Demonstrating the Uses of the Novel Gravitational Force Spectrometer to Stretch and Measure Fibrous Proteins

The study of macromolecular structure has become critical to the elucidation of molecular mechanisms and function. There are several limited, but ...

University of North Texas

&#x539F;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; subfragment-1 (S1) &#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D;&#x505C;&#x9760;&#x5728;&#x4E00;&#x8D77;&#x4F7F;&#x7528;&#x524D;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6570;&#x636E;&#x548C; postpowerstroke &#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x6700;&#x4F73;&#x914D;&#x5408;&#x7684;&#x8D28;&#x91CF;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x4E00;&#x7EC4;&#x7ED9;&#x5B9A;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6761;&#x4EF6; S1 &#x7684;&#x9888;&#x90E8;&#x533A;&#x57DF;&#x65B9;&#x5411;&#x4E4B;&#x95F4;&#x53D7;&#x5230;&#x6B67;&#x89C6;&#x3002;Postpowerstroke &#x56FD;&#x5BB6;&#x9762;&#x524D; ADP &#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#xFF0C;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6570;&#x636E;&#x672C;&#x8EAB;&#x8DB3;&#x4EE5;&#x505C;&#x9760;&#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E0E;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E24;&#x4E2A;&#x9888;&#x90E8;&#x533A;&#x57DF;&#x65B9;&#x5411;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x5B58;&#x5728;&#x7684; S1 &#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;&#x8981;&#x5C06;&#x505C;&#x9760; prepowerstroke &#x72B6;&#x6001;&#xFF0C;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6570;&#x636E;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x7ED3;&#x5408;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x5316;&#x5B66;&#x4EA4;&#x8054;&#x6570;&#x636E;&#x786E;&#x5B9A;&#x9888;&#x90E8;&#x533A;&#x57DF;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x76F8;&#x4F3C;&#x7684;&#x62DF;&#x8BAE;&#x7684; prepowerstroke &#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x6700;&#x597D;&#x9002;&#x5408;&#x6570;&#x636E;&#x3002;&#x4ECE;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x6587;&#x732E;&#x7684;&#x663E;&#x5FAE;&#x7167;&#x7247;&#x72EC;&#x7ACB;&#x786E;&#x5B9A;&#x4ECE;&#x7535;&#x955C;&#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x6A21;&#x578B;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x3002;&#x7531;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x575E;&#x6A21;&#x578B;&#x8868;&#x660E;&#x8F7B;&#x94FE;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x8F83;&#x5927;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x4F34;&#x968F;&#x7740;&#x626D;&#x66F2;&#x548C;&#x65CB;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7684;&#x50AC;&#x5316;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5F31;&#x5230;&#x5F3A;&#x7684;&#x8FC7;&#x6E21;&#x671F;&#x95F4;&#x9020;&#x6210;&#x7684;&#x5927;&#x7EA6; 30 &#x5EA6;&#x503E;&#x659C;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8FC7;&#x6E21;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5FC5;&#x8981;&#x652F;&#x6301;&#x52A8;&#x529B;&#x548C;&#x90E8;&#x961F;&#x7684;&#x7EC4;&#x5EFA;&#x7684;&#x4F4D;&#x79FB;&#x3002;

&#x52A8;&#x6001;&#x5BF9;&#x63A5;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x3002;

Atomic models of myosin subfragment-1 (S1) and the actin filament are docked together using resonance energy-transfer data from both pre- and postpowerstroke conditions. The quality of the resulting best fits discriminated between neck-region orientations of the S1 for a given set of experimental conditions. For measurements of the postpowerstroke states in the presence of ADP, resonance energy-transfer data alone are sufficient to dock the atomic models and provide evidence that S1 exists with at least two neck-region orientations under these conditions. To dock the prepowerstroke state, resonance energy-transfer data were used in combination with previous chemical cross-linking data to determine that a neck-region orientation similar to that of a proposed prepowerstroke state best fit the data. The resulting models determined independently from electron microscopy compare favorably with micrographs from the recent literature. The docking models by resonance energy transfer suggest that the larger movements in the light-chain binding domain are accompanied by twisting and rotating movements of the catalytic domain, causing a tilt of approximately 30 degrees during the weak-to-strong transition. This transition provides the displacement necessary to support motility and force generation.

Dynamic docking of myosin and actin observed with resonance energy transfer.

Mod&#xE8;les atomiques de la myosine sous-fragment-1 (S1) et le filament d&#x26;#39;actine sont ancr&#xE9;s ensemble en utilisant la r&#xE9;sonance de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie de donn&#xE9;es &#xE0; partir des deux conditions pr&#xE9;-et postpowerstroke. La qualit&#xE9; de la meilleure final puisse &#xEA;tre une discrimination entre les cou-r&#xE9;gion orientations du S1 pour un ensemble donn&#xE9; de conditions exp&#xE9;rimentales. Pour les mesures des Etats postpowerstroke en pr&#xE9;sence d&#x26;#39;ADP, de r&#xE9;sonance de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie de donn&#xE9;es suffisent &#xE0; ancrer les mod&#xE8;les atomiques et fournir la preuve que S1 existe avec au moins deux cou-r&#xE9;gion orientations dans ces conditions. Pour ancrer l&#x26;#39;&#xE9;tat prepowerstroke, r&#xE9;sonance de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie donn&#xE9;es ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;es en combinaison avec les pr&#xE9;c&#xE9;dents produits chimiques de r&#xE9;ticulation des donn&#xE9;es afin de d&#xE9;terminer si une orientation cou-r&#xE9;gion similaire &#xE0; celle d&#x26;#39;un Etat prepowerstroke propos&#xE9; s&#x26;#39;adapter au mieux aux donn&#xE9;es. Les mod&#xE8;les qui en r&#xE9;sultent d&#xE9;termin&#xE9;s ind&#xE9;pendamment de la microscopie &#xE9;lectronique se comparent favorablement avec micrographies de la litt&#xE9;rature r&#xE9;cente. Les mod&#xE8;les d&#x26;#39;amarrage par transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie de r&#xE9;sonance indiquent que les mouvements plus grands dans le domaine de liaison de cha&#xEE;ne l&#xE9;g&#xE8;re sont accompagn&#xE9;es par torsion et mouvements de rotation du domaine catalytique, ce qui provoque une inclinaison d&#x26;#39;environ 30 degr&#xE9;s pendant la transition faibles &#xE0; forte. Cette transition fournit le d&#xE9;placement n&#xE9;cessaire pour soutenir la motilit&#xE9; et de g&#xE9;n&#xE9;ration de force.

Station d&#x26;#39;accueil dynamique de myosine et l&#x26;#39;actine Observ&#xE9; avec Resonance Energy Transfer

Dynamische Andocken von Myosin und Aktin beobachtet mit Resonance Energy Transfer.

Modelli atomici di miosina subfragment-1 (S1) e i filamenti di actina sono ancorati insieme utilizzando dati trasferimento di energia per risonanza da entrambi pre e postpowerstroke condizioni. La qualit&agrave; del risultante si adatta meglio discriminate tra gli orientamenti del collo-regione della S1 per un determinato insieme di condizioni sperimentali. Per le misure degli Stati postpowerstroke in presenza di ADP, dati di trasferimento di energia di risonanza da soli sono sufficienti per i modelli atomici del bacino e di fornire la prova che S1 esiste con almeno due orientamenti collo-regione in queste condizioni. Per ancorare lo stato prepowerstroke, dati di trasferimento di energia di risonanza sono stati utilizzati in combinazione con dati cross-linking chimici precedenti per determinare che un orientamento regione collo simile a quello di uno stato di prepowerstroke proposte migliore adatta i dati. I modelli risultanti determinati indipendentemente da microscopia elettronica reggono il confronto con micrografie dalla letteratura recente. I modelli docking da trasferimento di energia per risonanza suggeriscono che i grandi movimenti nel dominio luce-catena sono accompagnati da torsione e rotazione movimenti del dominio catalitico, provocando un&#39;inclinazione di circa 30 gradi durante la transizione debole e forte. Questo passaggio fornisce lo spostamento necessario per sostenere la motilit&agrave; e forzare la generazione.

Aggancio dinamico di miosina e actina osservato con trasferimento di energia per risonanza.

&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B5;&#x30D6;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;1&#xFF08;S1&#xFF09;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x539F;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x524D;&#x3068;postpowerstroke&#x6761;&#x4EF6;&#x304B;&#x3089;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x54C1;&#x8CEA;&#x306F;&#x5B9F;&#x9A13;&#x6761;&#x4EF6;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;S1&#x306E;&#x9996;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x65B9;&#x5411;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x5DEE;&#x5225;&#x30D5;&#x30A3;&#x30C3;&#x30C8;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; ADP&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;postpowerstroke&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x72EC;&#x3067;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;S1&#x304C;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x30CD;&#x30C3;&#x30AF;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x65B9;&#x5411;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002; prepowerstroke&#x72B6;&#x614B;&#x3092;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x304C;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;prepowerstroke&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x9996;&#x9818;&#x57DF;&#x306E;&#x5411;&#x304D;&#x304C;&#x6700;&#x3082;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x9069;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306E;&#x5316;&#x5B66;&#x67B6;&#x6A4B;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x200B;&#x200B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x304B;&#x3089;&#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3057;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x6587;&#x732E;&#x304B;&#x3089;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8EFD;&#x9396;&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x52D5;&#x304D;&#x304C;&#x306D;&#x3058;&#x308C;&#x3068;&#x89E6;&#x5A92;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x52D5;&#x304D;&#x3092;&#x56DE;&#x8EE2;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x5F31;&#x3044;&#x304B;&#x3089;&#x5F37;&#x3044;&#x306E;&#x79FB;&#x884C;&#x4E2D;&#x306B;&#x7D04;30&#x5EA6;&#x306E;&#x50BE;&#x304D;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F34;&#x3046;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x9077;&#x79FB;&#x306F;&#x3001;&#x904B;&#x52D5;&#x3068;&#x529B;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x5909;&#x4F4D;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x3068;&#x89B3;&#x6E2C;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;

Myosin subfragment-1 (S1)&#xC758; &#xC6D0;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xACFC; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xBAA8;&#xB450; &#xC0AC;&#xC804;&#xC5D0;&#xC11C; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBC0F; postpowerstroke &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD568;&#xAED8; &#xACE0;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xB9DE;&#xB294; &#xD488;&#xC9C8; &#xC8FC;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; s 1&#xC758; &#xBC29;&#xD5A5; &#xBAA9; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xAC04;&#xC758; &#xCC28;&#xBCC4;. ADP &#xC874;&#xC7AC; postpowerstroke &#xC0C1;&#xD0DC; &#xCE21;&#xC815;&#xC6A9; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD63C;&#xC790; &#xC6D0;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xD558; &#xACE0; s 1&#xC774;&#xC774; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; 2 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1; &#xBAA9; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC29;&#xD5A5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC874;&#xC7AC; &#xD558;&#xB294; &#xC99D;&#xAC70;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xAE30;&#xC5D0; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Prepowerstroke &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xACE0;&#xC815; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC774;&#xC804; &#xD654;&#xD559; &#xAC00;&#xAD50; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBAA9; &#xC9C0;&#xC5ED; &#xBC29;&#xD5A5; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; prepowerstroke &#xC0C1;&#xD0DC; &#xCD5C;&#xACE0;&#xC758; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xC801;&#xD569; &#xD655;&#xC778;&#xC744; &#xC4F0;&#xC600;&#xB2E4;. &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACB0;&#xC815; &#xACB0;&#xACFC; &#xBAA8;&#xB378; &#xCD5C;&#xADFC; &#xBB38;&#xD559;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD638;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xD558; &#xC5EC; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xBAA8;&#xB378; &#xC81C;&#xC548; &#xBE5B; &#xCCB4;&#xC778; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD070; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784; &#xC65C;&#xACE1; &#xD558; &#xACE0; &#xC57D;&#xD55C;-&#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC804;&#xD658; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC57D; 30&#xB3C4;&#xC758; &#xACBD;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0A4;&#xB294; &#xCD09;&#xB9E4; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC784;&#xC744; &#xD68C;&#xC804; &#xD558; &#xC5EC; &#xD568;&#xAED8; &#xC81C;&#xACF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC804;&#xD658; &#xBCC0;&#xC704;&#xB97C; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD558; &#xACE0; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB3D9;&#xC801; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; myosin &#xB3C4;&#xD0B9;.

Modelos at&#xF3;micos de la miosina subfragmento-1 (S1) y los filamentos de actina se acoplan entre s&#xED; mediante la transferencia de energ&#xED;a de resonancia-los datos de las dos condiciones anteriores y postpowerstroke. La calidad de la mejor resultante se ajusta discriminados entre las orientaciones de la regi&#xF3;n de cuello de la S1 para un conjunto dado de condiciones experimentales. Para las mediciones de los estados postpowerstroke en presencia de ADP, la transferencia de energ&#xED;a de resonancia de datos por s&#xED; solos son suficientes para acoplar los modelos at&#xF3;micos y proporcionan evidencia de que existe S1 con al menos dos orientaciones-regi&#xF3;n del cuello bajo estas condiciones. Para acoplar el estado prepowerstroke, resonancia de transferencia de energ&#xED;a de datos se utiliza en combinaci&#xF3;n con las anteriores qu&#xED;micos que unen transversal de datos para determinar que una orientaci&#xF3;n cuello-regi&#xF3;n similar a la de un estado prepowerstroke propuesto se adaptan mejor a los datos. Los modelos resultantes determinan independientemente de la microscop&#xED;a electr&#xF3;nica se comparan favorablemente con las micrograf&#xED;as de la literatura reciente. Los modelos de acoplamiento por transferencia de energ&#xED;a de resonancia sugieren que los movimientos m&#xE1;s grandes en el dominio de uni&#xF3;n de cadena ligera son acompa&#xF1;ados por torsi&#xF3;n y movimientos de rotaci&#xF3;n del dominio catal&#xED;tico, provocando una inclinaci&#xF3;n de aproximadamente 30 grados durante la transici&#xF3;n d&#xE9;bil a fuerte. Esta transici&#xF3;n proporciona el desplazamiento necesario para apoyar la motilidad y la generaci&#xF3;n de fuerza.

De acoplamiento din&#xE1;mica de actina y miosina Observado con transferencia de energ&#xED;a resonante

&#x8089;&#x63A5;&#x53E3;&#x7684;&#x51E0;&#x79CD;&#x539F;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6D4B;&#x91CF;&#x5176;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E00;&#x8D77;&#x5BF9;&#x63A5;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x5F53;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7D27;&#x7D27;&#x5730;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6A21;&#x578B;&#x662F;&#x8FD1;&#x4F3C;&#x534F;&#x8BAE;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x63A5;&#x53E3;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5206;&#x5B50;&#x5BF9;&#x63A5;&#x6A21;&#x62DF;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x81EA;&#x7531;&#x80FD;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5B83;&#x4EEC;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5173;&#x7CFB;&#x662F;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x67E5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x521A;&#x6027;&#x5BF9;&#x63A5;&#x548C;&#x67D4;&#x6027;&#x5BF9;&#x63A5;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x641C;&#x7D22;&#x7B56;&#x7565;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x8BC6;&#x522B;&#x91CA;&#x653E;&#x80FD;&#x91CF;&#x6781;&#x5C0F;&#x503C;&#x5728;&#x539F;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x63A5;&#x53E3;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6570;&#x636E;&#x7684;&#x575E;&#x6A21;&#x578B;&#x66F4;&#x63A5;&#x8FD1;&#x4E8E;&#x81EA;&#x7531;&#x80FD;&#x6E90;&#x6700;&#x4F4E;&#x5728;&#x754C;&#x9762;&#x4E0A;&#x6BD4;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7684;&#x53EF;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x641C;&#x7D22;&#x4F7F;&#x7528;&#x6247;&#x8D1D;&#x548C;&#x9E21;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x88AB;&#x6267;&#x884C;&#xFF0C;&#x5E76;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x540C;&#x6837;&#x9762;&#x5411;&#x670D;&#x52A1;&#x6765;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6A21;&#x578B;&#x662F;&#x5168;&#x7403;&#x6700;&#x4F4E;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x63A5;&#x53E3;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x73B0;&#x6709;&#x575E;&#x6A21;&#x578B;&#x662F;&#x63A5;&#x8FD1;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x6B63;&#x662F;&#x5728;&#x5F3A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5173;&#x7CFB;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x793A;&#x5E94;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E24;&#x79CD;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28; &#xFF1B; &#x521D;&#x6B21;&#x63A5;&#x89E6;&#x7684;&#x80FD;&#x91CF;&#x6700;&#x4F4E;&#x521D;&#x6B21;&#x63A5;&#x89E6;&#x7F51;&#x7AD9;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x5F88;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x8FC7;&#x6E21;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5F3A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;

&#x8BA1;&#x7B97;&#x539F;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x6BD4;&#x8F83;&#x5206;&#x6790;&#x8089;&#x63A5;&#x53E3;&#x3002;

Several atomic models of the actomyosin interface have been proposed based on the docking together of their component structures using electron microscopy and resonance energy-transfer measurements. Although these models are in approximate agreement in the location of the binding interfaces when myosin is tightly bound to actin, their relationships to molecular docking simulations based on computational free-energy calculations are investigated here. Both rigid-docking and flexible-docking conformational search strategies were used to identify free-energy minima at the interfaces between atomic models of myosin and actin. These results suggest that the docking model produced by resonance energy-transfer data is closer to a free-energy minimum at the interface than are the available atomic models based on electron microscopy. The conformational searches were performed using both scallop and chicken skeletal muscle myosins and identified similarly oriented actin-binding interfaces that serve to validate that these models are at the global minimum. These results indicate that the existing docking models are close to but not precisely at the lowest-energy initial contact site for strong binding between myosin and actin that should represent an initial contact between the two proteins; therefore, conformational changes are likely to be important during the transition to a strongly bound complex.

A computational comparison of the atomic models of the actomyosin interface.

Plusieurs mod&#xE8;les atomiques de l&#x26;#39;interface actomyosine ont &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9;es sur la base de la station d&#x26;#39;accueil ainsi que de leurs structures de composants utilisant la microscopie &#xE9;lectronique et de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance mesures. Bien que ces mod&#xE8;les sont en accord approximatif &#xE0; l&#x26;#39;emplacement des interfaces de liaison lorsque la myosine est &#xE9;troitement li&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;actine, leurs relations &#xE0; des simulations d&#x26;#39;amarrage mol&#xE9;culaire bas&#xE9;es sur de calcul d&#x26;#39;&#xE9;nergie libre calculs sont &#xE9;tudi&#xE9;s ici. &#xC0; la fois rigide et flexible en cale-docking strat&#xE9;gies de recherche de conformation ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour identifier les minima d&#x26;#39;&#xE9;nergie libre au niveau des interfaces entre les mod&#xE8;les atomiques de la myosine et l&#x26;#39;actine. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que le mod&#xE8;le d&#x26;#39;amarrage produite par r&#xE9;sonance de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie est plus proche des donn&#xE9;es &#xE0; un minimum d&#x26;#39;&#xE9;nergie libre &#xE0; l&#x26;#39;interface que sont les mod&#xE8;les disponibles atomiques bas&#xE9;es sur la microscopie &#xE9;lectronique. Les recherches ont &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;aide de conformation &#xE0; la fois le p&#xE9;toncle et le poulet myosines musculaires squelettiques et identifi&#xE9; de la m&#xEA;me orient&#xE9;s liant l&#x26;#39;actine interfaces qui servent &#xE0; valider le fait que ces mod&#xE8;les sont au minimum global. Ces r&#xE9;sultats indiquent que les mod&#xE8;les d&#x26;#39;amarrage existants sont &#xE0; proximit&#xE9;, mais pas pr&#xE9;cis&#xE9;ment sur le site de plus basse &#xE9;nergie contact initial pour la liaison &#xE9;troits entre la myosine et l&#x26;#39;actine qui devraient repr&#xE9;senter un premier contact entre les deux prot&#xE9;ines, par cons&#xE9;quent, des changements de conformation sont susceptibles de jouer un r&#xF4;le important au cours la transition vers un complexe fortement li&#xE9;.

Une comparaison des mod&#xE8;les de calcul atomique de l&#x26;#39;interface actomyosine

Eine rechnerische Vergleich der atomaren Modelle der Actomyosin Schnittstelle.

Basato sull&#39;attracco insieme delle loro strutture di componente utilizzando le misure di microscopia elettronica e risonanza-il trasferimento di energia sono stati proposti diversi modelli atomici dell&#39;interfaccia actomiosina. Anche se questi modelli sono in accordo approssimativo nella posizione delle interfacce associazione quando la miosina &egrave; strettamente legata all&#39;actina, sono indagati qui loro relazioni a simulazioni di docking molecolare basati su calcoli computazionali di energia libera. Due strategie di ricerca conformazionale docking rigido e flessibile-docking furono utilizzate per identificare minimi di energia libera alle interfacce tra modelli atomici di miosina e actina. Questi risultati suggeriscono che il docking modello prodotto da dati di trasferimento di energia di risonanza &egrave; pi&ugrave; vicino a un minimo di energia libera all&#39;interfaccia che sono disponibili modelli atomici basati sulla microscopia elettronica. Le ricerche conformazionali sono state eseguite utilizzando pollo e pettine myosins muscolo scheletrico e identificato similmente orientate interfacce actina-associazione che servono a convalidare che questi modelli sono il minimo globale. Questi risultati indicano che i modelli esistenti di ancoraggio sono vicini ma non precisamente presso il sito contatto iniziale pi&ugrave; basso-energia per la forte associazione tra miosina e actina che dovrebbe rappresentare un primo contatto tra le due proteine; Pertanto, cambiamenti conformazionali sono suscettibili di essere importante durante la transizione verso un complesso fortemente legato.

Un confronto computazionale dei modelli atomici dell&#39;interfaccia actomiosina.

&#x30A2;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x539F;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304C;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x72EC;&#x81EA;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x5BC6;&#x63A5;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7D50;&#x5408;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3067;&#x304A;&#x304A;&#x3088;&#x305D;&#x306E;&#x5408;&#x610F;&#x306B;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x8A08;&#x7B97;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x5206;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#xB7;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3078;&#x306E;&#x95A2;&#x4FC2;&#x304C;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x525B;&#x4F53;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30D5;&#x30EC;&#x30AD;&#x30B7;&#x30D6;&#x30EB;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x914D;&#x5EA7;&#x63A2;&#x7D22;&#x6226;&#x7565;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304C;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x539F;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x754C;&#x9762;&#x3067;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x6975;&#x5C0F;&#x5024;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x8EE2;&#x9001;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x539F;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x3001;&#x754C;&#x9762;&#x3067;&#x306E;&#x81EA;&#x7531;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3092;&#x6700;&#x5C0F;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x691C;&#x7D22;&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30BF;&#x30C6;&#x8C9D;&#x3068;&#x9D8F;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x884C;&#x3044;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x304C;&#x5927;&#x57DF;&#x7684;&#x6700;&#x5C0F;&#x5024;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F79;&#x7ACB;&#x3064;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x6307;&#x5411;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306F;2&#x3064;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x9593;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x63A5;&#x89E6;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3079;&#x304D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6700;&#x4F4E;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x63A5;&#x89E6;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x4E2D;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x5F37;&#x304F;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306B;&#x79FB;&#x884C;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30A2;&#x30AF;&#x30C8;&#xB7;&#x30A4;&#x30F3;&#x30BF;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x539F;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;

Actomyosin &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC6D0;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xC740; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xD568;&#xAED8; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95; &#xBC0F; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Myosin &#xBC00;&#xC811; &#xD558; &#xAC8C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xB54C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xB7B5;&#xC801;&#xC778; &#xACC4;&#xC57D;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;&#xC740;, &#xBE44;&#xB85D; &#xC804;&#xC0B0; &#xC790;&#xC720; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xACC4;&#xC0B0;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xC790; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC758; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5EC;&#xAE30; &#xC870;&#xC0AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACBD;&#xC9C1; &#xB41C; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xBC0F; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC804;&#xB7B5;&#xC744; &#xBAA8;&#xB450; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xBB34;&#xB8CC; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xCD5C;&#xC18C; &#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; myosin&#xC758; &#xC6D0;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC791; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xBAA8;&#xB378;&#xC740; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xBB34;&#xB8CC; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xCD5C;&#xC18C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC6D0;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378; &#xAE30;&#xBC18; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAC80;&#xC0C9; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; myosins &#xAC00;&#xB9AC;&#xBE44;&#xC640; &#xB2ED;&#xACE0;&#xAE30;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xD589; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C; &#xBAA8;&#xD615;&#xC740; &#xC720;&#xD6A8;&#xC131;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xC5ED;&#xD560; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD558;&#xAC8C; &#xC9C0;&#xD5A5;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xAE30;&#xC874; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xBAA8;&#xB378;&#xC740; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB450; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC811;&#xCD09;&#xC744; &#xB300;&#xD45C; &#xD55C;&#xB2E4; &#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; myosin &#xC0AC;&#xC774; &#xAC15;&#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xCD5C;&#xC800; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xCD08;&#xAE30; &#xC5F0;&#xB77D;&#xCC98; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294; &#xAC15;&#xB825; &#xD558; &#xAC8C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xCF64;&#xD50C;&#xB809;&#xC2A4;&#xB97C; &#xC804;&#xD658; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB420; &#xAC83;.

Actomyosin &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xC6D0;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xC758; &#xACC4;&#xC0B0; &#xBE44;&#xAD50;.

Varios modelos at&#xF3;micos de la interfaz de actomiosina se han propuesto basado en el acoplamiento juntos de sus estructuras de componentes utilizando microscop&#xED;a electr&#xF3;nica y las mediciones de resonancia de transferencia de energ&#xED;a. Aunque estos modelos est&#xE1;n de acuerdo en la ubicaci&#xF3;n aproximada de las interfaces de uni&#xF3;n, cuando la miosina est&#xE1; fuertemente unido a la actina, sus relaciones con simulaciones de acoplamiento molecular computacional basados &#x200B;&#x200B;en c&#xE1;lculos de energ&#xED;a libre se investigan aqu&#xED;. Tanto r&#xED;gido de acoplamiento y de acoplamiento flexible estrategias de b&#xFA;squeda de conformaci&#xF3;n se utilizaron para identificar los m&#xED;nimos de energ&#xED;a libre en las interfaces entre los modelos at&#xF3;micos de actina y miosina. Estos resultados sugieren que el modelo de acoplamiento producido por resonancia de transferencia de energ&#xED;a de datos est&#xE1; m&#xE1;s cerca de un m&#xED;nimo de energ&#xED;a libre en la interfase que son los modelos disponibles at&#xF3;micos basados &#x200B;&#x200B;en microscop&#xED;a electr&#xF3;nica. Las b&#xFA;squedas conformacionales se realizaron con dos vieiras y pollo miosinas del m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico y se identificaron de manera similar orientadas uni&#xF3;n actina-interfaces que sirven para validar que estos modelos se encuentran en el m&#xED;nimo global. Estos resultados indican que los modelos de atraque existentes est&#xE1;n cerca de, pero no precisamente en el sitio de contacto inicial de menor energ&#xED;a para la uni&#xF3;n fuerte entre actina y miosina que debe representar un contacto inicial entre las dos prote&#xED;nas, por lo tanto, los cambios conformacionales son propensos a ser importante durante la transici&#xF3;n a un complejo fuertemente unido.

Una comparaci&#xF3;n computacional de los modelos at&#xF3;micos de la interfaz de la actomiosina

La actina y miosina interact&#xFA;an en una serie c&#xED;clica de pasos vinculados a la hidr&#xF3;lisis de ATP que son representativos de un mecanismo molecular antigua y extendida. Hallazgos espectrosc&#xF3;picos est&#xE1;n relacionados con el an&#xE1;lisis de las estructuras de actina y miosina y los resultados de la cin&#xE9;tica, las fibras, las mol&#xE9;culas individuales, microscop&#xED;a electr&#xF3;nica, la gen&#xE9;tica, y una variedad de otros estudios biof&#xED;sicos y bioqu&#xED;micos de la actina y la miosina para proporcionar una visi&#xF3;n general de los pasos de este proceso molecular. La s&#xED;ntesis de las principales conclusiones de estos campos revela un motor de alta eficiencia que amplifica los cambios sutiles en el sitio activo en inmejorables desplazamientos moleculares. Evoluci&#xF3;n reciente de la energ&#xED;a de resonancia de transferencia de la espectroscop&#xED;a y cristalograf&#xED;a de rayos X est&#xE1; habilitando una aclaraci&#xF3;n detallada de las etapas de una carrera de gran tama&#xF1;o que est&#xE1; de acuerdo con las evidencias de diversas l&#xED;neas de investigaci&#xF3;n estructural y cin&#xE9;tico. Una imagen completa de la motilidad actina y la miosina parece incluir giros, inclinaciones, escalones, y la din&#xE1;mica de los dos socios que podr&#xED;an ser descritos como una danza molecular.

La Danza de la actina y la miosina: una perspectiva estructural y espectrosc&#xF3;pica

&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x53E4;&#x4EE3;&#x3068;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x4EE3;&#x8868;&#x3067;&#x3042;&#x308B;ATP&#x306E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x306B;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x624B;&#x9806;&#x306E;&#x5DE1;&#x56DE;&#x76F4;&#x5217;&#x306B;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5206;&#x5149;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x52D5;&#x614B;&#x3001;&#x7E4A;&#x7DAD;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x624B;&#x9806;&#x306E;&#x6982;&#x8981;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B66;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x306E;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x5206;&#x5B50;&#x904E;&#x7A0B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x67FB;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x5408;&#x6210;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5353;&#x8D8A;&#x3057;&#x305F;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x5909;&#x4F4D;&#x306B;&#x6D3B;&#x6027;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x5FAE;&#x5999;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5897;&#x5E45;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x52B9;&#x7387;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x3068;X&#x7DDA;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x5C55;&#x306F;&#x3001;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x30D1;&#x30EF;&#x30FC;&#x30B9;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x89E3;&#x660E;&#x3092;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305D;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3068;&#x904B;&#x52D5;&#x7167;&#x4F1A;&#x306E;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x540C;&#x610F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x904B;&#x52D5;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30C0;&#x30F3;&#x30B9;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8A18;&#x8FF0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x200B;&#x200B;&#x3089;&#x306E;&#x306D;&#x3058;&#x308C;&#x3001;&#x50BE;&#x304D;&#x3001;&#x624B;&#x9806;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C0;&#x30A4;&#x30CA;&#x30DF;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; myosin &#xC8FC;&#xAE30;&#xC801; &#xC77C;&#xB828;&#xC758; &#xACE0; &#xB300; &#xD558; &#xACE0; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB300;&#xD45C; &#xD558;&#xB294; ATP&#xC758; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84; &#xAD11; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; myosin &#xAD6C;&#xC870; &#xBC0F; &#xACB0;&#xACFC;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;, &#xC12C;&#xC720;, &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790;, &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;, &#xC720;&#xC804;&#xD559;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; myosin&#xC774; &#xBD84;&#xC790; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xAC1C;&#xC694;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xB9AC; &#xBC0F; &#xC0DD;&#xD654;&#xD559; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xB828;. &#xC774; &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC758; &#xD569;&#xC131; &#xD0C1;&#xC6D4;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xCE58;&#xD658;&#xC73C;&#xB85C; &#xD604;&#xC7AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xBBF8;&#xBB18;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xC99D;&#xD3ED; &#xD558;&#xB294; &#xACE0;&#xD6A8;&#xC728; &#xC5D4;&#xC9C4;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC900;&#xB2E4;. &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xBC0F; x-&#xC120; &#xACB0;&#xC815;&#xD559;&#xC758; &#xCD5C;&#xADFC; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xD0D0;&#xAD6C;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB77C;&#xC778;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC70;&#xC640; &#xB3D9;&#xC758; &#xB300;&#xD615; &#xC804;&#xC6D0; &#xC120;&#xC758; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xC0C1;&#xC138;&#xD55C; &#xD574;&#xBA85;&#xC744; &#xC124;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; myosin &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131;&#xC758; &#xC644;&#xC804; &#xD55C; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xC65C;&#xACE1;, &#xC816; &#xD78C; &#xCC44;, &#xB2E8;&#xACC4; &#xBC0F; &#xBD84;&#xC790; &#xB304;&#xC2A4;&#xB85C; &#xC124;&#xBA85; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB450; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0A9;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; myosin&#xC758; &#xB304;&#xC2A4;: &#xAD6C;&#xC870;&#xC640; &#xBD84; &#xAD11; &#xAD00;&#xC810;.

&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7CFB;&#x5217;&#x6B65;&#x9AA4;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x6C34;&#x89E3;&#x5177;&#x6709;&#x4EE3;&#x8868;&#x6027;&#x7684;&#x53E4;&#x4EE3;&#x548C;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5149;&#x8C31;&#x7ED3;&#x679C;&#x65E0;&#x5173;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x7ED3;&#x679C;&#x5206;&#x6790;&#x4ECE;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3001; &#x7EA4;&#x7EF4;&#x3001; &#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x3001; &#x7535;&#x955C;&#x3001; &#x9057;&#x4F20;&#x5B66;&#x3001; &#x548C;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x6B65;&#x9AA4;&#x6982;&#x8FF0;&#x5176;&#x4ED6;&#x751F;&#x7269;&#x7269;&#x7406;&#x548C;&#x751F;&#x5316;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x9886;&#x57DF;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x6548;&#x7387;&#x7684;&#x5F15;&#x64CE;&#xFF0C;&#x5230;&#x65E0;&#x4E0E;&#x4F26;&#x6BD4;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x4F4D;&#x79FB;&#x653E;&#x5927;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7F51;&#x7AD9;&#x4E2D;&#x7684;&#x5FAE;&#x5999;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x4E8B;&#x6001;&#x53D1;&#x5C55;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5149;&#x8C31;&#x548C; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x6676;&#x4F53;&#x5B66;&#x542F;&#x7528;&#x7684;&#x5927;&#x578B;&#x7535;&#x529B;&#x7B14;&#x753B;&#x7684;&#x540C;&#x610F;&#x6765;&#x81EA;&#x4E0D;&#x540C;&#x7EBF;&#x8DEF;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x8BC1;&#x636E;&#x9636;&#x6BB5;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x6F84;&#x6E05;&#x3002;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x52A8;&#x529B;&#x5B8C;&#x6210;&#x56FE;&#x50CF;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x5305;&#x62EC;&#x66F2;&#x6298;&#x3001; &#x503E;&#x659C;&#x3001; &#x6B65;&#x9AA4;&#x548C;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x4ECE;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4F19;&#x4F34;&#x53EF;&#x4EE5;&#x88AB;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E3A;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x821E;&#x8E48;&#x3002;

&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x821E;&#x8E48;&#xFF1A; &#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x5149;&#x8C31;&#x7684;&#x89C2;&#x70B9;&#x3002;

Actin and myosin interact in a cyclic series of steps linked to the hydrolysis of ATP that are representative of an ancient and widespread molecular mechanism. Spectroscopic findings are related to the analysis of the actin and myosin structures and results from kinetics, fibers, single molecules, electron microscopy, genetics, and a variety of other biophysical and biochemical studies on actin and myosin to provide an overview of the steps in this molecular process. The synthesis of the key findings from these fields reveals a highly efficient engine that amplifies subtle changes in the active site into unsurpassed molecular displacements. Recent developments in resonance energy-transfer spectroscopy and X-ray crystallography are enabling a detailed elucidation of the stages of a large power stroke that concurs with evidences from diverse lines of structural and kinetic inquiry. A complete image of actin and myosin motility appears to include twists, tilts, steps, and dynamics from both partners that could be described as a molecular dance.

The dance of actin and myosin: a structural and spectroscopic perspective.

Actine et la myosine interagissent d&#x26;#39;une s&#xE9;rie cyclique de d&#xE9;marches li&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;hydrolyse de l&#x26;#39;ATP qui sont repr&#xE9;sentatifs d&#x26;#39;un m&#xE9;canisme ancien et r&#xE9;pandu mol&#xE9;culaire. Conclusions spectroscopiques sont li&#xE9;es &#xE0; l&#x26;#39;analyse des structures d&#x26;#39;actine et de myosine et les r&#xE9;sultats de la cin&#xE9;tique, des fibres, des mol&#xE9;cules simples, microscopie &#xE9;lectronique, la g&#xE9;n&#xE9;tique, et une vari&#xE9;t&#xE9; d&#x26;#39;autres &#xE9;tudes biophysiques et biochimiques sur les actine et la myosine de donner un aper&#xE7;u des &#xE9;tapes de cette processus mol&#xE9;culaire. La synth&#xE8;se des principales conclusions de ces domaines r&#xE9;v&#xE8;le un moteur tr&#xE8;s efficace qui amplifie des changements subtils dans le site actif en in&#xE9;gal&#xE9;es d&#xE9;placements mol&#xE9;culaires. Les d&#xE9;veloppements r&#xE9;cents en r&#xE9;sonance de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie spectroscopie et cristallographie aux rayons X permettent une &#xE9;lucidation d&#xE9;taill&#xE9;e des &#xE9;tapes d&#x26;#39;un accident vasculaire c&#xE9;r&#xE9;bral de grande puissance qui est d&#x26;#39;accord avec les preuves de diverses lignes de l&#x26;#39;enqu&#xEA;te structurelle et cin&#xE9;tique. Une image compl&#xE8;te de la motilit&#xE9; actine et la myosine semble inclure torsions, s&#x26;#39;incline, marches, et la dynamique des deux partenaires qui pourraient &#xEA;tre d&#xE9;crits comme une danse mol&#xE9;culaire.

La danse de l&#x26;#39;actine et la myosine: une perspective structurelle et spectroscopique

Der Tanz von Aktin und Myosin: eine strukturelle und spektroskopische Perspektive.

Actina e miosina interagire in una serie ciclica di passaggi legati all&#39;idrolisi di ATP che sono rappresentante di un antico e diffuso del meccanismo molecolare. Risultati spettroscopici sono correlati all&#39;analisi delle strutture di actina e miosina e risultati da cinetica, fibre, singole molecole, microscopia elettronica, genetica e una variet&agrave; di altri studi biochimici e biofisici su actina e miosina per fornire una panoramica dei passaggi in questo processo molecolare. La sintesi dei principali risultati da questi campi rivela un motore altamente efficiente che amplifica sottili cambiamenti nel sito attivo in spostamenti molecolari insuperabili. Recenti sviluppi nella spettroscopia di trasferimento di energia di risonanza e cristallografia a raggi x sono consentendo una delucidazione dettagliata delle fasi di un tratto di grande potenza che concorre con testimonianze da diverse linee di indagine strutturale e cinetica. Un&#39;immagine completa della motilit&agrave; actina e miosina sembra includere i colpi di scena, si inclina, passaggi e dinamica da entrambi i partner che potrebbero essere descritto come una danza molecolare.

La danza di actina e miosina: un punto di vista strutturale e spettroscopica.

&#x65E0;&#x6570;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; T &#xFF08;TnT&#xFF09; &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x751F;&#x6210;&#x7684; RNA &#x526A;&#x63A5;&#x4E3B;&#x8981;&#x5728;&#x5176; N &#x7AEF;&#x9AD8;&#x53D8;&#x533A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0D;&#x5B8C;&#x5168;&#x7684;&#x7406;&#x89E3;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B21;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x9E21;&#x5FEB;&#x901F; TnT &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x4E0E;&#x72EC;&#x7279;&#x7684; Tx &#x6BCD;&#x9898; (HEEAH)(n) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x9499;&#x3002;&#x6B64; TnT &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#x7684;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x884C;&#x4E3A;&#x9996;&#x6B21;&#x8C03;&#x67E5;&#x4F7F;&#x7528;&#x94FD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9499;&#x6A21;&#x62DF;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5B83;&#x66F4;&#x5BB9;&#x6613;&#x63A2;&#x6D4B;&#x8367;&#x5149;&#x53D8;&#x5316;&#x5BF9; TnT &#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x53D8; TnT &#x548C; TnT N &#x7AEF;&#x7247;&#x6BB5; &#xFF08;TnT N47) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x94FD;&#x7684;&#x6307;&#x793A;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x5E8F;&#x5217;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x529B;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x94FD;&#x5E38;&#x5E38;&#x66FF;&#x4EE3;&#x9499;&#x7ED3;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x9499;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x5E76;&#x53D1;&#x73B0;&#x8981;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5B8C;&#x597D; TnT &#x548C; TnT N47&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x9499;&#x654F;&#x611F;&#x8367;&#x5149;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x6D4B;&#x91CF;&#xFF0C;&#x9499;&#x7EFF;&#x8272; 5N&#xFF0C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x8BE5;&#x9499;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4E13;&#x4E0A;&#x590D;&#x6742;&#x7684; TnT &#x548C;&#x539F;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x4E0E;&#x5FEB;&#x901F;&#x4E0A;&#x901F;&#x7387; &#xFF08;&#x5982;&#x505C;&#x6B62;&#x6D41;&#x5206;&#x6790;&#x4E2D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230; 10(6)-10(7) &#x5176; M(-1) s(-1))&#x3002;&#x7B26;&#x5408;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x610F;&#x89C1;&#xFF0C;&#x8BA1;&#x7B97;&#x9884;&#x6D4B;&#x8868;&#x660E; TnT N47 &#x53EF;&#x80FD;&#x6298;&#x53E0;&#x6210;&#x7EC6;&#x957F;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0E;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x7ED3;&#x5408;&#x53E3;&#x888B;&#x7EC4;&#x6210;&#x4E3B;&#x8981;&#x7684; Tx &#x6BCD;&#x9898;&#x5E8F;&#x548C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x4F4E;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F4D;&#x70B9;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; TnT &#x53EF;&#x80FD;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x8C03;&#x8282;&#x9499;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x6A2A;&#x7EB9;&#x808C;&#x6536;&#x7F29;&#x76D1;&#x7BA1;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;

&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x9499;&#x79BB;&#x5B50;&#x5BF9;&#x9E1F;&#x7C7B;&#x98DE;&#x884C;&#x808C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; t&#x3002;

Numerous troponin T (TnT) isoforms are generated by alternative RNA splicing primarily in its N-terminal hypervariable region, but the functions of these isoforms are not completely understood. Here for the first time, we discovered that a chicken fast TnT isoform with a unique Tx motif (HEEAH)(n) binds calcium. The metal binding behavior of this TnT isoform was first investigated using terbium as a calcium analogue due to its more readily detectable fluorescence variation upon TnT binding. Both intact TnT and TnT N-terminal fragment (TnT N47) bound terbium with high affinity indicating that the N-terminal sequence was the site of binding. Since terbium often substitutes at calcium-binding sites, radioactive calcium was tested and found to bind both intact TnT and TnT N47. Fluorescence measurements using the calcium-sensitive fluorescent dye, calcium green 5N, confirmed that calcium bound to the tertiary complex of TnT and the tropomyosin dimer with a fast on-rate (10(6)-10(7) M(-1) s(-1)) as detected in stopped-flow analysis. Consistent with these observations, computational predictions suggest that TnT N47 might fold into an elongated structure with at least one high-affinity metal ion binding pocket comprised primarily of the Tx motif sequence and several lower affinity binding sites. These results suggest that TnT may play a role in modulating the calcium-mediated regulatory process of striated muscle contraction.

Binding of calcium ions to an avian flight muscle troponin T.

De nombreux troponine T (TnT) isoformes sont g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;es par l&#x26;#39;&#xE9;pissage alternatif de l&#x26;#39;ARN surtout dans sa partie N-terminale r&#xE9;gion hypervariable, mais les fonctions de ces isoformes ne sont pas compl&#xE8;tement compris. Voici pour la premi&#xE8;re fois, nous avons d&#xE9;couvert qu&#x26;#39;un rapide de poulet avec TnT isoforme un motif unique Tx (HEEAH) (n) se lie au calcium. Le comportement de liaison du m&#xE9;tal de cette isoforme TnT a d&#x26;#39;abord &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tudi&#xE9;e en utilisant le terbium comme un analogue de calcium &#xE0; cause de sa variation de fluorescence plus facilement d&#xE9;tectable lors de TnT contraignant. Les deux intacte TnT et TnT fragment N-terminal (TnT N47) le terbium li&#xE9; avec une affinit&#xE9; &#xE9;lev&#xE9;e indiquant que la s&#xE9;quence N-terminale a &#xE9;t&#xE9; le site de liaison. Depuis terbium souvent des substituts &#xE0; de calcium des sites de liaison, de calcium radioactif a &#xE9;t&#xE9; test&#xE9; et trouv&#xE9; &#xE0; se lier &#xE0; la fois intacte TnT et TnT N47. Des mesures de fluorescence en utilisant le sensible au calcium colorant fluorescent, de calcium, de vert 5N confirm&#xE9; que le calcium li&#xE9; au complexe tertiaire de la TnT et de la tropomyosine dim&#xE8;re avec une vitesse de d&#xE9;bit (10 (6) -10 (7) M (-1) s (-1)) telle que d&#xE9;tect&#xE9;e en arr&#xEA;t&#xE9; d&#xE9;bit analyse. Conform&#xE9;ment &#xE0; ces observations, les pr&#xE9;visions de calcul sugg&#xE8;rent que TnT N47 pourrait se replier en une structure allong&#xE9;e avec au moins une poche de haute affinit&#xE9; d&#x26;#39;ions m&#xE9;talliques de liaison compos&#xE9; principalement de la s&#xE9;quence motif Tx et plusieurs sites d&#x26;#39;affinit&#xE9; de liaison plus faibles. Ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que TnT peut jouer un r&#xF4;le dans la modulation du processus de calcium m&#xE9;di&#xE9;e par la r&#xE9;glementation de la contraction du muscle stri&#xE9;.

Fixation des ions calcium &#xE0; un aviaire Vol Muscle troponine T

Die Bindung von Calcium-Ionen zu einem Vogel Flugmuskel Troponin T.

Numerose isoforme di troponina T (TnT) sono generati da splicing alternativo RNA principalmente nella regione ipervariabile del N-terminale, ma le funzioni di queste isoforme non sono completamente chiari. Qui per la prima volta, abbiamo scoperto che un&#39;isoforma TnT veloce di pollo con un unico motivo di Tx (HEEAH)(n) lega calcio. Il comportamento di metallo associazione di questa isoforma TnT prima &egrave; stato studiato utilizzando terbio come un analogo di calcio a causa della sua variazione di fluorescenza pi&ugrave; facilmente rilevabile dell&#39;associazione TnT. Sia intatto frammento TnT e TnT N-terminale (TnT N47) associato terbio con alta affinit&agrave; che indica che la sequenza N-terminale &egrave; stato il sito dell&#39;associazione. Poich&eacute; il terbio sostituisce spesso presso i siti di legame di calcio, calcio radioattivo &egrave; stato testato e trovato da associare sia intatto TnT e TnT N47. Le misure di fluorescenza usando la tintura fluorescente sensibile al calcio, calcio verde 5N, ha confermato che calcio legato al complesso terziario di TnT e il dimero tropomiosina con un veloce sul tasso (10(6)-10(7) M(-1) s(-1)) come rilevato nell&#39;analisi del flusso interrotto. Coerentemente con queste osservazioni, computational previsioni suggeriscono che TnT N47 potrebbe piegare in una struttura allungata con almeno una tasca di legame ad alta affinit&agrave; dello ione del metallo &egrave; composto principalmente dalla sequenza di motif Tx e parecchi abbassare i siti di legame di affinit&agrave;. Questi risultati suggeriscono che TnT pu&ograve; giocare un ruolo nel modulare il processo di regolamentazione calcio-mediata di contrazione dei muscoli striati.

Legame di ioni di calcio alla troponina di muscolo volo aviaria T.

&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;T&#xFF08;TnT&#xFF09;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x4E3B;&#x306B;&#x305D;&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x8D85;&#x53EF;&#x5909;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9078;&#x629E;&#x7684;RNA&#x30B9;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x751F;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306F;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x521D;&#x3081;&#x3066;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;Tx&#x306E;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#xFF08;HEEAH&#xFF09;&#x30C1;&#x30AD;&#x30F3;&#x9AD8;&#x901F;TnT&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#xFF08;n&#xFF09;&#x306F;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;TnT&#x306E;&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x91D1;&#x5C5E;&#x7D50;&#x5408;&#x6319;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x521D;&#x306E;TnT&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x86CD;&#x5149;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306E;&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30C6;&#x30EB;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;TNT&#x3068;TnT&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x65AD;&#x7247;&#xFF08;TNT N47&#xFF09;&#x306E;N-&#x672B;&#x7AEF;&#x914D;&#x5217;&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3067;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30C6;&#x30EB;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x4E21;&#x65B9;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30C6;&#x30EB;&#x30D3;&#x30A6;&#x30E0;&#x306F;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x4EE3;&#x66FF;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x653E;&#x5C04;&#x6027;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x304C;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;TNT&#x3068;TnT&#x306E;N47&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898B;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x611F;&#x53D7;&#x6027;&#x86CD;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x7DD1;5N&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x86CD;&#x5149;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x306F;TNT&#x306E;&#x4E09;&#x6B21;&#x8907;&#x96D1;&#x304B;&#x3064;&#x9AD8;&#x901F;&#x30AA;&#x30F3;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#xFF08;10&#xFF08;6&#xFF09;-10&#xFF08;7&#xFF09;M&#xFF08;-1&#xFF09;s&#x3068;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#xFF08;-1&#xFF09;&#xFF09;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30B9;&#x30C8;&#x30C3;&#x30D7;&#x30C8;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x200B;&#x200B;&#x5BDF;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x8A08;&#x7B97;&#x306E;&#x4E88;&#x6E2C;&#x306F;&#x3001;TNT N47&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x306E;Tx&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x914D;&#x5217;&#x304B;&#x3089;&#x4E3B;&#x306B;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x200B;&#x200B;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4F4E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3068;&#x7D30;&#x9577;&#x3044;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x3080;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;TNT&#x306F;&#x6A2A;&#x7D0B;&#x7B4B;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x5A92;&#x4ECB;&#x898F;&#x5236;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x9CE5;&#x98DB;&#x884C;&#x7B4B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;T&#x306B;&#x30AB;&#x30EB;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;

&#xC218;&#xB9CE;&#xC740; troponin T (TnT) isoforms &#xB300;&#xCCB4; RNA &#xC811;&#xD569;&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790; hypervariable &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC131; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; isoforms&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xCC98;&#xC74C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558;&#xB294; (HEEAH)(n) &#xCE7C;&#xC298; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB3C5;&#xD2B9;&#xD55C; &#xD14D;&#xC0AC;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xB85C; &#xCE58;&#xD0A8; &#xBE68;&#xB9AC; TnT isoform. TnT isoform&#xC774; &#xAE08;&#xC18D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3D9;&#xC791; &#xCC98;&#xC74C; TnT &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC790;&#xC0AC;&#xC758; &#xB354; &#xC27D;&#xAC8C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD615;&#xAD11; &#xBCC0;&#xD615;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xCE7C;&#xC298; &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8;&#xB85C; &#xBE00;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBAA8;&#xB450; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; Tnt&#xC640; TnT N &#xB9E8;&#xB05D; &#xC870;&#xAC01; (TnT N47) &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xB294; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBE00;&#xC774; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC885;&#xC885; &#xBE00; &#xCE7C;&#xC298; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xB300;&#xCCB4;, &#xBC29;&#xC0AC;&#xC131; &#xCE7C;&#xC298; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; Tnt&#xC640; TnT N47 &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xCE7C;&#xC298;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xD615;&#xAD11; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD615;&#xAD11; &#xCE21;&#xC815;, &#xADF8;&#xB9B0; &#xCE7C;&#xC298; 5N &#xD655;&#xC778; Tnt&#xC640; &#xBE60;&#xB978;&#xC5D0;-&#xC18D;&#xB3C4; (&#xC911;&#xC9C0; &#xD750;&#xB984; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC9C0; M(-1) s(-1)) 10(6)-10(7) tropomyosin &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; 3 &#xCC28; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xADF8; &#xCE7C;&#xC298;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCE21;, &#xC608;&#xCE21; TnT N47 &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xD558;&#xB098; &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3EC;&#xCF13; Tx &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xAE38;&#xCB49;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xB85C; &#xC811;&#xC744; &#xC218;&#xB3C4; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB0AE;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC804;&#xC0B0;&#xACFC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xACB0;&#xACFC; TnT &#xAD74;&#xB9AC;&#xB294; &#xADFC;&#xC721; &#xC218;&#xCD95; &#xCE7C;&#xC298; &#xC911;&#xC7AC; &#xADDC;&#xC815; &#xACFC;&#xC815;&#xC744; &#xBCC0;&#xC870;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC870;&#xB958; &#xBE44;&#xD589; &#xADFC;&#xC721; troponin &#xD1A0;&#xB2C8;&#xC5D0; &#xCE7C;&#xC298; &#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;

Muchos de troponina T (TnT) isoformas se generan por splicing alternativo del ARN sobre todo en su extremo N-terminal de la regi&#xF3;n hipervariable, pero las funciones de estas isoformas no se entienden completamente. Aqu&#xED;, por primera vez, hemos descubierto que una forma r&#xE1;pida de pollo TnT isoforma con un &#xFA;nico motivo de Tx (HEEAH) (n) se une al calcio. El comportamiento de uni&#xF3;n de metal de esta isoforma TnT fue investigado por primera vez con terbio como un an&#xE1;logo de calcio debido a su variaci&#xF3;n m&#xE1;s f&#xE1;ciles de detectar la fluorescencia en la TnT vinculante. Tanto intacta la TnT y la TnT fragmento N-terminal (TnT N47) terbio unida con alta afinidad que indica que la secuencia N-terminal era el sitio de la uni&#xF3;n. Desde terbio a menudo sustitutos a los sitios de uni&#xF3;n a calcio, calcio radiactivo ha sido probado y se encontr&#xF3; que se unen tanto intacta la TnT y la TnT N47. Las mediciones de fluorescencia utilizando el calcio sensibles tinte fluorescente, calcio verde 5N, confirmaron que el calcio unido al complejo terciario de TNT y el d&#xED;mero tropomiosina con un r&#xE1;pido sobre-tasa (10 (6) -10 (7) M (-1) s (-1)) tal como se detecta en el an&#xE1;lisis de flujo detenido. De acuerdo con estas observaciones, predicciones computacionales sugieren que la TnT N47 podr&#xED;a plegarse en una estructura alargada con al menos una alta afinidad de metal bolsillo de iones de uni&#xF3;n compuesto principalmente de la secuencia motivo Tx y varios sitios de afinidad de uni&#xF3;n m&#xE1;s bajas. Estos resultados sugieren que la TnT puede jugar un papel en la modulaci&#xF3;n del proceso de calcio mediada regulador de la contracci&#xF3;n del m&#xFA;sculo estriado.

Uni&#xF3;n de los iones de calcio a un vuelo aviar muscular troponina T

Una potente combinazione di Faro e luminescenza risonanza energia trasferimento tecnologia molecolare rivela alterazioni nella struttura dell&#39;acido nucleico da piccolo quanto un singolo nucleotide in un dosaggio di prossimit&agrave; romanzo ibridazione. Il dosaggio misura la lunghezza di un singolo filamento bersaglio quando un terbio chelato-etichetta molecular beacon ibridizza con un lato del segmento di acido nucleico da misurare e una sonda accettore portando un fluoroforo convenzione ibridizza con l&#39;estremit&agrave; opposta del bersaglio. Usando una sequenza di test accorciata in modo incrementale di eliminazione di singoli nucleotidi, questo saggio riporta una relazione quasi lineare tra lunghezza della sequenza e la distanza che separa le sonde accettore e donatore. Di conseguenza, questo dosaggio pu&ograve; essere utilizzato per rilevare alternative splicing, tipi di allele, riarrangiamenti, inserimento e cancellazione eventi misurando le distanze di separazione all&#39;interno di una zona predefinita. Inoltre, l&#39;uso di terbio chelati in molecular beacons pu&ograve; produrre rapporti segnale a sfondo eccezionalmente alti rispetto all&#39;uso di fluorofori convenzionali. Principi di progettazione ottimale sonda sono indagati sperimentalmente e da simulazioni computazionali di plausibile molecular beacon pieghevole. Alcuni disegni di molecular beacon formano dimeri che riducono la loro risposta massima alle sequenze target. Un semplice test per rilevare tali dimeri &egrave; segnalato come uno strumento per aiutare a migliorare il design del molecular beacons. Ottimamente progettato molecular beacons con chelati di terbio e la vicinanza di ibridazione dosaggi sono attesi per espandere le loro applicazioni nell&#39;analisi e screening delle malattie genetiche.

Rilevazione delle variazioni di singolo nucleotide di un dosaggio di prossimit&agrave; ibridazione basato su molecular beacons e il trasferimento di energia di risonanza di luminescenza.

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A powerful combination of molecular beacon and luminescence resonance energy transfer technology reveals alterations in nucleic acid structure by as little as a single nucleotide in a novel hybridization proximity assay. The assay measures the length of a single-stranded target when a terbium chelate-labeled molecular beacon hybridizes to one side of the nucleic acid segment to be measured and an acceptor probe carrying a convention fluorophore hybridizes to the opposite end of the target. Using a test sequence shortened incrementally by deleting single nucleotides, this assay reports a nearly linear relationship between sequence length and the distance separating acceptor and donor probes. Consequently, this assay can be used to detect alternative splicing, allele types, rearrangements, insertion, and deletion events by measuring separation distances within a predefined region. Furthermore, the use of terbium chelates in molecular beacons can produce exceptionally high signal-to-background ratios compared to the use of conventional fluorophores. Principles of optimal probe design are investigated experimentally and by computational simulations of plausible molecular beacon folding. Some molecular beacon designs form dimers that reduce their maximal response to target sequences. A simple assay to detect such dimers is reported as a tool to help improve the design of molecular beacons. Optimally designed molecular beacons with terbium chelates and hybridization proximity assays are expected to expand their applications in the analysis and screening of genetic diseases.

Detection of single nucleotide variations by a hybridization proximity assay based on molecular beacons and luminescence resonance energy transfer.

Une puissante combinaison de balise mol&#xE9;culaire et de la r&#xE9;sonance de luminescence transferts de technologies &#xE9;nerg&#xE9;tiques r&#xE9;v&#xE8;le des alt&#xE9;rations dans la structure d&#x26;#39;acide nucl&#xE9;ique par aussi peu que un seul nucl&#xE9;otide dans un essai de proximit&#xE9; roman d&#x26;#39;hybridation. Le dosage mesure la longueur d&#x26;#39;une cible &#xE0; simple brin lorsque le terbium une ch&#xE9;late marqu&#xE9; s&#x26;#39;hybride balise mol&#xE9;culaire d&#x26;#39;un c&#xF4;t&#xE9; du segment d&#x26;#39;acide nucl&#xE9;ique &#xE0; mesurer et une sonde portant un fluorophore accepteur de convention s&#x26;#39;hybride &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; oppos&#xE9;e de la cible. Utilisation une s&#xE9;quence de test r&#xE9;duite progressivement par suppression nucl&#xE9;otides uniques, ce dosage signale une relation pratiquement lin&#xE9;aire entre la longueur de s&#xE9;quence et la distance s&#xE9;parant accepteur et donneur sondes. Par cons&#xE9;quent, ce test peut &#xEA;tre utilis&#xE9; pour d&#xE9;tecter l&#x26;#39;&#xE9;pissage alternatif, types d&#x26;#39;all&#xE8;les, les r&#xE9;arrangements, d&#x26;#39;insertion, de suppression et d&#x26;#39;&#xE9;v&#xE9;nements en mesurant les distances de s&#xE9;paration au sein d&#x26;#39;une r&#xE9;gion pr&#xE9;d&#xE9;finie. En outre, l&#x26;#39;utilisation de terbium ch&#xE9;lates dans les balises mol&#xE9;culaires peut produire exceptionnellement &#xE9;lev&#xE9;s signal-sur-fond ratios par rapport &#xE0; l&#x26;#39;utilisation de fluorophores classiques. Principes de conception de la sonde optimale sont &#xE9;tudi&#xE9;s exp&#xE9;rimentalement et par des simulations informatiques de repliement balise plausible mol&#xE9;culaire. Certains mod&#xE8;les de balises mol&#xE9;culaires forment des dim&#xE8;res qui r&#xE9;duisent leur r&#xE9;ponse maximale &#xE0; des s&#xE9;quences cibles. Un test simple pour d&#xE9;tecter ces dim&#xE8;res est signal&#xE9; comme un outil pour aider &#xE0; am&#xE9;liorer la conception de balises mol&#xE9;culaires. Id&#xE9;alement con&#xE7;us balises mol&#xE9;culaires avec le terbium ch&#xE9;lates et des essais d&#x26;#39;hybridation de proximit&#xE9; sont cens&#xE9;s d&#xE9;velopper leurs applications dans l&#x26;#39;analyse et le d&#xE9;pistage des maladies g&#xE9;n&#xE9;tiques.

D&#xE9;tection des variations nucl&#xE9;otidiques simples par un Proximity Assay hybridation Bas&#xE9; sur les balises mol&#xE9;culaires et de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie par r&#xE9;sonance Luminescence

Detektion von Single Nucleotide Variationen durch eine Hybridisierung Proximity Assay auf Molecular Beacons und Lumineszenz-Resonanz-Energie-Transfer.

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&#xBD84;&#xC790; &#xBE44;&#xCF58; &#xBC0F; &#xBC1C;&#xAD11; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xB2EC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAD50; &#xC7A1; &#xADFC;&#xC811; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC758;&#xD574; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC5FC;&#xAE30; &#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xAC80;&#xCD9C;.

Una potente combinaci&#xF3;n de marcador molecular y la resonancia de luminiscencia de transferencia de tecnolog&#xED;a de energ&#xED;a revela alteraciones en la estructura del &#xE1;cido nucleico por tan poco como un solo nucle&#xF3;tido en un ensayo de la novela de la proximidad de la hibridaci&#xF3;n. El ensayo mide la longitud de una diana de cadena sencilla, cuando un quelato terbio marcado molecular faro se hibrida a un lado del segmento de &#xE1;cido nucleico a ser medido y una sonda aceptor llevar un fluor&#xF3;foro convenci&#xF3;n se hibrida con el extremo opuesto de la diana. Usando una secuencia de prueba acortada de forma incremental mediante la supresi&#xF3;n de nucle&#xF3;tidos individuales, este ensayo reporta una relaci&#xF3;n casi lineal entre la secuencia de longitud y la distancia que separa aceptor y sondas donantes. En consecuencia, este ensayo se puede utilizar para detectar splicing alternativo, los tipos de alelos, reordenamientos, inserci&#xF3;n y deleci&#xF3;n eventos midiendo las distancias de separaci&#xF3;n dentro de una zona predefinida. Adem&#xE1;s, el uso de quelatos de terbio en balizas moleculares puede producir excepcionalmente alta relaci&#xF3;n se&#xF1;al-fondo proporciones en comparaci&#xF3;n con el uso de fluor&#xF3;foros convencionales. Principios de dise&#xF1;o de la sonda &#xF3;ptimo se investigan experimental y mediante simulaciones computacionales de plegamiento posible marcador molecular. Algunos dise&#xF1;os de balizas moleculares forman d&#xED;meros, que reducen su respuesta m&#xE1;xima a secuencias diana. Un simple ensayo para la detecci&#xF3;n de estos d&#xED;meros se presenta como una herramienta para ayudar a mejorar el dise&#xF1;o de marcadores moleculares. El &#xF3;ptimo dise&#xF1;o marcadores moleculares con terbio quelatos y los ensayos de hibridaci&#xF3;n de proximidad se espera ampliar sus aplicaciones en el an&#xE1;lisis y la detecci&#xF3;n de enfermedades gen&#xE9;ticas.

La detecci&#xF3;n de las variaciones de nucle&#xF3;tidos individuales por parte de un ensayo de proximidad hibridaci&#xF3;n Sobre la base de balizas moleculares y de transferencia de energ&#xED;a de resonancia de luminiscencia

&#x90E8;&#x961F;&#x4EA7;&#x751F;&#x808C;&#x8089;&#x4E2D;&#x7684;&#x6D41;&#x884C;&#x770B;&#x6CD5;&#x8868;&#x660E;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x5934;&#x90E8;&#x7684;&#x62C9;&#x6746;&#x81C2;&#x5C06;&#x542F;&#x52A8;&#x4F4D;&#x79FB;&#x7684;&#x7EC6;&#x4E1D;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x6B64;&#x62C9;&#x6746;&#x81C2;&#x662F;&#x5377;&#x66F2;&#x53CA;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; subfragment-2 (S2) &#xFF1B; &#x94F0;&#x94FE;&#x7684;&#x7075;&#x6D3B;&#x7EC4;&#x5408;&#x8FDE;&#x63A5;&#x5230;&#x539A;&#x539A;&#x7684;&#x957F;&#x4E1D;&#x9AA8;&#x5E72;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x9AD8;&#x6548;&#x7684;&#x90E8;&#x961F;&#x7EC4;&#x5EFA;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x7D27;&#x5F20;&#x5C40;&#x52BF;&#x53D1;&#x5C55;&#x5728;&#x6B64;&#x94FE;&#x63A5;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x672C;&#x6587;&#x6240;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x5F00;&#x53D1;&#x51FA;&#x4E00;&#x79CD;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x6765;&#x68C0;&#x67E5;&#x5B8C;&#x597D; S2 &#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x5934;&#x90E8;&#x7684;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;&#x9057;&#x4F20;&#x7269;&#x8D28;&#x6807;&#x8BB0;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x68D2;&#x805A;&#x5408;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5355;&#x4E00;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x5B50;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x5E76;&#x7531;&#x6B64;&#x4EA7;&#x751F;&#x5E03;&#x6717;&#x8FD0;&#x52A8;&#x7684;&#x6746;&#x7531;&#x6570;&#x5B57;&#x56FE;&#x50CF;&#x5904;&#x7406;&#x89C6;&#x9891;&#x7684;&#x901F;&#x5EA6;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684;&#x65CB;&#x8F6C;&#x6746;&#x7684;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x94FE;&#x63A5;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E2D;&#x968F;&#x673A;&#x7EBF;&#x5708;&#x3002;&#x76F8;&#x8FD1;&#x7684;&#x53CC;&#x5934;&#x548C;&#x5355;&#x6237;&#x4E3B;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x9EBB;&#x82B1;&#x7387;&#x8868;&#x660E;&#xFF0C;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x6E90;&#x81EA;&#x5904;&#x4E8E;&#x6216;&#x8D85;&#x51FA;&#x7B2C;&#x4E00;&#x87BA;&#x65CB;&#x7EBF;&#x5708;&#x5728; S2 &#x7684;&#x97F3;&#x8C03;&#x548C;&#x6700;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x94F0;&#x94FE;&#x8FDE;&#x63A5; S2 &#x548C;&#x8F7B;&#x578B;&#x7684;&#x9176;&#x3002;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x5934;&#x90E8;&#x5DF2;&#x8F83;&#x5C0F;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4ECD;&#x53EF;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#xFF0C;ADP &#x52A0;&#x5165;&#x4E25;&#x8C28;&#x4EBA;&#x884C;&#x5929;&#x6865;&#x4EE5;&#x6765;&#x5F71;&#x54CD;&#x4EA7;&#x751F;&#x7684;&#x53CC;&#x5934;&#x5355;&#x5934;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x626D;&#x7279;&#x6027;&#x5DEE;&#x5F02;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;

&#x9AD8;&#x7075;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x8089;&#x4EBA;&#x884C;&#x5929;&#x6865;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x9AA8;&#x9ABC;&#x808C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; subfragment-2 &#x65B0;&#x7684;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6240;&#x793A;&#x3002;

Popular views of force generation in muscle indicate that a lever arm in the myosin head initiates displacement of the thin filament. However, this lever arm is attached to the thick filament backbone by a flexible combination of coiled coils and hinges in the myosin subfragment-2 (S2); therefore, efficient force generation depends on tension development in this linking structure. Herein, a single molecule assay is developed to examine the flexibility of the intact S2 relative to that of the myosin head. Fluorescently labeled myosin rod is polymerized onto a single myosin molecule that is bound to actin, and the resulting Brownian motion of the rod is analyzed at video rates by digital image processing. Complete rotations of the rod suggest significant amounts of random coil in the linking structure. The close similarity of twist rates for double-headed and single-headed myosin indicates that most of the flexibility originates at or beyond the first pitch of coiled coil in S2 and most likely at the hinge connecting S2 and the light meromyosin. The myosin head has a smaller but still detectable impact on this flexibility, since the addition of ADP to the rigor crossbridge produces differential effects on the torsional characteristics of double-headed versus single-headed myosin.

High flexibility of the actomyosin crossbridge resides in skeletal muscle myosin subfragment-2 as demonstrated by a new single molecule assay.

Vues populaires de g&#xE9;n&#xE9;ration de force dans les muscles indiquent que un bras de levier dans la t&#xEA;te de myosine d&#xE9;clenche le d&#xE9;placement de la mince filament. Toutefois, ce bras de levier est attach&#xE9; &#xE0; la colonne vert&#xE9;brale filament &#xE9;pais par une combinaison flexible de bobines enroul&#xE9;s et des charni&#xE8;res dans le sous-fragment de myosine-2 (S2) et, par cons&#xE9;quent, la g&#xE9;n&#xE9;ration de force efficace d&#xE9;pend de d&#xE9;veloppement de la tension dans cette structure de liaison. Ici, une seule mol&#xE9;cule dosage est con&#xE7;u pour examiner la flexibilit&#xE9; du rapport intacte S2 &#xE0; celle de la t&#xEA;te de myosine. Marqu&#xE9; par fluorescence myosine tige est polym&#xE9;ris&#xE9; sur une seule mol&#xE9;cule de myosine qui est li&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;actine, et le mouvement brownien r&#xE9;sultant de la tige est analys&#xE9; au taux de vid&#xE9;o par traitement d&#x26;#39;image num&#xE9;rique. Rotations compl&#xE8;tes de la tige sugg&#xE8;rent d&#x26;#39;importantes quantit&#xE9;s de bobine au hasard dans la structure de liaison. La similitude des taux de torsion pour la myosine bic&#xE9;phale et seule t&#xEA;te indique que la plupart de la souplesse provient ou au-del&#xE0; du premier pas de la bobine enroul&#xE9;e dans S2 et les plus susceptibles &#xE0; la charni&#xE8;re reliant S2 et le m&#xE9;romyosine lumi&#xE8;re. La t&#xEA;te de myosine a un impact faible mais d&#xE9;tectable sur cette flexibilit&#xE9;, car l&#x26;#39;addition d&#x26;#39;ADP &#xE0; la rigueur crossbridge produit des effets diff&#xE9;rents sur les caract&#xE9;ristiques de torsion de la myosine &#xE0; deux t&#xEA;tes par rapport &#xE0; une t&#xEA;te.

Grande flexibilit&#xE9; de la Crossbridge actomyosine R&#xE9;side dans la myosine du muscle squelettique sous-fragment-2 Comme l&#x26;#39;a d&#xE9;montr&#xE9; par un essai &#xE0; mol&#xE9;cule unique Nouveau

Hohe Flexibilit&#xE4;t des Actomyosin Querbr&#xFC;cke wohnt in der Skelettmuskulatur Subfragment Myosin-2, wie durch eine neue Einzelmolek&#xFC;l-Assay demonstriert.

Viste popolari della generazione di forza nel muscolo indicano che un braccio di leva nella testa della miosina inizia lo spostamento del filamento sottile. Tuttavia, questo braccio di leva &egrave; collegato alla dorsale spessi filamenti di una combinazione flessibile di bobine arrotolati e cerniere in miosina subfragment-2 (S2); quindi, forza efficiente generazione dipende lo sviluppo di tensione in questo collegamento struttura. Qui, un saggio di singola molecola &egrave; sviluppato per esaminare la flessibilit&agrave; di S2 intatto rispetto a quello della testa della miosina. Asta di miosina fluorescente contrassegnati &egrave; polimerizzato su una molecola di miosina singolo che &egrave; associata all&#39;actina, e il moto browniano risultante dell&#39;asta viene analizzato a tariffe video di elaborazione digitale delle immagini. Rotazioni complete dell&#39;asta suggeriscono una quantit&agrave; significativa di bobina casuale nella struttura di collegamento. La stretta somiglianza dei tassi di torsione per bicipite e singolo-testa della miosina indica che la maggior parte della flessibilit&agrave; nasce a o oltre il primo passo di bobina arrotolata in S2 e molto probabilmente a cerniera collega S2 e la luce meromyosin. La testa di miosina ha una pi&ugrave; piccola ma ancora rilevabile impatto su questa flessibilit&agrave;, poich&eacute; l&#39;aggiunta di ADP per il rigore crossbridge produce effetti differenziali sulle caratteristiche torsionali della doppio-testa contro miosina teste singolo.

Alta flessibilit&agrave; del crossbridge actomiosina risiede nel muscolo scheletrico della miosina subfragment-2, come dimostrato da un nuovo dosaggio di singola molecola.

&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x529B;&#x767A;&#x751F;&#x306E;&#x4EBA;&#x6C17;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x982D;&#x90E8;&#x306E;&#x30EC;&#x30D0;&#x30FC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30E0;&#x304C;&#x7D30;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5909;&#x4F4D;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D0;&#x30FC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30E0;&#x306F;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B5;&#x30D6;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;-2&#xFF08;S2&#xFF09;&#x306E;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x3068;&#x8776;&#x756A;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x306A;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x592A;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30D0;&#x30C3;&#x30AF;&#x30DC;&#x30FC;&#x30F3;&#x306B;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x52B9;&#x7387;&#x7684;&#x306A;&#x529B;&#x306E;&#x751F;&#x6210;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x5F35;&#x529B;&#x767A;&#x751F;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x982D;&#x90E8;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;S2&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x3057;&#x305F;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5358;&#x4E00;&#x306E;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x5206;&#x5B50;&#x306B;&#x91CD;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x304A;&#x308A;&#x3001;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x30D6;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x904B;&#x52D5;&#x306F;&#x3001;&#x30C7;&#x30B8;&#x30BF;&#x30EB;&#x753B;&#x50CF;&#x51E6;&#x7406;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30D3;&#x30C7;&#x30AA;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3067;&#x89E3;&#x6790;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C9;&#x306E;&#x5B8C;&#x5168;&#x306A;&#x56DE;&#x8EE2;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x30E9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30E0;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x304B;&#x306A;&#x308A;&#x306E;&#x91CF;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x53CC;&#x982D;&#x3068;&#x5358;&#x982D;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x306D;&#x3058;&#x308C;&#x7387;&#x306E;&#x8FD1;&#x3044;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x304C;S2&#x3068;&#x30E9;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30ED;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3059;&#x308B;&#x30D2;&#x30F3;&#x30B8;&#x3067;S2&#x3068;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x30D4;&#x30C3;&#x30C1;&#x3067;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3092;&#x8D8A;&#x200B;&#x200B;&#x3048;&#x3066;&#x767A;&#x4FE1;&#x3055;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x982D;&#x90E8;&#x306F;&#x3001;&#x53B3;&#x5BC6;&#x306B;ADP&#x3092;&#x6DFB;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30B8;&#x306F;&#x3001;&#x53CC;&#x982D;&#x306E;&#x5BFE;&#x5358;&#x982D;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x306D;&#x3058;&#x308A;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x5DEE;&#x52D5;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x306B;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3067;&#x3082;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30B8;&#x306E;&#x9AD8;&#x3044;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x683C;&#x7B4B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B5;&#x30D6;&#x30D5;&#x30E9;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;-2&#x306B;&#x5E38;&#x99D0;

&#xADFC;&#xC721;&#xC758; &#xD798; &#xC0DD;&#xC131;&#xC758; &#xC778;&#xAE30; &#xC870;&#xD68C; myosin &#xBA38;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xB808;&#xBC84; &#xD314; &#xC2DC;&#xC791;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC587;&#xC740; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC758; &#xBCC0;&#xC704;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;,&#xC774; &#xB808;&#xBC84; &#xD314; &#xCF54;&#xC77C;&#xB41C; &#xCF54;&#xC77C;&#xACFC; myosin subfragment-2 (S2); &#xACBD;&#xCCA9; &#xC720;&#xC5F0;&#xD55C; &#xC870;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xB450;&#xAEBC;&#xC6B4; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8; &#xBC31;&#xBCF8;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5B4; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC778; &#xD798; &#xC138;&#xB300; &#xC5F0;&#xACB0; &#xAD6C;&#xC870;&#xAC00; &#xAE34;&#xC7A5; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E4;&#xB985;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; myosin &#xBA38;&#xB9AC;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801;&#xC778; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; S2 &#xC720;&#xC5F0;&#xC131; &#xAC80;&#xC0AC; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xBD99;&#xC77C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xB41C; myosin &#xB9C9;&#xB300; &#xB9D0;&#xB77C;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xB2E8;&#xC77C; myosin &#xBD84;&#xC790;&#xC5D0; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xD558; &#xACE0; &#xB9C9;&#xB300;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBE0C;&#xB77C;&#xC6B4; &#xBAA8;&#xC158; &#xBE44;&#xB514;&#xC624;&#xC5D0; &#xB514;&#xC9C0;&#xD138; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xCC98;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBD84;&#xC11D; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9C9;&#xB300;&#xC758; &#xC644;&#xBCBD; &#xD55C; &#xD68C;&#xC804; &#xC81C;&#xC548; &#xBB34;&#xC791;&#xC704; &#xCF54;&#xC77C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xC591;&#xC758;. &#xC591;&#xCABD; &#xBC0F; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD5A5;&#xD558;&#xACE0; myosin &#xD2B8;&#xC704;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC6B4; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4; S2 &#xCF54;&#xC77C;&#xB41C; &#xCF54;&#xC77C;&#xC758; &#xCCAB; &#xD53C;&#xCE58; &#xC774;&#xC0C1;&#xC778; &#xACE0; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; S2 &#xB77C;&#xC774;&#xD2B8; meromyosin&#xC744; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD558;&#xB294; &#xD78C;&#xC9C0; (hinge)&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB798;. Myosin &#xBA38;&#xB9AC; &#xC791;&#xC740; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; ADP&#xC758; &#xC5C4; &#xD568; crossbridge &#xCD94;&#xAC00; &#xC774;&#xD6C4;&#xC774; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC544;&#xC9C1;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB2E8;&#xC77C; &#xD5A5;&#xD558;&#xACE0; myosin &#xB300; &#xC591;&#xCABD;&#xC758; &#xBE44;&#xD2C0;&#xB9BC; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xCC28;&#xB4F1; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC0B0;.

Actomyosin crossbridge&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131; &#xC788;&#xB294; &#xACE8;&#xACA9; &#xADFC;&#xC721; myosin subfragment-2 &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCFC; &#xC218; &#xC788;&#xB4EF;&#xC774;.

Puntos de vista populares de la generaci&#xF3;n de fuerza en el m&#xFA;sculo indican que un brazo de palanca en la cabeza de la miosina se inicia el desplazamiento del filamento delgado. Sin embargo, este brazo de palanca est&#xE1; unido a la columna vertebral filamento grueso por una combinaci&#xF3;n flexible de bobinas enrolladas y las bisagras en la miosina subfragmento-2 (S2), por lo tanto, la generaci&#xF3;n de fuerza eficaz depende de la tensi&#xF3;n en el desarrollo de esta estructura de enlace. Aqu&#xED;, una sola mol&#xE9;cula de ensayo se desarroll&#xF3; para examinar la flexibilidad de la relaci&#xF3;n S2 intacta a la de la cabeza de miosina. Marcado con fluorescencia miosina varilla se polimeriza en una sola mol&#xE9;cula de miosina que se une a la actina, y el movimiento Browniano como resultado de la varilla se analiza en las tasas de v&#xED;deo mediante el procesamiento digital de im&#xE1;genes. Rotaciones completas de la varilla sugieren cantidades significativas de bobina al azar en la estructura de enlace. La similitud de los tipos de giro de la miosina con dos puntas y la &#xFA;nica cabeza-indica que la mayor parte de la flexibilidad se origina en o despu&#xE9;s del primer lanzamiento de la espiral de la bobina en S2 y muy probablemente en la bisagra que conecta S2 y la meromiosina luz. La cabeza de la miosina tiene un impacto peque&#xF1;o pero detectable a&#xFA;n en esta flexibilidad, ya que la adici&#xF3;n de ADP al rigor enlaces cruzados produce efectos diferenciales en las caracter&#xED;sticas de torsi&#xF3;n de la miosina con dos puntas en comparaci&#xF3;n con una sola cabeza.

Alta flexibilidad de la actomiosina CrossBridge Reside en La miosina del m&#xFA;sculo esquel&#xE9;tico subfragmento-2 como lo demuestra un ensayo sola mol&#xE9;cula de Nueva

&#x4ECE;&#x6839;&#x672C;&#x4E0A;&#x91CD;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x808C;&#x8089;&#x5927;&#x4F1A;&#x548C;&#x6536;&#x7F29;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x87BA;&#x65CB;&#x7EBF;&#x5708;&#x7684;&#x7EB3;&#x7C73;&#x529B;&#x5B66;&#x6027;&#x80FD;&#x3002;&#x53CC;&#x5934;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x5355;&#x6237;&#x4E3B;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x5377;&#x5377;&#x5C3E;&#x7247;&#x6BB5;&#x7684;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x529B;&#x8C31;&#x83B7;&#x5F97;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x7279;&#x6027;&#x80C3;&#x58C1;&#x529B;-&#x8DDD;&#x79BB;&#x54CD;&#x5E94;&#x4EE5;&#x62C9;&#x4F38;&#xFF1A; &#x4E00;&#x4E2A;&#x4E0A;&#x5347;&#x9636;&#x6BB5; (R) &#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x9AD8;&#x539F;&#x9636;&#x6BB5; (P) &#x548C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6307;&#x6570;&#x9636;&#x6BB5; (E)&#x3002;R &#x548C; P &#x9636;&#x6BB5;&#x4E3B;&#x8981;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E8E;&#x62C9;&#x4F38;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB;&#x7EBF;&#x5708;&#x4E0E;&#x94F0;&#x94FE;&#x5730;&#x533A;&#x6B63;&#x5728;&#x4E0A;&#x5347;&#x9636;&#x6BB5;&#x4F4E;&#x90E8;&#x961F;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x53EA;&#x6709;&#x5728; E &#x9636;&#x6BB5;&#x662F;&#x7531;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x5F39;&#x6027;&#x7684;&#x8815;&#x866B;&#x94FE;&#x6A21;&#x578B;&#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x9650;&#x5236;&#x5BF9;&#x73B0;&#x6709;&#x7684; x &#x5C04;&#x7EBF;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x6247;&#x8D1D; S2 &#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x5177;&#x6709;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6216;&#x4E09;&#x4E2A;&#x9636;&#x6BB5;&#xFF0C;&#x6839;&#x636E;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x62C9;&#x4F38;&#x529B;&#x8C31;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x62DF;&#x3002;&#x5B83;&#x663E;&#x793A;&#x9644;&#x8FD1; P &#x9636;&#x6BB5;&#x7ED3;&#x675F;&#x5B8C;&#x5168;&#x5355;&#x72EC;&#x7684;&#x5377;&#x7EBF;&#x5708;&#x94FE;&#x548C;&#x62C9;&#x4F38;&#x5C55;&#x5F00;&#x7684;&#x94FE;&#x5230; E &#x9636;&#x6BB5;&#x5F15;&#x8D77;&#x3002;&#x4EA7;&#x751F;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E2A; P &#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x641C;&#x7D22;&#x9644;&#x8FD1; 40 pN &#x4E5F;&#x540C;&#x610F;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x503C;&#x751F;&#x6548;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x7075;&#x6D3B;&#x548C;&#x5F39;&#x6027;&#x7684; S2 &#x5730;&#x533A;&#xFF0C;&#x7279;&#x522B;&#x662F;&#x94F0;&#x94FE;&#x7684;&#x5730;&#x533A;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x7ECF;&#x8FC7;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x529B;&#x5C55;&#x73B0;&#x548C;&#x53EF;&#x9006;&#x5EF6;&#x957F;&#x671F;&#x95F4;&#x8089; powerstroke&#x3002;

&#x5377;&#x7EBF;&#x5708;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x5F00;&#x5377;&#x548C;&#x5C55;&#x73B0;&#x7684; superhelix &#x548C; &alpha;-&#x87BA;&#x65CB;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

The nanomechanical properties of the coiled-coils of myosin are fundamentally important in understanding muscle assembly and contraction. Force spectra of single molecules of double-headed myosin, single-headed myosin, and coiled-coil tail fragments were acquired with an atomic force microscope and displayed characteristic triphasic force-distance responses to stretch: a rise phase (R) and a plateau phase (P) and an exponential phase (E). The R and P phases arise mainly from the stretching of the coiled-coils, with the hinge region being the main contributor to the rise phase at low force. Only the E phase was analyzable by the worm-like chain model of polymer elasticity. Restrained molecular mechanics simulations on an existing x-ray structure of scallop S2 yielded force spectra with either two or three phases, depending on the mode of stretch. It revealed that coiled-coil chains separate completely near the end of the P phase and the stretching of the unfolded chains gives rise to the E phase. Extensive conformational searching yielded a P phase force near 40 pN that agreed well with the experimental value. We suggest that the flexible and elastic S2 region, particularly the hinge region, may undergo force-induced unfolding and extend reversibly during actomyosin powerstroke.

Coiled-coil nanomechanics and uncoiling and unfolding of the superhelix and alpha-helices of myosin.

Les propri&#xE9;t&#xE9;s nanom&#xE9;canique des bobines coiled-de myosine sont d&#x26;#39;une importance fondamentale dans la compr&#xE9;hension de montage et de la contraction musculaire. Spectres de force de mol&#xE9;cules individuelles de deux t&#xEA;tes de myosine, &#xE0; une t&#xEA;te de myosine, et des fragments de queue bispiral&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; acquis avec un microscope &#xE0; force atomique et affich&#xE9;e caract&#xE9;ristiques force-distance triphasiques r&#xE9;ponses pour &#xE9;tirer: une phase de mont&#xE9;e (R) et une phase de plateau (P) et une phase exponentielle (E). Les phases de R et P r&#xE9;sultent principalement de l&#x26;#39;&#xE9;tirement des bobines coiled-, avec la r&#xE9;gion charni&#xE8;re &#xE9;tant le principal contributeur &#xE0; la phase de mont&#xE9;e &#xE0; la force faible. Seule la phase E &#xE9;tait analysable par le mod&#xE8;le de la cha&#xEE;ne en forme de ver de l&#x26;#39;&#xE9;lasticit&#xE9; du polym&#xE8;re. Retenus mol&#xE9;culaires simulations de m&#xE9;canique sur un existant x-ray structure de p&#xE9;toncles S2 donn&#xE9; spectres de force avec deux ou trois phases, en fonction du mode d&#x26;#39;&#xE9;tirement. Il a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que bispiral&#xE9;s cha&#xEE;nes s&#xE9;parer compl&#xE8;tement vers la fin de la phase P et l&#x26;#39;&#xE9;tirage des cha&#xEE;nes d&#xE9;pli&#xE9;es donne lieu &#xE0; la phase E. Vaste recherche conformationnelle a abouti &#xE0; une force de la phase P de pr&#xE8;s de 40 pN que sont en bon accord avec la valeur exp&#xE9;rimentale. Nous sugg&#xE9;rons que la r&#xE9;gion souple et &#xE9;lastique S2, en particulier la r&#xE9;gion charni&#xE8;re, peut subir la force induite par d&#xE9;roulement et d&#x26;#39;&#xE9;tendre de fa&#xE7;on r&#xE9;versible au cours powerstroke actomyosine.

Bispiral&#xE9;s Nanom&#xE9;canique et le d&#xE9;roulement et le d&#xE9;roulement des superh&#xE9;lice et les h&#xE9;lices alpha de la myosine

Die nanomechanischen Eigenschaften der gewickelten Spulen von Myosin sind eminent wichtiger Muskel Montage- und Kontraktion zu verstehen. Kraft-Spektren einzelner Molek&uuml;le der doppelk&ouml;pfigen Myosin, unter der Leitung von einzelnen Myosin und aufgerollte Spule Schwanz Fragmente wurden mit einem Rasterkraftmikroskop erworben und charakteristische Triphasic Kraft-Abstands-Antworten zu dehnen angezeigt: eine Aufstieg Phase (R) und eine Plateauphase (P) und eine exponentielle Phase (E). Die R und P-Phasen resultieren vor allem aus der Dehnung der gewickelten Spulen, mit der Scharnier-Region wird der Hauptverursacher der Aufstieg-Phase mit geringer Kraft. Nur die E-Phase war durch das wurm&auml;hnliche Kette Modell der Polymer-Elastizit&auml;t analysierbar. Zur&uuml;ckhaltend Molekulare Mechaniker-Simulationen auf eine vorhandene R&ouml;ntgen-Struktur der Jakobsmuschel, die S2 Kraft Spektren mit zwei oder drei Phasen, je nach Strecke ergab. Es ergab, dass die aufgerollte Spule Ketten trennen ganz nahe dem Ende der P-Phase und die Dehnung der entfalteten Ketten gibt Anlass zu der E-Phase. Umfangreiche Konformations&auml;nderungen Suche ergab eine P-Phase zwingen, in der N&auml;he von 40 pN, die gut mit den experimentellen Wert zugestimmt. Wir empfehlen flexibel und elastische S2 Region, besonders der Scharnier-Region, kann Kraft induziert Entfaltung zu unterziehen und umkehrbar verl&auml;ngern w&auml;hrend Actomyosin Krafthub.

Aufgerollte Spule Nanomechanics und uncoiling und Entfaltung der Superhelix und Alpha-Helices des Myosin.

La propriet&agrave; nanomeccanici delle bobine a spirale di miosina sono fondamentalmente importante nella comprensione di assemblaggio del muscolo e la contrazione. Forza spettri di singole molecole di miosina bicipite, singolo-testa della miosina e frammenti di coda coiled-coil sono stati acquisiti con un microscopio a forza atomica e visualizzato risposte forza-distanza caratteristica trifasica ad allungare: una fase di crescita (R) e una fase di plateau (P) e una fase esponenziale (E). Le fasi di R e P derivano principalmente da stiramento delle bobine a spirale, con la regione cerniera essendo il principale contributore per la fase di ascesa a bassa forza. Solo la fase E era analizzabile dal modello catena worm-like di elasticit&agrave; del polimero. Trattenuto simulazioni di meccanica molecolare su una struttura esistente di raggi x di capasanta che S2 ha reso gli spettri di forza con due o tre fasi, a seconda della modalit&agrave; di tratto. &Egrave; rivelato che catene coiled-coil separano completamente verso la fine della fase P e l&#39;allungamento delle catene dispiegate d&agrave; luogo alla fase di E. Vasta ricerca conformazionale ha reso una fase P forza vicino a pN 40 che ha accettato bene con il valore sperimentale. Consigliamo che il flessibile ed elastica S2, specialmente la regione cerniera, pu&ograve; subire la forza indotta da svolgersi ed estendere reversibilmente durante powerstroke actomiosina.

La nanomeccanica coiled-coil e srotolare e svolgimento delle superhelix e &alpha;-eliche di miosina.

&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x30CA;&#x30CE;&#x6A5F;&#x68B0;&#x7279;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x7B4B;&#x8089;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3068;&#x53CE;&#x7E2E;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x4E0A;&#x3067;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x53CC;&#x982D;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x5358;&#x982D;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x3001;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x5C3E;&#x90E8;&#x65AD;&#x7247;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x529B;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306F;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x53D6;&#x5F97;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x3059;&#x308B;&#x7279;&#x6027;&#x4E09;&#x76F8;&#x529B;&#x3068;&#x8DDD;&#x96E2;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x304C;&#x8868;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7ACB;&#x3061;&#x4E0A;&#x304C;&#x308A;&#x76F8;&#xFF08;R&#xFF09;&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30C8;&#x30FC;&#x76F8;&#x3092;&#xFF08;P&#xFF09;&#x3068;&#x5BFE;&#x6570;&#x671F;&#xFF08;E&#xFF09;&#x3002; R&#x3068;P&#x76F8;&#x306F;&#x3001;&#x4F4E;&#x529B;&#x306E;&#x7ACB;&#x3061;&#x4E0A;&#x304C;&#x308A;&#x306E;&#x4F4D;&#x76F8;&#x306B;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x5BC4;&#x7A3F;&#x8005;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x30D2;&#x30F3;&#x30B8;&#x9818;&#x57DF;&#x3067;&#x3001;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x304B;&#x3089;&#x4E3B;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;E&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x5F3E;&#x529B;&#x6027;&#x306E;&#x30EF;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5206;&#x6790;&#x53EF;&#x80FD;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002; S2&#x30DB;&#x30BF;&#x30C6;&#x306E;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;X&#x7DDA;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x62D8;&#x675F;&#x5206;&#x5B50;&#x529B;&#x5B66;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x30E2;&#x200B;&#x200B;&#x30FC;&#x30C9;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;&#x3001;2&#x3064;&#x307E;&#x305F;&#x306F;3&#x3064;&#x306E;&#x30D5;&#x30A7;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3067;&#x529B;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x304C;E&#x76F8;&#x3092;&#x751F;&#x3058;&#x3055;&#x305B;&#x308B;P&#x76F8;&#x306E;&#x7D42;&#x308F;&#x308A;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x5B8C;&#x5168;&#x306B;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x3066;&#x5C55;&#x958B;&#x3057;&#x305F;&#x30C1;&#x30A7;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x4F38;&#x3073;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x63A2;&#x7D22;&#x306F;&#x5B9F;&#x9A13;&#x5024;&#x3068;&#x3088;&#x304F;&#x4E00;&#x81F4;40 pN&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;P&#x76F8;&#x529B;&#x304C;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x67D4;&#x8EDF;&#x3067;&#x5F3E;&#x6027;S2&#x5730;&#x57DF;&#x3001;&#x7279;&#x306B;&#x30D2;&#x30F3;&#x30B8;&#x9818;&#x57DF;&#x306F;&#x3001;&#x5C55;&#x958B;&#x529B;&#x8A98;&#x767A;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;powerstroke&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306B;&#x62E1;&#x5F35;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;

&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30C9;&#x30B3;&#x30A4;&#x30EB;&#x30CA;&#x30CE;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30AF;&#x30B9;&#x3068;&#x8D85;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x306E;&#x5DFB;&#x304D;&#x623B;&#x3057;&#x3068;&#x30A2;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x3B1;&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;

Myosin&#xC758; &#xCF54;&#xC77C; &#xCF54;&#xC77C;&#xC758; nanomechanical &#xC18D;&#xC131;&#xC740; &#xADFC;&#xC721; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xC218;&#xCD95; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;. &#xD3EC;&#xC2A4; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xC591;&#xCABD; myosin, &#xB2E8;&#xC77C; &#xD5A5;&#xD558;&#xACE0; myosin &#xCF54;&#xC77C; &#xCF54;&#xC77C; &#xAF2C;&#xB9AC; &#xD30C;&#xD3B8;&#xC758; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4; &#xACE0; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xCE6D; &#xD2B9;&#xC131; triphasic &#xD798; &#xAC70;&#xB9AC; &#xC751;&#xB2F5; &#xD45C;&#xC2DC;: &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB2E8;&#xACC4; (R)&#xC640; &#xACE0;&#xC6D0; &#xB2E8;&#xACC4; (P)&#xB294; &#xBC0F; &#xC9C0; &#xC218; &#xB2E8;&#xACC4; (E). R &#xBC0F; P &#xB2E8;&#xACC4; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xCE6D; &#xCF54;&#xC77C;-&#xCF54;&#xC77C;, &#xB0AE;&#xC740; &#xD798;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C1;&#xC2B9; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xC694; &#xAE30;&#xC5EC;&#xC790; &#xB418; &#xACE0; &#xD78C;&#xC9C0; (hinge) &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD55C;&#xB2E4;. E &#xB2E8;&#xACC4;&#xB294; analyzable &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; &#xD0C4;&#xC131;&#xC758; &#xC6DC; &#xAC19;&#xC740; &#xCCB4;&#xC778; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574;. &#xAC00;&#xB9AC;&#xBE44; S2 &#xB098;&#xC654;&#xACE0; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xCE58; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB450; &#xAC1C; &#xB610;&#xB294; 3 &#xAC1C;&#xC758; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC640; &#xD3EC;&#xC2A4; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC758; &#xAE30;&#xC874; x-&#xC120; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC790; &#xC5ED;&#xD559; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC744; &#xC81C; &#xC9C0;. &#xCF54;&#xC77C; &#xCF54;&#xC77C; &#xCCB4;&#xC778; P &#xB2E8;&#xACC4;&#xC758; &#xB05D; &#xADFC;&#xCC98; &#xC644;&#xC804;&#xD788; &#xBD84;&#xB9AC; &#xD558; &#xACE0; E &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC0DD;&#xACA8;&#xB098;&#xAC8C; &#xD3BC;&#xCE5C;&#xB41C; &#xCCB4;&#xC778; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xCE6D; &#xACF5;&#xAC1C;. &#xC2E4;&#xD5D8; &#xAC12;&#xC5D0; &#xC798; &#xB3D9;&#xC758; 40 pN &#xADFC;&#xCC98; &#xAC15;&#xC81C;&#xB85C; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAC80;&#xC0C9; P &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xC5BB;&#xC9C0; &#xBABB;&#xD588;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC5F0; &#xD558; &#xACE0; &#xD0C4;&#xB825; &#xC788;&#xB294; s 2 &#xC601;&#xC5ED;, &#xD2B9;&#xD788; &#xD78C;&#xC9C0; &#xC601;&#xC5ED; &#xC218; &#xC804;&#xAC1C; &#xAC15;&#xC81C; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC1B;&#xC544;&#xC57C; &#xD558; &#xACE0; actomyosin powerstroke &#xB3D9;&#xC548; &#xC5ED;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCF54;&#xC77C; &#xCF54;&#xC77C; nanomechanics uncoiling &#xBC0F; superhelix&#xACFC; myosin&#xC758; &#xC54C;&#xD30C;-&#xD3EC;&#xD568;&#xC758; &#xC804;&#xAC1C;.

Las propiedades nanomec&#xE1;nicos de las bobinas en espiral-de la miosina tienen una importancia fundamental en la comprensi&#xF3;n de la Asamblea y la contracci&#xF3;n muscular. Los espectros de la Fuerza de las mol&#xE9;culas individuales de dos cabezas de miosina, la miosina de una sola cabeza, y la bobina en espiral-fragmentos de la cola fueron adquiridas con un microscopio de fuerza at&#xF3;mica y se muestran caracter&#xED;sticas trif&#xE1;sicas distancia de fuerza para estirar las respuestas: una fase de ascenso (R) y una fase de meseta (P) y una fase exponencial (E). Las fases I y P se deben principalmente a que el estiramiento de las bobinas en espiral, con la regi&#xF3;n bisagra de ser el principal contribuyente a la fase de ascenso a la fuerza baja. S&#xF3;lo la fase E fue analizables por el modelo de cadena de tipo gusano de la elasticidad del pol&#xED;mero. Restrained simulaciones de mec&#xE1;nica molecular sobre una existente estructura de rayos X de vieira S2 se observan espectros fuerza con dos o tres fases, dependiendo del modo de estiramiento. Se revel&#xF3; que la bobina en espiral-cadenas separar completamente cerca del final de la fase P y el estiramiento de las cadenas se desarrollaron da lugar a la fase E. B&#xFA;squeda conformacional extenso dado una fuerza de la fase P cerca de 40 PN que son concordantes con el valor experimental. Se sugiere que la regi&#xF3;n S2 flexible y el&#xE1;stico, en particular la regi&#xF3;n bisagra, puede someterse a la fuerza inducida desarrollo y ampliar de forma reversible durante Powerstroke actomiosina.

Bobina en espiral-Nanomec&#xE1;nica y desenrollado y el desarrollo del superh&#xE9;lice y h&#xE9;lices alfa de la miosina

&#x5728;&#x8FD9;&#x7B80;&#x77ED;&#x7684;&#x5BA1;&#x67E5;&#x6211;&#x4EEC;&#x68C0;&#x67E5;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5728;&#x836F;&#x7269;&#x5F00;&#x53D1;&#x548C;&#x57FA;&#x7840;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B0;&#x7C7B;&#x578B;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x7684;&#x6700;&#x5C0F;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5C3A;&#x5BF8;&#x3002;&#x8BB8;&#x591A;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5173;&#x952E;&#x4F18;&#x52BF;&#x662F;&#x6837;&#x672C;&#x7684;&#x4FDD;&#x5B88;&#x6570;&#x989D;&#x7684;&#x73CD;&#x8D35;&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4F20;&#x7EDF;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x8981;&#x6C42;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x8861;&#x91CF;&#x76F4;&#x63A5;&#x4E2D;&#x5206;&#x5B50;&#x5408;&#x594F;&#x672A;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4F18;&#x52BF;&#x662F;&#x76EE;&#x524D;&#x5E73;&#x8861;&#x5728;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5B89;&#x88C5;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3001; &#x5236;&#x5907;&#x548C;&#x8BBE;&#x5907;&#x8D39;&#x7528;&#x6709;&#x56F0;&#x96BE;&#x7684;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x672A;&#x6765;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x5C06;&#x6539;&#x5584;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7F3A;&#x70B9;&#x4E0E;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x66F4;&#x7B80;&#x5355;&#x3001; &#x66F4;&#x4FBF;&#x5B9C;&#x7684;&#x751F;&#x4EA7;&#x3002;

&#x964D;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x529F;&#x80FD;&#x5355;&#x5206;&#x5B50;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x9274;&#x5B9A;&#x3002;

In this short review we examine the potential of single-molecule assays in drug development and in basic research to provide new types of information at the smallest assay scales. A key advantage of many single-molecule assays is the requirement for conservative amounts of precious sample compared to conventional assays. In addition, they measure processes that are not observed directly in molecular ensembles. These advantages are balanced currently by difficulties in assay setup, preparation and equipment expense. However, future developments will ameliorate these drawbacks with the production of simpler, less expensive experimental systems for single-molecule assays.

Downscaling functional bioassays by single-molecule techniques.

Dans cette courte revue, nous examinons le potentiel de mol&#xE9;cule unique dosages dans le d&#xE9;veloppement de m&#xE9;dicaments et dans la recherche fondamentale pour fournir de nouveaux types d&#x26;#39;information &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;chelle plus petite de dosage. Un avantage cl&#xE9; de nombreux tests d&#x26;#39;une seule mol&#xE9;cule est la condition pour des montants conservateurs de l&#x26;#39;&#xE9;chantillon pr&#xE9;cieux par rapport &#xE0; des analyses classiques. En outre, ils mesurent les processus qui ne sont pas directement observables dans des ensembles mol&#xE9;culaires. Ces avantages sont &#xE9;quilibr&#xE9;es par des difficult&#xE9;s actuellement dans la configuration du test, la pr&#xE9;paration et les frais d&#x26;#39;&#xE9;quipement. Toutefois, les d&#xE9;veloppements futurs seront att&#xE9;nuer ces inconv&#xE9;nients &#xE0; la production de plus simple, moins co&#xFB;teux syst&#xE8;mes exp&#xE9;rimentaux pour une seule mol&#xE9;cule essais.

Downscaling Bioassays fonctionnels par une seule mol&#xE9;cule Techniques

In diesen kurzen Bericht untersuchen wir das Potenzial von Einzelmolek&uuml;l-Assays in der Medikamentenentwicklung und in der Grundlagenforschung, neue Arten von Informationen im kleinsten Assay-Massstab. Ein wichtiger Vorteil von vielen Einzelmolek&uuml;l-Assays ist die Voraussetzung f&uuml;r konservative Betr&auml;ge der kostbaren Probe im Vergleich zu konventionellen Proben. Au&szlig;erdem Messen sie Prozesse, die nicht direkt im molekularen Ensembles beachtet werden. Diese Vorteile werden derzeit durch Schwierigkeiten bei der Probe Setup, Vorbereitung und Ausr&uuml;stung Kosten ausgeglichen. Zuk&uuml;nftige Entwicklungen werden jedoch diese Nachteile mit der Produktion einfacher, kosteng&uuml;nstiger Experimentieranlagen f&uuml;r Einzelmolek&uuml;l-Assays mildern.

Herunterskalierung funktionale Bioassays durch Einzelmolek&uuml;l-Techniken.

In questa breve recensione noi esaminare il potenziale dei dosaggi di singola molecola in sviluppo di farmaci e nella ricerca di base per fornire nuovi tipi di informazioni a pi&ugrave; piccole dosaggio scale. Un vantaggio chiave di molti saggi di singola molecola &egrave; il requisito per importi conservatori del prezioso campione rispetto ai dosaggi convenzionali. Inoltre, misurano i processi che non sono osservati direttamente in ensemble molecolare. Questi vantaggi sono bilanciati attualmente dalle difficolt&agrave; nelle spese di installazione, preparazione e attrezzature di dosaggio. Tuttavia, gli sviluppi futuri saranno migliorare questi inconvenienti con la produzione di sistemi sperimentali pi&ugrave; semplici, meno costosi per analisi di singola molecola.

Downscaling biotest funzionali mediante tecniche di singola molecola.

&#x3053;&#x306E;&#x77ED;&#x3044;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6700;&#x5C0F;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x5C3A;&#x5EA6;&#x3067;&#x60C5;&#x5831;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x533B;&#x85AC;&#x54C1;&#x958B;&#x767A;&#x3084;&#x57FA;&#x790E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x5358;&#x5206;&#x5B50;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x4E3B;&#x306A;&#x5229;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x306A;&#x91D1;&#x984D;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x30A2;&#x30F3;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x3067;&#x76F4;&#x63A5;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;&#x6E96;&#x5099;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x5668;&#x8CBB;&#x7528;&#x306E;&#x96E3;&#x3057;&#x3055;&#x306F;&#x3001;&#x73FE;&#x5728;&#x306E;&#x30D0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5C06;&#x6765;&#x306E;&#x767A;&#x5C55;&#x306F;&#x3001;&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B7;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3067;&#x5B89;&#x4FA1;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x7CFB;&#x306E;&#x751F;&#x7523;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6B20;&#x70B9;&#x3092;&#x6539;&#x5584;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5358;&#x4E00;&#x5206;&#x5B50;&#x6280;&#x8853;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x6027;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;

&#xC774; &#xC9E7;&#xC740; &#xAC80;&#xD1A0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC57D;&#xBB3C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xBC0F; &#xAE30;&#xCD08; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC758; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825;&#xC744; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC791;&#xC740; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xBE44;&#xB298;&#xC5D0; &#xC815;&#xBCF4; &#xC81C;&#xACF5; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9CE;&#xC740; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xC7A5;&#xC810;&#xC740; &#xAE30;&#xC874;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xADC0;&#xC911; &#xD55C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC758; &#xBCF4;&#xC218; &#xAE08;&#xC561;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xCE21;&#xC815; &#xD558;&#xC9C0; &#xBD84;&#xC790; &#xC559;&#xC0C1;&#xBE14;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC9C1;&#xC811; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC7A5;&#xC810;&#xC740; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC124;&#xCE58;, &#xC900;&#xBE44; &#xBC0F; &#xC7A5;&#xBE44; &#xBE44;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC5B4;&#xB824;&#xC6C0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD604;&#xC7AC; &#xADE0;&#xD615; &#xC870;&#xC815; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD5A5;&#xD6C4; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xAC8C;, &#xB35C; &#xBE44;&#xC2FC; &#xB2E8;&#xC77C; &#xBD84;&#xC790; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC0DD;&#xC0B0;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC810;&#xC744; &#xAC1C;&#xB7C9; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xC77C;-&#xBD84;&#xC790; &#xAE30;&#xBC95;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCD95;&#xC18C; &#xAE30;&#xB2A5; bioassays&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En esta breve revisi&#xF3;n se examina el potencial de los ensayos de una sola mol&#xE9;cula en el desarrollo de f&#xE1;rmacos y en la investigaci&#xF3;n b&#xE1;sica para proporcionar nuevos tipos de informaci&#xF3;n en las escalas m&#xE1;s peque&#xF1;as del ensayo. Una ventaja clave de muchas mol&#xE9;culas de un solo ensayos es el requisito de cantidades conservadores de muestra precioso en comparaci&#xF3;n con los ensayos convencionales. Adem&#xE1;s, medir los procesos que no se observan directamente en conjuntos moleculares. Estas ventajas se compensan en la actualidad por las dificultades en la configuraci&#xF3;n del ensayo, la preparaci&#xF3;n y el costo del equipo. Sin embargo, la evoluci&#xF3;n futura mejorar estos inconvenientes con la producci&#xF3;n de m&#xE1;s simples, los sistemas experimentales menos costosos para los ensayos de una sola mol&#xE9;cula.

Reducci&#xF3;n de escala de bioensayos funcionales mediante t&#xE9;cnicas de una sola mol&#xE9;cula

&#xCABC;&#xAC1C;&#xC9C4; myosin subfragment-1 50kda&#xC758; &#xC798;&#xB09C; &#xCCB4; &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD615;&#xAD11; &#xB77C;&#xBCA8; &#xD504;&#xB85C;&#xC2DC;&#xC800; &#xD2B9;&#xC815; &#xC18C;&#xC218; &#xD0DC;&#xADF8; &#xBC0F; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; CY3 N-hydroxy succinimidyl &#xC5D0;&#xC2A4;&#xD14C; &#xB974;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xB9D0;&#xB77C; &#xD65C;&#xC131; ATPase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xC885; &#xC8FC; &#xC815;&#xD654; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC120;&#xBBF8; Volmer &#xBD84;&#xC11D;&#xC740; CY3 &#xAE30;&#xBCF8; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;, &#xC6D0;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9E4;&#xD551;&#xB41C; &#xB77C;&#xBCA8; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; &#xC591;&#xADF9; &#xD654;&#xB294; CY3 actomyosin &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xADFC;&#xCC98; &#xC704;&#xCE58; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xB9D0;&#xB77C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB354; &#xB9CE;&#xC740; &#xBAA8;&#xBC14;&#xC77C; &#xB418;&#xB294; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; myosin &#xD558;&#xB294; cy3&#xC5D0; &#xAC70;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE58;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xC790; &#xC5ED;&#xD559;&#xACFC; &#xD655;&#xB960;&#xB860; &#xC5ED;&#xD559; &#xC2DC;&#xBBAC;&#xB808;&#xC774;&#xC158;&#xC774; &#xB77C;&#xBCA8; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xC5F4;&#xACE0; &#xAC15;&#xC81C; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xACE0; &#xD3D0;&#xC1C4;, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCABC;&#xAC1C;&#xC9C4; &#xC0C1;&#xB2E8; 50kDa &#xC27D;&#xAC8C; &#xC6C0;&#xC9C1;&#xC774;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xAC15;&#xC81C; &#xAC08;&#xB77C;&#xC9C4; &#xAC1C;&#xBC29;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xC7A5;&#xAC70;&#xB9AC; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB294; &#xB2EB;&#xAE30; &#xB808;&#xBC84; &#xD314; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBBF8;&#xCE60; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xCABC;&#xAC1C;&#xC9C4; myosin&#xC758; 50kda&#xC758; &#xC798;&#xB09C; &#xCCB4;&#xC758; &#xD615;&#xAD11; &#xB77C;&#xBCA8; &#xBC0F; &#xC804;&#xC0B0; &#xBD84;&#xC11D;.

Un nuevo procedimiento marcaje fluorescente espec&#xED;fico para la secuencia de puntal de la miosina subfragmento-1 de 50 kDa hendido se desarroll&#xF3; utilizando CY3 N-hidroxi &#xE9;ster succinimidilo como una etiqueta hidr&#xF3;foba y cromatograf&#xED;a de interacci&#xF3;n hidrof&#xF3;bica para purificar las principales especies marcadas que retenidas actina activado por la actividad de ATPasa. Stern-Volmer an&#xE1;lisis sugiere que el CY3 est&#xE1; en estrecha proximidad a los residuos b&#xE1;sicos, en consonancia con la inspecci&#xF3;n del sitio etiquetado asignada en el modelo at&#xF3;mico. Polarizaci&#xF3;n de la fluorescencia indica que el CY3 se vuelve m&#xE1;s m&#xF3;vil sobre la uni&#xF3;n de actina, el apoyo a un lugar cercano a la interfaz de actomiosina. En contraste, la uni&#xF3;n de nucle&#xF3;tidos a la miosina tenido poco impacto en la Cy3. Mecanismos moleculares y simulaciones din&#xE1;micas estoc&#xE1;sticas indican que este sitio es de etiquetado sensibles a la apertura forzada leporino y el cierre, pero la hendidura superior de 50 kDa no se mueve f&#xE1;cilmente. Adem&#xE1;s, parece que hay algunos efectos a largo plazo de la apertura y el cierre obligado hendidura que podr&#xED;an afectar la posici&#xF3;n del brazo de palanca.

Etiquetado de fluorescencia y an&#xE1;lisis computacional de los puntales de la miosina de 50 kDa leporino

Una nuova specifica procedura etichettatura fluorescente per la sequenza di puntone della 50kDa di miosina subfragment-1 schisi &egrave; stata sviluppata utilizzando CY3 N-idrossi succinimidil estere come un tag idrofobi e cromatografia idrofoba di interazione per purificare i principali etichettati specie che hanno mantenuto attivit&agrave; ATPasi actina-attivato. Stern-Volmer analisi suggeriscono che i CY3 &egrave; nella prossimit&agrave; vicina ai residui di base, coerenti con l&#39;ispezione del sito d&#39;etichettatura mappato nel modello atomico. Polarizzazione di fluorescenza indica che il CY3 diventa pi&ugrave; mobile dell&#39;associazione actina, sostenendo una posizione vicino all&#39;interfaccia dell&#39;actomiosina. In contrasto, associazione nucleotide di miosina ebbe poco impatto sui CY3. Meccanica molecolare e dinamica stocastica simulazioni suggeriscono che questo sito etichettatura &egrave; sensibile alla schisi forzato di apertura e chiusura, ma il superiore 50kDa schisi non spostare facilmente. Inoltre, ci sembrano essere alcuni effetti a lungo raggio di apertura schisi forzato e chiusura che potrebbe urtare la posizione del braccio di leva.

Fluorescenza etichettatura e computazionali analisi del puntone di 50kDa di miosina schisi.

&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x652F;&#x67F1;&#x306E;&#x914D;&#x5217;&#x306B;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x624B;&#x9806;&#x306E;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;-1&#x306E;50kDa&#x306E;&#x88C2;&#x3051;&#x76EE;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;ATP&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x4FDD;&#x6301;&#x3057;&#x3066;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E;&#x4ED8;&#x3044;&#x305F;&#x7A2E;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x30BF;&#x30B0;&#x3068;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;CY3 N-&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30B9;&#x30AF;&#x30B7;&#x30F3;&#x30A4;&#x30DF;&#x30B8;&#x30EB;&#x30A8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30EB;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x958B;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3; - &#x30DC;&#x30EB;&#x30DE;&#x30FC;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;CY3&#x306F;&#x3001;&#x5869;&#x57FA;&#x6027;&#x6B8B;&#x57FA;&#x306B;&#x8FD1;&#x63A5;&#x3057;&#x305F;&#x539F;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x90E8;&#x4F4D;&#x306E;&#x691C;&#x67FB;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x504F;&#x5149;&#x306F;Cy3&#x306F;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x754C;&#x9762;&#x4ED8;&#x8FD1;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3088;&#x308A;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;Cy3&#x306B;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x529B;&#x5B66;&#x3068;&#x78BA;&#x7387;&#x8AD6;&#x7684;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x30B7;&#x30DF;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6A19;&#x8B58;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x304C;&#x5F37;&#x5236;&#x7684;&#x306B;&#x53E3;&#x84CB;&#x88C2;&#x306E;&#x958B;&#x53E3;&#x90E8;&#x3068;&#x9589;&#x9396;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x6E9D;&#x4E0A;&#x90E8;&#x306E;50kDa&#x306E;&#x306F;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x79FB;&#x52D5;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x30EC;&#x30D0;&#x30FC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x5F37;&#x5236;&#x7684;&#x306B;&#x53E3;&#x84CB;&#x88C2;&#x306E;&#x958B;&#x9589;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x898B;&#x3048;&#x308B;&#x3002;

&#x86CD;&#x5149;&#x6A19;&#x8B58;&#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;50kDa&#x306E;&#x88C2;&#x306E;&#x30B9;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x6570;&#x5024;&#x89E3;&#x6790;

&#x652F;&#x6491;&#x5E8F;&#x5217;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; subfragment 1 50kDa &#x5507;&#x88C2;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x65B0;&#x5177;&#x4F53;&#x5236;&#x5B9A;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528; succinimidyl CY3 N-&#x7F9F;&#x57FA;&#x916F;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x758F;&#x6C34;&#x6027;&#x6807;&#x8BB0;&#x548C;&#x758F;&#x6C34;&#x5C42;&#x6790;&#x51C0;&#x5316;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E3A;&#x4FDD;&#x7559;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x6D3B; ATPase &#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x7269;&#x79CD;&#x3002;&#x65AF;&#x7279;&#x6069;&#x6C83;&#x5C14;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; CY3 &#x662F;&#x5728;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x6B8B;&#x7559;&#x7269;&#xFF0C;&#x7B26;&#x5408;&#x68C0;&#x9A8C;&#x4E2D;&#x7684;&#x539F;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x6620;&#x5C04;&#x8D34;&#x6807;&#x7AD9;&#x70B9;&#x9760;&#x8FD1;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x504F;&#x632F;&#x6307;&#x793A; CY3 &#x53D8;&#x5F97;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x79FB;&#x52A8;&#x540E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED1;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x652F;&#x6301;&#x8089;&#x754C;&#x9762;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x5BF9; CY3 &#x5C0F;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x5206;&#x5B50;&#x529B;&#x5B66;&#x548C;&#x968F;&#x673A;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x6A21;&#x62DF;&#x8868;&#x660E;&#x6B64;&#x6807;&#x8BB0;&#x7684;&#x7AD9;&#x70B9;&#x662F;&#x654F;&#x611F;&#x5230;&#x5F3A;&#x8FEB;&#x816D;&#x88C2;&#x6253;&#x5F00;&#x548C;&#x5173;&#x95ED;&#xFF0C;&#x4F46;&#x88C2;&#x7684;&#x4E0A;&#x90E8; 50kDa &#x4E0D;&#x4F1A;&#x8F7B;&#x6613;&#x79FB;&#x52A8;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4F3C;&#x4E4E;&#x90A3;&#x91CC;&#x5F3A;&#x8FEB;&#x816D;&#x88C2;&#x5F00;&#x5E55;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x957F;&#x671F;&#x5F71;&#x54CD;&#x548C;&#x5173;&#x95ED;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x6760;&#x6746;&#x81C2;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;

&#x816D;&#x88C2;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7684; 50kDa &#x652F;&#x67F1;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0;&#x548C;&#x8BA1;&#x7B97;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

A new fluorescent labeling procedure specific for the strut sequence of myosin subfragment-1's 50kDa cleft was developed using CY3 N-hydroxy succinimidyl ester as a hydrophobic tag and hydrophobic interaction chromatography to purify the major labeled species which retained actin-activated ATPase activity. Stern-Volmer analysis suggests that the CY3 is in close proximity to basic residues, consistent with inspection of the mapped labeling site in the atomic model. Fluorescence polarization indicates that the CY3 becomes more mobile upon actin binding, supporting a location near the actomyosin interface. In contrast, nucleotide binding to myosin had little impact on the CY3. Molecular mechanics and stochastic dynamics simulations suggest that this labeling site is sensitive to forced cleft opening and closure, but the upper 50kDa cleft does not move easily. In addition, there appear to be some long-range effects of forced cleft opening and closing that could impact the lever arm position.

Fluorescence labeling and computational analysis of the strut of myosin's 50kDa cleft.

Une proc&#xE9;dure d&#x26;#39;&#xE9;tiquetage nouvelle fluorescente sp&#xE9;cifique de la s&#xE9;quence de la myosine entretoise sous-fragment-1 de 50 kDa fente a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;labor&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;aide CY3 N-hydroxy succinimidyl ester en tant que mot-cl&#xE9; hydrophobe et la chromatographie d&#x26;#39;interaction hydrophobe pour purifier les esp&#xE8;ces principales marqu&#xE9;s qui conservaient actine-actif activit&#xE9; ATPase. Stern-Volmer analyse sugg&#xE8;re que le CY3 est &#xE0; proximit&#xE9; de r&#xE9;sidus basiques, compatible avec l&#x26;#39;inspection du site d&#x26;#39;&#xE9;tiquetage mapp&#xE9; dans le mod&#xE8;le atomique. Polarisation de fluorescence indique que le CY3 devient plus mobile sur actine, supportant un emplacement pr&#xE8;s de l&#x26;#39;interface actomyosine. En revanche, la liaison de nucl&#xE9;otides &#xE0; la myosine eu peu d&#x26;#39;impact sur la CY3. De m&#xE9;canique mol&#xE9;culaire et stochastiques des simulations de dynamique sugg&#xE8;rent que ce site est sensible &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tiquetage d&#x26;#39;ouverture et de fermeture forc&#xE9;e fissure, mais la fente sup&#xE9;rieure 50 kDa ne se d&#xE9;place pas facilement. En outre, il semble y avoir certains effets &#xE0; long terme de l&#x26;#39;ouverture et la fermeture forc&#xE9;e fissure qui pourraient influer sur la position du bras de levier.

Marquage fluorescent et de l&#x26;#39;analyse computationnelle de la jambe de fente 50 kDa de myosine de

Eine neue fluoreszierende Kennzeichnung Verfahren bestimmte f&uuml;r die Federbein-Sequenz des Myosin Subfragment-1 50kDa cleft wurde entwickelt mit CY3 N-hydroxy-Succinimidyl-Ester als hydrophobe Tag und hydrophobe Interaktion Chromatographie, reinigen die wichtigsten beschriftet Arten die Aktin-aktiviert ATPase Aktivit&auml;t beibehalten. Stern-Volmer-Analyse zufolge die CY3 in unmittelbarer N&auml;he zum grundlegenden R&uuml;ckst&auml;nde, Einklang mit Ortsbesichtigung zugeordneten Kennzeichnung in das Atommodell ist. Fluoreszenz-Polarisation bedeutet, dass die CY3 mobiler auf Aktin-Bindung, eine Lage in der N&auml;he der Actomyosin-Schnittstelle unterst&uuml;tzt wird. Nukleotid-Bindung an Myosin hatte dagegen wenig Einfluss auf die CY3. Molekulare Mechanismen und stochastische Dynamik-Simulationen zufolge dieser Kennzeichnung Website reagiert auf erzwungene Hasenscharte, die &Ouml;ffnung und Schlie&szlig;ung, aber die oberen 50kDa, die Lippen bewegt sich nicht leicht. Dar&uuml;ber hinaus scheint es einige Langstrecken Effekte der erzwungenen Lippen-&Ouml;ffnung und schlie&szlig;en, die den Arm Hebelstellung auswirken.

Kennzeichnung und computational Fluoreszenzanalyse des Stabes des Myosin 50kDa Lippen.

&#x5408;&#x4F5C;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x7EC6;&#x4E1D;&#x5DF2;&#x77E5;&#x4F1A;&#x53D7;&#x5230;&#x7D27;&#x5BC6;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4F46;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x5B50;&#x5B66;&#x673A;&#x5236;&#x4E0D;&#x5F88;&#x4E86;&#x89E3;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x7406;&#x89E3;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x89C4;&#x7BA1;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x4E0E;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5173;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x6D4B;&#x91CF;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x6620;&#x5C04;&#x4E0E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4F7F;&#x7528;&#x539F;&#x5B50;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x90BB;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x5305;&#x542B;&#x5355;&#x4E2A;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178; troponins T&#x3001; &#x7B2C;&#x4E00;&#x3001; &#x548C; C &#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x63A5;&#x53E3;&#x9644;&#x8FD1;&#x7684;&#x9E21;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D; T &#x5F02;&#x6784;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x552F;&#x4E00;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E0A;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178;&#x662F;&#x53D1;&#x73B0;&#x663E;&#x8457;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D; 3 &#x73AF;&#x9644;&#x8FD1;&#x3002;&#x6B64;&#x5FAA;&#x73AF;&#x4EE5;&#x524D;&#x5DF2;&#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x754C;&#x9762;&#x9644;&#x8FD1;&#x7531;&#x5316;&#x5B66;&#x4EA4;&#x8054;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x6350;&#x6B3E;&#x3002;&#x7531;&#x5206;&#x5B50;&#x5EFA;&#x6A21;&#xFF0C;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x53EA;&#x9650;&#x5236;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x8089;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5BB9;&#x7EB3;&#x7684;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x5728;&#x6B64;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x8DE8;&#x6865;&#x9644;&#x8FD1;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8FD1;&#x5728;&#x54AB;&#x5C3A;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FDB;&#x884C;&#x5BA1;&#x67E5;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6F5C;&#x529B;&#x9644;&#x8FD1;&#x6CBF;&#x7EC6;&#x4E1D;&#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x5143;&#x9996;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x4E92;&#x52A8;&#x5F15;&#x8D77;&#x4E86;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x673A;&#x5236;&#x5728;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3002;

&#x8DDD;&#x79BB;&#x8F83;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x808C;&#x7403;&#x86CB;&#x767D;&#x5FAA;&#x73AF; 3 &#x5230;&#x808C;&#x9499;&#x86CB;&#x767D;&#x7531;&#x5171;&#x632F;&#x80FD;&#x91CF;&#x8F6C;&#x79FB;&#x8DDD;&#x79BB;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x4E09;&#x89D2;&#x5256;&#x5206;&#x3002;

Cooperative activation of the thin filament is known to be influenced by the tight binding of myosin to actin, but the molecular mechanism underlying this contribution of myosin is not well understood. To better understand the structural relationship of myosin with the regulatory troponin complex, resonance energy transfer measurements were used to map the location of troponin relative to a neighboring myosin bound to actin using atomic models. Using a chicken troponin T isoform that contains a single cysteine near the binding interface between troponins T, I, and C, this uniquely labeled cysteine on troponin was found to be remarkably near loop 3 of myosin. This loop has previously been localized near the actin and myosin interface by chemical cross-linking methods, but its functional contributions have not been established. The implications of this close proximity are examined by molecular modeling, which suggests that only restricted conformations of actomyosin can accommodate the presence of troponin at this location near the cross-bridge. This potential for interaction between troponin and myosin heads that bind near it along the thin filament raises the possibility of models in which direct myosin and troponin interactions may play a role in the regulatory mechanism.

Close proximity of myosin loop 3 to troponin determined by triangulation of resonance energy transfer distance measurements.

Coop&#xE9;rative d&#x26;#39;activation du filament fin est connue pour &#xEA;tre influenc&#xE9;e par la forte liaison de la myosine &#xE0; l&#x26;#39;actine, mais le m&#xE9;canisme mol&#xE9;culaire qui sous-tend cette contribution de la myosine n&#x26;#39;est pas bien comprise. Afin de mieux comprendre la relation structurelle de la myosine avec le complexe troponine r&#xE9;glementaire, des mesures de r&#xE9;sonance de transfert d&#x26;#39;&#xE9;nergie ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;es pour cartographier l&#x26;#39;emplacement de la troponine par rapport &#xE0; un voisin myosine li&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;actine en utilisant des mod&#xE8;les atomiques. L&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;un poulet troponine T isoforme qui contient une cyst&#xE9;ine unique pr&#xE8;s de l&#x26;#39;interface de liaison entre troponines T, I, et C, cette cyst&#xE9;ine unique &#xE9;tiquet&#xE9;s sur la troponine a &#xE9;t&#xE9; jug&#xE9; remarquablement pr&#xE8;s de la boucle 3 de la myosine. Cette boucle a d&#xE9;j&#xE0; &#xE9;t&#xE9; localis&#xE9;e pr&#xE8;s de l&#x26;#39;actine et de l&#x26;#39;interface myosine par r&#xE9;ticulation chimique des m&#xE9;thodes, mais ses contributions fonctionnelles n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; &#xE9;tablies. Les implications de cette proximit&#xE9; sont examin&#xE9;s par la mod&#xE9;lisation mol&#xE9;culaire, ce qui sugg&#xE8;re que les conformations ne restreint d&#x26;#39;actomyosine peut accueillir la pr&#xE9;sence de troponine &#xE0; cet endroit pr&#xE8;s de la croix-pont. Ce potentiel d&#x26;#39;interaction entre la troponine et t&#xEA;tes de myosine qui se lient pr&#xE8;s d&#x26;#39;elle le long de la mince filament soul&#xE8;ve la possibilit&#xE9; de mod&#xE8;les dans lesquels la myosine et les interactions directes troponine peut jouer un r&#xF4;le dans le m&#xE9;canisme de r&#xE9;gulation.

Proximit&#xE9; de la myosine Boucle 3 &#xE0; la troponine D&#xE9;termin&#xE9; par triangulation des Mesures de l&#x26;#39;&#xE9;nergie &#xE0; distance par r&#xE9;sonance de transfert

Kooperative Aktivierung des d&uuml;nnen Heizfadens ist bekannt, dass durch die enge Bindung von Myosin an Aktin beeinflusst werden, aber die molekulare Mechanismen, die hinter diesem Beitrag des Myosin ist nicht gut verstanden. Zum besseren Verst&auml;ndnis die strukturelle Beziehung von Myosin mit den regulatorischen Troponin komplex waren Resonanz Energie Transfer Messungen verwendet, um den Speicherort der Troponin im Vergleich zu einer benachbarten Myosin an Aktin mit atomaren Modelle gebunden zuzuordnen. Verwenden ein Huhn-Troponin T-Isoform, das ein einzelnes Cystein in der N&auml;he der Bindung-Schnittstelle zwischen Troponins T, I und C enth&auml;lt, dies eindeutig beschriftet Cystein auf Troponin erwies sich bemerkenswert nahe Schleife 3 von Myosin. Diese Schleife hat zuvor in der N&auml;he der Aktin und Myosin-Schnittstelle durch chemische Vernetzung Verfahren lokalisiert wurde, aber seine funktionale Beitr&auml;ge nicht eingerichtet wurden. Die Folgen aus dieser N&auml;he sind von Molekulare Modellierung untersucht, was darauf hindeutet, dass nur eingeschr&auml;nkte Konformationen von Actomyosin das Vorhandensein von Troponin an diesem Standort nahe der Kreuz-Br&uuml;cke unterbringen k&ouml;nnen. Dieses Potenzial f&uuml;r die Interaktion zwischen Troponin und Myosin-K&ouml;pfen, die in der N&auml;he es entlang der d&uuml;nnen Filamenten binden l&ouml;st die M&ouml;glichkeit Modelle, in denen direkte Myosin und Troponin-Interaktionen in Regelungsvorschriften eine Rolle spielen k&ouml;nnen.

Unmittelbarer N&auml;he Myosin-Schleife 3 Troponin durch Triangulation von Resonanz Energie Transfer Messungen bestimmt.

Cooperativa attivazione del filamento sottile &egrave; noto per essere influenzato dal legame stretto di miosina all&#39;actina, ma il meccanismo molecolare alla base di questo contributo di miosina non &egrave; ben compreso. Per comprendere meglio il rapporto strutturale della miosina con il complesso normativa della troponina, le misure di trasferimento di energia risonanza sono state utilizzate per mappare la posizione di troponina rispetto a una vicina miosina associata all&#39;actina utilizzando modelli atomici. Utilizzando un&#39;isoforma di troponina T pollo che contiene un singolo cisteina vicino all&#39;interfaccia dell&#39;associazione tra troponins T, I e C, questo etichettati in modo univoco la cisteina sulla troponina &egrave; stato trovato per essere notevolmente vicino ciclo 3 della miosina. Questo ciclo &egrave; stato precedentemente localizzato vicino all&#39;interfaccia dell&#39;actina e miosina di metodi chimici di cross-linking, ma suoi contributi funzionali non sono stati stabiliti. Le implicazioni di questa vicinanza sono esaminate dalla modellistica molecolare, il che suggerisce che solo limitati conformazioni di actomiosina possono ospitare la presenza di troponina in questa posizione vicino al ponte di croce. Questo potenziale per l&#39;interazione tra le teste di troponina e miosina che legano vicino esso lungo il filamento sottile genera la possibilit&agrave; di modelli in cui interazioni dirette della miosina e la troponina possono giocare un ruolo nel meccanismo di regolamentazione.

Nelle immediate vicinanze del ciclo di miosina 3 a troponina determinata dalla triangolazione delle misurazioni delle distanze resonance energy transfer.

&#x7D30;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5354;&#x540C;&#x7D44;&#x5408;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30C8;&#x7D50;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3088;&#x308A;&#x826F;&#x3044;&#x898F;&#x5236;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306A;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x96A3;&#x63A5;&#x3059;&#x308B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3092;&#x30DE;&#x30C3;&#x30D7;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;T&#x3001;I&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;C&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x754C;&#x9762;&#x4ED8;&#x8FD1;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x9D8F;&#x306E;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;T&#x30A2;&#x30A4;&#x30BD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x30E6;&#x30CB;&#x30FC;&#x30AF;&#x306A;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;3&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x4EE5;&#x524D;&#x306B;&#x5316;&#x5B66;&#x67B6;&#x6A4B;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x754C;&#x9762;&#x4ED8;&#x8FD1;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x8CA2;&#x732E;&#x306F;&#x3001;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8FD1;&#x63A5;&#x306E;&#x610F;&#x5473;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C8;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x306E;&#x307F;&#x306B;&#x5236;&#x9650;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30AF;&#x30ED;&#x30B9;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30B8;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x5834;&#x6240;&#x3067;&#x306E;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x5165;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x691C;&#x67FB;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D30;&#x3044;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x306B;&#x6CBF;&#x3063;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x982D;&#x90E8;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306F;&#x76F4;&#x63A5;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x767A;&#x751F;&#x3055;&#x305B;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x5171;&#x9CF4;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x79FB;&#x52D5;&#x8DDD;&#x96E2;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x306E;&#x4E09;&#x89D2;&#x6E2C;&#x91CF;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30C8;&#x30ED;&#x30DD;&#x30CB;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x30DF;&#x30AA;&#x30B7;&#x30F3;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;3&#x306E;&#x8FD1;&#x63A5;

&#xC587;&#xC740; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC758; &#xD611;&#xB825; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; myosin &#xB9D0;&#xB77C;, &#xD558;&#xC758; &#xB2E8;&#xB2E8;&#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC744; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAE30;&#xBCF8; myosin&#xC758;&#xC774; &#xACF5;&#xD5CC;&#xC774; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xADDC;&#xC81C; troponin&#xACFC; myosin&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xAD00;&#xACC4;&#xB97C; &#xB354; &#xC798; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xCE21;&#xC815; troponin &#xB9D0;&#xB77C; &#xC6D0;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC774;&#xC6C3; myosin &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xC704;&#xCE58;&#xC758; &#xC9C0;&#xB3C4; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. Troponins T, I &#xBC0F; C &#xAC04;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xADFC;&#xCC98; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xCE58;&#xD0A8; troponin T isoform&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xACE0;&#xC720; &#xD558; &#xAC8C; &#xD45C;&#xC2DC; troponin&#xC5D0; cysteine&#xC774; &#xB208;&#xC5D0; &#xB744;&#xAC8C; myosin &#xB8E8;&#xD504; 3 &#xADFC;&#xCC98;&#xC5D0; &#xC788;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB8E8;&#xD504;&#xB294; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBC88;&#xC5ED; &#xB41C; &#xB9D0;&#xB77C;&#xC640; myosin &#xC778;&#xD130;&#xD398;&#xC774;&#xC2A4; &#xADFC;&#xCC98; &#xD654;&#xD559; &#xAC00;&#xAD50; &#xBC29;&#xBC95;&#xC73C;&#xB85C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801; &#xAE30;&#xC5EC; &#xC124;&#xB9BD; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740;. &#xC774; &#xADFC;&#xC811;&#xC758; &#xC758;&#xBBF8;&#xB294; &#xC81C;&#xC548;&#xB9CC; &#xC81C;&#xD55C; conformations actomyosin&#xC758; troponin &#xD06C;&#xB85C;&#xC2A4; &#xBE0C;&#xB9AC;&#xC9C0; &#xADFC;&#xCC98;&#xC774; &#xC704;&#xCE58;&#xC5D0; &#xC874;&#xC7AC;&#xB97C; &#xC218;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC80;&#xC0AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC587;&#xC740; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xB97C; &#xB530;&#xB77C; &#xADFC;&#xCC98; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; troponin&#xACFC; myosin &#xBA38;&#xB9AC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C;&#xC774; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xBAA8;&#xB378; &#xC9C1;&#xC811; myosin troponin &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xADDC;&#xC81C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xAE30; &#xD558;&#xACE0;&#xC788;&#xB2E4;.

Myosin &#xB8E8;&#xD504; 3 troponin &#xACF5;&#xBA85; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xC804;&#xC1A1; &#xAC70;&#xB9AC; &#xCE21;&#xC815;&#xC758; &#xC0BC;&#xAC01; &#xCE21;&#xB7C9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815;&#xC758; &#xADFC;&#xC811;.

La activaci&#xF3;n de la Cooperativa de filamento delgado que se conoce para ser influenciado por la fuerte uni&#xF3;n de la miosina a la actina, pero el mecanismo molecular que subyace a esta contribuci&#xF3;n de la miosina no se entiende bien. Para comprender mejor la relaci&#xF3;n estructural de la miosina con el complejo de troponina regulatorio, las mediciones de resonancia de transferencia de energ&#xED;a se utiliza para asignar la ubicaci&#xF3;n de la troponina en relaci&#xF3;n con un vecino miosina actina obligado a utilizar los modelos at&#xF3;micos. Usando un pollo troponina T isoforma que contiene una &#xFA;nica ciste&#xED;na cerca de la interfase de uni&#xF3;n entre troponinas T, I y C, esta forma &#xFA;nica ciste&#xED;na marcada en la troponina se encontr&#xF3; que era notablemente cerca de bucle 3 de la miosina. Este circuito ya ha sido localizado cerca de la actina y la miosina por la interfaz de reticulaci&#xF3;n qu&#xED;mica m&#xE9;todos, pero sus contribuciones funcionales no se han establecido. Las implicaciones de esta cercan&#xED;a son examinadas por modelado molecular, lo que sugiere que las conformaciones de actomiosina se limita &#xFA;nicamente puede dar cabida a la presencia de troponina en este lugar cerca de la cruz-puente. Este potencial para la interacci&#xF3;n entre la troponina y las cabezas de miosina que se unen cerca de &#xE9;l a lo largo del filamento delgado plantea la posibilidad de modelos en los que la miosina y la interacci&#xF3;n directa de troponina pueden jugar un papel en el mecanismo de regulaci&#xF3;n.

Muy cerca de la miosina Loop 3 a la troponina determinada por triangulaci&#xF3;n de las mediciones de energ&#xED;a de resonancia distancia de transferencia de

Douglas D. Root

Department of Biological Sciences

University of North Texas

Demonstrating the Uses of the Novel Gravitational Force Spectrometer to Stretch and Measure Fibrous Proteins

Douglas D. Root

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Biological Sciences

University of North Texas

Demonstrating the Uses of the Novel Gravitational Force Spectrometer to Stretch and Measure Fibrous Proteins

Department of Biological Sciences