A High-content Imaging Workflow to Study Grb2 Signaling Complexes by Expression Cloning

Signal  transduction by growth factor receptors is essential for cells to maintain  proliferation and differentiation and requires tight control. Signal  ...

University College London

&#xB9CE;&#xC740; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; subpopulation &#xC140; (&#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC; &#xC778;&#xAD6C; [SP])&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558; Hoechst 33342 &#xC218;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. ATP &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCE74;&#xC138;&#xD2B8; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; Bcrp1 (Abcg2)&#xC640; Mdr1a/1b (Abcb1a/1b)&#xC774;&#xC774; &#xD615;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. SP &#xD615;&#xC5D0;&#xC774; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC758; &#xCC38;&#xC5EC;&#xB97C; &#xB354; &#xD0D0;&#xAD6C; &#xD558; &#xC6B0;&#xB9AC; Bcrp1/Mdr1a/1b &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC950;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xACE8; &#xC218;&#xC640; &#xC720;&#xC120; SP&#xC5D0; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;&#xC5D0; bcrp1&#xB294; &#xAC70;&#xC758; &#xB3C5;&#xC810;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACE8; &#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; SP, &#xACB0;&#xD569;&#xB41C; &#xBD80;&#xC7AC; sp. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, Mdr1a/1b-/-&#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xACE8; &#xC218;&#xC758; &#xAC70;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC190;&#xC2E4; &#xADC0;&#xCC29;&#xB418; &#xC720;&#xC120; &#xC120; SP &#xD615;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xB450; &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784; &#xC790;&#xC8FC; &#xD45C;&#xC2DC; Bcrp1 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; Ko143, Bcrp1 &#xACE8; &#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; Mdr1a/1b&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC0C1; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB418;&#xB3CC;&#xB9B4; &#xC218;&#xB294; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB41C; SP.

&#xC720;&#xC120; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xC950;&#xC758; &#xACE8; &#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE21;&#xBA74; &#xC778;&#xAD6C; phenotype ABC &#xC804;&#xC1A1;&#xAE30; Bcrp1 &#xBC0F; Mdr1a/1b&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC;.

La capacit&agrave; delle cellule di esportare Hoechst 33342 pu&ograve; essere utilizzata per identificare una sottopopolazione di cellule (popolazione di lato [SP]) con le caratteristiche delle cellule staminali in molti tessuti. Trasportatori ATP-binding cassette Bcrp1 (Abcg2) e Mdr1a/1b (Abcb1a/1b) sono stati implicati come responsabili di questo fenotipo. Per esplorare ulteriormente il coinvolgimento di questi trasportatori nel fenotipo SP, abbiamo generato topi knockout triple Bcrp1/Mdr1a/1b e studiato l&#39;effetto della loro assenza sulla SP nel midollo osseo e ghiandola mammaria. Considerando che nel midollo osseo che bcrp1 era quasi esclusivamente responsabile per il SP, entrambi i trasportatori hanno contribuiti per il fenotipo SP nella ghiandola mammaria, dove loro assenza combinata ha provocato una perdita quasi completa della SP. interessante, del midollo osseo di Mdr1a/1b-/-mice frequentemente visualizzata un&#39;elevata SP, che era reversibile con l&#39;inibitore di Bcrp1 Ko143, suggerendo che Bcrp1 pu&ograve; compensare la perdita di Mdr1a/1b nel midollo osseo.

Contributo dei trasportatori ABC Bcrp1 e Mdr1a/1b per il fenotipo della popolazione di lato nella ghiandola mammaria e del midollo osseo di topi.

&#x30D8;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8; 33342 &#x30A8;&#x30AF;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x7D30;&#x80DE; &#xFF08;&#x5074;&#x4EBA;&#x53E3; [SP]&#xFF09; &#x306E;&#x4E9C;&#x7A2E;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;ATP &#x7D50;&#x5408;&#x30AB;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; Bcrp1 (Abcg2&#xFF09; &#x3068; Mdr1a/1b (Abcb1a/1 b&#xFF09; &#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;SP &#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3092;&#x66F4;&#x306B;&#x63A2;&#x691C;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; 1 b Bcrp1/Mdr1a/&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EB; &#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8; &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3001;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x53CA;&#x3073;&#x4E73;&#x817A; SP &#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x4E0D;&#x5728;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x3067; Bcrp1 &#x3092;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5C02;&#x3089;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x8CAC;&#x4EFB;&#x306E; SP &#x306E; SP &#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3069;&#x3053;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x4E0D;&#x5728;&#x306E; SP &#x9762;&#x767D;&#x304F;&#x3001;Mdr1a/1b/&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x306E;&#x307B;&#x307C;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x640D;&#x5931;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3057;&#x305F;&#x4E73;&#x817A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x8CA2;&#x732E;&#x3057;&#x3066;&#x4E21;&#x65B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x983B;&#x7E41;&#x306B; Bcrp1 Mdr1a/1b &#x9AA8;&#x9AC4;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x88DC;&#x511F;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506; Bcrp1 &#x963B;&#x5BB3;&#x5264; Ko143&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x9AD8;&#x67B6;&#x306E; SP &#x8868;&#x793A;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3002;

ABC &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC; Bcrp1 &#x3068; Mdr1a/1b &#x5074;&#x4EBA;&#x53E3;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x4E73;&#x817A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x3078;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x3002;

&#x51FA;&#x53E3; Hoechst 33342 &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x6807;&#x8BC6;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C; &#xFF08;&#x4FA7;&#x4EBA;&#x53E3; [SP]&#xFF09; &#x4E0E;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7279;&#x6027;&#x3002;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x7ED3;&#x5408;&#x76D2;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D; Bcrp1 (Abcg2&#xFF09; &#x548C; Mdr1a/1b (Abcb1a/1b) &#x6709;&#x7275;&#x8FDE;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8D1F;&#x8D23;&#x6B64;&#x8868;&#x578B;&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x63A2;&#x8BA8;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x86CB;&#x767D;&#x5728; SP &#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x53C2;&#x4E0E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x751F;&#x6210;&#x7684; Bcrp1/Mdr1a/1b &#x4E09;&#x91CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7814;&#x7A76; SP &#x5728;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x548C;&#x4E73;&#x817A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x5BF9;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x800C;&#x9AA8;&#x9AD3; Bcrp1 &#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x662F;&#x5728;&#x8D1F;&#x8D23;&#x7684; SP&#xFF0C;SP &#x578B;&#x4E73;&#x817A;&#xFF0C;&#x90A3;&#x91CC;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x8054;&#x5408;&#x7684;&#x7F3A;&#x5E2D;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7684;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684; sp&#x3002; &#x662F;&#xFF0C;Mdr1a/1b-/-&#x5C0F;&#x9F20;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x51E0;&#x4E4E;&#x5B8C;&#x5168;&#x4E27;&#x5931;&#x4E86;&#x8D21;&#x732E;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8FD0;&#x8F93;&#x5546;&#x7ECF;&#x5E38;&#x663E;&#x793A;&#x9AD8;&#x67B6;&#x7684; SP&#xFF0C;&#x662F;&#x53EF;&#x9006; Bcrp1 &#x6291;&#x5236;&#x5242; Ko143&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; Bcrp1 &#x53EF;&#x4EE5;&#x5F25;&#x8865; Mdr1a/1b &#x7684;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x4E2D;&#x7684;&#x635F;&#x5931;&#x3002;

ABC &#x8F6C;&#x8FD0;&#x5230;&#x4FA7;&#x4E73;&#x817A;&#x548C;&#x5C0F;&#x9F20;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x4EBA;&#x53E3;&#x8868;&#x578B; Bcrp1 &#x548C; Mdr1a/1b &#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;

The ability of cells to export Hoechst 33342 can be used to identify a subpopulation of cells (side population [SP]) with characteristics of stem cells in many tissues. The ATP-binding cassette transporters Bcrp1 (Abcg2) and Mdr1a/1b (Abcb1a/1b) have been implicated as being responsible for this phenotype. To further explore the involvement of these transporters in the SP phenotype, we have generated Bcrp1/Mdr1a/1b triple knockout mice and studied the effect of their absence on the SP in bone marrow and mammary gland. Whereas in bone marrow Bcrp1 was almost exclusively responsible for the SP, both transporters contributed to the SP phenotype in the mammary gland, where their combined absence resulted in a nearly complete loss of SP. Interestingly, bone marrow of Mdr1a/1b-/- mice frequently displayed an elevated SP, which was reversible by the Bcrp1 inhibitor Ko143, suggesting that Bcrp1 can compensate for the loss of Mdr1a/1b in bone marrow.

Contribution of the ABC transporters Bcrp1 and Mdr1a/1b to the side population phenotype in mammary gland and bone marrow of mice.

La capacit&eacute; des cellules &agrave; exporter Hoechst 33342 peut servir &agrave; identifier une sous-population de cellules (population de c&ocirc;t&eacute; [SP]) avec les caract&eacute;ristiques des cellules souches dans de nombreux tissus. Les transporteurs de l&#39;ATP-binding cassette Bcrp1 (Abcg2) et Mdr1a/1 b (Abcb1a/1 b) ont &eacute;t&eacute; mis en cause comme &eacute;tant responsable de ce ph&eacute;notype. Pour explorer davantage la participation de ces transporteurs dans le ph&eacute;notype de la SP, nous avons produit des souris knock-out triple Bcrp1/Mdr1a/1 b et a &eacute;tudi&eacute; l&#39;effet de leur absence sur la SP dans la moelle osseuse et de la glande mammaire. Consid&eacute;rant que dans la moelle osseuse que bcrp1 &eacute;tait presque exclusivement responsable de la SP, les deux transporteurs ont contribu&eacute; au ph&eacute;notype de la SP dans la glande mammaire, o&ugrave; leur absence combin&eacute;e a entra&icirc;n&eacute; une perte presque totale de SP fait int&eacute;ressant, la moelle osseuse de Mdr1a/1 b-/-souris affich&eacute;e fr&eacute;quemment un SP &eacute;lev&eacute;e, ce qui est r&eacute;versible par l&#39;inhibiteur de la Bcrp1 Ko143, ce qui sugg&egrave;re que les Bcrp1 peuvent compenser pour la perte de Mdr1a/1 b dans la moelle osseuse.

Contribution des transporteurs ABC Bcrp1 et Mdr1a/1 b pour le ph&eacute;notype de la population de c&ocirc;t&eacute; dans la glande mammaire et de la moelle osseuse de souris.

Die F&auml;higkeit der Zellen, Hoechst 33342 exportieren kann verwendet werden, eine Subpopulation von Zellen (Seite Bev&ouml;lkerung [SP]) zu identifizieren, mit Eigenschaften von Stammzellen in vielen Geweben. ATP verbindliche Kassette Transporter Bcrp1 (Abcg2) und Mdr1a/1b (Abcb1a/1b) haben als verantwortlich f&uuml;r diese Ph&auml;notyp verwickelt worden. Wir haben um die Einbeziehung dieser Transporter in der SP-Ph&auml;notyp weiter zu erforschen, Bcrp1/Mdr1a/1b-dreifacher k.o.-M&auml;use generiert und untersucht die Auswirkungen von ihrer Abwesenheit auf der SP im Knochenmark und Brustdr&uuml;se. W&auml;hrend im Knochenmark, die Bcrp1 fast ausschlie&szlig;lich war verantwortlich f&uuml;r die SP, beide Transporter trugen zu der SP-Ph&auml;notyp in der Brustdr&uuml;se, wo ihre kombinierten Abwesenheit ein fast vollst&auml;ndiger Verlust der SP. Interessanterweise Knochenmark von Mdr1a/1b-/-M&auml;usen f&uuml;hrten h&auml;ufig einen erh&ouml;hten SP, die war reversibel durch den Bcrp1 wird Ko143 angezeigt, was darauf hindeutet, dass Bcrp1 den Verlust der Mdr1a/1b im Knochenmark ausgleichen kann.

Beitrag der ABC-Transporter Bcrp1 und Mdr1a/1b auf der Seite Bev&ouml;lkerung Ph&auml;notyp in Brustdr&uuml;se und Knochenmark von M&auml;usen.

La capacidad de las c&eacute;lulas para exportar Hoechst 33342 puede utilizarse para identificar una subpoblaci&oacute;n de c&eacute;lulas (poblaci&oacute;n de lado [SP]) con caracter&iacute;sticas de c&eacute;lulas madre en muchos tejidos. Las ATP-binding cassette transporters Bcrp1 (Abcg2) y Mdr1a/1b (Abcb1a/1b) han sido implicados como responsables de este fenotipo. Para profundizar en la implicaci&oacute;n de estos transportadores en el fenotipo de SP, hemos generado ratones knockout triple de Bcrp1/Mdr1a/1b y estudi&oacute; los efectos de su ausencia en la SP en la m&eacute;dula &oacute;sea y de la gl&aacute;ndula mamaria. Mientras que en m&eacute;dula &oacute;sea que bcrp1 fue casi exclusivamente responsable de la SP, ambos transportistas contribuidos al fenotipo SP en la gl&aacute;ndula mamaria, donde su ausencia combinada result&oacute; en una p&eacute;rdida casi completa de SP. curiosamente, m&eacute;dula de Mdr1a/1b-/-ratones con frecuencia muestra un elevado SP, que era reversible por el inhibidor de la Bcrp1 Ko143, sugiriendo que Bcrp1 puede compensar la p&eacute;rdida de Mdr1a/1b en m&eacute;dula &oacute;sea.

Contribuci&oacute;n de los transportadores ABC Bcrp1 y Mdr1a/1b para el fenotipo de la poblaci&oacute;n de lado en la gl&aacute;ndula mamaria y la m&eacute;dula &oacute;sea de ratones.

&#x521D;&#x7EA7;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53EF;&#x4EE5;&#x57F9;&#x517B;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x4F46;&#x96BE; nt-3 &#x4F7F;&#x7528;&#x5E38;&#x89C4;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x8981;&#x89E3;&#x51B3;&#x6B64;&#x95EE;&#x9898;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x6709;&#x6548;&#x548C;&#x53EF;&#x91CD;&#x73B0;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x4E3B;&#x65E0;&#x91CD;&#x5927;&#x5F71;&#x54CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5F62;&#x6001;&#x548C;&#x6D3B;&#x529B;&#x7684;&#x76AE;&#x8D28;&#x548C;&#x6D77;&#x9A6C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x5F00;&#x53D1;&#x4E86;&#x79F0;&#x4E3A; Cellaxess &#x4F0A;&#x83B1;&#x514B;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x7BA1;&#x7535;&#x7A7F;&#x5B54;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x662F;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x5206;&#x5316;&#x548C;&#x53D1;&#x80B2;&#xFF0C;&#x76F4;&#x63A5;&#x5728;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57F9;&#x517B;&#x677F;&#x4E2D;&#x7684;&#x4EFB;&#x4F55;&#x9636;&#x6BB5;&#x3002;&#x9057;&#x4F20;&#x6750;&#x6599;&#x662F;&#x4E00;&#x6B21;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x786C; transfect &#x539F;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x5C31;&#x662F;&#x8BF4;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x4EE5;&#x524D;&#x65E0;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x5165;&#x9057;&#x4F20;&#x64CD;&#x4F5C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x89C4;&#x6A21;&#x4E0A;&#x7814;&#x7A76;&#x57FA;&#x56E0;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x548C;&#x9AD8;&#x8D28;&#x91CF;&#x7B5B;&#x67E5;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x5230;&#x591A;&#x8FBE; 384 &#x539F;&#x4F4D;&#x6837;&#x54C1;&#x3002;

&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x4ECE;&#x5927;&#x9F20;&#x524D;&#x8111;&#x6709;&#x533A;&#x522B;&#x521D;&#x7EA7;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x8F6C;&#x67D3;&#x3002;

Primary neurons in culture are considered to be a highly relevant model in the study of neuronal development and activity. They can be cultivated and differentiated in vitro but are difficult to transfect using conventional methods. To address this problem, a capillary electroporation system called Cellaxess Elektra was developed for efficient and reproducible transfection of primary cortical and hippocampal neurons without significant impact on cell morphology and viability. The cells are transfected in any stage of differentiation and development, directly in cell culture plates. Genetic material is delivered in situ to as many as 384 samples at a time, which enables both high-throughput and high-quality screening for hard-to-transfect primary cells, meaning that gene function can be studied on a genome-wide scale in cells previously inaccessible to genetic manipulation.

High-throughput transfection of differentiated primary neurons from rat forebrain.

Les neurones en culture primaire sont consid&eacute;r&eacute;s comme un mod&egrave;le hautement pertinent dans l&#39;&eacute;tude du d&eacute;veloppement neuronal et d&#39;activit&eacute;. Ils peuvent &ecirc;tre cultiv&eacute;s et diff&eacute;renci&eacute;es in vitro mais sont difficiles &agrave; transfecter &agrave; l&#39;aide de m&eacute;thodes conventionnelles. Pour r&eacute;soudre ce probl&egrave;me, un syst&egrave;me capillaire &eacute;lectroporation appel&eacute; Cellaxess Elektra a &eacute;t&eacute; d&eacute;velopp&eacute; pour la transfection efficace et reproductible des primaires neurones corticaux et hippocampe sans impact significatif sur la morphologie cellulaire et la viabilit&eacute;. Les cellules transfected dans tous les stades de la diff&eacute;renciation et le d&eacute;veloppement, directement dans les plaques de culture cellulaire. Mat&eacute;riel g&eacute;n&eacute;tique est livr&eacute;e in situs pour autant 384 &eacute;chantillons &agrave; la fois, ce qui permet le criblage haut d&eacute;bit et de qualit&eacute; pour dur-&agrave;-transfecter les cellules primaires, ce qui signifie que la fonction du g&egrave;ne peut &ecirc;tre &eacute;tudi&eacute;e sur une &eacute;chelle de g&eacute;nome dans les cellules pr&eacute;c&eacute;demment inaccessibles aux manipulations g&eacute;n&eacute;tiques.

Haut d&eacute;bit transfection de diff&eacute;renci&eacute;e neurones primaires du cerveau de rat.

Prim&auml;re Neuronen in der Kultur gelten als ein h&ouml;chst relevante Modell in die Erforschung der neuronalen Entwicklung und Aktivit&auml;t. Sie k&ouml;nnen kultiviert werden und differenziert in-vitro-sind aber schwer zu bioaktiven mit konventionellen Methoden. Um dieses Problem zu beheben, wurde eine Kapillare Electroporation namens Cellaxess Elektra f&uuml;r effiziente und reproduzierbare Transfektion von prim&auml;ren kortikalen und hippocampal Neuronen ohne erhebliche Auswirkungen auf die Zellmorphologie und Lebensf&auml;higkeit entwickelt. Die Zellen sind in jedem Stadium der Differenzierung und Entwicklung, direkt in der Zelle-Zellkultur-Platten die transfected. Genetisches Material wird in-situ zu mehr als 384 Proben gleichzeitig ausgeliefert, die erm&ouml;glicht hohen Durchsatz und qualitativ hochwertige Screening f&uuml;r harte bioaktiven Prim&auml;rzellen, was bedeutet, dass auf einer genomweiten Skala in Zellen, die vorher unzug&auml;nglich f&uuml;r Genmanipulation Genfunktion untersucht werden kann.

Hochdurchsatz-Transfektion von differenzierten prim&auml;re Neuronen von Ratten Stirnhirn.

Neuroni primari nella cultura sono considerati un modello altamente rilevante nello studio dello sviluppo neuronale e attivit&agrave;. Pu&ograve; essere coltivate e differenziati in vitro, ma sono difficili a transfect utilizzando i metodi convenzionali. Per risolvere questo problema, &egrave; stato sviluppato un sistema di elettroporazione capillare chiamato Cellaxess Elektra per la transfezione efficiente e riproducibile dei neuroni corticali e hippocampal primari senza impatto significativo sulla morfologia cellulare e vitalit&agrave;. Le celle transfected in qualsiasi fase di differenziazione e di sviluppo, direttamente in piastre di coltura delle cellule. Materiale genetico &egrave; consegnato in situ per oltre 384 campioni in un momento, che permette lo screening ad alta velocit&agrave; e di alta qualit&agrave; per duro--transfect celle primarie, significa che la funzione del gene pu&ograve; essere studiato su una scala genome-wide in cellule precedentemente inaccessibili alla manipolazione genetica.

Transfezione di high-throughput di neuroni primari differenziati dal proencefalo ratto.

&#x4E00;&#x6B21;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x95A2;&#x9023;&#x6027;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x3068;&#x898B;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x683D;&#x57F9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3068;&#x751F;&#x4F53;&#x5916;&#x3067;&#x5206;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067; transfect &#x306B;&#x56F0;&#x96E3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x306E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x3068;&#x6D77;&#x99AC;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x3084;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x306A;&#x3057;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x304B;&#x3064;&#x518D;&#x73FE;&#x6027;&#x306E; transfection &#x306E;&#x305F;&#x3081; Cellaxess &#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30E9;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D4;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC; &#x30A8;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x304C;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x57F9;&#x990A;&#x76BF;&#x3067;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306E;&#x3042;&#x3089;&#x3086;&#x308B;&#x6BB5;&#x968E;&#x3067;&#x5C0E;&#x5165;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x7269;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x591A;&#x304F; 384 &#x3092;&#x305D;&#x306E;&#x5834;&#x3067;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306B;&#x9AD8;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x9AD8;&#x54C1;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081; transfect &#x30CF;&#x30FC;&#x30C9;&#x521D;&#x4EE3;&#x57F9;&#x990A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7D30;&#x80DE;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x64CD;&#x4F5C;&#x306B;&#x4EE5;&#x524D;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x304D;&#x306A;&#x3044;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x30EF;&#x30A4;&#x30C9;&#x306B;&#x5B66;&#x3076;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x4E00;&#x5EA6;&#x306B;&#x914D;&#x4FE1;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xBB38;&#xD654; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC2E0;&#xACBD; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xB828;&#xC131;&#xC774; &#xB192;&#xC740; &#xBAA8;&#xB378; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xACBD;&#xC791; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; transfect &#xC5B4;&#xB835;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; Cellaxess &#xC5D8;&#xB809;&#xD2B8;&#xB77C; &#xB77C;&#xACE0; &#xBAA8; &#xC138;&#xAD00; electroporation &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xC874;&#xC5D0; &#xD070; &#xC601;&#xD5A5; &#xC5C6;&#xC774; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; hippocampal &#xB274;&#xB7F0;&#xC758; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC7AC;&#xD604; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; transfection &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC640; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC30;&#xC591; &#xBC30;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xD398; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD558;&#xB4DC; transfect 1 &#xCC28; &#xC140;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAC8C;&#xB188; &#xB113;&#xC740; &#xADDC;&#xBAA8;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791;, &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBD80;&#xD558;&#xC2E4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC758;&#xBBF8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9;&#xACFC; &#xB192;&#xC740;-&#xD488;&#xC9C8; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xBA74; &#xD55C; &#xBC88;&#xC5D0; &#xB9CE;&#xC740; 384&#xB97C; &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC744; &#xC804;&#xB2EC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC950; &#xAC1C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xB41C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; transfection&#xB97C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9;.

Las neuronas primarias en cultura se consideran un modelo altamente relevante en el estudio del desarrollo neuronal y la actividad. Que pueden ser cultivados y diferenciadas in vitro pero son dif&iacute;ciles de transfectar usando m&eacute;todos convencionales. Para solucionar este problema, se desarroll&oacute; un sistema de electroporaci&oacute;n capilar llamado Cellaxess Elektra para transfecci&oacute;n eficiente y reproducible de neuronas corticales y hippocampal primarias sin impacto significativo sobre la morfolog&iacute;a celular y viabilidad. Las c&eacute;lulas son transfectadas en cualquier etapa de la diferenciaci&oacute;n y desarrollo, directamente en placas de cultivo de c&eacute;lulas. Material gen&eacute;tico se entrega in situ a unos 384 muestras a la vez, que permite la proyecci&oacute;n de alto rendimiento y de alta calidad para dif&iacute;cil-a-transfectar c&eacute;lulas primarias, lo que significa que la funci&oacute;n del gen puede estudiarse a escala de todo el genoma en c&eacute;lulas previamente inaccesibles a la manipulaci&oacute;n gen&eacute;tica.

Jamie Freeman

MRC LMCB

University College London

A High-content Imaging Workflow to Study Grb2 Signaling Complexes by Expression Cloning

Jamie Freeman

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University College London

A High-content Imaging Workflow to Study Grb2 Signaling Complexes by Expression Cloning

MRC LMCB