Iterative Optimization of DNA Duplexes for Crystallization of SeqA-DNA Complexes

Escherichia coli SeqA is a negative regulator of DNA replication that prevents premature reinitiation events by sequestering hemimethylated GATC clusters ...

McMaster University 

Teichoic &#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x6A21;&#x5F0F;&#x751F;&#x7269;&#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7814;&#x7A76;&#x6210;&#x7ACB; teichoic &#x9178;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9633;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x58C1;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x7EC4;&#x6210;&#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x6709;&#x5173;&#x4EA7;&#x751F;&#x8010;&#x836F;&#x6027;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x5982;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x3001; &#x7A00;&#x5C11;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x6211;&#x4EEC;&#x5DF2;&#x8FDB;&#x884C;&#x7684; teichoic &#x9178;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x9176;&#x8FD8;&#x8BB0;&#x8F7D;&#x4E2D;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x5341;&#x5206;&#x7EC6;&#x81F4;&#x7684;&#x5BA1;&#x67E5;&#x3002;&#x6240;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x7B49;&#x4F4D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86; teichoic &#x9178;&#x5927;&#x4F1A;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x80DE;&#x5185;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x751F;&#x4EA7;&#x548C;&#x51FA;&#x53E3;&#x7684;&#x5404;&#x4E2A;&#x65B9;&#x9762;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4EE3;&#x7406;&#x9176; (&#x828B;&#x5934;) &#x589E;&#x957F;&#xFF0C;&#x800C;&#x5728;&#x67AF;&#x8349;&#x4E2D;&#x8FD8;&#x8BB0;&#x8F7D;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x524D;&#x63D0;&#x3002;&#x540E;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x8868;&#x5F81;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8868;&#x660E;&#x4EE5;&#x540E;&#x4EE3;&#x7406;&#x57FA;&#x56E0;&#x4EA7;&#x54C1; &#xFF08;&#x5C5E;&#x3001; &#x62A5;&#x9053;&#x3001; &#x56E2;&#x8D39;&#x3001; TarIJ &#x548C; TarH&#xFF09; &#x8D1F;&#x8D23;&#x805A;&#x5408;&#x7269;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x51FA;&#x53E3;&#x662F;&#x751F;&#x5B58;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x901A;&#x8FC7;&#x5C55;&#x793A;&#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x663E;&#x7136;&#x662F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6216;&#x7F3A;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x53D8;&#x5F97;&#x53EF;&#x6709;&#x53EF;&#x65E0;&#x828B;&#x5934;&#x7A7A;&#x9057;&#x4F20;&#x80CC;&#x666F;&#x4E2D;&#x89E3;&#x51B3;&#x8FD9;&#x4E00;&#x77DB;&#x76FE;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x8868;&#x660E;&#x4E00;&#x4E2A;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x589E;&#x76CA;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x673A;&#x5236;&#x4EE5;&#x5916;&#x5899; teichoic &#x9178;&#x751F;&#x7269;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E00;&#x6B65;&#x7684;&#x75C5;&#x53D8;&#x5448;&#x73B0;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x8D70;&#x4E0B;&#x5761;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E00;&#x53D1;&#x73B0;&#x6784;&#x6210;&#x57FA;&#x672C;&#x57FA;&#x56E0;&#x96C6;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x9AD8;&#x7B49;&#x751F;&#x7269;&#xFF0C;&#x548C;&#x9488;&#x5BF9;&#x665A;&#x6B65;&#x9AA4; teichoic &#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x4E3A;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x4F20;&#x67D3;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x7684;&#x65B0;&#x578B;&#x836F;&#x7269;&#x53D1;&#x5C55;&#x6218;&#x7565;&#x6307;&#x5411;&#x5355;&#x4E2A;&#x57FA;&#x56E0;&#x6572;&#x9664;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684;&#x4F20;&#x7EDF;&#x8BA4;&#x8BC6;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x3002;

Teichoic &#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x91D1;&#x9EC4;&#x8272;&#x8461;&#x8404;&#x7403;&#x83CC;&#x75C5;&#x53D8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x81F4;&#x547D;&#x589E;&#x76CA;&#x7684;&#x5426;&#x5219;&#x4E3A;&#x53EF;&#x6709;&#x53EF;&#x65E0;&#x7684;&#x901A;&#x8DEF;&#x4E2D;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;

An extensive study of teichoic acid biosynthesis in the model organism Bacillus subtilis has established teichoic acid polymers as essential components of the gram-positive cell wall. However, similar studies pertaining to therapeutically relevant organisms, such as Staphylococcus aureus, are scarce. In this study we have carried out a meticulous examination of the dispensability of teichoic acid biosynthetic enzymes in S. aureus. By use of an allelic replacement methodology, we examined all facets of teichoic acid assembly, including intracellular polymer production and export. Using this approach we confirmed that the first-acting enzyme (TarO) was dispensable for growth, in contrast to dispensability studies in B. subtilis. Upon further characterization, we demonstrated that later-acting gene products (TarB, TarD, TarF, TarIJ, and TarH) responsible for polymer formation and export were essential for viability. We resolved this paradox by demonstrating that all of the apparently indispensable genes became dispensable in a tarO null genetic background. This work suggests a lethal gain-of-function mechanism where lesions beyond the initial step in wall teichoic acid biosynthesis render S. aureus nonviable. This discovery poses questions regarding the conventional understanding of essential gene sets, garnered through single-gene knockout experiments in bacteria and higher organisms, and points to a novel drug development strategy targeting late steps in teichoic acid synthesis for the infectious pathogen S. aureus.

Lesions in teichoic acid biosynthesis in Staphylococcus aureus lead to a lethal gain of function in the otherwise dispensable pathway.

Une &eacute;tude approfondie de la biosynth&egrave;se de l&#39;acide teicho&iuml;que chez l&#39;organisme mod&egrave;le Bacillus subtilis a &eacute;tabli des polym&egrave;res acide teicho&iuml;que comme des composantes essentielles de la paroi cellulaire Gram positive. Toutefois, des &eacute;tudes similaires se rapportant aux organismes th&eacute;rapeutiquement pertinentes, telles que Staphylococcus aureus, sont rares. Dans cette &eacute;tude, nous avons effectu&eacute; un examen minutieux de la dispense d&#39;enzymes de biosynth&egrave;se acide teicho&iuml;que chez S. aureus. En utilisant une m&eacute;thode de remplacement all&eacute;lique, nous avons examin&eacute; toutes les facettes de l&#39;Assembl&eacute;e acide teicho&iuml;que, y compris l&#39;exportation et la production de polym&egrave;res intracellulaire. En utilisant cette approche, nous avons confirm&eacute; que la premi&egrave;re action enzymatique (TarO) &eacute;tait indispensable pour la croissance, contrairement aux &eacute;tudes de dispense chez b. subtilis. Sur plus de caract&eacute;risation, nous avons d&eacute;montr&eacute; que produits g&egrave;ne action ult&eacute;rieure (TarB, TarD, TarF, TarIJ et Tetai) responsables de l&#39;exportation et de la formation du polym&egrave;re sont essentiels pour la viabilit&eacute;. Nous avons r&eacute;solu ce paradoxe en d&eacute;montrant que tous les g&egrave;nes apparemment indispensables est devenu indispensable dans le bagage g&eacute;n&eacute;tique null tarO. Ce travail sugg&egrave;re un m&eacute;canisme de gain de fonction l&eacute;tal o&ugrave; les l&eacute;sions au-del&agrave; de l&#39;&eacute;tape initiale dans la biosynth&egrave;se de l&#39;acide teicho&iuml;que mur rendent S. aureus non viables. Cette d&eacute;couverte pose des questions au sujet de l&#39;accord conventionnel des ensembles de g&egrave;nes essentiels, amass&eacute;s gr&acirc;ce &agrave; des exp&eacute;riences de knock-out seul g&egrave;ne chez les bact&eacute;ries et organismes sup&eacute;rieurs et pointe vers une strat&eacute;gie de d&eacute;veloppement de nouveaux m&eacute;dicaments ciblant les &eacute;tapes fin dans la synth&egrave;se de l&#39;acide teicho&iuml;que pour les agents pathog&egrave;nes infectieux S. aureus.

L&eacute;sions dans la biosynth&egrave;se de l&#39;acide teicho&iuml;que chez Staphylococcus aureus conduisent &agrave; un gain l&eacute;tal de fonction dans la voie contraire dispensable.

Eine umfassende Studie zur Teichoic S&auml;ure-Biosynthese in den Modellorganismus Bacillus Subtilis etablierte Teichoic S&auml;ure Polymere als wesentliche Bestandteile der Gram-positiven Zellwand. &Auml;hnliche Studien im Zusammenhang mit therapeutisch relevanter Organismen, wie Staphylococcus Aureus, sind jedoch knapp. In dieser Studie haben wir eine sorgf&auml;ltige Pr&uuml;fung der Entbehrlichkeit Teichoic saure biosynthetischen Enzyme in S. Aureus durchgef&uuml;hrt. Durch Verwendung einer allelische Ersatz-Methodik haben wir alle Facetten der sauren Teichoic Assembly, einschlie&szlig;lich intrazellul&auml;re Polymerproduktion und Export gepr&uuml;ft. Mit diesem Ansatz best&auml;tigt wir wurde, dass das erste wirkende Enzym (TarO) f&uuml;r Wachstum, im Gegensatz zu Entbehrlichkeit Studien in B. Subtilis entbehrlich. Nach weiteren Charakterisierung zeigten wir, dass sp&auml;ter wirkende Genprodukte (TarB, TarD, TarF, TarIJ und TarH) f&uuml;r Polymer-Bildung und Export zust&auml;ndig f&uuml;r die Rentabilit&auml;t entscheidend waren. Wir l&ouml;sen dieses Paradoxon demonstriert, dass all die scheinbar unverzichtbaren Gene in einem Tar&#x14D; null genetischen Hintergrund entbehrlich wurde. Diese Arbeit schl&auml;gt einen t&ouml;dlichen Gain of Function-Mechanismus, wo L&auml;sionen jenseits der erste Schritt in Mauer Teichoic saure Biosynthese S. Aureus nicht lebensf&auml;higes rendern. Diese Entdeckung stellt Fragen &uuml;ber das herk&ouml;mmliche Verst&auml;ndnis der wesentlichen gen-Sets, erregt durch Einzel-Gen-Knockout-Experimente in Bakterien und h&ouml;heren Organismen und verweist auf eine neuartige Entwicklung Drogenstrategie Zielgruppenadressierung sp&auml;ten Schritte Teichoic saure Synthese der infekti&ouml;sen Erreger S. aureus.

L&auml;sionen im Teichoic saure Biosynthese in Staphylococcus Aureus dazu f&uuml;hren, dass eine t&ouml;dliche Gewinn der Funktion in der ansonsten entbehrlich Weg.

Uno studio approfondito della biosintesi acido teichoic nell&#39;organismo modello Bacillus subtilis ha stabilito teichoic acidi polimeri come componenti essenziali della parete delle cellule Gram-positivo. Tuttavia, studi simili riguardanti gli organismi terapeuticamente rilevanti, come Staphylococcus aureus, sono scarsi. In questo studio abbiamo svolto un esame meticoloso di invariate di enzimi biosintetici acido teichoic in S. aureus. Dall&#39;utilizzo di una metodologia di sostituzione allelica, abbiamo esaminato tutti gli aspetti del montaggio acido teichoic, compreso esportazione e produzione di polimero intracellulare. Utilizzando questo approccio ci ha confermato che il primo effetto enzima (TarO) &egrave; superfluo per la crescita, in contrasto con gli studi invariate in b. subtilis. Su ulteriore caratterizzazione, abbiamo dimostrato che agire successivamente prodotti del gene (TarB, TarD, TarF, TarIJ e TarH) responsabile per l&#39;esportazione e la formazione del polimero sono state essenziali per la viabilit&agrave;. Abbiamo risolto questo paradosso dimostrando che tutti i geni apparentemente indispensabili &egrave; diventato superflui in un background genetico null tarO. Questo lavoro suggerisce un meccanismo di guadagno di funzione letale dove lesioni oltre il passo iniziale nella biosintesi acido parete teichoic rendono di S. aureus non vitali. Questa scoperta pone domande riguardanti la comprensione convenzionale dei set di gene essenziale, ha raccolto attraverso esperimenti di singolo-gene knockout in batteri e organismi superiori e punti per una strategia di sviluppo romanzo drug targeting tardi passi nella sintesi di acido teichoic per l&#39;agente patogeno infettivo S. aureus.

Lesioni nella biosintesi acido teichoic in Staphylococcus aureus portano ad un guadagno di funzione nel percorso altrimenti dispensabile letale.

&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x751F;&#x7269;&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30BF;&#x30A4;&#x30B3;&#x9178;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30B3;&#x9178;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC; &#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x967D;&#x6027;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x58C1;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x306B;&#x4FC2;&#x308B;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x304C;&#x4E0D;&#x8DB3;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30BF;&#x30A4;&#x30B3;&#x9178;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x5206;&#x6563;&#x6027;&#x306E;&#x7DBF;&#x5BC6;&#x306A;&#x691C;&#x8A0E;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;.Allelic &#x4EA4;&#x63DB;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8AD6;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x306E;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x751F;&#x7523;&#x3001;&#x8F38;&#x51FA;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30BF;&#x30A4;&#x30B3;&#x9178;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x5074;&#x9762;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6211;&#x3005; &#x6700;&#x521D;&#x6F14;&#x6280;&#x9175;&#x7D20; (&#x592A;&#x90CE;) &#x304C;&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x975E;&#x7814;&#x7A76;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x66F4;&#x306B;&#x30AD;&#x30E3;&#x30E9;&#x30AF;&#x30BF;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BC;&#x30A4;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x8981;&#x5F8C;&#x6F14;&#x6280;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x7523;&#x7269; (TarB&#x3001;&#x3070;&#x304B;&#x8005;&#x3001;TarF&#x3001;TarIJ&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; TarH&#xFF09; &#x30DD;&#x30EA;&#x30DE;&#x30FC;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x8F38;&#x51FA;&#x3092;&#x62C5;&#x5F53;&#x304C;&#x751F;&#x5B58;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x3069;&#x3046;&#x3084;&#x3089;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x592A;&#x90CE; null &#x907A;&#x4F1D;&#x7684;&#x80CC;&#x666F;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3053;&#x306E;&#x30D1;&#x30E9;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x3092;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x696D;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x75C5;&#x5909;&#x58C1;&#x30BF;&#x30A4;&#x30B3;&#x9178;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x521D;&#x671F;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x8D85;&#x3048;&#x3066;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC;&#x3092;&#x6DD8;&#x6C70;&#x30EC;&#x30F3;&#x30C0;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x81F4;&#x6B7B;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7372;&#x5F97;&#x6A5F;&#x69CB;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x8CEA;&#x554F;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x7406;&#x89E3;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x3068;&#x9AD8;&#x3044;&#x751F;&#x7269;&#x3068;&#x30BF;&#x30A4;&#x30B3;&#x9178;&#x5408;&#x6210;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x6027;&#x75C5;&#x539F;&#x4F53;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC;&#x306E;&#x5F8C;&#x534A;&#x624B;&#x9806;&#x3092;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x65B0;&#x85AC;&#x958B;&#x767A;&#x6226;&#x7565;&#x306B;&#x30DD;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5358;&#x4E00;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30A2;&#x30A6;&#x30C8;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x7372;&#x5F97;&#x306E;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BA;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30A4;&#x30B3;&#x9178;&#x751F;&#x5408;&#x6210;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9EC4;&#x8272;&#x30D6;&#x30C9;&#x30A6;&#x7403;&#x83CC;&#x306E;&#x75C5;&#x5909;&#x306F;&#x81F4;&#x6B7B;&#x5229;&#x5F97;&#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x4EE5;&#x5916;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306B; &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xBAA8;&#xB378; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; teichoic &#xC0B0; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xADF8;&#xB78C; &#xC591;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCBD;&#xC758; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB85C; teichoic &#xC0B0; &#xC131; &#xACE0;&#xBD84;&#xC790;&#xB97C; &#xC124;&#xB9BD; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xD3EC;&#xB3C4; &#xC0C1; &#xAD6C; &#xADE0; &#xB4F1; &#xCE58;&#xB8CC; &#xAD00;&#xB828; &#xC0DD;&#xBB3C;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xBD80;&#xC871; &#xD55C;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; S. &#xAD6C; &#xADE0;&#xC5D0; teichoic &#xC0B0; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; &#xD6A8;&#xC18C; dispensability&#xC758; &#xC138;&#xC2EC; &#xD55C; &#xAC80;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB300;&#xCCB4; &#xBC29;&#xBC95; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xC218;&#xCD9C;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; teichoic &#xC0B0; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xC758; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xCE21;&#xBA74;&#xC744; &#xAC80;&#xC0AC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xD655;&#xC778; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC5F0;&#xAE30; &#xD6A8;&#xC18C; (&#xD0C0;&#xB85C;) B. subtilis&#xC5D0; dispensability &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; &#xD544;&#xC218; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xB098;&#xC911; &#xC5F0;&#xAE30; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC81C;&#xD488; (TarB, TarD, TarF, TarIJ, &#xBC0F; TarH) &#xD3F4;&#xB9AC;&#xBA38; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xB0B4;&#xBCF4;&#xB0B4;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCC45;&#xC784;&#xC740; &#xC0DD;&#xC874;&#xC744; &#xC704;&#xD574; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xBD84;&#xBA85;&#xD788; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB2E4;&#xB85C; null &#xC720;&#xC804;&#xC801; &#xBC30;&#xACBD;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD568;&#xC73C;&#xB85C;&#xC368;&#xC774; &#xC5ED;&#xC124;&#xC744; &#xD574;&#xACB0;. &#xC774; &#xC791;&#xD488; &#xC5B4;&#xB514; &#xBCBD; teichoic &#xC0B0; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xB118;&#xC5B4; &#xBCD1; &#xBCC0; &#xB80C;&#xB354;&#xB9C1; S. &#xAD6C; &#xADE0; &#xBBF8;&#xB2EC; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xD568;&#xC218; &#xC774;&#xB4DD; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAC80;&#xC0C9; &#xD544;&#xC218; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC9D1;&#xD569;, &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC640; &#xB192;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC804;&#xC5FC; &#xC131; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xCCB4; S. &#xAD6C; &#xADE0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; teichoic &#xC0B0; &#xD569;&#xC131;&#xC758; &#xD6C4;&#xBC18; &#xB2E8;&#xACC4;&#xB97C; &#xB300;&#xC0C1;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC57D;&#xBB3C; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xC804;&#xB7B5; &#xD3EC;&#xC778;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E8;&#xC77C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xB179;&#xC544;&#xC6C3; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xD68D;&#xB4DD; &#xD588;&#xB2E4;&#xC758; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xC774;&#xD574;&#xC5D0; &#xAD00;&#xD55C; &#xC9C8;&#xBB38; &#xD3EC;&#xC988;.

&#xC0B0; &#xC0DD; &#xD569;&#xC131; teichoic &#xD669;&#xC0C9; &#xD3EC;&#xB3C4; &#xC0C1; &#xAD6C; &#xADE0;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCD1; &#xBCC0;&#xC744; &#xB2EC;&#xB9AC; &#xBD88;&#xAC00;&#xACB0; &#xD1B5;&#xB85C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xC774;&#xB4DD;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9C8;.

Un extenso estudio de bios&iacute;ntesis de &aacute;cidos teicoicos en el organismo modelo Bacillus subtilis ha establecido pol&iacute;meros &aacute;cidos teicoicos como componentes esenciales de la pared celular gram-positiva. Sin embargo, estudios similares pertenecientes a organismos terap&eacute;uticamente relevantes, tales como Staphylococcus aureus, son escasos. En este estudio hemos realizado un examen meticuloso de la prescindibilidad de las enzimas biosint&eacute;ticas &aacute;cidos teicoicos en S. aureus. Por el uso de una metodolog&iacute;a de sustituci&oacute;n al&eacute;lica, examinamos todas las facetas de Asamblea &aacute;cidos teicoicos, incluyendo la exportaci&oacute;n y la producci&oacute;n del pol&iacute;mero intracelular. Usando esta aproximaci&oacute;n nos confirm&oacute; que la primera acci&oacute;n enzima (malanga) era prescindible para el crecimiento, en contraste con estudios de prescindibilidad en B. subtilis. Sobre m&aacute;s caracterizaci&oacute;n, demostramos que la posterior acci&oacute;n productos g&eacute;nicos (TarB, TarD, TarF, Tari y TarH) responsables de exportaci&oacute;n y la formaci&oacute;n de pol&iacute;meros eran esenciales para la viabilidad. Decidimos esta paradoja demostrando que todos los genes al parecer indispensables lleg&oacute; a ser prescindibles en un fondo gen&eacute;tico nulo de tarO. Este trabajo sugiere un mecanismo de ganancia de funci&oacute;n letal donde lesiones m&aacute;s all&aacute; del paso inicial en &aacute;cido bios&iacute;ntesis de pared teicoicos que S. aureus no viables. Este descubrimiento plantea preguntas sobre la comprensi&oacute;n convencional de conjuntos gen esencial, obtenidos a trav&eacute;s de experimentos de gen &uacute;nico nocaut en bacterias y organismos superiores y apunta a una estrategia de desarrollo de nuevos f&aacute;rmacos dirigidos a pasos finales en la s&iacute;ntesis de &aacute;cidos teicoicos para las infecciones pat&oacute;genas S. aureus.

Lesiones en la bios&iacute;ntesis de &aacute;cidos teicoicos en Staphylococcus aureus conducen a una letal ganancia de funci&oacute;n en el camino lo contrario prescindible.

SeqA &#x662F;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x901A;&#x8FC7;&#x87AF;&#x5408;&#x8D77;&#x6E90;&#x548C;&#x4FBF;&#x5229;&#x5176;&#x91CD;&#x7F6E;&#x540E;&#x542F;&#x52A8;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#x7684; DNA &#x590D;&#x5236;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x548C;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC;&#x4E2D;&#x8D1F;&#x8C03;&#x8282;&#x5668;&#x3002;SeqA &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5931;&#x6D3B;&#x5BFC;&#x81F4;&#x590D;&#x5236;&#x540C;&#x6B65;&#x7684;&#x8F6E;&#x3001; nucleoids &#x548C;&#x589E;&#x52A0;&#x8D1F; superhelicity &#x5F02;&#x5E38;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;&#x591A;&#x4F59;&#x7684; SeqA &#x4E5F;&#x6270;&#x4E71;&#x4E86;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x540C;&#x6B65;&#x6027;&#x548C;&#x5F71;&#x54CD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x3002;SeqA &#x901A;&#x8FC7;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#x7684;&#x6682;&#x6001; hemimethylated GATC &#x5E8F;&#x5217;&#x590D;&#x5236;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x751F;&#x6210;&#x7684;&#x96C6;&#x7FA4;&#x65BD;&#x52A0;&#x5176;&#x804C;&#x80FD;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x89E6;&#x53D1;&#x5F62;&#x6210;&#x548C;&#x53CD;&#x6C47;&#x7F16;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x5C1A;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x5EA7;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x4E32;&#x8054; hemimethylated GATC &#x7F51;&#x7AD9;&#x7684; SeqA [SeqADelta(41-59) A25R] &#x7A81;&#x53D8;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x9610;&#x8FF0;&#x4E86;&#x5982;&#x4F55; SeqA &#x5F62;&#x5F0F;&#x4E0E; DNA &#x9AD8;&#x4EB2;&#x548C;&#x6027;&#x590D;&#x6742;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x5728; SeqA &#x4E3A;&#x4EC0;&#x4E48;&#x53EA;&#x627F;&#x8BA4;&#x5728;&#x67D0;&#x4E9B;&#x95F4;&#x8DDD; GATC &#x7AD9;&#x70B9;&#x3002;SeqA-DNA &#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x8FD8;&#x63A8;&#x51FA;&#x4E86;&#x5176;&#x4ED6;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x8C03;&#x89E3;&#x7684;&#x5F62;&#x6210;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7684;&#x66F2;&#x9762;&#x547D;&#x4EE4;&#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x540E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x65B0;&#x590D;&#x5236; DNA&#x3002;&#x57FA;&#x4E8E;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x6570;&#x636E;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x63CF;&#x8FF0; SeqA &#x5982;&#x4F55;&#x4E0E;&#x65B0;&#x590D;&#x5236; DNA &#x5185;&#x8D77;&#x6E90;&#x7684;&#x590D;&#x5236;&#x548C;&#x590D;&#x5236;&#x53C9;&#x4E0A;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x7684;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

&#x7ED3;&#x6784;&#x6DF1;&#x5165;&#x5408;&#x4F5C;&#x7684; SeqA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; GATC &#x4E32;&#x8054;&#x91CD;&#x590D;&#x3002;

SeqA is a negative regulator of DNA replication in Escherichia coli and related bacteria that functions by sequestering the origin of replication and facilitating its resetting after every initiation event. Inactivation of the seqA gene leads to unsynchronized rounds of replication, abnormal localization of nucleoids and increased negative superhelicity. Excess SeqA also disrupts replication synchrony and affects cell division. SeqA exerts its functions by binding clusters of transiently hemimethylated GATC sequences generated during replication. However, the molecular mechanisms that trigger formation and disassembly of such complex are unclear. We present here the crystal structure of a dimeric mutant of SeqA [SeqADelta(41-59)-A25R] bound to tandem hemimethylated GATC sites. The structure delineates how SeqA forms a high-affinity complex with DNA and it suggests why SeqA only recognizes GATC sites at certain spacings. The SeqA-DNA complex also unveils additional protein-protein interaction surfaces that mediate the formation of higher ordered complexes upon binding to newly replicated DNA. Based on this data, we propose a model describing how SeqA interacts with newly replicated DNA within the origin of replication and at the replication forks.

Structural insights into the cooperative binding of SeqA to a tandem GATC repeat.

SeqA est un r&eacute;gulateur n&eacute;gatif de la r&eacute;plication de l&#39;ADN chez Escherichia coli et les bact&eacute;ries apparent&eacute;es qui fonctionne en s&eacute;questrant l&#39;origine de r&eacute;plication et en facilitant sa remise &agrave; z&eacute;ro apr&egrave;s chaque &eacute;v&eacute;nement d&#39;initiation. L&#39;inactivation du g&egrave;ne seqA m&egrave;ne &agrave; tours non synchronis&eacute;s de r&eacute;plication, localisation anormale de nucl&eacute;o&iuml;des et une augmentation de surenroulement n&eacute;gatif. SeqA exc&egrave;s aussi perturbe la synchronisation de la r&eacute;plication et affecte la division cellulaire. SeqA exerce ses fonctions en liant des grappes de transitoirement les s&eacute;quences GATC hemimethylated g&eacute;n&eacute;r&eacute;es lors de la r&eacute;plication. Cependant, les m&eacute;canismes mol&eacute;culaires qui d&eacute;clenchent la formation et le d&eacute;montage de ces complexes ne sont pas claires. Nous pr&eacute;sentons ici la structure cristalline d&#39;un mutant dim&egrave;re de SeqA [SeqADelta(41-59)-A25R] li&eacute;e aux sites GATC tandem hemimethylated. La structure d&eacute;finit comment SeqA forme un complexe de haute affinit&eacute; avec l&#39;ADN et il sugg&egrave;re pourquoi SeqA reconna&icirc;t uniquement les sites GATC &agrave; certaines distances. Le complexe ADN-SeqA d&eacute;voile &eacute;galement l&#39;interaction prot&eacute;ine-prot&eacute;ine additionnelle surfaces qui n&eacute;gocient la formation du sup&eacute;rieur a ordonn&eacute; complexes &agrave; lier &agrave; nouveau r&eacute;pliqu&eacute; ADN. D&#39;apr&egrave;s ces donn&eacute;es, nous vous proposons un mod&egrave;le d&eacute;crivant comment SeqA interagit avec l&#39;ADN nouvellement r&eacute;pliqu&eacute; dans l&#39;origine de r&eacute;plication et &agrave; la fourche de r&eacute;plication.

R&eacute;p&eacute;tez les aper&ccedil;us structurelles de la fixation coop&eacute;rative de SeqA &agrave; un tandem GATC.

SeqA ist ein negativer Regulator der DNA-Replikation in Escherichia coli und verwandte Bakterien, die durch absondern des Ursprungs der Replikation und die Erleichterung seiner R&uuml;ckstellung nach jeder Veranstaltung Einleitung wirkt. Inaktivierung des Gens SeqA f&uuml;hrt zu nicht synchronisierten Runden der Replikation, abnorme Lokalisierung von Nucleoids und erh&ouml;hte negative Superhelicity. &Uuml;bersch&uuml;ssige SeqA auch unterbricht Replikation synchron und Zellteilung beeinflusst. SeqA &uuml;bt seine Funktionen durch die Bindung von Clustern vor&uuml;bergehend Hemimethylated GATC Sequenzen w&auml;hrend der Replikation generiert. Die molekularen Mechanismen, die Bildung und Abbau von solchen komplexen ausl&ouml;sen sind jedoch unklar. Wir pr&auml;sentieren hier die Kristallstruktur von Dimeren Mutanten von SeqA [SeqADelta(41-59)-A25R] an Tandem Hemimethylated GATC Standorte gebunden. Die Struktur umrei&szlig;t wie SeqA bildet einen hoher Affinit&auml;t-Komplex mit DNA und es schl&auml;gt vor, warum SeqA erkennt nur GATC Websites auf bestimmte Abst&auml;nde. Der SeqA-DNA-Komplex stellt auch zus&auml;tzliche Protein-Protein-Interaktion bestellten Fl&auml;chen, die die Bildung von h&ouml;her zu vermitteln, dass komplexe beim Binden an neu DNA repliziert. Auf der Grundlage dieser Daten, schlagen wir ein Modell zur Beschreibung der Interaktion von SeqA mit neu replizierten DNA innerhalb der Ursprung der Replikation und bei der Replikation-Gabeln.

Strukturelle Einblicke in die kooperative Bindung des SeqA auf einem Tandem GATC wiederholen.

SeqA &egrave; un regolatore negativo della replicazione del DNA in Escherichia coli e batteri correlati che funzioni sequestrante l&#39;origine di replicazione e facilitando il ripristino dopo ogni evento di iniziazione. Inattivazione del gene seqA conduce a turni non sincronizzati di replica, localizzazione anomala di nucleoids e superhelicity negativo maggiore. SeqA in eccesso anche sconvolge la sincronia di replica e influisce sulla divisione cellulare. SeqA esercita le sue funzioni mediante l&#39;associazione cluster transitoriamente hemimethylated sequenze GATC generati durante la replica. Tuttavia, i meccanismi molecolari che attivano la formazione e lo smontaggio di tali complessi sono poco chiari. Vi presentiamo qui la struttura cristallina di un mutante dimerica di SeqA [SeqADelta(41-59)-A25R] associata ai siti GATC hemimethylated tandem. La struttura si delinea come SeqA forma un complesso ad alta affinit&agrave; con il DNA e suggerisce perch&eacute; SeqA riconosce solo siti GATC a determinate distanze. Il complesso DNA SeqA svela anche interazione proteina-proteina supplementare superfici che mediano la formazione di pi&ugrave; ordinato complessi su associazione a nuova replica del DNA. Basato su questi dati, vi proponiamo un modello che descrive come SeqA interagisce con il DNA appena replicato all&#39;interno l&#39;origine di replicazione e presso le forche di replicazione.

Intuizioni strutturali il legame cooperativo di SeqA a un tandem GATC ripetere.

&#x8907;&#x88FD;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x3092;&#x9694;&#x96E2;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x958B;&#x59CB;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x5F8C;&#x306E;&#x30EA;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x6A5F;&#x80FD; DNA &#x8907;&#x88FD;&#x95A2;&#x9023;&#x7D30;&#x83CC;&#x3068;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x3067;&#x306E;&#x8CA0;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x8907;&#x88FD;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E0D;&#x6D3B;&#x5316;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9; &#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x540C;&#x671F;&#x304C;&#x3068;&#x308C;&#x306A;&#x304F;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x6838;&#x69D8;&#x4F53;&#x3068;&#x5897;&#x52A0;&#x8CA0;&#x8D85;&#x3089;&#x305B;&#x3093;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x5C40;&#x5728;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x904E;&#x5270;&#x306A;&#x8907;&#x88FD;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x540C;&#x671F;&#x3092;&#x59A8;&#x5BB3;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8907;&#x88FD;&#x306F;&#x3001;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x4E2D;&#x306B;&#x751F;&#x6210; hemimethylated GATC &#x30B7;&#x30FC;&#x30B1;&#x30F3;&#x30B9;&#x4E00;&#x904E;&#x6027;&#x306E;&#x623F;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x767A;&#x63EE;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5206;&#x89E3;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x5206;&#x5B50;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0; hemimethylated GATC &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x8907;&#x88FD; [SeqADelta(41-59) A25R] &#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x8907;&#x88FD; DNA &#x3068;&#x306E;&#x9AD8;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x306F;&#x306A;&#x305C;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x307F; GATC &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x7279;&#x5B9A;&#x9593;&#x9694;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x8A8D;&#x8B58;&#x3092;&#x793A;&#x5506; delineates &#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8907;&#x88FD; DNA &#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3082;&#x65B0;&#x3057;&#x304F;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x6642;&#x932F;&#x4F53; DNA &#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x9AD8;&#x3044;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30FC;&#x30D5;&#x30A7;&#x30B9;&#x3092;&#x547D;&#x3058;&#x305F;&#x8FFD;&#x52A0;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x8907;&#x88FD;&#x5185;&#x8D77;&#x6E90;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8907;&#x88FD;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30AF;&#x3067;&#x65B0;&#x3057;&#x304F;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F; DNA &#x3068;&#x5BFE;&#x8A71;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;.

&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x5354;&#x540C;&#x7684;&#x7D50;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C7;&#x30E0; GATC &#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

SeqA &#xBCF5;&#xC81C; &#xC6D0;&#xC810; &#xBD09;&#xC1C4;&#xC640; &#xADF8; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC2DC;&#xC791; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xD6C4; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC124;&#xC815; &#xD558;&#xBA74; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC640; &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; DNA &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130; &#xC774;&#xB2E4;. SeqA &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB294; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB3D9;&#xAE30;&#xD654; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC740; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;, nucleoids &#xBC0F; &#xC99D;&#xAC00; &#xBD80;&#xC815;&#xC801;&#xC778; superhelicity&#xC758; &#xBE44;&#xC815;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654; &#xC774;&#xC5B4;&#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C; &#xCD08;&#xACFC; SeqA &#xBCF5;&#xC81C; synchrony &#xBC29;&#xD574; &#xD558; &#xACE0; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. SeqA transiently hemimethylated GATC &#xC2DC;&#xD000;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xC5EC; &#xADF8; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBC1C;&#xD718; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xD615;&#xC131; &#xBC0F; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC758; &#xD574;&#xCCB4;&#xB97C; &#xD2B8;&#xB9AC;&#xAC70;&#xD558;&#xB294; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB2E4;. &#xC120;&#xBB3C;&#xC774; &#xC5EC;&#xAE30; &#xD0E0;&#xB364; hemimethylated GATC &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; SeqA [SeqADelta(41-59) A25R] dimeric &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;. &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; SeqA &#xB192;&#xC740; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; DNA &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC65C; Seqa&#xB9CC; GATC &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD2B9;&#xC815; &#xAC04;&#xACA9;&#xC5D0; &#xC778;&#xC2DD; &#xC81C;&#xC548; &#xAD6C;&#xBD84;. SeqA DNA &#xBCF5;&#xC7A1; &#xB610;&#xD55C; &#xCD94;&#xAC00; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB192;&#xC740; &#xC911;&#xC7AC; &#xD45C;&#xBA74; &#xC8FC;&#xBB38; &#xC0C8;&#xB85C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD560; &#xB54C; &#xB2E8;&#xC9C0; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; DNA&#xB97C; &#xBC1C;&#xD45C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xBC14;&#xD0D5;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC6B0;&#xB9AC; SeqA &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD3EC;&#xD06C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6D0;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; DNA&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Seqa&#xC758; &#xD611;&#xB3D9; GATC &#xD611;&#xB825; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xAD6C;&#xC870; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xBC18;&#xBCF5;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

SeqA es un regulador negativo de la replicaci&oacute;n del ADN en Escherichia coli y bacterias relacionadas que funciona por secuestrar el origen de replicaci&oacute;n y facilitar su restablecimiento despu&eacute;s de cada evento de iniciaci&oacute;n. Inactivaci&oacute;n del gen seqA conduce a rondas sincronizados de replicaci&oacute;n, localizaci&oacute;n anormal de nucleoids y superhelicity negativo mayor. SeqA exceso tambi&eacute;n interrumpe la sincron&iacute;a de la replicaci&oacute;n y afecta la divisi&oacute;n celular. SeqA ejerce sus funciones atando racimos de transitorio hemimethylated GATC secuencias generadas durante la replicaci&oacute;n. Sin embargo, no son claros los mecanismos moleculares que desencadenan la formaci&oacute;n y el desmontaje de tal complejo. Presentamos aqu&iacute; la estructura cristalina de un mutante dim&eacute;rico de SeqA [SeqADelta(41-59)-A25R] obligada a sitios GATC t&aacute;ndem hemimethylated. La estructura delinea c&oacute;mo SeqA forma un complejo de alta afinidad con el ADN y sugiere por qu&eacute; SeqA reconoce s&oacute;lo sitios GATC en ciertas distancias. El complejo de SeqA-DNA tambi&eacute;n presenta interacci&oacute;n prote&iacute;na-prote&iacute;na adicional ordenaron a superficies que median la formaci&oacute;n de m&aacute;s complejos a atar a las reci&eacute;n replicado el ADN. Basado en estos datos, se propone un modelo que describe c&oacute;mo SeqA interact&uacute;a con el ADN reci&eacute;n replicado en el origen de replicaci&oacute;n y en las horquillas de replicaci&oacute;n.

Penetraciones estructurales en la Uni&oacute;n Cooperativa de SeqA a un t&aacute;ndem GATC repetici&oacute;n.

DNA &#x9519;&#x914D;&#x4FEE;&#x590D;&#x7EA0;&#x6B63;&#x9003;&#x8131;&#x4E86;&#x805A;&#x5408;&#x9176;&#x6821;&#x5BF9;&#x3001; &#x589E;&#x52A0;&#x590D;&#x5236;&#x4FDD;&#x771F; 100-&#x5230; 1000 &#x500D;&#x4ECE;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5230;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x6709;&#x673A;&#x4F53;&#x4E2D;&#x7684;&#x9519;&#x8BEF;&#x3002;&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x86CB;&#x767D;&#x4F5C;&#x7528;&#x4E2D;&#x592E;&#x5728;&#x9519;&#x914D;&#x4FEE;&#x590D;&#x901A;&#x8FC7;&#x534F;&#x8C03;&#x591A;&#x4E2A;&#x4FE1;&#x53F7;&#x540E;&#x7531; MutS &#x4E0D;&#x5339;&#x914D;&#x8BC6;&#x522B;&#x7684;&#x94A2;&#x7EDE;&#x7EBF;&#x53BB;&#x9664;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;-&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x7684;&#x67AF;&#x8349;&#x82BD;&#x5B62;&#x6746;&#x83CC;&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x57DF;&#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x4E8C;&#x805A;&#x548C;&#x76D1;&#x7BA1;&#x5B50;&#x57DF;&#x7531;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x5B88;&#x6052;&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x6BCD;&#x9898;&#x7684;&#x87BA;&#x65CB;&#x6746;&#x8FDE;&#x63A5;&#x3002;&#x989D;&#x5916;&#x7684;&#x4FDD;&#x5B88;&#x7684;&#x56FE;&#x6848;&#x62C9;&#x6746;&#x5468;&#x56F4;&#x7FA4;&#x96C6;&#x548C;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E00;&#x4E2A; Zn(2+) &#x7ED1;&#x5B9A;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x662F;&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x51FD;&#x6570;&#x4F53;&#x5185;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x63A8;&#x51FA;&#x4E86;&#x529F;&#x80FD;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x9632;&#x6B62;&#x610F;&#x5916;&#x987A;&#x624B;&#x7275;&#x7F8A;&#x7684;&#x65B0;&#x590D;&#x5236;&#x7684; DNA&#xFF0C;&#x5E76;&#x5141;&#x8BB8;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x8BAE;&#x63CF;&#x8FF0;&#x5982;&#x4F55;&#x4E0E; MutS &#x548C; processivity &#x5939;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BB8;&#x53EF;&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x7ED3;&#x6784;&#x8FD8;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x89D2;&#x8272;&#x7684;&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x4E2D;&#x9519;&#x914D;&#x4FEE;&#x590D;&#x5206;&#x5B50;&#x6846;&#x67B6;&#x3002;

&#x9521;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x7684;&#x6838;&#x9178;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x57DF;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#xFF1A; &#x65E0;&#x724C;&#x524A;&#x51CF;&#x3002;

DNA mismatch repair corrects errors that have escaped polymerase proofreading, increasing replication fidelity 100- to 1000-fold in organisms ranging from bacteria to humans. The MutL protein plays a central role in mismatch repair by coordinating multiple protein-protein interactions that signal strand removal upon mismatch recognition by MutS. Here we report the crystal structure of the endonuclease domain of Bacillus subtilis MutL. The structure is organized in dimerization and regulatory subdomains connected by a helical lever spanning the conserved endonuclease motif. Additional conserved motifs cluster around the lever and define a Zn(2+)-binding site that is critical for MutL function in vivo. The structure unveils a powerful inhibitory mechanism to prevent undesired nicking of newly replicated DNA and allows us to propose a model describing how the interaction with MutS and the processivity clamp could license the endonuclease activity of MutL. The structure also provides a molecular framework to propose and test additional roles of MutL in mismatch repair.

Structure of the endonuclease domain of MutL: unlicensed to cut.

De r&#xE9;paration des m&#xE9;sappariements d&#x26;#39;ADN corrige les erreurs qui ont &#xE9;chapp&#xE9; &#xE0; la relecture polym&#xE9;rase, l&#x26;#39;augmentation de la r&#xE9;plication fid&#xE9;lit&#xE9; 100 - &#xE0; 1000 fois dans les organismes allant des bact&#xE9;ries aux humains. La prot&#xE9;ine MutL joue un r&#xF4;le central dans la r&#xE9;paration des m&#xE9;sappariements en coordonnant de multiples interactions prot&#xE9;ine-prot&#xE9;ine que l&#x26;#39;enl&#xE8;vement de brin signal lors de la reconnaissance par MutS d&#xE9;calage. Nous rapportons ici la structure cristalline du domaine endonucl&#xE9;ase de Bacillus subtilis MutL. La structure est organis&#xE9;e en dim&#xE9;risation et les sous-domaines de r&#xE9;gulation reli&#xE9;s par un levier h&#xE9;lico&#xEF;dale s&#x26;#39;&#xE9;tendant le motif endonucl&#xE9;ase conserv&#xE9;e. Suppl&#xE9;mentaires du cluster conserv&#xE9; motifs autour du levier de Zn et de d&#xE9;finir une (2 +) site de liaison qui est essentiel pour la fonction MutL in vivo. La structure d&#xE9;voile un puissant m&#xE9;canisme inhibiteur pour emp&#xEA;cher entaille ind&#xE9;sirable de l&#x26;#39;ADN nouvellement r&#xE9;pliqu&#xE9; et nous permet de proposer un mod&#xE8;le d&#xE9;crivant comment l&#x26;#39;interaction avec MutS et la pince de processivit&#xE9; pourrait autoriser l&#x26;#39;activit&#xE9; d&#x26;#39;endonucl&#xE9;ase de MutL. La structure offre aussi une structure mol&#xE9;culaire de proposer et de tester des r&#xF4;les suppl&#xE9;mentaires de MutL en r&#xE9;paration des m&#xE9;sappariements.

Structure du domaine endonucl&#xE9;ase de MutL: Unlicensed &#xE0; D&#xE9;couper

DNA-Mismatch-Reparatur korrigiert Fehler, die Polymerase Korrekturlesen, Erh&ouml;hung der Replikation Treue 100 - bis 1000 - 8-fach in Organismen, die von Bakterien bis hin zu Menschen entgangen sind. Das MutL-Protein spielt eine zentrale Rolle in Fehlanpassung Reparatur durch Koordination mehrerer Protein-Protein-Interaktionen, die Strang-Entfernung bei Nicht&uuml;bereinstimmung Anerkennung durch MutS zu signalisieren. Hier berichten wir &uuml;ber die Kristallstruktur der Endonuklease Dom&auml;ne von Bacillus Subtilis MutL. Die Struktur gliedert sich in die Dimerisierung und regulatorischen Subdomains, verbunden mit einem spiralf&ouml;rmigen Hebel &uuml;ber das konservierten Endonuklease-Motiv. Zus&auml;tzliche konservierte Motive cluster-rund um den Hebel und definieren eine Zn(2+)-Bindungsstelle f&uuml;r in-vivo-MutL Funktion entscheidend ist. Die Struktur stellt einen leistungsf&auml;higen hemmenden Mechanismus zur Vermeidung unerw&uuml;nschter nicking neu replizierten DNA und erm&ouml;glicht es uns, ein Modell zur Beschreibung, wie die Interaktion mit MutS und der Processivity-Klemme die Endonuklease-Aktivit&auml;t des MutL lizenzieren konnte vorschlagen. Die Struktur bietet auch einen molekularen Rahmen vorzuschlagen und zus&auml;tzliche Rollen des MutL Fehlanpassung Reparatur zu testen.

Struktur der Endonuklease Dom&auml;ne des MutL: unlizenziert zu schneiden.

Riparazione del DNA mismatch corregge gli errori che sono sfuggiti polimerasi di correzione di bozze, aumentando la fedelt&agrave; replica 100 - a 1000 volte in organismi che vanno dai batteri agli esseri umani. La proteina MutL svolge un ruolo centrale nella riparazione del disadattamento coordinando molteplici interazioni proteina-proteina che segnale strand rimozione su riconoscimento di mancata corrispondenza di MutS. Qui riportiamo la struttura cristallina del dominio endonucleasi di Bacillus subtilis MutL. La struttura &egrave; organizzata in dimerizzazione e sottodomini normativi collegati tramite una leva elicoidale che abbracciano il motivo dell&#39;endonucleasi conservata. Ulteriori motivi conservati cluster intorno la leva e definiscono un sito di legame Zn(2+) che &egrave; critico per la funzione MutL in vivo. La struttura presenta un potente meccanismo inibitorio per evitare di intaccare indesiderato del DNA appena replicato e ci permette di proporre un modello che descrive come l&#39;interazione con MutS e il morsetto processivity potrebbe concedere in licenza l&#39;attivit&agrave; endonucleasi di MutL. La struttura fornisce anche un quadro molecolare per proporre e verificare ulteriori ruoli di MutL nella riparazione del disadattamento.

Struttura del dominio endonucleasi di MutL: senza licenza per tagliare.

&#x7D30;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x30D2;&#x30C8;&#x306B;&#x81F3;&#x308B;&#x751F;&#x7269;&#x306E;1000&#x500D;&#x306B; -  DNA&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x5FE0;&#x5B9F;&#x5EA6;100&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x3001;&#x30D7;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x30DD;&#x30EA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x8131;&#x51FA;&#x3057;&#x305F;&#x30A8;&#x30E9;&#x30FC;&#x3092;&#x4FEE;&#x6B63;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; MutL&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; - &#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x8ABF;&#x6574;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x4E2D;&#x5FC3;&#x7684;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;MutS&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x8A8D;&#x8B58;&#x6642;&#x306B;&#x4FE1;&#x53F7;&#x9396;&#x306E;&#x9664;&#x53BB;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;MutL&#x67AF;&#x8349;&#x83CC;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x3092;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x30B9;&#x30D1;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x30D8;&#x30EA;&#x30AB;&#x30EB;&#x30EC;&#x30D0;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63A5;&#x7D9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x4FDD;&#x5B58;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x30EC;&#x30D0;&#x30FC;&#x5468;&#x308A;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x30BF;&#x304A;&#x3088;&#x3073;in vivo&#x3067;MutL&#x6A5F;&#x80FD;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;Zn&#xFF08;2 +&#xFF09;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x305F;&#x306B;&#x8907;&#x88FD;&#x3055;&#x308C;&#x305F;DNA&#x306E;&#x671B;&#x307E;&#x3057;&#x304F;&#x306A;&#x3044;&#x30CB;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x9632;&#x3050;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5F37;&#x529B;&#x306A;&#x6291;&#x5236;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x767A;&#x8868;&#x3057;&#x3001;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;MutS&#x3068;&#x80FD;&#x529B;&#xFF08;processivity&#xFF09;&#x30AF;&#x30E9;&#x30F3;&#x30D7;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x304C;MutL&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x53D6;&#x5F97;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x69CB;&#x9020;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x306B;MutL&#x306E;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x63D0;&#x6848;&#x3057;&#x3001;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30D5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30E0;&#x30EF;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

MutL&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C9;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#xFF1A;&#x30AB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306B;&#x30E9;&#x30A4;&#x30BB;&#x30F3;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;

DNA &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xAD50;&#xC815;, &#xBCF5;&#xC81C; &#xCDA9;&#xC2E4;&#xB3C4; 100-&#xB97C; 1000 &#xBC30; &#xC720;&#xAE30; &#xCCB4; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC778; &#xAC04;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAE30;&#xAE4C;&#xC9C0; &#xC99D;&#xAC00; &#xD0C8;&#xCD9C; &#xC624;&#xB958; &#xC218;&#xC815;. MutL &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; MutS &#xD558; &#xC5EC; &#xC77C;&#xCE58; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xB294; &#xC778;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xAC00;&#xB2E5; &#xC81C;&#xAC70; &#xC2E0;&#xD638; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC870;&#xC815; &#xD558; &#xC5EC; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xC218;&#xB9AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911;&#xC559; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC0C8; &#xADE0;&#xC758; subtilis MutL endonuclease &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;. &#xAD6C;&#xC870;&#xB294; dimerization &#xBC0F; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; endonuclease &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C;&#xC5D0; &#xAC78;&#xCE5C; &#xD5EC;&#xB9AC;&#xCEEC; &#xB808;&#xBC84;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB41C; &#xD558;&#xC704; &#xD558;&#xB294; &#xADDC;&#xC81C; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC874;&#xB41C; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xBE0C; &#xB808;&#xBC84; &#xC8FC;&#xC704; &#xD074;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xD130;&#xC640; vivo&#xC5D0;&#xC11C; MutL &#xD568;&#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; Zn(2+) &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC815;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870; &#xC0C8;&#xB85C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB41C; DNA&#xC758; &#xC6D0;&#xCE58; &#xC54A;&#xB294; nicking &#xBC29;&#xC9C0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAC15;&#xB825;&#xD55C; &#xC5B5;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xBC1C;&#xD45C; &#xD558; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC5B4;&#xB5BB;&#xAC8C; MutS &#xBC0F; processivity &#xD074;&#xB7A8;&#xD504;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; MutL endonuclease &#xD65C;&#xB3D9; &#xB77C;&#xC774;&#xC13C;&#xC2A4; &#xC218;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAD6C;&#xC870; &#xBD84;&#xC790; &#xD504;&#xB808;&#xC784; &#xC6CC;&#xD06C;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xACE0; &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xBCF5;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; Mutl&#xC758; &#xCD94;&#xAC00; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Mutl&#xC758; endonuclease &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;: &#xC798;&#xB77C; &#xBB34;&#xBA74;&#xD5C8;.

La reparaci&#xF3;n del ADN no coincide corrige los errores que se han escapado de la polimerasa correcci&#xF3;n, el aumento de la replicaci&#xF3;n de la fidelidad 100 - 1000 veces en los organismos que van desde las bacterias hasta los seres humanos. La prote&#xED;na MutL juega un papel central en la reparaci&#xF3;n de genes mediante la coordinaci&#xF3;n de m&#xFA;ltiples interacciones prote&#xED;na-prote&#xED;na que la eliminaci&#xF3;n de la se&#xF1;al de cadena a partir del reconocimiento por la falta de coincidencia MutS. Aqu&#xED; se presenta la estructura cristalina del dominio endonucleasa de Bacillus subtilis MutL. La estructura est&#xE1; organizada en la dimerizaci&#xF3;n y subdominios reguladoras conectadas por una palanca helicoidal que abarca el motivo endonucleasa conservada. Adicionales del cl&#xFA;ster motivos conservados alrededor de la palanca y definir un Zn (2 +)-sitio de uni&#xF3;n que es fundamental para la funci&#xF3;n MutL in vivo. La estructura presenta un poderoso mecanismo de inhibici&#xF3;n para evitar muescas no deseado de ADN reci&#xE9;n replicado y nos permite proponer un modelo que describe c&#xF3;mo la interacci&#xF3;n con MutS y la abrazadera procesividad podr&#xED;a autorizar la actividad endonucleasa de MutL. La estructura tambi&#xE9;n proporciona un marco molecular para proponer y probar las funciones adicionales de MutL en la reparaci&#xF3;n de genes.

Estructura de la endonucleasa de dominio de MutL: sin licencia para cortar

&#x5728; ClpXP &#x548C; ClpAP &#x7684;&#x914D;&#x5408;&#xFF0C;ClpA &#x548C; ClpX &#x4F7F;&#x7528;&#x80FD;&#x91CF;&#x7684;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178;&#x817A;&#x82F7;&#x6C34;&#x89E3;&#x4F38;&#x5C55;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x8F6C;&#x79FB;&#x5230; self-compartmentalized ClpP &#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x3002;ClpP &#x9700;&#x8981;&#x4E09;&#x964D;&#x4F4E;&#x6298;&#x53E0;&#x6216;&#x5C55;&#x5F00;&#x7684;&#x5E95;&#xFF0C;&#x4F46;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; ClpP acyldepsipeptide &#x6297;&#x751F;&#x7D20; (ADEPs) &#x53EF;&#x4EE5;&#x8DF3;&#x8FC7;&#x6B64;&#x8981;&#x6C42;&#x7684;&#x672A;&#x6298;&#x53E0;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x76EE;&#x524D;&#x5927;&#x80A0;&#x57C3;&#x5E0C;&#x6C0F;&#x5927;&#x80A0;&#x6746;&#x83CC; ClpP &#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; ADEP1 &#x7684;&#x6676;&#x4F53;&#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x62A5;&#x544A;&#x57FA;&#x7840; ClpP &#x6FC0;&#x6D3B;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x6027;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;ADEP1 &#x5C06;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x758F;&#x6C34;&#x7684;&#x69FD;&#x5185;&#xFF0C;&#x7528;&#x4F5C;&#x4E3B;&#x8981;&#x505C;&#x9760;&#x7AD9;&#x70B9;&#x7684; ClpP &#x4E09;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A; ADEP1 &#x9501;&#x5B9A; ClpP &beta; &#x53D1;&#x5939;&#x6784;&#x8C61;&#x4E2D;&#x7684; N-&#x672B;&#x7AEF;&#x56DE;&#x8DEF;&#x4EA7;&#x751F;&#x7A33;&#x5B9A;&#x7684;&#x5B54;&#x9699;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x901A;&#x8FC7;&#x8BE5;&#x7EBF;&#x7A0B;&#x6269;&#x5C55;&#x7684;&#x591A;&#x80BD;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x6A21;&#x578B;&#xFF0C;ClpP &#x5168;&#x9176;&#x8FD8;&#x80FD; ClpAP &#x548C; ClpXP &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5173;&#x952E;&#x4FE1;&#x606F;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x53D1;&#x5C55;&#x6B64;&#x7C7B;&#x6297;&#x751F;&#x7D20;&#x3002;

Acyldepsipeptide &#x6297;&#x751F;&#x7D20;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x5316;&#x7684;&#x8F74;&#x5411;&#x901A;&#x9053;&#x7684; ClpP: ClpP &#x7684; ClpX ClpA &#x65F6;&#x9650;&#x72B6;&#x6001;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

In ClpXP and ClpAP complexes, ClpA and ClpX use the energy of ATP hydrolysis to unfold proteins and translocate them into the self-compartmentalized ClpP protease. ClpP requires the ATPases to degrade folded or unfolded substrates, but binding of acyldepsipeptide antibiotics (ADEPs) to ClpP bypasses this requirement with unfolded proteins. We present the crystal structure of Escherichia coli ClpP bound to ADEP1 and report the structural changes underlying ClpP activation. ADEP1 binds in the hydrophobic groove that serves as the primary docking site for ClpP ATPases. Binding of ADEP1 locks the N-terminal loops of ClpP in a Î²-hairpin conformation, generating a stable pore through which extended polypeptides can be threaded. This structure serves as a model for ClpP in the holoenzyme ClpAP and ClpXP complexes and provides critical information to further develop this class of antibiotics.

Acyldepsipeptide antibiotics induce the formation of a structured axial channel in ClpP: A model for the ClpX/ClpA-bound state of ClpP.

Dans les complexes ClpXP et ClpAP, LRCECA et ClpX utilisent l&#39;&eacute;nergie d&#39;hydrolyse de l&#39;ATP &agrave; d&eacute;plier les prot&eacute;ines et les transf&eacute;rer dans la prot&eacute;ase PPLA self-compartmentalized. PPLA exige les ATPases de d&eacute;grader les substrats pli&eacute;es ou d&eacute;pli&eacute;es, mais contraignant des antibiotiques d&#39;acyldepsipeptide (ADEPs) au PPLA permet de contourner cette exigence avec les prot&eacute;ines non repli&eacute;es. Nous pr&eacute;senter la structure cristalline d&#39;Escherichia coli que PPLA li&eacute; &agrave; ADEP1 et signaler les changements structurels qui sous-tendent le PPLA activation. ADEP1 lie dans la rainure hydrophobe qui sert de site d&#39;accueil principal pour ClpP ATPases. Liaison de ADEP1 verrouille les boucles de N-terminal du PPLA dans une conformation &beta;-&eacute;pingle &agrave; cheveux, g&eacute;n&eacute;rant un pore stable &agrave; travers lequel polypeptides prolong&eacute;es peuvent &ecirc;tre filet&eacute;s. Cette structure sert de mod&egrave;le pour le PPLA dans les complexes de ClpAP et ClpXP holoenzyme et fournit des informations indispensables pour d&eacute;velopper davantage cette classe d&#39;antibiotiques.

Acyldepsipeptide antibiotiques induisent la formation d&#39;un canal axial structur&eacute;e au PPLA : un mod&egrave;le pour l&#39;&eacute;tat de ClpX/LRCECA-limite du PPLA.

In ClpXP und ClpAP komplexe nutzen ClpA und ClpX die Energie der ATP-Hydrolyse Proteine zu entfalten und sie in die self-compartmentalized ClpP-Protease akkumulieren. ClpP erfordert die ATPasen gefaltet oder ungefaltet Substrate abf&auml;llt, aber Bindung Acyldepsipeptide Antibiotika (ADEPs) auf ClpP umgeht diese Anforderung mit entfaltet Proteine. Wir pr&auml;sentieren die Kristallstruktur von Escherichia coli, dem, die CLPP ADEP1 gebunden, und die strukturellen Ver&auml;nderungen, die zugrunde liegenden ClpP-Aktivierung zu melden. ADEP1 bindet in der hydrophoben Furche, die als prim&auml;re docking Ortsbild ClpP ATPases dient. Bindung von ADEP1 sperrt die N-terminale Schleife des ClpP in eine &beta;-Haarnadel-Konformation, erzeugen eine stabile Pore, durch die l&auml;ngere Polypeptiden eingef&auml;delt werden k&ouml;nnen. Diese Struktur dient als Modell f&uuml;r ClpP in der Erfahrung ClpAP und ClpXP-komplexe und bietet wichtige Informationen zu dieser Klasse von Antibiotika weiter zu entwickeln.

Acyldepsipeptide Antibiotika induzieren die Bildung eines strukturierten axial-Kanals in ClpP: ein Modell f&uuml;r den ClpX/ClpA-gebundenen Zustand der ClpP.

Nei complessi ClpXP e ClpAP, ClpA e ClpX utilizzano l&#39;energia di idrolisi dell&#39;ATP per dispiegare le proteine e traslocano nel loro in self-compartmentalized proteasi ClpP. ClpP richiede l&#39;atpasi di degradare substrati piegati o spiegati, ma associazione di antibiotici acyldepsipeptide (ADEPs) a ClpP ignora questo requisito con proteine dispiegate. Noi presentiamo la struttura cristallina dell&#39;Escherichia coli che clpp associato a ADEP1 e riportare le modifiche strutturali sottostanti ClpP attivazione. ADEP1 associa la scanalatura idrofobica che serve come il principale sito docking per ClpP ATPases. Associazione di ADEP1 blocca il loop del N-terminale del ClpP in una conformazione &beta;-hairpin, generando un poro stabile attraverso il quale possono essere filettati estesi polipeptidi. Questa struttura serve da modello per ClpP in complessi della esonucleasica ClpAP e ClpXP e fornisce informazioni critiche per sviluppare ulteriormente questa classe di antibiotici.

Acyldepsipeptide antibiotici inducono la formazione di un canale assiale strutturato in ClpP: un modello per lo stato associata a ClpX/ClpA di ClpP.

ClpXP &#x3068; ClpAP &#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3067; ClpA &#x3068; ClpX ATP &#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3092;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x5C55;&#x958B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089; self-compartmentalized ClpP &#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x306B;&#x62D8;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6298;&#x308A;&#x7573;&#x307E;&#x308C;&#x305F;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5C55;&#x958B;&#x306E;&#x57FA;&#x677F;&#x3092;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3055;&#x305B;&#x308B; Atpase ClpP &#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x304C;&#x3053;&#x306E;&#x8981;&#x4EF6;&#x306B;&#x7E70;&#x308A;&#x5E83;&#x3052;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA; acyldepsipeptide &#x306E;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA; (&#x7F8A;&#x6BDB;) ClpP &#x3078;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x30D0;&#x30A4;&#x30D1;&#x30B9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F; ClpP ADEP1 &#x306B;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x5927;&#x8178;&#x83CC;&#x306E;&#x7D50;&#x6676;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x3001;ClpP &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306E;&#x57FA;&#x306B;&#x306A;&#x308B;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;ADEP1 &#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059; ClpP Atpase &#x306E;&#x758E;&#x6C34;&#x6027;&#x306E; groove &#x3067;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;ADEP1 &#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x62E1;&#x5F35;&#x30DD;&#x30EA;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9; &#x30B9;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C9;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x5B54;&#x306E;&#x751F;&#x6210; ClpP &#x306E; N &#x672B;&#x7AEF;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F; &beta; &#x30D8;&#x30A2;&#x30D4;&#x30F3;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3068;&#x3057;&#x3066; ClpP &#x306E;&#x30DB;&#x30ED;&#x9175;&#x7D20; ClpAP &#x3068; ClpXP &#x306E;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3001;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30AF;&#x30E9;&#x30B9;&#x306E;&#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3059;&#x308B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Acyldepsipeptide &#x6297;&#x751F;&#x7269;&#x8CEA; ClpP &#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8EF8;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;: ClpP &#x306E; ClpX/ClpA &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x72B6;&#x614B;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3002;

ClpXP &#xBC0F; ClpAP &#xB2E8;&#xC9C0; ClpA &#xBC0F; ClpX &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xC804;&#xAC1C; &#xD558; &#xC5EC; self-compartmentalized ClpP protease&#xC5D0; &#xC774;&#xB3D9; ATP &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xC758; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. ClpP &#xC811;&#xD78C; &#xB610;&#xB294; &#xD3BC;&#xCE5C; &#xAE30;&#xD310; &#xC800;&#xD558; ATPases &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; acyldepsipeptide &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C; (ADEPs) Clpp&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD3BC;&#xCE5C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xC694;&#xAD6C; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC744; &#xBB34;&#xC2DC; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; adep1&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; ClpP &#xB300;&#xC7A5;&#xADE0;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; ClpP &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0;. Adep1&#xC740; &#xAE30;&#xBCF8; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; ClpP Atpases&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC18C;&#xC218; &#xC131; &#xD648;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Adep1&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD655;&#xC7A5;&#xB41C; polypeptides&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2A4;&#xB808;&#xB4DC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC548;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xAE30; &#xACF5; &#xC0DD;&#xC131; N &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xB8E8;&#xD504; Clpp&#xC758; &beta;-&#xBA38;&#xB9AC; &#xD540; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0; &#xC7A0;&#xAE09;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xAD6C;&#xC870; holoenzyme ClpAP &#xBC0F; ClpXP &#xB2E8;&#xC9C0;&#xC5D0;&#xC11C; Clpp&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xD558; &#xACE0;&#xC774; &#xD074;&#xB798;&#xC2A4; &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Acyldepsipeptide &#xD56D;&#xC0DD;&#xC81C; Clpp&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xB41C; &#xCD95; &#xCC44;&#xB110;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC720;&#xBC1C;: Clpp&#xC758; ClpX/ClpA &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xB41C; &#xC0C1;&#xD0DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBAA8;&#xB378;.

En complejos de ClpXP y ClpAP, ClpA y ClpX utilizan la energ&iacute;a de la hidr&oacute;lisis de ATP para desplegar las prote&iacute;nas y los translocan a la proteasa self-compartmentalized de ClpP. ClpP requiere las ATPasas degradar sustratos plegados o desplegados, pero vinculante de antibi&oacute;ticos acyldepsipeptide (ADEPs) al ClpP omite este requisito con prote&iacute;nas desdobladas. Presentamos la estructura cristalina de Escherichia coli que ClpP obligado a ADEP1 e informe los cambios estructurales subyacentes de activaci&oacute;n ClpP. ADEP1 se une en el surco hidrof&oacute;bico que sirve como el principal sitio de acoplamiento para el ClpP ATPases. Uni&oacute;n de ADEP1 bloquea los lazos del N-terminal del ClpP en una conformaci&oacute;n &beta;-horquilla, generando un poro estable a trav&eacute;s del cual pueden enroscarse polip&eacute;ptidos extendidos. Esta estructura sirve como modelo para ClpP en los complejos de ClpAP y ClpXP de holoenzyme y proporciona informaci&oacute;n cr&iacute;tica para desarrollar esta clase de antibi&oacute;ticos.

Acyldepsipeptide antibi&oacute;ticos inducen la formaci&oacute;n de un canal axial estructurado en ClpP: un modelo para el estado de ClpX/ClpA-limite de ClpP.

Yu Seon Chung

Department of Biochemistry and Biomedical Sciences

McMaster University

Iterative Optimization of DNA Duplexes for Crystallization of SeqA-DNA Complexes

Yu Seon Chung

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McMaster University

Iterative Optimization of DNA Duplexes for Crystallization of SeqA-DNA Complexes

Department of Biochemistry and Biomedical Sciences