Monitoring Cleaved Caspase-3 Activity and Apoptosis of Immortalized Oligodendroglial Cells using Live-cell Imaging and Cleaveable Fluorogenic-dye Substrates Following Potassium-induced Membrane Depolarization

The central nervous system can experience a number of stresses and neurological insults, which can have numerous adverse effects that ultimately lead to a ...

University of Guelph

&#x7EC4; 2 &#x665A;&#x80DA;&#x80CE;&#x53D1;&#x751F;&#x4E30;&#x5BCC; (LEA) &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A;&#x8131;&#x6C34;&#xFF0C;&#x672C;&#x8D28;&#x4E0A;&#x662F;&#x65E0;&#x5E8F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8868;&#x793A;&#x7684;&#x690D;&#x7269;&#x9047;&#x5230;&#x5E72;&#x65F1;&#x6216;&#x4F4E;&#x6E29;&#x7B49;&#x6781;&#x7AEF;&#x73AF;&#x5883;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7279;&#x70B9;&#x7684;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x3001; &#x5BCC;&#x542B;&#x8D56;&#x6C28;&#x9178;&#x7684; K &#x6BB5;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x6709;&#x65F6;&#x7531;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6216;&#x591A;&#x4E2A;&#x5BCC;&#x542B;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178;&#x7684; S-&#x6BB5;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x3002;&#x8131;&#x6C34;&#x53EF;&#x80FD;&#x671F;&#x95F4;&#x73AF;&#x5883;&#x5E94;&#x529B;&#x7A33;&#x5B9A;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x819C;&#x7ED3;&#x6784;&#x53EF;&#x4EE5;&#x87AF;&#x5408;&#x548C;&#x6E05;&#x9664;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8C03;&#x67E5;&#x5982;&#x4F55;&#x6784;&#x8C61;&#x7684;&#x5C0F; salsuginea&#xFF0C;&#x4ECE;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8131;&#x6C34;&#x8868;&#x793A;&#x4E3A; TsDHN-1 (&#x9178;&#x6027;) &#x548C; TsDHN-2 &#xFF08;&#x57FA;&#x672C;&#xFF09;&#xFF0C;&#x53D7; ph &#x503C;&#x3001; &#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x548C;&#x819C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#x3002;TsDHN-1 &#x548C; TsDHN-2 &#x8868;&#x793A;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4F53;&#x5916;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x916A;&#x86CB;&#x767D;&#x6FC0;&#x9176; II (CKII) &#x76F8;&#x6251;&#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x5706;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x548C;&#x51CF;&#x6BD2;&#x603B;&#x53CD;&#x5C04;&#x5085;&#x91CC;&#x53F6;&#x53D8;&#x6362;&#x7EA2;&#x5916;&#x5149;&#x8C31;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A;&#x7684;&#x591A;&#x805A;&#x812F;&#x6C28;&#x9178;&#x4E8C;&#x5F62;&#x6001;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5728;&#x8131;&#x6C34;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x5176;&#x73AF;&#x5883;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5982;&#x7ECF;&#x4E8C;&#x4EF7;&#x91D1;&#x5C5E;&#x79BB;&#x5B50;&#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7531;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8131;&#x6C34;&#x5927;&#x4F1A;&#x662F;&#x7531;&#x6C89;&#x964D;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8BC4;&#x4F30;&#x5E76;&#x901A;&#x8FC7;&#x900F;&#x5C04;&#x7535;&#x548C;&#x539F;&#x5B50;&#x529B;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x67E5;&#x770B;&#x3002;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5141;&#x8BB8;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x8131;&#x6C34;&#xFF0C;&#x805A;&#x5408;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x4E1D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x8131;&#x6C34;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5E94;&#x529B;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x548C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7A33;&#x5B9A;&#x5C40;&#x9762;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;

&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x5C0F; salsuginea &#x8131;&#x6C34; TsDHN 1 &#x548C; TsDHN-2 &#x65B9;&#x4FBF;&#x9633;&#x79BB;&#x5B50;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x53D8;&#x5316;&#x548C;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x5927;&#x4F1A;&#x3002;

Group 2 late embryogenesis abundant (LEA) proteins, also known as dehydrins, are intrinsically disordered proteins that are expressed in plants experiencing extreme environmental conditions such as drought or low temperatures. These proteins are characterized by the presence of at least one conserved, lysine-rich K-segment and sometimes by one or more serine-rich S-segments that are phosphorylated. Dehydrins may stabilize proteins and membrane structures during environmental stress and can sequester and scavenge metal ions. Here, we investigate how the conformations of two dehydrins from Thellungiella salsuginea, denoted as TsDHN-1 (acidic) and TsDHN-2 (basic), are affected by pH, interactions with cations and membranes, and phosphorylation. Both TsDHN-1 and TsDHN-2 were expressed as SUMO fusion proteins for in vitro phosphorylation by casein kinase II (CKII), and structural analysis by circular dichroism and attenuated total reflection-Fourier transform infrared spectroscopy. We show that the polyproline II conformation can be induced in the dehydrins by their environmental conditions, including changes in the concentration of divalent cations such as Ca(2+). The assembly of actin by these dehydrins was assessed by sedimentation assays and viewed by transmission electron and atomic force microscopy. Phosphorylation allowed both dehydrins to polymerize actin filaments. These results support the hypothesis that dehydrins stabilize the cytoskeleton under stress conditions and further that phosphorylation may be an important feature of this stabilization.

Phosphorylation of Thellungiella salsuginea dehydrins TsDHN-1 and TsDHN-2 facilitates cation-induced conformational changes and actin assembly.

Groupe 2 fin d&#x26;#39;embryogen&#xE8;se abondantes (LEA) des prot&#xE9;ines, &#xE9;galement connus sous le nom d&#xE9;hydrines, sont des prot&#xE9;ines intrins&#xE8;quement d&#xE9;sordonn&#xE9;es qui sont exprim&#xE9;es dans les plantes connaissent des conditions environnementales extr&#xEA;mes comme la s&#xE9;cheresse ou de basses temp&#xE9;ratures. Ces prot&#xE9;ines sont caract&#xE9;ris&#xE9;es par la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;au moins un conserv&#xE9;e, riche en lysine K-segment et parfois par un ou plusieurs s&#xE9;rine-S-riches segments qui sont phosphoryl&#xE9;s. D&#xE9;hydrines peut stabiliser des prot&#xE9;ines et des structures membranaires au cours du stress de l&#x26;#39;environnement et peuvent s&#xE9;questrer et de r&#xE9;cup&#xE9;ration des ions m&#xE9;talliques. Ici, nous examinons comment les conformations de deux d&#xE9;hydrines de Thellungiella salsuginea, not&#xE9;e TsDHN-1 (acide) et TsDHN-2 (de base), sont affect&#xE9;s par le pH, les interactions avec les cations et les membranes, et la phosphorylation. Les deux TsDHN-1 et TsDHN-2 ont &#xE9;t&#xE9; exprim&#xE9;s sous forme de prot&#xE9;ines de fusion SUMO pour la phosphorylation in vitro par la cas&#xE9;ine kinase II (CKII), et l&#x26;#39;analyse structurale par dichro&#xEF;sme circulaire et totale att&#xE9;nu&#xE9;e r&#xE9;flexion spectroscopie infrarouge &#xE0; transform&#xE9;e de Fourier. Nous montrons que la conformation polyproline II peut &#xEA;tre induite dans les d&#xE9;hydrines par leurs conditions environnementales, y compris des changements dans la concentration de cations divalents tels que Ca (2 +). L&#x26;#39;assemblage de l&#x26;#39;actine par ces d&#xE9;hydrines a &#xE9;t&#xE9; &#xE9;valu&#xE9;e par des tests de s&#xE9;dimentation et consid&#xE9;r&#xE9; par &#xE9;lectronique &#xE0; transmission et microscopie &#xE0; force atomique. La phosphorylation a permis aux deux d&#xE9;hydrines &#xE0; polym&#xE9;riser filaments d&#x26;#39;actine. Ces r&#xE9;sultats soutiennent l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se que d&#xE9;hydrines stabiliser le cytosquelette dans des conditions de stress et en outre que la phosphorylation peut &#xEA;tre une caract&#xE9;ristique importante de cette stabilisation.

La phosphorylation de Thellungiella Salsuginea d&#xE9;hydrines TsDHN-1 et TsDHN-2 Facilite cations changements conformationnels induits par l&#x26;#39;Assembl&#xE9;e et l&#x26;#39;actine

Gruppe 2 sp&auml;ten Embryogenese reichlich (LEA) Proteine, auch bekannt als Dehydrins, erleben intrinsisch ungeordneten Proteine, die in Pflanzen ausgedr&uuml;ckt werden extreme Umweltbedingungen wie Trockenheit oder niedrigen Temperaturen. Diese Proteine sind gekennzeichnet durch die Anwesenheit von mindestens einem konservierten, Lysin-reiche K-Segment und manchmal durch mindestens eine Serin-Reich S-Segmente, die phosphoryliert werden. Dehydrins k&ouml;nnen Proteine und Membrane Strukturen zu stabilisieren, w&auml;hrend Umweltstress absondern und Aufr&auml;umen von Metallionen. Hier, wir untersuchen, wie die Konformationen von zwei Dehydrins aus Thellungiella Salsuginea, gekennzeichnet als TsDHN-1 (sauer) und TsDHN-2 (Basic), pH-Wert, Interaktionen mit kationen und Membranen und Phosphorylierung betroffen sind. TsDHN-1 und TsDHN-2 waren als SUMO-Fusionsproteine f&uuml;r in-vitro-Phosphorylierung von Kasein-Kinase II (CKII) und Strukturanalyse von Circulardichroismus und abgeschw&auml;chte totale Reflexion-Fourier-Transform-Infrarot-Spektroskopie ausgedr&uuml;ckt. Wir zeigen, dass die Polyproline II Konformation durch ihre Umweltbedingungen, einschlie&szlig;lich &Auml;nderungen in der Konzentration der bivalente kationen wie Ca(2+) in der Dehydrins induziert werden kann. Die Montage des Aktin durch diese Dehydrins wurde von Ablagerung Proben bewertet und durch &Uuml;bertragung Elektronen und Rasterkraftmikroskopie angezeigt. Phosphorylierung erlaubt beide Dehydrins an Aktin-Filamente zu polymerisieren. Diese Ergebnisse unterst&uuml;tzen die Hypothese, dass Dehydrins das Zytoskelett unter Stressbedingungen stabilisieren und weiter die Phosphorylierung kann ein wichtiges Merkmal dieser Stabilisierung.

Phosphorylierung von Thellungiella Salsuginea Dehydrins TsDHN-1 und TsDHN-2 erleichtert Konformationsver&auml;nderungen kation induziert und Aktin-Montage.

Gruppo 2 ritardo embriogenesi abbondanti (LEA) proteine, conosciuto anche come dehydrins, sono intrinsecamente disordinate proteine che vengono espresse nelle piante vivendo condizioni ambientali estreme quali siccit&agrave; o basse temperature. Queste proteine sono caratterizzate dalla presenza di almeno un conservato, ricco di lisina K-segmento e a volte da uno o pi&ugrave; ricchi di serina S-segmenti che sono fosforilati. Dehydrins pu&ograve; stabilizzare le proteine e le strutture di membrana durante lo stress ambientale e pu&ograve; sequestrare e scavenging ioni metallici. Qui, indaghiamo come le conformazioni dei due dehydrins da Thellungiella salsuginea, indicata come TsDHN-1 (acido) e TsDHN-2 (basic), sono influenzati dal pH, interazioni con i cationi e membrane e fosforilazione. Sia TsDHN-1 e TsDHN-2 sono stati espressi come proteine di fusione di SUMO per fosforilazione in vitro di chinasi caseina II (CKII) e l&#39;analisi strutturale di Dicroismo circolare e spettroscopia infrarossa attenuato riflessione totale-Fourier transform. Mostriamo che la conformazione di polyproline II pu&ograve; essere indotta nei dehydrins dalle loro condizioni ambientali, comprese le modifiche della concentrazione dei cationi divalenti come Ca(2+). L&#39;Assemblea dell&#39;actina da questi dehydrins fu valutata mediante test di sedimentazione e visto da transmission electron e microscopia a forza atomica. Fosforilazione consentito sia dehydrins polimerizzare i filamenti di actina. Questi risultati supportano l&#39;ipotesi che dehydrins stabilizzare il citoscheletro in condizioni di stress e ulteriormente tale fosforilazione pu&ograve; essere una caratteristica importante di questa stabilizzazione.

Fosforilazione della Thellungiella salsuginea dehydrins TsDHN-1 e TsDHN-2 facilita il catione indotta da cambiamenti conformazionali e assemblaggio dell&#39;actina.

&#x307E;&#x305F;dehydrins&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;2&#x5F8C;&#x671F;&#x80DA;&#x767A;&#x751F;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#xFF08;LEA&#xFF09;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x5E72;&#x3070;&#x3064;&#x3084;&#x4F4E;&#x6E29;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x6975;&#x7AEF;&#x306A;&#x74B0;&#x5883;&#x6761;&#x4EF6;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x690D;&#x7269;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x672C;&#x8CEA;&#x7684;&#x306B;&#x7121;&#x79E9;&#x5E8F;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;1&#x3064;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3;&#x304C;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;S-&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x5225;&#x306E;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3001;&#x30EA;&#x30B8;&#x30F3;&#x304C;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;K-&#x30BB;&#x30B0;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3001;&#x6642;&#x306B;&#x306F;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x3002; Dehydrins&#x306F;&#x3001;&#x74B0;&#x5883;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6642;&#x306B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3084;&#x819C;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x91D1;&#x5C5E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3092;&#x9694;&#x96E2;&#x3057;&#x3001;&#x6E05;&#x6383;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;TsDHN-1&#xFF08;&#x9178;&#x6027;&#xFF09;&#x3068;TsDHN-2&#xFF08;&#x57FA;&#x672C;&#xFF09;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x793A;&#x3055;Thellungiella salsuginea&#x3001;&#x304B;&#x3089;2 dehydrins&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;pH&#x3001;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x3068;&#x819C;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x304B;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;TsDHN-1&#x3068;TsDHN-2&#x306F;&#x3001;&#x5186;&#x504F;&#x5149;&#x4E8C;&#x8272;&#x6027;&#x3068;&#x6E1B;&#x8870;&#x5168;&#x53CD;&#x5C04; - &#x30D5;&#x30FC;&#x30EA;&#x30A8;&#x5909;&#x63DB;&#x8D64;&#x5916;&#x5206;&#x5149;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30AB;&#x30BC;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;II&#xFF08;CKII&#xFF09;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x308A;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;SUMO&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30DD;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30EA;&#x30F3;II&#x306E;&#x7ACB;&#x4F53;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3001;&#x4F8B;&#x3048;&#x3070;Ca&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x4E8C;&#x4FA1;&#x306E;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x305F;&#x74B0;&#x5883;&#x6761;&#x4EF6;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;dehydrins&#x306B;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;dehydrins&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306F;&#x3001;&#x6C88;&#x964D;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3057;&#x3001;&#x900F;&#x904E;&#x578B;&#x96FB;&#x5B50;&#x3068;&#x539F;&#x5B50;&#x9593;&#x529B;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x4E21;&#x65B9;dehydrins&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x91CD;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;dehydrins&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EC;&#x30B9;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x3092;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3055;&#x305B;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x305D;&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3053;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x5316;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x652F;&#x6301;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

Thellungiella Salsuginea Dehydrins TsDHN-1&#x3068;TsDHN-2&#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x967D;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x8A98;&#x767A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D44;&#x7ACB;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;

2 &#xD6C4;&#xBC18; embryogenesis &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; (&#xB808; &#xC544;) &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4; dehydrins &#xADF8;&#xB8F9;, &#xC2DD;&#xBB3C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD45C;&#xD604; &#xB418;&#xB294; &#xBCF8;&#xC9C8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBB34;&#xC9C8;&#xC11C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAC00;&#xBB44; &#xB610;&#xB294; &#xB0AE;&#xC740; &#xC628;&#xB3C4; &#xB4F1; &#xADF9;&#xD55C; &#xD658;&#xACBD; &#xC870;&#xAC74; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xBCF4;&#xC874;, lysine &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; K &#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8;&#xC758; &#xC874;&#xC7AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB54C;&#xB85C;&#xB294; &#xD558;&#xB098; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; S-&#xC138;&#xADF8;&#xBA3C;&#xD2B8; phosphorylated &#xB418;&#xB294; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xC774;&#xB2E4;. Dehydrins &#xD658;&#xACBD; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xB3D9;&#xC548; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xACFC; &#xB9C9; &#xAD6C;&#xC870; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBC0F; &#xACA9;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xAE08;&#xC18D; &#xC774;&#xC628;&#xC744; &#xCCAD;&#xC18C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC870;&#xC0AC; 2 dehydrins Thellungiella salsuginea&#xC5D0;&#xC11C; conformations TsDHN-1 (&#xC0B0; &#xC131;)&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; TsDHN-2 (&#xAE30;&#xBCF8;), &#xC0B0;&#xB3C4;, &#xC591;&#xC774;&#xC628; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xB9C9;, &#xBC0F; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. TsDHN-1&#xACFC; TsDHN-2 &#xC6D0;&#xD615; &#x9EC4; &#xBC0F; &#xAC10;&#xC1E0; &#xCD1D; &#xBC18;&#xC0AC; &#xD478;&#xB9AC;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD658; &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xBD84;&#xAD11;&#xD559; &#xC2A4;&#xBAA8; &#xD4E8;&#xC804; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCE74; &#xC138; &#xC778; &#xD0A4; &#xB2C8; &#xC544; &#xC81C; 2 &#xCC28; (CKII)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCCB4; &#xC678; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC870; &#xD574;&#xC11D;&#xC73C;&#xB85C; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; Ca(2+) &#xAC19;&#xC740; divalent &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD658;&#xACBD; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; polyproline II &#xB098; &#xB780;&#xC740; dehydrins&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9D0;&#xB77C;&#xAC00;&#xC774; dehydrins&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xAC00; &#xCE68; &#xAC15; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC804;&#xC1A1; &#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xC6D0;&#xC790; &#xD798; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC804;&#xB9DD;. &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xB450; dehydrins polymerize &#xB9D0;&#xB77C; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xB97C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xAC00;&#xC124; dehydrins &#xC548;&#xC815; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; cytoskeleton &#xB354; &#xADF8; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xAC00;&#xC774; &#xC548;&#xC815;&#xD654;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Thellungiella salsuginea dehydrins TsDHN 1, TsDHN 2&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xC591;&#xC774;&#xC628;&#xC744; &#xC774;&#xC6A9;&#xD55C; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;&#xC640; &#xB9D0;&#xB77C; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Grupo 2 finales de la embriog&#xE9;nesis abundantes (LEA), las prote&#xED;nas, tambi&#xE9;n conocida como dehidrinas, son las prote&#xED;nas intr&#xED;nsecamente desordenadas que se expresan en las plantas que experimentan condiciones ambientales extremas como la sequ&#xED;a o las bajas temperaturas. Estas prote&#xED;nas se caracterizan por la presencia de al menos un conservada, lisina rico en K-segmento y, a veces por uno o m&#xE1;s ricos serina-S-segmentos que est&#xE1;n fosforilados. Dehidrinas puede estabilizar las prote&#xED;nas y las estructuras de la membrana durante el estr&#xE9;s del medio ambiente y capaz de secuestrar y eliminan los iones met&#xE1;licos. En este sentido, investigar la forma en la conformaci&#xF3;n de dos dehidrinas de Thellungiella salsuginea, denominado TsDHN-1 (&#xE1;cido) y TsDHN-2 (b&#xE1;sico), se ven afectados por el pH, las interacciones con los cationes y las membranas, y la fosforilaci&#xF3;n. Tanto TsDHN-1 y 2-TsDHN se expresan como prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n de SUMO in vitro la fosforilaci&#xF3;n por la case&#xED;na quinasa II (CKII), y el an&#xE1;lisis estructural por dicro&#xED;smo circular y la reflexi&#xF3;n total atenuada-espectroscopia infrarroja transformada de Fourier. Se demuestra que la conformaci&#xF3;n poliprolina II puede ser inducida en los dehidrinas por sus condiciones ambientales, incluyendo cambios en la concentraci&#xF3;n de cationes divalentes tales como Ca (2 +). El montaje de actina por estos dehidrinas fue evaluada por ensayos de sedimentaci&#xF3;n y vistos por electr&#xF3;nica de transmisi&#xF3;n y microscop&#xED;a de fuerza at&#xF3;mica. La fosforilaci&#xF3;n permitido a ambas dehidrinas para polimerizar los filamentos de actina. Estos resultados apoyan la hip&#xF3;tesis de que dehidrinas estabilizar el citoesqueleto bajo condiciones de estr&#xE9;s y, adem&#xE1;s, que la fosforilaci&#xF3;n puede ser una caracter&#xED;stica importante de esta estabilizaci&#xF3;n.

La fosforilaci&#xF3;n de Thellungiella Salsuginea dehidrinas TsDHN-1 y TsDHN 2-Facilita inducidos por cambios en la conformaci&#xF3;n de cationes-actina y la Asamblea

Janine A.M. Voyer-Grant

Department of Molecular and Cellular Biology

University of Guelph

Monitoring Cleaved Caspase-3 Activity and Apoptosis of Immortalized Oligodendroglial Cells using Live-cell Imaging and Cleaveable Fluorogenic-dye Substrates Following Potassium-induced Membrane Depolarization

Janine A.M. Voyer-Grant

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Molecular and Cellular Biology

University of Guelph

Monitoring Cleaved Caspase-3 Activity and Apoptosis of Immortalized Oligodendroglial Cells using Live-cell Imaging and Cleaveable Fluorogenic-dye Substrates Following Potassium-induced Membrane Depolarization

Department of Molecular and Cellular Biology