in-vivo-imaging-of-deep-cortical-layers-using-a-microprism

<em>In vivo</em> Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

We present a protocol for in vivo imaging of cortical tissue using a deep-brain imaging probe in the shape of a microprism.  Microprisms are 1-mm in size ...

multiphoton-microscopy-of-cleared-mouse-brain-expressing-yfp

Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP

Multiphoton microscopy of intrinsic fluorescence and second harmonic generation (SHG) of whole mouse organs is made possible by optically clearing the ...

Yale University

&#x867D;&#x7136;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5DF2;&#x88AB;&#x8BC1;&#x660E;&#x662F;&#x5728;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x4E2D;&#x6700;&#x6709;&#x529B;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x4E4B;&#x4E00;&#xFF0C;&#x5176;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x5DF2;&#x88AB;&#x9650;&#x5236;&#x4E3A;&#x6210;&#x50CF;&#x5728;&#x5730;&#x8868;&#x4EE5;&#x4E0B;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A;&#x51E0;&#x767E;&#x5FAE;&#x7C73;&#x3002;&#x5176;&#x4F59;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x65E0;&#x9700;&#x526A;&#x53BB;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6216;&#x6267;&#x884C;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x624B;&#x672F;&#x672A;&#x80FD;&#x5728;&#x5FAE;&#x89C2;&#x5C42;&#x9762;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E0E;&#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51B3;&#x8BAE;&#x4E2D;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#x5F62;&#x8C61;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x4F7F;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x6B63;&#x786E;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x3002;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#xFF0C;&#x5982;&#x75BE;&#x75C5;&#x7684;&#x8BCA;&#x65AD;&#x548C;&#x5149;&#x5B66;&#x6D3B;&#x68C0;&#x53EF;&#x80FD;&#x53D7;&#x76CA;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5185;&#x5FAE;&#x521B;&#x624B;&#x672F;&#x3002;&#x68AF;&#x5EA6;&#x6298;&#x5C04;&#x7387; (&#x7B11;) &#x955C;&#x7247;&#x4E0E;&#x9488;&#x6837;&#x5C3A;&#x5BF8;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4ECE;&#x5BF9;&#x8C61;&#x5E73;&#x9762;&#x4F20;&#x8F93;&#x9AD8;&#x8D28;&#x91CF;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x5F88;&#x591A;&#x5398;&#x7C73;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x901A;&#x8FC7;&#x68AF;&#x5EA6;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x900F;&#x955C;&#x7684;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4F7F;&#x5FAE;&#x521B;&#x3001; &#x4E9A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51B3;&#x8BAE;&#x9EBB;&#x9189;&#x3001; &#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x52A8;&#x7269;&#xFF0C;&#x5728;&#x51E0;&#x4E2A;&#x6BEB;&#x7C73;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x4F53;&#x5185;&#x76AE;&#x8D28;&#x5C42; V &#x548C;&#x6D77;&#x9A6C;&#x56FE;&#x50CF;&#x4E2D;&#x9EBB;&#x9189; Thy1 YFP H &#x7EBF;&#x9F20;&#x6807;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#x5C06;&#x6F14;&#x793A;&#x5982;&#x4F55;&#x4ECE;&#x6DF1;&#x5C42;&#x6BDB;&#x7EC6;&#x8840;&#x7BA1;&#x548C;&#x8840;&#x7BA1;&#x542B;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;-&#x8461;&#x805A;&#x7CD6;&#x548C;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9;&#x6807;&#x8BB0;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x5927;&#x8111;&#x4E2D;&#x7684;&#x8840;&#x6E05; Microangiographies&#x3002;

&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x8111;&#x6DF1;&#x90E8;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;

Although fluorescence microscopy has proven to be one of the most powerful tools in biology, its application to the intact animal has been limited to imaging several hundred micrometers below the surface. The rest of the animal has eluded investigation at the microscopic level without excising tissue or performing extensive surgery. However, the ability to image with subcellular resolution in the intact animal enables a contextual setting that may be critical for understanding proper function. Clinical applications such as disease diagnosis and optical biopsy may benefit from minimally invasive in vivo approaches. Gradient index (GRIN) lenses with needle-like dimensions can transfer high-quality images many centimeters from the object plane. Here, we show that multiphoton microscopy through GRIN lenses enables minimally invasive, subcellular resolution several millimeters in the anesthetized, intact animal, and we present in vivo images of cortical layer V and hippocampus in the anesthetized Thy1-YFP line H mouse. Microangiographies from deep capillaries and blood vessels containing fluorescein-dextran and quantum dot-labeled serum in wild-type mouse brain are also demonstrated.

In vivo multiphoton microscopy of deep brain tissue.

Bien que la microscopie par fluorescence s&#x26;#39;est r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9;e &#xEA;tre l&#x26;#39;un des outils les plus puissants de la biologie, son application &#xE0; l&#x26;#39;animal intact a &#xE9;t&#xE9; limit&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;imagerie de plusieurs centaines de microm&#xE8;tres sous la surface. Le reste de l&#x26;#39;animal a &#xE9;chapp&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;enqu&#xEA;te &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;chelle microscopique, sans excision des tissus ou d&#x26;#39;effectuer une chirurgie lourde. Toutefois, la capacit&#xE9; de l&#x26;#39;image avec une r&#xE9;solution subcellulaire chez l&#x26;#39;animal intact permet un r&#xE9;glage contextuelle qui peut &#xEA;tre critique pour la compr&#xE9;hension de son bon fonctionnement. Les applications cliniques telles que le diagnostic des maladies et biopsie optique peuvent b&#xE9;n&#xE9;ficier d&#x26;#39;une mini-invasive des approches in vivo. Gradient d&#x26;#39;indice (GRIN) lentilles avec une aiguille-telles que les dimensions peuvent transf&#xE9;rer des images haute qualit&#xE9; de plusieurs centim&#xE8;tres par rapport au plan objet. Ici, nous montrons que la microscopie multiphotonique &#xE0; travers des lentilles GRIN permet minimalement invasives, millim&#xE8;tres r&#xE9;solution subcellulaires plusieurs dans le anesth&#xE9;si&#xE9;, animal intact, et nous pr&#xE9;sentons des images in vivo de V couche corticale et de l&#x26;#39;hippocampe chez la souris anesth&#xE9;si&#xE9;e Thy1-YFP ligne H. Microangiographies de profonde capillaires et les vaisseaux sanguins contenant de fluoresc&#xE9;ine-dextran et des points quantiques marqu&#xE9; le s&#xE9;rum dans le cerveau de la souris de type sauvage sont &#xE9;galement expliqu&#xE9;s.

En microscopie multiphotonique in vivo de tissus c&#xE9;r&#xE9;brale profonde

In vivo Mehrphotonenmikroskopie tiefer Hirngewebe.

Sebbene la microscopia di fluorescenza ha dimostrato di essere uno degli strumenti pi&ugrave; potenti in biologia, sua applicazione all&#39;animale intatto &egrave; stata limitata a diverse centinaia di micrometri sotto la superficie di imaging. Il resto dell&#39;animale ha eluso le indagini a livello microscopico senza asportare il tessuto o l&#39;esecuzione di intervento chirurgico. Tuttavia, la capacit&agrave; di immagine con risoluzione sottocellulari nell&#39;animale intatto consente un&#39;impostazione contestuale che possa essere critica per la comprensione corretta funzione. Applicazioni cliniche come la diagnosi di malattia e biopsia ottica possono trarre beneficio da approcci minimamente invasivi in vivo. Lenti gradiente indice (GRIN) con ago-come dimensioni possono trasferire immagini di alta qualit&agrave; molti centimetri dal piano dell&#39;oggetto. Mostriamo qui, microscopia multifotonica attraverso lenti GRIN permette minimamente invasiva, sottocellulari risoluzione parecchi millimetri nell&#39;animale anestetizzato, intatta, che presentiamo in vivo immagini dello strato corticale V e ippocampo nel mouse linea H Thy1-YFP anestetizzato. Microangiographies dal profondi dei capillari e vasi sanguigni contenente siero fluorescina-Destrano e quantum dot-etichettati nel cervello del mouse wild-type sono anche dimostrato.

In vivo microscopia multifotonica del tessuto cerebrale profonda.

&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x3067;&#x6700;&#x3082;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x8A3C;&#x660E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x8868;&#x9762;&#x4E0B;&#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x6570;&#x767E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x6B8B;&#x308A;&#x306E;&#x90E8;&#x5206;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x5207;&#x9664;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x624B;&#x8853;&#x3092;&#x884C;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5FAE;&#x8996;&#x7684;&#x306A;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3092;&#x9003;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x52D5;&#x7269;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306B;&#x80FD;&#x529B;&#x304C;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x6587;&#x8108;&#x306E;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x75BE;&#x60A3;&#x306E;&#x8A3A;&#x65AD;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x751F;&#x691C;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x5FDC;&#x7528;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3067;&#x4F4E;&#x4FB5;&#x8972;&#x306E;&#x6069;&#x6075;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x52FE;&#x914D;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#xFF08;GRIN&#xFF09;&#x91DD;&#x72B6;&#x306E;&#x6B21;&#x5143;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306F;&#x3001;&#x7269;&#x4F53;&#x9762;&#x304B;&#x3089;&#x9AD8;&#x54C1;&#x8CEA;&#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C1;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#x3092;&#x8EE2;&#x9001;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;GRIN&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x9EBB;&#x9154;&#x3092;&#x304B;&#x3051;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x52D5;&#x7269;&#x306B;&#x4F4E;&#x4FB5;&#x8972;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x6570;mm&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x9EBB;&#x9154;THY1-YFP&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;H&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x5C64;V&#x3068;&#x6D77;&#x99AC;&#x306E;in vivo&#x753B;&#x50CF;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D5;&#x30EB;&#x30AA;&#x30EC;&#x30BB;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x3001;&#x91CF;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x6DF1;&#x3044;&#x6BDB;&#x7D30;&#x8840;&#x7BA1;&#x3084;&#x8840;&#x7BA1;&#x304B;&#x3089;Microangiographies&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8133;&#x5185;&#x3067;&#x8840;&#x6E05;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x6A19;&#x8B58;&#x3082;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6DF1;&#x90E8;&#x8133;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;in vivo&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;

&#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xD559;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xAC00;&#xC7A5; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C; &#xC911; &#xD558;&#xB098; &#xC785;&#xC99D; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;, &#xBE44;&#xB85D; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xD45C;&#xBA74; &#xC544;&#xB798; &#xBA87; &#xBC31; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C;&#xBBF8;&#xD130;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC758; &#xB098;&#xBA38;&#xC9C0; &#xC870;&#xC9C1; &#xC808; &#xAC1C; &#xB610;&#xB294; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC218;&#xC220;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; &#xBBF8;&#xC138;&#xD55C; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xBC97;&#xC5B4;&#xB0AC;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xAE30;&#xB2A5; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB3D9;&#xBB3C; subcellular &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC0C1;&#xD669;&#xBCC4; &#xC124;&#xC815;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC784;&#xC0C1; &#xC751;&#xC6A9; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xBC0F; &#xAD11; &#xC0DD; &#xAC80; &#xB4F1; &#xCE68; &#xC2B5; vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD61C;&#xD0DD;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC14;&#xB298; &#xAC19;&#xC740; &#xCE58;&#xC218;&#xC640; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC778;&#xB371;&#xC2A4; (&#xBBF8;&#xC18C;) &#xB80C;&#xC988; &#xAC1C;&#xCCB4; &#xD3C9;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9CE;&#xC740; &#xC13C;&#xD2F0;&#xBBF8;&#xD130; &#xB192;&#xC740; &#xD488;&#xC9C8;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC804;&#xC1A1;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBBF8;&#xC18C; &#xB80C;&#xC988;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; multiphoton &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xCD5C;&#xC18C; &#xCE68; &#xC2B5;, subcellular &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xBA87; &#xBC00;&#xB9AC;&#xBBF8;&#xD130; &#xCDE8;, &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB3D9;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD604;&#xC7AC; &#xCDE8; Thy1 YFP H &#xB77C;&#xC778; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; V&#xC640; &#xD574; &#xB9C8;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE4A;&#xC740; &#xBAA8;&#xC138; &#xD608;&#xAD00;&#xACFC; &#xD608;&#xAD00; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C;, fluorescein dextran&#xC640; &#xC591;&#xC790; &#xB3C4;&#xD2B8; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC138;&#xB7FC;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; Microangiographies&#xB3C4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xAE4A;&#xC740; &#xB1CC; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; multiphoton &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Aunque la microscop&#xED;a de fluorescencia ha demostrado ser una de las herramientas m&#xE1;s potentes en la biolog&#xED;a, su aplicaci&#xF3;n al animal intacto se ha limitado a im&#xE1;genes de varios cientos de micras por debajo de la superficie. El resto del animal ha eludido investigaci&#xF3;n a nivel microsc&#xF3;pico sin escisi&#xF3;n de tejido o la realizaci&#xF3;n de cirug&#xED;a extensiva. Sin embargo, la capacidad de imagen con resoluci&#xF3;n subcelular en el animal intacto permite un ajuste contextual que puede ser cr&#xED;tica para la comprensi&#xF3;n de la funci&#xF3;n apropiada. Las aplicaciones cl&#xED;nicas tales como diagn&#xF3;stico de la enfermedad y la biopsia &#xF3;ptica se pueden beneficiar de los enfoques m&#xED;nimamente invasiva en vivo. &#xCD;ndice de gradiente (GRIN) lentes con forma de aguja dimensiones pueden transferir im&#xE1;genes de alta calidad varios cent&#xED;metros desde el plano del objeto. Aqu&#xED;, mostramos que la microscop&#xED;a multifot&#xF3;nica a trav&#xE9;s de lentes GRIN permite m&#xED;nimamente invasivos, varios mil&#xED;metros de resoluci&#xF3;n subcelular en el animal anestesiado, intacto, y se presenta en las im&#xE1;genes in vivo de la V capa cortical y del hipocampo en el rat&#xF3;n anestesiado Thy1-YFP la l&#xED;nea H. Microangiographies desde lo m&#xE1;s profundo los capilares y vasos sangu&#xED;neos que contienen fluoresce&#xED;na-dextrano y de puntos cu&#xE1;nticos marcado con suero en el cerebro de ratones de tipo salvaje tambi&#xE9;n se ha demostrado.

En microscop&#xED;a multifot&#xF3;nica Vivo en el tejido cerebral profunda

&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF; (FLIM) &#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63ED;&#x793A;&#x5C40;&#x90E8;&#x5FAE;&#x73AF;&#x5883;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;NADH&#xFF0C;&#x56FA;&#x6709;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x548C;&#x65E0;&#x5904;&#x4E0D;&#x5728;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x8F85;&#x9176;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x90FD;&#x5F3A;&#x70C8;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x9176;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x539F;&#x6599;&#x8367;&#x5149;&#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x548C;&#x632F;&#x5E45;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x5728;&#x5927;&#x9F20;&#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x5207;&#x7247;&#x663E;&#x793A;&#x7A7A;&#x95F4;&#x72EC;&#x7279;&#x7684; NADH &#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x81EA;&#x5B9A;&#x4E49;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x5904;&#x7406;&#x7B97;&#x6CD5;&#x3002;NADH &#x80F6;&#x7247;&#x56FE;&#x50CF;&#x63A7;&#x5236;&#x3001; &#x766B;&#x75EB;&#x5927;&#x9F20;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6536;&#x96C6;&#x4E86;&#x3002;&#x7A7A;&#x95F4;&#x683C;&#x5C40;&#x7684; NADH &#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5047;&#x8BBE;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x652F;&#x6301;&#xFF0C;NADH &#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x4EE3;&#x8C22;&#x80FD;&#x529B;&#x3001; &#x7EC4;&#x4E4B;&#x95F4;&#x6709;&#x663E;&#x8457;&#x533A;&#x522B;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8D44;&#x6599;&#xFF0C;&#x8BF4;&#x660E;&#x5728;&#x75C5;&#x7406;&#x7269;&#x8D28;&#x4EE3;&#x8C22;&#x56FD;&#x5BB6;&#x3002;

&#x5728;&#x4EBA;&#x6743;&#x7684;&#x56FA;&#x6709;&#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x5927;&#x9F20;&#x8111;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7684;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x7A7A;&#x95F4;&#x72EC;&#x7279;&#x7684; NADH &#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;

Two-photon fluorescence lifetime imaging (FLIM) of molecules can reveal important information on the local microenvironment. NADH, an intrinsic fluorescent molecule and ubiquitous metabolic co-enzyme, has a lifetime that depends strongly on enzymatic binding. We present a custom image-processing algorithm for raw fluorescence lifetime and amplitude data that produces an image showing spatially distinct NADH fluorescence lifetimes in slices of rat and human brain. NADH FLIM images were collected in control and epileptic rat tissue. Differences in spatial patterns of NADH lifetimes support the hypothesis that NADH binding, and thus metabolic capacity, is significantly different between groups. This type of analysis can provide information on metabolic states in pathological material.

Multiphoton fluorescence lifetime imaging of intrinsic fluorescence in human and rat brain tissue reveals spatially distinct NADH binding.

Imagerie biphotonique de vie de fluorescence (FLIM) de mol&#xE9;cules peuvent r&#xE9;v&#xE9;ler des informations importantes sur le microenvironnement local. NADH, une mol&#xE9;cule fluorescente intrins&#xE8;que et omnipr&#xE9;sent m&#xE9;tabolique co-enzyme, a une dur&#xE9;e de vie qui d&#xE9;pend fortement de liaison enzymatique. Nous pr&#xE9;sentons une coutume de traitement d&#x26;#39;image algorithme de vie de fluorescence brute et les donn&#xE9;es d&#x26;#39;amplitude qui produit une image montrant spatialement distinctes NADH de vie de fluorescence dans des tranches de cerveau du rat et l&#x26;#39;homme. Images FLIM NADH ont &#xE9;t&#xE9; recueillies dans le contr&#xF4;le et les tissus du rat &#xE9;pileptique. Les diff&#xE9;rences dans la r&#xE9;partition spatiale de la dur&#xE9;e de vie NADH soutiennent l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que le NADH contraignant, et la capacit&#xE9; ainsi m&#xE9;tabolique, est significativement diff&#xE9;rente entre les groupes. Ce type d&#x26;#39;analyse peut fournir des informations sur les &#xE9;tats m&#xE9;taboliques en mat&#xE9;riel pathologique.

Imagerie multiphotonique de vie de fluorescence de la fluorescence intrins&#xE8;que des tissus c&#xE9;r&#xE9;braux humains et de rat r&#xE9;v&#xE8;le NADH spatialement distinctes reliure

Zwei-Photonen-Fluoreszenz-Lebensdauer-imaging (FLIM) Molek&uuml;le kann wichtige Informationen &uuml;ber die lokalen Mikromilieu enth&uuml;llen. NADH, eine systeminterne fluoreszierende Molek&uuml;l und allgegenw&auml;rtigen metabolische Coenzym, hat eine Lebensdauer, die enzymatische Bindung stark abh&auml;ngt. Wir pr&auml;sentieren einen benutzerdefinierten Bildverarbeitungs-Algorithmus f&uuml;r rohe Fluoreszenz-Lebensdauer und Amplitude-Daten, die erzeugt ein Bild r&auml;umlich unterschiedliche G&uuml;ltigkeitsdauer der NADH-Fluoreszenz in Scheiben Ratte und menschliche Gehirn zeigen. NADH FLIM Bilder wurden in der Kontrolle und epileptische Ratte Gewebe gesammelt. Unterschiede in der r&auml;umlichen Muster von NADH Lebenszeiten unterst&uuml;tzen der Hypothese, dass NADH-Bindung und somit metabolischen Kapazit&auml;t, unterscheidet sich erheblich zwischen den Gruppen. Diese Art der Analyse kann &uuml;ber metabolische Zust&auml;nde in pathologischen Material informieren.

Multiphoton Fluoreszenz-Lebensdauer-Bildgebung der intrinsische Fluoreszenz in Mensch und Ratte Hirngewebe zeigt r&auml;umlich unterschiedliche NADH-Bindung.

Durata due-fotone di fluorescenza (FLIM) di imaging di molecole pu&ograve; rivelare informazioni importanti sul microambiente locale. NADH, una molecola fluorescente intrinseca e onnipresente co-enzima metabolico, ha una durata che dipende fortemente dall&#39;associazione enzimatica. Vi presentiamo un algoritmo di elaborazione immagini personalizzato per durata e ampiezza dati di fluorescenza crudo che produce un&#39;immagine che mostra spazialmente distinte durate di fluorescenza di NADH in fette del cervello umano e del ratto. NADH FLIM immagini furono raccolte nel controllo e nel tessuto ratto epilettico. Differenze nei modelli spaziali di vite NADH supportano l&#39;ipotesi che l&#39;associazione NADH e capacit&agrave; cos&igrave; metabolica, &egrave; significativamente diverse tra i gruppi. Questo tipo di analisi pu&ograve; fornire informazioni sugli stati metabolici nel materiale patologico.

Imaging durata multifotonica fluorescenza della fluorescenza intrinseca nell&#39;uomo e tessuto cerebrale di ratto rivela spazialmente distinti associazione NADH.

&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#xFF08;FLIM&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5C40;&#x6240;&#x5FAE;&#x5C0F;&#x74B0;&#x5883;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002; NADH&#x3001;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x86CD;&#x5149;&#x5206;&#x5B50;&#x3068;&#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30BF;&#x30B9;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x88DC;&#x9175;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x5F37;&#x304F;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x5BFF;&#x547D;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x8133;&#x306E;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x306B;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;NADH&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x753B;&#x50CF;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3068;&#x632F;&#x5E45;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30BF;&#x30E0;&#x753B;&#x50CF;&#x51E6;&#x7406;&#x30A2;&#x30EB;&#x30B4;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3002; NADH FLIM&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306F;&#x3001;&#x5236;&#x5FA1;&#x3068;&#x3066;&#x3093;&#x304B;&#x3093;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x53CE;&#x96C6;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; NADH&#x306E;&#x200B;&#x200B;&#x5BFF;&#x547D;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x9055;&#x3044;NADH&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x7FA4;&#x9593;&#x3067;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x72B6;&#x614B;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D2;&#x30C8;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x8133;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x56FA;&#x6709;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;Binding&#x7A7A;&#x9593;&#x500B;&#x5225;NADH&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

&#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; (FLIM) &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB85C;&#xCEEC; microenvironment&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC54C;&#xC544;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. NADH, &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC790;&#xC640; &#xC720;&#xBE44; &#xCFFC;&#xD130; &#xC2A4; &#xB300;&#xC0AC; &#xACF5;&#xB3D9; &#xD6A8;&#xC18C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xC758;&#xC874; &#xD558;&#xB294; &#xC218;&#xBA85;&#xC774; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC950;&#xC640; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB1CC;&#xC758; &#xC870;&#xAC01;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; NADH &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xC6D0;&#xC2DC; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xBC0F; &#xC9C4;&#xD3ED; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC790; &#xC9C0;&#xC815; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xCC98;&#xB9AC; &#xC54C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC998;&#xC744; &#xC18C;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC81C;&#xC5B4; &#xBC0F; &#xAC04; &#xC9C8; &#xC950; &#xC870;&#xC9C1; NADH FLIM &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC218;&#xC9D1; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. NADH &#xD3C9;&#xC0DD;&#xC758; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xD328;&#xD134;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; NADH &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xACFC; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xB300;&#xC0AC; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xAC00;&#xC124;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0;, &#xADF8;&#xB8F9; &#xAC04;&#xC5D0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xBCD1; &#xC801;&#xC778; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xAD11; &#xBC0F; &#xC950; &#xB1CC; &#xC870;&#xC9C1; multiphoton &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xACF5;&#xAC04;&#xC801; &#xBCC4;&#xAC1C; NADH &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;.

De dos fotones de im&#xE1;genes de fluorescencia vida (Flim) de las mol&#xE9;culas pueden revelar informaci&#xF3;n importante sobre el microambiente local. NADH, una mol&#xE9;cula fluorescente intr&#xED;nseca y ubicua metab&#xF3;lico co-enzima, tiene una duraci&#xF3;n que depende fuertemente de uni&#xF3;n enzim&#xE1;tica. Se presenta una imagen personalizada de algoritmo de procesamiento para toda la vida cruda de fluorescencia y datos de amplitud que produce una imagen que muestra espacialmente distintos tiempos de vida de fluorescencia de NADH en rebanadas de la rata y el cerebro humano. Im&#xE1;genes NADH Fli se recogieron en el control de la rata y el tejido epil&#xE9;ptico. Las diferencias en los patrones espaciales de la vida NADH apoyan la hip&#xF3;tesis de que el NADH vinculante, y la capacidad metab&#xF3;lica por lo tanto, es significativamente diferente entre los grupos. Este tipo de an&#xE1;lisis puede proporcionar informaci&#xF3;n sobre los estados metab&#xF3;licos en material patol&#xF3;gico.

Fotones de im&#xE1;genes de fluorescencia vida de fluorescencia intr&#xED;nseca en el tejido cerebral humano y de rata revela NADH Encuadernaci&#xF3;n lugares distintos

&#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x5C42;&#x5207;&#x7247;&#x5141;&#x8BB8;&#x540C;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x591A;&#x4E2A;&#x76AE;&#x8D28;&#x5C42;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x5207;&#x7247;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x672C;&#x673A;&#x751F;&#x7406;&#x6295;&#x5165;&#x548C;&#x4EA7;&#x51FA;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x4F53;&#x5185;&#x3001; &#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6210;&#x50CF;&#x4FDD;&#x7559;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x4E0A;&#x4E0B;&#x6587;&#xFF0C;&#x5B83;&#x662F;&#x901A;&#x5E38;&#x5C40;&#x9650;&#x4E8E;&#x6DF1;&#x5EA6; &lt; 500 microm&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x591A;&#x4E2A;&#x76AE;&#x8D28;&#x5C42;&#x540C;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x96BE;&#x7531;&#x4E8E;&#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x8D28;&#x7684;&#x5206;&#x5C42;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA; 1 &#x6BEB;&#x7C73; microprisms &#x7528;&#x4E8E;&#x4F53;&#x5185;&#x3001; &#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x7684;&#x76AE;&#x5C42;&#x6210;&#x50CF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x68F1;&#x955C;&#x542F;&#x7528;&#x540C;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x591A;&#x7684;&#x76AE;&#x8D28;&#x5C42;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5C42; V&#xFF0C;&#x4ECE;&#x67D0;&#x4E2A;&#x89D2;&#x5EA6;&#x770B;&#xFF0C;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x5207;&#x7247;&#x7684;&#x7B79;&#x5907;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3002;&#x56FE;&#x50CF;&#x662F;&#x4ECE;&#x9F20;&#x6807;&#x7535;&#x673A;&#x548C;&#x8EAF;&#x4F53;&#x611F;&#x89C9;&#x76AE;&#x5C42;&#x6536;&#x96C6;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x8FD1; 900-microm &#x5168;&#x89C6;&#x91CE;&#x3002;&#x5728;&#x9AD8;&#x653E;&#x5927;&#x500D;&#x6570;&#x6210;&#x50CF;&#x76EE;&#x6807; 1 &#x6BEB;&#x7C73;&#x7684; coverglass &#x6821;&#x6B63;&#xFF0C;&#x51B3;&#x8BAE;&#x662F;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x89E3;&#x51B3;&#x5BF9;&#x4E94;&#x5C42;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x6811;&#x7A81;&#x68D8;&#x3002;&#x56FE;&#x50CF;&#x4F7F;&#x7528;&#x68F1;&#x955C;&#x6536;&#x96C6;&#x53EF;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x4F20;&#x7EDF;&#x5207;&#x7247;&#x5236;&#x5907;&#x4ECE;&#x6536;&#x96C6;&#x5230;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x3002;&#x529F;&#x80FD;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x8840;&#x6D41;&#x91CF;&#x5728;&#x5404;&#x79CD;&#x76AE;&#x5C42;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x8FD8;&#x4ECB;&#x7ECD;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x91CF;&#x5316;&#x7684;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8840;&#x6D41;&#x91CF;&#x548C;&#x6D41;&#x901F;&#x3002;H &amp; E &#x67D3;&#x8272;&#x7684;&#x663E;&#x793A;&#x5468;&#x56F4;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4ECD;&#x4FDD;&#x7559;&#x5728;&#x5176;&#x672C;&#x673A;&#x5206;&#x5C42;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8367;&#x5149;&#x6C0F;&#x5C0F;&#x4F53;&#x67D3;&#x8272;&#x5242;&#x4E0E;&#x7898;&#x5316;&#x4E19;&#x952D;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x635F;&#x5BB3;&#x7684;&#x8BC4;&#x4F30;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x7EC6;&#x80DE;&#x635F;&#x4F24;&#x4EC5;&#x9650;&#x4E8E; &lt; 100 microm &#x4ECE;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x73BB;&#x7483;&#x754C;&#x9762;&#x3002;Microprisms &#x662F;&#x5230;&#x76AE;&#x5C42;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x4F17;&#x591A;&#x4F18;&#x70B9;&#x7684;&#x7B80;&#x5355;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x4F53;&#x5185;&#x591A;&#x5C42;&#x76AE;&#x8D28;&#x6210;&#x50CF;&#x7684; Microprisms&#x3002;

Cortical slices allow for simultaneous imaging of multiple cortical layers. However, slices lack native physiological inputs and outputs. Although in vivo, two-photon imaging preserves the native context, it is typically limited to a depth of <500 microm. In addition, simultaneous imaging of multiple cortical layers is difficult due to the stratified organization of the cortex. We demonstrate the use of 1-mm microprisms for in vivo, two-photon neocortical imaging. These prisms enable simultaneous imaging of multiple cortical layers, including layer V, at an angle typical of slice preparations. Images were collected from the mouse motor and somatosensory cortex and show a nearly 900-microm-wide field of view. At high-magnification imaging using an objective with 1-mm of coverglass correction, resolution is sufficient to resolve dendritic spines on layer V neurons. Images collected using the microprism are comparable to images collected from a traditional slice preparation. Functional imaging of blood flow at various neocortical depths is also presented, allowing for quantification of red blood cell flux and velocity. H&E staining shows the surrounding tissue remains in its native, stratified organization. Estimation of neuronal damage using propidium iodide and a fluorescent Nissl stain reveals cell damage is limited to <100 microm from the tissue-glass interface. Microprisms are a straightforward tool offering numerous advantages for into neocortical tissue.

Microprisms for in vivo multilayer cortical imaging.

Tranches de cortex permet pour l&#x26;#39;imagerie simultan&#xE9;e de plusieurs couches corticales. Toutefois, les tranches n&#x26;#39;ont pas indig&#xE8;nes entr&#xE9;es et sorties physiologiques. Bien que in vivo, l&#x26;#39;imagerie &#xE0; deux photons pr&#xE9;serve le contexte natif, il est g&#xE9;n&#xE9;ralement limit&#xE9;e &#xE0; une profondeur de &#x26;lt;500 microm. En outre, l&#x26;#39;imagerie simultan&#xE9;e de plusieurs couches corticales est difficile en raison de l&#x26;#39;organisation stratifi&#xE9;e du cortex. Nous d&#xE9;montrons l&#x26;#39;utilisation de 1-mm microprismes pour in vivo, l&#x26;#39;imagerie &#xE0; deux photons n&#xE9;ocorticale. Ces prismes permettre l&#x26;#39;imagerie simultan&#xE9;e de plusieurs couches corticales, y compris la couche V, un angle typique de pr&#xE9;parations de tranche. Les images ont &#xE9;t&#xE9; recueillies &#xE0; partir du moteur de la souris et le cortex somatosensoriel et de montrer un champ de pr&#xE8;s de 900 microm &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;chelle de vue. A fort grossissement d&#x26;#39;imagerie utilisant un objectif de 1 mm de correction lamelle, la r&#xE9;solution est suffisante pour r&#xE9;soudre les &#xE9;pines dendritiques des neurones V couche. Images recueillies &#xE0; l&#x26;#39;aide de la microprismes sont comparables &#xE0; des images recueillies &#xE0; partir d&#x26;#39;une pr&#xE9;paration de tranches traditionnelle. L&#x26;#39;imagerie fonctionnelle de la circulation sanguine &#xE0; diff&#xE9;rentes profondeurs du n&#xE9;ocortex est &#xE9;galement pr&#xE9;sent&#xE9;e, permettant de quantifier les flux de globules rouges et de la vitesse. Coloration H &#x26;amp; E montre le tissu environnant reste dans son origine, l&#x26;#39;organisation stratifi&#xE9;e. Estimation de l&#xE9;sions neuronales utilisant l&#x26;#39;iodure de propidium et un colorant fluorescent Nissl r&#xE9;v&#xE8;le des dommages aux cellules est limit&#xE9;e &#xE0; &#x26;lt;100 microm&#xE8;tre de l&#x26;#39;interface avec le tissu de verre. Microprismes sont un outil simple offrant de nombreux avantages pour les tissus en n&#xE9;ocorticale.

Microprismes pour l&#x26;#39;imagerie in vivo corticale multicouche

Kortikale Scheiben erm&ouml;glichen gleichzeitige Darstellung der kortikalen Mehrschichtigkeit. Scheiben fehlt jedoch native physiologische ein- und Ausg&auml;nge. Obwohl in-vivo, zwei-Photonen-Bildgebung den systemeigenen Kontext beibeh&auml;lt, ist es in der Regel beschr&auml;nkt auf eine Tiefe von &lt; 500 Microm. Dar&uuml;ber hinaus ist die simultane Bildgebung der kortikalen Mehrschichtigkeit schwierig, da die geschichteten Organisation des Cortex. Wir demonstrieren die Verwendung von 1-mm-Mikroprismen f&uuml;r in-vivo, zwei-Photonen neokortikalen Bildgebung. Diese Prismen erm&ouml;glichen gleichzeitige Bildgebung mehrere kortikalen Schichten, einschlie&szlig;lich der Schicht V, schr&auml;g typische Scheibe Zubereitungen. Bilder wurden von der Maus Motor und somatosensorischen Kortex gesammelt und zeigen eine fast 900-Microm-weiten Blickfeld. Bei hoher Vergr&ouml;&szlig;erung Bildgebung mit ein Ziel mit 1 mm Deckglas Korrektur, reicht die Aufl&ouml;sung dendritische Dornen auf Schicht V Neuronen zu beheben. Bilder mit der Mikroprismenring gesammelt sind vergleichbar mit Bilder von einer traditionellen Segment Zubereitung gesammelt. Funktionelle Bildgebung der Blutfluss in verschiedenen neokortikalen tiefen wird auch dargestellt, zulassend Quantifizierung der roten Blutzelle Flussmittel und Geschwindigkeit. H &amp; E F&auml;rbung zeigt, dass das umliegende Gewebe im systemeigenen bleibt, geschichtet Organisation. Absch&auml;tzung der neuronalen Sch&auml;den mit Propidium Jodid und einem fluoreszierenden Nissl Fleck zeigt Zellsch&auml;den beschr&auml;nkt sich auf &lt; 100 Microm die Gewebe-Glas-Schnittstelle. Mikroprismen sind ein einfaches Tool bietet zahlreiche Vorteile in neokortikalen Gewebe.

Mikroprismen f&uuml;r in-vivo mehrlagige kortikale Imaging.

Fette corticale consentono per l&#39;imaging simultanea di pi&ugrave; strati corticali. Tuttavia, fette mancano nativi fisiologici ingressi e uscite. Anche se imaging in vivo, due-fotone conserva il contesto nativo, &egrave; in genere limitata ad una profondit&agrave; di &lt; microm 500. Inoltre, imaging simultanea di pi&ugrave; strati corticali &egrave; difficile a causa dell&#39;organizzazione stratificata della corteccia. Noi dimostrare l&#39;uso di 1 mm microprismi per l&#39;imaging in vivo, due-fotone neocorticale. Questi prismi abilitare simultaneo imaging di strati corticali multipli, compreso strato V, con un angolo tipico di fetta preparati. Le immagini sono stati raccolte dal motore del mouse e corteccia somatosensoriale e visualizza un campo visivo di quasi 900-microm-wide. All&#39;imaging di alto ingrandimento utilizzando un obiettivo con 1 mm di correzione coprioggetti, risoluzione &egrave; sufficiente per risolvere le spine dendritiche su neuroni di strato V. Immagini raccolte mediante il microprismi sono paragonabili alle immagini raccolte da una preparazione tradizionale fetta. Imaging funzionale del flusso di sangue a varie profondit&agrave; neocorticale &egrave; anche presentato, consentendo per la quantificazione del flusso di globuli rossi e la velocit&agrave;. H &amp; E spettacoli il tessuto circostante rimane nella sua nativa, la colorazione stratificata e organizzazione. Stima dei danni neuronali utilizzando ioduro di propidium e una fluorescente di Nissl rivela danno cellulare &egrave; limitato a &lt; 100 microm dall&#39;interfaccia di tessuto di vetro. Microprismi sono un semplice strumento che offre numerosi vantaggi nel tessuto neocorticale.

Microprismi per imaging corticale multistrato in vivo.

&#x76AE;&#x8CEA;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x5C64;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x5165;&#x529B;&#x3068;&#x51FA;&#x529B;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; in vivo&#x3067;&#x3001;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AD;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x26;lt;500&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x5C64;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x5927;&#x8133;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x5C64;&#x72B6;&#x7D44;&#x7E54;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x56F0;&#x96E3;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;in vivo&#x3001;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x65B0;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;1 mm&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x6A19;&#x672C;&#x306E;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x89D2;&#x5EA6;&#x3067;&#x3001;V&#x5C64;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x76AE;&#x8CEA;&#x5C64;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x753B;&#x50CF;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x4F53;&#x6027;&#x611F;&#x899A;&#x91CE;&#x304B;&#x3089;&#x53CE;&#x96C6;&#x3057;&#x3001;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306E;&#x307B;&#x307C;900&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3092;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x88DC;&#x6B63;&#x306E;1 mm&#x306E;&#x5BFE;&#x7269;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x9AD8;&#x500D;&#x7387;&#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x3067;&#x3001;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306F;V&#x5C64;&#x306E;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x6A39;&#x72B6;&#x7A81;&#x8D77;&#x68D8;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x53CE;&#x96C6;&#x3057;&#x305F;&#x753B;&#x50CF;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x6A19;&#x672C;&#x304B;&#x3089;&#x53CE;&#x96C6;&#x3057;&#x305F;&#x753B;&#x50CF;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x65B0;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x3067;&#x8840;&#x6D41;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x200B;&#x200B;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x306E;&#x30D5;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x901F;&#x5EA6;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x5316;&#x3092;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x63D0;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; H&#xFF06;E&#x67D3;&#x8272;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5468;&#x56F2;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x3001;&#x5C64;&#x72B6;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30E8;&#x30A6;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30B8;&#x30A6;&#x30E0;&#x67D3;&#x8272;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CD;&#x5149;&#x30CB;&#x30C3;&#x30B9;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x795E;&#x7D4C;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30A4;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x26;lt;100&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E2;&#x30EB;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x7C21;&#x5358;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x751F;&#x4F53;&#x591A;&#x5C64;&#x76AE;&#x8CEA;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;

&#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC870;&#xAC01; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xC758; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xBD84;&#xD560; &#xC601;&#xC5ED; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC785;&#xB825;&#xACFC; &#xCD9C;&#xB825; &#xBD80;&#xC871;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;, 2 &#xAD11;&#xC790; &#xC601;&#xC0C1; &#xAE30;&#xBCF8; &#xCEE8;&#xD14D;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC720;&#xC9C0;, &#xBE44;&#xB85D; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;&#xC758; &#xAE4A;&#xC774;&#xB97C; &#xC81C;&#xD55C; &lt; 500 microm. &#xB610;&#xD55C;, &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC758; &#xD53C; &#xC9C8; &#xCE35; &#xC0C1;&#xB41C; &#xC870;&#xC9C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC5B4;&#xB835;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74;, 2 &#xAD11;&#xC790; neocortical &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; 1 m m &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD504;&#xB9AC;&#xC998;&#xC758; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; V, &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xC900;&#xBE44;&#xC758; &#xC804;&#xD615;&#xC801;&#xC778; &#xAC01;&#xB3C4; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD53C; &#xC9C8; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; &#xB3D9;&#xC2DC; &#xC601;&#xC0C1; &#xAC00;&#xB2A5;. &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xD130; somatosensory &#xD53C; &#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C; &#xACE0; &#xAC70;&#xC758; 900 microm &#xC804;&#xCCB4; &#xC2DC;&#xC57C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. Coverglass &#xAD50;&#xC815;&#xC758; 1 m m &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB192;&#xC740; &#xD655;&#xB300; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; V &#xB274;&#xB7F0;&#xC5D0; &#xC218;&#xC9C0;&#xC0C1; &#xCABD;&#xC774; &#xD574;&#xACB0;. &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB294; microprism&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xC9D1; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC218;&#xC9D1; &#xB41C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xBE44;&#xAD50;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; neocortical &#xAE4A;&#xC774;&#xC5D0; &#xD608;&#xC561; &#xD750;&#xB984;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xC601;&#xC0C1; &#xB610;&#xD55C; &#xC801;&#xD608;&#xAD6C; &#xC720;&#xB7C9; &#xBC0F; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xC815;&#xB7C9;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC81C;&#xC2DC;. H &amp; E &#xC1FC; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC870;&#xC9C1;&#xC744; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBCF8;&#xD1A0;&#xC5D0; &#xB0A8;&#xC544; &#xC5BC;&#xB8E9; &#xC870;&#xC9C1; &#xCE35; &#xD654;. Propidium &#xC694;&#xC624;&#xB4DC; &#xD654; &#xBC0F; &#xD615;&#xAD11; Nissl &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xCD94;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC; &#xC190;&#xC0C1;&#xC744; &#xC81C;&#xD55C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &lt; 100 microm &#xC870;&#xC9C1; &#xC720;&#xB9AC; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC9C0;&#xB3C4; neocortical &#xC870;&#xC9C1;&#xC73C;&#xB85C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC774;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xCE35; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC9C0;&#xB3C4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Rebanadas corticales permiten im&#xE1;genes simult&#xE1;neas de m&#xFA;ltiples capas corticales. Sin embargo, carecen de rodajas de nativos entradas y salidas fisiol&#xF3;gicas. Aunque en vivo, de dos fotones de imagen conserva el contexto nativo, t&#xED;picamente se limita a una profundidad de &#x26;lt;500 micras. Adem&#xE1;s, las im&#xE1;genes simult&#xE1;nea de m&#xFA;ltiples capas corticales es dif&#xED;cil debido a la organizaci&#xF3;n estratificada de la corteza. Se demuestra el uso de 1-mm microprismas para in vivo, de dos fotones de im&#xE1;genes neocortical. Estos prismas permiten im&#xE1;genes simult&#xE1;neas de m&#xFA;ltiples capas corticales, incluyendo la capa V, en un &#xE1;ngulo t&#xED;pico de las preparaciones rebanada. Las im&#xE1;genes fueron recogidas por el motor y la corteza somatosensorial del rat&#xF3;n y mostrar un campo de casi 900 micras-de visi&#xF3;n amplio. En im&#xE1;genes de alta magnificaci&#xF3;n, utilizando un objetivo de 1 mm de la correcci&#xF3;n de cubre objetos, la resoluci&#xF3;n es suficiente para resolver las espinas dendr&#xED;ticas en las neuronas de la capa V. Im&#xE1;genes recogidas con el microprisma son comparables a las im&#xE1;genes recogidas a partir de una rebanada preparaci&#xF3;n tradicional. Imagen funcional del flujo de sangre a diferentes profundidades neocorticales se presenta tambi&#xE9;n, lo que permite la cuantificaci&#xF3;n de flujo de c&#xE9;lulas rojas de la sangre y la velocidad. Tinci&#xF3;n H &#x26;amp; E muestra el tejido circundante permanece en su organizaci&#xF3;n ind&#xED;gena, estratificado. Estimaci&#xF3;n de da&#xF1;o neuronal utilizando yoduro de propidio y una mancha fluorescente Nissl revela el da&#xF1;o celular se limita a &#x26;lt;100 micras desde la interfaz de tejido de vidrio. Microprismas es una herramienta sencilla que ofrece numerosas ventajas para el en el tejido neocortical.

Microprismas de im&#xE1;genes in vivo de m&#xFA;ltiples capas corticales

&#x771F;&#x6B63;&#x7684;&#x7F8E;&#x56FD;&#x8054;&#x90A6;&#x50A8;&#x5907;&#x5238;&#x6709;&#x4E00;&#x81F4;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x56FA;&#x6709;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3002;&#x8FD9;&#x5141;&#x8BB8;&#x5047;&#x5E01;&#x7EB8;&#x5F20;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7531;&#x4E8E;&#x5176;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5927;&#x65F6;&#x76F8;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x771F;&#x6B63;&#x7684;&#x7EB8;&#x8D28;&#x8D27;&#x5E01;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x626B;&#x63CF;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x6FC0;&#x5149;&#x6FC0;&#x53D1;&#x548C;&#x65F6;&#x95F4;&#x76F8;&#x5173;&#x5355;&#x5149;&#x5B50;&#x8BA1;&#x6570; &#xFF08;TCSPC&#xFF09; &#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x6837;&#x7EA6; 4 mm(2) &#x533A;&#x57DF;&#x3002;&#x4E09;&#x79CD;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x5192;&#x724C;&#x6837;&#x672C;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x3002;&#x56DB;&#x4E2A;&#x4E5D;&#x4E2A;&#x5192;&#x724C;&#x6837;&#x672C;&#x9002;&#x5408;&#x5355;&#x7EC4;&#x5206;&#x8870;&#x51CF;&#x3002;&#x4E94;&#x4E5D;&#x5192;&#x724C;&#x6837;&#x54C1;&#x9002;&#x5408;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x4F46;&#x88AB;&#x6807;&#x8BC6;&#x4E3A;&#x5192;&#x724C;&#x56E0;&#x91CD;&#x5927;&#x504F;&#x5DEE;&#x5728;&#x8F83;&#x957F;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x76F8;&#x6BD4;&#x771F;&#x6B63;&#x7684;&#x6761;&#x4F8B;&#x8349;&#x6848;&#x3002;

&#x5192;&#x724C;&#x7F8E;&#x56FD;&#x7EB8;&#x5E01;&#x4F7F;&#x7528;&#x56FA;&#x6709;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3002;

Genuine U.S. Federal Reserve Notes have a consistent, two-component intrinsic fluorescence lifetime. This allows for detection of counterfeit paper money because of its significant differences in fluorescence lifetime when compared to genuine paper money. We used scanning two-photon laser excitation and the time-correlated single photon counting (TCSPC) method to sample a approximately 4 mm(2) region. Three types of counterfeit samples were tested. Four out of the nine counterfeit samples fit to a one-component decay. Five out of nine counterfeit samples fit to a two-component model, but are identified as counterfeit due to significant deviations in the longer lifetime component compared to genuine bills.

Detection of counterfeit U.S. paper money using intrinsic fluorescence lifetime.

D&#x26;#39;origine des &#xC9;tats-Unis Federal Reserve Notes ont une approche coh&#xE9;rente, &#xE0; deux composants &#xE0; vie fluorescence intrins&#xE8;que. Cela permet pour la d&#xE9;tection du papier-monnaie contrefaite en raison de ses diff&#xE9;rences significatives dans la dur&#xE9;e de vie de fluorescence comparativement au papier-monnaie r&#xE9;elle. Nous avons utilis&#xE9; la num&#xE9;risation d&#x26;#39;excitation laser &#xE0; deux photons et le temps-corr&#xE9;l&#xE9;e comptage de photon unique (TCSPC) m&#xE9;thode pour d&#xE9;guster un mm environ 4 (2) la r&#xE9;gion. Trois types d&#x26;#39;&#xE9;chantillons de contrefa&#xE7;on ont &#xE9;t&#xE9; test&#xE9;s. Quatre des neuf &#xE9;chantillons de contrefa&#xE7;on s&#x26;#39;adapter &#xE0; une d&#xE9;croissance &#xE0; un composant. Cinq des neuf &#xE9;chantillons de contrefa&#xE7;on s&#x26;#39;adapter &#xE0; un mod&#xE8;le &#xE0; deux composantes, mais sont d&#xE9;tect&#xE9;s comme faux en raison des &#xE9;carts importants dans la composante dur&#xE9;e de vie par rapport &#xE0; un billet authentique.

D&#xE9;tection du papier-monnaie de la contrefa&#xE7;on aux &#xC9;tats-Unis l&#x26;#39;aide de vie de fluorescence intrins&#xE8;que

Echte amerikanische Federal Reserve Notes haben eine konsistente, Zweikomponenten-intrinsische Fluoreszenz-Lebensdauer. Auf diese Weise k&ouml;nnen f&uuml;r die Erkennung von gef&auml;lschten Papiergeld wegen seiner erheblichen Unterschiede im Fluoreszenz-Lebensdauer im Vergleich zu echten Papiergeld. Wir verwendet Scannen, zwei-Photonen-Laser Erregung und die Zeit korrelierte single-Photon, das Z&auml;hlmethode (TCSPC), um eine ungef&auml;hr 4 mm(2)-Region zu probieren. Drei Arten von Softwaref&auml;lschungen wurden getestet. Vier von den neun Softwaref&auml;lschungen passen zu einem Einkomponenten-Verfall. F&uuml;nf von neun Softwaref&auml;lschungen passen zu einem zwei-Komponenten-Modell, aber als F&auml;lschung durch erhebliche Abweichungen in der l&auml;ngeren Lebensdauer-Komponente im Vergleich zu echten Rechnungen identifiziert werden.

Erkennung von gef&auml;lschten US-Papiergeld mit intrinsische Fluoreszenz-Lebensdauer.

Genuino US Federal Reserve note hanno una vita coerente, due-componente fluorescenza intrinseca. In questo modo per il rilevamento di banconote contraffatte a causa delle sue differenze significative nella durata della fluorescenza rispetto alla vera carta moneta. Abbiamo usato scansione di eccitazione del due-fotone laser e il fotone singolo correlati nel tempo (TCSPC) metodo di conteggio per una regione di circa 4 mm(2) del campione. Tre tipi di contraffazione campioni sono stati testati. Quattro dei nove campioni contraffazione adatta a un decadimento monocomponente. Cinque di nove campioni contraffazione adattano ad un modello a due componenti, ma sono identificati come contraffatte a causa di deviazioni significative nel componente durata pi&ugrave; lunga rispetto alle fatture originali.

Rilevamento di contraffazione degli Stati Uniti carta moneta utilizzando vita di fluorescenza intrinseca.

&#x672C;&#x7269;&#x306E;&#x7C73;&#x9023;&#x90A6;&#x6E96;&#x5099;&#x5236;&#x5EA6;&#x7406;&#x4E8B;&#x4F1A;&#x306E;&#x6CE8;&#x610F;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x8CAB;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x4E8C;&#x6210;&#x5206;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x672C;&#x7269;&#x306E;&#x7D19;&#x5E63;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6709;&#x610F;&#x5DEE;&#x306E;&#x507D;&#x9020;&#x7D19;&#x5E63;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7D04;4&#x30DF;&#x30EA;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#xFF08;2&#xFF09;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x5149;&#x5B50;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x52B1;&#x8D77;&#x3068;&#x6642;&#x9593;&#x76F8;&#x95A2;&#x5358;&#x4E00;&#x5149;&#x5B50;&#x8A08;&#x6570;&#xFF08;TCSPC&#xFF09;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x30B9;&#x30AD;&#x30E3;&#x30F3;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x507D;&#x9020;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;3&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x304C;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 9&#x507D;&#x9020;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x3046;&#x3061;4&#x3064;&#x306E;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x306B;&#x9069;&#x5408;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 9&#x306E;&#x3046;&#x3061;5&#x507D;&#x9020;&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;2&#x6210;&#x5206;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x9069;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x672C;&#x7269;&#x306E;&#x7D19;&#x5E63;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x9577;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x5206;&#x306E;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x9038;&#x8131;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x507D;&#x9020;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x507D;&#x9020;&#x7C73;&#x56FD;&#x7D19;&#x5E63;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;

&#x5178;&#x578B;&#x6210;&#x50CF;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x7ED3;&#x5408;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (MPM) &#x4EC5;&#x9650;&#x4E8E;&#x5C11;&#x4E8E; 300 &#x5988;&#x5988;&#x7531;&#x4E8E;&#x5149;&#x6563;&#x5C04;&#x7684;&#x8BB8;&#x591A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x3002;&#x5149;&#x5B66;&#x7ED3;&#x7B97;&#x5927;&#x5927;&#x964D;&#x4F4E;&#x901A;&#x8FC7;&#x66FF;&#x6362;&#x5177;&#x6709;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x6DB2;&#x7684;&#x5668;&#x5B98;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x6C34;&#x5149;&#x6563;&#x5C04;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7684;&#x5B8C;&#x6574;&#x3001; &#x56FA;&#x5B9A;&#x3001; &#x6E05;&#x9664;&#x9F20;&#x6807;&#x673A;&#x5173;&#x4E0E;&#x7A7F;&#x900F;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x548C;&#x5B57;&#x6BB5;&#x7684;&#x89C6;&#x56FE;&#x8D85;&#x8FC7; 2 &#x6BEB;&#x7C73;&#x3002; MPM &#x8FDE;&#x8F67;&#x7BA1;&#x673A;&#x4F7F;&#x5927;&#x578B;&#x4E09;&#x7EF4;&#x6570;&#x636E;&#x96C6;&#x521B;&#x5EFA;&#x4E0E;&#x50CF;&#x7D20;&#x683C;&#x5F0F;&#x548C;&#x968F;&#x65F6;&#x8BBF;&#x95EE;&#x56FA;&#x6709;&#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x4E8C;&#x6B21;&#x8C10;&#x6CE2;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x7684;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x56FE;&#x50CF;&#x548C;&#x4E09;&#x7EF4;&#x56FE;&#x50CF;&#x5806;&#x6808;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x3001; &#x5C0F;&#x80A0;&#x3001; &#x5927;&#x80A0;&#x3001; &#x80BE;&#x3001; &#x80BA;&#x3001; &#x548C;&#x777E;&#x4E38;&#x4E00;&#x6837;&#x5927; 4,096 x 4,096 &#x50CF;&#x7D20;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;

&#x6E05;&#x9664;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x673A;&#x5173;&#x7684;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x672F;&#x3002;

Typical imaging depths with multiphoton microscopy (MPM) are limited to less than 300 mum in many tissues due to light scattering. Optical clearing significantly reduces light scattering by replacing water in the organ tissue with a fluid having a similar index of refraction to that of proteins. We demonstrate MPM of intact, fixed, cleared mouse organs with penetration depths and fields of view in excess of 2 mm. MPM enables the creation of large 3-D data sets with flexibility in pixel format and ready access to intrinsic fluorescence and second-harmonic generation. We present high-resolution images and 3-D image stacks of the brain, small intestine, large intestine, kidney, lung, and testicle with image sizes as large as 4,096 x 4,096 pixels.

Multiphoton microscopy of cleared mouse organs.

Des profondeurs d&#x26;#39;imagerie typiques avec la microscopie multiphotonique (MPM) sont limit&#xE9;s &#xE0; moins de 300 mum dans de nombreux tissus en raison de diffusion de la lumi&#xE8;re. Compensation optique r&#xE9;duit sensiblement la diffusion de lumi&#xE8;re par le remplacement de l&#x26;#39;eau dans le tissu organique avec un fluide ayant un indice de r&#xE9;fraction similaire &#xE0; celui de la prot&#xE9;ines. Nous d&#xE9;montrons MPM de intactes, fixes, les organes de souris compens&#xE9;s avec des profondeurs de p&#xE9;n&#xE9;tration et de champs de vue au-del&#xE0; de 2 mm. MPM permet la cr&#xE9;ation de grands 3-D des ensembles de donn&#xE9;es avec souplesse dans le format de pixel et un acc&#xE8;s facile &#xE0; la g&#xE9;n&#xE9;ration de fluorescence et de second harmonique intrins&#xE8;que. Nous pr&#xE9;sentons des images haute r&#xE9;solution et des piles d&#x26;#39;images 3-D du cerveau, l&#x26;#39;intestin gr&#xEA;le, gros intestin, les reins, les poumons, et le testicule avec des tailles d&#x26;#39;image plus grand que 4096 x 4096 pixels.

Microscopie multiphotonique des organes de souris compens&#xE9;s

Typische bildgebende tiefen mit multiphoton-Mikroskopie (MPM) beschr&auml;nken sich auf weniger als 300 Mutter in vielen Geweben durch Lichtstreuung. Optische l&ouml;schen deutlich reduziert Lichtstreuung durch Wasser im Gewebe Orgel durch eine Fl&uuml;ssigkeit mit einem &auml;hnlichen Brechungsindex der Proteine zu ersetzen. Wir zeigen, dass MPM intakt, feste, ger&auml;umte Maus Organe mit tiefen eindringen und Gesichtsfelder von mehr als 2 mm. MPM die Schaffung gro&szlig;er 3-d-Datens&auml;tze mit Flexibilit&auml;t im Pixelformat und Zugriff auf systeminterne Fluoreszenz und zweite-harmonische Generation erm&ouml;glicht. Pr&auml;sentieren wir Ihnen hochaufl&ouml;sende Bilder und 3D-Bild Stapel von Gehirn, D&uuml;nndarm, Dickdarm, Niere, Lunge, und Hoden mit Bildgr&ouml;&szlig;en so gro&szlig; wie 4.096 x 4.096 Pixel.

Multiphoton-Mikroskopie ger&auml;umte Maus Organe.

Tipica profondit&agrave; imaging con microscopia multifotonica (MPM) sono limitati a meno di 300 mamma in molti tessuti a causa della dispersione della luce. Compensazione ottica notevolmente riduce la dispersione della luce sostituendo acqua nel tessuto organo con un fluido avendo un indice di rifrazione simile a quello delle proteine. Dimostriamo che MPM di organi intatti, fisso, sgomberati mouse con profondit&agrave; di penetrazione e campi di vista superiore a 2 mm. MPM consente la creazione di grandi insiemi di dati 3D con flessibilit&agrave; in formato pixel e pronto accesso a fluorescenza intrinseca e la generazione di seconda armonica. Vi presentiamo le immagini ad alta risoluzione e pile di immagini tridimensionali del cervello, dell&#39;intestino tenue, intestino crasso, rene, polmone e testicolo con dimensioni grandi come 4.096 x 4.096 pixel dell&#39;immagine.

Microscopia multifotonica degli organi del mouse deselezionata.

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;MPM&#xFF09;&#x306E;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x304C;&#x5149;&#x6563;&#x4E71;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x3067;300&#x4EBA;&#x672A;&#x6E80;&#x306E;&#x304A;&#x6BCD;&#x3055;&#x3093;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5149;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x304C;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5C48;&#x6298;&#x306E;&#x540C;&#x3058;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x6D41;&#x4F53;&#x3068;&#x81D3;&#x5668;&#x7D44;&#x7E54;&#x306B;&#x6C34;&#x3092;&#x7F6E;&#x304D;&#x63DB;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x5149;&#x6563;&#x4E71;&#x3092;&#x4F4E;&#x6E1B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;2&#x30DF;&#x30EA;&#x30E1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30EB;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306E;&#x6D78;&#x900F;&#x6DF1;&#x3055;&#x3068;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3001;&#x56FA;&#x5B9A;&#x3001;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;MPM&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; MPM&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;3&#x6B21;&#x5143;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x4F5C;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x30D4;&#x30AF;&#x30BB;&#x30EB;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3068;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x86CD;&#x5149;&#x3068;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x9AD8;&#x8ABF;&#x6CE2;&#x767A;&#x751F;&#x3078;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x3068;&#x8133;&#x3001;&#x5C0F;&#x8178;&#x3001;&#x5927;&#x8178;&#x3001;&#x814E;&#x81D3;&#x3001;&#x80BA;&#x3001;4096 X 4096&#x30D4;&#x30AF;&#x30BB;&#x30EB;&#x3068;&#x540C;&#x3058;&#x5927;&#x304D;&#x3055;&#x306E;&#x753B;&#x50CF;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068;&#x777E;&#x4E38;&#x306E;3-D&#x753B;&#x50CF;&#x30B9;&#x30BF;&#x30C3;&#x30AF;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x81D3;&#x5668;&#x306E;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;

Multiphoton &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; (MPM)&#xC640; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE4A;&#xC774; &#xBBF8;&#xB9CC; 300 &#xC5C4;&#xB9C8; &#xBE5B; &#xC0B0;&#xB780;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xB9CE;&#xC740; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xAD11;&#xD559; &#xC9C0;&#xC6B0;&#xAE30; &#xD06C;&#xAC8C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xAD74;&#xC808; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC0C9;&#xC778; &#xB370; &#xC561;&#xCCB4; &#xBB3C;&#xC774; &#xC7A5;&#xAE30; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0; &#xB300;&#xCCB4; &#xD558; &#xC5EC; &#xBE5B; &#xC0B0;&#xB780;&#xC744; &#xC904;&#xC77C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. MPM &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xACE0;&#xC815;&#xB41C; &#xCDE8;&#xC18C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC7A5;&#xAE30; &#xCE68;&#xD22C; &#xAE4A;&#xC774;&#xC640; &#xD544;&#xB4DC; &#xBCF4;&#xAE30;&#xC758; &#xCD08;&#xACFC; 2 m m. MPM&#xC758; &#xD53D;&#xC140; &#xD615;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xAD11; &#xBC0F; 2 &#xCC28; &#xACE0;&#xC870;&#xD30C; &#xC0DD;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC900;&#xBE44;&#xAC00; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC744; &#xD070; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC218; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xBC0F; &#xB1CC;, &#xC18C;&#xC7A5;, &#xB300; &#xC7A5;, &#xC2E0;&#xC7A5;, &#xD3D0;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xACE0;&#xD658;&#xC758; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC2A4;&#xD0DD; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xD06C;&#xAE30;&#xAC00; 4096 x 4096 &#xD53D;&#xC140; &#xB9CC;&#xD07C; &#xD070; &#xC120;&#xBB3C;&#xC774;.

&#xC9C0;&#xC6B4;&#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xAE30;&#xAD00;&#xC758; multiphoton &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Profundidades t&#xED;picas de im&#xE1;genes con microscop&#xED;a multifot&#xF3;nica (MPM) se limitan a menos de 300 madre en muchos tejidos debido a la dispersi&#xF3;n de la luz. Compensaci&#xF3;n &#xF3;ptica reduce significativamente la dispersi&#xF3;n de luz mediante la sustituci&#xF3;n de agua en el tejido de los &#xF3;rganos con un fluido que tiene un &#xED;ndice de refracci&#xF3;n similares a la de las prote&#xED;nas. Demostramos MPM de los &#xF3;rganos intactos, fijos, rat&#xF3;n despejadas con una profundidad de penetraci&#xF3;n y campos de visi&#xF3;n de m&#xE1;s de 2 mm. MPM permite la creaci&#xF3;n de grandes en 3-D los conjuntos de datos con la flexibilidad en el formato de p&#xED;xel y el f&#xE1;cil acceso a la generaci&#xF3;n de fluorescencia intr&#xED;nseca y el segundo arm&#xF3;nico. Se presentan im&#xE1;genes de alta resoluci&#xF3;n 3-D y pilas de im&#xE1;genes del cerebro, el intestino delgado, intestino grueso, ri&#xF1;&#xF3;n, pulm&#xF3;n y test&#xED;culo con tama&#xF1;os de imagen tan grande como 4.096 x 4.096 p&#xED;xeles.

Microscop&#xED;a multifot&#xF3;nica de los &#xF3;rganos de rat&#xF3;n aclarados

&#x591A;&#x5C42;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x5C42;&#x4F7F;&#x7528;&#x68F1;&#x955C;&#x3002;

Multi-layer in vivo imaging of neocortex using a microprism.

Multi-couche d&#x26;#39;imagerie in vivo du n&#xE9;ocortex l&#x26;#39;aide d&#x26;#39;un microprisme

Mehrlagige in-vivo Bildgebung der Gro&szlig;hirnrinde mit einem Mikroprismenring.

Multistrato imaging in vivo della neocorteccia utilizzando un microprismi.

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30EA;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x65B0;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;in vivo&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30EC;&#x30A4;&#x30E4;

Microprism&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD14D;&#xC758; &#xBA40;&#xD2F0; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; in vivo &#xC601;&#xC0C1;.

Multi-capa de im&#xE1;genes in vivo de la neocorteza El uso de un Microprisma

&#x4E86;&#x89E3;&#x8367;&#x5149;&#x4F20;&#x64AD;&#x901A;&#x8FC7;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x662F;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x80FD;&#x591F;&#x6DF1;&#x5C42;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x9AD8;&#x6027;&#x80FD;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x6781;&#x4E3A;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x5149;&#x6563;&#x5C04;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6837;&#x54C1;&#x548C;&#x5965;&#x6797;&#x5DF4;&#x65AF; 20 X 0.95NA &#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x76EE;&#x6807;&#x6A21;&#x578B;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x6A21;&#x62DF;&#x6210;&#x50CF;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x7684;&#x751F;&#x7406;&#x6709;&#x5173;&#x6563;&#x5C04;&#x53C2;&#x6570;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x51FD;&#x6570;&#x8367;&#x5149;&#x7E41;&#x6B96;&#x3002;&#x5728;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6A21;&#x62DF;&#x6D3E;&#x751F;&#x7684;&#x5BA2;&#x89C2;&#x80CC;&#x5B54;&#x5F84;&#x8367;&#x5149;&#x65F6;&#x7A7A;&#x89D2;&#x5206;&#x5E03;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x3001; &#x6700;&#x5927;&#x9650;&#x5EA6;&#x5730;&#x6709;&#x6548; post-objective &#x8367;&#x5149;&#x6536;&#x96C6;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x4ECE;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5E7B;&#x50CF;&#x6570;&#x636E;&#x6240;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x7684;&#x8499;&#x7279;&#x5361;&#x7F57;&#x6A21;&#x62DF;&#x6F14;&#x793A;&#x96C6;&#x5408;&#x6548;&#x7387;&#x63D0;&#x9AD8; 50%-90%&#x7684;&#x5E38;&#x89C4;&#x3001; &#x975E;&#x4F18;&#x5316;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x96C6;&#x5408;&#x51E0;&#x4F55;&#x56FE;&#x5F62;&#x5927;&#x6210;&#x50CF;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x8D85;&#x8FC7;&#x3002;&#x6210;&#x50CF;&#x6027;&#x80FD;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#x5C42; V &#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x76AE;&#x8D28; 850 &mu; m &#x7684;&#x6DF1;&#x5EA6;&#x3002;

&#x6700;&#x5927;&#x9650;&#x5EA6;&#x5730;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x8367;&#x5149;&#x6536;&#x96C6;&#x6548;&#x7387;&#x3002;

Understanding fluorescence propagation through a multiphoton microscope is of critical importance in designing high performance systems capable of deep tissue imaging. Optical models of a scattering tissue sample and the Olympus 20X 0.95NA microscope objective were used to simulate fluorescence propagation as a function of imaging depth for physiologically relevant scattering parameters. The spatio-angular distribution of fluorescence at the objective back aperture derived from these simulations was used to design a simple, maximally efficient post-objective fluorescence collection system. Monte Carlo simulations corroborated by data from experimental tissue phantoms demonstrate collection efficiency improvements of 50% - 90% over conventional, non-optimized fluorescence collection geometries at large imaging depths. Imaging performance was verified by imaging layer V neurons in mouse cortex to a depth of 850 Î¼m.

Maximizing fluorescence collection efficiency in multiphoton microscopy.

Comprendre la propagation &#xE0; travers un microscope &#xE0; fluorescence multiphotonique est d&#x26;#39;une importance critique dans la conception de syst&#xE8;mes de haute performance capables de l&#x26;#39;imagerie des tissus profonds. Mod&#xE8;les optiques d&#x26;#39;un &#xE9;chantillon tissulaire diffusion et l&#x26;#39;objectif de microscope Olympus 20X 0.95NA ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;es pour simuler la propagation de fluorescence en fonction de la profondeur d&#x26;#39;imagerie pour des param&#xE8;tres de diffusion physiologiquement appropri&#xE9;es. La distribution spatio-angulaire de la fluorescence &#xE0; l&#x26;#39;objectif de retour d&#x26;#39;ouverture provenant de ces simulations a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour concevoir un simple, une efficacit&#xE9; maximale post-objectif syst&#xE8;me de collecte de la fluorescence. Les simulations de Monte Carlo corrobor&#xE9;e par les donn&#xE9;es de fant&#xF4;mes de tissu exp&#xE9;rimentaux d&#xE9;montrent am&#xE9;lioration de l&#x26;#39;efficacit&#xE9; de collecte de 50% - 90% plus classiques, non-optimis&#xE9;s g&#xE9;om&#xE9;tries de collecte de fluorescence &#xE0; des profondeurs d&#x26;#39;imagerie importantes. Performances d&#x26;#39;imagerie a &#xE9;t&#xE9; v&#xE9;rifi&#xE9;e par les neurones d&#x26;#39;imagerie V couche chez la souris cortex &#xE0; une profondeur de 850 um.

Optimisation de l&#x26;#39;efficacit&#xE9; Collection fluorescence en microscopie multiphotonique

Verst&auml;ndnis-Fluoreszenz-Vermehrung durch ein multiphoton Mikroskop ist von entscheidender Bedeutung bei der Gestaltung von Hochleistungs-Systemen, die mit der tiefen Gewebe Bildgebung. Optische Modelle einer Gewebeprobe Streuung und Olympus 20 X 0.95NA Mikroskop Ziel dienten zur Fluoreszenz Vermehrung als Funktion von imaging-Tiefe f&uuml;r physiologisch relevanten Streuung Parametern zu simulieren. Spatio-Winkelverteilung der Fluoreszenz bei den objektiven zur&uuml;ck Blende diese Simulationen abgeleitet wurde verwendet, um eine einfache, maximal effiziente post-objective Fluoreszenz-Collection-System zu entwerfen. Monte-Carlo-Simulationen auch Daten aus experimentellen Gewebe Phantome best&auml;tigt zeigen Verbesserungen der Energieeffizienz f&uuml;r die Sammlung von 50-90 % &uuml;ber konventionelle, nicht optimierten Fluoreszenz Sammlung Geometrien bei gro&szlig;en tiefen imaging. Imaging Leistung wurde durch bildgebende Schicht V Neuronen im Maus Rinde bis zu einer Tiefe von 850 &mu;m &uuml;berpr&uuml;ft.

Fluoreszenz-Abscheidegrad in multiphoton-Mikroskopie zu maximieren.

Propagazione di fluorescenza di comprensione attraverso un microscopio multifotonica &egrave; di fondamentale importanza nella progettazione di sistemi ad alte prestazioni in grado di formazione immagine del tessuto profondo. Ottiche modelli di un campione di tessuto di scattering e l&#39;obiettivo del microscopio Olympus 20 X 0.95NA sono stati utilizzati per simulare la propagazione di fluorescenza in funzione della profondit&agrave; per i parametri di scattering fisiologicamente rilevanti di imaging. La distribuzione spazio-angolare di fluorescenza alla oggettiva apertura posteriore derivato da queste simulazioni &egrave; stata utilizzata per progettare un sistema di raccolta di fluorescenza post-objective semplice, efficiente al massimo. Simulazioni Monte Carlo corroborate da dati da fantasmi di tessuto sperimentale dimostrano miglioramenti di efficienza di raccolta del 50-90% su geometrie di raccolta convenzionale, non ottimizzato fluorescenza a grande profondit&agrave; di imaging. Prestazioni di imaging &egrave; stata verificata da imaging neuroni del V strato nella corteccia del mouse a 850 &mu;m di profondit&agrave;.

Massimizzare l&#39;efficienza di raccolta di fluorescenza nella microscopia multifotonica.

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x4F1D;&#x64AD;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x6DF1;&#x90E8;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x9AD8;&#x6027;&#x80FD;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6563;&#x4E71;&#x7D44;&#x7E54;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3068;&#x30AA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x30B9;20X 0.95NA&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5BFE;&#x7269;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x6563;&#x4E71;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x6DF1;&#x3055;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x4F1D;&#x64AD;&#x3092;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x6D3E;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x5BA2;&#x89B3;&#x7684;&#x306A;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x958B;&#x53E3;&#x90E8;&#x306B;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x89D2;&#x5EA6;&#x5206;&#x5E03;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x7D14;&#x306A;&#x3001;&#x6700;&#x5927;&#x9650;&#x306B;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x30DD;&#x30B9;&#x30C8;&#xB7;&#x5BA2;&#x89B3;&#x7684;&#x306A;&#x86CD;&#x5149;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x753B;&#x50CF;&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x3067;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x975E;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x30B3;&#x30EC;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5F62;&#x72B6;&#x306F;90&#xFF05;&#x4EE5;&#x4E0A; - &#x30E2;&#x30F3;&#x30C6;&#x30AB;&#x30EB;&#x30ED;&#xB7;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;50&#xFF05;&#x306E;&#x53CE;&#x96C6;&#x52B9;&#x7387;&#x306E;&#x6539;&#x5584;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7684;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E0;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D50;&#x50CF;&#x6027;&#x80FD;&#x3092;850&#x3BC;m&#x306E;&#x6DF1;&#x3055;&#x307E;&#x3067;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x5C64;V&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x86CD;&#x5149;&#x53CE;&#x96C6;&#x52B9;&#x7387;&#x3092;&#x6700;&#x5927;&#x5316;

Multiphoton &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC774;&#xD574; &#xD615;&#xAD11; &#xC804;&#xD30C; &#xAE4A;&#xC740; &#xC870;&#xC9C1; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC758; &#xACE0;&#xC131;&#xB2A5; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC124;&#xACC4;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC0B0; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0D8;&#xD50C; &#xBC0F; 20 X 0.95NA &#xC62C;&#xB9BC;&#xD478;&#xC2A4; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBAA9;&#xD45C; &#xAD11;&#xD559; &#xBAA8;&#xB378; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC21C;&#xC218; &#xAD00;&#xB828; &#xBD84;&#xC0B0; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE4A;&#xC774;&#xC758; &#xD568;&#xC218;&#xB85C; &#xD615;&#xAD11; &#xC804;&#xD30C; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD30C;&#xC0DD; &#xB41C; &#xAC1D;&#xAD00;&#xC801;&#xC778; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC870;&#xB9AC;&#xAC1C; &#xD615;&#xAD11; spatio &#xAC01;&#xB3C4; &#xBD84;&#xD3EC;&#xB294; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xACE0;, &#xCD5C;&#xB300;&#xD55C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; post-objective &#xD615;&#xAD11; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xC124;&#xACC4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xBAAC;&#xD14C; &#xCE74;&#xB97C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC870;&#xC9C1; &#xC720;&#xB839; &#xAC1C;&#xCCB4;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB4B7;&#xBC1B;&#xCE68; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xBE44; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xD615;&#xAD11; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158; &#xD615;&#xC0C1; &#xB300;&#xD615; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAE4A;&#xC774; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158; 50%-90%&#xC758; &#xD6A8;&#xC728; &#xD5A5;&#xC0C1;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;. &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC131;&#xB2A5; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; V &#xC2E0;&#xACBD; 850 &mu; m&#xC758; &#xAE4A;&#xC774;&#xB97C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC80;&#xC99D; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;.

Multiphoton &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0; &#xD615;&#xAD11; &#xCEEC;&#xB809;&#xC158; &#xD6A8;&#xC728;&#xC131; &#xADF9;&#xB300;&#xD654;.

Comprender la propagaci&#xF3;n a trav&#xE9;s del microscopio de fluorescencia multifot&#xF3;nica es de vital importancia en el dise&#xF1;o de sistemas de alto rendimiento capaz de obtener im&#xE1;genes de tejidos profundos. Los modelos de &#xF3;ptica de una muestra de tejido de dispersi&#xF3;n y la Olympus 20X objetivo del microscopio 0.95NA se utiliza para simular la propagaci&#xF3;n de fluorescencia como una funci&#xF3;n de la profundidad de imagen para los par&#xE1;metros de dispersi&#xF3;n fisiol&#xF3;gicamente relevantes. La distribuci&#xF3;n espacio-angular de fluorescencia en el objetivo de nuevo la abertura derivado de estas simulaciones se utiliz&#xF3; para dise&#xF1;ar una sencilla, m&#xE1;ximamente eficaz post-objetivo sistema de recogida de fluorescencia. Simulaciones de Monte Carlo corroborado por los datos de espectros de tejidos experimentales demuestran mejoras en la eficiencia de recolecci&#xF3;n del 50% - 90% m&#xE1;s convencionales, no optimizadas geometr&#xED;as de recogida de fluorescencia a una profundidad de imagen de gran tama&#xF1;o. Rendimiento de imagen fue verificada por formaci&#xF3;n de im&#xE1;genes de la capa V neuronas en la corteza del rat&#xF3;n a una profundidad de 850 micras.

Maximizar Eficiencia de Recolecci&#xF3;n de fluorescencia en microscop&#xED;a multifot&#xF3;nica

&#x4EE5;&#x524D;&#x5DF2;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x6E05;&#x9664;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x751F;&#x6210;&#x5927;&#x578B;&#x4E09;&#x7EF4; (3D) &#x5BB9;&#x79EF;&#x56FE;&#x50CF;&#x6570;&#x636E;&#x5BF9;&#x6574;&#x4E2A;&#x5B8C;&#x597D;&#x65E0;&#x635F;&#x9F20;&#x6807;&#x5668;&#x5B98;&#x4F7F;&#x7528;&#x5185;&#x90E8;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x8367;&#x5149;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x7528;&#x4E8E;&#x6267;&#x884C; 3D &#x865A;&#x62DF;&#x6D3B;&#x68C0;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x968F;&#x540E;&#x7684;&#x4F20;&#x7EDF;&#x5207;&#x7247;&#x548C;&#x67D3;&#x8272;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x548C;&#x6307;&#x5BFC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x5927;&#x6709;&#x524D;&#x9014;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x5B9E;&#x73B0;&#x5206;&#x5B50;&#x5BF9;&#x6BD4;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63ED;&#x793A;&#x5F62;&#x6001;&#x4E0A;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF0C;&#x5373;&#x4F7F;&#x5728;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x77E5;&#x8BC6;&#x57FA;&#x7840;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x6E90;&#x6E05;&#x9664;&#x5404;&#x673A;&#x6784;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x591A;&#x5F0F;&#x8054;&#x8FD0;&#x7684;&#x6210;&#x50CF;&#xFF0C;&#x7684;&#x529B;&#x91CF;&#x7ED3;&#x5408;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x3001; &#x4E8C;&#x6B21;&#x8C10;&#x6CE2;&#x548C;&#x6210;&#x50CF;&#x63ED;&#x793A;&#x7279;&#x6B8A;&#x5F62;&#x6001;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x5730;&#x6E05;&#x9664;&#x5149;&#x5B66;&#x9F20;&#x6807;&#x819D;&#x5173;&#x8282;&#x7684;&#x751F;&#x5B58;&#x671F;&#x3002;

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x3001; &#x4E8C;&#x6B21;&#x8C10;&#x6CE2;&#x548C;&#x8367;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x6574;&#x4E2A;&#x6E05;&#x9664;&#x7684;&#x9F20;&#x6807;&#x673A;&#x5173;&#x3002;

Multiphoton microscopy of cleared tissue has previously been demonstrated to generate large three-dimensional (3D) volumetric image data on entire intact mouse organs using intrinsic tissue fluorescence. This technique holds great promise for performing 3D virtual biopsies, providing unique information on tissue morphology, and guidance for subsequent traditional slicing and staining. Here, we demonstrate the use of fluorescence lifetime imaging in cleared organs for achieving molecular contrast that can reveal morphologically distinct structures, even in the absence of knowledge of the underlying molecular source. In addition, we demonstrate the power of multimodal imaging, combining multiphoton fluorescence, second harmonic generation, and lifetime imaging to reveal exceptional morphological detail in an optically cleared mouse knee.

Multiphoton fluorescence, second harmonic generation, and fluorescence lifetime imaging of whole cleared mouse organs.

Microscopie multiphotonique de tissu autoris&#xE9; a &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;demment d&#xE9;montr&#xE9; pour g&#xE9;n&#xE9;rer de grandes tridimensionnelles (3D) des donn&#xE9;es d&#x26;#39;image volum&#xE9;triques sur l&#x26;#39;ensemble des organes de souris intactes utilisant la fluorescence des tissus intrins&#xE8;que. Cette technique est tr&#xE8;s prometteuse pour la r&#xE9;alisation 3D biopsies virtuelles, fournissant des informations uniques sur la morphologie des tissus, et des conseils pour la suite traditionnelle de tranchage et de coloration. Ici, nous d&#xE9;montrons l&#x26;#39;utilisation de l&#x26;#39;imagerie de vie de fluorescence dans les organes d&#xE9;frich&#xE9;es pour la r&#xE9;alisation de contraste mol&#xE9;culaire qui peut r&#xE9;v&#xE9;ler des structures morphologiquement distinctes, m&#xEA;me en l&#x26;#39;absence de connaissance de la source mol&#xE9;culaire sous-jacent. En outre, nous d&#xE9;montrons la puissance de l&#x26;#39;imagerie multimodale, associant multiphotonique fluorescence, g&#xE9;n&#xE9;ration de seconde harmonique, et la dur&#xE9;e de vie d&#x26;#39;imagerie pour r&#xE9;v&#xE9;ler exceptionnelle d&#xE9;tails morphologiques dans un genou souris optique effac&#xE9;.

Multiphotonique fluorescence, G&#xE9;n&#xE9;ration de Second Harmonique, et d&#x26;#39;imagerie de vie de fluorescence des entiers organes de souris compens&#xE9;s

Multiphoton-Mikroskopie von gerodeten Gewebe wurde zuvor nachgewiesen, gro&szlig;e dreidimensionale (3D) Volumetrische Bilddaten auf ganze intakt Maus Organe mit systeminternen Gewebe Fluoreszenz zu generieren. Diese Technik vielversprechend sehr f&uuml;r die Durchf&uuml;hrung von 3D virtueller Biopsies, die einzigartige Informationen &uuml;ber Gewebe Morphologie und Leitf&auml;den f&uuml;r nachfolgende traditionelle Aufschneiden und F&auml;rbung. Hier zeigen wir die Verwendung Fluoreszenz-Lebensdauer-Imaging in ger&auml;umte Organe zur Erreichung Molekulare Kontrast, die morphologisch unterschiedliche Strukturen, auch in Abwesenheit des Wissens der zugrunde liegenden molekularen Quelle offenbaren kann. Dar&uuml;ber hinaus zeigen wir die Macht der multimodale Bildgebung, Kombination multiphoton Fluoreszenz, zweite harmonische Erzeugung und Lebensdauer imaging um au&szlig;ergew&ouml;hnliche morphologische Details in einer optisch ger&auml;umte Maus-Knie zu offenbaren.

Multiphoton Fluoreszenz, zweite harmonische Generierung und Fluoreszenz-Lebensdauer-Bildgebung ganze ger&auml;umte Maus Organe.

Microscopia multifotonica del tessuto sgomberato &egrave; stata dimostrata in precedenza per generare grandi dati tridimensionali (3D) immagine volumetrica su organi intero intatta del mouse mediante fluorescenza intrinseca dei tessuti. Questa tecnica molto promettente per l&#39;esecuzione di biopsie virtuale 3D, fornendo informazioni univoche sulla morfologia dei tessuti e di orientamento per affettare tradizionale successive e colorazione. Qui, ci illustrano l&#39;utilizzo dell&#39;imaging durata fluorescenza negli organi deselezionati per il conseguimento di contrasto molecolare che possono rivelare strutture morfologicamente distinti, anche in assenza di conoscenza dell&#39;origine molecolare sottostante. Inoltre, noi dimostrare la potenza dell&#39;imaging multimodale, combinando multifotonica fluorescenza, generazione di seconda armonica e lifetime imaging per rivelare eccezionale dettaglio morfologico in un ginocchio del mouse otticamente deselezionata.

Fluorescenza multifotonica, generazione di seconda armonica e fluorescenza lifetime imaging di organi del mouse tutto cancellato.

&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x5168;&#x4F53;&#x3092;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x81D3;&#x5668;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;3&#x6B21;&#x5143;&#xFF08;3D&#xFF09;&#x306E;&#x4F53;&#x7A4D;&#x753B;&#x50CF;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x6CD5;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x7D44;&#x7E54;&#x5F62;&#x614B;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x4F1D;&#x7D71;&#x7684;&#x306A;&#x30B9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B9;&#x3068;&#x67D3;&#x8272;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30AC;&#x30A4;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;3D&#x4EEE;&#x60F3;&#x751F;&#x691C;&#x3092;&#x5B9F;&#x65BD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x79D8;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30BD;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x77E5;&#x8B58;&#x306E;&#x306A;&#x3044;&#x72B6;&#x614B;&#x3067;&#x3001;&#x5F62;&#x614B;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x3092;&#x9054;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x819D;&#x306B;&#x512A;&#x308C;&#x305F;&#x5F62;&#x614B;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x86CD;&#x5149;&#x3001;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x9AD8;&#x8ABF;&#x6CE2;&#x767A;&#x751F;&#x3001;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C0;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x529B;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3002;

&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x86CD;&#x5149;&#x3001;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x9AD8;&#x8ABF;&#x6CE2;&#x767A;&#x751F;&#x3001;&#x5168;&#x4F53;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x5668;&#x5B98;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5BFF;&#x547D;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;

&#xC9C0;&#xC6B4; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; multiphoton &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC7A5; &#xC870;&#xC9C1; &#xD615;&#xAD11;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC804;&#xCCB4; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC5D0; &#xD070; 3 &#xCC28;&#xC6D0; (3D) &#xCCB4;&#xC801; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xC0DD;&#xC131; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC99D;&#xBA85; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAE30;&#xC220;&#xC740; &#xC774;&#xD6C4; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xBD80; &#xB7EC; &#xB728; &#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC870;&#xC9C1; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xCE68;&#xC5D0; &#xACE0;&#xC720;&#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; 3D &#xAC00;&#xC0C1; biopsies&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC704;&#xB300;&#xD55C; &#xC57D;&#xC18D;&#xC744; &#xBCF4;&#xC720; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB0B4;&#xBD80; &#xBD84;&#xC790; &#xC18C;&#xC2A4;&#xC758; &#xC9C0;&#xC2DD;&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xBC1D;&#xD790; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xB300;&#xBE44;&#xB97C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xD5C8;&#xAC00; &#xAE30;&#xAD00;&#xC5D0; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC6B0;&#xB9AC; multiphoton &#xD615;&#xAD11;, &#xB458;&#xC9F8; &#xACE0;&#xC870;&#xD30C; &#xC0DD;&#xC131; &#xBC0F; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xAD11;&#xD559; &#xC9C0;&#xC6B4;&#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBB34;&#xB98E; &#xB6F0;&#xC5B4;&#xB09C; &#xD615;&#xD0DC;&#xD559; &#xC138;&#xBD80; &#xC0AC;&#xD56D; &#xACF5;&#xAC1C;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF5;&#xD569; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;&#xC758; &#xD798; &#xBCF4;&#xC5EC;.

Multiphoton &#xD615;&#xAD11;, &#xB458;&#xC9F8; &#xACE0;&#xC870;&#xD30C; &#xC0DD;&#xC131; &#xBC0F; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC9C0;&#xC6B4;&#xB41C; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xC218;&#xBA85; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5;.

Microscop&#xED;a de fotones de tejido aclarado ya ha sido demostrado para generar grandes de tres dimensiones (3D) de datos de im&#xE1;genes volum&#xE9;tricas en todo los &#xF3;rganos de rat&#xF3;n utilizando fluorescencia de los tejidos intactos intr&#xED;nseca. Esta t&#xE9;cnica es muy prometedora para la realizaci&#xF3;n de biopsias virtuales en 3D, que proporciona informaci&#xF3;n &#xFA;nica sobre la morfolog&#xED;a de los tejidos, y la orientaci&#xF3;n para la tradicional posterior corte en lonchas y las manchas. En este caso, se demuestra el uso de im&#xE1;genes de fluorescencia vida en los &#xF3;rganos habilitados para el logro de cambio molecular que puede revelar estructuras morfol&#xF3;gicamente distintas, incluso en ausencia de conocimiento de la fuente molecular subyacente. Adem&#xE1;s, se demuestra el poder de la imagen multimodal, combinando multifot&#xF3;nica de fluorescencia, la generaci&#xF3;n de segundo arm&#xF3;nico, y la vida &#xFA;til de im&#xE1;genes para revelar detalles morfol&#xF3;gicos excepcional en una rodilla del rat&#xF3;n &#xF3;ptico despejado.

Fotones de fluorescencia, generaci&#xF3;n de segundo arm&#xF3;nico, y de im&#xE1;genes de fluorescencia de vida enteros &#xF3;rganos de rat&#xF3;n aclarados

&#x9274;&#x5B9A;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5;&#x56E0;&#x5B50; (vWF) &#x5F02;&#x5E38;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x6761;&#x4EF6;&#x800C;&#x53D7;&#x5230;&#x4E86;&#x5F53;&#x524D;&#x53EF;&#x7528;&#x7684;&#x8BCA;&#x65AD;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x5C40;&#x9650;&#x6027;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x7535;&#x6CF3;&#x65B9;&#x6CD5;&#x76F4;&#x63A5; multimer &#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5E38;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x662F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5E38;&#x89C4;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E0D;&#x5207;&#x5B9E;&#x9645;&#x7684;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5206;&#x6790;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x8367;&#x5149;&#x76F8;&#x5173;&#x5149;&#x8C31; (FCS) &#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5;&#x5206;&#x5E03;&#x3002;&#x76EE;&#x6807;&#x662F;&#x8981;&#x53D1;&#x5C55;&#x66F4;&#x5FEB;&#x3001; &#x8840;&#x53CB;&#x75C5;&#x51DD;&#x80F6;&#x7535;&#x6CF3;&#x6BD4;&#x7B80;&#x5355;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BC4;&#x4EF7;&#x529F;&#x80FD;&#x7EC4;&#x522B;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x8BCA;&#x65AD;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;

&#x4E34;&#x5E8A;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x8840;&#x53CB;&#x75C5;&#x56E0;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x76F8;&#x5173;&#x5149;&#x8C31;&#x6CD5;&#x3002;

Identification of von Willebrand factor (vWF) abnormalities in a variety of conditions is hampered by the limitations of currently available diagnostic tests. Although direct multimer visualization by immunoelectrophoresis is a commonly used method, it is impractical as a routine clinical test. In this study, we used a biophysical analysis tool, fluorescence correlation spectroscopy (FCS), to measure vWF distributions. The goals were to develop a method that is quicker and simpler than vWF gel electrophoresis and to evaluate the potential of FCS as a clinical diagnostic technique.

Clinical measurement of von Willebrand factor by fluorescence correlation spectroscopy.

Identification des anomalies de facteur de von Willebrand dans une vari&eacute;t&eacute; de conditions est entrav&eacute;e par les limites des tests diagnostiques actuellement disponibles. Visualisation directe IUB par immuno&eacute;lectrophor&egrave;se est une m&eacute;thode couramment utilis&eacute;e, mais il est peu pratique comme un test clinique de routine. Dans cette &eacute;tude, nous avons utilis&eacute; un outil d&#39;analyse biophysique, spectroscopie de corr&eacute;lation de fluorescence (FCS), pour mesurer les distributions de vWF. Les objectifs sont de d&eacute;velopper une m&eacute;thode qui est plus rapide et plus simple que l&#39;&eacute;lectrophor&egrave;se sur gel de vWF et d&#39;&eacute;valuer le potentiel du FCS comme une technique de diagnostic clinique.

Clinique mesure du facteur de von Willebrand par spectroscopie de corr&eacute;lation de fluorescence.

Identifizierung des von-Willebrand-Faktor (vWF)-Anomalien in einer Vielzahl von Bedingungen wird durch die Beschr&auml;nkungen der derzeit verf&uuml;gbaren diagnostischen Tests behindert. Obwohl direkte Multimer-Visualisierung von Immunoelectrophoresis eine h&auml;ufig verwendete Methode ist, ist es unpraktisch als routinem&auml;&szlig;ige klinische Test. In dieser Studie haben wir eine biophysikalische Analyse-Tool, Fluoreszenz Korrelation Spektroskopie (FCS), zur Messung von vWF-Distributionen verwendet. Die Ziele waren eine Methode zu entwickeln, die schneller und einfacher als vWF-Gel-Elektrophorese und das Potenzial der FCS als klinische diagnostische Verfahren zu bewerten.

Klinische Messung des von-Willebrand-Faktor von Fluoreszenz-Korrelations-Spektroskopie.

Identificazione di anomalie di von Willebrand factor (vWF) in una variet&agrave; di condizioni &egrave; ostacolata dalle limitazioni dei test diagnostici attualmente disponibili. Anche se la visualizzazione diretta di inattivazione di immunoelettroforesi &egrave; un metodo comunemente usato, non &egrave; pratico come una routine di test clinici. In questo studio, abbiamo utilizzato uno strumento di analisi biofisica, spettroscopia di correlazione di fluorescenza (FCS), per misurare le distribuzioni del vWF. Gli obiettivi erano di sviluppare un metodo che &egrave; pi&ugrave; veloce e pi&ugrave; semplice di elettroforesi del gel del vWF e per valutare il potenziale di FCS come tecnica diagnostica clinica.

Clinico misurazione del fattore di von Willebrand di spettroscopia di correlazione di fluorescenza.

Von Willebrand &#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;vWF&#xFF09; &#x7570;&#x5E38;&#x306E;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x6761;&#x4EF6;&#x3067;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x8A3A;&#x65AD;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x5236;&#x9650;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x59A8;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x76F4;&#x63A5;&#x591A;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3092;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5B9F;&#x7528;&#x7684;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5E74;&#x4F1A;&#x89E3;&#x6790;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3001;vWF &#x5206;&#x5E03;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x86CD;&#x5149;&#x76F8;&#x95A2;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5; (FCS) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x76EE;&#x6A19;&#x306F;&#x3001;&#x8FC5;&#x901F;&#x304B;&#x3064; vWF &#x30B2;&#x30EB;&#x96FB;&#x6C17;&#x6CF3;&#x52D5;&#x6CD5;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x7C21;&#x5358;&#x3067;&#x3059;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x3066; FCS &#x81E8;&#x5E8A;&#x8A3A;&#x65AD;&#x6CD5;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;.

&#x86CD;&#x5149;&#x76F8;&#x95A2;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B; von Willebrand &#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3002;

&#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; von Willebrand &#xC778;&#xC790; (vWF) &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC740; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC758; &#xC81C;&#xD55C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC29;&#xD574;. &#xC9C1;&#xC811; multimer &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; immunoelectrophoresis&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95; &#xC774;&#xC9C0;&#xB9CC;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC2E4;&#xC6A9;&#xC801;&#xC778; &#xC77C;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC784;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xC73C;&#xB85C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xD615;&#xAD11; &#xC0C1;&#xAD00; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; (FCS), vWF &#xBD84;&#xD3EC;&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xBD84;&#xC11D; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; &#xBE60;&#xB974;&#xACE0; vWF &#xC824; &#xC804;&#xAE30; &#xC774;&#xB3D9; &#xBC95; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xAC04;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD558; &#xACE0; &#xC784;&#xC0C1; &#xC9C4;&#xB2E8; &#xAE30;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; FCS&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;.

&#xD615;&#xAD11; &#xC0C1;&#xAD00; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559;, &#xD3F0; Willebrand &#xC778;&#xC790;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xCE21;&#xC815;.

Identificaci&oacute;n de anormalidades de von Willebrand factor (FvW) en una variedad de condiciones se ve entorpecida por las limitaciones de las pruebas diagn&oacute;sticas actualmente disponibles. Aunque multimer directa visualizaci&oacute;n por inmunoelectroforesis es un m&eacute;todo com&uacute;nmente usado, no es pr&aacute;ctico como una prueba cl&iacute;nica de rutina. En este estudio, utilizamos una herramienta de an&aacute;lisis biof&iacute;sico, espectroscopia de correlaci&oacute;n de fluorescencia (FCS), para medir las distribuciones de vWF. Los objetivos fueron para desarrollar un m&eacute;todo que es m&aacute;s r&aacute;pido y m&aacute;s simple que la electroforesis en gel de vWF y para evaluar el potencial del FCS como una t&eacute;cnica de diagn&oacute;stico cl&iacute;nica.

Medici&oacute;n cl&iacute;nica del factor de von Willebrand por espectroscopia de correlaci&oacute;n de fluorescencia.

&#x5FAE;&#x5149;&#x5B66;&#x63A2;&#x6D4B;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x68AF;&#x5EA6;&#x6298;&#x5C04;&#x7387; &#xFF08;&#x7B11;&#xFF09; &#x955C;&#x7247;&#x548C; microprisms&#xFF0C;&#x6269;&#x5927;&#x4E86;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x8FBE;&#x5230;&#x6DF1;&#x76AE;&#x8D28;&#x5C42;&#x548C;&#x5E95;&#x5C42;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6D77;&#x9A6C;&#x7B49;&#x4EE5;&#x524D;&#x65E0;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x5165;&#x7684;&#x8111;&#x6DF1;&#x90E8;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x3002;&#x5C1A;&#x672A;&#x4E0E;&#x68AF;&#x5EA6;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x900F;&#x955C;&#x6210;&#x50CF;&#x4ECE;&#x6839;&#x672C;&#x4E0A;&#x53D7;&#x5230;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x7403;&#x5DEE;&#x548C;&#x9700;&#x8981;&#x5EFA;&#x9020;&#x9650;&#x5236;&#x5B57;&#x6BB5;&#x7684;&#x89C6;&#x56FE;&#x7684;&#x590D;&#x5408;&#x955C;&#x7247;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA; 0.5 &#x6BEB;&#x7C73;&#x53E3;&#x5F84;&#x3001; 1.7 &#x6BEB;&#x7C73;&#x957F;&#x54A7;&#x5634;&#x4E00;&#x7B11;&#x955C;&#x5934; singlets 0.6 &#x6570;&#x503C;&#x5B54;&#x5F84;&#x4E0E;&#x76D6;&#x73BB;&#x7483;&#x548C;&#x5E38;&#x89C4;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x5BA2;&#x89C2;&#x6821;&#x6B63;&#x9886;&#x6765;&#x5E73;&#x8861;&#x7403;&#x9762;&#x50CF;&#x5DEE;&#x7279;&#x6027;&#x4E00;&#x8D77;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#xFF0C;&#x5B9E;&#x73B0;&#x6A2A;&#x5411;&#x5206;&#x8FA8;&#x529B;&#x7684; 618 nm &#x548C; 5.5 &mu; m&#xFF0C;&#x8F74;&#x5411;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x76F8;&#x6BD4; &asymp; &#x6A2A;&#x5411;&#x4E0E;&#x8F74;&#x5411;&#x51B3;&#x8BAE; 1 &mu; m &#x548C; &asymp; 15 &mu; m&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x590D;&#x5408;&#x54A7;&#x5634;&#x4E00;&#x7B11;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x76F4;&#x5F84;&#x7684;&#x955C;&#x7247;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x54A7;&#x5634;&#x4E00;&#x7B11;&#x7684;&#x955C;&#x5934; singlets &#x663E;&#x793A;&#x8D85;&#x8FC7; 150 &mu; m&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E3A;&#x6570;&#x5341;&#x5FAE;&#x7C73;&#x590D;&#x5408;&#x68AF;&#x5EA6;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x900F;&#x955C;&#x7684;&#x5B57;&#x6BB5;&#x7684;&#x89C6;&#x56FE;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x54A7;&#x5634;&#x4E00;&#x7B11;&#x955C;&#x5934;/&#x76D6;&#x73BB;&#x7483;&#x7EC4;&#x5408;&#x662F;&#x4FBF;&#x4E8E;&#x7EC4;&#x88C5;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x6B21;&#x6027;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x8BBE;&#x5907;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x795E;&#x7ECF;&#x79D1;&#x5B66;&#x793E;&#x4F1A;&#x51C6;&#x5907;&#x597D;&#x901A;&#x8FC7;&#x7684;&#x4F4E;&#x4EF7;&#x3002;

&#x6DF1;&#x4F53;&#x5185;&#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x5355;&#x7EBF;&#x6001;&#x68AF;&#x5EA6;&#x6298;&#x5C04;&#x7387;&#x900F;&#x955C;&#x3002;

Micro-optical probes, including gradient index (GRIN) lenses and microprisms, have expanded the range of in vivo multiphoton microscopy to reach previously inaccessible deep brain structures such as deep cortical layers and the underlying hippocampus in mice. Yet imaging with GRIN lenses has been fundamentally limited by large amounts of spherical aberration and the need to construct compound lenses that limit the field-of-view. Here, we demonstrate the use of 0.5-mm-diameter, 1.7-mm-long GRIN lens singlets with 0.6 numerical aperture in conjunction with a cover glass and a conventional microscope objective correction collar to balance spherical aberrations. The resulting system achieves a lateral resolution of 618 nm and an axial resolution of 5.5 Î¼m, compared to lateral and axial resolutions of â‰ˆ 1 Î¼m and â‰ˆ 15 Î¼m, respectively, for compound GRIN lenses of similar diameter. Furthermore, the GRIN lens singlets display fields-of-view in excess of 150 Î¼m, compared with a few tens of microns for compound GRIN lenses. The GRIN lens/cover glass combination presented here is easy to assemble and inexpensive enough for use as a disposable device, enabling ready adoption by the neuroscience community.

Singlet gradient index lens for deep in vivo multiphoton microscopy.

Sondes micro-optiques, y compris de gradient d&#39;indice (GRIN) lentilles et microprismes, ont &eacute;largi l&#39;&eacute;ventail de la microscopie multiphoton in vivo pour atteindre les structures jusque-l&agrave; inaccessibles profonde du cerveau telles que les couches profondes corticales et l&#39;hippocampe sous-jacente chez la souris. Imagerie encore avec des lentilles GRIN a &eacute;t&eacute; fondamentalement limit&eacute;e par grandes quantit&eacute;s d&#39;aberration sph&eacute;rique et la n&eacute;cessit&eacute; de construire des lentilles compos&eacute; qui limitent le champ de vision. Ici, nous d&eacute;montrons l&#39;utilisation de 0,5 mm de diam&egrave;tre, 1,7 mm-long sourire maillots de lentille avec une ouverture num&eacute;rique 0,6 en conjonction avec un couvercle en verre et un collier de correction objectif de microscope conventionnel pour &eacute;quilibrer les aberrations sph&eacute;riques. Le syst&egrave;me qui en r&eacute;sulte permet d&#39;obtenir une r&eacute;solution lat&eacute;rale de 618 nm et une r&eacute;solution axiale de 5,5 &mu;m, comparativement &agrave; des r&eacute;solutions lat&eacute;rales et axiales de &asymp; 1 &mu;m et &asymp; 15 &mu;m, respectivement, pour compos&eacute; GRIN lentilles de m&ecirc;me diam&egrave;tre. En outre, les maillots de lentille GRIN affichent champs de vision plus de 150 &mu;m, par rapport &agrave; quelques dizaines de microns pour lentilles compos&eacute;s de sourire. La combinaison de verre cabochon/GRIN pr&eacute;sent&eacute;e ici est facile &agrave; assembler et assez abordable pour une utilisation comme un dispositif jetable, permettant une adoption pr&ecirc;te de la communaut&eacute; des neurosciences.

Objectif du singulet gradient d&#39;indice pour la microscopie multiphoton profond in vivo.

Mikrooptische Sonden, einschlie&szlig;lich Gradienten-Index (GRIN) Linsen und Mikroprismen, erweitert das Spektrum der in-vivo multiphoton-Mikroskopie, zuvor unzug&auml;nglichen tiefen Gehirn Strukturen wie tief kortikalen Schichten und die zugrunde liegenden Hippocampus bei M&auml;usen zu erreichen. Mit GRIN-Linsen noch imaging wurde grundlegend begrenzt durch gro&szlig;e Mengen von sph&auml;rische Aberration und die Notwendigkeit, Compound-Objektive zu konstruieren, die das Sichtfeld einschr&auml;nken. Hier zeigen wir die Verwendung von 0,5 mm Durchmesser, 1,7 mm langen GRINSEN Objektiv Einzellinsen mit 0,6 numerische Apertur in Verbindung mit einem Deckglas und einem herk&ouml;mmlichen Mikroskop Objektive Korrektur Kragen sph&auml;rische Aberrationen auszugleichen. Das resultierende System erreicht eine laterale Aufl&ouml;sung von 618 nm und einer axialen Aufl&ouml;sung von 5,5 &mu;m, verglichen mit laterale und axiale Aufl&ouml;sung von &asymp; 1 &mu;m und &asymp; 15 &mu;m, bzw. f&uuml;r zusammengesetzte GRIN-Linsen mit &auml;hnlichen Durchmesser. Dar&uuml;ber hinaus zeigen die GRIN Linse Einzellinsen Felder-of-View von mehr als 150 &mu;m, verglichen mit ein paar Dutzend Mikrometer f&uuml;r zusammengesetzte GRIN-Linsen. Die GRIN Objektivabdeckung/Glas Kombination pr&auml;sentiert hier ist einfach zu montieren und preiswert genug f&uuml;r den Einsatz als verf&uuml;gbares Ger&auml;t bereit einarbeiten der Neurowissenschaften-Gemeinschaft.

Singulett-Gradienten-Index-Objektiv f&uuml;r multiphoton tief in-vivo-Mikroskopie.

Sonde Micro-ottica, compresi indice gradiente (GRIN) lenti e microprismi, hanno ampliato la gamma di in vivo microscopia multifotonica per raggiungere le strutture cerebrali profonde precedentemente inaccessibili come strati profondi corticali e l&#39;ippocampo sottostante nei topi. Ancora di imaging con lenti GRIN &egrave; stato fondamentalmente limitata da grandi quantit&agrave; di aberrazione sferica e la necessit&agrave; di costruire lenti composto che limitano il campo di vista. Qui, ci illustrano l&#39;utilizzo del diametro di 0,5 mm, 1.7 mm di lunghezza Camiciole di lente GRIN con apertura numerica 0,6 in congiunzione con un vetro di copertura e un collare di correzione oggettiva microscopio convenzionale per bilanciare le aberrazioni sferica. Il sistema risultante raggiunge una risoluzione laterale di 618 nm e una risoluzione assiale di 5,5 &mu;m, rispetto a risoluzioni laterale e assiale di &asymp; 1 &mu;m e &asymp; 15 &mu;m, rispettivamente, per composti GRIN lenti di diametro simile. Inoltre, i canottiere lente GRIN visualizzare campi di vista superiori a 150 &mu;m, confrontato con poche decine di micron per lenti GRIN composti. La combinazione di vetro copriobiettivo/GRIN presentata qui &egrave; facile da montare e abbastanza economico per essere utilizzato come un dispositivo monouso, consentendo la pronta adozione da parte della Comunit&agrave; di neuroscienze.

Lente di gradiente indice singoletto per microscopia multifotonica profondo in vivo.

&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x5149;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#xFF08;&#x30CB;&#x30E4;&#x30EA;&#xFF09; &#x306A;&#x3069;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3068; microprisms&#x3001;&#x62E1;&#x5927;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x8FD1;&#x3065;&#x304D;&#x8133;&#x6DF1;&#x90E8;&#x69CB;&#x9020;&#x76AE;&#x8CEA;&#x6DF1;&#x90E8;&#x5C64;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x6D77;&#x99AC;&#x306A;&#x3069;&#x306B;&#x5230;&#x9054;&#x3059;&#x308B; in vivo &#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3002;&#x307E;&#x3060;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0; GRIN &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3092;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306B;&#x5927;&#x91CF;&#x306E;&#x7403;&#x9762;&#x53CE;&#x5DEE;&#x3068;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x3092;&#x5236;&#x9650;&#x3059;&#x308B;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3092;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3059;&#x308B;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;0.5 mm &#x306E;&#x76F4;&#x5F84;&#x3001;1.7 mm &#x9577;&#x3055;&#x306E; GRIN &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA; &#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8; 0.6 &#x958B;&#x53E3;&#x6570;&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC; &#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x3068;&#x7403;&#x9762;&#x53CE;&#x5DEE;&#x3092;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x5BA2;&#x89B3;&#x7684;&#x88DC;&#x6B63;&#x895F;&#x3068;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x3068;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x30C7;&#x30E2;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x7D50;&#x679C; 618 &#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3092;&#x5B9F;&#x73FE; nm &#x3068;&#x3001;&#x8EF8;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6; 5.5 &mu; m &#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066; &asymp; &#x5074;&#x5727;&#x3068;&#x8EF8;&#x306E;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x3092; 1 &mu; m &#x3068; &asymp; 15 &mu;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3001;&#x5316;&#x5408;&#x7269; GRIN &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3088;&#x304F;&#x4F3C;&#x305F;&#x76F4;&#x5F84;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;GRIN &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA; &#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x6570;&#x5341;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E; GRIN &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x306E;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x3001;150 &mu; m &#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x308B;&#x306E;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC; &#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x306E;&#x8868;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x306B;&#x63D0;&#x793A; GRIN &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;/&#x30AB;&#x30D0;&#x30FC; &#x30AC;&#x30E9;&#x30B9;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x3084;&#x3059;&#x3044;&#x3068;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x5B89;&#x4FA1;&#x306A;&#x6E96;&#x5099;&#x306E;&#x63A1;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x795E;&#x7D4C;&#x79D1;&#x5B66;&#x30B3;&#x30DF;&#x30E5;&#x30CB;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3001;&#x4F7F;&#x3044;&#x6368;&#x3066;&#x306E;&#x30C7;&#x30D0;&#x30A4;&#x30B9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3067;&#x3059;&#x3002;

&#x6DF1;&#x3044; in vivo &#x591A;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x4E00;&#x91CD;&#x9805;&#x30B0;&#x30E9;&#x30C7;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; &#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30EC;&#x30F3;&#x30BA;&#x3002;

&#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C; &#xAD11;&#xD559; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;, &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC778;&#xB371;&#xC2A4; (&#xBBF8;&#xC18C;)&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xB80C;&#xC988; &#xBC0F; &#xC9C0;&#xB3C4;, &#xAE4A;&#xC740; &#xB300;&#xB1CC; &#xD53C; &#xC9C8;&#xC758; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC950; &#xD574; &#xB9C8; &#xB4F1;&#xC758; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xAE4A;&#xC740; &#xB1CC; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC; multiphoton &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC758; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xD655;&#xB300; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xC18C; &#xB80C;&#xC988;&#xC640; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9D5; &#xC544;&#xC9C1; &#xB2E4;&#xB7C9;&#xC758; &#xAD6C;&#xBA74; &#xC218; &#xCC28; &#xBC0F; &#xBCF4;&#xAE30; &#xD544;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC81C;&#xD55C; &#xD558;&#xB294; &#xBCF5;&#xD569; &#xB80C;&#xC988;&#xB97C; &#xAD6C;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xD544;&#xC694;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xD55C; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xCEE4;&#xBC84; &#xC720;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xAD6C;&#xBA74; aberrations &#xADE0;&#xD615;&#xC744; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC1D;&#xAD00;&#xC801;&#xC778; &#xBCF4;&#xC815; &#xCE7C;&#xB77C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; 0.6 &#xC22B;&#xC790; &#xC870;&#xB9AC;&#xAC1C;&#xC640; 0.5 m m &#xC9C1;&#xACBD;, 1.7 m m &#xAE34; &#xBBF8;&#xC18C; &#xB80C;&#xC988; singlets &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB2EC;&#xC131; 618&#xC758; &#xCE21;&#xBA74; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; &#xBC0F; 5.5 &mu; m&#xC758; &#xCD95; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &asymp;&#xC758; &#xCE21;&#xBA74; &#xBC0F; &#xCD95; &#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; 1 &mu; m &#xBC0F; &asymp; 15 &mu;, &#xAC01;&#xAC01; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC9C1;&#xACBD;&#xC758; &#xCEF4;&#xD30C;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xBBF8;&#xC18C; &#xB80C;&#xC988;. &#xB610;&#xD55C;, &#xBBF8;&#xC18C; &#xB80C;&#xC988; singlets &#xBCF5;&#xD569; &#xBBF8;&#xC18C; &#xB80C;&#xC988; &#xBBF8;&#xD06C;&#xB860;&#xC758; &#xBA87; &#xC218;&#xB9CC; &#xBE44;&#xD574; 150 &mu; m &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xBCF4;&#xAE30;&#xC758; &#xD544;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xBBF8;&#xC18C; &#xB80C;&#xC988;/&#xCEE4;&#xBC84; &#xC720;&#xB9AC; &#xC870;&#xD569; &#xC870;&#xB9BD; &#xD558;&#xAE30; &#xC27D;&#xACE0; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xC2E0;&#xACBD; &#xACFC;&#xD559; &#xCEE4;&#xBBA4;&#xB2C8;&#xD2F0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC900;&#xBE44; &#xB3C4;&#xC785;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xAC8C; &#xC77C;&#xD68C;&#xC6A9; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC800;&#xB834; &#xD55C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB0B4;&#xC758; &#xAE4A;&#xC740; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; multiphoton &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158; &#xC778;&#xB371;&#xC2A4; &#xB80C;&#xC988;.

Sondas &oacute;pticas micro, incluyendo &iacute;ndice gradiente (GRIN) lentes y microprisms, han ampliado la gama de microscop&iacute;a multifot&oacute;n in vivo para llegar a las estructuras del cerebro profundo previamente inaccesibles como capas corticales profundas y el hipocampo subyacente en ratones. Proyecci&oacute;n de imagen a&uacute;n con lentes de sonrisa ha sido limitado fundamentalmente por grandes cantidades de aberraci&oacute;n esf&eacute;rica y la necesidad de construir lentes de compuesto que limitan el campo de visi&oacute;n. Aqu&iacute;, demostramos que el uso de camisetas de lente GRIN 0.5 mm de di&aacute;metro, 1.7 mm de longitud con 0,6 apertura num&eacute;rica junto con una cubierta de vidrio y un collar de correcci&oacute;n objetiva del microscopio convencional para equilibrar las aberraciones esf&eacute;ricas. El sistema resultante alcanza una resoluci&oacute;n lateral de 618 nm y una resoluci&oacute;n axial de 5.5 &mu;m, comparado resoluci&oacute;n lateral y axial de &asymp; 1 &micro;m y &asymp; 15 &micro;m, respectivamente, para lentes GRIN compuestas de di&aacute;metro similar. Adem&aacute;s, las camisetas de la lente GRIN Mostrar campos de vista superior a 150 &mu;m, en comparaci&oacute;n con unas pocas decenas de micras para lentes compuestas de sonrisa. La combinaci&oacute;n de vidrio de cubierta de lente/GRIN presentada aqu&iacute; es f&aacute;cil de montar y lo suficientemente barato para su uso como un dispositivo desechable, permitiendo la adopci&oacute;n preparado por la comunidad de neurociencia.

Michael J. Levene

Department of Biomedical Engineering

Yale University

In vivo Imaging of Deep Cortical Layers using a Microprism

Multiphoton Microscopy of Cleared Mouse Brain Expressing YFP