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Large Insert Environmental Genomic Library Production

The vast majority of microbes in nature currently remain inaccessible to traditional cultivation methods. Over the past decade, culture-independent ...

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Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast <em>Pichia pastoris</em>

Protein expression in the microbial eukaryotic host Pichia pastoris offers the possibility to generate high amounts of recombinant protein in a fast and ...

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A High Throughput Screen for Biomining Cellulase Activity from Metagenomic Libraries

Cellulose, the most abundant source of organic carbon on the planet, has wide-ranging industrial applications with increasing emphasis on biofuel ...

University of British Columbia - UBC

&#x4F5C;&#x4E3A;&#x53EF;&#x80FD;&#x51CF;&#x6BD2;&#x6BD2;&#x8F7D;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x6297;&#x539F;&#x6216; DNA &#x75AB;&#x82D7;&#x682A;&#x5EFA;&#x9020;&#x4E86;&#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x5BFC;&#x81F4;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x9014;&#x5F84;&#x7684;&#x5171;&#x540C;&#x5206;&#x652F;&#x4E2D;&#x8FDB;&#x884C;&#x5220;&#x9664;&#x64CD;&#x4F5C;&#x7684;&#x674E;&#x65AF;&#x7279;&#x83CC;&#x3002;aroA&#xFF0C;aroB&#xFF0C;&#x548C;&#x5C24;&#x5176;&#x662F; aroE &#x7A81;&#x53D8;&#x8868;&#x660E;&#x5F3A;&#x70C8;&#x964D;&#x4F4E;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x7387;&#x5728;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3001; &#x751A;&#x81F3;&#x5728;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x5A92;&#x4F53;&#x3002;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x538C;&#x6C27;&#x4EE3;&#x8C22;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684; aro &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x6709;&#x6C27;&#x4EE3;&#x8C22;&#x548C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x7684;&#x589E;&#x957F;&#x7387;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5931;&#x800C;&#x590D;&#x5F97;&#x540E;&#x589E;&#x8865;&#x7EF4;&#x751F;&#x7D20; K2&#xFF0C;&#x6697;&#x793A; aro &#x7A81;&#x53D8;&#x7531;&#x4E8E;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4F53;&#x918C;&#x6C27;&#x5316;&#x547C;&#x5438;&#x6709;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4E4B;&#x5904;&#x3002;Aro &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x5728;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x6DB2;&#x548C;&#x8513;&#x5EF6;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x590D;&#x5236;&#x4E86;&#x5927;&#x5E45;&#x653E;&#x7F13;&#xFF0C;&#x548C;&#x6240;&#x6709; aro &#x7A81;&#x53D8;&#x90FD;&#x8868;&#x660E;&#x9AD8;&#x6BD2;&#x529B;&#x8870;&#x51CF;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x5373; BALB/c &#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x81F4;&#x6B7B;&#x5242;&#x91CF;&#x7684; 50%&#x662F;&#x589E;&#x52A0;&#x81F3;&#x5C11; 10 4 &#x6298;&#x4E3A; aroA&#x3001; aroB &#x548C; aroA/B &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x548C; &gt; 10 5 &#x6298;&#x76F8;&#x6BD4;&#x7236;&#x5E94;&#x53D8; aroE &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x9F20; preimmunized aro &#x7A81;&#x53D8;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5F15;&#x8D77;&#x826F;&#x597D;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x548C;&#x5BF9;&#x540E;&#x7EED;&#x6311;&#x6218;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x682A;&#x7684;&#x5B8C;&#x5168;&#x4FDD;&#x62A4;&#x3002;5 X 10(6) aroA&#x3001; aroB &#x548C; aroA/B &#x7A81;&#x53D8;&#x7EC6;&#x83CC;&#x603B;&#x6570;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x83B7;&#x5F97;&#x4FDD;&#x62A4;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136; 5 x 10(8) aroE &#x6216; aroA/E &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x7684;&#x4EE5;&#x5B9E;&#x73B0;&#x6BD4;&#x8F83;&#x7684;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x5B57;&#x88AB;&#x8010;&#x53D7;&#x826F;&#x597D;&#x800C;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F15;&#x8D77;&#x4EFB;&#x4F55;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x8FF9;&#x8C61;&#x8868;&#x660E;&#x674E;&#x65AF;&#x7279;&#x83CC;&#x83CC;&#x682A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x57FA;&#x672C;&#x5206;&#x652F;&#x4E2D;&#x8FDB;&#x884C;&#x5220;&#x9664;&#x64CD;&#x4F5C;&#x53EF;&#x80FD;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x75AB;&#x82D7;&#x8F7D;&#x4F53;&#x8BF1;&#x5BFC; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x3002;

&#x589E;&#x957F;&#x3001; &#x6BD2;&#x529B;&#x548C;&#x674E;&#x65AF;&#x7279;&#x674E;&#x65AF;&#x7279;&#x83CC; aro &#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x3002;

Mutants of Listeria monocytogenes with deletions in genes of the common branch of the biosynthesis pathway leading to aromatic compounds were constructed as possible virulence-attenuated carrier strains for protein antigens or vaccine DNA. aroA, aroB, and in particular aroE mutants showed strongly reduced growth rates in epithelial cells and even in rich culture media. The metabolism of the aro mutants under these conditions was predominantly anaerobic. Aerobic metabolism and a wild-type growth rate were, however, regained upon the addition of vitamin K2, suggesting that the aro mutants are deficient in oxidative respiration due to the lack of menaquinone. Replication of the aro mutants in the host cell's cytosol and cell-to-cell spread were drastically slowed down, and all aro mutants showed high virulence attenuation in mice, i.e., the 50% lethal dose in BALB/c mice was increased at least 10(4)-fold for the aroA, aroB, and aroA/B mutants and >10(5)-fold for the aroE mutant compared to the parent strain. Nevertheless, mice preimmunized with aro mutant bacteria elicited good T-cell response and full protection against a subsequent challenge with the virulent wild-type strain. A total of 5 x 10(6) aroA, aroB, and aroA/B mutant bacteria were sufficient to obtain a protective T-cell response, while 5 x 10(8) aroE or aroA/E mutants were necessary to achieve comparable numbers of antigen-specific T cells. These numbers were well tolerated without causing any signs of disease, indicating that Listeria strains with deletions in genes of the basic branch of the aromatic amino acid pathway could be useful vaccine carriers for inducing T-cell immunity.

Growth, virulence, and immunogenicity of Listeria monocytogenes aro mutants.

Mutants de Listeria monocytogenes par d&eacute;l&eacute;tions dans les g&egrave;nes du service commun de la voie de biosynth&egrave;se conduisant aux compos&eacute;s aromatiques ont &eacute;t&eacute; construits comme souches possible porteur de virulence att&eacute;nu&eacute;e pour les antig&egrave;nes prot&eacute;iques ou vaccin ADN. aroA, aroB, et en particulier aroE mutants ont montr&eacute; des taux de croissance fortement r&eacute;duite dans les cellules &eacute;pith&eacute;liales et m&ecirc;me dans les milieux de culture riche. Le m&eacute;tabolisme des mutants aro dans ces conditions a &eacute;t&eacute; principalement ana&eacute;robie. M&eacute;tabolisme a&eacute;robie et un taux de croissance de type sauvage &eacute;taient, cependant, a repris lors de l&#39;addition de vitamine K2, sugg&eacute;rant que les mutants d&#39;aro sont d&eacute;ficients dans la respiration oxydative en raison du manque de m&eacute;naquinone. R&eacute;plication des mutants dans le cytosol de la cellule h&ocirc;te et la propagation de la cellule &agrave; aro ont &eacute;t&eacute; consid&eacute;rablement ralentie, et aro tous les mutants att&eacute;nuation de virulence &eacute;lev&eacute;e ont montr&eacute; chez la souris, par exemple, la dose l&eacute;tale 50 % chez la souris BALB/c a &eacute;t&eacute; augment&eacute; d&#39;au moins 4-plier pour les mutants aroA, aroB et aroA/B et &amp;gt; 5-replier pour le mutant aroE par rapport &agrave; la souche parentale. N&eacute;anmoins, les souris preimmunized avec aro bact&eacute;ries mutantes a suscit&eacute; bon &eacute;cho de lymphocytes et une protection compl&egrave;te contre un d&eacute;fi ult&eacute;rieur avec la souche virulente de type sauvage. Un total de 5 x 10 (6) les bact&eacute;ries mutantes aroA, aroB et aroA/B &eacute;taient suffisants pour obtenir une r&eacute;ponse protectrice des lymphocytes T, tandis que 5 x subsection aroE ou aroA/E mutants ont &eacute;t&eacute; n&eacute;cessaires pour atteindre des chiffres comparables de lymphocytes T sp&eacute;cifiques d&#39;antig&egrave;nes. Ces chiffres ont &eacute;t&eacute; bien tol&eacute;r&eacute;s sans causer aucun signe de maladie, indiquant que les souches de Listeria avec des d&eacute;l&eacute;tions dans les g&egrave;nes de la direction de la base de la voie des acides amin&eacute;s aromatiques pourraient &ecirc;tre porte-vaccins utiles permettant d&#39;induire l&#39;immunit&eacute; lymphocytes.

Croissance, la virulence et l&#39;immunog&eacute;nicit&eacute; de mutants aro de Listeria monocytogenes.

Wachstum, Virulenz und Immunogenit&#xE4;t von Listeria monocytogenes aro-Mutanten.

Mutanti di Listeria monocytogenes con delezioni di geni del ramo comune del percorso della biosintesi che porta a composti aromatici furono costruiti come ceppi possibile vettore attenuata virulenza per gli antigeni della proteina o vaccino DNA. aroA, Luca, e in particolare aroE mutanti hanno mostrato tassi di crescita fortemente ridotta nelle cellule epiteliali e persino nella ricca cultura media. Il metabolismo dei mutanti aro in queste condizioni &egrave; stato prevalentemente anaerobico. Metabolismo aerobico e un tasso di crescita del selvaggio-tipo erano, tuttavia, ha riguadagnati dopo l&#39;aggiunta di vitamina K2, suggerendo che i mutanti di aro sono carenti di respirazione ossidativa a causa della mancanza di menachinone. Replica dei mutanti aro nel citosol della cellula ospite e la diffusione di cellula-cellula sono stati drasticamente rallentato, e aro tutti i mutanti ha mostrato virulenza elevata attenuazione nei topi, cio&egrave;, il 50% dose letale in topi BALB/c &egrave; stata aumentata ad almeno 4-fold per i mutanti aroA, Luca e aroA/B e &amp;gt; 5-fold per il mutante aroE rispetto al ceppo principale. Tuttavia, topi preimmunized con aro batteri mutanti ha suscitati buona risposta delle cellule T e una protezione completa contro una sfida successiva con il ceppo virulento di wild-type. Un totale di 5 x 10 aroA, Luca e aroA/B batteri mutanti sono stati sufficienti per ottenere una risposta protettiva delle cellule T, mentre 5 x 10, paragrafo 8 aroE o aroA/E mutanti sono state necessarie per raggiungere numeri paragonabili di cellule T antigene-specifiche. Questi numeri sono stati ben tollerati senza causare sintomi di malattia, che indica che i ceppi di Listeria con delezioni nei geni del ramo base del percorso dell&#39;amminoacido aromatico potrebbero essere vettori vaccino utile per indurre immunit&agrave; delle cellule T.

Crescita, virulenza e immunogenicit&agrave; di mutanti aro di Listeria monocytogenes.

&#x5171;&#x901A;&#x652F;&#x5E97;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x3068;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x83CC;&#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x682A;&#x306F;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x6E1B;&#x8870;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x682A;&#x6297;&#x539F;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x307E;&#x305F;&#x306F; DNA &#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5EFA;&#x8A2D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E9;&#x3001;&#x30C7;&#x30B8;&#x30BF;&#x30EB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7279;&#x306B;&#x30B8;&#x30A7;&#x30EC;&#x30A4;&#x30C9; gt &#x30A8;&#x30A2;&#x30ED;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C4;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x5F37;&#x304F;&#x6E1B;&#x3089;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6210;&#x9577;&#x7387;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x8C4A;&#x304B;&#x306A;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x30A2;&#x30ED;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x5ACC;&#x6C17;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x597D;&#x6C17;&#x7684;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x3068;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x7387;&#x306F;&#x3001;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30D3;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3; K2&#x3001;&#x30A2;&#x30ED;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x9178;&#x5316;&#x547C;&#x5438;&#x30E1;&#x30CA;&#x30AD;&#x30CE;&#x30F3;&#x306E;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6B20;&#x4E4F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3082;&#x53D6;&#x308A;&#x623B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3001;&#x30A2;&#x30ED;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x666E;&#x53CA;&#x3057;&#x305F;&#x30AC;&#x30BF;&#x843D;&#x3061;&#x3068;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082; 4 &#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x9AD8;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x6E1B;&#x8870;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3001;50% &#x81F4;&#x6B7B;&#x91CF; balb/c &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; aro &#x3092;&#x5897;&#x52A0;-&#x6298;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x30A2;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E9;&#x3001;&#x30C7;&#x30B8;&#x30BF;&#x30EB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E9;/B &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3068;&#x76EE; 5-&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3092;&#x89AA;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306B;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x30B8;&#x30A7;&#x30EC;&#x30A4;&#x30C9; gt &#x30A8;&#x30A2;&#x30ED;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C4;&#x5909;&#x7570;&#x306E;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;aro &#x8A98;&#x767A;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x826F;&#x3044; T &#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3068;&#x5F8C;&#x7D9A;&#x306E;&#x6311;&#x6226;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5F37;&#x6BD2;&#x682A;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x4FDD;&#x8B77;&#x3068; preimmunized &#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3002;10(6) &#x30A2;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E9;&#x3001;&#x30C7;&#x30B8;&#x30BF;&#x30EB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E9;/B &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2; x 5 &#x306E;&#x5408;&#x8A08;&#x304C; 5 x 10 (8) &#x30B8;&#x30A7;&#x30EC;&#x30A4;&#x30C9; gt &#x30A8;&#x30A2;&#x30ED;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C4;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30A2;&#x30ED;&#x30FC;&#x30E9;/E &#x306E;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5BFE;&#x7B49;&#x306A;&#x6570;&#x5B57;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x9593;&#x3001;&#x4FDD;&#x8B77;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x5F97;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6570;&#x5B57;&#x3082;&#x75C5;&#x6C17;&#x306E;&#x5146;&#x5019;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x306A;&#x304F;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x83CC;&#x306E;&#x82B3;&#x9999;&#x65CF;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x9178;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x5206;&#x5C90;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x524A;&#x9664;&#x304C; T &#x7D30;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x5F79;&#x306B;&#x7ACB;&#x3064;&#x30EF;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x62C5;&#x4F53;&#x3092;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x5BB9;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x6210;&#x9577;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x3001;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A2;&#x83CC;&#x30A2;&#x30ED;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x539F;&#x6027;&#x3002;

Listeria monocytogenes &#xC0AD;&#xC81C; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC871; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C0;&#xB294; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xACBD;&#xB85C;&#xC758; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xAE30;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD56D; &#xC6D0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB610;&#xB294; DNA &#xBC31;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB3C5;&#xC131; &#xAC10;&#xC1E0; &#xCE90;&#xB9AC;&#xC5B4; &#xBCC0;&#xC885;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC74;&#xC124; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. aroA, aroB, &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBC0F; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xBB38;&#xD654; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4; &#xC5D0;&#xC11C;&#xB3C4; aroE &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC18C; &#xC131;&#xC7A5;&#xB960;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC; &#xD2B9;&#xD788;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC544;&#xB85C; &#xBBA4;&#xD134;&#xD2B8;&#xC758; &#xB300;&#xC0AC;&#xB294; &#xC8FC;&#xB85C; &#xD610; &#xAE30;&#xC131;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xD638; &#xAE30;&#xC131; &#xB300;&#xC0AC;&#xC640; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xC131;&#xC7A5;&#xB960;, &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC544;&#xB85C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; menaquinone &#xBD80;&#xC871;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0B0;&#xD654; &#xD638;&#xD761;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C; &#xBE44;&#xD0C0;&#xBBFC; k 2&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xB530;&#xB77C; &#xD68C;&#xBCF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; cytosol &#xBC0F; &#xC140; &#xD655;&#xC0B0; &#xC544;&#xB85C; &#xBBA4;&#xD134;&#xD2B8;&#xC758; &#xBCF5;&#xC81C; &#xACFC;&#xAC10; &#xD558; &#xAC8C; &#xAC10;&#xC18D; &#xD588;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC544;&#xB85C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC0DD;&#xC950;, &#xB192;&#xC740; &#xB3C5;&#xC131; &#xAC10;&#xC1E0; &#xC989;, BALB/c &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; 50% &#xCE58; &#xC0AC; &#xB7C9;&#xC740; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; 10 (4)-&#xBC30; &#xC99D;&#xAC00; aroA, aroB, &#xBC0F; aroA/B &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB300; &#xD55C; &#xACE0; &amp;gt; 10 (5) &#xBC30; &#xBD80;&#xBAA8; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC778;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; aroE &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB300; &#xD55C;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, &#xC950; &#xC544;&#xB85C; elicited &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC88B;&#xC740; T &#xC138;&#xD3EC; &#xBC18;&#xC751; &#xBC0F; &#xC545;&#xC131; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xBCC0;&#xD615;&#xACFC; &#xC774;&#xD6C4;&#xC758; &#xACFC;&#xC81C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xBCF4;&#xD638;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; preimmunized. &#xC2DC;&#xBBFC;&#xAD8C;&#xC774; aroA, aroB, &#xBC0F; aroA/B &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; x 5&#xC758; &#xCD1D; 10(8) aroE &#xB610;&#xB294; aroA/E &#xBBA4;&#xD134;&#xD2B8; x 5 &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xC22B;&#xC790;&#xB97C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xB3D9;&#xC548; &#xBCF4;&#xD638; T &#xC138;&#xD3EC; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC5BB;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC22B;&#xC790; &#xD588;&#xB2E4; &#xC798; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC871; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBD84;&#xAE30;&#xC758; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AD;&#xC81C; Listeria &#xBCC0;&#xC885; T &#xC138;&#xD3EC; &#xBA74;&#xC5ED;&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xBC31;&#xC2E0; &#xC0AC;&#xC5C5;&#xC790; &#xC218;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC758; &#xC9D5;&#xD6C4;&#xAC00; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC6A9;&#xB0A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC131;&#xC7A5;, &#xB3C5;&#xC131;, &#xBC0F; Listeria monocytogenes &#xC544;&#xB85C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; immunogenicity.

Se construyeron mutantes de Listeria monocytogenes con eliminaciones en los genes de la rama com&uacute;n de la v&iacute;a biosint&eacute;tica que conduce a compuestos arom&aacute;ticos como cepas posible portador de virulencia atenuada para los ant&iacute;genos de la prote&iacute;na o la vacuna de ADN. aroA, aroB, y en particular aroE mutantes mostraron tasas de crecimiento reducido fuertemente en las c&eacute;lulas epiteliales e incluso en medios de cultivo enriquecidos. El metabolismo de los mutantes de aro en estas condiciones fue predominantemente anaerobio. Metabolismo aer&oacute;bico y una tasa de crecimiento de tipo salvaje fueron, sin embargo, recuper&oacute; a la adici&oacute;n de vitamina K2, sugiriendo que los mutantes de aro son deficientes en la respiraci&oacute;n oxidativa debido a la falta de menaquinone. Replicaci&oacute;n de los mutantes de aro en el citosol de la c&eacute;lula hu&eacute;sped y la difusi&oacute;n de c&eacute;lula a c&eacute;lula se ralentiz&oacute; dr&aacute;sticamente, y todos los mutantes de aro demostraron atenuaci&oacute;n alta virulencia en ratones, es decir, el 50% de la dosis letal en ratones BALB/c era aumentar al menos 10 4-veces para los mutantes aroA, aroB y aroA/B y &gt; 10 5 veces para el mutante de aroE comparado con la cepa parental. Sin embargo, los ratones preimmunized con aro bacterias mutantes sacadas buena respuesta de c&eacute;lulas T y la protecci&oacute;n completa contra un desaf&iacute;o posterior con la virulenta cepa de tipo salvaje. Un total de 5 x 10 (6) aroA, aroB y aroA/B bacterias mutantes fueron suficientes para obtener una respuesta protectora de c&eacute;lulas T, mientras que 5 x 10 (8) aroE o aroA/E mutantes eran necesarias para lograr un n&uacute;mero comparable de ant&iacute;genos espec&iacute;ficos de c&eacute;lulas T. Estos n&uacute;meros se toleraron bien sin causar cualquier signo de enfermedad, indicando que las cepas de Listeria con eliminaciones en los genes de la rama b&aacute;sica de la v&iacute;a del amino&aacute;cido arom&aacute;tico podr&iacute;an ser portavacunas &uacute;til para inducir inmunidad t-c&eacute;lula.

Crecimiento, virulencia y la inmunogenicidad de mutantes de aro de Listeria monocytogenes.

&#x571F;&#x58E4;&#x6837;&#x54C1;&#x88AB;&#x7504;&#x522B;&#x9009;&#x62E9;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x5230;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x4E9A;&#x781C;&#x4E0E;&#x5FAE;&#x5206; enantioselectivities &#x6C27;&#x5316;&#x6709;&#x673A;&#x786B;&#x5316;&#x7269;&#x7684;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3002;&#x51E0;&#x682A;&#x7EC6;&#x83CC;&#x4F18;&#x5148;&#x751F;&#x4EA7; S &#x914D;&#x7F6E;&#x4E9A;&#x781C;&#x5BF9;&#x6620;&#x4F53;&#x88AB;&#x9694;&#x79BB;&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E00;&#x682A;&#x7EC6;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5206;&#x6790;&#x548C;&#x8868;&#x5B9A;&#x6027;&#x4E3A;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC; frederiksbergensis&#xFF0C;&#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x5730;&#x7ED9;&#x4E86; R &#x5BF9;&#x6620;&#x4F53;&#x3002;&#x5BF9;&#x9762; enantioselectivities &#x663E;&#x793A;&#x663E;&#x7136;&#x662F;&#x5B8C;&#x5168;&#x76F8;&#x540C;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x53D1;&#x73B0;&#x662F;&#x4E3A;&#x975E;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x751F;&#x7269;&#x4F53;&#x7684;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x3002;

&#x5BF9;&#x9762;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8868;&#x548C;&#x5206;&#x6790;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x682A;&#x5047;&#x5355;&#x80DE;&#x83CC; frederiksbergensis &#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C; sulfoxidation &#x4E2D;&#x7684; enantioselectivities&#x3002;

Soil samples were screened to select microorganisms with the capability to oxidize organic sulfides into the corresponding sulfoxides with differential enantioselectivities. Several bacterial strains that preferentially produced the S-configured sulfoxide enantiomer were isolated. Surprisingly, one bacterial strain, genotypically and phenotypically characterized as Pseudomonas frederiksbergensis, selectively gave the R enantiomer. The finding that two apparently identical organisms displayed opposite enantioselectivities is novel for non-genetically modified organisms.

Opposite enantioselectivities of two phenotypically and genotypically similar strains of Pseudomonas frederiksbergensis in bacterial whole-cell sulfoxidation.

Des &eacute;chantillons de sol ont &eacute;t&eacute; cribl&eacute;s pour s&eacute;lectionner des micro-organismes ayant la capacit&eacute; d&#39;oxyder les sulfures organiques dans les sulfoxydes correspondantes avec des &eacute;nantios&eacute;lectivit&eacute;s diff&eacute;rentielles. Plusieurs souches bact&eacute;riennes qui se produit pr&eacute;f&eacute;rentiellement l&#39;&eacute;nantiom&egrave;re S-configur&eacute; sulfoxyde ont &eacute;t&eacute; isol&eacute;s. &Eacute;tonnamment, une souche bact&eacute;rienne, g&eacute;notypiquement et ph&eacute;notypiquement caract&eacute;ris&eacute;e comme Pseudomonas frederiksbergensis, Donna s&eacute;lectivement l&#39;&eacute;nantiom&egrave;re R. La conclusion selon laquelle les deux organismes apparemment identiques affich&eacute;s en face des &eacute;nantios&eacute;lectivit&eacute;s est roman pour les organismes non g&eacute;n&eacute;tiquement modifi&eacute;s.

En face des &eacute;nantios&eacute;lectivit&eacute;s allant de deux souches semblables sur le plan ph&eacute;notypique et g&eacute;notypique de Pseudomonas frederiksbergensis dans sulfoxydation bact&eacute;rienne de cellules enti&egrave;res.

Gegen&#xFC;ber Enantioselektivit&#xE4;ten von zwei ph&#xE4;notypisch und genotypisch &#xE4;hnlicher St&#xE4;mme von Pseudomonas frederiksbergensis in bakteriellen whole-cell Sulfoxidation.

Campioni di suolo sono stati proiettati per selezionare microrganismi con la capacit&agrave; di ossidare i solfuri organici nei corrispondenti solfossidi con differenziale enantioselectivities. Diversi ceppi batterici che preferenzialmente prodotta l&#39;enantiomero S-configurato solfossido sono stati isolati. Sorprendentemente, un ceppo batterico, genotipicamente e fenotipicamente caratterizzato come Pseudomonas frederiksbergensis, dato in modo selettivo l&#39;enantiomero R. La constatazione che due organismi apparentemente identici visualizzati di fronte enantioselectivities &egrave; romanzo per organismi non geneticamente modificati.

Fronte enantioselectivities di due simili fenotipicamente e genotipicamente ceppi di Pseudomonas frederiksbergensis in sulfoxidation di tutta la cellula batterica.

&#x571F;&#x58CC;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9;&#x5DEE;&#x52D5;&#x30A8;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30AA;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306E;&#x6709;&#x6A5F;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C9;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3092;&#x9178;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3092;&#x9078;&#x629E;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x4E0A;&#x6620;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x512A;&#x5148;&#x7684; S &#x69CB;&#x6210;&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C9; &#x30A8;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x306E;&#x7DCA;&#x5F35;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x5F62;&#x8CEA; Pseudomonas frederiksbergensis &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B; 1 &#x3064;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x682A;&#x306F;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x7684;&#x306B; R &#x30A8;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30AA;&#x30DE;&#x30FC;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x3002;&#x3064;&#x306E;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x540C;&#x4E00;&#x751F;&#x7269;&#x30A8;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30AA;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306E;&#x53CD;&#x5BFE;&#x5074;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3092;&#x898B;&#x3064;&#x3051;&#x308B;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7D44;&#x307F;&#x63DB;&#x3048;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x30B7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E2;&#x30CA;&#x30B9; frederiksbergensis &#x7D30;&#x83CC;&#x5168;&#x4F53;&#x30BB;&#x30EB; &#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x30B9;&#x30EB;&#x30DB;&#x30F3;&#x3067;&#x5F62;&#x8CEA;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x985E;&#x4F3C;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x30A8;&#x30CA;&#x30F3;&#x30C1;&#x30AA;&#x9078;&#x629E;&#x6027;&#x306E;&#x53CD;&#x5BFE;&#x5074;&#x3002;

&#xCC28;&#xB3D9; enantioselectivities&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xD574;&#xB2F9; sulfoxides&#xB85C; &#xC720;&#xAE30; &#xD669; &#xD654;&#xBB3C; &#xC0B0;&#xD654; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC744; &#xC120;&#xD0DD; &#xD558;&#xB294; &#xD1A0;&#xC591; &#xC0D8;&#xD50C; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xC120;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC0B0; S &#xAD6C;&#xC131; sulfoxide enantiomer &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC138;&#xADE0; &#xBCC0;&#xC885; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, genotypically &#xBC0F; phenotypically &#xB179; frederiksbergensis&#xB85C; &#xD2B9;&#xC9D5; 1 &#xAC1C;&#xC758; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xAE34;&#xC7A5;&#xC744; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; R enantiomer &#xC900;. &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBD84;&#xBA85;&#xD788; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; enantioselectivities &#xBC18;&#xB300; &#xD45C;&#xC2DC; &#xCC3E;&#xAE30;-&#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCC0;&#xD615;&#xB41C; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC18C;&#xC124; &#xC774;&#xB2E4;.

Enantioselectivities &#xC138;&#xADE0; &#xC804;&#xCCB4; &#xC140; sulfoxidation&#xC5D0; &#xB179; frederiksbergensis&#xC758; 2 &#xAC1C;&#xC758; phenotypically &#xBC0F; genotypically &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC885;&#xC790;&#xC758; &#xBC18;&#xB300;.

Se revisaron las muestras de suelo para seleccionar microorganismos con la capacidad para oxidar sulfuros org&aacute;nicos en los sulf&oacute;xidos correspondientes con diferencial enantioselectivities. Se aislaron varias cepas bacterianas que producen preferentemente el enanti&oacute;mero S-configurado sulf&oacute;xido. Sorprendentemente, una cepa bacteriana, genot&iacute;pico y fenot&iacute;picamente caracterizada como Pseudomonas frederiksbergensis, dio selectivamente el enanti&oacute;mero R. El hallazgo de que dos organismos aparentemente id&eacute;nticos aparecen enfrente de enantioselectivities es la novela para organismos no modificados gen&eacute;ticamente.

Frente a enantioselectivities de dos cepas similares fenot&iacute;picamente y genot&iacute;pico de Pseudomonas frederiksbergensis en sulfoxidation de celulares bacteriana.

&#x5DE8;&#x5927;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#xFF0C;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x8868;&#x571F;&#xFF0C;&#x7B5B;&#x9009;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7528;&#x7684;&#x5929;&#x7136; N-&#x7532;&#x57FA;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x7532;&#x9178; N-&#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x751F;&#x4EA7;&#x5929;&#x7136;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x7532;&#x9178;&#x3002;70 &#x6BEB;&#x514B;/&#x5347;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x751F;&#x4EA7;&#x529B;/&#x672A;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x4F18;&#x5316;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x89C4;&#x6A21;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x5929;&#x3002;&#x6CA1;&#x6709;&#x526F;&#x4EA7;&#x7269;&#x88AB;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528; B.&#x5DE8;&#x5927;&#x7684;&quot;&#x81EA;&#x7136;&quot;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x7532;&#x9178;&#x751F;&#x4EA7;&#x76F8;&#x6BD4;&#x53EF;&#x6BD4;&#x73B0;&#x6709;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x662F;&#x663E;&#x8457;&#x7684;&#x6539;&#x8FDB;&#x3002;

&#x751F;&#x4EA7;&#x7684;&#x5929;&#x7136;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x7532;&#x9178; N-&#x7532;&#x57FA;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x7532;&#x9178;&#x7684;&#x5DE8;&#x5927;&#x8868;&#x571F;&#x9694;&#x79BB;&#x7EC6;&#x83CC;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269; N-&#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x3002;

Bacillus megaterium, isolated in a screening process from topsoil, was used for N-demethylation of natural N-methyl methyl anthranilate to produce natural methyl anthranilate. Maximal productivity of 70 mg/L/day was achieved under laboratory-scale conditions without further optimization. No byproducts were observed. Thus, production of "natural" methyl anthranilate using B. megaterium is a significant improvement over comparable already existing procedures.

Production of natural methyl anthranilate by microbial N-demethylation of N-methyl methyl anthranilate by the topsoil-isolated bacterium Bacillus megaterium.

Bacillus megaterium, isol&eacute; dans un processus de s&eacute;lection de la couche arable, a &eacute;t&eacute; utilis&eacute; pour la N-d&eacute;m&eacute;thylation de naturel N-m&eacute;thyle anthranilate de m&eacute;thyle anthranilate de m&eacute;thyle naturel de produire. Productivit&eacute; maximale de 70 mg/L/jour a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e dans des conditions de laboratoire sans optimisation suppl&eacute;mentaire. Aucun sous-produits ont &eacute;t&eacute; observ&eacute;s. Ainsi, la production de l&#39;anthranilate de m&eacute;thyle &laquo; naturel &raquo; &agrave; l&#39;aide de b. megaterium est une am&eacute;lioration significative au cours des proc&eacute;dures d&eacute;j&agrave; existantes comparables.

Production de l&#39;anthranilate de m&eacute;thyle naturel par N-d&eacute;m&eacute;thylation microbienne du N-m&eacute;thyle anthranilate de m&eacute;thyle de la bact&eacute;rie isol&eacute;e de la terre arable Bacillus megaterium.

Bacillus Megaterium, isoliert in einem Screening-Verfahren von Mutterboden, wurde f&uuml;r N-Demethylierung von nat&uuml;rlichen N-Methyl-Methyl-Anthranilat verwendet, um nat&uuml;rliche Methyl Anthranilat zu produzieren. Maximale Produktivit&auml;t von 70 mg/L/Tag wurde unter Laborma&szlig;stab Bedingungen ohne weitere Optimierung erreicht. Keine Nebenprodukte wurden beobachtet. So ist die Produktion von &quot;nat&uuml;rliche&quot; Methyl Anthranilat mit B. Megaterium eine signifikante Verbesserung &uuml;ber vergleichbare bereits bestehenden Verfahren.

Produktion von nat&uuml;rlichen Methyl Anthranilat durch mikrobielle N-Demethylierung von N-Methyl-Methyl-Anthranilat durch den Mutterboden-isolierte Bakterium Bacillus Megaterium.

Bacillus megaterium, isolato in un processo di screening da terriccio, &egrave; stato utilizzato per N-demetilazione del naturale antranilato di metile N-metilico per produrre antranilato di metile naturale. Produttivit&agrave; massima di 70 mg/L/giorno &egrave; stato ottenuto in condizioni di laboratorio senza ulteriore ottimizzazione. No sottoprodotti sono stati osservati. Cos&igrave;, la produzione di antranilato di metile &quot;naturale&quot; utilizzando megaterium b. &egrave; un miglioramento significativo sopra analoghe procedure gi&agrave; esistenti.

Produzione di antranilato di metile naturale da microbica N-demetilazione del N-metil antranilato di metile dal terriccio-isolato batterio Bacillus megaterium.

&#x30D0;&#x30AD;&#x30EB;&#x30B9; &#x30E1;&#x30AC;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3001;&#x8868;&#x571F;&#x304B;&#x3089;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x5206;&#x96E2;&#x81EA;&#x7136; N &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x306E; N &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x306E;&#x81EA;&#x7136;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x6027;&#x306E; 70 mg/L/&#x65E5;&#x306E;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x306A;&#x3057;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x5BA4;&#x898F;&#x6A21;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x4E0B;&#x3067;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x526F;&#x7523;&#x7269;&#x306F;&#x8A8D;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;B. &#x30E1;&#x30AC;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x300C;&#x81EA;&#x7136;&#x306A;&#x300D;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x6539;&#x5584;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x5339;&#x6575;&#x306E;&#x65E2;&#x306B;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x8868;&#x571F;&#x5206;&#x96E2;&#x83CC;&#x30D0;&#x30AD;&#x30EB;&#x30B9; &#x30E1;&#x30AC;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x308B; N-&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x306E;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269; N-&#x8131;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x81EA;&#x7136;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30A2;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30CB;&#x30EB;&#x9178;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x3002;

&#xADE0; megaterium, &#xD45C; &#xD1A0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xACFC;&#xC815;&#xC5D0; &#xACA9;&#xB9AC; &#xC790;&#xC5F0; N-&#xBA54; &#xD2F8; &#xBA54; &#xD2F8; anthranilate&#xC758; N-demethylation &#xC790;&#xC5F0; &#xBA54; &#xD2F8; anthranilate &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 70 Mg/L&#xC758; &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC131;/&#xD558;&#xB8E8; &#xCD94;&#xAC00; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xADDC;&#xBAA8; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC544;&#xB2C8; &#xBD80;&#xC0B0;&#xBB3C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &quot;&#xC790;&#xC5F0;&quot; &#xBA54; &#xD2F8; anthranilate B. megaterium&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xB300; &#xB4F1; &#xC774;&#xBBF8; &#xAE30;&#xC874; &#xD504;&#xB85C;&#xC2DC;&#xC800; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC1C;&#xC120; &#xC774;&#xB2E4;.

Demethylation N-&#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C;&#xC758; &#xD45C; &#xD1A0; &#xACA9;&#xB9AC; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xADE0; megaterium&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; N-&#xBA54; &#xD2F8; &#xBA54; &#xD2F8; anthranilate&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC790;&#xC5F0; &#xBA54; &#xD2F8; anthranilate&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;.

Bacillus megaterium, aislado en un proceso de selecci&oacute;n de la capa superior del suelo, se utiliz&oacute; para n-desmetilaci&oacute;n de natural N-metil antranilato de metilo para producir antranilato de metilo natural. Productividad m&aacute;xima de 70 mg/L/d&iacute;a fue alcanzado bajo condiciones de laboratorio sin mayor optimizaci&oacute;n. No se observan ningunos subproductos. As&iacute;, la producci&oacute;n de antranilato de metilo &quot;natural&quot; usando B. megaterium es una mejora significativa sobre procedimientos comparables ya existentes.

Producci&oacute;n de antranilato de metilo natural por n-desmetilaci&oacute;n microbiano de N-metil antranilato de metilo por el suelo-aislado de la bacteria Bacillus megaterium.

&#x6C27;&#x5316; N-&#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x4F7F;&#x7528;&#x5206;&#x79BB;&#x8868;&#x571F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x751F;&#x7269;&#x50AC;&#x5316;&#x5242;&#x7684; N&#xFF0C;N dialkylarylamines N&#xFF0C;N-&#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x7684;&#x5DE8;&#x5927;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x5B75;&#x5316;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7528;&#x6765;&#x8861;&#x91CF; N-&#x4E8C;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x80FA;&#x548C; N-&#x4E59;&#x57FA;-N-&#x7532;&#x82EF;&#x80FA;&#x3002;&#x5EFA;&#x5236;&#x7684;&#x7532;&#x919B;&#xFF0C;&#x901A;&#x5E38;&#x96BE;&#x4EE5;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x4EE3;&#x8C22;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5206;&#x6790;&#x751F;&#x7269;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x6210;&#x529F;&#x88AB;&#x56F0;&#x5E76;&#x901A;&#x8FC7;&#x534A;&#x80F1;&#x80FA;&#x52A0;&#x5165;&#x5B75;&#x5316;&#x4ECB;&#x8D28;&#x8F6C;&#x6362;&#x4E3A;&#x567B;&#x5511;&#x70F7;&#x3002;&#x7814;&#x7A76;&#x4F7F;&#x7528; N&#x3001; N-di-(trideutero-methyl)-&#x82EF;&#x80FA;&#x548C; N-&#x4E59;&#x57FA;-N-(trideuteromethyl)-&#x82EF;&#x80FA;&#x4EE5;&#x53CA; N&#xFF0C;N-&#x8FEA;-[&#x7532;&#x57FA;-(13) C]-&#x82EF;&#x80FA;&#x548C; N-ethyl-N-[methyl-(13)C]-aniline &#x8FDB;&#x884C;&#x786E;&#x8BA4; N-&#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x6536;&#x76CA;&#x901A;&#x8FC7;&#x7532;&#x919B;&#x3002;

&#x901A;&#x8FC7; N&#xFF0C;N-dialkylarylamines &#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x534A;&#x80F1;&#x80FA;&#x884D;&#x751F;&#x5DE8;&#x5927;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x6C27;&#x5316; N-&#x53BB;&#x7532;&#x57FA;&#x5316;&#x5F62;&#x6210;&#x76F4;&#x63A5;&#x9677;&#x5370;&#x7684;&#x7532;&#x919B;&#x3002;

Oxidative N-demethylation was measured by incubation experiments using Bacillus megaterium isolated from topsoil as a biocatalyst for the N-demethylation of the N,N-dialkylarylamines N,N-dimethylaniline and N-ethyl-N-methylaniline. Formed formaldehyde, normally difficult to analyse in biological systems because of further metabolization, was successfully trapped and converted into thiazolidine by addition of cysteamine into the incubation media. Studies using N,N-di-(trideutero-methyl)-aniline and N-ethyl-N-(trideuteromethyl)-aniline as well as N,N-di-[methyl-(13)C]-aniline and N-ethyl-N-[methyl-(13)C]-aniline were performed to confirm that the N-demethylation proceeds via formaldehyde.

Direct trapping of formaldehyde formed via oxidative N-demethylation of N,N-dialkylarylamines by Bacillus megaterium using cysteamine derivatization.

Oxydante N-d&eacute;m&eacute;thylation a &eacute;t&eacute; mesur&eacute;e par des exp&eacute;riences d&#39;incubation &agrave; l&#39;aide de Bacillus megaterium isol&eacute; de la terre v&eacute;g&eacute;tale comme un biocatalyseur pour la N-d&eacute;m&eacute;thylation de la N, N-dialkylarylamines N, N-dim&eacute;thylaniline et N-&eacute;thyl-N-m&eacute;thylaniline. Form&eacute; de formald&eacute;hyde, normalement difficile &agrave; analyser dans les syst&egrave;mes biologiques &agrave; cause davantage de m&eacute;tabolisation, a &eacute;t&eacute; avec succ&egrave;s pris au pi&egrave;ge et converti en thiazolidine par addition de cyst&eacute;amine dans le milieu d&#39;incubation. Les &eacute;tudes utilisant N, N-di-(trideutero-methyl)-aniline et N-&eacute;thyl - N-(trideuteromethyl) - aniline comme N, N - di-[m&eacute;thyl-(13) C] - aniline et N-ethyl-N-[methyl-(13)C]-aniline ont &eacute;t&eacute; effectu&eacute;es pour confirmer que la N-d&eacute;m&eacute;thylation proc&egrave;de par l&#39;interm&eacute;diaire de formald&eacute;hyde.

Recouvrement direct de formald&eacute;hyde form&eacute;e par l&#39;interm&eacute;diaire d&#39;oxydative N-d&eacute;m&eacute;thylation de N, N-dialkylarylamines de Bacillus megaterium, &agrave; l&#39;aide de la d&eacute;rivation de la cyst&eacute;amine.

Oxidative N-Demethylierung wurde mittels Inkubation-Experimente, die mit Bacillus Megaterium isoliert von Mutterboden als ein Biokatalysator f&uuml;r den N-Demethylierung von N, N-Dialkylarylamines-N, N-Dimethylanilin und N-Ethyl-N-Methylaniline. Gebildete Formaldehyd, normalerweise schwierig, wegen weiterer Metabolization, in biologischen Systemen zu analysieren wurde erfolgreich gefangen und durch Zugabe von Cysteamin in die Inkubation-Medien in Thiazolidin umgewandelt. Studien mit N, N-di-(trideutero-methyl)-Anilin und N-Ethyl - N-(Trideuteromethyl) - Anilin wie N, N - di-[Methyl-(13) C] - Anilin und N-ethyl-N-[methyl-(13)C]-aniline wurden durchgef&uuml;hrt, um zu best&auml;tigen, dass die N-Demethylierung &uuml;ber Formaldehyd verl&auml;uft.

Direkte Trapping von Formaldehyd gebildet &uuml;ber oxidative N-Demethylierung von N, N-Dialkylarylamines von Bacillus Megaterium mit Cysteamin Derivatisierung.

N-demetilazione ossidativa &egrave; stata misurata mediante esperimenti di incubazione utilizzando Bacillus megaterium isolato da terriccio come un biocatalizzatore per la N-demetilazione del N, N-dialkylarylamines N, N-dimetilanilina e N-etil-N-metilanilina. Formato formaldeide, normalmente difficili da analizzare in sistemi biologici a causa di ulteriore metabolizzazione, &egrave; stato con successo intrappolato e convertito in thiazolidine tramite l&#39;aggiunta di cisteammina in media di incubazione. Studia con N, N-di-(trideutero-methyl)-anilina e N-etil - N-(trideuteromethyl) - anilina cos&igrave; come N, N - di-[metil-(13) C] - anilina e N-ethyl-N-[methyl-(13)C]-aniline sono stati eseguiti per confermare che la N-demetilazione procede via formaldeide.

Cattura diretta di formaldeide formata tramite N-demetilazione ossidativa di N, N-dialkylarylamines da Bacillus megaterium mediante derivatizzazione cisteammina.

&#x9178;&#x5316;&#x7684; N &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30D0;&#x30AD;&#x30EB;&#x30B9; &#x30E1;&#x30AC;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x8868;&#x571F;&#x304B;&#x3089;&#x751F;&#x4F53;&#x89E6;&#x5A92;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x305F; n, N dialkylarylamines N, N &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x57F9;&#x990A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F; n-&#x30B8;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x30A2;&#x30CB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068; N-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB;-N-methylaniline&#x3002;&#x5F62;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DB;&#x30EB;&#x30E0;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x3001;&#x901A;&#x5E38;&#x751F;&#x7269;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x56F0;&#x96E3;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x6B63;&#x5E38;&#x306B;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x30C1;&#x30A2;&#x30BE;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x306B;&#x6DFB;&#x52A0;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x7814;&#x7A76; N, N-&#x30C7;&#x30A3;-(trideutero-methyl) &#x30A2;&#x30CB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068; N-&#x30A8;&#x30C1;&#x30EB; - N-(trideuteromethyl) - &#x30A2;&#x30CB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068;&#x3057;&#x3066; N, N - &#x30C7;&#x30A3;-[&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;-(13) C] - &#x30A2;&#x30CB;&#x30EA;&#x30F3;&#x3068; N-ethyl-N-[methyl-(13)C]-aniline N &#x30E1;&#x30C1;&#x30EB; &#x30DB;&#x30EB;&#x30E0;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x7D4C;&#x7531;&#x3067;&#x9032;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x30DB;&#x30EB;&#x30E0;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E; N, N-dialkylarylamines &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x8A98;&#x5C0E;&#x4F53;&#x5316;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30D0;&#x30AD;&#x30EB;&#x30B9; &#x30E1;&#x30AC;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9178;&#x5316;&#x7684; N-&#x8131;&#x30E1;&#x30C1;&#x30EB;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;

&#xC0B0;&#xD654; N demethylation N dialkylarylamines N N N demethylation&#xB97C; biocatalyst&#xB85C; &#xD45C; &#xD1A0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB41C; &#xADE0; megaterium&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD80; &#xD654; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCE21;&#xC815; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; N dimethylaniline&#xACFC; N-&#xC5D0;&#xD2F8;-N-methylaniline. &#xD615;&#xC131;&#xB41C; &#xB41C; &#xD3EC; &#xB984; &#xC54C; &#xB370;&#xD788;&#xB4DC;, &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB354; metabolization &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xAE30; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6B4; &#xAC07;&#xD600; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; cysteamine&#xC758; &#xBD80; &#xD654; &#xBBF8;&#xB514;&#xC5B4;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; thiazolidine&#xB85C; &#xBCC0;&#xD658; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; N, N-&#xB514;-(trideutero-methyl)-&#xC544;&#xB2D0;&#xB9B0;, N-&#xC5D0;&#xD2F8;-N-(trideuteromethyl)-&#xC544;&#xB2D0;&#xB9B0; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; N, N-&#xB514;-[&#xBA54; &#xD2F8;-(13) C]-&#xC544;&#xB2D0;&#xB9B0;&#xACFC; N-ethyl-N-[methyl-(13)C]-aniline N demethylation &#xD3EC; &#xB984; &#xC54C; &#xB370;&#xD788;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C4;&#xD589; &#xD655;&#xC778;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xD3EC; &#xB984; &#xC54C; &#xB370;&#xD788;&#xB4DC;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xD2B8;&#xB798;&#xD551; &#xC0B0;&#xD654; N-n, N-dialkylarylamines &#xADE0; megaterium cysteamine derivatization&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; demethylation&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD615;&#xC131;.

N-desmetilaci&oacute;n oxidativo se midi&oacute; por experimentos de incubaci&oacute;n con Bacillus megaterium aislado del suelo como un biocatal&iacute;tica para el N-desmetilaci&oacute;n de la N, N-dialkylarylamines N, N-dimetilanilina y N-ethyl-N-metilanilina. Formado formaldeh&iacute;do, normalmente dif&iacute;cil de analizar en sistemas biol&oacute;gicos debido a mayor metabolizaci&oacute;n, con &eacute;xito fue atrapado y convertido en tiazolidina por adici&oacute;n de cisteamina en el medio de incubaci&oacute;n. Estudios con N, N-di-(trideutero-methyl)-anilina y N-ethyl - N-(trideuteromethyl) - anilina as&iacute; como N, N - di-[metil-(13) C] - anilina y N-ethyl-N-[methyl-(13)C]-aniline fueron realizados para confirmar que la n-desmetilaci&oacute;n procede v&iacute;a formaldeh&iacute;do.

Captura directa de formaldeh&iacute;do formado v&iacute;a n-desmetilaci&oacute;n oxidativo de N, N-dialkylarylamines por Bacillus megaterium utilizando derivatizaci&oacute;n cisteamina.

&#x8FD9;&#x7BC7;&#x6587;&#x7AE0;&#x603B;&#x7ED3;&#x4E86;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x5B8F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5B66;&#x7684;&#x4E00;&#x822C;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x539F;&#x5219;&#x3002;&#x91CD;&#x70B9;&#x662F;&#x5BF9;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x5BBF;&#x4E3B;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x66FF;&#x4EE3;&#x4E3B;&#x673A;&#x77E2;&#x91CF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x90FD;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E86;&#x5728;&#x4F18;&#x5316;&#x57FA;&#x56E0;&#x6062;&#x590D;&#x57FA;&#x4E8E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7684;&#x5C4F;&#x5E55;&#x4E2D;&#x3002;DNA &#x5206;&#x79BB;&#x4E0E;&#x6D53;&#x7F29;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3001; &#x56FE;&#x4E66;&#x9986;&#x5EFA;&#x8BBE;&#x548C;&#x8868;&#x578B;&#x8BFB;&#x51FA;&#x7684;&#x4F8B;&#x5B50;&#x63CF;&#x8FF0;&#x90FD;&#x7279;&#x522B;&#x5F3A;&#x8C03;&#x9AD8;&#x541E;&#x5410;&#x91CF;&#x6280;&#x672F;&#x7528;&#x4E8E;&#x5FEB;&#x901F;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x73AF;&#x5883;&#x514B;&#x9686;&#x7F16;&#x7801;&#x8868;&#x578B;&#x6027;&#x72B6;&#x7684;&#x5174;&#x8DA3;&#x3002;

&#x827A;&#x672F;&#x4E0E;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x83CC;&#x5B8F;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x5C4F;&#x5E55;&#x3002;

This article summarizes general design principles for functional metagenomics. The focus is on Escherichia coli as an expression host, although alternative host-vector systems are discussed in relation to optimizing gene recovery in activity-based screens. Examples of DNA isolation and enrichment approaches, library construction and phenotypic read-out are described with special emphasis on the use of high throughput technologies for rapid isolation of environmental clones encoding phenotypic traits of interest.

The art and design of functional metagenomic screens.

Cet article r&#xE9;sume les principes g&#xE9;n&#xE9;raux de conception pour la m&#xE9;tag&#xE9;nomique fonctionnels. L&#x26;#39;accent est mis sur Escherichia coli comme h&#xF4;te d&#x26;#39;expression, bien que d&#x26;#39;autres syst&#xE8;mes h&#xF4;te-vecteur sont discut&#xE9;es en relation avec la r&#xE9;cup&#xE9;ration du g&#xE8;ne d&#x26;#39;optimisation de l&#x26;#39;activit&#xE9; &#xE0; base d&#x26;#39;&#xE9;crans. Exemples d&#x26;#39;isolement de l&#x26;#39;ADN et les approches d&#x26;#39;enrichissement, construction de la biblioth&#xE8;que et ph&#xE9;notypiques de lecture sont d&#xE9;crits avec un accent particulier sur l&#x26;#39;utilisation de technologies &#xE0; haut d&#xE9;bit pour l&#x26;#39;isolement rapide de clones codant pour l&#x26;#39;environnement des traits ph&#xE9;notypiques d&#x26;#39;int&#xE9;r&#xEA;t.

L&#x26;#39;art et la conception des &#xE9;crans fonctionnels m&#xE9;tag&#xE9;nomiques

Dieser Artikel beschreibt allgemeine Design-Prinzipien f&uuml;r funktionale Metagenomik. Der Schwerpunkt liegt auf Escherichia coli als Ausdruck Host, obwohl Alternativen Host-Vektor-Systeme in Bezug auf die Optimierung von Gen-Erholung in ma&szlig;nahmenbezogenen Bildschirme diskutiert werden. Beispiele f&uuml;r DNA Isolierung und Bereicherung Ans&auml;tze, Bibliotheksbau und ph&auml;notypische Auslesen werden mit besonderem Schwerpunkt auf die Verwendung von Hochdurchsatz-Technologien f&uuml;r die schnelle Isolierung Umwelt Klone Codierung ph&auml;notypische Merkmale von Interesse beschrieben.

Die Kunst und Design von funktionalen durchgef&uuml;hrte metagenomische Bildschirmen.

Questo articolo riassume i principi di progettazione generali per metagenomica funzionale. Il focus &egrave; su Escherichia coli come un host di espressione, anche se sistemi alternativi ospite-vettore sono discusse in relazione al recupero del gene in schermi basati su attivit&agrave; di ottimizzazione. Esempi di approcci di isolamento e di arricchimento del DNA, costruzione della libreria e read-out fenotipiche sono descritti con particolare enfasi sull&#39;uso delle tecnologie high throughput per rapido isolamento dei cloni ambientali codifica tratti fenotipici di interesse.

L&#39;arte e il design degli schermi metagenomica funzionale.

&#x3053;&#x306E;&#x8CC7;&#x6599;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x30E1;&#x30BF;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x8A2D;&#x8A08;&#x539F;&#x5247;&#x3092;&#x307E;&#x3068;&#x3081;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x4EE3;&#x66FF;&#x5BBF;&#x4E3B; - &#x30D9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7CFB;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3067;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x56DE;&#x5FA9;&#x3068;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3067;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x7126;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306B;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; DNA&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x3068;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3001;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30E9;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3068;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x8AAD;&#x307F;&#x51FA;&#x3057;&#x306E;&#x4F8B;&#x306F;&#x3001;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x5F62;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x8FC5;&#x901F;&#x306A;&#x5206;&#x96E2;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30CF;&#x30A4;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30C3;&#x30C8;&#x6280;&#x8853;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x7279;&#x5225;&#x306A;&#x91CD;&#x70B9;&#x3092;&#x7F6E;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC774; &#xBB38;&#xC11C; &#xC694;&#xC57D; &#xAE30;&#xB2A5; metagenomics&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xC6D0;&#xCE59;. &#xD3EC;&#xCEE4;&#xC2A4;&#xB294; &#xC2DD; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB85C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC5D0; &#xB300;&#xCCB4; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBCA1;&#xD130; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xAE30;&#xCD08;&#xB97C; &#xB454; &#xC2A4;&#xD06C;&#xB9B0;&#xC5D0; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD558;&#xC5EC; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC;. DNA &#xBD84;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xB18D;&#xCD95; &#xBC29;&#xBC95;, &#xB3C4;&#xC11C;&#xAD00; &#xAC74;&#xC124; phenotypic &#xC77D;&#xC5B4;&#xC758; &#xC608; &#xAD00;&#xC2EC; phenotypic &#xD2B9;&#xC131; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xD658;&#xACBD; &#xD074;&#xB860;&#xC758; &#xC2E0;&#xC18D;&#xD55C; &#xACA9;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xAE30;&#xC220;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD2B9;&#xBCC4; &#xD55C; &#xAC15;&#xC870;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC124;&#xBA85; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC608;&#xC220;&#xACFC; &#xB514;&#xC790;&#xC778;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC131; metagenomic &#xD654;&#xBA74;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Este art&#xED;culo resume los principios generales de dise&#xF1;o para la metagen&#xF3;mica funcionales. La atenci&#xF3;n se centra en Escherichia coli como una expresi&#xF3;n de acogida, a pesar de alternativas hu&#xE9;sped-vector sistemas se discuten en relaci&#xF3;n a la recuperaci&#xF3;n de la optimizaci&#xF3;n en el gen basados &#x200B;&#x200B;en la actividad de las pantallas. Ejemplos de aislamiento de ADN y los enfoques de enriquecimiento, construcci&#xF3;n de la biblioteca y fenot&#xED;pica leer-se describen con especial &#xE9;nfasis en el uso de tecnolog&#xED;as de alto rendimiento para el aislamiento r&#xE1;pido de los clones ambientales que codifican rasgos fenot&#xED;picos de inter&#xE9;s.

Marcus Taupp

Department of Microbiology and Immunology,
Microbiology and Immunology

University of British Columbia - UBC

Large Insert Environmental Genomic Library Production

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

A High Throughput Screen for Biomining Cellulase Activity from Metagenomic Libraries

Marcus Taupp

Department of Microbiology and Immunology,Microbiology and Immunology

University of British Columbia - UBC

Large Insert Environmental Genomic Library Production

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

A High Throughput Screen for Biomining Cellulase Activity from Metagenomic Libraries

Department of Microbiology and Immunology,
Microbiology and Immunology