xC758; bolus &#xCC98;&#xB9AC; &#xD575; &#xC0AC;&#xB2E8;&#xC758; &#xB2E4;&#xC911;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xCC3E;&#xC744; &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC99;&#xB3C4;. &#xC6B0;&#xB9AC; parasitemia merozoite &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC774;&#xD6C4; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; bolus CQ &#xB178;&#xCD9C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xACC4;&#xB7C9; &#xD558; &#xACE0; CQ &#xB3C5;&#xC131; &#xBD80;&#xBD84; &quot;&#xC9C0;&#xC5F0; &#xB41C; &#xC8FD;&#xC74C;&quot;&#xC73C;&#xB85C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB098; &#xC2E0;&#xB41C; post-schizogony &#xCC3E;&#xC744;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xACFC; &#xB2E4;&#xB978; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; PfCRT.&#xC758; &#xB3C4;&#xC785;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4; CQR&#xB294; transfectants&#xB85C; &#xC11C; &#xB0B4;&#xC131; (CQR) &#xBCC0;&#xC885; &#xB300; CQ &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; (CQS) &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; PfCRT &#xACE0;&#xC6D0; Hz &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC740; &#xC0DD;&#xAC01; &#xD558;&#xB294; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; schizont &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC5B4;&#xB5A4; &#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC18C;&#xD654; &#xACF5;&#xD3EC; &#xC544;&#xC9C1; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;, &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xC544;&#xC8FC; &#xCD08;&#xAE30; &#xB9C1; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xB9AC; CQ&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC800;&#xD56D;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xCC3E;&#xC73C;&#xC2ED;&#xC2DC;&#xC624;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; CQ &#xC57D;&#xB9AC;&#xD559; &#xBC0F; CQR &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC7AC;&#xAC80;&#xD1A0;&#xB97C; &#xAC15;&#xC81C;&#xB85C;.

&#xBB34;&#xB300; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xD074;&#xB85C;&#xB85C;&#xD038; &#xC800;&#xD56D; &#xBC0F; &#xD074;&#xB85C;&#xB85C;&#xD038; &#xB3C5;&#xC131; &#xD68C;&#xC804; &#xB514;&#xC2A4;&#xD06C; confocal &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;.

Nos personalizado previamente un microscopio confocal disco (SDCM) para adquirir datos 4D de Nipkow giratorio para vivo, par&aacute;sitos pal&uacute;dicos intraerythrocytic [Gligorijevic B, McAllister R, Urbach JS, Roepe, microscop&iacute;a confocal de Spinning PD. disco de vivo, intraerythrocytic par&aacute;sitos pal&uacute;dicos. 1. Cuantificaci&oacute;n de desarrollo leucocito-asociado de malaria para sensibles frente a la malaria resistente a medicamentos. Bioqu&iacute;mica 2006; 45:12400-10]. Nos informan que el tratamiento de la cloroquina (CQ) no pareci&oacute; afectar el progreso a trav&eacute;s del ciclo celular y sugiri&oacute; que la toxicidad puede ser manifestado post-schizogony. Ahora utilizamos SDCM, cultivo celular sincronizada y continua vs drogas bolo dosificaci&oacute;n para investigar la etapa espec&iacute;fica CQ efectos detalladamente. Desarrollamos un m&eacute;todo novedoso, muy r&aacute;pido para contar los n&uacute;cleos esquizonte en 3D. Nosotros entonces cuantificar esquizonte n&uacute;cleos y producci&oacute;n leucocito-asociado de la malaria (Hz) para par&aacute;sito vivo culturas pulsada con CQ en diferentes etapas en el ciclo celular y encuentran que el tratamiento de bolo de anillos afecta la multiplicidad de Divisi&oacute;n nuclear. Que cuantificar el desarrollo de la parasitemia y merozoito tras ciclos despu&eacute;s de la exposici&oacute;n de CQ bolo y encontraremos que una porci&oacute;n de la toxicidad de CQ es post-schizogony se manifiesta como &quot;retrasar la muerte&quot;. Mediante estos m&eacute;todos y otros que comparamos CQ sensible (CQS) frente a cepas resistentes de (CQR) as&iacute; como transfectants que son CQR mediante introducci&oacute;n de mutante PfCRT. sorprendentemente, encontramos que PfCRT confiere resistencia a CQ administrado en la etapa de anillo muy temprana del desarrollo, en donde una vacuola digestiva a&uacute;n no est&aacute; formada, as&iacute; como en la etapa de esquizonte, en donde se cree que la meseta Hz producci&oacute;n es. Tomados en conjunto, estos datos obligan a un replanteamiento de la farmacolog&iacute;a de CQ y el mecanismo de CQR.

Etapa independiente cloroquina resistencia y cloroquina toxicidad revelada mediante microscop&iacute;a confocal de disco de giro.

&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x6280;&#x672F;&#x5728;&#x591A;&#x4E2A;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x4F1A;&#x8BDD;&#x751F;&#x6D3B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x540C;&#x4E00;&#x80BF;&#x7624;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x5355;&#x4E2A;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE; photoswitchable &#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x539F;&#x4F4D;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#xFF0C;&#x8DDF;&#x5728;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x540E;&#x9762;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E73;&#x817A;&#x6210;&#x50CF;&#x7A97;&#x53E3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x5FAE;&#x89C2;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x539F;&#x4F4D;&#x4E73;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E0D;&#x540C;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;

&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x8F6C;&#x79FB;&#x884C;&#x4E3A;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E73;&#x817A;&#x6210;&#x50CF;&#x7A97;&#x53E3;&#x3002;

We report a technique to evaluate the same tumor microenvironment over multiple intravital imaging sessions in living mice. We optically marked individual tumor cells expressing photoswitchable proteins in an orthotopic mammary carcinoma and followed them for extended periods through a mammary imaging window. We found that two distinct microenvironments in the same orthotopic mammary tumor affected differently the invasion and intravasation of tumor cells.

Intravital imaging of metastatic behavior through a mammary imaging window.

Nous rapportons une technique pour &#xE9;valuer le microenvironnement tumoral m&#xEA;me sur plusieurs s&#xE9;ances d&#x26;#39;imagerie intravitale chez la souris vivantes. Nous optiquement marqu&#xE9;e des cellules tumorales exprimant des prot&#xE9;ines individuelles photoswitchable dans un carcinome mammaire orthotopique et les a suivis pendant des p&#xE9;riodes prolong&#xE9;es &#xE0; travers une fen&#xEA;tre d&#x26;#39;imagerie mammaire. Nous avons constat&#xE9; que deux microenvironnements distincts dans la m&#xEA;me tumeur mammaire orthotopique affect&#xE9;s diff&#xE9;remment l&#x26;#39;invasion et intravasation des cellules tumorales.

Imagerie intravitale du comportement m&#xE9;tastatique &#xE0; travers une fen&#xEA;tre d&#x26;#39;imagerie mammaire

Wir berichten &uuml;ber eine Technik, um die gleichen Tumor Mikromilieu &uuml;ber mehrere intravital Bildgebung Sitzungen in lebenden M&auml;usen zu bewerten. Wir optisch markiert einzelne Tumorzellen zum Ausdruck Photoswitchable Proteine in ein Orthotopic Mamma-Karzinom und folgte ihnen &uuml;ber einen l&auml;ngeren Zeitraum durch ein Mamma Bildgebung Fenster. Wir fanden, dass zwei unterschiedliche Mikroumgebungen in der gleichen Orthotopic Mamma-Tumor unterschiedlich die Invasion und die Intravasation von Tumorzellen betroffen.

Intravital Bildgebung von metastasierendem Verhalten durch ein Mamma Bildgebung Fenster.

Riportiamo una tecnica per valutare il microambiente tumorale stesso corso di pi&ugrave; sessioni di imaging intravital nei topi vivi. Otticamente abbiamo contrassegnato le cellule tumorali singole che esprimono le proteine photoswitchable in un carcinoma mammario ortotopico e li ha seguiti per lunghi periodi attraverso una finestra di imaging mammaria. Abbiamo trovato che due microambienti distinti nel tumore mammario stesso ortotopico diversamente interessarono l&#39;invasione e la intravasation delle cellule tumorali.

Intravital imaging del comportamento metastatico attraverso una finestra di imaging mammaria.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x30BB;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x3058;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x624B;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x5831;&#x544A;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x540C;&#x6240;&#x6027;&#x4E73;&#x764C;&#x3067;photoswitchable&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x4E73;&#x817A;&#x753B;&#x50CF;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30A6;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x9577;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x540C;&#x3058;&#x540C;&#x6240;&#x6027;&#x4E73;&#x817A;&#x816B;&#x760D;&#x3067;2&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5FAE;&#x74B0;&#x5883;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x3084;&#x8108;&#x7BA1;&#x5185;&#x3078;&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x4E73;&#x817A;&#x753B;&#x50CF;&#x30A6;&#x30A3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30A6;&#x3067;&#x306E;&#x8EE2;&#x79FB;&#x6319;&#x52D5;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;

&#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5EC;&#xB7EC; intravital &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC138;&#xC158;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCCD0; &#xAC19;&#xC740; &#xC885;&#xC591; microenvironment&#xB97C; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xC220;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xAD11;&#xD559; orthotopic &#xC720; &#xC554; &#xC885;&#xC5D0;&#xC11C; photoswitchable &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC720; &#xBC29; &#xC601;&#xC0C1; &#xCC3D;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC5F0;&#xC7A5;&#xB41C; &#xAE30;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xB530; &#xB790; &#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; microenvironments &#xAC19;&#xC740; orthotopic &#xC720; &#xBC29; &#xC885;&#xC591; &#xCE68;&#xC785;&#xACFC; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; intravasation &#xB2E4;&#xB974;&#xAC8C; &#xC601;&#xD5A5; &#xBC1C;&#xACAC;.

&#xC720; &#xBC29; &#xC601;&#xC0C1; &#xCC3D;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xC774;&#xC131; &#xB3D9;&#xC791; intravital &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;.

Se presenta una t&#xE9;cnica para evaluar el microambiente tumoral misma a trav&#xE9;s de m&#xFA;ltiples sesiones de formaci&#xF3;n de im&#xE1;genes intravital en ratones vivos. Hemos marcado &#xF3;pticamente c&#xE9;lulas tumorales que expresan las prote&#xED;nas individuales photoswitchable en un carcinoma mamario ortot&#xF3;pico y les dio seguimiento durante largos per&#xED;odos de tiempo a trav&#xE9;s de una ventana de im&#xE1;genes mamarias. Se encontr&#xF3; que dos microambientes distintos en el mismo tumor mamario ortot&#xF3;pico afectados de manera diferente a la invasi&#xF3;n y intravasaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas tumorales.

Imagen intravital del comportamiento metast&#xE1;sico trav&#xE9;s de una ventana de imagen Mamaria

&#x4EE5;&#x6765;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x5B83;&#x5728; 1992 &#x5E74;&#x7684;&#x5148;&#x9A71;&#xFF0C;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x6709;&#x673A;&#x4F1A;&#x6211;&#x4EEC;&#x6781;&#x5176;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&quot;&#x770B;&#x5230;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&quot;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5230;&#x76EE;&#x524D;&#x4E3A;&#x6B62;&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4E2D;&#x540C;&#x4E00;&#x52A8;&#x7269;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E3A;&#x77ED;&#x65F6;&#x95F4;&#x4EE5;&#x6765;&#xFF0C;&#x8981;&#x6C42;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5047;&#x8BBE;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x5206;&#x6790;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x3002;&#x5728;&#x8FC7;&#x53BB;&#x4E00;&#x5E74;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7FA4;&#x4F53;&#x6709;&#x81EA;&#x4E3B;&#x7814;&#x53D1;&#x6280;&#x672F;&#x5EF6;&#x957F;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x5230;&#x51E0;&#x5929;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6539;&#x8FDB;&#x4F7F;&#x4EBA;&#x4EEC;&#x5F97;&#x4EE5;&#x89E3;&#x51B3;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x884C;&#x4E3A;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5468;&#x56F4;&#x7684;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x8FDE;&#x63A5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x73B0;&#x5728;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BC4;&#x4F30;&#x52A8;&#x6001;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5206;&#x6790;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x547D;&#x8FD0;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5916;&#x57FA;&#x8D28;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x4F34;&#x968F;&#x7740;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

&#x5728;&#x80BF;&#x7624;&#x4E2D;&#x4F38;&#x5C55;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x65F6;&#x95F4;&#x7684;&#x523B;&#x5EA6;&#x3002;

Since the time it was pioneered in 1992, intravital imaging of tumors at cellular resolution has offered us the extremely important opportunity of "seeing biology." However, until now, most studies were monitoring tumor cell behavior in the same animal over short times, requiring the combining of acquired data into a hypothesis via statistical analysis. In the last year, different groups have independently developed techniques to extend the time scale of intravital imaging to several days. This improvement allows one to address the connection between tumor cell behavior and the microenvironment which surrounds them. We can now assess dynamics of the cell-cell interactions in tumors, analyze tumor cell fate and changes in the tumor extracellular matrix which accompany tumor progression.

Stretching the timescale of intravital imaging in tumors.

Depuis le temps, qu&#39;il a &eacute;t&eacute; lanc&eacute; en 1992, intravitale imagerie des tumeurs &agrave; r&eacute;solution cellulaire nous a offert l&#39;occasion extr&ecirc;mement importante de &laquo; voir biologie. &raquo; Toutefois, jusqu&#39;&agrave; pr&eacute;sent, la plupart des &eacute;tudes surveillaient le comportement cellulaire tumorale chez l&#39;animal m&ecirc;me pendant des temps courts, exigeant la combinaison des donn&eacute;es obtenues en une hypoth&egrave;se par analyse statistique. L&#39;ann&eacute;e derni&egrave;re, diff&eacute;rents groupes ont d&eacute;velopp&eacute; ind&eacute;pendamment de techniques permettant d&#39;&eacute;tendre &agrave; l&#39;&eacute;chelle de temps de l&#39;imagerie intravitale pour plusieurs jours. Cette am&eacute;lioration permet d&#39;aborder le lien entre le comportement des cellules tumorales et le micro-environnement qui l&#39;entoure. Nous pouvons maintenant &eacute;valuer la dynamique des interactions cellule-cellule dans les tumeurs, analyser le sort des cellules tumorales et des changements dans la matrice extracellulaire de la tumeur qui accompagnent la progression tumorale.

S&#39;&eacute;tendant &agrave; l&#39;&eacute;chelle de temps d&#39;intravitale imagerie dans les tumeurs.

Die Zeit, die es 1992 Pionierarbeit geleistet wurde, hat sich intravital Bildgebung Tumoren bei zellul&auml;ren Aufl&ouml;sung angeboten uns die &auml;u&szlig;erst wichtige Gelegenheit &quot;Biologie sehen.&quot; Die meisten Studien wurden jedoch bis jetzt Tumor Zelle Verhalten im gleichen Tier &uuml;ber kurze Zeiten, erfordern die B&uuml;ndelung der erfassten Daten in eine Hypothese &uuml;ber statistische Analyse &Uuml;berwachung. Im letzten Jahr entwickelten verschiedene Gruppen unabh&auml;ngig Techniken um die Zeitskala der intravital Bildgebung auf mehrere Tage zu verl&auml;ngern. Diese Verbesserung erlaubt es, die Adresse der Verbindungs zwischen Tumor Zelle Verhalten und die Untersuchungsverfahren, die sie umgibt. Wir k&ouml;nnen jetzt bewerten, Dynamik der Zell-Zell-Interaktionen in Tumoren, zu analysieren, Tumor Zelle Schicksal und Ver&auml;nderungen in der extrazellul&auml;ren Matrix der Tumor Tumor Fortschreiten zu begleiten.

Dehnen die Zeitskala der intravital Bildgebung in Tumoren.

Fin dai tempi in cui che esso &egrave; stato introdotto nel 1992, intravital imaging dei tumori cellulari con risoluzione ci ha offerto l&#39;opportunit&agrave; estremamente importante di &quot;vedere la biologia.&quot; Tuttavia, fino ad ora, la maggior parte dei studi erano monitoraggio comportamento delle cellule tumorali nell&#39;animale stesso su tempi brevi, che richiedono la combinazione di dati acquisiti in un&#39;ipotesi tramite analisi statistica. Nell&#39;ultimo anno, diversi gruppi hanno sviluppato indipendentemente tecniche per estendere la scala temporale di imaging intravital per diversi giorni. Questo miglioramento permette di affrontare la connessione tra il comportamento delle cellule tumorali e il microambiente che li circonda. Ora possiamo valutare dinamica delle interazioni cellula-cellula in tumori, analizzare il destino delle cellule tumorali e cambiamenti nella matrice extracellulare del tumore che accompagnano la progressione del tumore.

Stretching la scala cronologica di imaging intravital nei tumori.

&#x305D;&#x308C;&#x306F; 1992 &#x5E74;&#x306B;&#x958B;&#x62D3;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6642;&#x4EE5;&#x6765;&#x3001;&#x751F;&#x4F53;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x306E;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x300C;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3092;&#x898B;&#x3066;&#x300D;&#x306E;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x4F1A;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x4ECA;&#x307E;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x540C;&#x3058;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x884C;&#x52D5;&#x77ED;&#x3044;&#x6642;&#x9593;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3057;&#x305F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x306B;&#x7D71;&#x5408;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x76E3;&#x8996;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6628;&#x5E74;&#x306F;&#x3001;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x751F;&#x4F53;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x6570;&#x65E5;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3059;&#x308B;&#x6280;&#x8853;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6319;&#x52D5;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x56F2;&#x3080;&#x306E;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x9593;&#x306E;&#x63A5;&#x7D9A;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x4ECA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306B;&#x4F34;&#x3046;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x751F;&#x4F53;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; &#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x3002;

1992 &#xB144;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xCC99; &#xB41C; &#xC774;&#xD6C4;, &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; intravital &#xC601;&#xC0C1; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4; &#xC6B0;&#xB9AC; &quot;&#xBCF4;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;.&quot; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xD68C; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xAC00; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xD1B5;&#xACC4; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xAC00;&#xC124;&#xC5D0; &#xC218;&#xC9D1;&#xB41C; &#xB41C; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9E7;&#xC740; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xAC19;&#xC740; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xB09C; &#xD574;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xB978; &#xADF8;&#xB8F9; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xD55C; &#xD558;&#xC9C0; intravital &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xBA87; &#xC77C;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04; &#xADDC;&#xBAA8;&#xB97C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xAE30;&#xBC95;. &#xC774; &#xAC1C;&#xC120; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xD589;&#xB3D9; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xB458;&#xB7EC;&#xC2F8;&#xACE0; &#xC788;&#xB294; microenvironment &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC5F0;&#xACB0; &#xC8FC;&#xC18C; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC774;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC885;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;-&#xC138;&#xD3EC; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xC6B4;&#xBA85;&#xACFC; &#xC885;&#xC591; &#xC9C4;&#xD589;&#xC744; &#xB3D9;&#xBC18; &#xD558;&#xB294; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC885;&#xC591;&#xC5D0; intravital &#xC601;&#xC0C1;&#xC758; &#xB0A0;&#xC9DC; &#xD45C;&#xC2DC;&#xC904;&#xC744; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xCE6D;.

Desde el momento que se inici&oacute; en 1992, im&aacute;genes intravital de tumores en resoluci&oacute;n celular nos ha ofrecido la oportunidad muy importante de &quot;ver la biolog&iacute;a&quot;. Sin embargo, hasta ahora, la mayor&iacute;a de estudios segu&iacute;an de cerca comportamiento de c&eacute;lulas de tumor en el mismo animal en tiempos cortos, que requiere la combinaci&oacute;n de datos adquiridos en una hip&oacute;tesis mediante an&aacute;lisis estad&iacute;stico. En el &uacute;ltimo a&ntilde;o, diferentes grupos han desarrollado independientemente t&eacute;cnicas para ampliar la escala de tiempo de imagen intravital para varios d&iacute;as. Esta mejora permite abordar la conexi&oacute;n entre el comportamiento de la c&eacute;lula del tumor y el microambiente que lo rodea. Ahora podemos evaluar din&aacute;mica de las interacciones c&eacute;lula-c&eacute;lula en tumores, analizar el destino de la c&eacute;lula del tumor y cambios en la matriz extracelular del tumor que acompa&ntilde;an la progresi&oacute;n tumoral.

Se extiende el plazo de la proyecci&oacute;n de imagen intravital en tumores.

&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x51FA;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x4F53;&#x5916;&#x4F7F;&#x7528;&#x79F0;&#x4E3A; NANIVID &#xFF08;&#x7EB3;&#x7C73;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x5148;&#x8FDB;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;/&#x5FAE;&#x7C73;&#x5236;&#x9020;&#x6280;&#x672F;&#x5F00;&#x53D1;&#x65B0;&#x578B;&#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x8D8B;&#x5316;&#x88C5;&#x7F6E;&#x7684;&#x4F18;&#x5316;&#x3002;&#x8BE5;&#x8BBE;&#x5907;&#x634F;&#x9020;&#x4F7F;&#x7528; microphotolithographic &#x6280;&#x672F;&#x548C;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5E95;&#x7269;&#x4FDD;&#x7A0E;&#x4E00;&#x8D77;&#x4F7F;&#x7528;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E00;&#x4E2A;&#x63D2;&#x5EA7;&#x5BC6;&#x5C01;&#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x8584;&#x5C42;&#x3002;&#x8BE5;&#x8BBE;&#x5907;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7ED3;&#x6784;&#x5305;&#x62EC;&#x4E24;&#x4E2A; Pyrex &#x57FA;&#x8D28;&#xFF1A; &#x8680;&#x523B;&#x8D8B;&#x5316;&#x6C34;&#x5E93;&#x548C;&#x9876;&#x76D6;&#xFF0C;&#x6700;&#x7EC8;&#x5927;&#x5C0F;&#x4E3A; 0.2 &times; 2 &times; 3 &#x6BEB;&#x7C73;&#x3002;&#x6B64;&#x6C34;&#x5E93;&#x5305;&#x542B;&#x6C34;&#x51DD;&#x80F6;&#x6DF7;&#x5408;&#x4E0E;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6F2B;&#x53CD;&#x5C04;&#x51FA;&#x901A;&#x8FC7;&#x5C0F;&#x578B; (&sim;9.10(3)&mu;m(2)) &#x63D2;&#x5EA7;&#x3002;&#x6B64;&#x6C34;&#x5E93;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x68AF;&#x5EA6;&#x4ECE;&#x8BBE;&#x5907;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x5C0F;&#x65F6;&#x5230;&#x5468;&#x56F4;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7EF4;&#x6301;&#x7A33;&#x5B9A;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x91CD;&#x70B9;&#x662F;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x548C;&#x4F18;&#x5316;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x4E2D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x65B0;&#x8BBE;&#x5907;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x6211;&#x4EEC;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7075;&#x6D3B;&#x3001; &#x4FBF;&#x5B9C;&#x3001; &#x5FAE;&#x578B;&#x548C;&#x81EA;&#x4E3B;&#x7684;&#x8D8B;&#x5316;&#x6027;&#x8BBE;&#x5907;&#x548C;&#x6F14;&#x793A;&#x5728; 2D &#x548C; 3D &#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x53CA;&#x5176;&#x7528;&#x9014;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x521D;&#x6B65;&#x6570;&#x636E;&#x3002;

&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC1;&#x79FB;&#x7814;&#x7A76;&#x65B0;&#x8D8B;&#x5316;&#x8BBE;&#x5907;&#x3002;

This study presents the design and optimization for in vitro use of a new versatile chemotaxis device called the NANIVID (NANo IntraVital Imaging Device), developed using advanced nano/micro fabrication techniques. The device is fabricated using microphotolithographic techniques and two substrates are bonded together using a thin polymer layer creating a sealed device with one outlet. The main structure of the device consists of two Pyrex substrates: an etched chemoattractant reservoir and a top cover, with a final size of 0.2 Ã— 2 Ã— 3 mm. This reservoir contains a hydrogel blend with EGF which diffuses out through a small (âˆ¼9.10(3)Î¼m(2)) outlet. This reservoir sustains a steady release of growth factor into the surrounding environment for several hours establishing a consistent concentration gradient from the device. The focus of this study was to design and optimize the new device for cell chemotaxis studies in breast cancer cells in cell culture. Our results show that we have created a flexible, cheap, miniature and autonomous chemotaxis device and demonstrate its usefulness in 2D and 3D cell culture. We also provide preliminary data for use of the device in vivo.

A new chemotaxis device for cell migration studies.

Cette &eacute;tude pr&eacute;sente la conception et l&#39;optimisation pour l&#39;usage in vitro d&#39;un nouvel appareil de chimiotactisme polyvalent appel&eacute; le NANIVID (NANo intravitale Imaging Device), d&eacute;velopp&eacute; &agrave; l&#39;aide de techniques de fabrication avanc&eacute;es de nano/micro. L&#39;appareil est fabriqu&eacute; en utilisant des techniques de microphotolithographic et deux substrats sont coll&eacute;es ensemble en utilisant une couche mince de polym&egrave;re cr&eacute;ant un dispositif scell&eacute; avec une seule sortie. La structure principale de l&#39;appareil se compose de deux substrats Pyrex : un r&eacute;servoir de chemoattractant grav&eacute; et un couvercle sup&eacute;rieur, avec une taille finale de 0,2 &times; 2 &times; 3 mm. Ce r&eacute;servoir contient un m&eacute;lange d&#39;hydrogel avec EGF qui diffuse sur gr&acirc;ce &agrave; un petit (prise de &sim;9.10(3)&mu;m(2)). Ce r&eacute;servoir subit une lib&eacute;ration constante du facteur de croissance dans le milieu environnant pendant plusieurs heures, &eacute;tablissant un gradient de concentration conforme de l&#39;appareil. L&#39;objectif de cette &eacute;tude &eacute;tait de concevoir et d&#39;optimiser le nouveau dispositif pour les &eacute;tudes de chimiotactisme des cellules dans les cellules canc&eacute;reuses du sein en culture cellulaire. Nos r&eacute;sultats montrent que nous ont cr&eacute;&eacute; un souple, pas cher, miniature et un dispositif autonome de chimiotactisme et de d&eacute;montrer son utilit&eacute; dans une culture cellulaire 2D et 3D. Nous fournissons &eacute;galement des donn&eacute;es pr&eacute;liminaires pour l&#39;utilisation du dispositif in vivo.

Un nouveau dispositif de chimiotactisme pour &eacute;tudes sur la migration cellulaire.

Diese Studie f&uuml;hrt Design und Optimierung f&uuml;r in-vitro Gebrauch ein neues vielseitiges Chemotaxis-Ger&auml;t, genannt der NANIVID (NANo IntraVital Imaging Device), mit erweiterten Nano/Mikro-Fertigungstechniken entwickelt. Das Ger&auml;t ist mit Microphotolithographic Techniken produziert und zwei Substrate werden zusammen mit eine d&uuml;nnen Polymerschicht erstellen ein versiegelter Ger&auml;t mit einer Steckdose verbunden. Die Hauptstruktur des Ger&auml;ts besteht aus zwei Pyrex-Substrate: einem ge&auml;tzten Chemoattractant-Reservoir und oberer Abdeckung, mit einer Endgr&ouml;&szlig;e von 0,2 &times; 2 &times; 3 mm. Dieses Reservoir enth&auml;lt eine Mischung von Hydrogel mit EGF der heraus durch eine kleine (&sim;9.10(3)&mu;m(2)) Steckdose diffundiert. Dieses Reservoir tr&auml;gt eine kontinuierliche Freisetzung von Wachstumsfaktor in der Umgebung f&uuml;r mehrere Stunden zur Gr&uuml;ndung einer konsistenten Konzentrationsgradienten vom Ger&auml;t. Der Fokus dieser Studie war es, gestalten und optimieren Sie das neue Ger&auml;t f&uuml;r Zelle Chemotaxisstudien in Brustkrebs-Zellen in der Zellkultur. Unsere Ergebnisse zeigen, dass wir eine flexible, billig, Miniatur und autonome Chemotaxis-Ger&auml;t erstellt haben und seine N&uuml;tzlichkeit in 2D und 3D Zellkultur zu demonstrieren. Wir bieten auch vorl&auml;ufige Daten f&uuml;r die Verwendung des Ger&auml;ts in-vivo.

Ein neues Chemotaxis-Ger&auml;t f&uuml;r Zelle Migrationsforschung.

Questo studio presenta la progettazione e l&#39;ottimizzazione per uso in vitro di un nuovo dispositivo versatile chemiotassi chiamato NANIVID (NANo IntraVital Imaging Device), sviluppato utilizzando tecniche di fabbricazione avanzata di nano/micro. Il dispositivo &egrave; fabbricato utilizzando tecniche di microphotolithographic e due substrati sono incollati insieme usando uno strato sottile polimero creazione di un dispositivo sigillato con una presa di corrente. La struttura principale del dispositivo &egrave; costituito da due substrati di Pyrex: un serbatoio di chemioattrattanti acidato e un coperchio superiore, con una dimensione finale di 0,2 &times; 2 &times; 3 mm. Questo serbatoio contiene una miscela di idrogel con EGF che diffonde fuori attraverso un piccolo (presa a &sim;9.10(3)&mu;m(2)). Questo serbatoio sostiene un rilascio costante del fattore di crescita nell&#39;ambiente circostante per diverse ore, che stabilisce un gradiente di concentrazione costante dal dispositivo. Il focus di questo studio era quello di progettare e ottimizzare il nuovo dispositivo per studi di chemiotassi delle cellule in cellule di cancro al seno nella coltura delle cellule. I nostri risultati mostrano che hanno creato un flessibile, a basso costo, in miniatura e un dispositivo autonomo chemiotassi e dimostrare la sua utilit&agrave; nella coltura delle cellule 2D e 3D. Forniamo anche i dati preliminari per l&#39;uso del dispositivo in vivo.

Un nuovo dispositivo di chemiotassi per gli studi di migrazione delle cellule.

&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x306A;&#x30CA;&#x30CE; &#x30FB; &#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x52A0;&#x5DE5;&#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x958B;&#x767A; NANIVID &#xFF08;&#x30CA;&#x30CE;&#x751F;&#x4F53;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#xFF09; &#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x591A;&#x76EE;&#x7684;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E; in vitro &#x3067;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.Microphotolithographic &#x6280;&#x8853;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x8A66;&#x4F5C;&#x3057;&#x3001;&#x57FA;&#x677F;&#x3092; 2 &#x679A;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x5BC6;&#x5C01;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E; 1 &#x3064;&#x306E;&#x51FA;&#x53E3;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x8584;&#x819C;&#x5C64;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;2 &#x3064;&#x306E;&#x30D1;&#x30A4;&#x30EC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x57FA;&#x677F;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x69CB;&#x9020;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;: &#x30A8;&#x30C3;&#x30C1;&#x30F3;&#x30B0;&#x904A;&#x8D70;&#x8CAF;&#x6C34;&#x6C60;&#x3068;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306A;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306F; 0.2 &times; 2 &times; 3 mm &#x306E;&#x4E0A;&#x90E8;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8CAF;&#x6C34;&#x6C60;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3046;&#x3061;&#x306F;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066; (&sim;9.10(3)&mu;m(2)) &#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3002; &#x62E1;&#x6563; EGF &#x30CF;&#x30A4;&#x30C9;&#x30ED;&#x30B2;&#x30EB; &#x30D6;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C9;&#x3053;&#x306E;&#x8CAF;&#x6C34;&#x6C60;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306F;&#x4E00;&#x8CAB;&#x3057;&#x305F;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x52FE;&#x914D;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x3001;&#x5468;&#x8FBA;&#x74B0;&#x5883;&#x3078;&#x3092;&#x652F;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x7126;&#x70B9;&#x306F;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3057;&#x3001;&#x4E73;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3059;&#x308B;.&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x683C;&#x5B89;&#x3001;&#x30DF;&#x30CB;&#x30C1;&#x30E5;&#x30A2;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x81EA;&#x5F8B;&#x578B;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3057;&#x3001;2 D &#x3068; 3 D &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3059;. &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x3082; in vivo &#x3067;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E88;&#x5099;&#x7684;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x306E;&#x8D70;&#x5316;&#x6027;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9; &#x30BB;&#x30EB;&#x79FB;&#x6C11;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xC124;&#xACC4; &#xBC0F; &#xACE0;&#xAE09; &#xB098;&#xB178;/&#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xC81C;&#xC870; &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB41C; NANIVID (&#xB098;&#xB178; IntraVital &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC7A5;&#xCE58;) &#xB77C;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB2E4;&#xBAA9;&#xC801; chemotaxis &#xC7A5;&#xCE58;&#xC758; &#xCCB4; &#xC678; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC7A5;&#xCE58;&#xB294; microphotolithographic &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC791; &#xD558; &#xACE0; &#xD568;&#xAED8; &#xD55C; &#xCF58;&#xC13C;&#xD2B8;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xBD09;&#xC778;&#xB41C; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4DC;&#xB294; &#xC587;&#xC740; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB450; &#xAE30;&#xD310; &#xBCF4; &#xC138;. &#xB450; Pyrex &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC18C;&#xC790;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xC870;: &#xC5D0;&#xCE6D;&#xB41C; chemoattractant &#xC800;&#xC218;&#xC9C0;&#xC640; 0.2 &times; 2 &times; 3 mm&#xC758; &#xCD5C;&#xC885; &#xD06C;&#xAE30;&#xC640; &#xC0C1;&#xB2E8; &#xB36E;&#xAC1C;. &#xC774; &#xC800;&#xC218;&#xC9C0; (&sim;9.10(3)&mu;m(2)) &#xCF58;&#xC13C;&#xD2B8; &#xC791;&#xC740; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC16;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC0B0; &#xD558;&#xB294; EGF&#xC640; hydrogel &#xD63C;&#xD569; &#xD3EC;&#xD568;. &#xC774; &#xC800;&#xC218;&#xC9C0; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xD658;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00;&#xC728;&#xC758; &#xAFB8;&#xC900;&#xD55C; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xB97C; &#xACA9;&#xB824; &#xD558; &#xACE0; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC77C;&#xAD00; &#xB41C; &#xB18D;&#xB3C4; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xBA87; &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xCD08;&#xC810;&#xC740; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xACFC; &#xC720;&#xBC29;&#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; chemotaxis &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xC0C8; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xD558;&#xB294;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC720;&#xC5F0; &#xD558; &#xACE0;, &#xC800;&#xB834; &#xD55C;, &#xBBF8;&#xB2C8;&#xC5B4;&#xCC98;&#xC640; &#xC790;&#xCE58; chemotaxis &#xC7A5;&#xCE58; &#xB9CC;&#xB4E0; 2D &#xBC0F; 3D &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591;&#xC758; &#xC720;&#xC6A9;&#xC131;&#xC744; &#xC785;&#xC99D;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A5;&#xCE58;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC784;&#xC2DC; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC140; &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; chemotaxis &#xC7A5;&#xCE58;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Este estudio presenta el dise&ntilde;o y optimizaci&oacute;n para uso in vitro de un nuevo dispositivo vers&aacute;til quimiotaxis llamado el NANIVID (NANo IntraVital Imaging Device), desarrollado utilizando t&eacute;cnicas de fabricaci&oacute;n avanzadas de nano/micro. El dispositivo est&aacute; fabricado utilizando t&eacute;cnicas de microphotolithographic y dos sustratos se adhieren con una capa delgada del pol&iacute;mero crear un dispositivo de sellado con un enchufe. La estructura principal del dispositivo consiste en dos sustratos de Pyrex: un dep&oacute;sito de quimioatrayentes grabadas y una cubierta superior, con un tama&ntilde;o final de 0,2 &times; 2 &times; 3 mm. Este dep&oacute;sito contiene una mezcla de hidrogel con EGF que difunde hacia fuera a trav&eacute;s de un peque&ntilde;o (salida de &sim;9.10(3)&mu;m(2)). Este embalse sostiene un lanzamiento constante de factor de crecimiento en el entorno durante varias horas, establecer un gradiente de concentraci&oacute;n consistente desde el dispositivo. El enfoque de este estudio fue dise&ntilde;ar y optimizar el nuevo dispositivo para estudios de quimiotaxis celular en c&eacute;lulas de c&aacute;ncer de mama en cultivo celular. Nuestros resultados muestran que han creado un dispositivo de quimiotaxis aut&oacute;noma y flexible, barato, miniatura y demostrar su utilidad en cultivo celular 2D y 3D. Tambi&eacute;n proporcionamos datos preliminares para el uso del aparato en vivo.

Un nuevo dispositivo de quimiotaxis para estudios de migraci&oacute;n celular.

&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x5408;&#x63A7;&#x5236;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x8D29;&#x5356;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x79FB;&#x52A8;&#x548C;&#x4FB5;&#x88AD;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x3002;&#x4EE3;&#x548C;&#x514D;&#x8D39;&#x7684;&#x5012;&#x523A;&#x4E24;&#x7AEF;&#x4F38;&#x957F;&#x5B9A;&#x4E49;&#x79EF;&#x6781;&#x805A;&#x5408;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x89C4;&#x7BA1;&#x901A;&#x8FC7;&#x8BE5;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x6B64;&#x5904;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x5E76;&#x4E0D;&#x6D89;&#x53CA;&#x7EC6;&#x80DE;&#x901A;&#x900F;&#x6027;&#x589E;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x65E5;&#x76CA;&#x4F7F;&#x7528; photoswitchable &beta;-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;-Dendra2 &#x6784;&#x9020;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5927;&#x9F20;&#x4E73;&#x817A;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x682A;&#x6709;&#x523A;&#x7684;&#x4E24;&#x7AEF;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8BE5;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5229;&#x7528;&#x4E86; photoconverted &#xFF08;&#x7EA2;&#x8272;&#xFF09; G-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7269;&#x79CD;&#x80FD;&#x591F;&#x6210;&#x4E3A;&#x7EB3;&#x5165;&#x9884;&#x5148;&#x5B58;&#x5728;&#x7684; &#xFF08;&#x7EFF;&#x8272;&#xFF09; &#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D;&#xFF0C;&#x5728;&#x63D0;&#x5C14;&#x592B;&#x955C;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x6CE2;&#x957F;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x589E;&#x52A0;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D;&#xFF0C;photoconverted &#xFF08;&#x7EA2;&#x8272;&#xFF09; &#x5355;&#x4F53;&#x6DFB;&#x52A0;&#x5230;&#x523A;&#x7ED3;&#x675F;&#x867D;&#x7136;&#x53EA;&#x6709;&#x7EFF;&#x8272;&#x5355;&#x4F53;&#x56DE;&#x6536;&#x4ECE;&#x5C16;&#x7AEF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x5B8C;&#x597D; podosomes &#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EB3;&#x5165;&#x4E00;&#x53D1;&#x751F;&#xFF0C;&#x662F;&#x9002;&#x4E8E; cytochalasin D &#x6307;&#x793A;&#x5012;&#x523A;&#x7684;&#x7ED3;&#x675F;&#x6CD5;&#x56E2;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728;&#x9759;&#x6001; invadopodial &#x524D;&#x4F53;&#x7684;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6697;&#x793A;&#x4E1D;&#x4E0A;&#x9650;&#x548C;&#x4E0B;&#x9762;&#x7684;&#x8868;&#x76AE;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#x523A;&#x6FC0;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EB3;&#x5165;&#x53D1;&#x751F;&#x5728;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x4E00;&#x800C;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x9AD8;&#x5CF0;&#x672A;&#x51FA;&#x73B0;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x805A;&#x5408;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; Dendra2 &#x70E4;&#x74F7;&#x8981;&#x4E48; N-&#x6216; &beta;-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D; C-&#x5DF4;&#x58EB;&#x603B;&#x7AD9;&#x6DF1;&#x523B;&#x5730;&#x5F71;&#x54CD;&#x5176;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x548C;&#x7EB3;&#x5165;&#x4E0D;&#x540C; F-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5F71;&#x54CD;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x5355;&#x4F53;&#x662F; photoconverted&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x5728;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x81EA;&#x7531;&#x6709;&#x523A;&#x7AEF;&#x7684;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x652F;&#x6301; photoswitchable &#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D; Dendra2 &#x6784;&#x9020;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x805A;&#x5408;&#x4E2D;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528; photoconvertible &beta;-&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;-Dendra2 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FB5;&#x88AD;&#x6027;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x3002;

Actin polymerization controls a range of cellular processes, from intracellular trafficking to cell motility and invasion. Generation and elongation of free barbed ends defines the regions of actively polymerizing actin in cells and, consequently, is of importance in the understanding of the mechanisms through which actin dynamics are regulated. Herein we present a method that does not involve cell permeabilization and provides direct visualization of growing barbed ends using photoswitchable Î²-actin-Dendra2 constructs expressed in murine macrophage and rat mammary adenocarcinoma cell lines. The method exploits the ability of photoconverted (red) G-actin species to become incorporated into pre-existing (green) actin filaments, visualized in two distinct wavelengths using TIRF microscopy. In growing actin filaments, photoconverted (red) monomers are added to the barbed end while only green monomers are recycled from the pointed end. We demonstrate that incorporation of actin into intact podosomes of macrophages occurs constitutively and is amenable to inhibition by cytochalasin D indicating barbed end incorporation. Additionally, actin polymerization does not occur in quiescent invadopodial precursors of carcinoma cells suggesting that the filaments are capped and following epidermal growth factor stimulation actin incorporation occurs in a single but extended peak. Finally, we show that Dendra2 fused to either the N- or the C-terminus of Î²-actin profoundly affects its localization and incorporation in distinct F-actin structures in carcinoma cells, thus influencing the ability of monomers to be photoconverted. These data support the use of photoswitchable actin-Dendra2 constructs as powerful tools in the visualization of free barbed ends in living cells.

Visualization of actin polymerization in invasive structures of macrophages and carcinoma cells using photoconvertible Î²-actin-Dendra2 fusion proteins.

Polym&eacute;risation de l&#39;actine permet une gamme de processus cellulaires, de trafic intracellulaire &agrave; l&#39;invasion et la motilit&eacute; cellulaire. G&eacute;n&eacute;ration et l&#39;allongement des extr&eacute;mit&eacute;s libres de barbel&eacute; d&eacute;finit les r&eacute;gions d&#39;activement polym&eacute;risation de l&#39;actine dans les cellules et, par cons&eacute;quent, est d&#39;importance dans la compr&eacute;hension des m&eacute;canismes par lesquels la dynamique de l&#39;actine est r&eacute;glement&eacute;e. Ici, nous pr&eacute;sentons une m&eacute;thode qui n&#39;implique pas la perm&eacute;abilisation de la cellule et permet une visualisation directe des extr&eacute;mit&eacute;s barbel&eacute;es en utilisant des constructions de &beta;-actine-Dendra2 ayant exprim&eacute;es en lign&eacute;es de cellules Ad&eacute;nocarcinome mammaire murines macrophage et rat de plus en plus. La m&eacute;thode exploite la capacit&eacute; des esp&egrave;ces d&#39;actine G photoconverted (rouge) deviennent int&eacute;gr&eacute;e &agrave; pr&eacute;existantes des filaments d&#39;actine (vert), visualis&eacute;s dans deux longueurs d&#39;onde distinctes, au microscope TIRF. Dans la croissance des filaments d&#39;actine, monom&egrave;res photoconverted (rouge) sont ajout&eacute;s &agrave; l&#39;extr&eacute;mit&eacute; cannel&eacute;e, tandis que seuls les monom&egrave;res verts sont recycl&eacute;s &agrave; partir de l&#39;extr&eacute;mit&eacute; pointue. Nous d&eacute;montrons que l&#39;incorporation d&#39;actine dans les podosomes intacts des macrophages se produit de fa&ccedil;on constitutive et se pr&ecirc;te &agrave; l&#39;inhibition par l&#39;incorporation d&#39;extr&eacute;mit&eacute; cannel&eacute;e indiquant la cytochalasine D. En outre, polym&eacute;risation de l&#39;actine ne se produit pas invadopodial quiescentes pr&eacute;curseurs de cellules de carcinome, sugg&eacute;rant que les filaments sont plafonn&eacute;es et incorporation d&#39;actine suivant le facteur de croissance &eacute;pidermique stimulation se produit dans un pic unique mais prolong&eacute;. Enfin, nous montrons que Dendra2 fondue &agrave; soit le N - ou l&#39;extr&eacute;mit&eacute; C-terminale de la &beta;-actine affecte profond&eacute;ment sa localisation et l&#39;incorporation dans des structures distinctes de F-actine dans les cellules de carcinome, influen&ccedil;ant ainsi la capacit&eacute; de monom&egrave;res d&#39;&ecirc;tre photoconverted. Ces donn&eacute;es supportent l&#39;utilisation de constructions d&#39;actine-Dendra2 ayant un outil appr&eacute;ciable dans la visualisation des extr&eacute;mit&eacute;s barbel&eacute;es libres dans les cellules vivantes.

Visualisation de la polym&eacute;risation de l&#39;actine dans les structures des macrophages et des cellules de carcinome utilisant des prot&eacute;ines de fusion de &beta;-actine-Dendra2 et envahissantes.

Aktin-Polymerisation steuert eine Reihe von zellul&auml;ren Prozesse, von der intrazellul&auml;ren Menschenhandel zu Zelle Motilit&auml;t und Invasion. Generation und Streckung des freien Stacheldraht enden definiert die Regionen aktiv Polymerisations-Aktin in Zellen und folglich ist von Bedeutung f&uuml;r das Verst&auml;ndnis der Mechanismen, die durch die Aktin-Dynamik geregelt sind. Hier pr&auml;sentieren wir eine Methode, die nicht mit Zelle Permeabilization und bietet direkte Visualisierung der wachsenden Stacheldraht Ends mit Photoswitchable &beta;-Aktin-Dendra2 Konstrukte ausgedr&uuml;ckt in murinen Makrophagen und Ratte Mamma Adenokarzinom-Zelllinien. Die Methode nutzt die F&auml;higkeit des Photoconverted (rot)-G-Actin-Arten, in bereits vorhandene (gr&uuml;n) Aktin-Filamente, visualisiert in zwei unterschiedlichen Wellenl&auml;ngen TIRF-Mikroskopie mit aufgenommen werden. In wachsenden Aktin-Filamente, sind Photoconverted (rot) Monomere Stacheldraht am Ende hinzugef&uuml;gt, w&auml;hrend nur gr&uuml;ne Monomere vom Spitzen Ende wiederverwendet werden. Wir zeigen, dass die Einbeziehung der Aktin in intakten Podosomes der Makrophagen tritt konstitutiv und ist geneigt sein, Hemmung von Cytochalasin D angibt, gezackter Ende Aufnahme. Dar&uuml;ber hinaus tritt Aktin-Polymerisation nicht im Ruhezustand Invadopodial Vorl&auml;ufer der Karzinom-Zellen, die darauf hindeutet, dass die F&auml;den verschlossen und folgenden epidermalen Wachstumsfaktor Stimulierung Aktin Satzung in einer einzigen aber erweiterte Spitze tritt. Schlie&szlig;lich zeigen wir, dass Dendra2 entweder die N verschmolzen - oder der C-Terminus von &beta;-Actin zutiefst beeinflusst seine Lokalisierung und Einbindung in unterschiedliche F-Actin-Strukturen in Karzinom-Zellen, somit beeinflusst die F&auml;higkeit der Monomere, Photoconverted zu sein. Diese Daten unterst&uuml;tzen die Verwendung von Photoswitchable Aktin-Dendra2 Konstrukte als leistungsstarke Werkzeuge in der Visualisierung von freien Stacheldraht enden in lebenden Zellen.

Visualisierung der Aktin-Polymerisation in invasive Strukturen von Makrophagen und Karzinom-Zellen mit Photoconvertible &beta;-Aktin-Dendra2 Schmelzverfahrensproteine.

Polimerizzazione dell&#39;actina controlla una serie di processi cellulari, dal traffico intracellulare di invasione e la motilit&agrave; cellulare. Generazione e allungamento delle estremit&agrave; libere spinata definisce le regioni di attivamente polimerizzazione actina nelle cellule e, di conseguenza, &egrave; importante nella comprensione dei meccanismi attraverso i quali sono regolati actina dinamiche. Qui vi presentiamo un metodo che non coinvolgono permeabilization cellula e fornisce la visualizzazione diretta di spinato estremit&agrave; usando photoswitchable &beta;-actina-Dendra2 costrutti espresse in murini macrofago e ratto adenocarcinoma mammario linee di cellule in crescita. Il metodo sfrutta la capacit&agrave; delle specie di G-actina photoconverted (rosso) di diventare incorporata preesistenti filamenti di actina (verde), visualizzati in due distinte lunghezze d&#39;onda utilizzando la microscopia TIRF. Alla coltivazione dei filamenti di actina, photoconverted (rosso) monomeri sono aggiunti alla fine spinata mentre solo verde monomeri vengono riciclati dall&#39;estremit&agrave; appuntita. Ci dimostrano che incorporazione di actina podosomes intatto dei macrofagi si verifica costitutivamente ed &egrave; assoggettabile all&#39;inibizione di citocalasina D indicando incorporazione fine spinato. Inoltre, polimerizzazione dell&#39;actina non si verificano quiescente invadopodial dei precursori delle cellule di carcinoma suggerendo che i filamenti sono innevati e nell&#39;incorporazione di actina di stimolazione di fattore di crescita epidermico si verifica in un picco unico ma esteso. Infine, ci mostra che Dendra2 fuso o N - o C-terminale della &beta;-actina colpisce profondamente la localizzazione e l&#39;incorporazione in distinte strutture di F-actina nelle cellule di carcinoma, influenzando cos&igrave; la capacit&agrave; di monomeri di essere photoconverted. Questi dati supportano l&#39;utilizzo di costrutti di actina-Dendra2 photoswitchable come strumenti potenti nella visualizzazione delle estremit&agrave; libere spinata in cellule viventi.

Visualizzazione di polimerizzazione dell&#39;actina in strutture invasive di macrofagi e cellule di carcinoma mediante proteine di fusione di &beta;-actina-Dendra2 fotoconvertibile.

&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x91CD;&#x5408;&#x304B;&#x3089;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x52D5;&#x3001;&#x4FB5;&#x7565;&#x306B;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E16;&#x4EE3;&#x3068;&#x4F38;&#x3073;&#x7121;&#x6599;&#x6709;&#x523A;&#x9244;&#x7DDA;&#x7D42;&#x4E86;&#x306E;&#x7A4D;&#x6975;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x91CD;&#x5408;&#x306E;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x305D;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30FB; &#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7D30;&#x80DE;&#x900F;&#x904E;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3057;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5927;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x4E73;&#x817A;&#x817A;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x3067;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x305F; photoswitchable &beta; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; Dendra2 &#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6709;&#x523A;&#x9244;&#x7DDA;&#x306E;&#x4E21;&#x7AEF;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x624B;&#x6CD5;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x5185;&#x306E; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6CE2;&#x9577;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x53EF;&#x8996;&#x5316; (&#x7DD1;) &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; &#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x65E2;&#x5B58;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x306B;&#x306A;&#x308B; photoconverted &#xFF08;&#x8D64;&#xFF09; G &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7A2E;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x60AA;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x7DD1;&#x306E;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x306F;&#x5148;&#x306E;&#x5C16;&#x3063;&#x305F;&#x7AEF;&#x304B;&#x3089;&#x30EA;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x9593;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; 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N - &#x307E;&#x305F;&#x306F; &beta;-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E; C &#x672B;&#x7AEF;&#x6DF1;&#x304F;&#x305D;&#x306E;&#x5C40;&#x5728;&#x3068; F &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x4E00;&#x7FA9;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066; photoconverted &#x3092;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x7121;&#x6599;&#x30D0;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x7D42;&#x4E86;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x306E;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066; photoswitchable &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3; Dendra2 &#x30B3;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30AF;&#x30C8;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x91CD;&#x5408;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3068; photoconvertible &#x306E; &beta;-&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;-Dendra2 &#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x4FB5;&#x8972;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3002;

&#xB9D0;&#xB77C; &#xD569; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBC0F; &#xCE68;&#xB7B5;&#xC744; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xBC00;&#xB9E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC81C;&#xC5B4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xB300; &#xBC0F; &#xBB34;&#xB8CC; &#xAC00;&#xC2DC; &#xB05D;&#xC758; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC801;&#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC140;&#xC758; polymerizing&#xC758; &#xC601;&#xC5ED; &#xC815;&#xC758; &#xD558; &#xACE0;, &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC5ED;&#xD559; &#xADDC;&#xC81C; &#xB418;&#xB294; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC140; permeabilization&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xD558; &#xACE0; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xC2DC; &#xB05D; murine macrophage&#xC640; &#xC950; &#xC720; &#xBC29; &#xC120; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; photoswitchable &beta;-&#xB9D0;&#xB77C;-Dendra2 &#xAD6C;&#xBB38;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC9C1;&#xC811; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; photoconverted (&#xB808;&#xB4DC;) G &#xB9D0;&#xB77C; &#xC885; &#xC218; (&#xB179;&#xC0C9;) &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;, &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xD30C;&#xC7A5; TIRF &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2DC;&#xAC01;&#xC744; &#xAE30;&#xC874;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xB420; &#xC545;&#xC6A9;. &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xB97C; &#xC131;&#xC7A5;, &#xB179;&#xC0C9; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xB294; &#xBFB0;&#xC871;&#xD55C; &#xB05D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xD65C;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; photoconverted (&#xB808;&#xB4DC;) &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4; &#xAC00;&#xC2DC; &#xB05D;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5C6;&#xC774; &#xB9D0;&#xB77C; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; podosomes&#xC5D0; constitutively &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558; &#xACE0; &#xC21C;&#xC885; cytochalasin D &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC00;&#xC2DC; &#xB05D; &#xBC95;&#xC778;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB9D0;&#xB77C; &#xD569; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xCD9C;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xC74C;&#xACFC; &#xAC19;&#xC740; &#xD45C; &#xD53C; &#xC131;&#xC7A5; &#xC778;&#xC790; &#xC790;&#xADF9; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC95;&#xC778; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD655;&#xC7A5; &#xD53C;&#xD06C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBB34;&#xBD80;&#xD558; invadopodial &#xC804;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; dendra2&#xC744; &#xC735;&#xD569; N-&#xB610;&#xB294; C-&#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &beta;-&#xB9D0;&#xB77C; &#xBFCC;&#xB9AC;&#xAE4A;&#xC740; &#xC601;&#xD5A5;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xBC0F; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; F &#xB9D0;&#xB77C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC95;&#xC778; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; photoconverted &#xC218; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4;&#xC758; &#xB2A5;&#xB825;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBB34;&#xB8CC; &#xAC00;&#xC2DC; &#xB05D; &#xC0B4;&#xC544;&#xC788;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;&#xC5D0; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; photoswitchable &#xB9D0;&#xB77C; Dendra2 &#xAD6C;&#xBB38; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;&#xB97C; &#xC9C0;&#xC6D0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; photoconvertible &beta;-&#xB9D0;&#xB77C;-Dendra2 &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCE68; &#xC724; &#xC131; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD569;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

Polimerizaci&oacute;n de la actina controla una variedad de procesos celulares, de tr&aacute;fico intracelular a la invasi&oacute;n y motilidad celular. Generaci&oacute;n y alargamiento de extremos libres p&uacute;as define las regiones de activamente polimerizar la actina en las c&eacute;lulas y, en consecuencia, es de importancia en la comprensi&oacute;n de los mecanismos a trav&eacute;s del cual se regula la din&aacute;mica de actina. En este documento se presenta un m&eacute;todo que implique permeabilizaci&oacute;n de la c&eacute;lula y proporciona la visualizaci&oacute;n directa de p&uacute;as extremos con construcciones de &beta;-actina-Dendra2 fotoconmutables expresadas en l&iacute;neas de celulares adenocarcinoma mamario murinas macr&oacute;fago y la rata de crecimiento. El m&eacute;todo aprovecha la capacidad de especie de G-actina photoconverted (rojo) para incorporarse a la preexistente de filamentos de actina (verde), en dos distintas longitudes de onda mediante microscop&iacute;a TIRF. En el cultivo de filamentos de actina, mon&oacute;meros de photoconverted (rojo) se agregan al final p&uacute;a mientras s&oacute;lo verdes mon&oacute;meros son reciclados desde el extremo puntiagudo. Demostramos que la incorporaci&oacute;n de la actina podosomes intacto de macr&oacute;fagos ocurre constitutivamente y es sensible a la inhibici&oacute;n por la incorporaci&oacute;n de extremo de p&uacute;a indicando Citocalasina D. Adem&aacute;s, polimerizaci&oacute;n de la actina no ocurre en invadopodial quieto precursores de las c&eacute;lulas del carcinoma sugiriendo que los filamentos est&eacute;n cerrados e incorporaci&oacute;n de actina de estimulaci&oacute;n de factor de crecimiento epid&eacute;rmico siguiente ocurre en un pico solo pero extendido. Finalmente, demostramos que Dendra2 hab&iacute;a fusionada a cualquiera el N - o el c-terminal de la &beta;-actina afecta profundamente su localizaci&oacute;n y su incorporaci&oacute;n en distintas estructuras de la F-actina en las c&eacute;lulas del carcinoma, as&iacute; influir en la capacidad de mon&oacute;meros para ser photoconverted. Estos datos apoyan el uso de construcciones de actina-Dendra2 fotoconmutables como herramientas poderosas en la visualizaci&oacute;n de los extremos libres de p&uacute;as en las c&eacute;lulas vivas.

Visualizaci&oacute;n de la polimerizaci&oacute;n de la actina en estructuras invasoras de los macr&oacute;fagos y las c&eacute;lulas del carcinoma con prote&iacute;nas de fusi&oacute;n de &beta;-actina-Dendra2 de photoconvertible.

&#x4EE5;&#x524D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x8868;&#x660E;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x4E2D;&#x4E1C;&#x548C;&#x5317;&#x975E;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x5747;&#x4EE5;&#x521B;&#x548C;&#x6D04;&#x6E38;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x793A;&#x5165;&#x4FB5;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53; &#xFF08;Mena(INV)) &#x589E;&#x5F3A;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x80BF;&#x7624;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8BE5;&#x7279;&#x5B9A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x8F6C;&#x79FB;&#x8FDB;&#x5C55;&#x53D7;&#x6B64;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x548C;&#x8F6C;&#x79FB; Mena11a &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#xFF0C;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x662F;&#x5F88;&#x5927;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x672A;&#x77E5;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BC1;&#x636E;&#x8BC1;&#x660E; Mena(INV) &#x589E;&#x52A0;&#x534F;&#x8C03;&#x6D41;&#x52A8;&#x529B;&#x63D0;&#x5347;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x5185;&#x8033;&#x8FC1;&#x79FB;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5165;&#x4FB5;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x7531; Mena(INV) &#x8F6C;&#x79FB;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65E9;&#x671F;&#x9636;&#x6BB5;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x65C1;&#x5206;&#x6CCC;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4F9D;&#x8D56;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FD8;&#x663E;&#x793A; Mena11a &#x8868;&#x8FBE;&#x589E;&#x52A0;&#x51CF;&#x5C11;&#x96C6;&#x843D;&#x523A;&#x6FC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0E;&#x5173;&#x8054; 1 &#x548C;&#x53C2;&#x4E0E;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x65C1;&#x5206;&#x6CCC;&#x5165;&#x4FB5;&#x548C;&#x672F;&#x524D;&#x663E;&#x8457;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BF4;&#x660E;&#x6D41;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x65C1;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F20;&#x64AD;&#xFF0C;&#x672F;&#x524D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8868;&#x660E;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684; Mena(INV) &#x548C; Mena11a &#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x8C03;&#x8282;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5173;&#x952E;&#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6027;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

&#x4E2D;&#x4E1C;&#x548C;&#x5317;&#x975E;&#x521B; &#xFF08;MenaINV&#xFF09; &#x4FC3;&#x8FDB;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D41;&#x52A8;&#x529B;&#x53CA;&#x5185;&#x8033;&#x8FC1;&#x79FB;&#x3002;

We have shown previously that distinct Mena isoforms are expressed in invasive and migratory tumor cells in vivo and that the invasion isoform (Mena(INV)) potentiates carcinoma cell metastasis in murine models of breast cancer. However, the specific step of metastatic progression affected by this isoform and the effects on metastasis of the Mena11a isoform, expressed in primary tumor cells, are largely unknown. Here, we provide evidence that elevated Mena(INV) increases coordinated streaming motility, and enhances transendothelial migration and intravasation of tumor cells. We demonstrate that promotion of these early stages of metastasis by Mena(INV) is dependent on a macrophage-tumor cell paracrine loop. Our studies also show that increased Mena11a expression correlates with decreased expression of colony-stimulating factor 1 and a dramatically decreased ability to participate in paracrine-mediated invasion and intravasation. Our results illustrate the importance of paracrine-mediated cell streaming and intravasation on tumor cell dissemination, and demonstrate that the relative abundance of Mena(INV) and Mena11a helps to regulate these key stages of metastatic progression in breast cancer cells.

Mena invasive (MenaINV) promotes multicellular streaming motility and transendothelial migration in a mouse model of breast cancer.

Nous avons d&eacute;j&agrave; montr&eacute; que les isoformes distinctes de Mena sont exprim&eacute;s dans les cellules de tumeur invasive et migrateurs in vivo et que l&#39;isoforme d&#39;invasion (Mena(INV)) potentialise les m&eacute;tastases cellule carcinome dans des mod&egrave;les murins de cancer du sein. Cependant, l&#39;&eacute;tape sp&eacute;cifique de progression m&eacute;tastatique touch&eacute;e par cette isoforme et les effets sur les m&eacute;tastases de l&#39;isoforme Mena11a, exprim&eacute;e dans les cellules de la tumeur primitive, sont largement inconnus. Ici, nous fournir la preuve qu&#39;&eacute;lev&eacute; Mena(INV) augmente la motilit&eacute; streaming coordonn&eacute;e et am&eacute;liore la migration transendoth&eacute;liale et intravasation des cellules tumorales. Nous d&eacute;montrons que la promotion des stades pr&eacute;coces de la m&eacute;tastase de Mena(INV) est tributaire d&#39;une boucle paracrine de macrophage-tumeur cellulaire. Nos &eacute;tudes montrent &eacute;galement que Mena11a une expression accrue est corr&eacute;l&eacute;e avec la diminution de l&#39;expression du facteur colonie-stimulant de 1 et une capacit&eacute; consid&eacute;rablement diminu&eacute;e de participer au intravasation et paracrine induite par l&#39;invasion. Nos r&eacute;sultats illustrent l&#39;importance de paracrine cellulaire en streaming et intravasation sur la diffusion des cellules tumorales et d&eacute;montrent que l&#39;abondance relative des Mena(INV) et Mena11a aide &agrave; r&eacute;guler ces &eacute;tapes cl&eacute;s de la progression dans les cellules du cancer du sein m&eacute;tastatique.

Mena invasive (MenaINV) promeut multicellulaire en continu la motilit&eacute; et transendoth&eacute;liale migration dans un mod&egrave;le murin de cancer du sein.

Zuvor haben wir gezeigt, dass unterschiedliche Mena-Isoformen in invasive und wandernden Tumorzellen in Vivo und dass ausgedr&uuml;ckt werden die Invasion-Isoform (Mena(INV)) Spurenelement Karzinom-Zelle-Metastase in murinen Modelle von Brustkrebs. Der bestimmte Schritt metastasierendem Progression von dieser Isoform und Auswirkungen auf die Metastasierung von der Mena11a-Isoform, ausgedr&uuml;ckt in prim&auml;ren Tumorzellen betroffen sind jedoch weitgehend unbekannt. Hier bieten wir Beweise, die erh&ouml;hte Mena(INV) Erh&ouml;hungen koordinierte streaming Motilit&auml;t und verbessert die Transendothelial Migration und Intravasation von Tumorzellen. Wir zeigen, dass die F&ouml;rderung dieser fr&uuml;hen Phasen der Metastasierung von Mena(INV) eine Makrophage-Tumor Zelle parakrine Schleife abh&auml;ngig ist. Unsere Studien zeigen auch, dass die erh&ouml;hte Expression von Mena11a 1 und eine dramatisch verminderte F&auml;higkeit zur Teilnahme an parakrine-vermittelte Invasion und Intravasation mit verringerter Ausdruck der Kolonie-stimulierende Faktor korreliert. Unsere Ergebnisse verdeutlichen die Bedeutung der parakrine-vermittelte Zelle streaming und Intravasation auf Tumor Zelle Verbreitung und zeigen, dass die relative H&auml;ufigkeit von Mena(INV) und Mena11a hilft um diese Schl&uuml;sselstellen metastasierendem Progression in Brustkrebs-Zellen zu regulieren.

Mena invasive (MenaINV) f&ouml;rdert die vielzelligen streaming Motilit&auml;t und Transendothelial Migration in einem Mausmodell an Brustkrebs.

Abbiamo dimostrato in precedenza che distinte isoforme Mena sono espressi nelle cellule tumorali invasive e migratori in vivo e che l&#39;isoforma di invasione (Mena(INV)) potenzia metastasi cell carcinoma in modelli murini di cancro al seno. Tuttavia, il passo specifico della progressione metastatica colpiti da questa isoforma e gli effetti sulle metastasi dell&#39;isoforma Mena11a, espresso in cellule del tumore primario, sono in gran parte sconosciuto. Qui, forniamo prove che elev&ograve; Mena(INV) aumenti coordinato streaming motilit&agrave; e migliora la migrazione transendoteliale e intravasation delle cellule tumorali. Dimostriamo che la promozione di queste prime fasi di metastasi di Mena(INV) dipende da un ciclo di paracrina macrofago-tumore delle cellule. I nostri studi mostrano anche che maggiore Mena11a espressione correla con diminuita espressione di colony-stimulating factor 1 e una drasticamente diminuita capacit&agrave; di partecipare intravasation e invasione paracrina-mediata. I nostri risultati illustrano l&#39;importanza della cellula mediata paracrina streaming e intravasation sulla diffusione delle cellule tumorali e dimostrano che l&#39;abbondanza relativa di Mena(INV) e Mena11a aiuta a regolare queste fasi chiave della progressione metastatica in cellule di cancro al seno.

Mena invasiva (MenaINV) promuove pluricellulare streaming migrazione transendoteliale e motilit&agrave; in un modello murino di cancro al seno.

&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x4EE5;&#x524D;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30CA; &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x4FB5;&#x8972;&#x3068;&#x6E21;&#x308A;&#x9CE5;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE; in vivo &#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F; (Mena(INV)) &#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x8EE2;&#x79FB;&#x4E73;&#x764C;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x4FB5;&#x7565;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3067;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3068;&#x539F;&#x767A;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3057;&#x305F; Mena11a &#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; Mena(INV) &#x5897;&#x52A0;&#x5354;&#x8ABF;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x904B;&#x52D5;&#x3001;&#x9AD8;&#x67B6;&#x3057;&#x3001;&#x5185;&#x76AE;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E; intravasation &#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E; Mena(INV) &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x4FC3;&#x9032;&#x304C;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x30D1;&#x30E9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3; &#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;Mena11a &#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306F; 1 &#x3068;&#x508D;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x4FB5;&#x5165;&#x3068; intravasation &#x306B;&#x53C2;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x523A;&#x6FC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D1;&#x30E9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x666E;&#x53CA;&#x3001;&#x4E0A;&#x306E; intravasation &#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066; Mena(INV) &#x3068; Mena11a &#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x591A;&#x91CF;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x8EE2;&#x79FB;&#x9032;&#x884C;&#x4E73;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x6F14;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Mena &#x4FB5;&#x8972; &#xFF08;MenaINV&#xFF09; &#x4E73;&#x764C;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x591A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x904B;&#x52D5;&#x3068;&#x5185;&#x76AE;&#x79FB;&#x884C;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xBBF8; &#xB098; isoforms &#xBE44;&#xBCF4;&#xC758; &#xCE68;&#xB7B5;&#xACFC; &#xCCA0;&#xC0C8; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB418;&#xB294; &#xCE68;&#xACF5; isoform (Mena(INV)) potentiates &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xC804;&#xC774; &#xC720;&#xBC29;&#xC554;&#xC758; murine &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xC804;&#xC774;&#xC131; &#xC9C4;&#xD589;&#xC774;&#xC774; isoform &#xBC0F; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; Mena11a isoform&#xC758; &#xC804;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C0;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; Mena(INV) &#xC99D;&#xAC00; &#xC870;&#xC728; &#xB41C; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9AC;&#xBC0D; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131;, &#xC0C1;&#xC2B9; &#xD558; &#xACE0; transendothelial &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xBC0F; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; intravasation &#xD5A5;&#xC0C1; &#xD558;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Mena(inv)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC804;&#xC774;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC2B9;&#xC9C4;&#xC740; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; paracrine &#xB8E8;&#xD504;&#xC5D0; &#xC885;&#xC18D; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; 1, paracrine &#xC911;&#xC7AC; &#xCE68;&#xACF5; &#xBC0F; intravasation&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC10;&#xC18C; &#xB2A5;&#xB825; &#xC99D;&#xAC00; Mena11a &#xC2DD;&#xC758; &#xCF5C;&#xB85C; &#xB2C8; &#xC790;&#xADF9; &#xC778;&#xC790; &#xAC10;&#xC18C; &#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xAD00; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9AC;&#xBC0D; paracrine &#xC911;&#xC7AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC885;&#xC591; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCF4;&#xAE09;&#xC5D0; intravasation&#xC758; &#xC911;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558; &#xACE0; Mena(INV) &#xBC0F; mena11a&#xC758; &#xC0C1;&#xB300; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xC804;&#xC774;&#xC131; &#xC9C4;&#xD589; &#xC720;&#xBC29;&#xC554; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD575;&#xC2EC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xB3C4;&#xC6C0;&#xC774; &#xBCF4;&#xC5EC;.

&#xBA54; &#xB098; &#xCE68; &#xC724; &#xC131; (MenaINV) &#xC720;&#xBC29;&#xC554;&#xC758; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC138;&#xD3EC; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB9AC;&#xBC0D; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBC0F; transendothelial &#xB9C8;&#xC774;&#xADF8;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xCD94;&#xC9C4;.

Hemos demostrado previamente que distintas isoformas de Mena se expresan en c&eacute;lulas del tumor invasivo y migratorias en vivo y que la isoforma de la invasi&oacute;n (Mena(INV)) potencializa met&aacute;stasis de carcinoma de la c&eacute;lula en modelos murinos de c&aacute;ncer de mama. Sin embargo, el paso espec&iacute;fico de progresi&oacute;n metast&aacute;sica afectado por esta isoforma y los efectos sobre la met&aacute;stasis de la isoforma Mena11a, expresada en las c&eacute;lulas del tumor primario, son en gran parte desconocido. Aqu&iacute; proporcionamos evidencia que elev&oacute; Mena(INV) aumenta la motilidad transmisi&oacute;n coordinada y aumenta la migraci&oacute;n transendothelial e intravasaci&oacute;n de c&eacute;lulas tumorales. Demostramos que la promoci&oacute;n de estas primeras etapas de met&aacute;stasis por Mena(INV) es dependiente en un bucle de macr&oacute;fago-tumor celular paracrina. Nuestros estudios demuestran tambi&eacute;n que Mena11a aumento de la expresi&oacute;n correlaciona con la expresi&oacute;n disminuida del factor estimulante de colonias de 1 y una capacidad disminuida dr&aacute;sticamente para participar en intravasaci&oacute;n y paracrina mediada por invasi&oacute;n. Nuestros resultados ilustran la importancia de celular mediada por paracrina streaming e intravasaci&oacute;n en la difusi&oacute;n de la c&eacute;lula del tumor y demuestran que la abundancia relativa de Mena(INV) y Mena11a ayuda a regular estas etapas claves de la progresi&oacute;n en c&eacute;lulas de c&aacute;ncer de mama metast&aacute;sica.

Mena invasiva (MenaINV) promueve la migraci&oacute;n streaming multicelular de la motilidad y transendothelial en un modelo murino de c&aacute;ncer de mama.

&#x8FA8;&#x522B;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x5F88;&#x591A;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x673A;&#x5236;&#x9700;&#x8981;&#x6709;&#x80FD;&#x529B;&#x6269;&#x5927;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x548C;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5220;&#x9664;&#x73B0;&#x6709;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x6CE2;&#x957F;&#x8C03;&#x8C10;&#x9650;&#x5236;&#x65F6;&#x540C;&#x65F6;&#x62CD;&#x6444;&#x4E24;&#x4E2A;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53C2;&#x6570;&#x63D0;&#x53D6;&#x5927;&#x91CF;&#x7684; 4 D &#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x51FA;&#x6784;&#x5EFA;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6FC0;&#x5149;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x6FC0;&#x53D1;&#x5149;&#x7684;&#x6CE2;&#x957F;&#x8303;&#x56F4;&#x5EF6;&#x4F38;&#x3001; &#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x540C;&#x65F6;&#x53EF;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x6570;&#x548C;&#x566A;&#x58F0;&#x901A;&#x8FC7; &#39;over-clocking&#39; &#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x80FD;&#x591F;&#x663E;&#x8457;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x5229;&#x7528;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7F16;&#x5199;&#x7684;&#x8F6F;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x63D2;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x7B80;&#x5316;&#x4E86;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x548C;&#x5206;&#x6790; 4 D &#x6D3B;&#x4F53;&#x56FE;&#x50CF;&#x6570;&#x636E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x9996;&#x5148;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5149;&#x5B66;&#x3001; &#x786C;&#x4EF6;&#x3001; &#x7535;&#x5B50;&#x4EA7;&#x54C1;&#x548C;&#x8F6F;&#x4EF6;&#x6240;&#x9700;&#xFF0C;&#x548C;&#x6700;&#x540E;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x63D2;&#x4EF6;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x5B89;&#x88C5;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x548C;&#x63D2;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x63D0;&#x51FA;&#x901A;&#x8FC7;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x4E73;&#x817A;&#x764C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x6536;&#x96C6;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x3002;&#x8BE5;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5728; &sim;24 h &#x5B8C;&#x6210;&#x3002;

&#x8BBE;&#x7F6E;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6FC0;&#x5149;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x591A;&#x901A;&#x9053;&#x6D3B;&#x4F53;&#x8367;&#x5149;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;

Characterizing biological mechanisms dependent upon the interaction of many cell types in vivo requires both multiphoton microscope systems capable of expanding the number and types of fluorophores that can be imaged simultaneously while removing the wavelength and tunability restrictions of existing systems, and enhanced software for extracting critical cellular parameters from voluminous 4D data sets. We present a procedure for constructing a two-laser multiphoton microscope that extends the wavelength range of excitation light, expands the number of simultaneously usable fluorophores and markedly increases signal to noise via 'over-clocking' of detection. We also utilize a custom-written software plug-in that simplifies the quantitative tracking and analysis of 4D intravital image data. We begin by describing the optics, hardware, electronics and software required, and finally the use of the plug-in for analysis. We demonstrate the use of the setup and plug-in by presenting data collected via intravital imaging of a mouse model of breast cancer. The procedure may be completed in âˆ¼24 h.

Setup and use of a two-laser multiphoton microscope for multichannel intravital fluorescence imaging.

Caract&eacute;riser les m&eacute;canismes biologiques d&eacute;pendent de l&#39;interaction de nombreux types cellulaires in vivo n&eacute;cessite les deux syst&egrave;mes de microscopie multiphoton capables d&#39;&eacute;largir le nombre et les types des fluorophores qui peut &ecirc;tre photographi&eacute;es en m&ecirc;me temps tout en &eacute;liminant les restrictions de longueur d&#39;onde et accordabilit&eacute; des syst&egrave;mes existants et am&eacute;lior&eacute; le logiciel permettant d&#39;extraire les param&egrave;tres cellulaires critiques d&#39;ensembles de donn&eacute;es volumineux 4D. Nous pr&eacute;sentons une proc&eacute;dure pour la construction d&#39;un microscope multiphoton deux-laser qui &eacute;tend la gamme de longueur d&#39;onde d&#39;excitation lumineuse, accro&icirc;t le nombre des fluorophores utilisables simultan&eacute;ment et augmente consid&eacute;rablement le signal au bruit via &laquo; over-clocking &raquo; de d&eacute;tection. Aussi, nous utilisons un logiciel d&#39;&eacute;criture personnalis&eacute;e plug-in qui simplifie le suivi quantitatif et l&#39;analyse des donn&eacute;es d&#39;image intravitale 4D. Nous commen&ccedil;ons par d&eacute;crire l&#39;optique, mat&eacute;riel, &eacute;lectronique et logiciel requis et enfin l&#39;utilisation de plug-in pour analyse. Nous montrons l&#39;utilisation de la configuration et le plug-in en pr&eacute;sentant les donn&eacute;es recueillies par l&#39;interm&eacute;diaire de l&#39;imagerie intravitale d&#39;un mod&egrave;le de souris de cancer du sein. La proc&eacute;dure peut &ecirc;tre compl&eacute;t&eacute;e en &sim;24 h.

Configuration et l&#39;utilisation d&#39;un microscope multiphoton deux-laser pour l&#39;imagerie de fluorescence intravitale multicanaux.

Charakterisierung der biologische Mechanismen der Interaktion von vielen Zelltypen in-vivo abh&auml;ngig erfordert beide multiphoton-Mikroskop-Systemen, die mit der Ausweitung der Anzahl und Typen der Fluorophore, die gleichzeitig abgebildet werden k&ouml;nnen, w&auml;hrend das Entfernen der Wellenl&auml;nge und Einstellbarkeit Einschr&auml;nkungen bestehender Systeme und verbesserte Software zum Extrahieren von kritischen zellul&auml;re Parameter aus volumin&ouml;sen 4D Datens&auml;tze. Wir pr&auml;sentieren ein Verfahren zur Konstruktion von einem zwei-Laser multiphoton-Mikroskop, die erweitert des Wellenl&auml;ngenbereich der Anregung Licht, erweitert die Anzahl der gleichzeitig verwendbaren Fluorophore und deutlich erh&ouml;ht Signal to Noise &uuml;ber &quot;&Uuml;bertaktung&quot; Nachweisgrenze. Wir verwenden auch eine benutzerdefinierte Software-Plug-ins, die die quantitativen Verfolgung und Analyse von 4D intravital Bilddaten vereinfacht. Wir beginnen mit der Beschreibung der Optik, Hardware, Elektronik und Software erforderlich und schlie&szlig;lich die Verwendung von Plug-ins f&uuml;r Analyse. Wir zeigen die Verwendung des Setups und Plug-in-durch die Vorlage von Daten &uuml;ber intravital Bildgebung in einem Mausmodell des Brustkrebses gesammelt. Das Verfahren kann in &sim;24 h abgeschlossen werden.

Einrichtung und Verwendung eines zwei-Laser multiphoton-Mikroskops f&uuml;r Mehrkanal intravital Fluoreszenz-Imaging.

Caratterizzare i meccanismi biologici dipende dalla interazione di molti tipi di cellule in vivo richiede entrambi i sistemi multiphoton microscopio in grado di ampliare il numero e i tipi di fluorofori che possono essere imaged simultaneamente durante la rimozione delle restrizioni di lunghezza d&#39;onda e sintonizzabilit&agrave; di sistemi esistenti e avanzato software per l&#39;estrazione di parametri cellulari critici da insiemi di dati voluminosi D 4. Vi presentiamo una procedura per la costruzione di un microscopio multifotonica due laser che amplia la gamma di lunghezza d&#39;onda della luce di eccitazione, si espande il numero di fluorofori utilizzabili simultaneamente e aumenta marcatamente signal to noise via &#39;l&#39;overclocking&#39; di rilevamento. Utilizziamo anche un plug-in che semplifica il rilevamento quantitativa e analisi dei dati di immagine intravital 4 D di software personalizzato. Iniziamo descrivendo l&#39;ottica, hardware, elettronica e software richiesto e infine l&#39;utilizzo di plug-in per l&#39;analisi. Ci illustrano l&#39;utilizzo del setup e plug-in di presentazione dei dati raccolti tramite intravital immagini di un modello murino di cancro al seno. La procedura pu&ograve; essere completata in &sim;24 h.

Installazione e utilizzo di un microscopio multifotonica due-laser per l&#39;imaging di fluorescenza intravital multicanale.

&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x6570;&#x3068;&#x65E2;&#x5B58;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x6CE2;&#x9577;&#x3068;&#x53EF;&#x5909;&#x6027;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x3092;&#x9664;&#x53BB;&#x3057;&#x306A;&#x304C;&#x3089;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3092;&#x4F5C;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059; fluorophores &#x578B;&#x306E;&#x62E1;&#x5F35;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3057;&#x3001;&#x5927;&#x90E8;&#x306E; 4 D &#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; &#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x304B;&#x3089;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x62BD;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x3092;&#x5F37;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x52B1;&#x8D77;&#x5149;&#x306E;&#x6CE2;&#x9577;&#x7BC4;&#x56F2;&#x62E1;&#x5F35;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x4F7F;&#x3048;&#x308B; fluorophores &#x6570;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3057;&#x3001;&#x8457;&#x3057;&#x304F; &#39;&#x691C;&#x51FA;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF; &#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#39; &#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x30CE;&#x30A4;&#x30BA;&#x306B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x304C;&#x5897;&#x52A0; 2 &#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30E0;&#x66F8;&#x304B;&#x308C;&#x305F;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x306F;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x306A;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x304A;&#x3088;&#x3073; 4 D &#x751F;&#x4F53;&#x753B;&#x50CF;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7C21;&#x7D20;&#x5316;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B0;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x5149;&#x5B66;&#x7CFB;&#x3001;&#x30CF;&#x30FC;&#x30C9;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x3001;&#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30CB;&#x30AF;&#x30B9;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30BD;&#x30D5;&#x30C8;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A2;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B0;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x4E73;&#x304C;&#x3093;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9; &#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x53CE;&#x96C6;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B0;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&sim;24 h &#x3067;&#x5B8C;&#x4E86;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC124;&#xCE58; &#xBC0F; &#xBA40;&#xD2F0; &#xCC44;&#xB110; intravital &#xD615;&#xAD11; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; 2 &#xB808;&#xC774;&#xC800; multiphoton &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;.

Caracterizar los mecanismos biol&oacute;gicos dependen de la interacci&oacute;n de muchos tipos de c&eacute;lulas in vivo requiere ambos sistemas multifot&oacute;n microscopio capaces de ampliar el n&uacute;mero y tipo de fluor&oacute;foros que pueden ser reflejada simult&aacute;neamente al quitar las restricciones de la longitud de onda y afinabilidad de los sistemas existentes y software para la extracci&oacute;n de los par&aacute;metros cr&iacute;ticos de celulares de conjuntos de datos voluminosos 4D mejorado. Presentamos un procedimiento para construir un microscopio multifot&oacute;n dos l&aacute;ser que ampl&iacute;a la gama de longitud de onda de la luz de la excitaci&oacute;n, ampl&iacute;a el n&uacute;mero de fluor&oacute;foros simult&aacute;neamente usable y aumenta notablemente la se&ntilde;al a ruido a trav&eacute;s de &quot;aceleraci&oacute;n&quot; de detecci&oacute;n. Tambi&eacute;n utilizamos un software de medida plug-in que simplifica el seguimiento cuantitativo y an&aacute;lisis de datos de imagen intravital de 4D. Empezamos describiendo la &oacute;ptica, hardware, electr&oacute;nica y software necesario y finalmente el uso del complemento para el an&aacute;lisis. Se demuestra el uso de la configuraci&oacute;n y el plug-in al presentar los datos recopilados mediante la proyecci&oacute;n de imagen intravital de un modelo murino de c&aacute;ncer de mama. El procedimiento puede completarse en h &sim;24.

Instalaci&oacute;n y uso de un microscopio multifot&oacute;n dos l&aacute;ser para la proyecci&oacute;n de imagen de fluorescencia intravital multicanal.

&#x5982;&#x679C;&#x8981;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x7684;&#x764C;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x5206;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x4E2D;&#x7684;&#x5404;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x5B9E;&#x73B0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x5404;&#x6B65;&#x9AA4;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x969C;&#x788D;&#x662F;&#x5728;&#x6BDB;&#x4E00;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x5F02;&#x7C7B;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E0E;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x53D8;&#x5F02;&#x5C5E;&#x6027;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x6240;&#x6709;&#x901A;&#x8FC7;&#x8840;&#x6DB2;&#x548C;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x751F;&#x957F;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x4ECE;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x80FD;&#x591F;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x51B3;&#x8BAE;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x6210;&#x4E3A;&#x5173;&#x952E;&#x5728;&#x63A8;&#x8FDB;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3001; &#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x5B9A;&#x4E49;&#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x8FD9;&#x7BC7;&#x6587;&#x7AE0;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x80BF;&#x7624; (&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x4E73;&#x817A;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;) &#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

&#x4F53;&#x5185;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;

Analysis of the individual steps in metastasis is crucial if insights at the molecular level are to be linked to the cell biology of cancer. A technical hurdle to achieving the analysis of the individual steps of metastasis is the fact that, at the gross level, tumors are heterogeneous in both animal models and patients. Human primary tumors show extensive variation in all properties ranging from growth and morphology of the tumor through tumor-cell density in the blood and formation and growth of metastases. Methods capable of the direct visualization and analysis of tumor-cell behavior at single-cell resolution in vivo have become crucial in advancing the understanding of mechanisms of metastasis, the definition of microenvironment, and the markers related to both. This article discusses the use of high-resolution multiphoton imaging of tumors (specifically breast tumors in mice) in vivo.

High-resolution multiphoton imaging of tumors in vivo.

Analyse des diff&eacute;rentes &eacute;tapes &agrave; la m&eacute;tastase est crucial si aper&ccedil;us au niveau mol&eacute;culaire sont li&eacute;es &agrave; la biologie de cellules de cancer. Un obstacle technique &agrave; la r&eacute;alisation de l&#39;analyse des diff&eacute;rentes &eacute;tapes de la m&eacute;tastase est le fait que, au niveau brut, les tumeurs sont h&eacute;t&eacute;rog&egrave;nes dans les mod&egrave;les animaux et les patients. Les tumeurs primaires humaines montrent une importante variation de toutes les propri&eacute;t&eacute;s, allant de la croissance et la morphologie de la tumeur par le biais de la densit&eacute; de cellules tumorales dans le sang et la formation et la croissance des m&eacute;tastases. M&eacute;thodes capables de la visualisation directe et l&#39;analyse du comportement des cellules tumorales &agrave; cellule unique r&eacute;solution in vivo sont devenues cruciales pour faire avancer la compr&eacute;hension des m&eacute;canismes de m&eacute;tastases, la d&eacute;finition du microenvironnement et les marqueurs associ&eacute;s &agrave; la fois. Cet article traite de l&#39;utilisation d&#39;une imagerie multiphoton de tumeurs (sp&eacute;cifiquement les tumeurs du sein chez les souris) in vivo.

Une imagerie multiphoton de tumeurs in vivo.

Analyse der einzelnen Schritte bei der Metastasierung ist entscheidend, wenn Erkenntnisse auf molekularer Ebene sind mit der Zellbiologie von Krebs verkn&uuml;pft werden. Eine technische H&uuml;rde zur Erreichung der Analysis der einzelnen Schritte der Metastasierung ist die Tatsache, dass auf grober Ebene Tumoren in Tiermodellen und Patienten heterogen sind. Menschliche Prim&auml;rtumoren zeigen umfangreiche Variation in alle Eigenschaften reicht von Wachstum und Morphologie des Tumors bis Dichte von Tumor-Zellen im Blut und Bildung und Wachstum von Metastasen. Methoden der direkten Visualisierung und Analyse von Tumor-Zellen Verhalten bei einzelligen Aufl&ouml;sung in-vivo sind entscheidend f&ouml;rdert das Verst&auml;ndnis der Mechanismen der Metastasierung, die Definition der Untersuchungsverfahren und die Marker mit Bezug zu beiden geworden. Dieser Artikel beschreibt die Verwendung von hochaufl&ouml;senden multiphoton Bildgebung Tumoren (insbesondere Brusttumoren bei M&auml;usen) in-vivo.

Hochaufl&ouml;sende multiphoton Bildgebung Tumoren in vivo.

Analisi dei singoli passaggi in metastasi sono cruciale se intuizioni a livello molecolare sono collegate per la biologia delle cellule di cancro. Un ostacolo tecnico per realizzare l&#39;analisi dei singoli passi di metastasi &egrave; il fatto che, a livello lordo, i tumori sono eterogenei in modelli animali e pazienti. Tumori primari umani mostrano variazioni estese in tutte le propriet&agrave; che vanno dalla crescita e morfologia del tumore attraverso la densit&agrave; delle cellule tumorali nel sangue e la formazione e la crescita delle metastasi. Metodi in grado della visualizzazione diretta e l&#39;analisi del comportamento della cellula tumorale a cella singola risoluzione in vivo sono diventate cruciale nel promuovere la comprensione dei meccanismi della metastasi, la definizione del microambiente e gli indicatori relativi ad entrambi. Questo articolo discute l&#39;uso di alta risoluzione multiphoton imaging dei tumori (in particolare tumori al seno nei topi) in vivo.

Ad alta risoluzione multiphoton imaging dei tumori in vivo.

&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x306F;&#x5206;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x304C;&#x3093;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x306A;&#x30CF;&#x30FC;&#x30C9;&#x30EB;&#x306F;&#x7DCF;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x7570;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x816B;&#x760D;&#x306F;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x8840;&#x6DB2;&#x3001;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x304B;&#x3089;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x5358;&#x4E00;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6; in vivo &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x6319;&#x52D5;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x79FB;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x9032;&#x3081;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306E;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x816B;&#x760D; (&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x4E73;&#x817A;&#x816B;&#x760D;) in vivo &#x3067;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; multiphoton &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

An&aacute;lisis de los pasos individuales en met&aacute;stasis es crucial si ideas a nivel molecular son vinculados a la biolog&iacute;a de la c&eacute;lula de c&aacute;ncer. Un obst&aacute;culo t&eacute;cnico para lograr el an&aacute;lisis de los pasos individuales de met&aacute;stasis es el hecho de que, en el nivel burdo, los tumores son heterog&eacute;neos en modelos animales y pacientes. Tumores primarios humanos muestran variaci&oacute;n amplia en todas las propiedades que van desde el crecimiento y la morfolog&iacute;a del tumor a trav&eacute;s de la densidad de c&eacute;lulas tumorales en la sangre y la formaci&oacute;n y el crecimiento de met&aacute;stasis. M&eacute;todos capaces de la visualizaci&oacute;n directa y el an&aacute;lisis del comportamiento de la c&eacute;lula del tumor en unicelulares resoluci&oacute;n in vivo se han convertido en cruciales para avanzar en la comprensi&oacute;n de los mecanismos de met&aacute;stasis, la definici&oacute;n del microambiente y los marcadores relacionados con ambos. Este art&iacute;culo aborda el uso de alta resoluci&oacute;n imagen multifot&oacute;n de tumores (espec&iacute;ficamente tumores de mama en ratones) en vivo.

Proyecci&oacute;n multifot&oacute;n alta resoluci&oacute;n de imagen de tumores in vivo.

&#x5982;&#x679C;&#x8981;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x7684;&#x764C;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x5206;&#x5B50;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x89C1;&#x89E3;&#xFF0C;&#x8F6C;&#x79FB;&#x4E2D;&#x7684;&#x5404;&#x4E2A;&#x6B65;&#x9AA4;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x5B9E;&#x73B0;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x5404;&#x6B65;&#x9AA4;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x6280;&#x672F;&#x969C;&#x788D;&#x662F;&#x5728;&#x6BDB;&#x4E00;&#x7EA7;&#xFF0C;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x5F02;&#x7C7B;&#x52A8;&#x7269;&#x6A21;&#x578B;&#x4E0E;&#x60A3;&#x8005;&#x7684;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x3002;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x80BF;&#x7624;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x53D8;&#x5F02;&#x5C5E;&#x6027;&#x4E2D;&#x663E;&#x793A;&#x6240;&#x6709;&#x901A;&#x8FC7;&#x8840;&#x6DB2;&#x548C;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x751F;&#x957F;&#x8F6C;&#x79FB;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x4ECE;&#x751F;&#x957F;&#x548C;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x3002;&#x65B9;&#x6CD5;&#x80FD;&#x591F;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5355;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x51B3;&#x8BAE;&#x7684;&#x884C;&#x4E3A;&#x5DF2;&#x7ECF;&#x6210;&#x4E3A;&#x5173;&#x952E;&#x5728;&#x63A8;&#x8FDB;&#x8F6C;&#x79FB;&#x3001; &#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x5B9A;&#x4E49;&#x548C;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x4F53;&#x5185;&#x80BF;&#x7624;&#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x6210;&#x50CF;&#x5728;&#x8FD9;&#x65B9;&#x9762;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B9D;&#x8D35;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x5438;&#x5F15;&#x5230;&#x8840;&#x7BA1;&#xFF0C;&#x4F53;&#x5185;&#x5165;&#x4FB5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x88AB;&#x4E3A;&#x4E86;&#x5206;&#x6790;&#x54EA;&#x4E9B;&#x56E0;&#x7D20;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x523A;&#x6FC0;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FB5;&#x5165;&#x8840;&#x7BA1;&#x3002;&#x6B64;&#x534F;&#x8BAE;&#x8BF4;&#x660E;&#x51C6;&#x5907;&#x548C;&#x5904;&#x7406;&#x96C6;&#x5408;&#x9488;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x3002;33 &#x8BA1;&#x9488;&#x4E00;&#x5957;&#x7528;&#x4E8E;&#x521B;&#x5EFA;&#x6CE8;&#x5165;&#x80BF;&#x7624;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FDE;&#x63A5;&#x5230;&#x5FAE;&#x64CD;&#x4F5C;&#x673A;&#x5668;&#x4EBA;&#x7279;&#x522B;&#x4E3E;&#x884C;&#x8BBE;&#x5907;&#x7A33;&#x5B9A;&#x9488;&#x804C;&#x4F4D;&#x671F;&#x95F4;&#x548C;&#x4E4B;&#x540E;&#x63D2;&#x5165;&#x5230;&#x9EBB;&#x9189;&#x52A8;&#x7269;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x6216;&#x4EE3;&#x7406;&#x9879;&#x8840;&#x7BA1;&#x3002;&#x9488;&#x6EE1; Matrigel &#x548C;&#x5404;&#x79CD;&#x751F;&#x957F;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x56E0;&#x7D20;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x5165;&#x4FB5;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;

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Analysis of the individual steps in metastasis is crucial if insights at the molecular level are to be linked to the cell biology of cancer. A technical hurdle to achieving the analysis of the individual steps of metastasis is the fact that, at the gross level, tumors are heterogeneous in both animal models and patients. Human primary tumors show extensive variation in all properties ranging from growth and morphology of the tumor through tumor-cell density in the blood and formation and growth of metastases. Methods capable of the direct visualization and analysis of tumor-cell behavior at single-cell resolution in vivo have become crucial in advancing the understanding of mechanisms of metastasis, the definition of microenvironment, and the markers related to both. High-resolution multiphoton imaging of tumors in vivo is a valuable tool in this regard. Because tumor cells have been found to be attracted to blood vessels, the in vivo invasion assay was developed to analyze which factors may stimulate invasion of these cells into the vessels. This protocol describes the preparation and handling of collection needles for the assay. A set of 33-gauge needles is used to create artificial or surrogate blood vessels that are injected into tumors, using a special holding device attached to a micromanipulator to stabilize the needle positions during and after insertion into the anesthetized animal. The needles are filled with Matrigel and various growth factors to determine which of these factors may influence the invading tumor cells.

The in vivo invasion assay: preparation and handling of collection needles.

Analyse des diff&eacute;rentes &eacute;tapes &agrave; la m&eacute;tastase est crucial si aper&ccedil;us au niveau mol&eacute;culaire sont li&eacute;es &agrave; la biologie de cellules de cancer. Un obstacle technique &agrave; la r&eacute;alisation de l&#39;analyse des diff&eacute;rentes &eacute;tapes de la m&eacute;tastase est le fait que, au niveau brut, les tumeurs sont h&eacute;t&eacute;rog&egrave;nes dans les mod&egrave;les animaux et les patients. Les tumeurs primaires humaines montrent une importante variation de toutes les propri&eacute;t&eacute;s, allant de la croissance et la morphologie de la tumeur par le biais de la densit&eacute; de cellules tumorales dans le sang et la formation et la croissance des m&eacute;tastases. M&eacute;thodes capables de la visualisation directe et l&#39;analyse du comportement des cellules tumorales &agrave; cellule unique r&eacute;solution in vivo sont devenues cruciales pour faire avancer la compr&eacute;hension des m&eacute;canismes de m&eacute;tastases, la d&eacute;finition du microenvironnement et les marqueurs associ&eacute;s &agrave; la fois. Une imagerie multiphoton de tumeurs in vivo est un outil pr&eacute;cieux &agrave; cet &eacute;gard. Parce que les cellules tumorales ont &eacute;t&eacute; trouv&eacute;s &agrave; &ecirc;tre attir&eacute;s par les vaisseaux sanguins, l&#39;essai in vivo d&#39;invasion a &eacute;t&eacute; d&eacute;velopp&eacute; pour analyser les facteurs qui peuvent stimuler l&#39;invasion de ces cellules dans les vaisseaux. Ce protocole d&eacute;crit la pr&eacute;paration et la manipulation des aiguilles de pr&eacute;l&egrave;vement pour le dosage. Un ensemble d&#39;aiguilles de calibre 33 sert &agrave; cr&eacute;er des vaisseaux sanguins artificiels ou de substitution qui sont inject&eacute;es dans les tumeurs, &agrave; l&#39;aide d&#39;un dispositif de maintien sp&eacute;cial attach&eacute; &agrave; un micromanipulateur pour stabiliser les positions de l&#39;aiguille pendant et apr&egrave;s l&#39;insertion dans l&#39;animal anesth&eacute;si&eacute;. Les aiguilles sont remplis de Matrigel et divers facteurs de croissance afin de d&eacute;terminer lequel de ces facteurs peuvent influer sur l&#39;invasion des cellules tumorales.

L&#39;essai in vivo d&#39;invasion : pr&eacute;paration et manipulation des aiguilles de pr&eacute;l&egrave;vement.

Analyse der einzelnen Schritte bei der Metastasierung ist entscheidend, wenn Erkenntnisse auf molekularer Ebene sind mit der Zellbiologie von Krebs verkn&uuml;pft werden. Eine technische H&uuml;rde zur Erreichung der Analysis der einzelnen Schritte der Metastasierung ist die Tatsache, dass auf grober Ebene Tumoren in Tiermodellen und Patienten heterogen sind. Menschliche Prim&auml;rtumoren zeigen umfangreiche Variation in alle Eigenschaften reicht von Wachstum und Morphologie des Tumors bis Dichte von Tumor-Zellen im Blut und Bildung und Wachstum von Metastasen. Methoden der direkten Visualisierung und Analyse von Tumor-Zellen Verhalten bei einzelligen Aufl&ouml;sung in-vivo sind entscheidend f&ouml;rdert das Verst&auml;ndnis der Mechanismen der Metastasierung, die Definition der Untersuchungsverfahren und die Marker mit Bezug zu beiden geworden. Hochaufl&ouml;sende multiphoton Bildgebung Tumoren in vivo ist ein wertvolles Instrument in dieser Hinsicht. Da Tumorzellen festgestellt wurde, dass Blutgef&auml;&szlig;e angezogen werden, wurde der Einmarsch in-vivo-Test entwickelt, um analysieren, welche Faktoren diese Zellen Eindringen in die Gef&auml;&szlig;e stimulieren k&ouml;nnen. Dieses Protokoll beschreibt die Vorbereitung und Abwicklung von Sammlung Nadeln f&uuml;r die Probe. Eine Reihe von 33-Gauge Nadeln wird zum k&uuml;nstlichen oder Ersatz Blutgef&auml;&szlig;e zu erstellen, die in Tumoren, verwenden eine spezielle Halterung mit einem Mikromanipulator verbunden zur Stabilisierung der Nadelpositionen w&auml;hrend und nach dem Einlegen in das narkotisierten Tier injiziert werden. Die Nadeln sind voller Matrigel und verschiedene Wachstumsfaktoren, um zu bestimmen, welche dieser Faktoren die eindringenden Tumorzellen beeinflussen kann.

Der Einmarsch in-vivo-Test: Vorbereitung und Handhabung der Sammlung Nadeln.

Analisi dei singoli passaggi in metastasi sono cruciale se intuizioni a livello molecolare sono collegate per la biologia delle cellule di cancro. Un ostacolo tecnico per realizzare l&#39;analisi dei singoli passi di metastasi &egrave; il fatto che, a livello lordo, i tumori sono eterogenei in modelli animali e pazienti. Tumori primari umani mostrano variazioni estese in tutte le propriet&agrave; che vanno dalla crescita e morfologia del tumore attraverso la densit&agrave; delle cellule tumorali nel sangue e la formazione e la crescita delle metastasi. Metodi in grado della visualizzazione diretta e l&#39;analisi del comportamento della cellula tumorale a cella singola risoluzione in vivo sono diventate cruciale nel promuovere la comprensione dei meccanismi della metastasi, la definizione del microambiente e gli indicatori relativi ad entrambi. Ad alta risoluzione multiphoton imaging dei tumori in vivo &egrave; uno strumento prezioso in tal senso. Perch&eacute; le cellule tumorali sono state trovate per essere attratti da vasi sanguigni, il dosaggio di invasione in vivo &egrave; stato sviluppato per analizzare quali fattori possono stimolare l&#39;invasione di queste cellule nei vasi. Questo protocollo descrive la preparazione e la manipolazione di aghi per il dosaggio. Un set di aghi gauge 33 viene utilizzato per creare vasi sanguigni artificiali o surrogati che vengono iniettati in tumori, utilizzando un dispositivo speciale azienda associato ad un micromanipolatore a stabilizzare le posizioni dell&#39;ago durante e dopo l&#39;inserimento nell&#39;animale anestetizzato. Gli aghi sono pieni di Matrigel e vari fattori di crescita per determinare quale di questi fattori possono influenzare le cellule tumorali invasore.

Il dosaggio di invasione in vivo: preparazione e la manipolazione di aghi.

&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x306F;&#x5206;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x304C;&#x3093;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x500B;&#x3005; &#x306E;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6280;&#x8853;&#x7684;&#x306A;&#x30CF;&#x30FC;&#x30C9;&#x30EB;&#x306F;&#x7DCF;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x52D5;&#x7269;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x7570;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4E8B;&#x5B9F;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x4E00;&#x6B21;&#x816B;&#x760D;&#x306F;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x8840;&#x6DB2;&#x3001;&#x5F62;&#x6210;&#x3001;&#x8EE2;&#x79FB;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x6210;&#x9577;&#x3068;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x304B;&#x3089;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3068;&#x5358;&#x4E00;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6; in vivo &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x6319;&#x52D5;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306F;&#x3001;&#x8EE2;&#x79FB;&#x3001;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306B;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x3092;&#x9032;&#x3081;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x3068;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306E;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x816B;&#x760D;&#x306E;&#x751F;&#x4F53;&#x5185;&#x3067;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x70B9;&#x3067;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x7BA1;&#x306B;&#x9B45;&#x4E86;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;in vivo &#x3067;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3069;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x304C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8840;&#x7BA1;&#x4FB5;&#x5165;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6E96;&#x5099;&#x3068;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x91DD;&#x8A66;&#x91D1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;33 &#x30B2;&#x30FC;&#x30B8;&#x91DD;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;&#x4EBA;&#x5DE5;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30B5;&#x30ED;&#x30B2;&#x30FC;&#x30C8;&#x4E2D;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x9EBB;&#x9154;&#x4E0B;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x3078;&#x306E;&#x633F;&#x5165;&#x5F8C;&#x306B;&#x91DD;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30CB;&#x30D4;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7279;&#x5225;&#x306A;&#x4FDD;&#x6301;&#x88C5;&#x7F6E;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x816B;&#x760D;&#x306B;&#x6CE8;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x8840;&#x7BA1;&#x306E;&#x4F5C;&#x6210;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91DD;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8981;&#x56E0;&#x306F;&#x3001;&#x4FB5;&#x7565;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30B2;&#x30EB;&#x3068;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x6210;&#x9577;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x6E80;&#x3061;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

In vivo &#x3067;&#x306E;&#x6D78;&#x6F64;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;: &#x4F5C;&#x88FD;&#x3068;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x91DD;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x6271;&#x3044;&#x3002;

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In vivo &#xCE68;&#xACF5; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;: &#xC900;&#xBE44; &#xBC0F; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158; &#xBC14;&#xB298;&#xC758; &#xCC98;&#xB9AC;.

An&aacute;lisis de los pasos individuales en met&aacute;stasis es crucial si ideas a nivel molecular son vinculados a la biolog&iacute;a de la c&eacute;lula de c&aacute;ncer. Un obst&aacute;culo t&eacute;cnico para lograr el an&aacute;lisis de los pasos individuales de met&aacute;stasis es el hecho de que, en el nivel burdo, los tumores son heterog&eacute;neos en modelos animales y pacientes. Tumores primarios humanos muestran variaci&oacute;n amplia en todas las propiedades que van desde el crecimiento y la morfolog&iacute;a del tumor a trav&eacute;s de la densidad de c&eacute;lulas tumorales en la sangre y la formaci&oacute;n y el crecimiento de met&aacute;stasis. M&eacute;todos capaces de la visualizaci&oacute;n directa y el an&aacute;lisis del comportamiento de la c&eacute;lula del tumor en unicelulares resoluci&oacute;n in vivo se han convertido en cruciales para avanzar en la comprensi&oacute;n de los mecanismos de met&aacute;stasis, la definici&oacute;n del microambiente y los marcadores relacionados con ambos. Alta resoluci&oacute;n multifot&oacute;n proyecci&oacute;n de imagen de tumores in vivo es una herramienta valiosa en este sentido. Porque las c&eacute;lulas del tumor se han encontrado para ser atra&iacute;dos a los vasos sangu&iacute;neos, el ensayo in vivo de la invasi&oacute;n fue desarrollado para analizar los factores que pueden estimular la invasi&oacute;n de estas c&eacute;lulas en los vasos. Este protocolo describe la preparaci&oacute;n y manejo de esteriles para el ensayo. Un conjunto de agujas de calibre 33 se utiliza para crear vasos de sangre artificiales o alternativos que se inyectan en tumores, utilizando un dispositivo de sujeci&oacute;n especial conectado a un micromanipulador para estabilizar las posiciones de la aguja durante y despu&eacute;s de la inserci&oacute;n en el animal anestesiado. Las agujas se llenan con Matrigel y varios factores de crecimiento para determinar cu&aacute;l de estos factores pueden influir en las c&eacute;lulas del tumor invasor.

El ensayo in vivo de la invasi&oacute;n: preparaci&oacute;n y manejo de esteriles.

Niche construction concept was originally defined in evolutionary biology as the continuous interplay between natural selection via environmental conditions and the modification of these conditions by the organism itself. Processes unraveling during cancer metastasis include construction of niches, which cancer cells use towards more efficient survival, transport into new environments and preparation of the remote sites for their arrival. Many elegant experiments were done lately illustrating, for example, the premetastatic niche construction, but there is practically no mathematical modeling done which would apply the  framework. To create models useful for understanding niche construction role in cancer progression, we argue that a) genetic, b) phenotypic and c) ecological levels are to be included. While the model proposed here is phenomenological in its current form, it can be converted into a predictive outcome model via experimental measurement of the model parameters. Here we give an overview of an experimentally formulated problem in cancer metastasis and propose how niche construction framework can be utilized and broadened to model it. Other life science disciplines, such as host-parasite coevolution, may also benefit from niche construction framework adaptation, to satisfy growing need for theoretical considerations of data collected by experimental biology.

ArticleTotal : 2	Year
Publication title	2009
Publication title	2021

Article	Year
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