Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Dynamic live cell imaging allows direct visualization of real-time interactions between cells of the immune system1, 2; however, the lack of spatial and ...

Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

PCH &#x5BB6;&#x65CF;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x4ECE;&#x6839;&#x672C;&#x4E0A;&#x91CD;&#x8981;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x5C06;&#x819C;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684;&#x66F2;&#x7387;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x8054;&#x7CFB;&#x8D77;&#x6765;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC4; &#xFF08;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A; srGAPs &#x548C; WRPs&#xFF09; &#x7684; MEGAPs &#x5305;&#x542B; RhoGAP F &#x680F;&#x57DF;&#x4E4B;&#x5916;&#x7684;&#x57DF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6253;&#x4E71;&#x4E86; MEGAP1 &#x548C; MEGAP2 &#x7684;&#x76D8;&#x57FA;&#x7F51;&#x67C4;&#xFF0C;&#x5355;&#x72EC;&#x548C;&#x7EC4;&#x5408;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728; MEGAP1(-) &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; MEGAP2(-) &#x86DE;&#x8753;&#x5FAE;&#x5999;&#x8D8B;&#x5149;&#x7F3A;&#x9677;&#x53D1;&#x73B0;&#x5F3A;&#x9AA8;&#x67B6;&#x8868;&#x578B;&#x3002;MEGAP1(-)/2(-) &#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x604D;&#x5982;&#x9694;&#x4E16;&#x7684;&#x4F8B;&#x8BC1;&#x548C;&#x86DE;&#x8753;&#x52A8;&#x529B;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x53D7;&#x5230;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x6700;&#x5F15;&#x4EBA;&#x6CE8;&#x76EE;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5728; contractile &#x6DB2;&#x6CE1;&#x3002;MEGAP1(-)/2(-) &#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD4;&#x6B63;&#x5E38;&#x5C11;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x6E05;&#x7A7A;&#x5176; contractile &#x6DB2;&#x6CE1;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#x6709;&#x6B63;&#x5E38;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x4E09;&#x500D;&#x3002;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0; MEGAP1 &#x8BF0;&#x5230; contractile &#x6CE1;&#x7F51;&#x7EDC;&#x7684;&#x80BE;&#x5C0F;&#x7BA1;&#x548C;&#x6DB2;&#x6CE1;&#x5F00;&#x59CB;&#x5BF9;&#x7A7A;&#x65F6;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x62DB;&#x8058;&#x6E38;&#x79BB;&#x7684;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0; MEGAP1&#x3002;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; RGD1 &#x548C; RGD2 &#x7684;&#x917F;&#x9152;&#x540C;&#x7CFB;&#x7269;&#x4E5F;&#x663E;&#x793A;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684;&#x6DB2;&#x6CE1;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x8FD9;&#x79CD;&#x4F5C;&#x7528;&#x5B88;&#x6052;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;MEGAP &#x662F; contractile &#x6CE1;&#x7F51;&#xFF0C;&#x91CD;&#x8981;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x8BE5;&#x5236;&#x7684;&#x7531; MEGAP1 contractile &#x6CE1;&#x8868;&#x793A;&#x4E3A;&#x9A7E;&#x9A76;&#x6CE1;&#x6392;&#x7A7A;&#x7684;&#x65B0;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x76D8;&#x57FA;&#x7F51;&#x67C4; MEGAPs&#xFF1A; F &#x680F;&#x8C03;&#x8282;&#x52A8;&#x529B;&#x53CA;&#x819C;&#x5236; contractile &#x6DB2;&#x6CE1;&#x4E2D;&#x7684;&#x57DF;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;

PCH family proteins are fundamentally important proteins, linking membrane curvature events with cytoskeletal reorganisation. One group, the MEGAPs (also called srGAPs and WRPs) contain RhoGAP domains in addition to the F-BAR domain. We disrupted MEGAP1 and MEGAP2 in Dictyostelium both singly and in combination. We found a strong cytoskeletal phenotype in MEGAP1(-) cells and a subtle phototaxis defect in MEGAP2(-) slugs. MEGAP1(-)/2(-) cells have an overabundance of filopodia and slug motility and function are affected. The most dramatic changes, however, are on contractile vacuoles. MEGAP1(-)/2(-) cells empty their contractile vacuoles less efficiently than normal and consequently have three times the usual number. GFP-tagged MEGAP1 localises to tubules of the contractile vacuole network and when vacuoles start to empty they recruit cytosolic GFP-MEGAP1. Mutants in the Saccharomyces homologues RGD1 and RGD2 also show abnormal vacuoles, implying that this role is conserved. Thus, MEGAP is an important regulator of the contractile vacuole network, and we propose that tubulation of the contractile vacuole by MEGAP1 represents a novel mechanism for driving vacuole emptying.

Dictyostelium MEGAPs: F-BAR domain proteins that regulate motility and membrane tubulation in contractile vacuoles.

Prot&eacute;ines de la famille PCH sont des prot&eacute;ines fondamentalement importants, qui relie les &eacute;v&eacute;nements de courbure membranaire avec la r&eacute;organisation du cytosquelette. Un groupe, les MEGAPs (aussi appel&eacute;s srGAPs et Waterloo) contiennent des domaines de RhoGAP en plus le domaine F-BAR. Nous avons perturb&eacute; MEGAP1 et MEGAP2 dans Dictyostelium fois s&eacute;par&eacute;ment et en combinaison. Nous avons trouv&eacute; un ph&eacute;notype du cytosquelette des cellules MEGAP1(-) et un d&eacute;faut de phototaxie subtile de limaces MEGAP2(-). Les cellules MEGAP1(-)/2(-) ont une surabondance des filopodes et fonction et motilit&eacute; limace sont touch&eacute;s. Les changements les plus dramatiques, cependant, sont sur les vacuoles contractiles. MEGAP1(-)/2(-) cellules vider leurs vacuoles contractiles moins efficacement que la normale et ont par cons&eacute;quent trois fois le nombre habituel. GFP-&eacute;tiquet&eacute;e MEGAP1 points aux tubules du r&eacute;seau vacuole contractile et lorsque les vacuoles commencent &agrave; vide qu&#39;elles recrutent cytosolique GFP-MEGAP1. Mutants chez les homologues de Saccharomyces RGD1 et RGD2 montrent aussi des vacuoles anormales, ce qui implique que ce r&ocirc;le est conserv&eacute;. Ainsi, MEGAP est un r&eacute;gulateur important du r&eacute;seau de la vacuole contractile, et nous vous proposons cette tubulation de la vacuole contractile de MEGAP1 repr&eacute;sente un nouveau m&eacute;canisme pour la conduite de vidange de vacuole.

Dictyostelium MEGAPs : Prot&eacute;ines de domaine F-BAR qui r&eacute;gulent la motilit&eacute; et la tubulation de membrane dans les vacuoles contractiles.

PCH Familie Proteine sind grundlegend wichtige Proteine, Membran Kr&uuml;mmung Veranstaltungen mit Zytoskelett Reorganisation zu verkn&uuml;pfen. Eine Gruppe, die MEGAPs (auch genannt SrGAPs und WRPs) enthalten RhoGAP Dom&auml;nen neben der F-BAR-Dom&auml;ne. Wir MEGAP1 und MEGAP2 in Dictyostelium gest&ouml;rt, sowohl einzeln als auch in Kombination. Wir fanden einen starken Zytoskelett Ph&auml;notyp in MEGAP1(-) Zellen und subtile Phototaxis Defekt des MEGAP2(-) Schnecken. MEGAP1(-)/2(-)-Zellen haben eine &Uuml;berf&uuml;lle von Filopodium und Schnecke Motilit&auml;t und Funktion sind betroffen. Die dramatischsten Ver&auml;nderungen sind jedoch auf kontraktilen Vakuolen. MEGAP1(-)/2(-) Zellen leeren ihrer kontraktilen Vakuolen weniger effizient als normal und haben daher drei Mal die &uuml;bliche Zahl. GFP-Tags MEGAP1 dynamisches zu Tubuli der kontraktilen Vakuole-Netzwerks und beim Starten von Vakuolen zu entleeren sie rekrutieren Zytosolische GFP-MEGAP1. Mutanten in der Saccharomyces-Homologen RGD1 und RGD2 zeigen auch abnorme Vakuolen, was impliziert, dass diese Rolle erhalten bleibt. So MEGAP ist ein wichtiger Regulator der kontraktilen Vakuole-Netzwerks, und wir schlagen die Schlauchbildung des der kontraktilen Vakuole von MEGAP1 stellt einen neuen Mechanismus zur treibenden Vakuole Entleerung.

Dictyostelium MEGAPs: F-BAR-Dom&auml;ne-Proteine, die Motilit&auml;t und Membran Schlauchbildung im kontraktilen Vakuolen zu regulieren.

Famiglie proteine PCH sono fondamentalmente importanti proteine, che collega gli eventi di curvatura di membrana con riorganizzazione del citoscheletro. Un gruppo, il MEGAPs (chiamato anche srGAPs e WRPs) contengono domini ripetizione oltre il dominio di F-BAR. Abbiamo interrotto MEGAP1 e MEGAP2 in Dictyostelium sia singolarmente che in combinazione. Abbiamo trovato un forte fenotipo del citoscheletro in cellule MEGAP1(-) e un difetto di fototassi sottile in MEGAP2(-) lumache. MEGAP1(-)/2(-) le cellule hanno una sovrabbondanza di filopodia e funzione e motilit&agrave; slug sono interessati. I cambiamenti pi&ugrave; drammatici, tuttavia, sono su contrattile vacuoli. MEGAP1(-)/2(-) cellule svuotare loro vacuoli contrattile meno efficiente rispetto al normale e di conseguenza hanno tre volte il numero usuale. GFP-etichettato MEGAP1 localizza a tubuli della rete vacuolo contrattile e quando i vacuoli iniziano a vuoto reclutano citosolico GFP-MEGAP1. Mutanti negli omologhi Saccharomyces RGD1 e RGD2 mostrano anche vacuoli anormali, che implica che questo ruolo &egrave; conservato. Cos&igrave;, MEGAP &egrave; un importante regolatore della rete vacuolo contrattile, e proponiamo che tubulazione del vacuolo contrattile da MEGAP1 rappresenta un meccanismo di romanzo per lo svuotamento di vacuolo guida.

Dictyostelium MEGAPs: F-BAR proteine di settore che regolano la motilit&agrave; e membrana tubulazione nei vacuoli contrattile.

PCH &#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x819C;&#x66F2;&#x7387;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x30EA;&#x30F3;&#x30AF;&#x3001;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;1 &#x3064;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7; (srGAPs &#x3068; WRPs &#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x308B;&#xFF09; MEGAPs RhoGAP &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3; F &#x30D0;&#x30FC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x52A0;&#x3048;&#x3066;&#x3092;&#x542B;&#x307F;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x5358;&#x72EC;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3067; MEGAP1 &#x3068; MEGAP2 &#x7D30;&#x80DE;&#x6027;&#x7C98;&#x83CC;&#x306E;&#x4E2D;&#x65AD;&#x3002;MEGAP1(-) &#x7D30;&#x80DE;&#x304A;&#x3088;&#x3073; MEGAP2(-) &#x30CA;&#x30E1;&#x30AF;&#x30B8;&#x306E;&#x5FAE;&#x5999;&#x306A;&#x8D70;&#x5149;&#x6027;&#x6B20;&#x9665;&#x5F37;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;MEGAP1(-)/2(-) &#x7D30;&#x80DE;&#x30D5;&#x30A3;&#x30ED;&#x30DD;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A2;&#x306E;&#x904E;&#x591A;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30CA;&#x30E1;&#x30AF;&#x30B8;&#x306E;&#x904B;&#x52D5;&#x3068;&#x95A2;&#x6570;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6700;&#x3082;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x53CE;&#x7E2E;&#x80DE;&#x4E0A;&#x3067;&#x3059;&#x3002;MEGAP1(-)/2(-) &#x7D30;&#x80DE;&#x305D;&#x306E;&#x53CE;&#x7E2E;&#x80DE;&#x3092;&#x901A;&#x5E38;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x80FD;&#x7387;&#x7684;&#x306B;&#x7A7A;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C; 3 &#x500D;&#x901A;&#x5E38;&#x306E;&#x756A;&#x53F7;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;GFP &#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F; MEGAP1 &#x53CE;&#x7E2E;&#x80DE;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x7D30;&#x7BA1;&#x306B; localises &#x3057;&#x3001;&#x7A7A;&#x80DE;&#x3092;&#x7A7A;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x8D77;&#x52D5;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30BE;&#x30EB; GFP MEGAP1 &#x3092;&#x52DF;&#x96C6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x51FA;&#x82BD;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x540C;&#x65CF;&#x4F53; RGD1 &#x3068; RGD2 &#x306E;&#x7A81;&#x7136;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3053;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x304C;&#x7BC0;&#x7D04;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x610F;&#x5473;&#x3057;&#x3066;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x7A7A;&#x80DE;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;MEGAP &#x306F;&#x53CE;&#x7E2E;&#x80DE;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3078;&#x306E; MEGAP1 &#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x53CE;&#x7E2E;&#x80DE;&#x6DB2;&#x80DE;&#x904B;&#x8EE2;&#x7A7A;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

MEGAPs &#x7D30;&#x80DE;&#x6027;&#x7C98;&#x83CC;: &#x904B;&#x52D5;&#x6027;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x53CE;&#x7E2E;&#x80DE;&#x306E;&#x819C; tubulation &#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B; F &#x30D0;&#x30FC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3002;

PCH &#xAC00;&#xC871; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC740; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, cytoskeletal &#xAC1C;&#xD601;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xB9C9; &#xACE1;&#xB960; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC5F0;&#xACB0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD55C; &#xADF8;&#xB8F9; (srGAPs &#xBC0F; WRPs &#xB77C;&#xACE0;&#xB3C4; &#xD568;) MEGAPs F &#xBC14; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC774;&#xC678;&#xC5D0; RhoGAP &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC911;&#xB2E8; MEGAP1 &#xBC0F; Dictyostelium&#xC5D0;&#xB294; MEGAP2 &#xB2E8;&#xB3C5; &#xBC0F; &#xC870;&#xD569;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; MEGAP1(-) &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; MEGAP2(-) &#xAD7C; &#xBCB5;&#xC774;&#xC758; &#xBBF8;&#xBB18;&#xD55C; phototaxis &#xACB0;&#xD568;&#xC5D0; &#xAC15;&#xD55C; cytoskeletal &#xD45C;&#xD604; &#xD615;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC;. MEGAP1(-)/2(-) &#xC138;&#xD3EC; filopodia&#xC758; &#xACFC;&#xC789; &#xC788;&#xACE0; &#xC2AC;&#xB7EC;&#xADF8; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xAC00;&#xC7A5; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;&#xB294;, contractile vacuoles&#xC5D0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. MEGAP1(-)/2(-) &#xC140; &#xC815;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB35C; &#xD6A8;&#xC728;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; contractile vacuoles &#xBE48; &#xD558; &#xACE0; &#xACB0;&#xACFC;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138; &#xBC88; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xC22B;&#xC790;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;. GFP &#xD0DC;&#xADF8; MEGAP1 contractile &#xACF5;&#xD3EC; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; tubules&#xB97C; localises &#xBC0F; vacuoles &#xBE48; &#xD558;&#xAE30; &#xC2DC;&#xC791;&#xD560; &#xB54C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; cytosolic GFP MEGAP1 &#xBAA8;&#xC9D1;. Saccharomyces homologues RGD1 &#xBC0F; rgd2&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB610;&#xD55C; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; vacuoles&#xB97C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD558; &#xC5EC;&#xC774; &#xC5ED;&#xD560; &#xBCF4;&#xC874;&#xC744; &#xC554;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, MEGAP&#xB294; contractile &#xACF5;&#xD3EC; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C;&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; tubulation&#xC758; megap1&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; contractile &#xACF5;&#xD3EC; &#xACF5;&#xD3EC; &#xBE44;&#xC6B0;&#xB294; &#xC6B4;&#xC804;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC6B4;&#xB3D9; &#xC131; &#xBC0F; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; tubulation contractile vacuoles&#xC5D0;&#xC11C; &#xC870;&#xC808; &#xD558;&#xB294; Dictyostelium MEGAPs: F &#xBC14; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;.

PCH familias prote&iacute;nas son fundamentalmente importantes prote&iacute;nas, enlazan a eventos de curvatura de la membrana con la reorganizaci&oacute;n del citoesqueleto. Un grupo, los MEGAPs (tambi&eacute;n llamados srGAPs y Mejico) contienen dominios RhoGAP adem&aacute;s del dominio de F-BAR. Hemos interrumpido MEGAP1 y MEGAP2 en Dictyostelium tanto individualmente como en combinaci&oacute;n. Encontramos un fenotipo fuerte del citoesqueleto en las c&eacute;lulas MEGAP1(-) y un defecto Fototaxia sutil en las babosas MEGAP2(-). C&eacute;lulas MEGAP1(-)/2(-) tienen una superabundancia de filopodios y funci&oacute;n y motilidad slug son afectados. Los cambios m&aacute;s dram&aacute;ticos, sin embargo, est&aacute;n en las vacuolas contr&aacute;ctiles. MEGAP1(-)/2(-) c&eacute;lulas vaciar sus vacuolas contr&aacute;ctiles menos eficientemente lo normal y por lo tanto tienen tres veces el n&uacute;mero habitual. MEGAP1 GFP-etiquetado localises t&uacute;bulos de la red de la vacuola contr&aacute;ctil y cuando las vacuolas comienzan a vac&iacute;o reclutan citos&oacute;lica GFP-MEGAP1. Mutantes en los hom&oacute;logos de Saccharomyces RGD1 y RGD2 tambi&eacute;n muestran vacuolas anormales, lo que implica conserva ese papel. As&iacute;, MEGAP es un importante regulador de la red de la vacuola contr&aacute;ctil, y proponemos que tubulation de la vacuola contr&aacute;ctil por MEGAP1 representa un nuevo mecanismo para conducir el vaciado de la vacuola.

Dictyostelium MEGAPs: Prote&iacute;nas de dominio de F-BAR que regulan la motilidad y la membrana tubulation en vacuolas contr&aacute;ctiles.

F &#x680F;&#x57DF;&#xFF1A; &#x591A;&#x529F;&#x80FD;&#x819C;&#x66F2;&#x7387;&#x7684;&#x76D1;&#x7BA1;&#x3002;

F-BAR domains: multifunctional regulators of membrane curvature.

Domaines F-BAR: r&eacute;gulateurs multifonctionnels de courbure de la membrane.

F-BAR Dom&auml;nen: Multifunktionale Regler der Kr&uuml;mmung der Membran.

Domini F-BAR: regolatori multifunzionali di curvatura della membrana.

F &#x30D0;&#x30FC; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;: &#x819C;&#x306E;&#x66F2;&#x7387;&#x306E;&#x591A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3002;

F &#xBC14; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;: &#xB9C9; &#xACE1;&#xB960;&#xC758; &#xB2E4;&#xAE30;&#xB2A5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;.

Dominios F-BAR: m&uacute;ltiples funciones reguladoras de la curvatura de la membrana.

&#x5728;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x4F20;&#x611F;&#x4E2D;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x76F8;&#x5173;&#x5206;&#x5B50;&#x6A21;&#x5F0F;&#x8BC6;&#x522B;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x901A;&#x5E38;&#x6D89;&#x53CA;&#x5BCC;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x91CD;&#x590D;&#x5E8F;&#x5217; &#xFF08;LRRs&#xFF09;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684; 375 &#x4EBA;&#x5E0C;&#x542B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x51E0;&#x4E4E;&#x6709;&#x4E00;&#x534A;&#x7684;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5176;&#x4ED6;&#x53EF;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x57DF;&#x7684;&#x5206;&#x7C7B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x805A;&#x96C6;&#x4EE4;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x901A;&#x8FC7;&#x9996;&#x5148;&#x5206;&#x914D;&#x7ED9;&#x5E0C;&#x7C7B;&#x7684; LRRs&#xFF0C;&#x7136;&#x540E;&#x5206;&#x7EC4;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#xFF0C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7C7B;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x5206;&#x914D;&#xFF0C;&#x63ED;&#x793A;&#x51E0;&#x4E2A;&#x542B;&#x6709;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E0E;&#x67D0;&#x4E9B;&#x975E;&#x4EE4;&#x529F;&#x80FD;&#x57DF;&#x5F97;&#x5230;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EC4;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x4EE4;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E2D;&#x5178;&#x578B;&#x7684; (T) &#x548C;&#x7EC6;&#x83CC; + &#x5178;&#x578B; (S + T) &#x7C7B;&#x522B;&#x7684;&#x7EDF;&#x8BA1;&#x4E0A;&#x5927;&#x91CF;&#x6709;&#x8DE8;&#x819C;&#x57DF;&#xFF0C;&#x800C;&#x6700;&#x4EE4;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4E2D;&#x542B;&#x6709;&#x534A;&#x80F1;&#x6C28;&#x9178; (CC) &#x7C7B;&#x522B;&#x5305;&#x542B; F &#x6846;&#x57DF; &#xFF08;&#x5176;&#x4E2D;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x4E0E;&#x590D;&#x6742;&#x7684; E3 &#x6CDB;&#x7D20;&#x8FDE;&#x63A5;&#x9176;&#x7684;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF09;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x68C0;&#x67E5;&#x4EE4;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8FDB;&#x5316;&#x56FE;&#x8C31;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x786E;&#x5B9A;&#x4E86;&#x5E0C;&#x86CB;&#x767D;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x5F3A;&#x70C8;&#x7684;&#x4FDD;&#x62A4;&#xFF0C;&#x5728;&#x771F;&#x83CC;&#x548C;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&quot;&#x6838;&#x9178;&#x7ED1;&#x5B9A;&quot;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;&#x5E0C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x5206;&#x6790;&#x786E;&#x5B9A;&#x75C5;&#x539F;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x7EC6;&#x83CC;&#x611F;&#x67D3;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x539F;&#x53D1;&#x6027;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x529F;&#x80FD; RNAi&#xFF0C;&#x663E;&#x793A; MFHAS1 &#x8C03;&#x8282; Toll &#x6837;&#x53D7;&#x4F53; &#xFF08;&#x5355;&#x53CD;&#xFF09;-&#x4ECE;&#x5C5E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x4F7F;&#x7528;&#x8DDF;&#x529F;&#x80FD; RNAi &#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7F51;&#x7EDC;&#x5206;&#x6790;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0; LRSAM1 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x6297;&#x83CC;&#x81EA;&#x566C;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;

&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5BCC;&#x4EAE;&#x6C28;&#x9178;&#x91CD;&#x590D;&#x86CB;&#x767D;&#xFF1A; &#x5168;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x751F;&#x7269;&#x4FE1;&#x606F;&#x5B66;&#x5206;&#x7C7B;&#x548C;&#x5929;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x4E2D;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x5206;&#x6790;&#x3002;

In innate immune sensing, the detection of pathogen-associated molecular patterns by recognition receptors typically involve leucine-rich repeats (LRRs). We provide a categorization of 375 human LRR-containing proteins, almost half of which lack other identifiable functional domains. We clustered human LRR proteins by first assigning LRRs to LRR classes and then grouping the proteins based on these class assignments, revealing several of the resulting protein groups containing a large number of proteins with certain non-LRR functional domains. In particular, a statistically significant number of LRR proteins in the typical (T) and bacterial + typical (S+T) categories have transmembrane domains, whereas most of the LRR proteins in the cysteine-containing (CC) category contain an F-box domain (which mediates interactions with the E3 ubiquitin ligase complex). Furthermore, by examining the evolutionary profiles of the LRR proteins, we identified a subset of LRR proteins exhibiting strong conservation in fungi and an enrichment for "nucleic acid-binding" function. Expression analysis of LRR genes identifies a subset of pathogen-responsive genes in human primary macrophages infected with pathogenic bacteria. Using functional RNAi, we show that MFHAS1 regulates Toll-like receptor (TLR)-dependent signaling. By using protein interaction network analysis followed by functional RNAi, we identified LRSAM1 as a component of the antibacterial autophagic response.

Human leucine-rich repeat proteins: a genome-wide bioinformatic categorization and functional analysis in innate immunity.

En sentant immune inn&eacute;e, la d&eacute;tection des micro-organismes pathog&egrave;nes associ&eacute;s des profils mol&eacute;culaires par les r&eacute;cepteurs de reconnaissance impliquent g&eacute;n&eacute;ralement des r&eacute;p&eacute;titions riches en leucine (LRR). Nous fournissons une cat&eacute;gorisation des 375 humaines LRR contenant prot&eacute;ines, pr&egrave;s de la moiti&eacute; n&#39;ont pas autres domaines fonctionnels identifiables. Nous en cluster des prot&eacute;ines humaines LRR en abord attribuant LRR aux classes LRR et puis regrouper les prot&eacute;ines bas&eacute;s sur ces affectations, r&eacute;v&eacute;lant plusieurs des groupes qui en r&eacute;sultent de prot&eacute;ine contenant un grand nombre de prot&eacute;ines avec certains domaines fonctionnels non-LRR. En particulier, un nombre statistiquement significatif de prot&eacute;ines LRR dans le typique (T) et bact&eacute;riennes + typiques des cat&eacute;gories (S + T) ont des domaines transmembranaires, alors que la plupart des prot&eacute;ines dans la cat&eacute;gorie (CC) de cyst&eacute;ine contenant LRR contiennent un domaine F-box (qui intervient dans les interactions avec l&#39;ubiquitine ligase E3 complexe). De plus, en examinant les profils &eacute;volutifs des prot&eacute;ines LRR, nous avons identifi&eacute; un sous-ensemble des prot&eacute;ines LRR pr&eacute;sentant forte conservation des champignons et un enrichissement pour la fonction &laquo; nucleic acid-binding &raquo;. Analyse de l&#39;expression des g&egrave;nes de la LRR identifie un sous-ensemble des g&egrave;nes sensibles aux agents pathog&egrave;nes dans les macrophages primaires humains infect&eacute;s par des bact&eacute;ries pathog&egrave;nes. &Agrave; l&#39;aide d&#39;ARNi fonctionnelle, nous montrons que MFHAS1 r&eacute;glemente les r&eacute;cepteurs Toll-like (TLR)-signalisation d&eacute;pendant. En utilisant l&#39;analyse de r&eacute;seau des interactions prot&eacute;ine suivie d&#39;ARNi fonctionnelle, nous avons identifi&eacute; LRSAM1 comme une composante de la r&eacute;ponse autophagique antibact&eacute;rienne.

Humaine riche en leucine r&eacute;p&eacute;ter des prot&eacute;ines : une cat&eacute;gorisation de bioinformatique g&eacute;nome et analyse fonctionnelle dans l&#39;immunit&eacute; inn&eacute;e.

In angeborenen Immunsystem Sensorik, die Erkennung von Pathogen-assoziierte Molekulare Muster durch Anerkennung-Rezeptoren in der Regel betreffen, Leucin-reiche Wiederholungen (LRRs). Wir bieten eine Kategorisierung 375 menschlicher LRR-haltige Proteine, von denen fast die H&auml;lfte anderen identifizierbaren funktionellen Dom&auml;nen fehlt. Wir gruppierten LRR Peptidase durch LRR Klassen zuerst LRRs zuweisen und dann gruppieren die Proteine, die auf der Grundlage von diese Zuweisungen Klasse offenbart einige der resultierenden Protein-Gruppen mit einer gro&szlig;en Anzahl von Proteinen mit bestimmten nicht-LRR funktionelle Dom&auml;nen. Insbesondere haben eine statistisch signifikante Anzahl von LRR Proteine in der typischen (T) und bakterielle + typische (S + T) Kategorien transmembrane-Dom&auml;nen, w&auml;hrend die meisten der LRR-Proteine in der Cystein-haltigen (CC) Kategorie eine F-Box-Dom&auml;ne enthalten (die Interaktionen mit der E3 Ubiquitin Ligase Komplex vermittelt). Dar&uuml;ber hinaus wurden durch Untersuchen der evolution&auml;ren Profile der LRR-Proteine, eine Teilmenge der LRR Proteine starke Erhaltung in Pilzen und Bereicherung &quot;Nukleins&auml;ure-Bindung&quot; Funktion ausstellen. Expressionsanalyse LRR Gene identifiziert eine Teilmenge der Pathogen-responsive Gene in menschliche prim&auml;ren Makrophagen mit pathogenen Bakterien infiziert. Mit funktionalen RNAi, wir zeigen, dass MFHAS1 Toll-Like-Rezeptor (TLR) regelt-abh&auml;ngige signalisieren. Mithilfe von Protein-Interaktion-Netzwerk-Analyse gefolgt von funktionalen RNAi haben wir LRSAM1 als Komponente der antibakterielle autophagic Antwort identifiziert.

Menschliche Leucin-reiche Proteine zu wiederholen: einer genomweiten Bioinformatic Kategorisierung und Funktionsanalyse in der angeborenen Immunit&auml;t.

Sensing sistema immunitario innato, la rilevazione di pathogen-associated molecular patterns di recettori di riconoscimento comportano in genere ricchi di leucina ripetizioni (LRRs). Forniamo una categorizzazione di 375 LRR contenenti proteine umane, quasi la met&agrave; dei quali mancano altri domini funzionali identificabili. Abbiamo raggruppato proteine umane LRR prima assegnazione LRRs alle classi LRR e poi raggruppando le proteine basate su questi compiti in classe, rivelando alcuni dei gruppi della proteina risultante contenente un gran numero di proteine con determinati domini funzionali non-LRR. In particolare, un numero statisticamente significativo di proteine LRR tipica (T) e batteriche + tipiche (S + T) categorie hanno domini transmembrana, considerando che la maggior parte delle proteine LRR nella categoria contenenti cisteina (CC) contengono un dominio F-box (che media le interazioni con l&#39;E3 ubiquitina ligasi complessa). Inoltre, esaminando i profili evolutivi delle proteine LRR, abbiamo identificato un sottoinsieme delle proteine LRR esibendo forte conservazione di funghi e un arricchimento per la funzione di &quot;acido nucleico-associazione&quot;. Analisi dell&#39;espressione di geni LRR identifica un sottogruppo di geni patogeno-sensible a reagire umani primari macrofagi infettati con batteri patogeni. Utilizzo funzionale RNAi, mostriamo che MFHAS1 regola il recettore Toll-like (TLR)-Segnalazione dipendente. Utilizzando analisi di rete di interazione della proteina seguita da RNAi funzionale, abbiamo identificato LRSAM1 come componente della risposta autophagic antibatterica.

Umano ricco di leucina ripetizione le proteine: un genome-wide bioinformatic categorizzazione e analisi funzionale nell&#39;immunit&agrave; innata.

&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x95A2;&#x9023;&#x5206;&#x5B50;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x8A8D;&#x8B58;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x306F;&#x751F;&#x5F97;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057; (Lrr) &#x901A;&#x5E38;&#x4F34;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3001;&#x307B;&#x307C;&#x534A;&#x5206;&#x304C;&#x4ED6;&#x306E;&#x500B;&#x4EBA;&#x3092;&#x7279;&#x5B9A;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x6B20;&#x5982; 375 &#x4EBA;&#x9593; LRR &#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5206;&#x985E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x30FC;&#x5316;&#x6211;&#x3005; &#x4EBA;&#x9593; LRR &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x6700;&#x521D; Lrr LRR &#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306B;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x304F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x5316;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x7279;&#x5B9A;&#x975E; LRR &#x6A5F;&#x80FD;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x7D50;&#x679C;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;(CC) &#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B4;&#x30EA;&#x306E; LRR &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B; &#xFF08;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;E3 &#x30E6;&#x30D3;&#x30AD;&#x30C1;&#x30F3;&#x30EA; &#x30AC;&#x30FC;&#x30BC;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;) F &#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; LRR &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A; (T) &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x83CC; + &#x5178;&#x578B;&#x7684;&#x306A; (S + T) &#x30AB;&#x30C6;&#x30B4;&#x30EA;&#x306E;&#x7D71;&#x8A08;&#x7684;&#x306B;&#x6709;&#x610F;&#x306A;&#x6570;&#x306F;&#x819C;&#x8CAB;&#x901A;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;LRR &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x9032;&#x5316;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB;&#x3092;&#x8ABF;&#x3079;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x83CC;&#x985E;&#x3068;&#x3001;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x300C;&#x6838;&#x9178;&#x7D50;&#x5408;&quot;&#x6A5F;&#x80FD;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x4FDD;&#x5168;&#x51FA;&#x5C55; LRR &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;LRR &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x89E3;&#x6790;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;&#x306B;&#x611F;&#x67D3;&#x3057;&#x3066;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA; &#x30D2;&#x30C8;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x5FDC;&#x7B54;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A; RNAi &#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;, MFHAS1 Toll &#x69D8;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; &#xFF08;TLR&#xFF09; &#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;-&#x4F9D;&#x5B58;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684; RNAi &#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066; LRSAM1 &#x6297;&#x83CC; autophagic &#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x4EBA;&#x9593;&#x306E;&#x30ED;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;: &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; bioinformatic &#x5206;&#x985E;&#x3068;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x3002;

&#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAC10;&#xC9C0;&#xC5D0; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBD84;&#xC790; &#xD328;&#xD134; &#xC778;&#xC2DD; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAC10;&#xC9C0;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2E0;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC744; (LRRs)&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; 375 &#xC778;&#xAC04;&#xC758; LRR &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xAC70;&#xC758; &#xC808;&#xBC18; &#xBD80;&#xC871; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xBD84;&#xB958;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBA3C;&#xC800; LRR &#xD074;&#xB798;&#xC2A4;&#xC5D0; Lrrs&#xB97C; &#xD560;&#xB2F9; &#xD55C; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xD560;&#xB2F9;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xADF8;&#xB8F9;&#xD654; &#xD558; &#xC5EC; &#xB9CE;&#xC740; &#xBE44; LRR &#xAE30;&#xB2A5; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xD2B9;&#xC815; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0;&#xB97C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; LRR &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xC77C;&#xBC18; (T)&#xC640; &#xC138;&#xADE0; + &#xC77C;&#xBC18; (S + T) &#xCE74;&#xD14C;&#xACE0;&#xB9AC; LRR &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD1B5;&#xACC4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC758; &#xD55C; &#xC218; (&#xC774; E3 &#xC720;&#xBE44;&#xD034;&#xD2F4; &#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC911;&#xC7AC;) F &#xAE30;&#xBCF8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD14C;&#xC778; (CC) &#xCE74;&#xD14C;&#xACE0;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; LRR &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xB9C9; &#xD6A1;&#xB2E8; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC774; &#xC788;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, LRR &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC9C4;&#xD654; &#xD504;&#xB85C;&#xD544;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xADE0; &#xB958;&#xACFC; &quot;&#xD575; &#xC0B0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&quot; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB18D;&#xCD95;&#xC5D0; &#xAC15;&#xD55C; &#xBCF4;&#xC874; &#xC804;&#xC2DC; LRR &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBD80;&#xBD84; &#xC9D1;&#xD569; &#xC2DD;&#xBCC4;. LRR &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xC815; &#xBD84;&#xC11D; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xAC00; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xAC10;&#xC5FC; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xBC18;&#xC751; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; MFHAS1 &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD1B5;&#xD589;&#xC138; &#xAC19;&#xC774; (TLR) &#xADDC;&#xC81C; &#xD45C;&#xC2DC; &#xAE30;&#xB2A5; Rnai&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;-&#xC885;&#xC18D; &#xC2E0;&#xD638;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xB124;&#xD2B8;&#xC6CC;&#xD06C; &#xBD84;&#xC11D; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC778; Rnai&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; LRSAM1 &#xD56D;&#xADE0; autophagic &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xC2DD;&#xBCC4;.

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2E0;&#xC774; &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xBC18;&#xBCF5;: &#xAC8C;&#xB188; &#xC804;&#xCCB4;&#xC758; bioinformatic &#xBD84;&#xB958;&#xC640; &#xD0C0;&#xACE0; &#xB09C; &#xBA74;&#xC5ED; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D;.

En detecci&oacute;n inmune innata, la detecci&oacute;n de patrones moleculares asociado a pat&oacute;genos por receptores de reconocimiento comprenden, repeticiones ricas en leucina (EBLR). Proporcionamos una categorizaci&oacute;n de 375 LRR que contienen prote&iacute;nas humanas, casi la mitad de los cuales carecen de otros dominios funcionales identificables. Nos agrupan prote&iacute;nas humanas del LRR primero asignando EBLR a clases LRR y luego agrupar las prote&iacute;nas basadas en estos trabajos de clase, revelando varios de los grupos resultante de la prote&iacute;na que contiene un gran n&uacute;mero de prote&iacute;nas con ciertos dominios funcionales no-LRR. En particular, un n&uacute;mero estad&iacute;sticamente significativo de LRR prote&iacute;nas en el t&iacute;pico (T) y bacterianas + t&iacute;picas categor&iacute;as (S + T) tiene dominios transmembrana, mientras que la mayor&iacute;a de las prote&iacute;nas LRR en la categor&iacute;a de (CC) que contienen ciste&iacute;na contienen un dominio de F-box (que media las interacciones con la ligasa de ubiquitina E3 complejo). Adem&aacute;s, al examinar los perfiles evolutivos de las prote&iacute;nas LRR, identificamos un subconjunto de prote&iacute;nas LRR exhibiendo fuerte conservaci&oacute;n en hongos y un enriquecimiento para la funci&oacute;n de &quot;&aacute;cido nucleico-vinculante&quot;. An&aacute;lisis de la expresi&oacute;n de genes LRR identifican un subconjunto de genes sensibles al pat&oacute;genos en humanos primarios macr&oacute;fagos infectados con bacterias pat&oacute;genas. Utilizando ARNi funcional, mostramos que MFHAS1 regula Toll-like receptor (TLR)-se&ntilde;alizaci&oacute;n dependiente. Utilizando el an&aacute;lisis de redes de interacci&oacute;n prote&iacute;na seguido por RNAi funcional, se identificaron LRSAM1 como un componente de la respuesta de autofagia antibacteriano.

Rico en leucina humano repita las prote&iacute;nas: un genoma bioinform&aacute;ticas categorizaci&oacute;n y an&aacute;lisis funcional en la inmunidad innata.

&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x6280;&#x672F;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x4F7F;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x4E92;&#x52A8;&#x7684;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x4E00;&#x4E9B;&#x521D;&#x6B65;&#x610F;&#x89C1;&#x5BF9;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269; &#xFF1B; &#x6311;&#x6218;&#x957F;&#x671F;&#x6301;&#x6709;&#x7684;&#x4FE1;&#x5FF5;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x5E94;&#x7B54;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236;&#x5DF2;&#x5448;&#x73B0;&#x91CD;&#x70B9;&#x7684;&#x89C2;&#x6D4B;&#x5230;&#x4E3B;&#x673A;&#x54CD;&#x5E94;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x521D;&#x59CB;&#x4EA4;&#x4E92;&#x56F0;&#x96BE;&#x3002;&#x672C;&#x6587;&#x6982;&#x8FF0;&#x4E86;&#x8FDB;&#x5C55;&#x7684;&#x65CB;&#x8F6C;&#x78C1;&#x76D8;&#x5171;&#x805A;&#x7126;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x7ED3;&#x5408;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x9677;&#x9631;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A;&#x5149;&#x5B66;&#x954A;&#x5B50;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7CBE;&#x81F4;&#x7684;&#x65F6;&#x7A7A;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5C06;&#x5176;&#x653E;&#x7F6E;&#x5728;&#x9760;&#x8FD1;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7531;&#x8FD0;&#x7B97;&#x7B26;&#x51B3;&#x5B9A;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;&#x805A;&#x5408;&#x73E0;&#x548C;&#x6D3B;&#x3001; &#x81F4;&#x75C5;&#x6709;&#x673A;&#x4F53; (&#x767D;&#x8272;&#x5FF5;&#x73E0;&#x83CC;&#x548C;&#x9709;&#x83CC;) &#x5149;&#x88AB;&#x56F0;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x7834;&#x574F;&#x6027;&#x529B;&#x91CF;&#x548C;&#x79FB;&#x52A8;&#x76F8;&#x90BB;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x968F;&#x540E;&#x541E;&#x566C;&#x540E;&#x88AB;&#x56F0;&#x7684;&#x7C92;&#x5B50;&#x3002;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#xFF0C;&#x5149;&#x4F20;&#x8F93;&#x548C;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x7535;&#x5F71;&#x8BBE;&#x7ACB;&#x89C2;&#x5BDF;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x541E;&#x566C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x65E9;&#x671F;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x8BC1;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5BF9;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x5177;&#x6709;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x9002;&#x7528;&#x6027;&#xFF0C;&#x6297; CD3 &#x805A;&#x5408;&#x73E0;&#x88AB;&#x4E5F;&#x88AB;&#x56F0;&#x548C;&#x7A97;&#x4F53;&#x4E0E; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x7A81;&#x89E6;&#x7684;&#x64CD;&#x63A7;&#x548C;&#x7A81;&#x89E6;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x5EF6;&#x65F6;&#x6210;&#x50CF;&#x8FD8;&#x83B7;&#x5F97;&#x3002;&#x901A;&#x8FC7;&#x63D0;&#x4F9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x7684;&#x6D3B;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x5BF9;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7CBE;&#x7EC6;&#x63A7;&#x5236;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6355;&#x83B7;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x4E0E;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x6781;&#x5C0F;&#x7684;&#x6270;&#x52A8;&#x548C;&#x53EF;&#x4EA7;&#x751F;&#x5F3A;&#x5927;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x65E9;&#x671F;&#x5148;&#x5929;&#x548C;&#x81EA;&#x9002;&#x5E94;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;

&#x63A7;&#x5236;&#x548C;&#x64CD;&#x7EB5;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x4E0E;&#x7EC6;&#x80DE;&#x95F4;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x50CF;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x9677;&#x9631;&#x3002;

The application of live cell imaging allows direct visualization of the dynamic interactions between cells of the immune system. Some preliminary observations challenge long-held beliefs about immune responses to microorganisms; however, the lack of spatial and temporal control between the phagocytic cell and microbe has rendered focused observations into the initial interactions of host response to pathogens difficult. This paper outlines a method that advances live cell imaging by integrating a spinning disk confocal microscope with an optical trap, also known as an optical tweezer, in order to provide exquisite spatial and temporal control of pathogenic organisms and place them in proximity to host cells, as determined by the operator. Polymeric beads and live, pathogenic organisms (Candida albicans and Aspergillus fumigatus) were optically trapped using non-destructive forces and moved adjacent to living cells, which subsequently phagocytosed the trapped particle. High resolution, transmitted light and fluorescence-based movies established the ability to observe early events of phagocytosis in living cells. To demonstrate the broad applicability of this method to immunological studies, anti-CD3 polymeric beads were also trapped and manipulated to form synapses with T cells in vivo, and time-lapse imaging of synapse formation was also obtained. By providing a method to exert fine control of live pathogens with respect to immune cells, cellular interactions can be captured by fluorescence microscopy with minimal perturbation to cells and can yield powerful insight into early responses of innate and adaptive immunity.

Control and manipulation of pathogens with an optical trap for live cell imaging of intercellular interactions.

L&#x26;#39;application de l&#x26;#39;imagerie des cellules vivantes permet la visualisation directe des interactions dynamiques entre les cellules du syst&#xE8;me immunitaire. Quelques observations pr&#xE9;liminaires d&#xE9;fi &#xE0; long croyances au sujet de la r&#xE9;ponse immunitaire &#xE0; des micro-organismes, mais le manque de contr&#xF4;le spatial et temporel entre la cellule phagocytaire et microbe a rendus port&#xE9; observations sur les interactions initiales de r&#xE9;ponse de l&#x26;#39;h&#xF4;te aux agents pathog&#xE8;nes difficiles. Le pr&#xE9;sent document d&#xE9;crit une m&#xE9;thode que les progr&#xE8;s vivre l&#x26;#39;imagerie cellulaire par l&#x26;#39;int&#xE9;gration d&#x26;#39;un microscope confocal &#xE0; disque rotatif un pi&#xE8;ge optique, &#xE9;galement connu sous le nom une pince optique, afin de fournir exquise de contr&#xF4;le spatial et temporel d&#x26;#39;organismes pathog&#xE8;nes et de les placer &#xE0; proximit&#xE9; des cellules h&#xF4;tes, tel que d&#xE9;termin&#xE9; par l&#x26;#39;op&#xE9;rateur. Les granules et les organismes vivants pathog&#xE8;nes (Candida albicans et Aspergillus fumigatus) ont &#xE9;t&#xE9; captur&#xE9;s &#xE0; l&#x26;#39;aide optiquement non-destructrices des forces et a d&#xE9;m&#xE9;nag&#xE9; &#xE0; c&#xF4;t&#xE9; de cellules vivantes, qui ont ensuite phagocyt&#xE9;es la particule pi&#xE9;g&#xE9;e. Haute r&#xE9;solution, transmise films l&#xE9;gers et bas&#xE9; sur la fluorescence cr&#xE9;&#xE9; la possibilit&#xE9; d&#x26;#39;observer les &#xE9;v&#xE9;nements pr&#xE9;coces de la phagocytose dans les cellules vivantes. Pour d&#xE9;montrer la large applicabilit&#xE9; de cette m&#xE9;thode pour des &#xE9;tudes immunologiques, anti-CD3 perles polym&#xE8;res ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; pris au pi&#xE8;ge et manipul&#xE9;es pour former des synapses avec les cellules T in vivo, et imagerie time-lapse de formation de la synapse ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; obtenues. En fournissant une m&#xE9;thode d&#x26;#39;exercer un contr&#xF4;le pr&#xE9;cis de pathog&#xE8;nes vivants en ce qui concerne les cellules immunitaires, les interactions cellulaires peuvent &#xEA;tre captur&#xE9;s par microscopie &#xE0; fluorescence avec une perturbation minimale pour les cellules et peut donner un aper&#xE7;u puissante dans les r&#xE9;ponses au d&#xE9;but de l&#x26;#39;immunit&#xE9; inn&#xE9;e et adaptative.

Contr&#xF4;le et la manipulation des agents pathog&#xE8;nes d&#x26;#39;un pi&#xE8;ge optique pour l&#x26;#39;imagerie des cellules vivantes des interactions intercellulaires

Die Anwendung von live Cell Imaging erm&ouml;glicht direkte Visualisierung der dynamischen Wechselwirkungen zwischen Zellen des Immunsystems. Einige Vorbemerkungen fordern lang gehegte &Uuml;berzeugungen &uuml;ber Immunantworten zu Mikroorganismen; Allerdings hat die mangelnde r&auml;umliche und zeitliche Kontrolle zwischen dem phagozytische Zelle und Mikrobe gezielte Beobachtungen in die ersten Interaktionen der Wirtsantwort gegen Krankheitserreger schwierig gerendert. Dieses Papier legt eine Methode, dass Fortschritte Zelle Darstellung Leben durch die Integration eines drehenden Scheibe Konfokales Mikroskops mit einer optischen Falle, auch eine optische Pinzette, um exquisite r&auml;umliche und zeitliche Steuerung der pathogenen Organismen und legen Sie sie in der N&auml;he Wirtszellen, wie vom Betreiber bestimmt. Polymer Perlen und live, pathogenen Organismen (Candida Albicans und Aspergillus Fumigatus) wurden optisch gefangen, mittels nicht-destruktive Kr&auml;fte und angrenzend an lebenden Zellen, die anschlie&szlig;end das aufgefangene Partikel phagozytierte verschoben. Hohe Aufl&ouml;sung, &uuml;bertrug Licht und Fluoreszenz basierenden Filmen etabliert die F&auml;higkeit, Fr&uuml;he Veranstaltungen der Phagozytose in lebenden Zellen beobachten. Um die breite Anwendbarkeit dieser Methode auf immunologische Studien zu demonstrieren, wurden Anti-CD3 Polymer Perlen auch gefangen in Form Synapsen mit T-Zellen in vivo manipuliert und Zeitraffer Bildgebung Synapse-Formation wurde auch erhalten. Durch die Bereitstellung einer Methode, um feine Kontrolle Leben Krankheitserreger in Bezug auf Immunzellen, zellul&auml;re Interaktionen durch Fluoreszenzmikroskopie mit minimaler St&ouml;rung auf Zellen erfasst werden k&ouml;nnen und leistungsf&auml;hige Einblick in fr&uuml;hen Antworten der angeborenen und erworbenen Immunit&auml;t ergeben k&ouml;nnen.

Kontrolle und Manipulation von Krankheitserregern mit einer optischen Falle f&uuml;r live Cell Imaging interzellul&auml;re Wechselwirkungen.

L&#39;applicazione di imaging cellulare diretta permette la visualizzazione diretta delle interazioni dinamiche tra le cellule del sistema immunitario. Alcune osservazioni preliminari sfidano lunga convinzioni sulla risposta immunitaria ai microrganismi; Tuttavia, la mancanza di controllo spaziale e temporale tra la cellula fagocitaria e microbo ha reso difficile osservazioni mirate nelle interazioni iniziali della risposta ospite ad agenti patogeni. Questo documento delinea un metodo che anticipi live imaging cellulare integrando un microscopio confocale del disco rotante con un&#39;ottica trappola, noto anche come una pinzetta ottica, al fine di fornire squisito controllo spaziale e temporale degli organismi patogeni e posizionarli in prossimit&agrave; di cellule ospiti, come determinato dall&#39;operatore. PERLINE polimerici e organismi vivi, patogeni (Candida albicans e Aspergillus fumigatus) erano intrappolati otticamente usando le forze non-distruttive e spostato adiacenti alle cellule viventi, che successivamente phagocytosed la particella intrappolata. Luce emessa ad alta risoluzione e filmati basati sulla fluorescenza stabilirono la possibilit&agrave; di osservare i primi eventi della fagocitosi in cellule viventi. Per dimostrare l&#39;ampia applicabilit&agrave; di questo metodo per studi immunologici, anti-CD3 polimerici perline erano anche intrappolati e manipolati a forma sinapsi con le cellule T in vivo, e time-lapse imaging di formazione sinapsi anche &egrave; stato ottenuto. Fornendo un metodo per esercitare un controllo accurato del live patogeni nei confronti di cellule del sistema immunitario, interazioni cellulari possono essere catturate da microscopia di fluorescenza con minima perturbazione alle cellule e possono produrre potente intuizione prime risposte dell&#39;immunit&agrave; innata e adattiva.

Controllo e la manipolazione di agenti patogeni con un&#39;ottica trappola per l&#39;acquisizione diretta delle cellule delle interazioni intercellulari.

&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x30BB;&#x30EB;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x7CFB;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x4E88;&#x5099;&#x7684;&#x89B3;&#x5BDF;&#x306F;&#x3001;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306E;&#x9577;&#x5E74;&#x306E;&#x4FE1;&#x5FF5;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x5236;&#x5FA1;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x304C;&#x56F0;&#x96E3;&#x306A;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3092;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7A3F;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x9032;&#x6B69;&#x306F;&#x75C5;&#x539F;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x7D76;&#x5999;&#x306A;&#x7A7A;&#x9593;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x306A;&#x5236;&#x5FA1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x8FD1;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x914D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5149;&#x30D4;&#x30F3;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x5149;&#x5B66;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3001;&#x3068;&#x30B9;&#x30D4;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B9;&#x30AF;&#x5171;&#x7126;&#x70B9;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x7D71;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x751F;&#x304D;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x6982;&#x8AAC;&#x3057;as&#x6F14;&#x7B97;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x3084;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D6;&#x3001;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x751F;&#x7269;&#xFF08;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C0;&#x3068;&#x30A2;&#x30B9;&#x30DA;&#x30EB;&#x30AE;&#x30EB;&#x30B9;&#xFF09;&#x306F;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x7834;&#x58CA;&#x7684;&#x306A;&#x529B;&#x3092;&#x4F7F;&#x3063;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x9589;&#x3058;&#x8FBC;&#x3081;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x7C92;&#x5B50;&#x3092;&#x8CAA;&#x98DF;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x96A3;&#x63A5;&#x3057;&#x3066;&#x79FB;&#x52D5;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x9AD8;&#x5206;&#x89E3;&#x80FD;&#x3001;&#x900F;&#x904E;&#x5149;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x30E0;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x751F;&#x304D;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x98DF;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3078;&#x306E;&#x3053;&#x306E;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306E;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x9069;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6297;CD3&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x30D3;&#x30FC;&#x30BA;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x3055;&#x308C;&#x3001;in 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La aplicaci&#xF3;n de im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas permite la visualizaci&#xF3;n directa de las interacciones din&#xE1;micas entre las c&#xE9;lulas del sistema inmune. Algunas observaciones preliminares desafiar a las viejas creencias acerca de la respuesta inmune a los microorganismos, sin embargo, la falta de control espacial y temporal entre la c&#xE9;lula fagoc&#xED;tica y el microbio ha hecho observaciones se centr&#xF3; en las interacciones iniciales de la respuesta del hu&#xE9;sped a los pat&#xF3;genos dif&#xED;ciles. Este documento describe un m&#xE9;todo que avanza vivo im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas mediante la integraci&#xF3;n de un microscopio confocal de disco giratorio con una trampa &#xF3;ptica, tambi&#xE9;n conocida como una pinza &#xF3;ptica, a fin de proporcionar un exquisito control espacial y temporal de organismos pat&#xF3;genos y colocarlos en la proximidad de las c&#xE9;lulas hu&#xE9;sped, seg&#xFA;n lo determinado por el operador. Perlas de pol&#xED;mero y de los organismos vivos, pat&#xF3;genos (Candida albicans y Aspergillus fumigatus) quedaron atrapados &#xF3;pticamente usando no destructivas fuerzas y se traslad&#xF3; junto a las c&#xE9;lulas vivas, que posteriormente fagocitados la part&#xED;cula atrapada. De alta resoluci&#xF3;n, transmite pel&#xED;culas de luz y fluorescencia basada en establecer la capacidad de observar los acontecimientos iniciales de la fagocitosis de las c&#xE9;lulas vivas. Para demostrar la amplia aplicabilidad de este m&#xE9;todo para los estudios inmunol&#xF3;gicos, anti-CD3 perlas polim&#xE9;ricas fueron atrapados tambi&#xE9;n y se manipula para formar sinapsis con las c&#xE9;lulas T in vivo, y el tiempo de im&#xE1;genes a intervalos de formaci&#xF3;n de sinapsis se obtuvo tambi&#xE9;n. Al proporcionar un m&#xE9;todo para ejercer un control preciso de pat&#xF3;genos vivos con respecto a las c&#xE9;lulas inmunes, las interacciones celulares pueden ser capturados por microscop&#xED;a de fluorescencia con un m&#xED;nimo de perturbaci&#xF3;n a las c&#xE9;lulas y pueden producir una poderosa comprensi&#xF3;n de las respuestas iniciales de la inmunidad innata y adaptativa.

Control y la manipulaci&#xF3;n de pat&#xF3;genos con una trampa &#xF3;ptica de im&#xE1;genes de c&#xE9;lulas vivas de las interacciones intercelulares

&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x75C5;&#x539F;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x89E6;&#x53D1;&#x5668;&#x7531;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E00;&#x5927;&#x6279;&#x5305;&#x62EC;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x91CD;&#x7EC4;&#x548C;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x7684;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;Diarrheagenic &#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; (EPEC) &#x53CA;&#x76F8;&#x5173;&#x51FA;&#x8840;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; 0157&#xFF1A; &#x98A0;&#x8986;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x5411;&#x7A97;&#x4F53;&#x9644;&#x52A0;&#x548C;&#x6CE8;&#x5C04;&#x6548;&#x5E94;&#x86CB;&#x767D;&#x901A;&#x8FC7;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E09;&#x3001; &#x5206;&#x6CCC;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x62B9;&#x53BB;&#x8868;&#x9762;&#x7684;&#x80A0;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x75C5;&#x53D8;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x4EF2;&#x88C1;&#x6CD5; &#x300B; &#x6613;&#x4F4D;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x5BF9;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4FE1;&#x53F7;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x5BF9;&#x75C5;&#x539F;&#x7EC6;&#x83CC;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x4EF2;&#x88C1;&#x6CD5; &#x300B; &#x662F;&#x8F85;&#x9176;&#x7684;&#x8840;&#x6E05;&#x53CD;&#x5E94;&#x56E0;&#x5B50; (SRF) &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x4E0E;&#x8C03;&#x8282;&#x7684;&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; EPEC &#x8BF1;&#x4F7F;&#x6838;&#x4EF2;&#x88C1;&#x6CD5; &#x300B;-&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x79EF;&#x7D2F;&#x3002;&#x5960;&#x57FA;&#x7684; intimin &#x53D7;&#x4F53;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E00;&#x8FDB;&#x7A0B;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x548C;&#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x7684;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x6B8B;&#x57FA; 454 &#x548C; 474 &#x975E;&#x5E38;&#x91CD;&#x8981;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x5C4F;&#x5E55;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC6;&#x522B; FLRT3&#x3001; C22orf28 &#x548C; TESK1 &#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x6D3B;&#x5316;&#x5242;&#x7684;&#x6210;&#x679C;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E;&#x963F;&#x5E03; (&#x808C;&#x52A8;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408; Rho &#x6FC0;&#x6D3B;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x79F0;&#x4E3A;&#x6052;&#x661F;&#xFF09;&#xFF0C;&#x662F; EPEC &#x81F4;&#x6838;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x4EF2;&#x88C1;&#x6CD5; &#x300B; &#x548C;&#x65B0;&#x578B; SRF &#x6D3B;&#x5316;&#x5242; FLRT3 &#x6240;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x8FD9;&#x6761;&#x6B65;&#x9053;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x660E;&#x963F;&#x5E03;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684; EPEC &#x5E95;&#x5EA7;&#x7ED3;&#x6784;&#x7EF4;&#x62A4;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x53D1;&#x73B0;&#x65B0;&#x578B;&#x75C5;&#x539F;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AA8;&#x67B6;&#x5BF9;&#x4EF2;&#x88C1;&#x6CD5; &#x300B; &#x6FC0;&#x6D3B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4E2D;&#x7684;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x3002;

&#x4EF2;&#x88C1;&#x6CD5; &#x300B; &#x6FC0;&#x6D3B;&#x540E;&#x80A0;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x4E3B;&#x673A;&#x51B3;&#x5B9A;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF1A; &#x56FD;&#x9645;&#x516C;&#x8DEF;&#x8D27;&#x8FD0;&#x3001; &#x963F;&#x5E03;&#x62C9;&#x548C; FLRT3 &#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#x3002;

Infection of host cells by pathogenic microbes triggers signal transduction pathways leading to a multitude of host cell responses including actin cytoskeletal re-arrangements and transcriptional programs. The diarrheagenic pathogens Enteropathogenic E. coli (EPEC) and the related Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) subvert the host-cell actin cytoskeleton to form attaching and effacing lesions on the surface of intestinal epithelial cells by injecting effector proteins via a type III secretion system. Here we use a MAL translocation assay to establish the effect of bacterial pathogens on host cell signaling to transcription factor activation. MAL is a cofactor of Serum response factor (SRF), a transcription factor with important roles in the regulation of the actin cytoskeleton. We show that EPEC induces nuclear accumulation of MAL-GFP. The translocated intimin receptor is essential for this process and phosphorylation of Tyrosine residues 454 and 474 is important. Using an expression screen we identify FLRT3, C22orf28 and TESK1 as novel activators of SRF. Importantly we demonstrate that ABRA (actin-binding Rho-activating protein, also known as STARS) is necessary for EPEC-induced nuclear accumulation of MAL and the novel SRF activator FLRT3, is a component of this pathway. We further demonstrate that ABRA is important for structural maintenance of EPEC pedestals. Our results uncover novel components in pathogen-activated cytoskeleton signalling to MAL activation.

Bacterial and host determinants of MAL activation upon EPEC infection: the roles of Tir, ABRA, and FLRT3.

L&#39;infection des cellules de l&#39;h&ocirc;te par les d&eacute;clencheurs de microbes pathog&egrave;nes conduisant &agrave; une multitude de h6te cellulaire, y compris les r&eacute;organisations du cytosquelette d&#39;actine et programmes transcriptionnelles des voies de transduction du signal. Les pathog&egrave;nes diarrheagenic Escherichia coli ent&eacute;ropathog&egrave;nes (EPEC) et les associ&eacute;s Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) subvert le cytosquelette d&#39;actine de cellule-h&ocirc;te pour former attachant et effa&ccedil;ant des l&eacute;sions &agrave; la surface des cellules &eacute;pith&eacute;liales intestinales par l&#39;injection de prot&eacute;ines effectrices via un type de syst&egrave;me de s&eacute;cr&eacute;tion de III. Ici, nous utilisons un dosage de translocation du MAL &agrave; d&eacute;terminer l&#39;effet des bact&eacute;ries pathog&egrave;nes sur la cellule-h&ocirc;te de signalisation &agrave; l&#39;activation de facteurs de transcription. MAL est un cofacteur du facteur de r&eacute;ponse s&eacute;rique (SRF), un facteur de transcription avec un r&ocirc;le important dans la r&eacute;gulation du cytosquelette d&#39;actine. Nous montrons que l&#39;EPEC induit nucl&eacute;aire accumulation de MAL-GFP. Le r&eacute;cepteur de la translocation intimine est essentiel &agrave; ce processus et la phosphorylation des r&eacute;sidus Tyrosine 454 et 474 est importante. &Agrave; l&#39;aide d&#39;un &eacute;cran d&#39;expression nous identifier FLRT3, C22orf28 et TESK1 comme nouveaux activateurs de la SRF. Ce qui est important, nous d&eacute;montrons que ABRA (prot&eacute;ine liant l&#39;actine-activation de Rho, aussi connu comme les &eacute;toiles) est n&eacute;cessaire pour l&#39;accumulation nucl&eacute;aire induite par l&#39;EPEC du MAL et de l&#39;activateur SRF roman FLRT3, est une composante de cette voie. De plus, nous d&eacute;montrons que ABRA est important pour l&#39;entretien structurel des pi&eacute;destaux EPEC. Nos r&eacute;sultats de d&eacute;couvrir les nouveaux composants dans le cytosquelette activ&eacute;s par le pathog&egrave;ne de signalisation &agrave; l&#39;activation de la LTA.

D&eacute;terminants bact&eacute;riens et h&ocirc;te d&#39;activation MAL apr&egrave;s infection EPEC : les r&ocirc;les de Tir, ABRA et FLRT3.

Infektion der Wirtszellen von pathogenen Mikroben Trigger signal Transduktion &Uuml;bertragungswege, die bei einer Vielzahl von Host Zelle Antworten einschlie&szlig;lich Aktin-Zytoskelett-Re-arrangements und transkriptionelle Programme. Diarrheagenic Krankheitserreger enteropathogener E. coli (EPEC) und die damit verbundenen Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) unterlaufen die Wirtszelle Aktin-Zytoskeletts Formular anf&uuml;gen und L&auml;sionen auf der Oberfl&auml;che der intestinalen Epithelzellen durch die Injektion von Effektor Proteine &uuml;ber einen Typ III-Sekretionssystem auszul&ouml;schen. Hier verwenden wir ein MAL Translokation Assay, die Wirkung von bakteriellen Krankheitserregern auf Wirtszelle Signalisierung Transkription Faktor Aktivierung herzustellen. MAL ist ein Kofaktor der Serum-Response-Faktor (SRF), einen Transkriptionsfaktor mit wichtige Rolle bei der Regulation des Aktin-Zytoskeletts. Wir zeigen, dass EPEC nuklearen Anreicherung von MAL-GFP induziert. Der entwichene Intimin-Rezeptor ist wesentlich f&uuml;r diesen Prozess und die Phosphorylierung von Tyrosin R&uuml;ckst&auml;nden 454 und 474 ist wichtig. Mit einen Ausdruck-Bildschirm identifizieren wir FLRT3, C22orf28 und TESK1 als neuartige Aktivatoren der SRF. Vor allem zeigen wir ABRA (Aktin-Bindung Rho-Aktivierung von Protein, auch bekannt als STARS) erforderlich f&uuml;r EPEC-induzierte nukleare Anh&auml;ufung von MAL und das neuartige SRF-Activator FLRT3, ist eine Komponente von diesem Weg. Weiter zeigen wir, dass ABRA f&uuml;r strukturelle Wartung der EPEC Sockeln wichtig. Unsere Ergebnisse entdecken Sie neuartige Komponenten in Krankheitserreger aktivierte Zytoskeletts Signalisierung auf MAL-Aktivierung.

Bakteriell und Host Determinanten der MAL Aktivierung auf EPEC-Infektion: die Rollen von Tir, ABRA und FLRT3.

Infezione delle cellule ospiti da trigger di microbi patogeni segnale vie di trasduzione del portando ad una moltitudine di risposte cell host tra cui programmi transcriptional e riorganizzazioni del citoscheletro di actina. Gli agenti patogeni diarrheagenic enteropatogeno E. coli (EPEC) e le relativo Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) sovvertire il citoscheletro di actina cellula ospite per formare associare e cancellare le lesioni sulla superficie delle cellule epiteliali intestinali iniettando proteine effettrici tramite un tipo sistema di secrezione di III. Qui usiamo un dosaggio di traslocazione MAL per stabilire l&#39;effetto di agenti patogeni batterici sulla cellula ospite segnalazione attivazione di fattore di trascrizione. MAL &egrave; un cofattore del fattore di risposta del siero (SRF), un fattore di trascrizione con ruoli importanti nella regolazione del citoscheletro di actina. Mostriamo che EPEC induce accumulo nucleare di MAL-GFP. Fosforilazione dei residui di tirosina 454 e 474 &egrave; importante e il recettore traslocato intimin &egrave; essenziale per questo processo. Usando un&#39;espressione schermo identificare i FLRT3, C22orf28 e TESK1 come romanzo attivatori della SRF. Soprattutto noi dimostrare che ABRA (actina-Rho-attivazione proteina, conosciuta anche come stelle) &egrave; necessaria per EPEC-indotta accumulo nucleare di MAL e il romanzo attivatore SRF FLRT3, &egrave; un componente di questo percorso. Noi dimostrare ulteriormente che ABRA &egrave; importante per la manutenzione strutturale dell&#39;EPEC piedistalli. I nostri risultati scoprono romanzo componenti attivati dal patogeno citoscheletro segnalazione attivazione di MAL.

Batterica e host determinanti di attivazione MAL su infezione EPEC: i ruoli di Tir, ABRA e FLRT3.

&#x611F;&#x67D3;&#x75C5;&#x539F;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x4F1D;&#x9054;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x518D;&#x3084;&#x8EE2;&#x5199;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x591A;&#x304F;&#x306B; &#x3002;&#x4E0B;&#x75E2;&#x539F;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7531;&#x6765;&#x8178;&#x7BA1;&#x75C5;&#x539F;&#x5927;&#x8178;&#x83CC; EPEC &#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x8178;&#x7BA1;&#x51FA;&#x8840;&#x6027;&#x5927;&#x8178;&#x83CC; (EHEC) &#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x75C5;&#x5909;&#x8178;&#x7BA1;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x9762;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; III &#x5206;&#x6CCC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x6CE8;&#x5165;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8178;&#x7BA1;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3092;&#x8986;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x7D30;&#x83CC;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B; MAL &#x8EE2;&#x5EA7;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;MAL &#x5171;&#x540C;&#x56E0;&#x5B50;&#x8840;&#x6E05;&#x5FDC;&#x7B54;&#x56E0;&#x5B50; &#xFF08;SRF&#xFF09; &#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3067;&#x3059;&#x3002;EPEC MAL GFP &#x306E;&#x6838;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8EE2; intimin &#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x6B8B;&#x57FA; 454 &#x3068; 474 &#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x5F0F;&#x306E;&#x753B;&#x9762;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x306E; FLRT3&#x3001;C22orf28&#x3001;TESK1 SRF &#x306E;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x8B58;&#x5225;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306F;&#x6211;&#x3005; &#x30A2;&#x30D6;&#x30E9; &#xFF08;&#x307E;&#x305F;&#x661F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30F3;&#x7D50;&#x5408; Rho &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#xFF09; &#x30DE;&#x30EB;&#x306E;&#x6838;&#x84C4;&#x7A4D;&#x306F; EPEC &#x8A98;&#x8D77;&#x3068;&#x5C0F;&#x8AAC; SRF &#x6D3B;&#x6027;&#x5264; FLRT3 &#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x3053;&#x306E;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x30A2;&#x30D6;&#x30E9;&#x304C; EPEC &#x53F0;&#x5EA7;&#x3092;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x7DAD;&#x6301;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;MAL &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x9AA8;&#x683C;&#x306E;&#x65B0;&#x898F;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

MAL &#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3; EPEC &#x611F;&#x67D3;&#x6642;&#x306E;&#x7D30;&#x83CC;&#x3084;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x8981;&#x56E0;: Tir&#x3001;&#x30A2;&#x30D6;&#x30E9;&#x3068; FLRT3 &#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3002;

&#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC; &#xACBD;&#xB85C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; &#xC751;&#xB2F5; transcriptional &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xACFC; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeletal &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC815;&#xB82C;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB4F1;&#xC744; &#xC120;&#xB3C4;. Diarrheagenic &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; Enteropathogenic &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; (EPEC)&#xC640; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; Enterohemorrhagic E&#xB97C; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0; (EHEC) &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xBD80;&#xCC29; &#xD558; &#xACE0; effector &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC885;&#xB958; III &#xBD84; &#xBE44; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC8FC;&#xC785; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xC7A5; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD45C;&#xBA74;&#xC5D0; effacing &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton &#xD30C;&#xAD34;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xB9D0; &#xC804; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638;&#xC5D0; &#xC138;&#xADE0;&#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB9D0; &#xD608; &#xCCAD; &#xBC18;&#xC751; &#xACC4;&#xC218; (SRF) &#xB9D0;&#xB77C; cytoskeleton&#xC758; &#xADDC;&#xCE59;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xACF5;&#xB3D9; &#xC778;&#xC790; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; EPEC &#xB9D0; GFP&#xC758; &#xD575; &#xCD95;&#xC801; &#xC720;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC;. Translocated intimin &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xAC00;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801; &#xC774;&#xBA70; 454&#xC640; 474 &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC794;&#xB958;&#xBB3C;&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. SRF&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xD65C;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; FLRT3, C22orf28 &#xBC0F; tesk1&#xC744; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC2DD; &#xD654;&#xBA74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;. &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740; &#xC6B0;&#xB9AC; ABRA (&#xB9D0;&#xB77C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; Rho &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xBCC4;&#xC774; &#xB77C;&#xACE0;&#xB3C4;) &#xB9D0; &#xC911; &#xD575; &#xCD95;&#xC801; EPEC &#xC720;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC18C;&#xC124; SRF &#xD65C;&#xC131; &#xC81C; FLRT3,&#xC774; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB354; ABRA EPEC &#xBC1B;&#xCE68;&#xB300;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xC911;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4; &#xC785;&#xC99D;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; cytoskeleton &#xB9D0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xC2E0;&#xD638; &#xC804;&#xB2EC;&#xC758; &#xC18C;&#xC124; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C; &#xD3ED;&#xB85C;.

EPEC &#xAC10;&#xC5FC; &#xB9D0; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC758; &#xC138;&#xADE0; &#xBC0F; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xACB0;&#xC815; &#xC694;&#xC778;: &#xC0AC;&#xACA9;, &#xC0C1;&#xC790;, &#xBC0F; flrt3&#xC758; &#xC5ED;&#xD560;.

Infecci&oacute;n de las c&eacute;lulas del hu&eacute;sped por disparadores de microbios pat&oacute;genos conduce a una multitud de las respuestas de la c&eacute;lula anfitri&oacute;n como reorganizaci&oacute;n citoesqueleto de actina y programas transcripcionales de v&iacute;as de transducci&oacute;n de la se&ntilde;al. Los pat&oacute;genos de patotipos de Escherichia coli enteropat&oacute;geno (EPEC) y los relacionados con Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) subvertir el citoesqueleto de actina de la c&eacute;lula hu&eacute;sped para formar asociar y deformando las lesiones en la superficie de las c&eacute;lulas epiteliales intestinales mediante la inyecci&oacute;n de prote&iacute;nas efectoras mediante un tipo de sistema de secreci&oacute;n III. Aqu&iacute; utilizamos un ensayo de translocaci&oacute;n de MAL para establecer el efecto de bacterias pat&oacute;genas en la se&ntilde;alizaci&oacute;n a la activaci&oacute;n del factor de transcripci&oacute;n de la c&eacute;lula hu&eacute;sped. MAL es un cofactor del factor de respuesta s&eacute;rica (SRF), un factor de transcripci&oacute;n con papeles importantes en la regulaci&oacute;n del citoesqueleto de actina. Mostramos que EPEC induce acumulaci&oacute;n nuclear de MAL-GFP. El receptor intimin translocados es esencial para este proceso y fosforilaci&oacute;n de residuos de tirosina 454 y 474 es importante. Utilizando una pantalla de expresi&oacute;n identificamos FLRT3, C22orf28 y TESK1 como novela activadores de SRF. Lo importante es que demostramos que ABRA (prote&iacute;na de Rho-activaci&oacute;n de uni&oacute;n a actina, tambi&eacute;n conocida como estrellas) es necesario para la acumulaci&oacute;n nuclear inducida por EPEC de MAL y el activador SRF novela FLRT3, es un componente de esta v&iacute;a. Adem&aacute;s, demostramos que ABRA es importante para el mantenimiento estructural de EPEC pedestales. Nuestros resultados descubren nuevos componentes en pat&oacute;geno activado citoesqueleto se&ntilde;alizaci&oacute;n a la activaci&oacute;n de MAL.

Robert J. W. Heath

Center for Computational and Integrative Biology

Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Robert J. W. Heath

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Center for Computational and Integrative Biology

Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School

Use of an Optical Trap for Study of Host-Pathogen Interactions for Dynamic Live Cell Imaging

Center for Computational and Integrative Biology