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Local Application of Drugs to Study Nicotinic Acetylcholine Receptor Function in Mouse Brain Slices

Tobacco use leads to numerous health problems, including cancer, heart disease, emphysema, and stroke. Addiction to cigarette smoking is a prevalent ...

Purdue University

Tolbutamide e gliclazide bloccano i canali KATP Kir 6.2/Sur1, causando la depolarizzazione della membrana e stimolando la secrezione di insulina nelle cellule beta del pancreas. Abbiamo esaminato la possibilit&agrave; di potenziare l&#39;azione di questi farmaci e il meccanismo che potrebbe spiegare l&#39;EPAC-selettiva cAMP 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM analogico. Secrezione di insulina, stimolata da 200 tolbutamide &mu;M e 20 &mu;M gliclazide, concentrazioni che avevano effetti equivalenti sul potenziale di membrana, &egrave; stati inibiti da thapsigargin (1 &mu;M) o il tipo L Ca2 + channel blocker nicardipina (2 &mu;M) e 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM a concentrazioni &amp;gt; 2 &mu;M nelle cellule INS-1 &egrave; stati potenziati. CA(2+) transitori stimolate da tolbutamide o gliclazide sono stati inibiti da thapsigargin o nicardipina e furono notevolmente potenziate da 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM a 5 &mu;M ma non 1&mu;M. Sia tolbutamide e gliclazide stimolato attivit&agrave; fosfolipasi C; Tuttavia, solo gliclazide ha fatto indipendentemente dalla sua attivit&agrave; presso i canali KATP, e questa attivit&agrave; &egrave; stata parzialmente inibita dalla tossina della pertosse. 8-pCPT-2&#39;-O-me-Camp-am da solo (5 &mu;M) non stimolare la secrezione di insulina, ma ha fatto aumentare in modo significativo la concentrazione intracellulare di Ca(2+), e questa attivit&agrave; &egrave; stata inibita da 25 &mu;M 2-aminoethoxydiphenylborate (2-APB) o la rimozione di Ca(2+) extracellulare. 8-pCPT-2&#39;-O-me-Camp-am potenziamento della secrezione dell&#39;insulina stimolata da tolbutamide era marcatamente inibito da 2-APB (25 &mu;M) e rafforzata da inibitore PKC Bisindolylmaleimide I (1 &mu;M). I nostri dati dimostrano che le azioni di tolbutamide e gliclazide sono fortemente potenziate da 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM, che gliclazide pu&ograve; stimolare l&#39;attivit&agrave; della fosfolipasi C tramite un meccanismo sensibile alla tossina pertosse parzialmente, e che 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM potenziamento dell&#39;azione di tolbutamide pu&ograve; comportare l&#39;attivazione di un afflusso di Ca(2+)-2-APB-sensitive.

Potenziamento dell&#39;azione Sulfonylurea da un Analog EPAC-selettiva cAMP nelle cellule INS-1: confronto di Tolbutamide e Gliclazide e un ruolo potenziale per l&#39;attivazione di un 2-APB-sensibili al Ca2 + afflusso EPAC.

&#x7532;&#x82EF;&#x78FA;&#x4E01;&#x8132;&#x3001; &#x683C;&#x5217;&#x9F50;&#x7279;&#x963B;&#x6B62; KATP &#x901A;&#x9053; Kir6.2/Sur1&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x819C;&#x53BB;&#x6781;&#x5316;&#x548C;&#x523A;&#x6FC0;&#x80F0;&#x817A; &beta; &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86; EPAC &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8425;&#x6A21;&#x62DF; 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x80FD;&#x591F;&#x4FC3;&#x8FDB;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x836F;&#x7269;&#x548C;&#x673A;&#x5236;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BF4;&#x660E;&#x5B83;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x3002;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x6CCC;&#x523A;&#x6FC0; 200 &mu; M &#x7532;&#x82EF;&#x78FA;&#x4E01;&#x8132;&#x548C;&#x683C;&#x5217;&#x9F50;&#x7279; 20 &mu; M&#xFF0C;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x76F8;&#x5F53;&#x5F71;&#x54CD;&#x819C;&#x7535;&#x4F4D;&#x3001; &#x6291;&#x5236; thapsigargin &#xFF08;1 &mu; M&#xFF09; &#x6216;&#x5C3C;&#x5361;&#x5730; L &#x578B; Ca2 + &#x901A;&#x9053;&#x963B;&#x6EDE;&#x5242;&#x5E73; &#xFF08;2 &mu; M&#xFF09;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x52A0;&#x8F7D;&#x9879; 1 &#x7EC6;&#x80DE;&#x6D53;&#x5EA6; &gt; 2 &mu; M 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x7ECF;&#x77AC;&#x53D8;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x7532;&#x82EF;&#x78FA;&#x4E01;&#x8132;&#x6216;&#x683C;&#x5217;&#x9F50;&#x7279;&#x963B;&#x788D;&#x4E86; thapsigargin &#x6216;&#x5C3C;&#x5361;&#x5730;&#x5E73;&#x4E0E;&#x88AB;&#x5927;&#x5927;&#x5F3A;&#x5316;&#x7684; 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x5728; 5 &mu; M &#x4F46;&#x4E0D;&#x662F; 1 &mu; m&#x3002;&#x7532;&#x82EF;&#x78FA;&#x4E01;&#x8132;&#x3001; &#x683C;&#x5217;&#x9F50;&#x7279;&#x523A;&#x6FC0;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; C &#x7684;&#x6D3B;&#x52A8; &#xFF1B;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x53EA;&#x6709;&#x683C;&#x5217;&#x9F50;&#x7279;&#x505A;&#x72EC;&#x7ACB; KATP &#x901A;&#x9053;&#xFF0C;&#x5728;&#x5176;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x6B64;&#x6D3B;&#x52A8;&#x90E8;&#x5206;&#x7531;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x6291;&#x5236;&#x3002;8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x5355; &#xFF08;5 &#x5FAE;&#x7C73;&#xFF09; &#x786E;&#x5B9E;&#x4E0D;&#x523A;&#x6FC0;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x6CCC;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E76;&#x672A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7ECF;&#x6D53;&#x5EA6;&#x5927;&#x5E45;&#x5EA6;&#x589E;&#x52A0;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x8FD9;&#x9879;&#x6D3B;&#x52A8;&#x6291;&#x5236; 25 &mu; M 2-aminoethoxydiphenylborate &#xFF08;2-&#x5EFA;&#x4E1A;) &#x6216;&#x80DE;&#x5916;&#x7ECF;&#x5207;&#x9664;&#x3002;8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x957F;&#x65F6;&#x7A0B;&#x589E;&#x5F3A;&#x80F0;&#x5C9B;&#x7D20;&#x5206;&#x6CCC;&#x523A;&#x6FC0;&#x7684;&#x7532;&#x82EF;&#x78FA;&#x4E01;&#x8132;&#x7684;&#x7531; 2-&#x5EFA;&#x4E1A; &#xFF08;25 &mu; M&#xFF09;&#xFF0C;&#x663E;&#x8457;&#x6291;&#x5236;&#x548C;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684; PKC &#x6291;&#x5236; Bisindolylmaleimide &#x6211; &#xFF08;1 &mu; M&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5F3A;&#x70C8;&#x5F3A;&#x5316;&#x7532;&#x82EF;&#x78FA;&#x4E01;&#x8132;&#x548C;&#x683C;&#x5217;&#x9F50;&#x7279;&#x7684;&#x884C;&#x52A8;&#x662F;&#x7531; 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM&#x3001; &#x683C;&#x5217;&#x9F50;&#x7279;&#x53EF;&#x4EE5;&#x523A;&#x6FC0;&#x78F7;&#x8102;&#x9176; C &#x6D3B;&#x52A8;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x654F;&#x611F;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E0E;&#x8BE5; 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x7684;&#x957F;&#x65F6;&#x7A0B;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684;&#x7532;&#x82EF;&#x78FA;&#x4E01;&#x8132;&#x884C;&#x52A8;&#x53EF;&#x80FD;&#x6D89;&#x53CA; 2 &#x5EFA;&#x4E1A;&#x654F;&#x611F;&#x7ECF;&#x6D8C;&#x5165;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;

&#x957F;&#x65F6;&#x7A0B;&#x589E;&#x5F3A;&#x7684; INS 1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D; EPAC &#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x8425;&#x6A21;&#x62DF;&#x7684;&#x78FA;&#x9170;&#x8132;&#x7C7B;&#x884C;&#x52A8;&#xFF1A; &#x6BD4;&#x8F83;&#x7684;&#x7532;&#x82EF;&#x78FA;&#x4E01;&#x8132;&#x548C;&#x683C;&#x5217;&#x9F50;&#x7279;&#x548C; 2-&#x5EFA;&#x4E1A;&#x654F;&#x611F;&#x6027; Ca2 + &#x5927;&#x91CF;&#x6D8C;&#x5165; EPAC &#x6FC0;&#x6D3B;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

Tolbutamide and gliclazide block the KATP channel Kir6.2/Sur1, causing membrane depolarization and stimulating insulin secretion in pancreatic beta cells. We examined the ability of the EPAC-selective cAMP analog 8-pCPT-2'-O-Me-cAMP-AM to potentiate the action of these drugs, and the mechanism that might account for it. Insulin secretion stimulated by both 200 Î¼M tolbutamide and 20 Î¼M gliclazide, concentrations that had equivalent effects on membrane potential, was inhibited by thapsigargin (1 Î¼M) or the L-type Ca2+ channel blocker nicardipine (2 Î¼M), and was potentiated by 8-pCPT-2'-O-Me-cAMP-AM at concentrations > 2 Î¼M in INS-1 cells. Ca(2+) transients stimulated by either tolbutamide or gliclazide were inhibited by thapsigargin or nicardipine and were significantly potentiated by 8-pCPT-2'-O-Me-cAMP-AM at 5 Î¼M but not 1Î¼M. Both tolbutamide and gliclazide stimulated phospholipase C activity; however, only gliclazide did so independently of its activity at KATP channels, and this activity was partially inhibited by pertussis toxin. 8-pCPT-2'-O-Me-cAMP-AM alone (5 Î¼M) did not stimulate insulin secretion, but did increase intracellular Ca(2+) concentration significantly, and this activity was inhibited by 25 Î¼M 2-aminoethoxydiphenylborate (2-APB) or the removal of extracellular Ca(2+). 8-pCPT-2'-O-Me-cAMP-AM potentiation of insulin secretion stimulated by tolbutamide was markedly inhibited by 2-APB (25 Î¼M), and enhanced by the PKC inhibitor Bisindolylmaleimide I (1 Î¼M). Our data demonstrate that the actions of both tolbutamide and gliclazide are strongly potentiated by 8-pCPT-2'-O-Me-cAMP-AM, that gliclazide can stimulate phospholipase C activity via a partially pertussis toxin-sensitive mechanism, and that 8-pCPT-2'-O-Me-cAMP-AM potentiation of tolbutamide action may involve activation of a 2-APB-sensitive Ca(2+) influx.

Potentiation of Sulfonylurea Action by an EPAC-selective cAMP Analog in INS-1 Cells: Comparison of Tolbutamide and Gliclazide, and a Potential Role for EPAC Activation of a 2-APB-sensitive Ca2+ Influx.

Tolbutamide et gliclazide bloquent le canaux KATP Kir6.2/Sur1, provoquant une d&eacute;polarisation membranaire et stimulant la s&eacute;cr&eacute;tion de l&#39;insuline dans les cellules b&ecirc;ta du pancr&eacute;as. Nous avons &eacute;tudi&eacute; la capacit&eacute; de l&#39;EPAC s&eacute;lectifs 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM analogique cAMP potentialise l&#39;action de ces m&eacute;dicaments et le m&eacute;canisme qui pourrait en rendre compte. S&eacute;cr&eacute;tion d&#39;insuline stimul&eacute;e par 200 tolbutamide &mu;M et 20 &mu;M gliclazide, concentrations qui ont eu des effets &eacute;quivalents sur le potentiel de membrane sont inhib&eacute;es par la thapsigargine (1 &mu;M) ou la L-type Ca2 + canal bloqueur nicardipine (2 &mu;M) et fut potentialis&eacute;es par 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &agrave; des concentrations &gt; 2 &mu;M dans les cellules de l&#39;INS-1. Ca(2+) transitoires stimul&eacute;es par tolbutamide ou gliclazide sont inhib&eacute;es par la thapsigargine ou nicardipine et ont &eacute;t&eacute; significativement potentialis&eacute;es par 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &agrave; 5 &mu;M, mais pas de 1&micro;m. Fois tolbutamide et gliclazide a stimul&eacute; l&#39;activit&eacute; phospholipase C ; Cependant, seulement le gliclazide l&#39;a fait ind&eacute;pendamment de son activit&eacute; &agrave; des canaux KATP, et cette activit&eacute; est partiellement inhib&eacute;e par la toxine pertussique. 8-pCPT-2&#39;-O-me-camp-am seul (5 &mu;M) ne stimule pas la s&eacute;cr&eacute;tion d&#39;insuline, mais a fait augmenter de mani&egrave;re significative la concentration intracellulaire de Ca(2+), et cette activit&eacute; est inhib&eacute;e par 25 &mu;M 2-aminoethoxydiphenylborate (2-APB) ou l&#39;enl&egrave;vement de Ca(2+) extracellulaire. 8-pCPT-2&#39;-O-me-camp-am potentialisation de la s&eacute;cr&eacute;tion d&#39;insuline stimul&eacute;e par le tolbutamide est fortement inhib&eacute;e par le 2-APB (25 &mu;M) et renforc&eacute;e par l&#39;inhibiteur PKC bisindolylmal&eacute;imide I (1 &mu;M). Nos r&eacute;sultats d&eacute;montrent que les actions de tolbutamide et gliclazide sont fortement potentialis&eacute;e par 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM, que gliclazide peut stimuler l&#39;activit&eacute; de la phospholipase C via un m&eacute;canisme partiellement la coqueluche sensibles &agrave; la toxine et que la potentialisation de l&#39;action de tolbutamide 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM peut impliquer l&#39;activation d&#39;un afflux de Ca(2+) 2-APB-sensibles.

Potentialisation de l&#39;Action de sulfonylur&eacute;e par un analogue de cAMP EPAC-s&eacute;lective dans les cellules de l&#39;INS-1: Comparaison de Tolbutamide et Gliclazide et un r&ocirc;le potentiel pour EPAC l&#39;Activation d&#39;un Influx de Ca2 + 2-APB-sensibles.

Tolbutamid und Gliclazid blockieren den KATP-Kanal Kir6.2/Sur1, verursachen Depolarisierung der Membran und Stimulierung der Insulinsekretion im Pankreas Beta-Zellen. Wir pr&uuml;fen die F&auml;higkeit der EPAC-selektive cAMP analoge 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM, potenzieren die Wirkung von diesen Drogen und der Mechanismus, der es begr&uuml;nden k&ouml;nnte. Insulin-Sekretion von 200 &mu;M Tolbutamid und 20 &mu;M Gliclazid, Konzentrationen, die entsprechende Auswirkungen auf die Membrane Potential hatte, wurde durch Thapsigargin (1 &mu;M) oder der L-Typ Ca2 +-Kanal-Blocker Nicardipin (2 &mu;M) gehemmt und wurde von 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM bei Konzentrationen &gt; 2 &mu;M in INS-1 Zellen potenzierte angeregt. Ca(2+) Transienten angeregt durch Tolbutamid oder Gliclazid wurden durch Thapsigargin oder Nicardipin gehemmt und waren deutlich von 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM bei 5 &mu;M aber nicht 1&mu;M potenzierte. Tolbutamid und Gliclazid stimuliert die Aktivit&auml;t der Phospholipase C; jedoch nur Gliclazide tat dies unabh&auml;ngig von seiner T&auml;tigkeit am KATP-Kan&auml;le, und diese T&auml;tigkeit wurde teilweise durch Pertussis-Toxin gehemmt. 8-pCPT-2&#39;-O-Me-Camp-am allein (5 &mu;M) Insulin-Sekretion nicht zu, sondern intrazellul&auml;re Ca(2+)-Konzentration signifikant erh&ouml;hen, und diese Aktivit&auml;t wurde durch 25 &mu;M 2-Aminoethoxydiphenylborate (2-APB) oder die Entfernung von extrazellul&auml;ren Ca(2+) gehemmt. 8-pCPT-2&#39;-O-Me-Camp-am Potenzierung der Insulin-Sekretion angeregt durch Tolbutamid wurde deutlich durch 2-APB (25 &mu;M) gehemmt, und durch die PKC-Hemmer Bisindolylmaleimide I (1 &mu;M) verbessert. Unsere Daten zeigen, dass die Aktionen von Tolbutamid und Gliclazid sind stark von 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM, potenzierte, Gliclazid kann Phospholipase C Aktivit&auml;t &uuml;ber einen teilweise Pertussis-Toxin-Sensitive-Mechanismus anregen, und dieser 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM Potenzierung Tolbutamid Aktion kann Aktivierung von einem 2-APB-Sensitive Ca(2+) Zustrom beinhalten.

Potenzierung Sulfonylharnstoff-Nachhutgefecht Analogon EPAC-selektive Lager in INS-1 Zellen: Vergleich von Tolbutamid und Gliclazid und eine m&ouml;gliche Rolle f&uuml;r EPAC Aktivierung eines 2-APB-Sensitive Ca2 + Zustrom.

&#x30C8;&#x30EB;&#x30D6;&#x30BF;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068; gliclazide &#x6FC3;&#x5EA6; KATP &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; Kir6.2/Sur1&#x3001;&#x8131;&#x5206;&#x6975;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x3001;&#x81B5; &beta; &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x85AC;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3059;&#x308B; EPAC &#x30BB;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0; 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;&#x3088;&#x308B; 200 &mu; M &#x30C8;&#x30EB;&#x30D6;&#x30BF;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068;&#x4E21;&#x65B9; 20 &mu; M gliclazide &#x6FC3;&#x5EA6;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x819C;&#x96FB;&#x4F4D;&#x306B;&#x76F8;&#x5F53;&#x52B9;&#x679C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3001;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC; &#xFF08;1 &mu; M&#xFF09; &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3001;L &#x578B; ca 2 + &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB; &#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AB;&#x30FC; &#x30CB;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B8;&#x30D4;&#x30F3; &#xFF08;2 &mu; M&#xFF09; &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6291;&#x5236;&#x3057;&#x3001;8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x6FC3;&#x5EA6;&#x76EE; 2 &mu; m &#x5E2F; INS 1 &#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x305F;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0; &#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x30C8; &#x30C8;&#x30EB;&#x30D6;&#x30BF;&#x30DF;&#x30C9;&#x307E;&#x305F;&#x306F; gliclazide &#x6FC3;&#x5EA6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x523A;&#x6FC0;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30CB;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B8;&#x30D4;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3001;5 &mu; M &#x304C;&#x306A;&#x3044; 1 &mu; m &#x3067; 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x5897;&#x5F37;&#x3057;&#x305F;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30EB;&#x30D6;&#x30BF;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068; gliclazide &#x6FC3;&#x5EA6;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; C &#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x305F;;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x306E;&#x307F; gliclazide &#x6FC3;&#x5EA6;&#x305D;&#x3046;&#x305D;&#x306E; KATP &#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x306F;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x3060;&#x3051;&#x3067; &#xFF08;5 &mu; M&#xFF09; &#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x523A;&#x6FC0;&#x3092;&#x3057;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304C;&#x5897;&#x5927;&#x3057;&#x305F;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;25 &mu; M 2 aminoethoxydiphenylborate (2 APB&#xFF09; &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6291;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x5897;&#x5F37;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30EA;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x30C8;&#x30EB;&#x30D6;&#x30BF;&#x30DF;&#x30C9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E; 2 APB (25 &mu; M) &#x306F;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x963B;&#x5BB3;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x79C1; (1 &mu; M) PKC &#x30A4;&#x30F3;&#x30D2;&#x30D3;&#x30BF;&#x30FC; Bisindolylmaleimide &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x30C8;&#x30EB;&#x30D6;&#x30BF;&#x30DF;&#x30C9;&#x3068; gliclazide &#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x5F37;&#x304F;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068; 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066; gliclazide &#x6FC3;&#x5EA6;&#x306F;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x767E;&#x65E5;&#x54B3;&#x6BD2;&#x7D20;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x306A;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30DB;&#x30B9;&#x30DB;&#x30EA;&#x30D1;&#x30FC;&#x30BC; C &#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x523A;&#x6FC0;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x306E; 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#x306E;&#x5897;&#x5F37;&#x30C8;&#x30EB;&#x30D6;&#x30BF;&#x30DF;&#x30C9; &#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E; 2 APB &#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x6D41;&#x5165;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4F34;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30CB;&#x30EB;&#x30A6;&#x30EC;&#x30A2; &#x30A2;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; EPAC &#x30BB;&#x30EC;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; &#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x30D7; &#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0; INS 1 &#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x306E;&#x5897;&#x5F37;&#xFF1A; &#x30C8;&#x30EB;&#x30D6;&#x30BF;&#x30DF;&#x30C9;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3068; gliclazide &#x6FC3;&#x5EA6;&#x3068;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272; EPAC 2 APB &#x611F;&#x53D7;&#x6027; ca 2 + &#x6D41;&#x5165;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Tolbutamide &#xBC0F; gliclazide KATP &#xCC44;&#xB110; Kir6.2/Sur1, &#xB9C9; depolarization &#xC57C;&#xAE30; &#xD558; &#xACE0; &#xCDCC; &#xC7A5; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xBD84; &#xBE44; &#xC790;&#xADF9;&#xC744; &#xCC28;&#xB2E8; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC57D;&#xBB3C;&#xACFC; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xACC4;&#xC815; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xB3D9;&#xC791;&#xC744; &#xC57D;&#xD6A8; EPAC &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xCEA0;&#xD504; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; 8-pcpt-2&#39;-o-me-camp-am&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; &#xAC80;&#xC0AC;. &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xBD84; &#xBE44;&#xB294; 200 &mu; M tolbutamide&#xC640; 20 &mu; M gliclazide &#xB9C9; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC5D0; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;, thapsigargin (1 &mu; M) &#xB610;&#xB294; L &#xD615; Ca2 + &#xCC44;&#xB110; &#xCC28;&#xB2E8; nicardipine (2 &mu; M)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xACE0; &#xAE30;&#xB2A5; 1 &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; &amp;gt; 2 &mu; M &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0;&#xC11C; 8-pcpt-2&#39;-o-me-camp-am&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; potentiated&#xB294; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C;. Ca(2+) &#xACFC;&#xB3C4; tolbutamide &#xB610;&#xB294; gliclazide&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; thapsigargin &#xB610;&#xB294; nicardipine&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xBC0F; 5 &mu; M &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0; 1&mu;m&#xC5D0; 8-pcpt-2&#39;-o-me-camp-am&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD06C;&#xAC8C; potentiated &#xD588;&#xB2E4;. Tolbutamide &#xBC0F; gliclazide &#xC790;&#xADF9; phospholipase C &#xD65C;&#xB3D9;; &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xB2E8;&#xC9C0; gliclazide KATP &#xCC44;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xADF8;&#xB807;&#xAC8C; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC740; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC31; &#xC77C; &#xD574; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574;. 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM &#xD63C;&#xC790; (5 &mu; M) &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xBD84; &#xBE44;&#xB97C; &#xC790;&#xADF9; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2+) &#xB18D;&#xB3C4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588; &#xACE0;&#xC774; &#xD65C;&#xB3D9; 25 &mu; M 2 aminoethoxydiphenylborate (2 &#xC9C0;&#xBA85;) &#xB610;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; ca(2+)&#xC758; &#xC81C;&#xAC70;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC800;&#xD574; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xC290;&#xB9B0; &#xBD84; &#xBE44; &#xC790;&#xADF9;&#xB41C; tolbutamide 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM potentiation 2 &#xC9C0;&#xBA85; (25 &mu; M)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC800;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC0F; PKC &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; Bisindolylmaleimide&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC15;&#xD654; &#xB41C; &#xB098; (1 &mu; M). &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; gliclazide &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC790;&#xADF9; phospholipase C &#xD65C;&#xB3D9; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC31; &#xC77C; &#xD574; &#xB3C5; &#xC18C;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; tolbutamide &#xC561;&#xC158;&#xC758; &#xADF8; 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM potentiation 2 &#xC9C0;&#xBA85; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; Ca(2+) &#xC720;&#xC785;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; tolbutamide &#xBC0F; gliclazide &#xC791;&#xC5C5; 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM, &#xC5EC;&#xB294; potentiated &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xAE30;&#xB2A5; 1 &#xC140;&#xC5D0;&#xC11C; EPAC &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xCEA0;&#xD504; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; Sulfonylurea &#xD589;&#xB3D9; potentiation: Tolbutamide &#xBE44;&#xAD50;&#xC640; Gliclazide, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; 2 &#xC9C0;&#xBA85; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; Ca2 + &#xC720;&#xC785;&#xC758; EPAC &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;.

Tolbutamida y glibenclamida bloquean el canal KATP Kir6.2/Sur1, causando la despolarizaci&oacute;n de la membrana y estimulando la secreci&oacute;n de insulina en las c&eacute;lulas beta pancre&aacute;ticas. Examinamos la capacidad de la 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM anal&oacute;gica campo EPAC selectivo para potenciar la acci&oacute;n de estos f&aacute;rmacos y el mecanismo que podr&iacute;a explicar. Secreci&oacute;n de insulina estimulada por tanto 200 tolbutamida &mu;M y 20 &mu;M gliclazida, concentraciones que ten&iacute;an efectos equivalentes sobre el potencial de la membrana, se inhibici&oacute;n por thapsigargin (1 &mu;M) o el tipo L Ca2 + canal bloqueador nicardipina (2 &mu;M) y fue potenciadas por 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM en concentraciones &gt; 2 &mu;M en c&eacute;lulas INS-1. CA estimulado por la tolbutamida o gliclazida fueron inhibidos por thapsigargin o nicardipina y fueron significativamente potenciada por 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM en 5 &mu;M pero no 1&mu;M. Tolbutamida tanto gliclazida estimulan la actividad de la fosfolipasa C; sin embargo, s&oacute;lo gliclazida lo hicieron independientemente de su actividad en canales KATP, y esta actividad fue inhibida parcialmente por la toxina pertussis. 8-pCPT-2&#39;-O-me-Camp-am solo (5 &mu;M) no estimularon la secreci&oacute;n de insulina, pero aumentar considerablemente la concentraci&oacute;n de CA intracelular, y esta actividad fue inhibida por 25 &mu;M 2-aminoethoxydiphenylborate (2-APB) o la extracci&oacute;n de CA extracelular. 8-pCPT-2&#39;-O-me-Camp-am potenciaci&oacute;n de la secreci&oacute;n de insulina estimulada por la tolbutamida marcado fue inhibida por 2-APB (25 micras) y reforzado por el inhibidor de la PKC Bisindolylmaleimide I (1 &mu;M). Nuestros datos demuestran que las acciones de tolbutamida y gliclazida son fuertemente potenciada por 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM, que gliclazida puede estimular la actividad de la fosfolipasa C mediante un mecanismo sensible a la toxina pertussis parcialmente, y esa 8-pCPT-2&#39;-O-Me-cAMP-AM potenciaci&oacute;n de la acci&oacute;n de la tolbutamida puede implicar la activaci&oacute;n de una afluencia de CA 2-APB-sensible.

Potenciaci&oacute;n de la acci&oacute;n de la sulfonilurea por un an&aacute;logo de campamento EPAC-selectiva en c&eacute;lulas INS-1: comparaci&oacute;n de tolbutamida y gliclazida y un papel potencial EPAC activaci&oacute;n de una 2-APB-sensible Ca2 + afluencia.

Hilary J. Broderick

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