A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from <em>Anopheles</em> spp.

Endemic countries are increasingly adopting molecular tools for  efficient typing, identification and surveillance against malaria parasites and  vector ...

Malaria Institute at Macha

&#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x6297;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x76D1;&#x6D4B;&#x662F;&#x759F;&#x75BE;&#x63A7;&#x5236;&#x7684;&#x91CD;&#x5927;&#x52AA;&#x529B;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x5BF9;&#x6BD4; antifolate &#x6297;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x7684;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#xFF0C;&#x5F53;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x7684;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x4E0E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x75C5;&#x75C5;&#x5A92;&#x868A;&#x4ECE;&#x7761;&#x5728;&#x519C;&#x6751;&#x8D5E;&#x6BD4;&#x4E9A;&#x5C0F;&#x5C4B;&#x4F5C;&#x4E86;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;DNA &#x7F16;&#x7801;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x4E8C;&#x6C22;&#x53F6;&#x9178;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; (EC 1.5.1.3) &#x662F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x9650;&#x5236;&#x9176;&#x6D88;&#x89E3; pcr &#x6269;&#x589E;&#x3002;&#x660E;&#x663E;&#x6D41;&#x884C;&#x4E59;&#x80FA;&#x5627;&#x5576;&#x8010;&#x836F;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x663E;&#x800C;&#x6613;&#x89C1;&#xFF1A; &#x4EBA;&#x7C7B;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3; &mdash; &mdash; S108N (&gt; 90%)&#x3001; N51I&#x3001; C59R&#xFF0C;&#x4E0E; 108N + 51I + 59R &#x4E09;&#x500D;&#x7A81;&#x53D8; (30-80%)&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x963B;&#x529B;&#x6C34;&#x5E73;&#x53EF;&#x80FD;&#x4ECE;&#x9009;&#x62E9;&#x538B;&#x529B;&#x56E0;&#x5728;&#x8BE5;&#x533A;&#x57DF;&#x4E2D;&#x7684;&#x78FA;&#x80FA;/&#x4F7F;&#x7528;&#x51E0;&#x5341;&#x5E74;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;cycloguanil &#x8010;&#x836F;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x4E2D;&#x53D1;&#x73B0;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x4ECE;&#x4EBA;&#x4F53;&#x8840;&#x6DB2;&#x6837;&#x672C;-S108T &#xFF08;13%&#xFF09;&#xFF0C;&#x5728;&#x975E;&#x5E38;&#x4F4E;&#x9891;&#x7387;&#x4E0E; A16V &#x548C; 108T + 16V &#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; (&sim;4%)&#x3002;&#x5947;&#x602A;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E59;&#x80FA;&#x5627;&#x5576;&#x8010;&#x836F;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x53D1;&#x75C5;&#x7387;&#x5F88;&#x4F4E; (2-12%) &#x4E2D;&#x7684;&#x6309;&#x868A; arabiensis &#x80A0;&#x868A;&#x5B50;&#xFF0C;&#x4F46; cycloguanil &#x8010;&#x836F;&#x7A81;&#x53D8;&#x682A;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x88AB;&#x666E;&#x904D; S108T (90%)&#xFF0C;&#x4E0E; A16V &#x548C; 108T + 16V &#x53CC;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53; (49-57%&#xFF09;&#x3002;&#x7845;&#x5EFA;&#x6A21;&#x4E2D;&#x4E8C;&#x6C22;&#x53F6;&#x9178;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A;&#x5185; NADPH &#x7ED1;&#x5B9A;&#x53E3;&#x888B;&#x91CC;&#xFF0C;&#x9884;&#x6D4B; S108N &#x9176;&#xFF0C;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x7A33;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x4F46; S108T &#x9176;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x4E86;&#x7A33;&#x5B9A;&#x9176;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x533A;&#x522B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x51FA;&#x7ED3;&#x8BBA;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x80FD;&#x627F;&#x53D7;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x7279;&#x5B9A;&#x4E8E;&#x4E3B;&#x673A;&#x7684;&#x8010;&#x836F;&#x57FA;&#x56E0;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#xFF0C;&#x6700;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x53CD;&#x6620;&#x51FA;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x538B;&#x529B;&#x5B58;&#x5728;&#x4E8E;&#x4EBA;&#x4F53;&#x548C;&#x868A;&#x5B50;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5B83;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x6709;&#x7528;&#x4EBA;&#x6743;&#x548C;&#x868A;&#x5B50;&#x8FDB;&#x884C;&#x62BD;&#x6837;&#x77E2;&#x91CF;&#x611F;&#x67D3;&#x4E3A;&#x4E86;&#x51C6;&#x786E;&#x5730;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684;&#x8010;&#x836F;&#x57FA;&#x56E0;&#x6D41;&#x884C;&#x75C5;&#x5B66;&#x72B6;&#x6001;&#x3002;

&#x759F;&#x75BE; antifolate &#x62B5;&#x6297;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x6076;&#x6027;&#x759F;&#x539F;&#x866B;&#x4E8C;&#x6C22;&#x53F6;&#x9178;&#x8FD8;&#x539F;&#x9176; (DHFR) &#x591A;&#x6001;&#x6027;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x548C;&#x868A;&#x5F62;&#x6210;&#x4E86;&#x9C9C;&#x660E;&#x5BF9;&#x6BD4;&#x3002;

Surveillance for drug-resistant parasites in human blood is a major effort in malaria control. Here we report contrasting antifolate resistance polymorphisms in Plasmodium falciparum when parasites in human blood were compared with parasites in Anopheles vector mosquitoes from sleeping huts in rural Zambia. DNA encoding P. falciparum dihydrofolate reductase (EC 1.5.1.3) was amplified by PCR with allele-specific restriction enzyme digestions. Markedly prevalent pyrimethamine-resistant mutants were evident in human P. falciparum infections--S108N (>90%), with N51I, C59R, and 108N+51I+59R triple mutants (30-80%). This resistance level may be from selection pressure due to decades of sulfadoxine/pyrimethamine use in the region. In contrast, cycloguanil-resistant mutants were detected in very low frequency in parasites from human blood samples-S108T (13%), with A16V and 108T+16V double mutants (âˆ¼4%). Surprisingly, pyrimethamine-resistant mutants were of very low prevalence (2-12%) in the midguts of Anopheles arabiensis vector mosquitoes, but cycloguanil-resistant mutants were highly prevalent-S108T (90%), with A16V and the 108T+16V double mutant (49-57%). Structural analysis of the dihydrofolate reductase by in silico modeling revealed a key difference in the enzyme within the NADPH binding pocket, predicting the S108N enzyme to have reduced stability but the S108T enzyme to have increased stability. We conclude that P. falciparum can bear highly host-specific drug-resistant polymorphisms, most likely reflecting different selective pressures found in humans and mosquitoes. Thus, it may be useful to sample both human and mosquito vector infections to accurately ascertain the epidemiological status of drug-resistant alleles.

Malaria antifolate resistance with contrasting Plasmodium falciparum dihydrofolate reductase (DHFR) polymorphisms in humans and Anopheles mosquitoes.

La surveillance de la pharmaco-r&#xE9;sistantes de parasites dans le sang humain est un effort majeur dans la lutte antipaludique. Nous rapportons ici contrastant polymorphismes r&#xE9;sistance antifolates dans Plasmodium falciparum o&#xF9; les parasites dans le sang humain ont &#xE9;t&#xE9; compar&#xE9;s par des parasites chez Anopheles moustiques vecteurs de dormir huttes en Zambie rurale. ADN codant pour la dihydrofolate r&#xE9;ductase de P. falciparum (CE 1.5.1.3) a &#xE9;t&#xE9; amplifi&#xE9; par PCR avec l&#x26;#39;all&#xE8;le-sp&#xE9;cifiques digestions d&#x26;#39;enzymes de restriction. Nettement pr&#xE9;valentes pyrim&#xE9;thamine mutants r&#xE9;sistants &#xE9;taient &#xE9;videntes dans l&#x26;#39;homme infections &#xE0; P. falciparum - S108N (&#x26;gt; 90%), avec N51I, C59R, et 108N +51 +59 I mutants Triple R (30-80%). Ce niveau de r&#xE9;sistance peut &#xEA;tre de la pression de s&#xE9;lection due &#xE0; des d&#xE9;cennies de la sulfadoxine / pyrim&#xE9;thamine utilisation dans la r&#xE9;gion. En revanche, le cycloguanil mutants r&#xE9;sistants ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;s dans de tr&#xE8;s basse fr&#xE9;quence chez les parasites du sang humain &#xE9;chantillons-S108T (13%), avec A16V et 108T +16 V doubles mutants (~ 4%). &#xC9;tonnamment, la pyrim&#xE9;thamine-mutants r&#xE9;sistants &#xE9;taient de la pr&#xE9;valence tr&#xE8;s faible (2-12%) dans les estomacs d&#x26;#39;Anopheles arabiensis vecteur les moustiques, mais cycloguanil mutants r&#xE9;sistants &#xE9;taient tr&#xE8;s r&#xE9;pandus-S108T (90%), avec A16V et le +16 V 108T double mutant (49-57%). Analyse structurelle de la dihydrofolate r&#xE9;ductase par la mod&#xE9;lisation in silico a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; une diff&#xE9;rence cl&#xE9; dans l&#x26;#39;enzyme NADPH dans la poche de liaison, la pr&#xE9;diction de l&#x26;#39;enzyme S108N avoir r&#xE9;duit la stabilit&#xE9;, mais l&#x26;#39;enzyme S108T avoir une stabilit&#xE9; accrue. Nous concluons que P. falciparum peut supporter tr&#xE8;s sp&#xE9;cifiques de l&#x26;#39;h&#xF4;te r&#xE9;sistant aux m&#xE9;dicaments polymorphismes, tr&#xE8;s probablement refl&#xE9;tant des pressions s&#xE9;lectives trouv&#xE9;es chez l&#x26;#39;homme et les moustiques. Ainsi, il peut &#xEA;tre utile pour d&#xE9;guster les infections vectorielles &#xE0; la fois l&#x26;#39;homme et le moustique de conna&#xEE;tre avec pr&#xE9;cision la situation &#xE9;pid&#xE9;miologique de pharmaco-r&#xE9;sistantes all&#xE8;les.

R&#xE9;sistance antifolate paludisme contrastant avec Plasmodium Falciparum dihydrofolate r&#xE9;ductase (DHFR) Polymorphismes chez les humains et les moustiques anoph&#xE8;les

&Uuml;berwachung der Medikamenten-resistenten Parasiten im menschlichen Blut ist eine gro&szlig;e Anstrengung in Malariabek&auml;mpfung. Hier berichten wir, kontrastierenden struktur&auml;hnliche Widerstand Polymorphismen in Plasmodium Falciparum Parasiten im menschlichen Blut mit Parasiten in der Anopheles-M&uuml;cke Vektor vom schlafen H&uuml;tten in l&auml;ndlichen Sambia verglichen wurden. DNA Kodierung p. Falciparum Dihydrofolate Reduktase (EG 1.5.1.3) wurde mit Allel-spezifische Beschr&auml;nkung Enzym Verdauung durch PCR verst&auml;rkt. Deutlich vorherrschende Pyrimethamin-resistente Mutanten zeigten sich in menschlichen p. Falciparum Infektionen--S108N (&gt; 90 %), mit N51I, C59R und 108N + 51I + 59R verdreifachen Mutanten (30-80 %). Dieser Widerstand kann von Selektionsdruck aufgrund jahrzehntelanger Sulfadoxine/Pyrimethamin-Einsatz in der Region wird. Im Gegensatz dazu wurden Cycloguanil-resistente Mutanten in sehr niedriger Frequenz in Parasiten aus menschlichem Blut Proben-S108T (13 %), mit A16V und 108T + 16V entdeckt doppelte Mutanten (&sim;4 %). &Uuml;berrascht Pyrimethamin-resistente Mutanten waren sehr niedrigen Pr&auml;valenz (2-12 %) in der Midguts von Anopheles Arabiensis Vektor M&uuml;cken, aber Cycloguanil-resistenten Mutanten sehr weit verbreitet-S108T (90 %) waren, mit A16V und 108T + 16V Doppel Mutant (49-57 %). Strukturanalyse von der Dihydrofolate Reduktase durch in Silico Modellierung ergab einen entscheidender Unterschied in das Enzym innerhalb der NADPH Bindung Tasche, Vorhersage, das S108N Enzym Stabilit&auml;t verringert haben, aber das S108T Enzym Stabilit&auml;t erh&ouml;ht zu haben. Wir schlie&szlig;en, dass p. Falciparum hoch Host-spezifischen Medikamenten-resistente Polymorphismen, ertragen kann h&ouml;chstwahrscheinlich reflektieren verschiedene selektive Dr&uuml;cke, die bei Menschen und M&uuml;cken gefunden. Also es kann sinnvoll sein, probieren Sie Mensch und Moskito Vektor Infektionen den epidemiologischen Status der Medikamenten-resistenten Allele genau festzustellen.

Malaria struktur&auml;hnliche Widerstand mit kontrastierenden Plasmodium Falciparum Dihydrofolate Reduktase (DHFR) Polymorphismen in der Mensch und die Anopheles-M&uuml;cke.

Sorveglianza per parassiti resistenti ai farmaci nel sangue umano &egrave; un grande sforzo nel controllo di malaria. Qui riportiamo polimorfismi antifolate resistenza a Plasmodium falciparum in contrasto quando parassiti nel sangue umano sono stati confrontati con parassiti nelle zanzare vettore Anopheles da dormire capanne in Zambia rurale. DNA codifica p. falciparum diidrofolato reduttasi (CE 1.5.1.3) &egrave; stato amplificato mediante PCR con enzima di restrizione di allele-specific digestioni. Nettamente prevalente mutanti resistenti pirimetamina erano evidenti nelle infezioni da p. falciparum umano - S108N (&amp;gt; 90%), con N51I, C59R e 108N + 51icomunica + 59R tripla mutanti (30-80%). Questo livello di resistenza pu&ograve; essere dalla pressione di selezione a causa di decenni di impiego sulfadossina/pirimetamina nella regione. Al contrario, mutanti resistenti alla cycloguanil sono stati rilevati in very low frequency in parassiti da campioni di sangue umano-S108T (13%), con A16V e 108T + 16V doppio mutanti (% &sim;4). Sorprendentemente, mutanti resistenti alla pirimetamina erano di prevalenza molto bassa (2-12%) nell&#39;intestino medio di Anopheles arabiensis zanzare vettore, ma mutanti resistenti alla cycloguanil erano altamente prevalente-S108T (90%), con A16V e il 108T + 16V doppio mutante (49-57%). Analisi strutturale della diidrofolato reduttasi da in silico modellazione ha rivelato una differenza fondamentale nell&#39;enzima all&#39;interno della tasca di legame NADPH, predire l&#39;enzima S108N di aver ridotto la stabilit&agrave;, ma l&#39;enzima S108T per avere maggiore stabilit&agrave;. Possiamo concludere che p. falciparum pu&ograve; sopportare altamente specifico per l&#39;host polimorfismi farmaco-resistenti, probabilmente riflettendo diverse pressioni selettive trovati in esseri umani e le zanzare. Cos&igrave;, pu&ograve; essere utile a campione sia umani e zanzare vettore di infezioni per accertare con precisione la situazione epidemiologica di alleli farmaco-resistenti.

Resistenza antifolate malaria con contrasto Plasmodium falciparum diidrofolato reduttasi (DHFR) polimorfismi in esseri umani e le zanzare Anopheles.

&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x30B5;&#x30FC;&#x30D9;&#x30A4;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x4F5C;&#x696D;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x8840;&#x6DB2;&#x4E2D;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306F;&#x3001;&#x5730;&#x65B9;&#x30B6;&#x30F3;&#x30D3;&#x30A2;&#x306E;&#x5C0F;&#x5C4B;&#x3092;&#x7720;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304B;&#x3089;&#x868A;&#x5A92;&#x4ECB;&#x868A;&#x306E;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3068;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306E;&#x8449;&#x9178;&#x62B5;&#x6297;&#x591A;&#x578B;&#x3092;&#x5BFE;&#x6BD4;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;DNA&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x8449;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;EC 1.5.1.3&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5BFE;&#x7ACB;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5236;&#x9650;&#x9175;&#x7D20;&#x6D88;&#x5316;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;PCR&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5897;&#x5E45;&#x3057;&#x305F;&#x3002; N51I&#x3001;C59R&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;108N 51 I 59 R 3&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;30&#x301C;80&#xFF05;&#xFF09;&#x3067;&#x3001;S108N&#xFF08;&#x26;gt; 90&#xFF05;&#xFF09; - &#x8457;&#x3057;&#x304F;&#x666E;&#x53CA;&#x30D4;&#x30EA;&#x30E1;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x3067;&#x9855;&#x8457;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x62B5;&#x6297;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F;&#x3001;&#x5730;&#x57DF;&#x306E;&#x30B9;&#x30EB;&#x30D5;&#x30A1;&#x30C9;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;/&#x30D4;&#x30EA;&#x30E1;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x6570;&#x5341;&#x5E74;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x9078;&#x629E;&#x5727;&#x304B;&#x3089;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;cycloguanil&#x8010;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;A16V&#x3068;108T +16 V&#x306E;&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#xFF08;&#x301C;4&#xFF05;&#xFF09;&#x3067;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x8840;&#x6DB2;&#x8A66;&#x6599;-S108T&#xFF08;13&#xFF05;&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E;&#x983B;&#x5EA6;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x9A5A;&#x304F;&#x3079;&#x304D;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x30D4;&#x30EA;&#x30E1;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x8010;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;&#x30CF;&#x30DE;&#x30C0;&#x30E9;&#x30AB;arabiensis&#x5A92;&#x4ECB;&#x868A;&#x306E;&#x4E2D;&#x8178;&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x6709;&#x75C5;&#x7387;&#xFF08;2-12&#xFF05;&#xFF09;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;cycloguanil&#x8010;&#x6027;&#x5909;&#x7570;&#x306F;&#x3001;A16V&#x3068;108T +16 V&#x4E8C;&#x91CD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3067;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x666E;&#x53CA;&#x3057;&#x3066;-S108T&#xFF08;90&#xFF05;&#xFF09;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#xFF08;49&#x304B;&#x3089;57&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#xFF09;&#x3002; silico&#x3067;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x8449;&#x9178;&#x9084;&#x5143;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;S108T&#x9175;&#x7D20;&#x304C;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;S108N&#x9175;&#x7D20;&#x3092;&#x4E88;&#x6E2C;&#x3057;&#x3001;NADPH&#x7D50;&#x5408;&#x30DD;&#x30B1;&#x30C3;&#x30C8;&#x5185;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x306F;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x56FA;&#x6709;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x591A;&#x578B;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x3068;&#x868A;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x6700;&#x3082;&#x9AD8;&#x3044;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x9078;&#x629E;&#x5727;&#x306B;&#x8010;&#x3048;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3068;&#x7D50;&#x8AD6;&#x4ED8;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x6B63;&#x78BA;&#x306B;&#x85AC;&#x5264;&#x8010;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x72B6;&#x6CC1;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x4EBA;&#x9593;&#x3068;&#x868A;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x30D9;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;&#x3092;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x4FBF;&#x5229;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;

&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306A;&#x71B1;&#x5E2F;&#x71B1;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x539F;&#x866B;&#x30B8;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x8449;&#x9178;&#x30EC;&#x30C0;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;DHFR&#xFF09;&#x30D2;&#x30C8;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x591A;&#x578B;&#x3068;&#x30CF;&#x30DE;&#x30C0;&#x30E9;&#x30AB;&#x868A;&#x3068;&#x30DE;&#x30E9;&#x30EA;&#x30A2;&#x8449;&#x9178;&#x62B5;&#x6297;

&#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC10;&#xC2DC; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB178;&#xB825; &#xC774;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC790;&#xB294; &#xC7A0;&#xBE44;&#xC544;&#xC758; &#xC2DC;&#xACE8; &#xC624;&#xB450;&#xB9C9;&#xC5D0;&#xC11C; Anopheles &#xBCA1;&#xD130; &#xBAA8;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xD588;&#xB2E4; Plasmodium falciparum&#xC5D0; antifolate &#xC800;&#xD56D; polymorphisms &#xB300;&#xC870; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. DNA&#xC758; &#xC778;&#xCF54;&#xB529; P. falciparum dihydrofolate reductase (EC 1.5.1.3) &#xB300;&#xB9BD; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xD2B9;&#xC815; &#xAE08;&#xC9C0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC18C;&#xD654;&#xC640; PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC99D;&#xD3ED; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC720;&#xD589; pyrimethamine &#xB0B4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC778;&#xAC04; P. falciparum &#xAC10;&#xC5FC;-s108n&#xC5D0;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xBA85; &#xD588;&#xB2E4; (&amp;gt; 90%), N51I, C59R, &#xBC0F; 108N + 51I + 59R &#xD2B8;&#xB9AC;&#xD50C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (30-80%). &#xC774; &#xC800;&#xD56D; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120;&#xD0DD; &#xC555;&#xB825; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC218;&#xC2ED; &#xB144;&#xAC04;&#xC774; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; sulfadoxine/pyrimethamine &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;, cycloguanil &#xB0B4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; a16v&#xC640; 108T + 16V &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xD608;&#xC561; &#xC0D8;&#xD50C;-S108T (13%)&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC5D0; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB41C; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (&sim;4%)&#xB97C; &#xB450; &#xBC88;. &#xB180;&#xB78D;&#xAC8C;&#xB3C4;, pyrimethamine &#xB0B4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; &#xBCF4;&#xAE09; (2-12%)&#xC758; Anopheles arabiensis&#xC758; midguts&#xC5D0;&#xC11C; cycloguanil &#xB0B4;&#xC131; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBCA1;&#xD130; &#xBAA8;&#xAE30; &#xD588;&#xB2E4; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB110;&#xB9AC; S108T (90%), a16v&#xC640; 108T + 16V &#xB354;&#xBE14; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; (49-57%). Silico &#xBAA8;&#xB378;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; dihydrofolate reductase&#xC758; &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC11D; S108N &#xD6A8;&#xC18C; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xAC10;&#xC18C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; S108T &#xD6A8;&#xC18C; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xC608;&#xCE21; &#xD558;&#xB294; NADPH &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC8FC;&#xBA38;&#xB2C8; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xD0A4; &#xCC28;&#xC774; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; &#xB2E4;&#xB978; &#xC120;&#xD0DD;&#xC801; &#xC555;&#xB825; &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xBAA8;&#xAE30;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC744; &#xBC18;&#xC601; &#xADF8; P. falciparum &#xB192;&#xC740; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD2B9;&#xC815; &#xC57D;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xC800;&#xD56D;&#xB825;&#xC774; polymorphisms &#xACAC;&#xB51C; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xACB0;&#xB860; &#xC9C0;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xBAA8;&#xAE30; &#xC0D8;&#xD50C;&#xB9C1;&#xC774; &#xC720;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218;&#xB3C4; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xBCA1;&#xD130; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB0B4;&#xC131; &#xB300;&#xB9BD; &#xC5ED;&#xD559; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xB97C; &#xC815;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xD655;&#xC778; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Plasmodium falciparum dihydrofolate reductase (DHFR) polymorphisms &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; Anopheles &#xBAA8;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300;&#xC870;&#xC640; &#xB9D0;&#xB77C;&#xB9AC;&#xC544; antifolate &#xC800;&#xD56D;.

La vigilancia de la droga-resistentes a los par&#xE1;sitos en la sangre humana es un esfuerzo importante en el control de la malaria. Aqu&#xED; mostramos que contrasta polimorfismos antifolatos de resistencia en los par&#xE1;sitos Plasmodium falciparum, cuando en la sangre humana se compararon con los par&#xE1;sitos en los mosquitos Anopheles vectores de dormir en caba&#xF1;as de zonas rurales de Zambia. ADN que codifica el P. falciparum dihidrofolato reductasa (CE 1.5.1.3) se amplific&#xF3; por PCR con alelo-espec&#xED;ficas digestiones de enzimas de restricci&#xF3;n. Marcadamente predominantes pirimetamina mutantes resistentes fueron evidentes en humanos infecciones por P. falciparum - S108N (&#x26;gt; 90%), con N51I, C59R, y 108N +51 +59 I mutantes R triples (30-80%). Este nivel de resistencia puede ser de la presi&#xF3;n de selecci&#xF3;n debido a d&#xE9;cadas de sulfadoxina / pirimetamina uso en la regi&#xF3;n. En contraste, cicloguanil mutantes resistentes se detectaron en frecuencia muy baja en los par&#xE1;sitos de la sangre humana muestras-S108T (13%), con A16V y 108T +16 V mutantes dobles (~ 4%). Sorprendentemente, los mutantes resistentes a la pirimetamina eran de muy baja prevalencia (2-12%) en el intestino medio de los mosquitos Anopheles arabiensis vector, pero cicloguanil mutantes resistentes tuvieron una alta prevalencia-S108T (90%), con A16V y el 108T +16 V doble mutante (49-57%). El an&#xE1;lisis estructural de la dihidrofolato reductasa por el modelado in silico revel&#xF3; una diferencia fundamental en la enzima en el bolsillo de uni&#xF3;n de NADPH, la predicci&#xF3;n de la enzima S108N haber reducido la estabilidad, pero la enzima S108T que ha aumentado la estabilidad. Llegamos a la conclusi&#xF3;n que el P. falciparum puede soportar gran acogida espec&#xED;ficos resistentes a los medicamentos polimorfismos, m&#xE1;s probable es que reflejen las distintas presiones selectivas que se encuentran en los seres humanos y los mosquitos. Por lo tanto, puede ser &#xFA;til para muestrear las infecciones vector tanto humanos como mosquitos para determinar con precisi&#xF3;n la situaci&#xF3;n epidemiol&#xF3;gica de los alelos resistentes a los f&#xE1;rmacos.

Malaria Resistencia Antifolato que contrastan con Plasmodium falciparum dihidrofolato reductasa (DHFR) Los polimorfismos en los seres humanos y los mosquitos Anopheles

Taida Kumwenda

Malaria Institute at Macha

A Simple Chelex Protocol for DNA Extraction from Anopheles spp.