Wholemount Immunohistochemistry for Revealing Complex Brain Topography

The repeated and well-understood cellular architecture of the cerebellum make it an ideal model system for exploring brain topography. Underlying its ...

Albert Einstein College of Medicine, Yeshiva University 

&#x4F7F;&#x7528;&#x4E2D;&#x5927;&#x9F20;&#x5C40;&#x90E8;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;&#x8111;&#x7F3A;&#x8840;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x548C;&#x7EC6;&#x83CC;&#x6027; convertase 2 (PC2) &#x5927;&#x8111;&#x76AE;&#x8D28;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x5BA1;&#x67E5;&#x3002;&#x539F;&#x4F4D;&#x6742;&#x4EA4;&#x5206;&#x6790;&#x5728;&#x65E9;&#x671F;&#x518D;&#x704C;&#x6CE8;&#x5C0F;&#x65F6;&#xFF0C;&#x4F1A;&#x4E0A; PC2 &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x5E73;&#x4E5F;&#x8F83;&#x9AD8;&#xFF0C;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5316;&#x5B66;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x5370;&#x8FF9;&#x6240;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E3A; PC2 &#x900F;&#x9732;&#x77AC;&#x6001;&#x4E0A;&#x8C03;&#x7684; mRNA &#x6C34;&#x5E73;&#x3002;&#x5F53; PC2 &#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x8FDB;&#x884C;&#x5206;&#x6790;&#x4F7F;&#x7528;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x57FA;&#x8D28;&#x65F6;&#xFF0C;&#x660E;&#x663E;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x5728;&#x65E9;&#x671F;&#x518D;&#x704C;&#x6CE8;&#x5C0F;&#x65F6; PC2 &#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6C34;&#x5E73;&#xFF0C;&#x4ECD;&#x7136;&#x5F88;&#x9AD8;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x518D;&#x704C;&#x6CE8;&#x65F6;&#x95F4;&#x4E5F;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684; dynorphin-A(1-8) (DYN-A(1-8))&#xFF0C;PC2 &#x886C;&#x5E95;&#xFF0C;&#x7531;&#x653E;&#x5C04;&#x514D;&#x75AB;&#x5206;&#x6790;&#x8BA4;&#x5B9A;&#x3002;PC2 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6807;&#x8BB0;&#x5728;&#x795E;&#x7ECF;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x5BA1;&#x67E5;&#x8868;&#x660E;&#x5728;&#x7F3A;&#x8840;&#x6027;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;PC2 &#x86CB;&#x767D;&#x6C34;&#x89E3;&#x5904;&#x7406;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x6BD2;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x5408;&#x6210; DYN-A(1-8) &#x4FA7;&#x8111;&#x5BA4;&#x6CE8;&#x5C04;&#x5927;&#x5927;&#x51CF;&#x5C11;&#x7F3A;&#x8840;&#x6027;&#x8111;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3002;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x90A3;&#x4E9B;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x79EF;&#x6781;&#x7684; PC2&#xFF0C;&#x52A0;&#x91CD;&#x7684;&#x8111;&#x635F;&#x4F24;&#x6709;&#x4EBA;&#x53E6;&#x6709;&#x975E;&#x81F4;&#x547D;&#x6027;&#x5C40;&#x7076;&#x6027;&#x7F3A;&#x8840;&#x540E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7684;&#x7ED3;&#x8BBA;&#xFF0C;&#x8111;&#x90E8;&#x7F3A;&#x8840;&#x51CF;&#x8F7B; PC2 &#x548C; PC2 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x80BD;&#x52A0;&#x5DE5;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x8870;&#x51CF;&#x53EF;&#x80FD;&#x5728;&#x7F3A;&#x8840;&#x6027;&#x8111;&#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x75C5;&#x7406;&#x53D1;&#x6325;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

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Using a focal cerebral ischemia model in rats, brain ischemia-induced changes in expression levels of mRNA and protein, and activities of proprotein convertase 2 (PC2) in the cortex were examined. In situ hybridization analyses revealed a transient upregulation of the mRNA level for PC2 at an early reperfusion hour, at which the level of PC2 protein was also high as determined by immunocytochemistry and western blotting. When enzymatic activities of PC2 were analyzed using a synthetic substrate, a significant decrease was observed at early reperfusion hours at which levels of PC2 protein were still high. Also decreased at these reperfusion hours were tissue levels of dynorphin-A(1-8) (DYN-A(1-8)), a PC2 substrate, as determined by radioimmunoassay. Further examination of PC2 protein biosynthesis by metabolic labeling in cultured neuronal cells showed that in ischemic cells, the proteolytic processing of PC2 was greatly attenuated. Finally, in mice, an intracerebroventricular administration of synthetic DYN-A(1-8) significantly reduced the extent of ischemic brain injury. In mice those lack an active PC2, exacerbated brain injury was observed after an otherwise non-lethal focal ischemia. We conclude that brain ischemia attenuates PC2 and PC2-mediated neuropeptide processing. This attenuation may play a role in the pathology of ischemic brain injury.

Defective neuropeptide processing and ischemic brain injury: a study on proprotein convertase 2 and its substrate neuropeptide in ischemic brains.

&Agrave; l&#39;aide d&#39;un mod&egrave;le d&#39;isch&eacute;mie c&eacute;r&eacute;brale focale chez les rats, ont &eacute;tudi&eacute; les changements d&#39;induite par l&#39;isch&eacute;mie c&eacute;r&eacute;brale dans les niveaux d&#39;expression de l&#39;ARNm et de prot&eacute;ines et les activit&eacute;s de la proprot&eacute;ine convertase 2 (PC2) dans le cortex. Analyses d&#39;hybridation in situ a r&eacute;v&eacute;l&eacute; une upregulation transitoire de l&#39;ARNm pour PC2 &agrave; une heure de reperfusion pr&eacute;coce, au cours de laquelle le niveau de prot&eacute;ines PC2 &eacute;tait &eacute;galement &eacute;lev&eacute;, tel que d&eacute;termin&eacute; par immunocytochimie et &eacute;ponger occidental. Lorsque les activit&eacute;s enzymatiques de PC2 ont &eacute;t&eacute; analys&eacute;es &agrave; l&#39;aide d&#39;un substrat synth&eacute;tique, une diminution significative a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e &agrave; l&#39;aube de la reperfusion &agrave; quels niveaux de prot&eacute;ine PC2 &eacute;taient encore &eacute;lev&eacute;s. Aussi diminu&eacute; &agrave; ces heures de reperfusion &eacute;taient des taux tissulaires de dynorphin-A(1-8) (DYN-A(1-8)), un substrat de PC2, tel que d&eacute;termin&eacute; par dosage radio-immunologique. Un examen plus pouss&eacute; de la biosynth&egrave;se des prot&eacute;ines PC2 par marquage m&eacute;tabolique en cellules neuronales ont montr&eacute; que dans les cellules isch&eacute;miques, le traitement prot&eacute;olytique de PC2 a &eacute;t&eacute; consid&eacute;rablement att&eacute;nu&eacute;. Enfin, chez les souris, l&#39;administration intrac&eacute;r&eacute;broventriculaire de DYN-A(1-8) synth&eacute;tique r&eacute;duit consid&eacute;rablement l&#39;&eacute;tendue de la l&eacute;sion c&eacute;r&eacute;brale isch&eacute;mique. Chez les souris ceux qui n&#39;ont pas un actif PC2, l&eacute;sion c&eacute;r&eacute;brale exacerb&eacute; a &eacute;t&eacute; observ&eacute;e apr&egrave;s une isch&eacute;mie focale autrement non l&eacute;tal. Nous concluons cette isch&eacute;mie c&eacute;r&eacute;brale att&eacute;nue PC2 et le neuropeptide PC2-mediated transformation. Cette att&eacute;nuation peut jouer un r&ocirc;le dans la pathologie de la l&eacute;sion c&eacute;r&eacute;brale isch&eacute;mique.

Traitement de neuropeptide d&eacute;fectueux et l&eacute;sion c&eacute;r&eacute;brale isch&eacute;mique : une &eacute;tude sur la proprot&eacute;ine convertase 2 et le neuropeptide de son substrat dans le cerveau isch&eacute;mique.

Mit einem fokalen zerebralen Isch&auml;mie-Modell bei Ratten, wurden Gehirn Isch&auml;mie-induzierte Ver&auml;nderungen in Stufen von mRNA und Protein und Aktivit&auml;ten der proprotein Konvertase 2 (PC2) in der Hirnrinde untersucht. In situ Hybridisierung Analysen ergab eine vor&uuml;bergehende Fehlregulation der mRNA-Ebene f&uuml;r PC2 an einem fr&uuml;hen Reperfusion-Stunde, an der die PC2 Protein auch hoch durch Immunzytochemie und Westliches Beflecken bestimmt war. Beim enzymatische Aktivit&auml;ten des PC2 mit einem synthetischen Substrat analysiert wurden, wurde eine signifikante Abnahme bei fr&uuml;hen Reperfusion Stunden beobachtet, auf welchen Ebenen der PC2 Protein noch hoch waren. Auch bei diesen Reperfusion-Stunden verringert wurden Gewebe Ebenen der dynorphin-A(1-8) (DYN-A(1-8)), einem PC2-Substrat, wie durch Radioimmunoassay bestimmt. Weitere Pr&uuml;fung der PC2 Proteinbiosynthese durch metabolische Bezeichnung in kultivierten neuronalen Zellen zeigte, dass in isch&auml;mischen Zellen, die proteolytische Verarbeitung von PC2 stark abgeschw&auml;cht wurde. Schlie&szlig;lich bei M&auml;usen reduziert eine Intracerebroventricular-Verwaltung von synthetischen DYN-A(1-8) deutlich den Umfang der isch&auml;mische Gehirnverletzung. Bei M&auml;usen wurde diejenigen fehlt eine aktive PC2, ungehemmten Gehirnverletzung nach eine nicht t&ouml;dliche fokale Isch&auml;mie beobachtet. Wir schlie&szlig;en daraus, dass Gehirn Isch&auml;mie d&auml;mpft PC2 und PC2-bedingte Neuropeptid Verarbeitung. Diese D&auml;mpfung kann eine Rolle in der Pathologie des isch&auml;mischen Hirnverletzung.

Defekte Neuropeptid-Verarbeitung und isch&auml;mische Gehirnverletzung: eine Studie &uuml;ber proprotein-Konvertase 2 und seine Substrat Neuropeptid in isch&auml;mischen Gehirnen.

Utilizzando un modello di ischemia cerebrale focale nel ratto, sono state esaminate le modifiche indotta da ischemia cerebrale nei livelli di espressione di mRNA e proteine e attivit&agrave; di convertasi proprotein 2 (PC2) nella corteccia. Analisi di ibridazione in situ ha rivelato una upregulation transitoria del livello di mRNA per PC2 a un&#39;ora di riperfusione precoce, in cui il livello di proteina PC2 era anche alto come determinato da immunocitochimica e western blotting. Quando l&#39;attivit&agrave; enzimatica di PC2 sono state analizzate utilizzando un substrato sintetico, una diminuzione significativa &egrave; stata osservata durante ore di riperfusione precoce a quali livelli di proteina PC2 erano ancora alti. Inoltre &egrave; diminuito in queste ore di riperfusione erano livelli di tessuto di dynorphin-A(1-8) (DYN-A(1-8)), un substrato di PC2, come determinato dal dosaggio radioimmunologico. Ulteriore esame della biosintesi della proteina PC2 etichettando metaboliche in cellule neuronali in coltura hanno dimostrato che nelle cellule ischemiche, trattamento proteolitico dei PC2 era notevolmente attenuato. Infine, nei topi, un&#39;amministrazione di intracerebroventricular di DYN-A(1-8) sintetico notevolmente ridotto l&#39;entit&agrave; del danno ischemico cerebrale. Nei topi lesioni cerebrali esacerbato quelli mancano un PC2 attivo, &egrave; stata osservata dopo un&#39;ischemia focale altrimenti non letale. Concludiamo che ischemia cerebrale attenua PC2 e PC2-mediata neuropeptide elaborazione. Questa attenuazione pu&ograve; giocare un ruolo nella patologia delle lesioni ischemiche cerebrali.

Neuropeptide difettosa elaborazione e lesione ischemica cerebrale: uno studio su proprotein convertasi 2 e relativo substrato neuropeptide nel cervello ischemico.

&#x5C40;&#x6240;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x30E9;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3001;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x6027;&#x5909;&#x5316; mRNA &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3068;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8EE2;&#x63DB;&#x9175;&#x7D20; 2 &#xFF08;PC2) &#x3067;&#x306F;&#x76AE;&#x8CEA;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x305F;&#x3002;In situ &#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C0;&#x30A4;&#x30BC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x89E3;&#x6790;&#x904E;&#x6E21;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; mRNA &#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E; PC2 &#x306E;&#x65E9;&#x671F;&#x518D;&#x704C;&#x6D41; 1 &#x6642;&#x9593; PC2 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3082;&#x9AD8;&#x3044;&#x514D;&#x75AB;&#x67D3;&#x8272;&#x3068;&#x30A6;&#x30A8;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30C8;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3002;&#x5408;&#x6210;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F; PC2 &#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3001;&#x5927;&#x5E45;&#x306A;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3067;&#x65E9;&#x671F;&#x518D;&#x704C;&#x6D41;&#x6642;&#x9593;&#x3069;&#x306E; PC2 &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x4F9D;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x9AD8;&#x3044;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x518D;&#x704C;&#x6D41;&#x6642;&#x9593;&#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x7D44;&#x7E54;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306E; dynorphin-A(1-8) &#xFF08;DYN-A(1-8))&#x3001;PC2 &#x57FA;&#x6750;&#x30E9;&#x30B8;&#x30AA;&#x30A4;&#x30E0;&#x30CE;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B; PC2 &#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x57F9;&#x990A;&#x795E;&#x7D4C;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x865A;&#x8840;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x306F;&#x3001;PC2 &#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x5206;&#x89E3;&#x51E6;&#x7406;&#x3092;&#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x6E1B;&#x8870;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x8A8D;&#x3081;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5408;&#x6210; DYN-A(1-8) &#x8133;&#x5BA4;&#x5185;&#x6295;&#x4E0E;&#x306F;&#x865A;&#x8840;&#x6027;&#x8133;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x3092;&#x5927;&#x5E45;&#x306B;&#x524A;&#x6E1B;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6; PC2 &#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x60AA;&#x5316;&#x8133;&#x640D;&#x50B7;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x306A;&#x5C40;&#x6240;&#x865A;&#x8840;&#x5F8C;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x8133;&#x865A;&#x8840;&#x3092;&#x6E1B;&#x8870;&#x3055;&#x305B;&#x308B; PC2 &#x304A;&#x3088;&#x3073; PC2 &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x7DE0;&#x7D50;&#x51E6;&#x7406;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6E1B;&#x8870;&#x306F;&#x3001;&#x865A;&#x8840;&#x6027;&#x8133;&#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x75C5;&#x7406;&#x5B66;&#x3067;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x6B20;&#x9665;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x51E6;&#x7406;&#x3068;&#x865A;&#x8840;&#x6027;&#x8133;&#x640D;&#x50B7;: &#x4ECA;&#x9031;&#x306E;&#x8EE2;&#x63DB;&#x9175;&#x7D20; 2 &#x30D7;&#x30ED;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x795E;&#x7D4C;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x865A;&#x8840;&#x6027;&#x8133;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#xC950;&#xC5D0; &#xCD08;&#xC810; &#xB1CC; &#xD5C8; &#xD608; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xBA74; &#xB1CC; &#xD5C8; &#xD608; &#xC720;&#xBC1C; &#xBCC0;&#xD654; &#xC2DD; &#xC218;&#xC900;&#xC758; Mrna&#xC640; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; proprotein convertase 2 (PC2) &#xD53C; &#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC81C;&#xC790;&#xB9AC; &#xAD50; &#xC7A1; &#xBD84;&#xC11D; &#xC218;&#xC900;&#xACFC; PC2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC218;&#xC900; &#xB192;&#xC740; immunocytochemistry&#xACFC; &#xC11C;&#xC591; blotting&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACB0;&#xC815; &#xB418;&#xB294; &#xCD08;&#xAE30; reperfusion &#xC2DC;&#xAC04;, p c 2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; mRNA &#xC218;&#xC900;&#xC758; &#xC77C;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; upregulation&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. Pc2&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9; &#xD569;&#xC131; &#xAE30;&#xC9C8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; &#xB54C; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xAC10;&#xC18C; &#xCD08;&#xAE30; reperfusion &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC5EC;&#xC804;&#xD788; &#xB192;&#xC740; &#xAC83;&#xC73C;&#xB85C; &#xC5B4;&#xB290; &#xC218;&#xC900;&#xC758; PC2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; reperfusion &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; &#xC870;&#xC9C1; &#xC218;&#xC900;&#xC758; dynorphin-A(1-8) (DYN-A(1-8)), radioimmunoassay &#xC815;&#xD55C; PC2 &#xAE30;&#xD310;. &#xBC30;&#xC591;&#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC; &#xB77C;&#xBCA8; PC2 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB294; &#xD5C8; &#xD608; &#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; p c 2&#xC758; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCC98;&#xB9AC; &#xAC10;&#xC1E0; &#xD06C;&#xAC8C;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC950;, &#xD569;&#xC131; DYN-A(1-8)&#xC758; intracerebroventricular &#xAD00;&#xB9AC;&#xB294; &#xD5C8; &#xD608; &#xC131; &#xB1CC; &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xC815;&#xB3C4; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC904;&#xC5B4;&#xB4ED;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; &#xADF8; &#xD65C;&#xC131; PC2 &#xBD80;&#xC871; &#xC778;&#xD574; &#xB1CC; &#xC190;&#xC0C1; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB807;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC73C;&#xBA74; &#xBE44; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xCD08;&#xC810; &#xAD6D; &#xC18C; &#xBE48; &#xD608; &#xD6C4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB1CC; &#xD5C8; &#xD608; &#xC57D;&#xD654; PC2 &#xBC0F; PC2 &#xC911;&#xC7AC; neuropeptide &#xACB0;&#xB860; &#xCC98;&#xB9AC;. &#xC774; &#xAC10;&#xC1E0; &#xD5C8; &#xD608; &#xC131; &#xB1CC; &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xBCD1; &#xB9AC;&#xC5D0; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xACB0;&#xD568;&#xC774; &#xC788;&#xB294; neuropeptide &#xCC98;&#xB9AC; &#xBC0F; &#xD5C8; &#xD608; &#xC131; &#xB1CC; &#xC190;&#xC0C1;: proprotein convertase 2&#xC640; &#xD5C8; &#xD608; &#xC131; &#xB1CC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xD310; neuropeptide &#xADF8;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;.

Utilizando un modelo de isquemia cerebral focal en ratas, se examinaron los cambios inducidos por isquemia cerebral en los niveles de expresi&oacute;n de mRNA y prote&iacute;na y actividades de la convertasa proprote&iacute;na 2 (PC2) en la corteza. An&aacute;lisis de hibridaci&oacute;n in situ revelan una upregulation transitoria del nivel del mRNA para PC2 a una hora de reperfusi&oacute;n temprana, en la que el nivel de prote&iacute;na PC2 tambi&eacute;n fue alto seg&uacute;n lo determinado por inmunocitoqu&iacute;mica y western blot. Cuando las actividades enzim&aacute;ticas de PC2 se analizaron usando un substrato sint&eacute;tico, una disminuci&oacute;n significativa observ&oacute; a primeras horas de la reperfusi&oacute;n en que los niveles de prote&iacute;na PC2 eran todav&iacute;a altos. Tambi&eacute;n disminuy&oacute; en estas horas de reperfusi&oacute;n fueron los niveles de tejido de dynorphin-A(1-8) (DYN-A(1-8)), un sustrato PC2, seg&uacute;n lo determinado por radioinmunoan&aacute;lisis. La examinaci&oacute;n adicional de bios&iacute;ntesis de la prote&iacute;na PC2 por etiquetado metab&oacute;licos en las c&eacute;lulas neuronales cultivadas demostr&oacute; que en c&eacute;lulas isqu&eacute;micas, el procesamiento proteol&iacute;tico de PC2 fue atenuado considerablemente. Finalmente, en ratones, una administraci&oacute;n intracerebroventricular de DYN-A(1-8) sint&eacute;tico redujo significativamente el grado de lesi&oacute;n isqu&eacute;mica cerebral. En ratones quienes carecen de un activo PC2, lesi&oacute;n cerebral exacerbado se observ&oacute; despu&eacute;s de una isquemia focal de lo contrario no letal. Concluimos que la isquemia cerebral aten&uacute;a PC2 y neurop&eacute;ptido PC2-mediada de procesamiento. Esta atenuaci&oacute;n puede desempe&ntilde;ar un papel en la patolog&iacute;a de la lesi&oacute;n isqu&eacute;mica cerebral.

Procesamiento defectuoso neurop&eacute;ptido y lesi&oacute;n isqu&eacute;mica cerebral: un estudio sobre la convertasa proprote&iacute;na 2 y su substrato neurop&eacute;ptido en cerebros isqu&eacute;micas.

Joshua J. White

Department of Neuroscience

Albert Einstein College of Medicine, Yeshiva University

Wholemount Immunohistochemistry for Revealing Complex Brain Topography

Joshua J. White

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Neuroscience

Albert Einstein College of Medicine, Yeshiva University

Wholemount Immunohistochemistry for Revealing Complex Brain Topography

Department of Neuroscience