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Colony Forming Cell (CFC) Assay for Human Hematopoietic Cells

Human hematopoietic stem/progenitor cells are usually obtained from bone marrow, cord blood, or peripheral blood and are used to study hematopoiesis and ...

Washington University School of Medicine

&#x5C55;&#x793A;&#x8D85;&#x8FC7; 1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x8868;&#x578B;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#xFF0C;&#x79F0;&#x4E3A;&#x65B0;&#x4E16;&#x754C; &#xE40C; &#x751F;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5206;&#x7C7B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x7684;&#x542B;&#x7CCA;&#x4E0D;&#x6E05;&#x7684;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7684;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x3002;&#x5B50;&#x7C7B;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7684;&#x542B;&#x7CCA;&#x4E0D;&#x6E05;&#x7684;&#x662F;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7684;&#x53CC;&#x8868;&#x578B;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7684;&#x6076;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EBA;&#x53E3;&#x8868;&#x793A; 2 &#x4E0D;&#x540C;&#x8C31;&#x7CFB;&#xFF0C;&#x6700;&#x5E38;&#x89C1;&#x7684;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x548C;&#x4EFB;&#x4E00; B &#x6216; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x5B97;&#x65CF;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;&#x6B64;&#x5B9E;&#x4F53;&#x5B9A;&#x4E49;&#x4E86;&#x7531;&#x6B27;&#x6D32;&#x96C6;&#x56E2;&#x63D0;&#x51FA;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7279;&#x5F81;&#x7684;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5; (&#x578B;)&#xFF0C;&#x4E0E;&#x5404;&#x79CD;&#x6807;&#x8BB0;&#x5206;&#x914D;&#x5206;&#x6570;&#x4E3A; 2&#x3001; 1 &#x6216;&#x6839;&#x636E;&#x5176;&#x7279;&#x6B8A;&#x6027;&#x4E3A;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x6216;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x6CBF;&#x88AD; 0.5 &#x8BC4;&#x5206;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6848;&#x4EF6;&#x6709;&#x5F97;&#x5206;&#x5927;&#x4E8E; 2 &#x4E3A;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x548C;&#x4EFB;&#x4E00; B &#x6216; T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x5B97;&#x65CF;&#x5728;&#x6B64;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x6709;&#x53CC;&#x8868;&#x578B;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x3002;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6807;&#x8BB0;&#xFF0C;CD79a&#xFF0C;&#x4E00;&#x76F4;&#x5982;&#x6B64;&#x660E;&#x786E;&#x5173;&#x8054;&#x6025;&#x6027;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5; (&#x5168;&#x90E8;) &#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x4EBA;&#x5458;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x5176;&#x5B58;&#x5728;&#x7206;&#x70B8;&#x6807;&#x8BB0;&#x4E0B;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x662F; B &#x6240;&#x6709;&#x7684;&#x6307;&#x793A;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x6EE1;&#x8DB3;&#x6807;&#x51C6;&#x4E2D;&#x7684; CD79a &#x4E2D;&#x761F;&#x75C5;&#x4EBA;&#x53E3;&#x89C2;&#x5BDF;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x53CC;&#x8868;&#x578B;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x4E0D;&#x5BFB;&#x5E38;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;

&#x53CC;&#x8868;&#x578B;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x4E0E; CD79a &#x7684;&#x5171;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0;&#x3002;

Acute leukemias demonstrating immunophenotypic features of more than 1 cell lineage are referred to as acute leukemias of ambiguous lineage in the new World Health Organization classification system. A subtype of leukemia of ambiguous lineage is biphenotypic acute leukemia in which the malignant cell population expresses markers of 2 different lineages, most commonly myeloid and either B- or T-lymphoid lineages. This entity has been defined by a scoring system proposed by the European Group for the Immunological Characterization of Acute Leukemias (EGIL), with various markers assigned a score of 2, 1, or 0.5 depending on their specificity for myeloid or lymphoid lineage. Those cases having a score greater than 2 for the myeloid and either the B- or T-lymphoid lineages are biphenotypic acute leukemia in this system. One marker, CD79a, has been so clearly associated with acute lymphoblastic leukemia (ALL) by some researchers that its expression in the presence of blast markers is considered indicative of B-ALL. We describe an unusual case of acute leukemia meeting the criteria for biphenotypic acute leukemia in which CD79a expression was observed in the blast population.

Biphenotypic acute leukemia with coexpression of CD79a and markers of myeloid lineage.

Les leuc&#xE9;mies aigu&#xEB;s d&#xE9;montrant les caract&#xE9;ristiques immunoph&#xE9;notypiques de plus de 1 lign&#xE9;e cellulaire sont consid&#xE9;r&#xE9;s comme des leuc&#xE9;mies aigu&#xEB;s de la lign&#xE9;e ambigu&#xEB; dans le syst&#xE8;me de classification mondiale de la Sant&#xE9; nouvelle Organisation. Un sous-type de leuc&#xE9;mie de la lign&#xE9;e ambigu&#xEB; est biph&#xE9;notypique leuc&#xE9;mie aigu&#xEB; dans laquelle la population de cellules malignes exprime des marqueurs de 2 lign&#xE9;es diff&#xE9;rentes, le plus souvent my&#xE9;lo&#xEF;des et soit lign&#xE9;es B ou T-lympho&#xEF;de. Cette entit&#xE9; a &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;finie par un syst&#xE8;me de notation propos&#xE9; par le Groupe europ&#xE9;en pour la caract&#xE9;risation immunologique des leuc&#xE9;mies aigu&#xEB;s (EGIL), avec des marqueurs diff&#xE9;rents attribu&#xE9; un score de 2, 1, ou 0,5 en fonction de leur sp&#xE9;cificit&#xE9; pour la lign&#xE9;e my&#xE9;lo&#xEF;de ou lympho&#xEF;de. Ces cas ayant un score sup&#xE9;rieur &#xE0; 2 pour l&#x26;#39;my&#xE9;lo&#xEF;de et soit les lign&#xE9;es B ou T-lympho&#xEF;de sont biph&#xE9;notypique leuc&#xE9;mie aigu&#xEB; dans ce syst&#xE8;me. Un marqueur, CD79a, a &#xE9;t&#xE9; si clairement associ&#xE9; &#xE0; la leuc&#xE9;mie aigu&#xEB; lymphoblastique (LAL) par certains chercheurs que son expression dans la pr&#xE9;sence de marqueurs fourneaux est consid&#xE9;r&#xE9; comme indicatif de B-ALL. Nous d&#xE9;crivons un cas inhabituel de leuc&#xE9;mie aigu&#xEB; r&#xE9;pondant aux crit&#xE8;res de la leuc&#xE9;mie aigu&#xEB; biph&#xE9;notypique dans lequel l&#x26;#39;expression CD79a a &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;e dans la population explosion.

Biph&#xE9;notypique leuc&#xE9;mie aigu&#xEB; avec co-expression de CD79a et marqueurs de la lign&#xE9;e my&#xE9;lo&#xEF;de

Biph&#xE4;notypischen akute Leuk&#xE4;mie mit Koexpression von CD79a und Marker der myeloischen Linie.

Leucemie acute dimostrando immunofenotipici caratteristiche di pi&ugrave; di 1 lineage delle cellule sono denominati leucemie acute del lineage ambiguo nel nuovo sistema di classificazione della organizzazione mondiale della sanit&agrave;. Un sottotipo di leucemia di lineage ambiguo &egrave; bifenotipiche leucemia acuta in cui la popolazione di cellule maligne esprime marcatori di 2 differenti lignaggi, pi&ugrave; comunemente mieloide e o B - o T-linfoide lineages. Questa entit&agrave; &egrave; stata definita da un sistema di punteggio proposto dal gruppo europeo per l&#39;immunologico caratterizzazione di acuta leucemie (EGIL), con i vari marcatori assegnati un punteggio di 2, 1 o 0,5 a seconda della loro specificit&agrave; per lineage mieloide o linfoide. Quei casi aventi un punteggio superiore a 2 per la mieloide e sia la B - o T-linfoide lineages sono leucemie acute bifenotipiche in questo sistema. Un marcatore, CD79a, &egrave; stata cos&igrave; chiaramente associata con leucemia linfoblastica acuta (ALL) da alcuni ricercatori che sua espressione in presenza di marcatori di blast &egrave; considerato indicativo di B-ALL. Descriviamo un caso insolito di leucemia acuta che soddisfano i criteri per la leucemia acuta bifenotipiche in cui CD79a espressione &egrave; stata osservata nella popolazione blast.

Bifenotipiche leucemia acuta con coexpression di CD79a e marcatori di lineage mieloide.

1&#x4EE5;&#x4E0A;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x7CFB;&#x8B5C;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x7279;&#x5FB4;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x306F;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x4E16;&#x754C;&#x4FDD;&#x5065;&#x6A5F;&#x95A2;&#x306E;&#x5206;&#x985E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x66D6;&#x6627;&#x306A;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x3068;&#x547C;&#x3070;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x66D6;&#x6627;&#x306A;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x60AA;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x304C;&#x7570;&#x306A;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x306E;&#x7CFB;&#x7D71;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;B&#x307E;&#x305F;&#x306F;T&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x6025;&#x6027;&#x6DF7;&#x5408;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C6;&#x30A3;&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7CFB;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x7279;&#x7570;&#x6027;&#x306B;&#x5FDC;&#x3058;&#x3066;2&#x5F97;&#x70B9;&#x3001;1&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;0.5&#x304C;&#x5272;&#x308A;&#x5F53;&#x3066;&#x3089;&#x308C;&#x3001;&#x69D8;&#x3005;&#x306A;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3067;&#x3001;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#xFF08;&#x30A8;&#x30AE;&#x30EB;&#xFF09;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E8;&#x30FC;&#x30ED;&#x30C3;&#x30D1;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30B9;&#x30B3;&#x30A2;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x6027;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;2&#x3088;&#x308A;&#x5927;&#x304D;&#x3044;&#x30B9;&#x30B3;&#x30A2;&#x3092;&#x6709;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;B&#x307E;&#x305F;&#x306F;T-&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x7CFB;&#x7D71;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6025;&#x6027;&#x6DF7;&#x5408;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3064;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x3001;&#x9670;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x3046;&#x306F;&#x3063;&#x304D;&#x308A;&#x3068;&#x7206;&#x767A;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;B-ALL&#x306E;&#x6307;&#x6A19;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x8005;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6025;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x82BD;&#x7403;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#xFF08;ALL&#xFF09;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x9670;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x5F0F;&#x306F;&#x30D6;&#x30E9;&#x30B9;&#x30C8;&#x96C6;&#x56E3;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6025;&#x6027;&#x6DF7;&#x5408;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x6E96;&#x3092;&#x6E80;&#x305F;&#x3059;&#x6025;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x306E;&#x7279;&#x6B8A;&#x306A;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x9670;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3068;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7CFB;&#x306E;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;&#x306E;&#x540C;&#x6642;&#x767A;&#x73FE;&#x3068;&#x6025;&#x6027;&#x6DF7;&#x5408;&#x578B;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;

1 &#xAC1C; &#xC774;&#xC0C1;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC758; immunophenotypic &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC8FC;&#xB294; &#xAE09;&#xC131; leukemias &#xB77C;&#xACE0; &#xAE09;&#xC131; leukemias &#xBAA8;&#xD638;&#xD55C; &#xD608;&#xD1B5;&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC138;&#xACC4; &#xBCF4;&#xAC74; &#xAE30;&#xAD6C; &#xBD84;&#xB958; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;. &#xBAA8;&#xD638;&#xD55C; &#xD608;&#xD1B5;&#xC758; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC758; &#xD558;&#xC704; biphenotypic &#xAE09;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; &#xC545;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C; 2 &#xB2E4;&#xB978; &#xACC4;&#xBCF4;, &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xACE8;&#xC218;&#xC131;&#xACFC; &#xC911; B &#xB610;&#xB294; T &#xB9BC;&#xD504; &#xACC4;&#xBCF4;&#xC758; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB97C; &#xD45C;&#xD604;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5D4;&#xD130;&#xD2F0;&#xB294; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xD560;&#xB2F9; &#xB41C; 2, 1, &#xB610;&#xB294; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xB610;&#xB294; &#xB9BC;&#xD504; &#xD608;&#xD1B5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC774;&#xC131;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; 0.5&#xC758; &#xC810;&#xC218;&#xC5D0;&#xB294; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xAE09;&#xC131; Leukemias (EGIL), &#xC720;&#xB7FD; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xCC44; &#xC810; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC815;&#xC758; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC810;&#xC218;&#xB294; &#xACE8;&#xC218;&#xC131;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; 2 &#xC911; B &#xB610;&#xB294; T &#xB9BC;&#xD504; &#xACC4;&#xBCF4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xD070; &#xB370; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; biphenotypic &#xAE09;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD558;&#xB098;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DD;, CD79a, &#xADF8;&#xB798;&#xC11C; &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xD3ED;&#xBC1C; &#xB9C8;&#xCEE4; &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; B &#xBAA8;&#xB450;&#xC758; &#xC9C0;&#xD45C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC77C;&#xBD80; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE09;&#xC131; &#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; (ALL)&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; CD79a &#xC2DD; &#xD3ED;&#xBC1C; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; biphenotypic &#xAE09;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xC900;&#xC744; &#xCDA9;&#xC871; &#xD558;&#xB294; &#xAE09;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Biphenotypic CD79a coexpression &#xBC0F; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xD608;&#xD1B5;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DD;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xAE09;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;.

Las leucemias agudas que demuestran caracter&#xED;sticas inmunofenot&#xED;picas de linaje celular a m&#xE1;s de uno se les conoce como las leucemias agudas de linaje ambiguo en el sistema Mundial de la Salud nueva clasificaci&#xF3;n de la Organizaci&#xF3;n. Un subtipo de leucemia de linaje ambiguo es la leucemia aguda bifenot&#xED;pica en el que la poblaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas malignas expresa marcadores de 2 linajes diferentes, con m&#xE1;s frecuencia, ya sea linajes mieloides y B o T-linfoide. Esta entidad ha sido definida por un sistema de puntuaci&#xF3;n propuesto por el Grupo Europeo para la caracterizaci&#xF3;n inmunol&#xF3;gica de las leucemias agudas (EGIL), con distintos marcadores le asigna una puntuaci&#xF3;n de 2, 1, o 0,5 en funci&#xF3;n de su especificidad para el linaje mieloide o linfoide. Estos casos tienen una puntuaci&#xF3;n superior a 2 para la mieloide y cualquiera de los linajes B o T-linfoide son la leucemia aguda bifenot&#xED;pica en este sistema. Uno de estos marcadores, CD79a, ha sido tan claramente asociado con la leucemia linfobl&#xE1;stica aguda (LLA) por algunos investigadores que su expresi&#xF3;n en la presencia de marcadores de explosi&#xF3;n se considera indicativo de B-ALL. Nosotros describimos un caso poco com&#xFA;n de leucemia aguda que satisfacen los criterios para la leucemia aguda bifenot&#xED;pica en el que se observ&#xF3; la expresi&#xF3;n de CD79a en la poblaci&#xF3;n de explosi&#xF3;n.

Leucemia aguda con bifenot&#xED;pica coexpresi&#xF3;n de CD79a y marcadores de linaje mieloide

Nucleoporin Nup98 &#x57FA;&#x56E0;&#x7ECF;&#x5E38;&#x5728;&#x6025;&#x6027;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x767D;&#x8840;&#x75C5; (AML) &#x4E2D;&#x91CD;&#x65B0;&#x6392;&#x5217;&#x3002;&#x5728;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x60C5;&#x51B5;&#x4E0B;&#x8FD9;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684; Nup98 N &#x7EC8;&#x70B9;&#x7AD9;&#x878D;&#x5408;&#x5230; homeodomain &#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684; DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x878D;&#x5408;&#xFF0C;Nup98-HOXA9 &#x7684;&#x539F;&#x578B;&#x662F;&#x4E0E;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x53CD;&#x6D17;&#x94B1;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x548C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6A21;&#x578B;&#x4E2D;&#x7684;&#x53CD;&#x6D17;&#x94B1;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x5176;&#x4E2D; Nup98 HOXA9 &#x5BFC;&#x81F4;&#x53CD;&#x6D17;&#x94B1;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE;&#x5B83;&#x548C;&#x786E;&#x5B9A;&#x4F7F;&#x7528;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x82AF;&#x7247;&#x53CA;&#x5176;&#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x6267;&#x884C;&#x4E00;&#x5F0F;&#x4E09;&#x4EFD;&#xFF0C;&#x5E76;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x5B9E;&#x65F6;&#x5B9A;&#x91CF; pcr &#x6280;&#x672F;&#x3002;102 Nup98 HOXA9 &#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x786E;&#x5B9A;&#xFF0C;92 &#x540D;&#x4E0A;&#x8C03;&#xFF0C;&#x548C;&#x53EA;&#x6709; 10 &#x540D;&#x662F;&#x4E0B;&#x8C03;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x7684;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; HOXA9 &#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x63ED;&#x793A; 13 &#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D; 12 &#x4E2A;&#x662F;&#x4E0A;&#x8C03;&#xFF0C;&#x548C; 1 &#x662F;&#x4E0B;&#x8C03;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; Nup98 &#x5DF2;&#x7ECF;&#x4E0D;&#x4F1A;&#x5F71;&#x54CD;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E; HOXA9 DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#x57FA;&#x56E0;&#x76D1;&#x7BA1;&#x6240;&#x5FC5;&#x9700;&#x7684;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x94FE;&#x63A5;&#x5230;&#x4E00;&#x4E2A; Nup98 HOXA9 &#x9776;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x62A5;&#x9053;&#x8054;&#x5408;&#x8F6C;&#x67D3;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x7684; Nup98 HOXA9 &#x800C;&#x4E0D;&#x662F;&#x7531; HOXA9 &#x6216; Nup98 &#x8F6C;&#x5F55;&#x4E00;&#x7EA7;&#x4E0A;&#x8C03;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E; Nup98 HOXA9 &#x5F02;&#x5E38;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; HOXA9 DNA &#x7ED3;&#x5408;&#x57DF;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x6709;&#x6BD4; HOXA9 &#x66F4;&#x5F3A;&#x5927;&#x548C;&#x66F4;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x8F6C;&#x5F55;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x53D7; Nup98 HOXA9 &#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6709;&#x51E0;&#x4E2A;&#x662F;&#x4E0E;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x751F;&#x5B58;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x836F;&#x7269;&#x4EE3;&#x8C22;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x6DF1;&#x5165;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x53CA;&#x6D41;&#x884C;&#x75C5;&#x5B66;&#x7684; Nup98-HOXA9 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x7684;&#x53CD;&#x6D17;&#x94B1;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;

Nup98 HOXA9 &#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;

The nucleoporin Nup98 gene is frequently rearranged in acute myelogenous leukemia (AML). In most cases this results in fusion of the N terminus of Nup98 to the DNA binding domain of a homeodomain transcription factor. The prototype of these fusions, Nup98-HOXA9, is associated with human AML and induces AML in mouse models. To understand the mechanisms by which Nup98-HOXA9 causes AML, we expressed it in myeloid cells and identified its target genes using high density oligonucleotide microarrays. The analysis was performed in triplicate and was confirmed by quantitative real time PCR. Of the 102 Nup98-HOXA9 target genes identified, 92 were up-regulated, and only 10 were down-regulated, suggesting a transcriptional activation function. A similar analysis of wild-type HOXA9 revealed 13 target genes, 12 of which were up-regulated, and 1 was down-regulated. In contrast, wild-type Nup98 had no effect on gene expression, demonstrating that the HOXA9 DNA binding domain is required for gene regulation. Co-transfection experiments using a luciferase reporter linked to the promoter of one of the Nup98-HOXA9 target genes confirmed up-regulation at the transcriptional level by Nup98-HOXA9 but not by either HOXA9 or Nup98. These data indicate that Nup98-HOXA9 is an aberrant transcription factor whose activity depends on the HOXA9 DNA binding domain but has a stronger and wider transcriptional effect than HOXA9. Several of the genes regulated by Nup98-HOXA9 are associated with increased cell proliferation and survival as well as drug metabolism, providing insights into the pathogenesis and epidemiology of Nup98-HOXA9-induced AML.

The oncogene Nup98-HOXA9 induces gene transcription in myeloid cells.

Le nucl&#xE9;oporine NUP98 g&#xE8;ne est fr&#xE9;quemment r&#xE9;arrang&#xE9;s dans la leuc&#xE9;mie my&#xE9;lo&#xEF;de aigu&#xEB; (LMA). Dans la plupart des cas cela se traduit par la fusion de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; N-terminale de la NUP98 au domaine de liaison &#xE0; l&#x26;#39;ADN d&#x26;#39;un facteur de transcription &#xE0; hom&#xE9;odomaine. Le prototype de ces fusions, NUP98-HOXA9, est associ&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;homme AML AML et induit dans des mod&#xE8;les murins. Pour comprendre les m&#xE9;canismes par lesquels NUP98-HoxA9 les causes en mati&#xE8;re de LBC, nous qu&#x26;#39;il a exprim&#xE9;es dans les cellules my&#xE9;lo&#xEF;des et identifi&#xE9; ses g&#xE8;nes cibles &#xE0; l&#x26;#39;aide de haute densit&#xE9; puces &#xE0; oligonucl&#xE9;otides. L&#x26;#39;analyse a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;e en trois exemplaires et a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9; par PCR en temps r&#xE9;el quantitative. Sur les 102 NUP98-HOXA9 g&#xE8;nes cibles identifi&#xE9;s, 92 &#xE9;taient r&#xE9;gul&#xE9;s &#xE0; la hausse, et seulement 10 &#xE9;taient r&#xE9;gul&#xE9;s &#xE0; la baisse, ce qui sugg&#xE8;re une fonction d&#x26;#39;activation transcriptionnelle. Une analyse similaire de type sauvage HOXA9 r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; 13 g&#xE8;nes cibles, dont 12 &#xE9;taient r&#xE9;gul&#xE9;s &#xE0; la hausse, et 1 a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;gul&#xE9;e &#xE0; la baisse. En revanche, de type sauvage NUP98 eu aucun effet sur l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes, ce qui d&#xE9;montre que le domaine HOXA9 liaison &#xE0; l&#x26;#39;ADN est n&#xE9;cessaire pour la r&#xE9;gulation des g&#xE8;nes. Co-transfection des exp&#xE9;riences en utilisant un rapporteur de la lucif&#xE9;rase li&#xE9; au promoteur d&#x26;#39;un des g&#xE8;nes cibles NUP98-HoxA9 confirm&#xE9; up-r&#xE9;gulation au niveau transcriptionnel par NUP98-HOXA9 mais non pas par une HOXA9 ou NUP98. Ces donn&#xE9;es indiquent que NUP98-HOXA9 est un facteur de transcription aberrante dont l&#x26;#39;activit&#xE9; d&#xE9;pend du domaine HOXA9 liaison &#xE0; l&#x26;#39;ADN, mais a un effet plus fort et plus large que la transcription HOXA9. Plusieurs des g&#xE8;nes r&#xE9;gul&#xE9;s par NUP98-HOXA9 sont associ&#xE9;es &#xE0; une prolif&#xE9;ration cellulaire accrue et la survie ainsi que le m&#xE9;tabolisme des m&#xE9;dicaments, apportant des &#xE9;clairages sur la pathogen&#xE8;se et l&#x26;#39;&#xE9;pid&#xE9;miologie de NUP98-HOXA9 induite par la LMA.

L&#x26;#39;oncog&#xE8;ne NUP98-HOXA9 transcription g&#xE9;nique induit dans les cellules my&#xE9;lo&#xEF;des

Das Onkogen Nup98-HoxA9 induziert Gen-Transkription in myeloischen Zellen.

Il gene Nup98 nucleoporin &egrave; spesso riarrangiato in leucemia mieloide acuta (AML). Nella maggior parte dei casi ci&ograve; si traduce in fusione tra il capolinea di N di Nup98 al dominio di associazione del DNA di un fattore di trascrizione homeodomain. Il prototipo di queste fusioni, Nup98-HOXA9, &egrave; associato con AML umana e induce AML in modelli murini. Per comprendere i meccanismi con cui Nup98-HOXA9 cause AML, abbiamo espresso in cellule mieloidi e identificati i geni bersaglio usando i microarrays del oligonucleotide ad alta densit&agrave;. L&#39;analisi &egrave; stata effettuata in triplice copia e fu confermata dal quantitativo PCR in tempo reale. Dei 102 Nup98-HOXA9 obiettivo geni identificati, 92 erano up-regolato, e solo 10 erano down-regolato, suggerendo una funzione di attivazione trascrizionale. Una simile analisi del selvaggio-tipo HOXA9 rivelato 13 geni bersaglio, 12 delle quali sono state up-regolato, e 1 era gi&ugrave;-regolato. Al contrario, selvaggio-tipo Nup98 ha avuto alcun effetto sull&#39;espressione del gene, dimostrando che il dominio di legame del DNA HOXA9 &egrave; necessario per la regolazione dei geni. Esperimenti di co-transfection usando un reporter di luciferase legato al promotore di uno dei geni target Nup98-HOXA9 confermato su-regolazione a livello trascrizionale di Nup98-HOXA9, ma non da HOXA9 o Nup98. Questi dati indicano che Nup98-HOXA9 &egrave; un fattore di trascrizione aberranti cui attivit&agrave; dipende dal dominio di legame del DNA HOXA9 ma ha un effetto pi&ugrave; forte e pi&ugrave; ampia transcriptional rispetto HOXA9. Molti dei geni regolati da Nup98-HOXA9 sono associati con aumento della proliferazione cellulare e sopravvivenza cos&igrave; come il metabolismo del farmaco, fornendo approfondimenti la patogenesi ed epidemiologia di AML Nup98-HOXA9-indotta.

L&#39;oncogene Nup98-HOXA9 induce la trascrizione del gene in cellule mieloidi.

&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;NUP98&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x6025;&#x6027;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#xFF08;AML&#xFF09;&#x306B;&#x518D;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;DNA&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;NUP98&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x3067;&#x3001;&#x307B;&#x3068;&#x3093;&#x3069;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3001;NUP98-HOXA9&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3067;&#x30D2;&#x30C8;AML&#x3068;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;AML&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;AML&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x8868;&#x660E;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x5BC6;&#x5EA6;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x4E09;&#x91CD;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x5B9A;&#x91CF;&#x7684;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;PCR&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8B58;&#x5225;102 NUP98-HOXA9&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;92&#x306F;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;10&#x306F;&#x3001;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;HOXA9&#x306E;&#x540C;&#x69D8;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x3001;1&#x304C;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x305F;12&#x305D;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;13&#x306E;&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;NUP98&#x306F;HOXA9 DNA&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x5236;&#x5FA1;&#x306B;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x5B9F;&#x8A3C;&#x3057;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x53CA;&#x307C;&#x3055;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; NUP98-HOXA9&#x6A19;&#x7684;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306B;&#x9023;&#x7D50;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x5171;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;HOXA9&#x307E;&#x305F;&#x306F;NUP98&#x306E;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;NUP98-HOXA9&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;NUP98-HOXA9&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;HOXA9 DNA&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3001;HOXA9&#x3088;&#x308A;&#x5F37;&#x304F;&#x3001;&#x3088;&#x308A;&#x5E83;&#x3044;&#x8EE2;&#x5199;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; NUP98-HOXA9&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306F;&#x3001;NUP98-HOXA9&#x8A98;&#x767A;&#x6027;&#x6025;&#x6027;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x3068;&#x75AB;&#x5B66;&#x3078;&#x306E;&#x6D1E;&#x5BDF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x751F;&#x5B58;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x85AC;&#x7269;&#x4EE3;&#x8B1D;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;NUP98-HOXA9&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;

Nucleoporin Nup98 &#xC9C4; &#xC790;&#xC8FC; &#xAE09;&#xC131; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; (AML)&#xC5D0; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xC815;&#xB82C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC758; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC774; homeodomain &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790;&#xB294; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC744; nup98&#xC758; N &#xB9D0;&#xB2E8;&#xC758; &#xC735;&#xD569; &#xACB0;&#xACFC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; fusions Nup98 hoxa9&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0; &#xD0C0;&#xC785; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; AML &#xC5F0;&#xACB0; &#xB418;&#xBA70; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0;&#xC11C; AML&#xC744; &#xC720;&#xB3C4; &#xD55C;&#xB2E4;. Nup98-hoxa9&#xB294; &#xAE09;&#xC131; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xD45C;&#xD604; &#xB418; &#xACE0; &#xACE0;&#xBC00;&#xB3C4; oligonucleotide microarrays&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4;. &#xBD84;&#xC11D;&#xACFC; 3 &#xC911;&#xC5D0; &#xC218;&#xD589; &#xB41C; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; PCR&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 102 Nup98 HOXA9 &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4;&#xC758; 92 &#xD588;&#xB2E4; &#xCD5C;&#xB300; &#xD1B5;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xC720;&#xC77C;&#xD55C; 10 &#xB2E4;&#xC6B4; &#xADDC;&#xC81C;, transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xD568;&#xC218;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; hoxa9&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC0AC;&#xD55C; &#xBD84;&#xC11D; 13 &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; 12 &#xC704;&#xB85C; &#xD588;&#xB2E4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; 1&#xC740; &#xC544;&#xB798;&#xB85C;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; Nup98 &#xD588;&#xB2E4; HOXA9 DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC808;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694; &#xD558;&#xB2E4;&#xB294; &#xAC83;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC8FC;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xAE30;&#xC790; Nup98 HOXA9 &#xB300;&#xC0C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xBAA8;&#xD130;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; co-transfection &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD655;&#xC778; &#xCD5C;&#xB300;-&#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; HOXA9 &#xB610;&#xB294; Nup98 &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; Nup98 hoxa9&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; transcriptional &#xC218;&#xC900;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; Nup98 HOXA9 &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xD65C;&#xB3D9; HOXA9 DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; HOXA9 &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB354; &#xAC15;&#xD558;&#xACE0; &#xB113;&#xC740; transcriptional &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00; &#xD0C8; &#xC120; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xC788;&#xC74C;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Nup98 hoxa9&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80; &#xC99D;&#xAC00; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xACFC; &#xC0DD;&#xC874; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB300;&#xC0AC;, pathogenesis &#xBC0F; Nup98 HOXA9 &#xC720;&#xBC1C; &#xB41C; &#xAE09;&#xC131; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC758; &#xC5ED;&#xD559;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xCC30;&#xB825;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nup98 HOXA9 oncogene &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC804;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El nucleoporin Nup98 gen a menudo se reorganizan en la leucemia miel&#xF3;gena aguda (LMA). En la mayor&#xED;a de los casos esto da como resultado la fusi&#xF3;n del extremo N de Nup98 al dominio de uni&#xF3;n al ADN de un factor de transcripci&#xF3;n homeodominio. El prototipo de estas fusiones, Nup98-Hoxa9, se asocia con la LMA y LMA humana induce en modelos de rat&#xF3;n. Para comprender los mecanismos por los cuales Nup98-Hoxa9 causa de la LMA, que se expresan en c&#xE9;lulas mieloides y se identificaron sus genes diana con alta densidad de microarrays de ADN. El an&#xE1;lisis se realiz&#xF3; por triplicado y fue confirmado por PCR cuantitativa en tiempo real. De los 102 Nup98-Hoxa9 genes diana identificados, 92 fueron reguladas, y s&#xF3;lo el 10 se redujeron regulado, lo que sugiere una funci&#xF3;n de activaci&#xF3;n de la transcripci&#xF3;n. Un an&#xE1;lisis similar de tipo salvaje Hoxa9 revel&#xF3; 13 genes diana, 12 de los cuales fueron hasta reguladas, y 1 era el regulado. En contraste, de tipo salvaje Nup98 no tuvo ning&#xFA;n efecto sobre la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica, lo que demuestra que el dominio de uni&#xF3;n ADN Hoxa9 se requiere para la regulaci&#xF3;n de genes. Co-transfecci&#xF3;n experimentos utilizando un reportero de la luciferasa unido al promotor de uno de los genes diana Nup98-Hoxa9 confirm&#xF3; la regulaci&#xF3;n a nivel transcripcional por Nup98 Hoxa9-pero no por cualquiera de las Hoxa9 o Nup98. Estos datos indican que Nup98-Hoxa9 es un factor de transcripci&#xF3;n aberrante cuya actividad depende del dominio de ADN Hoxa9 vinculante, pero tiene un efecto fuerte y m&#xE1;s amplia de la transcripci&#xF3;n de Hoxa9. Varios de los genes regulados por Nup98-Hoxa9 se asocian con aumento de la proliferaci&#xF3;n celular y la supervivencia, as&#xED; como el metabolismo de f&#xE1;rmacos, y proporciona informaci&#xF3;n sobre la patog&#xE9;nesis y la epidemiolog&#xED;a de Nup98-Hoxa9 LMA inducida.

El oncog&#xE9;n Nup98-Hoxa9 induce la transcripci&#xF3;n de genes en las c&#xE9;lulas mieloides

CD45&#xFF0C;&#x53D7;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x9176; (PTP)&#xFF0C;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x5C55;&#x548C;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x663E;&#x793A;&#x8FD9;&#x4E8C;&#x805A;&#x53CD;&#x5E94; CD45 &#x4E0B;&#x89C4;&#x7BA1;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7531;&#x54EA;&#x4E2A; CD45 &#x4E8C;&#x805A;&#x53CD;&#x5E94;&#x89C4;&#x7BA1;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#xFF0C;&#x548C; CD45 &#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x7684; PTP &#x6D3B;&#x6027;&#x8F83;&#x5355;&#x4F53;&#x4E3A;&#x6CA1;&#x6709;&#x76F4;&#x63A5;&#x8BC1;&#x636E;&#x3002;CD45 &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x5173;&#x8054; CD45 AP (CD45 &#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;)&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x4ECE; CD45 AP &#x7A7A;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6709;&#x66F4;&#x9AD8;&#x7EA7;&#x522B;&#x7684; CD45 &#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x6697;&#x793A; CD45 AP &#x6291;&#x5236; CD45 &#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B; CD45 AP &#x7A7A; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x7EBF;&#xFF0C;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E00;&#x70B9;&#x65C5;&#x6E38;&#x4E0E;&#x73AF;&#x5883;&#x5B66;&#x9662;-1&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x4ECE;&#x81EA;&#x53D1;&#x7684;&#x80F8;&#x817A;&#x80BF;&#x7624; CD45 AP &#x7A7A;&#x9F20;&#x6807;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x3002;&#x8F6C;&#x67D3;&#x7684; CD45 AP &#x6291;&#x5236;&#x7684; CD45 &#x4E8C;&#x805A;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x7684;&#x91CF;&#x4E0E; CD45 AP &#x65C5;&#x6E38;&#x4E0E;&#x73AF;&#x5883;&#x5B66;&#x9662; 1 &#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8868;&#x793A;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x5C0F;&#x9F20;&#x80F8;&#x817A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x65C5;&#x6E38;&#x4E0E;&#x73AF;&#x5883;&#x5B66;&#x9662; 1 transfectants &#x5FAE;&#x7C92;&#x4F53;&#x7EC4;&#x5206;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0; CD45 PTP &#x6D3B;&#x6027; CD45 &#x9634;&#x6027; AP &#x6BD4;&#x5728;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D; CD45 AP &#x9633;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x663E;&#x8457;&#x964D;&#x4F4E;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x652F;&#x6301;&#x5C06;&#x5728;&#x5176;&#x4E2D; CD45 AP &#x5BF9;&#x4E8C;&#x805A;&#x4F53; CD45 &#x5904;&#x4E8E;&#x975E;&#x6D3B;&#x52A8;&#x72B6;&#x6001;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5B83;&#x4EEC;&#x8F6C;&#x6362;&#x4E3A;&#x6D3B;&#x8DC3;&#x7684;&#x5355;&#x4F53;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;

CD45 &#x76F8;&#x5173;&#x86CB;&#x767D;&#x6291;&#x5236; CD45 &#x4E8C;&#x805A;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5411;&#x4E0A;&#x8C03;&#x8282;&#x5176;&#x86CB;&#x767D;&#x916A;&#x6C28;&#x9178;&#x78F7;&#x9178;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x3002;

CD45, a receptor-like protein tyrosine phosphatase (PTP), plays an essential role in lymphocyte development and immune responses. Recent evidence suggests that dimerization of CD45 down-regulates its function. However, the mechanisms by which CD45 dimerization is regulated remain unclear, and there is no direct evidence that the PTP activity of CD45 dimers is less than that of monomers. CD45 in lymphocytes associates with CD45-AP (CD45-associated protein). Here we show that T cells from CD45-AP-null mice have a much higher level of CD45 dimers than those of wild-type mice, suggesting that CD45-AP inhibits CD45 dimer formation. This was confirmed with the use of a novel CD45-AP-null T-cell line, ALST-1, that we established from a spontaneous thymic tumor found in a CD45-AP-null mouse. Transfected CD45-AP inhibited CD45 dimer formation in ALST-1 cells in proportion to the amount of CD45-AP expressed. Finally, with the use of microsomal fractions from both mouse thymocytes and ALST-1 transfectants, the PTP activity of CD45 was found to be significantly lower in CD45-AP-negative cells than in CD45-AP-positive cells. Therefore, our results support a model in which binding of CD45-AP to inactive CD45 dimers converts them to active monomers.

CD45-associated protein inhibits CD45 dimerization and up-regulates its protein tyrosine phosphatase activity.

CD45, un r&#xE9;cepteur de type prot&#xE9;ine tyrosine phosphatase (PTP), joue un r&#xF4;le essentiel dans le d&#xE9;veloppement des lymphocytes et les r&#xE9;ponses immunitaires. Des donn&#xE9;es r&#xE9;centes sugg&#xE8;rent que la dim&#xE9;risation du CD45 r&#xE9;gule &#xE0; la baisse sa fonction. Cependant, les m&#xE9;canismes par lesquels CD45 dim&#xE9;risation est r&#xE9;glement&#xE9;e restent floues, et il n&#x26;#39;y a pas de preuve directe que l&#x26;#39;activit&#xE9; PTP de CD45 dim&#xE8;res est inf&#xE9;rieure &#xE0; celle des monom&#xE8;res. CD45 dans les lymphocytes associ&#xE9;s avec CD45-AP (CD45-associated protein). Ici, nous montrons que les cellules T CD45-AP &#xE0; partir de souris nulles pour avoir un niveau beaucoup plus &#xE9;lev&#xE9; de CD45 dim&#xE8;res que ceux des souris de type sauvage, ce qui sugg&#xE8;re que CD45-CD45 inhibe AP formation de dim&#xE8;res. Cela a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;utilisation d&#x26;#39;un roman CD45-AP-nulle lign&#xE9;e de cellules T, ALST-1, que nous avons &#xE9;tabli &#xE0; partir d&#x26;#39;une tumeur spontan&#xE9;e thymique trouv&#xE9; dans une souris CD45-AP-nulle. Transfect&#xE9;e CD45-CD45 AP inhib&#xE9;e dans la formation de dim&#xE8;res ALST-1 cellules en proportion de la quantit&#xE9; de CD45-PA exprim&#xE9;. Enfin, avec l&#x26;#39;utilisation de fractions microsomales de thymocytes de souris et les deux ALST-1 transfectants, l&#x26;#39;activit&#xE9; PTP du CD45 a &#xE9;t&#xE9; jug&#xE9;e significativement plus faible dans les cellules CD45-AP-n&#xE9;gatifs que dans CD45-AP-cellules positives. Par cons&#xE9;quent, nos r&#xE9;sultats supportent un mod&#xE8;le dans lequel la liaison du CD45-AP &#xE0; l&#x26;#39;&#xE9;tat inactif CD45 dim&#xE8;res les convertit en monom&#xE8;res actifs.

CD45-CD45 associ&#xE9;e prot&#xE9;ine inhibe la dim&#xE9;risation et Up-r&#xE9;gule son activit&#xE9; de la prot&#xE9;ine tyrosine phosphatase

CD45-assoziierten Protein hemmt die CD45-Dimerisierung und up-reguliert seine Protein-Tyrosin-Phosphatase-Aktivit&#xE4;t.

CD45, una fosfatasi tirosina della proteina recettore-like (PTP), gioca un ruolo essenziale nel linfocita risposte sviluppo e immunitario. Recenti evidenze suggeriscono che la dimerizzazione di CD45 gi&ugrave;-regola la sua funzione. Tuttavia, i meccanismi da cui CD45 &egrave; regolata dimerizzazione rimangono poco chiari, e non non c&#39;&egrave; alcuna prova diretta che l&#39;attivit&agrave; PTP di dimeri CD45 &egrave; inferiore a quello dei monomeri. CD45 nei linfociti associa CD45-AP (CD45-associated protein). Qui vi mostriamo che cellule T da topi CD45-AP-null hanno un livello molto pi&ugrave; elevato di CD45 dimeri di quelle dei topi wild-type, suggerendo che CD45-AP inibisce la formazione di dimero CD45. Ci&ograve; &egrave; stato confermato con l&#39;uso di un romanzo CD45-AP-null T-cell line, ALST-1, che abbiamo stabiliti da un tumore del timo spontaneo, trovato in un mouse CD45-AP-null. AP-CD45 transfected inibito CD45 formazione del dimero ALST-1 cellule in proporzione alla quantit&agrave; di CD45-AP espresso. Infine, con l&#39;uso delle frazioni microsomiali da timociti mouse sia transfettanti ALST-1, l&#39;attivit&agrave; PTP di CD45 &egrave; stato trovato per essere significativamente inferiore nelle cellule CD45-AP-negativo rispetto a cellule CD45-AP-positive. Pertanto, i nostri risultati supportano un modello nel quale associazione di CD45-AP a inattivi CD45 dimeri li converte in monomeri attivi.

CD45-associated protein inibisce la dimerizzazione CD45 e up-regola la sua attivit&agrave; di proteina tirosina fosfatasi.

CD45&#x3001;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x69D8;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#xFF08;PTP&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3001;CD45&#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;CD45&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5316;&#x304C;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4E0D;&#x660E;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x3067;&#x3001;CD45&#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;PTP&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;&#x5358;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x306A;&#x8A3C;&#x62E0;&#x306F;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; CD45-AP&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CD45&#xFF08;CD45-&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF09;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CD45-AP-&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7531;&#x6765;&#x306E;T&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;CD45-AP&#x306F;&#x3001;CD45&#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3088;&#x308A;&#x3082;CD45&#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x306E;&#x306F;&#x308B;&#x304B;&#x306B;&#x9AD8;&#x3044;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306A;&#x80F8;&#x817A;&#x816B;&#x760D;&#x304B;&#x3089;&#x6A39;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;CD45-AP-&#x30CC;&#x30EB;T&#x7D30;&#x80DE;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;ALST-1&#x306F;&#x3001;CD45-AP-&#x30CC;&#x30EB;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3067;&#x898B;&#x3064;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x5C0F;&#x8AAC;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;CD45-AP&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x73FE;CD45-AP&#x306E;&#x91CF;&#x306B;&#x6BD4;&#x4F8B;&#x3057;&#x3066;ALST-1&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;CD45&#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x5F8C;&#x306B;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x80F8;&#x817A;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;ALST-1&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30DF;&#x30AF;&#x30ED;&#x30BD;&#x30FC;&#x30E0;&#x753B;&#x5206;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x3001;CD45&#x306E;PTP&#x6D3B;&#x6027;&#x306F;CD45-AP-&#x967D;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x3088;&#x308A;&#x3082;CD45-AP-&#x9670;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x6709;&#x610F;&#x306B;&#x4F4E;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x975E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306B;CD45&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x3078;&#x306E;CD45-AP&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x304C;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x306A;&#x30E2;&#x30CE;&#x30DE;&#x30FC;&#x306B;&#x5909;&#x63DB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x30B5;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CD45-&#x95A2;&#x9023;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;CD45&#x306E;&#x4E8C;&#x91CF;&#x4F53;&#x5316;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3;&#x30DB;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;

CD45, &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xD6A8;&#xC18C; (PTP) &#xAC1C;&#xBC1C;&#xACFC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC751;&#xB2F5; &#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC778; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC99D;&#xAC70; &#xC81C;&#xC2DC;&#xC758; &#xADF8; dimerization CD45 &#xB2E4;&#xC6B4; &#xC870;&#xC808; &#xAE30;&#xB2A5;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC5B4;&#xB5A4; CD45 &#xC5EC; dimerization &#xADDC;&#xC81C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBD88;&#xBD84;&#xBA85;, &#xC720;&#xC9C0; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; CD45 &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; PTP &#xD65C;&#xB3D9; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xC791;&#xC73C;&#xBA74; &#xC9C1;&#xC811; &#xC99D;&#xAC70;&#xAC00; &#xC5C6;&#xB2E4;. &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; CD45 CD45-AP (CD45 &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;)&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; CD45 AP null &#xC0DD;&#xC950;&#xC5D0;&#xC11C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xADF8; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xBCF4;&#xB2E4; CD45 &#xC774;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xD6E8;&#xC52C; &#xB192;&#xC740; &#xC218;&#xC900; CD45 AP CD45 dimer &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD558;&#xC790;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC18C;&#xC124; CD45 AP null T-&#xC140; &#xB77C;&#xC778;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; ALST-1 &#xC6B0;&#xB9AC; CD45 AP null &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC778; thymic &#xC885;&#xC591;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC124;&#xB9BD;. Transfected CD45 AP &#xC800;&#xD574; CD45 CD45 AP&#xC758; &#xC591;&#xC5D0; &#xBE44;&#xB840;&#xD558;&#xC5EC; ALST 1 &#xC140;&#xC5D0; &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; &#xD615;&#xC131; &#xD45C;&#xD604;. &#xB9C8;&#xC9C0;&#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C;, &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; thymocytes&#xACFC; ALST-1 transfectants microsomal &#xBD84;&#xC218;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; CD45 PTP &#xD65C;&#xB3D9; CD45-AP-&#xAE0D;&#xC815;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCF4;&#xB2E4; CD45 AP &#xC74C;&#xC218;&#xAC00; &#xC140;&#xC5D0; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xB0AE;&#xC740; &#xAC83;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC;&#xB294; &#xBE44;&#xD65C;&#xC131; CD45 &#xC774;&#xD569;&#xCCB4; CD45 AP&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xBCC0;&#xD658; &#xD65C;&#xC131; &#xB2E8;&#xC704;&#xCCB4; &#xBAA8;&#xB378;&#xC744; &#xC9C0;&#xC6D0; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

CD45 &#xAD00;&#xB828; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; CD45 dimerization &#xC5B5;&#xC81C; &#xBC0F; &#xCD5C;&#xB300; &#xC870;&#xC808; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; &#xC778;&#xC0B0; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xD6A8;&#xC18C; &#xD65C;&#xB3D9;.

CD45, un receptor-como la prote&#xED;na tirosina fosfatasa (PTP), juega un papel esencial en el desarrollo de los linfocitos y la respuesta inmune. La evidencia reciente sugiere que la dimerizaci&#xF3;n de CD45 regula a la baja su funci&#xF3;n. Sin embargo, los mecanismos por los cuales se regula CD45 dimerizaci&#xF3;n no est&#xE1;n claras, y no hay evidencia directa de que la actividad de PTP CD45 d&#xED;meros es menor que la de los mon&#xF3;meros. CD45 en los linfocitos asociados con CD45-AP (CD45 la prote&#xED;na asociada). Aqu&#xED; nos muestran que las c&#xE9;lulas T de CD45-AP-null ratones tienen un nivel mucho m&#xE1;s alto de d&#xED;meros de CD45 que las de los ratones de tipo salvaje, lo que sugiere que CD45-CD45 inhibe la AP la formaci&#xF3;n de d&#xED;meros. Esto fue confirmado con el uso de un novedoso CD45-AP-nulo l&#xED;nea de c&#xE9;lulas T, Alst-1, que se estableci&#xF3; a partir de un tumor t&#xED;mico espont&#xE1;nea se encuentra en un rat&#xF3;n CD45-AP-nulo. Transfectadas CD45-AP inhibe la formaci&#xF3;n de d&#xED;mero CD45 en Alst-1 en las c&#xE9;lulas en proporci&#xF3;n a la cantidad de CD45-AP expresado. Finalmente, con el uso de fracciones microsomales de timocitos de rat&#xF3;n y ambos transfectantes Alst-1, la actividad de PTP de CD45 se encontr&#xF3; que era significativamente menor en las c&#xE9;lulas CD45-AP-negativas que en CD45-AP de c&#xE9;lulas positivas. Por lo tanto, nuestros resultados apoyan un modelo en el que la uni&#xF3;n de CD45-CD45 AP inactivos d&#xED;meros los convierte en mon&#xF3;meros activos.

CD45-CD45 inhibe la prote&#xED;na asociada a la dimerizaci&#xF3;n y hasta regula su actividad prote&#xED;na tirosina fosfatasa

&#x7136;&#x662F;&#x5C0F;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5468;&#x671F;&#x4E4B;&#x95F4;&#x9E1F;&#x82F7;&#x4E8C;&#x78F7;&#x9178;&#x679C;&#x7CD6; (&#x56FD;&#x5185;&#x751F;&#x4EA7;&#x603B;&#x503C;)-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7A97;&#x4F53; (RanGDP) &#x548C;&#x9E1F;&#x82F7;&#x4E09;&#x78F7;&#x9178; (GTP)-&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7A97;&#x4F53; (RanGTP) &#x548C;&#x626E;&#x6F14;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x89D2;&#x8272;&#xFF0C;&#x6838;&#x8FD0;&#x8F93;&#x548C;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x3002;&#x5189;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x5176;&#x4E0E;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x7EAF;&#x7684; RanGDP &#x548C; RanGTP &#x7684;&#x914D;&#x5408;&#x662F;&#x81F3;&#x5173;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x3002;&#x5189;&#x7EDC;&#x5408;&#x4E0E; nonhydrolyzable GTP &#x6A21;&#x62DF;&#xFF0C;GMPPNP (RanGMPPNP) &#x662F;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; RanGTP &#x7684;&#x6C34;&#x89E3;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x5F53;&#x9700;&#x8981;&#x65F6;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;&#x5728;&#x6B64;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C55;&#x793A; UNO Q &#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x67F1;&#x5411;&#x5189;&#x7684;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x662F;&#x5BF9; MgCl(2) &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5C0F;&#x5C0F;&#x7684;&#x53D8;&#x52A8;&#x975E;&#x5E38;&#x654F;&#x611F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x5C5E;&#x6027;&#x6765;&#x51C0;&#x5316;&#x91CD;&#x7EC4;&#x7684; RanGTP&#x3001; RanGMPPNP&#x3001; RanGDP &#x914D;&#x5408;&#x7269;&#x3002;10 &#x6BEB;&#x7C73; MgCl(2)&#xFF0C;&#x5728;&#x5189;&#x5728;&#x6D41;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E3B;&#x8981;&#x53D1;&#x73B0;&#xFF0C;&#x5E76;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5206;&#x5F00;&#x4E86;&#x7EDD;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x7EC6;&#x83CC;&#x86CB;&#x767D;&#x3002;&#x540E;&#x51CF;&#x5C11;&#x5230; 5 m m MgCl(2) &#x7684;&#x6D53;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x7EAF;&#x5316;&#x7684; RanGTP&#x3001; RanGMPPNP &#x548C; RanGDP &#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x52A0;&#x8F7D;&#x5230;&#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x67F1;&#x548C;&#x6C2F;&#x5316;&#x94A0;&#x68AF;&#x5EA6;&#x6D17;&#x8131;&#x3002;&#x91CA;&#x653E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x548C;&#x6838;&#x5BF9;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x7684;&#x9AD8;&#x6027;&#x80FD;&#x6DB2;&#x76F8;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5; (HPLC) &#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x7EAF;&#x5EA6;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x7B79;&#x5907;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x786E;&#x8BA4;&#x7684;&#x7EAF;&#x5EA6;&#x548C;&#x5189;&#x7B79;&#x5907;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x7ED3;&#x5408;&#x3001; &#x9176;&#x6CD5;&#x3001; &#x548C;&#x6838;&#x5BFC;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E94;&#x4FBF;&#x5229;&#x5BF9;&#x6D89;&#x53CA;&#x5189;&#x901A;&#x8FC7;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7EAF;&#x529F;&#x80FD;&#x6027;&#x5189;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x3002;

&#x7EAF;&#x5316;&#x7684; RanGDP&#x3001; RanGTP&#x3001; RanGMPPNP &#x79BB;&#x5B50;&#x4EA4;&#x6362;&#x8272;&#x8C31;&#x6CD5;&#x3002;

Ran is a small GTPase that cycles between a guanosine diphosphate (GDP)-bound form (RanGDP) and a guanosine triphosphate (GTP)-bound form (RanGTP) and plays important roles in nuclear transport and mitosis. For studies of Ran function and its interactions with partner proteins, pure RanGDP and RanGTP complexes are critical. Ran complexed with the nonhydrolyzable GTP analog, GMPPNP (RanGMPPNP), is used instead of RanGTP when inhibition of hydrolysis is required. In this study, we demonstrate that the binding of Ran to a UNO Q ion exchange column is remarkably sensitive to small shifts in MgCl(2) concentration, and we use this property to purify recombinant RanGTP, RanGMPPNP, and RanGDP complexes. At 10 mM MgCl(2), Ran was found predominantly in the flow-through and, thus, was separated from the vast majority of bacterial proteins. After reducing the concentration of MgCl(2) to 5 mM, further purification of RanGTP, RanGMPPNP, and RanGDP was achieved by loading onto ion exchange columns and elution with an NaCl gradient. Purity of the resulting preparations was confirmed by releasing the bound nucleotide and checking it against a known nucleotide by high-performance liquid chromatography (HPLC). To further confirm the purity and function of the Ran preparations, appropriate protein-binding, enzymatic, and nuclear import assays were carried out. These methods should facilitate studies of cellular processes involving Ran by providing pure functional Ran-nucleotide complexes.

Purification of RanGDP, RanGTP, and RanGMPPNP by ion exchange chromatography.

Ran est une petite GTPase que les cycles entre une guanosine diphosphate (PIB) sous forme li&#xE9;e (RanGDP) et une guanosine triphosphate (GTP)-forme li&#xE9;e (RanGTP) et joue un r&#xF4;le important dans le transport nucl&#xE9;aire et de la mitose. Pour les &#xE9;tudes de Ran fonction et de ses interactions avec les prot&#xE9;ines partenaires, RanGDP pur et complexes RanGTP sont essentiels. Ran complex&#xE9; avec le non hydrolysable analogique GTP, GMPPNP (RanGMPPNP), est utilis&#xE9; &#xE0; la place de RanGTP lorsque l&#x26;#39;inhibition de l&#x26;#39;hydrolyse est n&#xE9;cessaire. Dans cette &#xE9;tude, nous d&#xE9;montrons que la liaison de Ran &#xE0; une colonne de l&#x26;#39;ONU Q &#xE9;change d&#x26;#39;ions est remarquablement sensible &#xE0; de faibles variations MgCl (2) la concentration, et nous utilisons cette propri&#xE9;t&#xE9; pour purifier RanGTP recombinant, RanGMPPNP et complexes RanGDP. &#xC0; 10 mM MgCl (2), Ran a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; principalement dans le flux continu et, par cons&#xE9;quent, a &#xE9;t&#xE9; s&#xE9;par&#xE9; de la grande majorit&#xE9; des prot&#xE9;ines bact&#xE9;riennes. Apr&#xE8;s avoir r&#xE9;duit la concentration en MgCl (2) &#xE0; 5 mM, de purification RanGTP, RanGMPPNP, et RanGDP a &#xE9;t&#xE9; obtenue par chargement sur colonnes &#xE9;changeuses d&#x26;#39;ions et &#xE9;lution avec un gradient de NaCl. La puret&#xE9; des pr&#xE9;parations r&#xE9;sultant a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9;e par la lib&#xE9;ration du nucl&#xE9;otide li&#xE9; et le contr&#xF4;le contre un nucl&#xE9;otide connue par chromatographie liquide haute performance (CLHP). Pour confirmer davantage la puret&#xE9; et la fonction des pr&#xE9;parations Ran, appropri&#xE9;es dosages importation de prot&#xE9;ines de liaison, enzymatiques, et le nucl&#xE9;aire ont &#xE9;t&#xE9; effectu&#xE9;s. Ces m&#xE9;thodes devraient faciliter l&#x26;#39;&#xE9;tude des processus cellulaires impliquant Ran en fournissant purs fonctionnels Ran-nucl&#xE9;otidiques complexes.

Purification de RanGDP, RanGTP, et RanGMPPNP par Ion Exchange Chromatography

Reinigung von RanGDP, RanGTP und RanGMPPNP durch Ionenaustauschchromatographie.

Ran &egrave; una piccola GTPasi cicli tra un difosfato della guanosina (P.I.L.) - forma rilegata (RanGDP) e un guanosintrifosfato (GTP) - forma rilegata (RanGTP), che gioca un ruolo importante nel trasporto nucleare e mitosi. Per gli studi di funzione Ran e le relative interazioni con le proteine partner, puri RanGDP e RanGTP complessi sono critici. Ran complessato con l&#39;analogico nonhydrolyzable GTP, GMPPNP (RanGMPPNP), viene utilizzato invece di RanGTP inibizione della idrolisi &egrave; necessaria. In questo studio, ci dimostrano che l&#39;associazione di Ran a una colonna di scambio ionico UNO Q &egrave; straordinariamente sensibile ai piccoli spostamenti nella concentrazione di MgCl(2), e usiamo questa propriet&agrave; per purificare complessi ricombinanti RanGTP, RanGMPPNP e RanGDP. A 10 mM MgCl(2), Ran &egrave; stato trovato principalmente in flow-through e, quindi, fu separato dalla stragrande maggioranza delle proteine batteriche. Dopo la riduzione della concentrazione di MgCl(2) a 5 mM, ulteriore purificazione di RanGTP, RanGMPPNP e RanGDP &egrave; stato raggiunto dal caricamento delle colonne di scambio ionico ed eluizione con un gradiente di NaCl. Purezza delle preparazioni risultante &egrave; stata confermata da rilasciando il nucleotide associato e controllo contro un nucleotide noto mediante cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC). Per confermare ulteriormente la purezza e la funzione delle preparazioni Ran, sono state effettuate analisi appropriata importazione associazione proteina enzimatica e nucleare. Questi metodi dovrebbero facilitare studi di processi cellulari che coinvolgono Ran fornendo puri funzionali complessi Ran-nucleotide.

Purificazione del RanGDP, RanGTP e RanGMPPNP mediante cromatografia a scambio ionico.

RAN&#x306F;&#x3001;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E8C;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;GDP&#xFF09;&#x7D50;&#x5408;&#x578B;&#xFF08;RanGDP&#xFF09;&#x3068;&#x30B0;&#x30A2;&#x30CE;&#x30B7;&#x30F3;&#x4E09;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#xFF08;GTP&#xFF09;&#x7D50;&#x5408;&#x578B;&#xFF08;RanGTP&#xFF09;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x30B5;&#x30A4;&#x30AF;&#x30EB;&#x304C;&#x6838;&#x8F38;&#x9001;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x4F4E;&#x5206;&#x5B50;&#x91CF;GTPase&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x862D;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D14;&#x7C8B;&#x306A;RanGDP&#x3068;RanGTP&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x306A;&#x5834;&#x5408;&#x306F;&#x3001;RanGTP&#x306E;&#x4EE3;&#x308F;&#x308A;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x975E;&#x52A0;&#x6C34;&#x5206;&#x89E3;&#x6027;GTP&#x30A2;&#x30CA;&#x30ED;&#x30B0;&#x3001;GMPPNP&#xFF08;RanGMPPNP&#xFF09;&#x3068;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x8D70;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D50;&#x5408;&#x304C;UNO Q&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x30AB;&#x30E9;&#x30E0;&#x306B;&#x8D70;&#x3063;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;MgCl 2&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x306A;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306B;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x654F;&#x611F;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;RanGTP&#x3001;RanGMPPNP&#x3001;&#x3068;RanGDP&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x7CBE;&#x88FD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D1;&#x30C6;&#x30A3;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002; 10mM&#x3067;&#x306E;MgCl&#xFF08;2&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B9;&#x30EB;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x4E3B;&#x306B;&#x767A;&#x898B;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x862D;&#x3068;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3001;&#x7D30;&#x83CC;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 5mM&#x306E;&#x3001;RanGTP&#x3001;RanGMPPNP&#x3001;&#x3068;RanGDP&#x306E;&#x3055;&#x3089;&#x306A;&#x308B;&#x7CBE;&#x88FD;&#x306B;&#x5869;&#x5316;&#x30DE;&#x30B0;&#x30CD;&#x30B7;&#x30A6;&#x30E0;&#xFF08;2&#xFF09;&#x306E;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x5F8C;NaCl&#x52FE;&#x914D;&#x3067;&#x306E;&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x30AB;&#x30E9;&#x30E0;&#x3068;&#x6EB6;&#x51FA;&#x306B;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C9;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x8ABF;&#x88FD;&#x7269;&#x306E;&#x7D14;&#x5EA6;&#x306F;&#x3001;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x3092;&#x200B;&#x200B;&#x89E3;&#x653E;&#x3057;&#x3001;&#x9AD8;&#x901F;&#x6DB2;&#x4F53;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#xFF08;HPLC&#xFF09;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3066;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x30C1;&#x30A7;&#x30C3;&#x30AF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x862D;&#x88FD;&#x5264;&#x306E;&#x7D14;&#x5EA6;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;&#x9175;&#x7D20;&#x3001;&#x6838;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30E1;&#x30BD;&#x30C3;&#x30C9;&#x306F;&#x3001;&#x7D14;&#x7C8B;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x862D;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3067;&#x3001;&#x862D;&#x304C;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x904E;&#x7A0B;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3092;&#x4FC3;&#x9032;&#x3059;&#x3079;&#x304D;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;

&#x30A4;&#x30AA;&#x30F3;&#x4EA4;&#x63DB;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C8;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308A;RanGDP&#x3001;RanGTP&#x3068;RanGMPPNP&#x306E;&#x7CBE;&#x88FD;

&#xB780;&#xC740; &#xC791;&#xC740; GTPase guanosine diphosphate &#xC0AC;&#xC774; &#xC0AC;&#xC774;&#xD074; (GDP)-&#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xD3FC; (RanGDP)&#xC640; guanosine &#xC0BC;&#xC778;&#xC0B0; (GTP)-&#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xD3FC; (RanGTP)&#xB294; &#xD575; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xC720;&#xC0AC; &#xBD84;&#xC5F4;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4;. Ran &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC21C;&#xC218;&#xD55C; RanGDP &#xBC0F; RanGTP &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB294; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. GMPPNP (RanGMPPNP) nonhydrolyzable GTP &#xC544;&#xB0A0;&#xB85C;&#xADF8; complexed &#xB780; &#xAC00;&#xC218;&#xBD84;&#xD574; &#xC5B5;&#xC81C; &#xD544;&#xC694;&#xD55C; &#xACBD;&#xC6B0; RanGTP &#xB300;&#xC2E0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xB780; &#xC6B0;&#xB178; Q &#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658; &#xC5F4;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xD604;&#xC800; &#xD558; &#xAC8C; &#xC791;&#xC740; MgCl(2) &#xB18D;&#xB3C4; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xBBFC;&#xAC10;&#xD55C; &#xACE0; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; RanGTP, RanGMPPNP, &#xBC0F; RanGDP &#xB2E8;&#xC9C0; &#xC815;&#xD654;&#xC774; &#xC18D;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. 10 M m MgCl(2), Ran &#xD1B5;&#xD574; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC8FC;&#xB85C; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC138;&#xADE0; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBD84;&#xB9AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. 5Mm Mgcl(2)&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xAC10;&#xC18C;, &#xD6C4; &#xCD94;&#xAC00; &#xC815;&#xD654; RanGTP, RanGMPPNP, &#xBC0F; Rangdp&#xC758; &#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658; &#xC5F4;&#xACFC; NaCl &#xADF8;&#xB77C;&#xB370;&#xC774;&#xC158;&#xC73C;&#xB85C; &#xCC28;&#xC785;&#xC5D0; &#xB85C;&#xB4DC; &#xD558; &#xC5EC; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC; &#xC900;&#xBE44;&#xC758; &#xC21C;&#xB3C4; &#xBC14;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xB97C; &#xD574;&#xC81C; &#xD558; &#xACE0; &#xACE0;&#xC131;&#xB2A5; &#xC561;&#xCCB4; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C; (HPLC)&#xC73C;&#xB85C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAC80;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;. &#xB354; &#xC21C;&#xB3C4; &#xB780; &#xC900;&#xBE44;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD655;&#xC778;, &#xC801;&#xC808; &#xD55C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;, &#xD6A8;&#xC18C;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC2E4;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC;&#xB294; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xB780; &#xC21C;&#xC218; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB780; &#xB274;&#xD074;&#xB808;&#xC624;&#xD2F0;&#xB4DC; &#xB2E8;&#xC9C0;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC6A9;&#xC774; &#xD574;&#xC57C;.

&#xC774;&#xC628; &#xAD50;&#xD658; &#xD06C;&#xB85C;&#xB9C8;&#xD1A0;&#xADF8;&#xB798;&#xD53C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; RanGDP, RanGTP, &#xBC0F; Rangmppnp&#xC758; &#xC815;&#xD654;.

Ran es una GTPasa peque&#xF1;a que los ciclos de entre un difosfato de guanosina (PIB) de forma unida (RanGDP) y guanosina trifosfato (GTP)-forma unida (RanGTP) y juega un papel importante en el transporte nuclear y mitosis. Para los estudios de la funci&#xF3;n Ran y sus interacciones con las prote&#xED;nas asociadas, RanGDP pura y complejos RanGTP son cr&#xED;ticos. Ran complejado con el an&#xE1;logo no hidrolizable de GTP, GMPPNP (RanGMPPNP), se utiliza en lugar de RanGTP cuando la inhibici&#xF3;n de la hidr&#xF3;lisis se requiere. En este estudio, se demuestra que la uni&#xF3;n de Ran a una columna de Q UNO de intercambio de iones es muy sensible a peque&#xF1;os cambios en MgCl (2) la concentraci&#xF3;n, y utilizar esta propiedad para purificar RanGTP recombinante, RanGMPPNP y complejos RanGDP. En 10 mM de MgCl (2), Ran se encuentra predominantemente en el flujo a trav&#xE9;s y, por tanto, se separ&#xF3; de la gran mayor&#xED;a de prote&#xED;nas bacterianas. Despu&#xE9;s de reducir la concentraci&#xF3;n de MgCl (2) a 5 mM, purificaci&#xF3;n adicional de RanGTP, RanGMPPNP, y RanGDP se logr&#xF3; mediante la carga en columnas de intercambio i&#xF3;nico y la eluci&#xF3;n con un gradiente de NaCl. La pureza de las preparaciones resultantes se confirm&#xF3; mediante la liberaci&#xF3;n de la envolvente de nucle&#xF3;tidos y la comprobaci&#xF3;n contra un nucle&#xF3;tido conocido por cromatograf&#xED;a l&#xED;quida de alta resoluci&#xF3;n (HPLC). Para confirmar a&#xFA;n m&#xE1;s la pureza y la funci&#xF3;n de los preparativos Ran, correspondientes ensayos de importaci&#xF3;n de uni&#xF3;n a prote&#xED;nas, enzim&#xE1;ticos, y la energ&#xED;a nuclear se llevaron a cabo. Estos m&#xE9;todos deben facilitar los estudios de procesos celulares que implican Ran proporcionando puros funcionales Ran-nucle&#xF3;tidos complejos.

Purificaci&#xF3;n de RanGDP, RanGTP, y RanGMPPNP por Cromatograf&#xED;a de intercambio i&#xF3;nico

PU.1 &#x662F; Ets &#x5BB6;&#x65CF;&#x4E0E;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5229;&#x7528;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D; PU.1 &#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x663E;&#x793A; PU.1 &#x7684;&#x7535;&#x5B50;&#x6295;&#x6807;&#x7CFB;&#x7EDF; DNA &#x7ED1;&#x5B9A;&#x57DF;&#x662F;&#x5FC5;&#x8981;&#x548C;&#x8DB3;&#x591F;&#x7684;&#x5176;&#x6838;&#x5B9A;&#x4F4D;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x548C;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x68C0;&#x6D4B;&#x8868;&#x660E; PU.1 &#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x9700;&#x8981;&#x4F46;&#x4E0D;&#x662F;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x8F7D;&#x4F53;&#x7684;&#x80FD;&#x6E90;&#x3002;PU.1 &#x76F4;&#x63A5;&#x4E0E;&#x4E24;&#x4E2A; nucleoporins&#xFF0C;Nup62 &#x548C; Nup153 &#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x4EA4;&#x6D41;&#x3002;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x7684; PU.1 &#x81F3; Nup153&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x662F; Nup62 &#x4E0B; RanGMPPNP&#xFF0C;&#x6307;&#x793A; PU.1.RanGTP.Nup153 &#x590D;&#x5408;&#x4F53;&#x5F62;&#x6210;, &#x6025;&#x5267;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x7535;&#x5B50;&#x6295;&#x6807;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x57DF;&#x5360;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x7684; Nup153 &#x4E0E; RanGMPPNP &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; PU.1&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A; Nup62 &#x662F;&#x9760;&#x8FD1;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6838;&#x5B54;&#xFF0C;&#x800C; Nup153 &#x662F;&#x5176;&#x6838;&#x4FA7;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E; RanGTP &#x5373;&#x901A;&#x8FC7;&#x589E;&#x52A0;&#x5176;&#x4EB2;&#x4E3A; Nup153 &#x548C;&#x63A8;&#x52A8;&#x8D70;&#x5411;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6838;&#x5B54;&#x7684;&#x6838;&#x4E00;&#x4FA7;&#x7684; PU.1 &#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x91D1;&#x6807; PU.1 &#x4E2D;&#x900F;&#x6027;&#x5316;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E00;&#x6982;&#x5FF5;&#x3002;

&#x627F;&#x8FD0;&#x4EBA;&#x72EC;&#x7ACB;&#x6838;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; PU.1 RanGTP &#x523A;&#x6FC0;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; Nup153 &#x901A;&#x8FC7;&#x5BFC;&#x5165;&#x3002;

PU.1 is a transcription factor of the Ets family with important functions in hematopoietic cell differentiation. Using green fluorescent protein-PU.1 fusions, we show that the Ets DNA binding domain of PU.1 is necessary and sufficient for its nuclear localization. Fluorescence and ultrastructural nuclear import assays showed that PU.1 nuclear import requires energy but not soluble carriers. PU.1 interacted directly with two nucleoporins, Nup62 and Nup153. The binding of PU.1 to Nup153, but not to Nup62, increased dramatically in the presence of RanGMPPNP, indicating the formation of a PU.1.RanGTP.Nup153 complex. The Ets domain accounted for the bulk of the interaction of PU.1 with Nup153 and RanGMPPNP. Because Nup62 is located close to the midplane of the nuclear pore complex whereas Nup153 is at its nuclear side, these findings suggest a model whereby RanGTP propels PU.1 toward the nuclear side of the nuclear pore complex by increasing its affinity for Nup153. This notion was confirmed by ultrastructural studies using gold-labeled PU.1 in permeabilized cells.

Carrier-independent nuclear import of the transcription factor PU.1 via RanGTP-stimulated binding to Nup153.

PU.1 est un facteur de transcription de la famille Ets avec des fonctions importantes dans la diff&#xE9;renciation des cellules h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques. Utilisation de prot&#xE9;ine fluorescente verte-PU.1 fusions, nous montrons que le domaine d&#x26;#39;ADN Ets liaison de PU.1 est n&#xE9;cessaire et suffisante pour que sa localisation nucl&#xE9;aire. Fluorescence et en microscopie &#xE9;lectronique des essais nucl&#xE9;aires &#xE0; l&#x26;#39;importation ont montr&#xE9; que PU.1 import nucl&#xE9;aire n&#xE9;cessite de l&#x26;#39;&#xE9;nergie, mais pas des transporteurs solubles. PU.1 interagissaient directement avec deux nucl&#xE9;oporines, les Nup62 et Nup153. La liaison de PU.1 &#xE0; Nup153, mais pas &#xE0; Nup62, augment&#xE9; de fa&#xE7;on spectaculaire dans la pr&#xE9;sence de RanGMPPNP, indiquant la formation d&#x26;#39;un complexe PU.1.RanGTP.Nup153. Le nom de domaine Ets ont repr&#xE9;sent&#xE9; l&#x26;#39;essentiel de l&#x26;#39;interaction de PU.1 avec Nup153 et RanGMPPNP. Parce que Nup62 est situ&#xE9; &#xE0; proximit&#xE9; du plan m&#xE9;dian du complexe du pore nucl&#xE9;aire alors Nup153 est &#xE0; son c&#xF4;t&#xE9; nucl&#xE9;aire, ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent un mod&#xE8;le dans lequel RanGTP propulse PU.1 vers le c&#xF4;t&#xE9; nucl&#xE9;aire du complexe de pore nucl&#xE9;aire en augmentant son affinit&#xE9; pour Nup153. Cette notion a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9;e par des &#xE9;tudes ultrastructurales en utilisant l&#x26;#39;or marqu&#xE9; PU.1 dans des cellules perm&#xE9;abilis&#xE9;es.

Transporteur ind&#xE9;pendant import nucl&#xE9;aire de l&#x26;#39;PU.1 Transcription Factor Via RanGTP stimul&#xE9;e par liaison &#xE0; Nup153

Carrier-unabh&#xE4;ngigen nukle&#xE4;ren Import des Transkriptionsfaktors PU.1 &#xFC;ber RanGTP-stimulierte Bindung an Nup153.

PU.1 &egrave; un fattore di trascrizione della famiglia Ets con funzioni importanti nella differenziazione delle cellule ematopoietiche. Utilizzando green fluorescent protein-PU.1 fusioni, mostriamo che il dominio di legame DNA Ets di PU.1 &egrave; necessario e sufficiente per la sua localizzazione nucleare. Fluorescenza e analisi ultrastrutturale importazione nucleare ha mostrato che importazione di pu.1 nucleare richiede energia ma i vettori non solubili. PU.1 interagito direttamente con due nucleoporins, Nup62 e Nup153. L&#39;associazione di PU.1 a Nup153, ma non per Nup62, aumentato drammaticamente in presenza di RanGMPPNP, che indica la formazione di un complesso di PU.1.RanGTP.Nup153. Il dominio Ets ha rappresentato per la maggior parte dell&#39;interazione del PU.1 con Nup153 e RanGMPPNP. Perch&eacute; Nup62 si trova vicino al midplane del poro nucleare complesso considerando che Nup153 &egrave; al suo fianco nucleare, questi risultati suggeriscono un modello per cui RanGTP aziona PU.1 verso il lato del poro nucleare complesso nucleare aumentando la sua affinit&agrave; per il Nup153. Questa nozione &egrave; stata confermata da studi ultrastrutturali utilizzando PU.1 marcato con oro in celle permeabilized.

Indipendente dalla portaerei nucleare importazione del fattore di trascrizione PU.1 via associazione RanGTP stimolato a Nup153.

PU.1&#x306F;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5099;&#x3048;&#x305F;Ets&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;-PU.1&#x878D;&#x5408;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;PU.1&#x306E;&#x30A8;&#x30C3;&#x30C4;&#x306E;DNA&#x7D50;&#x5408;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6838;&#x5C40;&#x5728;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5341;&#x5206;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6838;&#x8F38;&#x5165;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306F;PU.1&#x306E;&#x6838;&#x8F38;&#x5165;&#x306F;&#x3001;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x6C34;&#x6EB6;&#x6027;&#x306E;&#x62C5;&#x4F53;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002; PU.1&#x306F;&#x3001;2&#x3064;&#x306E;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x3001;Nup62&#x3068;Nup153&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3002; Nup153&#x306B;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x304F;&#x3001;Nup62&#x306B;PU.1&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306F;&#x3001;PU.1.RanGTP.Nup153&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x793A;&#x3059;&#x3001;RanGMPPNP&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x5287;&#x7684;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A8;&#x30C3;&#x30C4;&#x306E;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;Nup153&#x3068;RanGMPPNP&#x3068;PU.1&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x5927;&#x90E8;&#x5206;&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; Nup153&#x304C;&#x6838;&#x5074;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;Nup62&#x306F;&#x6838;&#x819C;&#x5B54;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C9;&#x30D7;&#x30EC;&#x30FC;&#x30F3;&#x306E;&#x8FD1;&#x304F;&#x306B;&#x914D;&#x7F6E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;RanGTP&#x304C;Nup153&#x306E;&#x89AA;&#x548C;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6838;&#x819C;&#x5B54;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x6838;&#x5074;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;PU.1&#x3092;&#x63A8;&#x9032;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x6982;&#x5FF5;&#x306F;&#x3001;&#x900F;&#x904E;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x91D1;&#x6A19;&#x8B58;PU.1&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;

Nup153&#x306B;RanGTP&#x523A;&#x6FC0;&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;PU.1&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x6838;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;

PU.1 &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xAC00;&#xC9C4; Ets &#xAC00;&#xC871;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C; &#xC774;&#xB2E4;. &#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; PU.1 fusions&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; PU.1&#xC758; Ets DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778;&#xC740; &#xD544;&#xC694; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8; &#xD575; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xCDA9;&#xBD84; &#xD55C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; ultrastructural &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; PU.1 &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xD544;&#xC694; &#xC5C6;&#xB294; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xC0AC;&#xC5C5;&#xC790; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. PU.1 2 nucleoporins, Nup62 &#xBC0F; nup153&#xC640; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. PU.1 Nup62, Nup153, &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xD558;&#xC9C0;&#xC758; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; RanGMPPNP, PU.1.RanGTP.Nup153 &#xBCF5;&#xD569;&#xCCB4;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xC874;&#xC7AC; &#xADF9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. Ets &#xB3C4;&#xBA54;&#xC778; nup153&#xC640; Rangmppnp&#xC640; PU.1&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84;&#xC744; &#xCC28;&#xC9C0; &#xD588;&#xB2E4;. Nup62&#xB294; Nup153 &#xD575; &#xC606;&#xC5D0;&#xB294; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD575; &#xACF5; &#xC911;&#xC559;&#xD310; &#xC704;&#xCE58; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC81C;&#xC548; &#xBAA8;&#xB378; Rangtp&#xC758; nup153&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC120;&#xD638;&#xB3C4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xC5EC; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD575; &#xACF5;&#xC758; &#xD575; &#xCABD;&#xC73C;&#xB85C; PU.1&#xC744; &#xCD94;&#xC9C4; &#xD558;&#xB294; &#xADF8;&#xAC83;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC;. &#xC774; &#xAC1C;&#xB150;&#xC740; &#xAE08; &#xC774;&#xB77C;&#xACE0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; PU.1&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; permeabilized &#xC140;&#xC5D0; ultrastructural &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;.

&#xC774;&#xB3D9; &#xD1B5;&#xC2E0;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; Nup153 RanGTP &#xC790;&#xADF9; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; PU.1&#xC758; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30;.

PU.1 es un factor de transcripci&#xF3;n de la familia Ets con funciones importantes en la diferenciaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas. Usando verdes fluorescentes PU.1 prote&#xED;nas fusiones, nos muestran que el dominio de uni&#xF3;n de ADN Ets PU.1 es necesaria y suficiente para su localizaci&#xF3;n nuclear. Los ensayos nucleares de fluorescencia y ultraestructurales de importaci&#xF3;n mostraron que PU.1 importaci&#xF3;n nuclear exige a las compa&#xF1;&#xED;as de energ&#xED;a, pero no solubles. PU.1 interactuado directamente con dos nucleoporinas y Nup62 y Nup153. La uni&#xF3;n de PU.1 a Nup153, pero no a Nup62, aumentado dr&#xE1;sticamente en presencia de RanGMPPNP, indicando la formaci&#xF3;n de un complejo PU.1.RanGTP.Nup153. El dominio Ets representaron la mayor parte de la interacci&#xF3;n de PU.1 con Nup153 y RanGMPPNP. Debido a que Nup62 se encuentra cerca del plano medio del complejo de poros nucleares, mientras que Nup153 est&#xE1; en su lado nuclear, estos hallazgos sugieren un modelo en el que RanGTP PU.1 impulsa hacia el lado nuclear del complejo de poros nucleares, aumentando su afinidad por Nup153. Esta idea fue confirmada por estudios ultraestructurales utilizando marcado con oro PU.1 en c&#xE9;lulas permeabilizadas.

Carrier independiente de la importaci&#xF3;n nuclear del factor de transcripci&#xF3;n PU.1 Via RanGTP estimulada por uni&#xF3;n a Nup153

NUP98-HOXA9&#xFF0C;t(7;11)(p15;p15) &#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x6613;&#x4F4D;&#xFF0C;&#x6240;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x5D4C;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x662F;&#x9AA8;&#x9AD3;&#x589E;&#x751F;&#x5F02;&#x5E38;&#x7EFC;&#x5408;&#x5F81;&#x548C;&#x6025;&#x6027;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x4E2D;&#x53EF;&#x80FD;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x51E0;&#x4E2A; NUP98 &#x878D;&#x5408;&#x7684;&#x539F;&#x578B;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x4E86;&#x5176;&#x5BF9;&#x5206;&#x5316;&#x3001; &#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x4E3B; /cd34 + &#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;&#x534A;&#x56FA;&#x6001;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x7ED3;&#x5408;&#x514D;&#x75AB;&#x5206;&#x5F62;&#x6001;&#x5B66;&#x68C0;&#x67E5;&#x548C;&#x6D41;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x578B;&#x96C6;&#x843D;&#x5F62;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE; (CFC) &#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x63ED;&#x793A; NUP98 HOXA9 &#x589E;&#x52A0;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x524D;&#x4F53;&#x7684;&#x4EBA;&#x6570;&#x548C;&#x53D7;&#x635F;&#x4E24;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x53CA;&#x7EA2;&#x7CFB;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x8FDE;&#x7EED;&#x7684;&#x6DB2;&#x4F53;&#x57F9;&#x517B; NUP98 HOXA9 &#x8F6C;&#x67D3;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5C55;&#x793A;&#x53CC;&#x76F8;&#x751F;&#x957F;&#x66F2;&#x7EBF;&#x4E0E;&#x521D;&#x59CB;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F;&#x589E;&#x5F3A;&#x957F;&#x671F;&#x6269;&#x6563;&#xFF0C;&#x6697;&#x793A;&#x81EA;&#x6211;&#x66F4;&#x65B0;&#x7684;&#x539F;&#x59CB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x8FD9;&#x4E00;&#x70B9;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x6587;&#x5316;&#x542F;&#x52A8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x63A2;&#x6D4B;&#x7684;&#x6700;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x6025;&#x5267;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x4E86;&#x89E3;&#x57FA;&#x7840; NUP98 HOXA9 &#x5BF9;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x5206;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#x662F;&#x505A;&#x51E0;&#x4E2A;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9;&#x8D85;&#x8FC7; 16 &#x5929;&#xFF0C;&#x8D77;&#x4EF7; 6 &#x5C0F;&#x65F6; posttransduction&#x3002;&#x65E9;&#x671F;&#x7684;&#x751F;&#x957F;&#x6291;&#x5236;&#x662F;&#x524D;&#x9762; IFNbeta1 &#x4E0A;&#x8C03;&#xFF0C;&#x5E76;&#x4E14;&#x4F34;&#x968F;&#x7740;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5E72;&#x6270;&#x7D20;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x8FBE;&#x5230; 3 &#x5929; posttransduction &#x7684;&#x5CF0;&#x503C;&#x663E;&#x8457;&#x4E0A;&#x8C03;&#x3002;&#x76F8;&#x6BD4;&#x4E4B;&#x4E0B;&#xFF0C;&#x4F8B;&#x5982;&#x540C;&#x6E90;&#x76D2;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001; FLT3&#x3001; &#x5957;&#x4EF6;&#x548C; WT1 &#x57FA;&#x56E0;&#x8FBE;&#x5230;&#x9876;&#x5CF0; 8 &#x5929;&#x5904;&#x4E8E;&#x6216;&#x8D85;&#x51FA;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x6269;&#x6563;&#x4E0E;&#x76F8;&#x543B;&#x5408;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x51E0;&#x4E2A;&#x80BF;&#x7624;&#x6291;&#x5236;&#x5668;&#x548C;&#x9020;&#x8840;&#x5206;&#x5316;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x538B;&#x8FEB;&#x5728;&#x7A0D;&#x540E;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x70B9;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D1;&#x73B0;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5168;&#x9762;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x7531; NUP98 HOXA9 &#x4EBA;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x8F6C;&#x5316;&#x589E;&#x6B96;&#x3001; &#x5206;&#x5316;&#x3001; &#x53CA;&#x5168;&#x7403;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x56FE;&#x7247;&#x3002;

NUP98 HOXA9 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x957F;&#x671F;&#x4E3B;&#x4EBA; /cd34 + &#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#x548C;&#x5757;&#x5206;&#x5316;&#x3002;

NUP98-HOXA9, the chimeric protein resulting from the t(7;11)(p15;p15) chromosomal translocation, is a prototype of several NUP98 fusions that occur in myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia. We examined its effect on differentiation, proliferation, and gene expression in primary human CD34+ hematopoietic cells. Colony-forming cell (CFC) assays in semisolid medium combined with morphologic examination and flow cytometric immunophenotyping revealed that NUP98-HOXA9 increased the numbers of erythroid precursors and impaired both myeloid and erythroid differentiation. In continuous liquid culture, cells transduced with NUP98-HOXA9 exhibited a biphasic growth curve with initial growth inhibition followed by enhanced long-term proliferation, suggesting an increase in the numbers of primitive self-renewing cells. This was confirmed by a dramatic increase in the numbers of long-term culture-initiating cells, the most primitive hematopoietic cells detectable in vitro. To understand the molecular mechanisms underlying the effects of NUP98-HOXA9 on hematopoietic cell proliferation and differentiation, oligonucleotide microarray analysis was done at several time points over 16 days, starting at 6 hours posttransduction. The early growth suppression was preceded by up-regulation of IFNbeta1 and accompanied by marked up-regulation of IFN-induced genes, peaking at 3 days posttransduction. In contrast, oncogenes such as homeobox transcription factors, FLT3, KIT, and WT1 peaked at 8 days or beyond, coinciding with increased proliferation. In addition, several putative tumor suppressors and genes associated with hematopoietic differentiation were repressed at later time points. These findings provide a comprehensive picture of the changes in proliferation, differentiation, and global gene expression that underlie the leukemic transformation of human hematopoietic cells by NUP98-HOXA9.

NUP98-HOXA9 induces long-term proliferation and blocks differentiation of primary human CD34+ hematopoietic cells.

NUP98-HOXA9, la prot&#xE9;ine chim&#xE9;rique r&#xE9;sultant de la translocation t (7; 11) (p15; p15) translocation chromosomique, est un prototype de plusieurs fusions NUP98 qui se produisent dans les syndromes my&#xE9;lodysplasiques et les leuc&#xE9;mies aigu&#xEB;s my&#xE9;lo&#xEF;des. Nous avons examin&#xE9; son effet sur la diff&#xE9;renciation, la prolif&#xE9;ration et l&#x26;#39;expression des g&#xE8;nes dans les primaires de l&#x26;#39;homme des cellules h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques CD34 +. Formant des colonies de cellules (CFC) dans des dosages milieu semi-solide combin&#xE9;e avec l&#x26;#39;examen morphologique et l&#x26;#39;immunoph&#xE9;notypage par cytom&#xE9;trie en flux a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que NUP98-HOXA9 augment&#xE9; le nombre de pr&#xE9;curseurs &#xE9;rythro&#xEF;des et une alt&#xE9;ration de la diff&#xE9;renciation &#xE0; la fois my&#xE9;lo&#xEF;de et &#xE9;rythro&#xEF;de. En culture liquide continue, les cellules transduites avec NUP98-HOXA9 pr&#xE9;sentait une courbe de croissance biphasique avec inhibition de la croissance initiale suivie par le renforcement de la prolif&#xE9;ration &#xE0; long terme, ce qui sugg&#xE8;re une augmentation du nombre de primitives d&#x26;#39;auto-renouvellement des cellules. Cela a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9; par une augmentation spectaculaire du nombre de long terme de la culture-initiateurs cellules, les cellules les plus primitives h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques d&#xE9;tectables in vitro. Pour comprendre les m&#xE9;canismes mol&#xE9;culaires qui sous-tendent les effets de NUP98-HOXA9 sur la prolif&#xE9;ration cellulaire et diff&#xE9;renciation h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tique, l&#x26;#39;analyse des micror&#xE9;seaux oligonucl&#xE9;otide a &#xE9;t&#xE9; fait &#xE0; diff&#xE9;rents moments de plus de 16 jours, &#xE0; partir de 6 posttransduction heures. La suppression de la croissance au d&#xE9;but a &#xE9;t&#xE9; pr&#xE9;c&#xE9;d&#xE9;e par up-r&#xE9;gulation de la IFNbeta1 et accompagn&#xE9; par marque r&#xE9;gulation &#xE0; la hausse de l&#x26;#39;IFN-g&#xE8;nes induits, avec un pic &#xE0; 3 posttransduction jours. En revanche, les oncog&#xE8;nes tels que les facteurs de transcription &#xE0; hom&#xE9;obo&#xEE;te, FLT3, KIT et WT1 a culmin&#xE9; &#xE0; 8 jours ou au-del&#xE0;, co&#xEF;ncidant avec une prolif&#xE9;ration accrue. En outre, plusieurs suppresseurs de tumeurs putatifs et des g&#xE8;nes associ&#xE9;s &#xE0; la diff&#xE9;renciation h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tique ont &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;prim&#xE9;s &#xE0; des temps plus tard. Ces r&#xE9;sultats fournissent une image compl&#xE8;te des changements dans la prolif&#xE9;ration, la diff&#xE9;renciation et l&#x26;#39;expression g&#xE9;nique globale qui sous-tendent la transformation leuc&#xE9;mique de cellules h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques humaines par NUP98-HOXA9.

NUP98-HOXA9 induit &#xE0; long terme contre la prolif&#xE9;ration et la diff&#xE9;renciation des blocs primaires de l&#x26;#39;homme CD34 + cellules h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques

NUP98-HOXA9, die Chim&auml;ren Proteinen der chromosomalen Translokation von t(7;11)(p15;p15) ist ein Prototyp von mehreren NUP98-Fusionen, die in Myelodysplastische Syndrome und akute myeloische Leuk&auml;mie auftreten. Wir untersuchten seinen Effekt auf Differenzierung, Proliferation und Genexpression in prim&auml;ren humanen CD34 + h&auml;matopoetischen Zellen. Kolonienbildende Zelle (CFC) Proben in halbfeste Medium kombiniert mit morphologische Untersuchung und Flow Cytometric Immunph&auml;notypisierung ergab, dass NUP98-HOXA9 die Zahl der Erythroid Vorl&auml;ufer erh&ouml;ht und beide myeloische beeintr&auml;chtigt und Erythroid Differenzierung. In der kontinuierlichen fl&uuml;ssigen Kultur ausgestellt Zellen transduzierten mit NUP98-HOXA9 eine biphasische Wachstumskurve mit anf&auml;nglich Wachstum Hemmung gefolgt von erweiterten langfristige Verbreitung, was auf eine zunehmende Zahl von primitiven erneuernde Zellen. Dies best&auml;tigt einen dramatischen Anstieg der Zahl der langfristigen Kultur-Einleitung-Zellen, die primitivsten blutbildender Zellen in Vitro nachweisbar. Zum Verst&auml;ndnis der molekularen Mechanismen die Auswirkungen der NUP98-HOXA9 auf h&auml;matopoetischen Zellproliferation und Differenzierung Oligonukleotid-Microarray-Analyse zu mehreren Zeitpunkten innerhalb von 16 Tagen erfolgte ab 6 Stunden Posttransduction. Die fr&uuml;hen Wachstum Unterdr&uuml;ckung war bis-Regelung der IFNbeta1 vorangestellt und begleitet von markierten bis-Verordnung von IFN-induzierten Genen, Platz 3 Tage Posttransduction. Dagegen erreichte Onkogene wie Homeobox Transkriptionsfaktoren, FLT3, KIT und WT1 auf 8 Tage oder jenseits, zeitgleich mit der Verbreitung. Dar&uuml;ber hinaus wurden mehrere vermeintliche Tumor Suppressors und Genen mit h&auml;matopoetischen Differenzierung zu sp&auml;teren Zeitpunkten unterdr&uuml;ckt. Diese Erkenntnisse vermitteln ein umfassendes Bild &uuml;ber die &Auml;nderungen in der Proliferation, Differenzierung und globalen Genexpression, die die leuk&auml;mischen Transformation des menschlichen blutbildender Zellen durch NUP98-HOXA9 zugrunde liegen.

NUP98-HOXA9 induziert langfristige Proliferation und Bl&ouml;cke Differenzierung der prim&auml;ren menschlichen CD34 + blutbildender Zellen.

NUP98-HOXA9, la proteina chimerica derivanti dalla traslocazione cromosomica t(7;11)(p15;p15), &egrave; un prototipo di diverse fusioni di NUP98 che si verificano nelle sindromi mielodisplastiche e leucemia mieloide acuta. Abbiamo esaminato il suo effetto sull&#39;espressione del gene in primarie CD34 + cellule ematopoietiche, proliferazione e differenziazione. Dosaggi di cella (CFC) formanti in mezzo semisolido combinato con morphologic esame e flusso cytometric immunofenotipizzazione ha rivelato che NUP98-HOXA9 aumentato il numero di precursori eritroidi e mieloidi sia alterata e differenziazione eritroide. Nella cultura liquido continuo, cellule transduced con NUP98-HOXA9 esposto una curva di crescita bifasico con inibizione della crescita iniziale seguita da una maggiore proliferazione a lungo termine, suggerendo un aumento del numero di celle primitive autorinnovabile. Ci&ograve; &egrave; stato confermato da un drammatico aumento del numero delle cellule di cultura-avvio a lungo termine, le pi&ugrave; primitive cellule ematopoietiche rilevabile in vitro. Per comprendere i meccanismi molecolari sottostanti gli effetti di NUP98-HOXA9 sulla proliferazione delle cellule ematopoietiche e differenziazione, analisi di microarray di oligonucleotidi &egrave; stato fatto in diversi punti del tempo oltre 16 giorni, a partire da posttransduction 6 ore. La soppressione di crescita precoce &egrave; stata preceduta da up-regulation di IFNbeta1 e accompagnata da marcata su-regolazione dei geni di IFN-indotta, piazzandosi al posttransduction di 3 giorni. Al contrario, oncogeni quali fattori di trascrizione homeobox, FLT3, KIT e WT1 raggiunse a 8 giorni o oltre, in concomitanza con aumentata proliferazione. Inoltre, diversi soppressori tumorali putativo e geni associati con differenziazione ematopoietiche furono represse in punti temporali successive. Questi risultati forniscono un quadro completo delle modifiche nella proliferazione, differenziazione ed espressione genica globale che sottendono la trasformazione leucemiche di cellule ematopoietiche da NUP98-HOXA9.

NUP98-HOXA9 induce la differenziazione di proliferazione e blocchi a lungo termine di primarie CD34 + cellule ematopoietiche.

NUP98-HOXA9&#x306F;&#x3001;t&#xFF08;7; 11&#xFF09;&#x304B;&#x3089;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x30AD;&#x30E1;&#x30E9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#xFF08;P15&#x3001;P15&#xFF09;&#x67D3;&#x8272;&#x4F53;&#x8EE2;&#x5EA7;&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7570;&#x5F62;&#x6210;&#x75C7;&#x5019;&#x7FA4;&#x3084;&#x6025;&#x6027;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x3067;&#x767A;&#x751F;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;NUP98&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;CD34 +&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3001;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; NUP98-HOXA9&#x306F;&#x3001;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x969C;&#x5BB3;&#x3068;&#x8D64;&#x82BD;&#x7403;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x6570;&#x304C;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x5F62;&#x614B;&#x5B66;&#x7684;&#x691C;&#x67FB;&#x3068;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x514D;&#x75AB;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x305F;&#x534A;&#x56FA;&#x5F62;&#x57F9;&#x5730;&#x3067;&#x306E;&#x30B3;&#x30ED;&#x30CB;&#x30FC;&#x5F62;&#x6210;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;CFC&#xFF09;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3002;&#x9023;&#x7D9A;&#x6DB2;&#x4F53;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x306A;&#x81EA;&#x5DF1;&#x518D;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x963B;&#x5BB3;&#x3068;&#x76F8;&#x6027;&#x6210;&#x9577;&#x66F2;&#x7DDA;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;NUP98-HOXA9&#x3067;&#x5F62;&#x8CEA;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x9577;&#x671F;&#x57F9;&#x990A;&#x958B;&#x59CB;&#x7D30;&#x80DE;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x6700;&#x3082;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x306A;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6570;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5206;&#x5316;&#x306B;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306E;&#x6839;&#x5E95;&#x306B;&#x3042;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x89E3;&#x6790;&#x3092;6&#x6642;&#x9593;posttransduction&#x304B;&#x3089;&#x59CB;&#x307E;&#x308B;&#x3001;16&#x65E5;&#x9593;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x6642;&#x70B9;&#x3067;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x6291;&#x5236;&#x304C;IFNbeta1&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x304C;&#x5148;&#x884C;&#x3057;&#x3001;3&#x65E5;&#x9593;posttransduction&#x3067;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x3001;IFN&#x8A98;&#x5C0E;&#x6027;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AF;&#x3092;&#x4F34;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3001;FLT3&#x3001;KIT&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;WT1&#x306F;&#x3001;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3001;8&#x65E5;&#x9593;&#x3067;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8D85;&#x3048;&#x3066;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x9020;&#x8840;&#x7CFB;&#x3078;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x63A8;&#x5B9A;&#x4E0A;&#x306E;&#x816B;&#x760D;&#x6291;&#x5236;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3068;&#x306F;&#x3001;&#x5F8C;&#x306E;&#x6642;&#x70B9;&#x3067;&#x6291;&#x5727;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x3001;NUP98-HOXA9&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x5909;&#x63DB;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x50CF;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

NUP98-HOXA9&#x306F;&#x3001;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;CD34 +&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;

NUP98-HOXA9, t(7;11)(p15;p15) &#xC5FC;&#xC0C9;&#xCCB4; &#xC804; &#xC88C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB798;&#xD55C; chimeric &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB09C; &#xC99D;&#xD6C4;&#xAD70; &#xBC0F; &#xAE09;&#xC131; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC5EC;&#xB7EC; NUP98 fusions&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0; &#xD0C0;&#xC785;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;, &#xD655;&#xC0B0;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; CD34 + &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC870;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xD569; &#xD615;&#xD0DC; &#xB860; &#xC801; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC0F; &#xD750;&#xB984; cytometric immunophenotyping semisolid &#xC911;&#xAC04;&#xC5D0; &#xC140; (CFC) &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xBC1D;&#xD600; NUP98-HOXA9 erythroid &#xC804;&#xC870;&#xC758; &#xC22B;&#xC790;&#xB97C; &#xC99D;&#xAC00; &#xD558; &#xACE0; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBAA8;&#xB450; &#xC7A5;&#xC560;&#xC778; &#xBC0F; erythroid &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;. &#xC5F0;&#xC18D; &#xC561;&#xCCB4; &#xBB38;&#xD654;, &#xC140; NUP98 hoxa9&#xB85C; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xB098;&#xC544;&#xC84C;&#xB2E4; &#xC131;&#xC7A5; &#xACE1;&#xC120; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xC6D0;&#xC2DC;&#xC801;&#xC778; &#xD558;&#xB2F5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC140;&#xC758; &#xC22B;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC99D;&#xAC00; &#xB41C; &#xC7A5;&#xAE30; &#xD655;&#xC0B0; &#xCD08;&#xAE30; &#xC131;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC7A5;&#xAE30; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC791; &#xC140;, &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC6D0;&#xC2DC; &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC22B;&#xC790;&#xC5D0; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC00; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xBD84;&#xD654;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; NUP98 hoxa9&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD558;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC54C;&#xC544;&#xC57C; oligonucleotide microarray &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218;&#xD589;&#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC9C0;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; 16 &#xC77C; &#xB3D9;&#xC548; 6 &#xC2DC;&#xAC04; posttransduction&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC791;. &#xCD08;&#xAE30; &#xC131;&#xC7A5; &#xC5B5;&#xC81C; &#xC5C5; &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xC158; Ifnbeta1&#xC758; &#xC55E;&#xC5D0; &#xC788;&#xC5C8;&#xACE0; 3 &#xC77C; posttransduction&#xC5D0;&#xC11C; &#xC815;&#xC810;&#xC744; IFN &#xC720;&#xBC1C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xCD5C;&#xB300; &#xADDC;&#xC81C;&#xC640; &#xD568;&#xAED8;. &#xBC18;&#xBA74;, WT1 &#xD0A4;&#xD2B8;, FLT3 homeobox &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778; &#xB4F1;&#xACFC; oncogenes &#xB610;&#xB294; &#xB118;&#xC5B4; &#xC99D;&#xAC00; &#xD655;&#xC0B0;&#xC640; &#xB3D9;&#xC2DC; 8 &#xC77C;&#xC5D0; &#xC815;&#xC810;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC5EC;&#xB7EC; &#xC0C1; &#xC885;&#xC591; &#xC9C4;&#xC555; &#xBC0F; &#xC870; &#xD608; &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;&#xC640; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB97C; &#xB098;&#xC911; &#xC2DC;&#xAC04; &#xC9C0;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5B5;&#xC555; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xACB0;&#xACFC; leukemic &#xBCC0;&#xD658; NUP98 hoxa9&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC778;&#xAC04; &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAE30;&#xBC18;&#xC774; &#xB418;&#xB294; &#xD655;&#xC0B0;, &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;, &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC758; &#xD3EC;&#xAD04;&#xC801;&#xC778; &#xADF8;&#xB9BC; &#xC81C;&#xACF5;.

NUP98-HOXA9 &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; CD34 + &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30; &#xD655;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xBE14;&#xB85D; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xC720;&#xB3C4;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nup98-Hoxa9, la prote&#xED;na quim&#xE9;rica resultante de la t (7; 11) (p15; p15) translocaci&#xF3;n cromos&#xF3;mica, es un prototipo de varios Nup98 fusiones que se producen en los s&#xED;ndromes mielodispl&#xE1;sicos y leucemia mieloide aguda. Se examinaron su efecto sobre la diferenciaci&#xF3;n, proliferaci&#xF3;n y la expresi&#xF3;n de genes humanos en la ense&#xF1;anza primaria las c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas CD34 +. Formadoras de colonias de c&#xE9;lulas (CFC), los ensayos en medio semis&#xF3;lido junto con el examen morfol&#xF3;gico y el an&#xE1;lisis inmunofenot&#xED;pico por citometr&#xED;a de flujo revel&#xF3; que Nup98-Hoxa9 aumentado el n&#xFA;mero de precursores eritroides y la diferenciaci&#xF3;n de deterioro tanto mieloide y eritroide. En cultivo l&#xED;quido continuo, las c&#xE9;lulas transducidas con Nup98-Hoxa9 exhibi&#xF3; una curva de crecimiento bif&#xE1;sico con la inhibici&#xF3;n del crecimiento inicial seguida por una mayor proliferaci&#xF3;n a largo plazo, lo que sugiere un aumento en el n&#xFA;mero de primitivos renovaci&#xF3;n auto-c&#xE9;lulas. Esto fue confirmado por un aumento dram&#xE1;tico en el n&#xFA;mero de larga duraci&#xF3;n que inician cultivo de c&#xE9;lulas, las c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas m&#xE1;s primitivas detectables in vitro. Para comprender los mecanismos moleculares que subyacen a los efectos de Nup98-Hoxa9 sobre la proliferaci&#xF3;n celular y diferenciaci&#xF3;n hematopoy&#xE9;tica, el an&#xE1;lisis de microarrays de oligonucle&#xF3;tidos se llev&#xF3; a cabo en diversos puntos temporales de m&#xE1;s de 16 d&#xED;as, a partir de las 6 posttransduction horas. La supresi&#xF3;n temprana de crecimiento fue precedido por la regulaci&#xF3;n de los IFNbeta1 y acompa&#xF1;ados por marcados de la regulaci&#xF3;n de los genes inducidos por IFN-, alcanzando un m&#xE1;ximo de 3 posttransduction d&#xED;as. En contraste, los oncogenes como factores de transcripci&#xF3;n homeobox, FLT3, KIT y WT1 alcanz&#xF3; un m&#xE1;ximo de 8 d&#xED;as o m&#xE1;s all&#xE1;, coincidiendo con una mayor proliferaci&#xF3;n. Adem&#xE1;s, varios supresores de tumores y genes putativos asociados con la diferenciaci&#xF3;n hematopoy&#xE9;tica fueron reprimidos en los puntos de tiempo posteriores. Estos resultados proporcionan una imagen completa de los cambios en la proliferaci&#xF3;n, diferenciaci&#xF3;n y la expresi&#xF3;n g&#xE9;nica global que subyacen a la transformaci&#xF3;n leuc&#xE9;mica de las c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas mediante Nup98-Hoxa9.

Nup98-Hoxa9 induce a largo plazo la proliferaci&#xF3;n y diferenciaci&#xF3;n de los bloques primarios humanos c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas CD34 +

&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C; (EM) &#x5DF2;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x6570;&#x5341;&#x5E74;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x6838;&#x8FD0;&#x8F93;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x5728;&#x65E9;&#x671F;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x7684;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#xFF0C;&#x9EC4;&#x91D1;&#x5171;&#x8F6D;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x5FAE;&#x91CF;&#x6CE8;&#x5C04;&#x5230;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x5176;&#x6B21;&#x662F; EM&#x3002;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x6838;&#x5B54; (&#x5168;&#x56FD;&#x4EBA;&#x5927;) &#x548C;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x8C03;&#x89E3;&#x5458;&#x7684;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x88AB;&#x514B;&#x9686;&#x548C;&#x7279;&#x70B9;&#xFF0C;&#x9EC4;&#x91D1;&#x5171;&#x8F6D;&#x6297;&#x4F53;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E; sublocalize &#x7684;&#x6838;&#x8FD0;&#x8F93;&#x673A;&#x68B0;&#x7EC4;&#x4EF6;&#x7531;&#x514D;&#x75AB; EM&#x3002;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x3001; &#x9EC4;&#x91D1;&#x5171;&#x8F6D;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x88AB;&#x7528;&#x6765;&#x63A2;&#x6D4B;&#x900F;&#x6027;&#x5316;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6216;&#x5B64;&#x7ACB;&#x7684;&#x6838;&#x4FE1;&#x5C01;&#x548C;&#x7279;&#x70B9;&#x5728;&#x4EBA;&#x5927;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x7ED3;&#x5408;&#x70B9;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#xFF0C;&#x91CD;&#x7EC4;&#x9EC4;&#x91D1;&#x5171;&#x8F6D;&#x6838;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x88AB;&#x7528;&#x4E8E;&#x5728;&#x4F53;&#x5916;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x5E2E;&#x52A9;&#x89E3;&#x5256;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x6838;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; PU.1 &#x7684;&#x5BFC;&#x5165;&#x3002;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x6B64;&#x5BFC;&#x5165;&#x9700;&#x8981;&#x7684;&#x80FD;&#x6E90;&#xFF0C;&#x4F46;&#x627F;&#x8FD0;&#x4EBA;&#x65E0;&#x5173;&#x3002;&#x5B58;&#x5728;&#x80FD;&#x6E90;&#x3001; &#x9EC4;&#x91D1;&#x5171;&#x8F6D; PU.1 &#x8F6C;&#x79FB;&#x5230;&#x4EBA;&#x5927;&#x7684;&#x6838;&#x4FA7;&#x548C;&#x5185;&#x4FA7;&#x7684;&#x6838;&#x5FC3;&#x3002;&#x7ED3;&#x5408;&#x751F;&#x5316;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x8FD9;&#x79CD;&#x8F6C;&#x53D8;&#x6D89;&#x53CA;&#x7684; PU.1 &#x5230; NUP153&#xFF0C;&#x4F4D;&#x4E8E;&#x5168;&#x56FD;&#x4EBA;&#x5927;&#x7684;&#x6838;&#x4FA7; nucleoporin Ran &#x4F9D;&#x8D56;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x63CF;&#x8FF0;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x5236;&#x5907;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#x3001; &#x9EC4;&#x91D1;&#x5171;&#x8F6D;&#x3001; &#x4F53;&#x5916;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x68C0;&#x6D4B;&#x3001; &#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x548C;&#x6570;&#x636E;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x68C0;&#x6D4B;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

&#x6D4B;&#x5B9A;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x3002;

Electron microscopy (EM) has been used for several decades to study the mechanisms of nuclear transport. In early studies of nuclear import, gold-conjugated nuclear proteins were microinjected into cells and followed by EM. As the components of the nuclear pore complex (NPC) and soluble mediators of nuclear import were cloned and characterized, gold-conjugated antibodies were utilized to sublocalize the components of the nuclear transport machinery by immuno-EM. Further, gold-conjugated recombinant proteins were used to probe permeabilized cells or isolated nuclear envelopes and characterize binding sites for these proteins at the NPC. More recently, recombinant gold-conjugated nuclear proteins were used in in vitro nuclear import assays to help dissect the mechanisms of nuclear import. We have used this ultrastructural nuclear import assay to study the nuclear import of the transcription factor PU.1. The results showed that this import requires energy but is carrier-independent. In the presence of energy, gold-conjugated PU.1 shifted to the nuclear side of the NPC and the inside of the nucleus. In conjunction with biochemical assays, these results indicated that this shift involved Ran-dependent binding of PU.1 to NUP153, a nucleoporin situated at the nuclear side of the NPC. Here we describe in detail the methods used in the ultrastructural nuclear import assay including preparation of recombinant protein, gold conjugation, in vitro nuclear import assay, electron microscopy, and data analysis.

Ultrastructural nuclear import assay.

La microscopie &#xE9;lectronique (EM) a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pendant plusieurs d&#xE9;cennies pour &#xE9;tudier les m&#xE9;canismes de transport de mati&#xE8;res nucl&#xE9;aires. Dans les premi&#xE8;res &#xE9;tudes de l&#x26;#39;import nucl&#xE9;aire, de l&#x26;#39;or-conjugu&#xE9;s prot&#xE9;ines nucl&#xE9;aires ont &#xE9;t&#xE9; micro-inject&#xE9;es dans les cellules et suivi par EM. Comme les composants du complexe du pore nucl&#xE9;aire (CPN) et des m&#xE9;diateurs solubles de l&#x26;#39;import nucl&#xE9;aire ont &#xE9;t&#xE9; clon&#xE9;s et caract&#xE9;ris&#xE9;s, l&#x26;#39;or-anticorps conjugu&#xE9;s ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour sublocalize les composants de la machinerie de transport nucl&#xE9;aire par immuno-EM. En outre, l&#x26;#39;or-conjugu&#xE9;s prot&#xE9;ines recombinantes ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;s pour sonder les cellules perm&#xE9;abilis&#xE9;es ou isol&#xE9;es enveloppes nucl&#xE9;aires et de caract&#xE9;riser les sites de liaison de ces prot&#xE9;ines &#xE0; l&#x26;#39;APN. Plus r&#xE9;cemment, des prot&#xE9;ines recombinantes d&#x26;#39;or conjugu&#xE9;s nucl&#xE9;aires ont &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9;es dans des essais in vitro d&#x26;#39;importation nucl&#xE9;aires pour aider diss&#xE9;quer les m&#xE9;canismes de l&#x26;#39;import nucl&#xE9;aire. Nous avons utilis&#xE9; ce test import ultrastructurale nucl&#xE9;aire d&#x26;#39;&#xE9;tudier l&#x26;#39;import nucl&#xE9;aire du facteur de transcription PU.1. Les r&#xE9;sultats ont montr&#xE9; que cette importation n&#xE9;cessite de l&#x26;#39;&#xE9;nergie, mais est porteur ind&#xE9;pendant. En pr&#xE9;sence de l&#x26;#39;&#xE9;nergie, de l&#x26;#39;or-conjugu&#xE9;s PU.1 d&#xE9;plac&#xE9; sur le c&#xF4;t&#xE9; nucl&#xE9;aire de l&#x26;#39;APN et l&#x26;#39;int&#xE9;rieur du noyau. En collaboration avec des dosages biochimiques, ces r&#xE9;sultats ont indiqu&#xE9; que ce changement participe Ran cette liaison est d&#xE9;pendante de PU.1 &#xE0; Nup153, un nucl&#xE9;oporine situ&#xE9; sur le c&#xF4;t&#xE9; nucl&#xE9;aire de l&#x26;#39;APN. Ici nous d&#xE9;crivons en d&#xE9;tail les m&#xE9;thodes utilis&#xE9;es dans le test import nucl&#xE9;aire ultrastructurale y compris la pr&#xE9;paration de la prot&#xE9;ine recombinante, la conjugaison d&#x26;#39;or, test in vitro avec l&#x26;#39;import nucl&#xE9;aire, microscopie &#xE9;lectronique, et l&#x26;#39;analyse des donn&#xE9;es.

Ultrastructurale test import nucl&#xE9;aire

Elektronenmikroskopie (EM) wurde seit Jahrzehnten eingesetzt, um die Mechanismen der Nukleartransporten zu studieren. In fr&uuml;hen Studien der nuklearen Import waren Gold-konjugierten nukleare Proteine microinjected in Zellen und gefolgt von EM. Da die Komponenten der komplexen nukleare Pore (NPC) und l&ouml;slicher Mediatoren der nuklearen Import geklont und gekennzeichnet wurden, waren Gold-konjugierten Antik&ouml;rpern genutzt, um die Komponenten des nuklearen Transportmaschinen sublocalize von Immuno-EM. Weitere, Gold-konjugierten rekombinante Proteine wurden zur Sonde permeabilized Zellen oder isolierten Nuclear Umschl&auml;ge und Bindungsstellen f&uuml;r diese Proteine bei der NPC zu charakterisieren. Vor kurzem wurden rekombinante als nukleare Gold-konjugierte Proteine bei in-vitro-nukleare Import-Assays zur helfen, die Mechanismen der nuklearen Import zu sezieren. Wir haben diese ultrastrukturelle Nuklear Import-Probe verwendet, den nuklearen Import des Transkriptionsfaktors PU.1 zu studieren. Die Ergebnisse zeigten, dass dieser Import Energie erfordert aber Tr&auml;ger unabh&auml;ngig ist. In Anwesenheit von Energie verlagert Gold-konjugierten PU.1 auf der nuklearen Seite des NPC und dem Inneren des Zellkerns. In Verbindung mit biochemischen Tests gekennzeichnet diese Ergebnisse, dass diese Verschiebung Ran-abh&auml;ngige Bindung von PU.1, NUP153, ein Nucleoporin, gelegen an der nuklearen Seite des NPC beteiligt. Hier beschreiben wir detailliert die Methoden in der ultrastrukturelle Nuklear Import-Assay, einschlie&szlig;lich Vorbereitung von rekombinanten Protein, gold Konjugation, in-vitro-nukleare Import-Assay, Elektronenmikroskopie und Datenanalyse verwendet.

Ultrastrukturelle Nuklear Import-Assay.

Microscopia elettronica (EM) &egrave; stata utilizzata per diversi decenni per studiare i meccanismi di trasporto nucleare. Nei primi studi di importazione nucleare, coniugato con oro proteine nucleari erano microinjected nelle cellule e seguite da EM. Come i componenti del complesso nucleare poro (NPC) e mediatori solubili di importazione nucleare sono stati clonati e caratterizzate, anticorpi coniugati di oro sono stati utilizzati per sublocalize i componenti della macchina trasporto nucleare da immuno-EM. Ulteriore, coniugato con oro proteine ricombinanti sono state utilizzate per sonda celle permeabilized o buste nucleari isolati e caratterizzare i siti di legame per queste proteine il NPC. Pi&ugrave; recentemente, proteine ricombinanti coniugato con oro nucleare sono state utilizzate nelle analisi in vitro di importazione nucleare per aiutare a sezionare i meccanismi di importazione nucleare. Abbiamo usato questa analisi ultrastrutturale importazione nucleare per studiare l&#39;importazione nucleare del fattore di trascrizione PU.1. I risultati hanno mostrato che questa importazione richiede energia, ma &egrave; indipendente dal vettore. In presenza di energia, PU.1 coniugato con oro spostata verso il lato nucleare del NPC e all&#39;interno del nucleo. In concomitanza con dosaggi biochimici, questi risultati hanno indicato che questo spostamento coinvolto associazione Ran-dipendente di PU.1 a NUP153, un nucleoporin situati sul lato nucleare del NPC. Qui descriviamo in dettaglio i metodi utilizzati nell&#39;analisi ultrastrutturale importazione nucleare compresa la preparazione di proteine ricombinanti, coniugazione oro, test in vitro di importazione nucleare, microscopia elettronica e analisi dei dati.

Analisi ultrastrutturale importazione nucleare.

&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#xFF08;EM&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6570;&#x5341;&#x5E74;&#x306B;&#x308F;&#x305F;&#x3063;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6838;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x91D1;&#x6A19;&#x8B58;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3092;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B8;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3055;&#x308C;&#x3001;EM&#x304C;&#x7D9A;&#x304F;&#x3002;&#x6838;&#x819C;&#x5B54;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#xFF08;NPC&#xFF09;&#x3068;&#x6838;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x53EF;&#x6EB6;&#x6027;&#x30E1;&#x30C7;&#x30A3;&#x30A8;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30CD;&#x30F3;&#x30C8;&#x304C;&#x30AF;&#x30ED;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x7279;&#x5FB4;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x91D1;&#x6A19;&#x8B58;&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;EM&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6838;&#x8F38;&#x9001;&#x6A5F;&#x68B0;&#x306E;&#x90E8;&#x54C1;&#x3092;sublocalize&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5229;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x91D1;&#x6A19;&#x8B58;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x819C;&#x900F;&#x904E;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x5358;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6838;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30D9;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D7;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3057;&#x3001;NPC&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3092;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x91D1;&#x5171;&#x5F79;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x6838;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x6838;&#x8F38;&#x5165;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306B;&#x304A;&#x3044;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;PU.1&#x306E;&#x6838;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x5FAE;&#x7D30;&#x69CB;&#x9020;&#x306E;&#x6838;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306F;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3001;&#x30AD;&#x30E3;&#x30EA;&#x30A2;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002; NPC&#x3068;&#x6838;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x306E;&#x6838;&#x5074;&#x306B;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x30A8;&#x30CD;&#x30EB;&#x30AE;&#x30FC;&#x3001;&#x91D1;&#x5171;&#x5F79;PU.1&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3002;&#x751F;&#x5316;&#x5B66;&#x7684;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x306F;PU.1&#x306B;NUP153&#x306E;&#x862D;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x7D50;&#x5408;&#x3001;NPC&#x306E;&#x6838;&#x5074;&#x306B;&#x4F4D;&#x7F6E;&#x3059;&#x308B;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x8A73;&#x7D30;&#x306B;&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3001;&#x91D1;&#x30B3;&#x30F3;&#x30B8;&#x30E5;&#x30B2;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x6838;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x5206;&#x6790;&#x306E;&#x6E96;&#x5099;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5FAE;&#x7D30;&#x6838;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; (EM) &#xD575; &#xC804;&#xC1A1; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC218; &#xC2ED;&#xB144; &#xB3D9;&#xC548; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD575; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xAE08; &#xD65C;&#xC6A9; &#xC140;&#xC73C;&#xB85C; microinjected &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;. (NPC) &#xD575; &#xAE30; &#xACF5; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xC640; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30;&#xC758; &#xC218;&#xC6A9; &#xC131; &#xC911;&#xC7AC;&#xC790; &#xBCF5;&#xC81C; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xD2B9;&#xC9D5;, &#xAE08; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD56D; &#xCCB4; &#xBA74;&#xC5ED; EM sublocalize &#xD575; &#xC804;&#xC1A1; &#xAE30;&#xACC4; &#xAD6C;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD65C;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xCD94;&#xAC00; &#xAE08; &#xD65C;&#xC6A9; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; permeabilized &#xC140; &#xB610;&#xB294; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB41C; &#xD575; &#xBD09;&#xD22C; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC0F; NPC&#xC5D0;&#xC774; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xCD5C;&#xADFC;&#xC5D0;, &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xACE8;&#xB4DC; conjugated &#xD575; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xCCB4; &#xC678; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xD574; &#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD575; &#xC804;&#xC0AC; &#xC778;&#xC790; PU.1 &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xC774; ultrastructural &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xC6A9; &#xD588;&#xB2E4;. &#xACB0;&#xACFC;&#xC774; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30;&#xAC00; &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;&#xB97C; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC774;&#xB3D9; &#xD1B5;&#xC2E0;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xAD00;&#xACC4; &#xC5C6;&#xC774; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0AC;&#xB2E4;. &#xC5D0;&#xB108;&#xC9C0;, &#xC874;&#xC7AC; PU.1 &#xACE8;&#xB4DC; conjugated NPC&#xC758; &#xD575; &#xC0AC;&#xC774;&#xB4DC;&#xC640; &#xD575;&#xC758; &#xB0B4;&#xBD80; &#xC774;&#xB3D9;. &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC;&#xC774; &#xBCC0;&#xD654; &#xCC38;&#xC5EC; &#xB780; &#xC885;&#xC18D; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; NUP153, NPC&#xC758; &#xD575; &#xCABD;&#xC5D0; &#xC704;&#xCE58;&#xD55C; nucleoporin&#xC5D0; PU.1&#xC758; &#xD45C;&#xC2DC;. &#xC5EC;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC790;&#xC138;&#xD558;&#xAC8C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;, &#xAE08; &#xD65C;&#xC6A9;, &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;, &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xBC0F; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xC900;&#xBE44;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; ultrastructural &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Ultrastructural &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La microscop&#xED;a electr&#xF3;nica (EM) ha sido utilizada durante varias d&#xE9;cadas para estudiar los mecanismos de transporte nuclear. En los primeros estudios de importaci&#xF3;n nuclear, oro-conjugados prote&#xED;nas nucleares se microinyectaron en las c&#xE9;lulas y seguido por EM. Como los componentes del complejo de poro nuclear (NPC) y mediadores solubles de importaci&#xF3;n nuclear fueron clonados y caracterizados, oro-anticuerpos conjugados se utilizaron para sublocalize los componentes de la maquinaria de transporte nuclear por inmuno-EM. Otras, las de oro y conjugado con prote&#xED;nas recombinantes se utilizaron para investigar las c&#xE9;lulas permeabilizadas o aisladas sobres nucleares y caracterizaci&#xF3;n de sitios de uni&#xF3;n de estas prote&#xED;nas en el NPC. M&#xE1;s recientemente, las prote&#xED;nas recombinantes nucleares oro-conjugados se usaron en ensayos in vitro de importaci&#xF3;n nucleares para ayudar a diseccionar los mecanismos de importaci&#xF3;n nuclear. Hemos utilizado este ensayo ultraestructural importaci&#xF3;n nuclear para estudiar la importaci&#xF3;n nuclear del factor de transcripci&#xF3;n PU.1. Los resultados mostraron que esta importaci&#xF3;n requiere energ&#xED;a, pero es portador-independiente. En presencia de la energ&#xED;a, el oro-conjugados PU.1 desplazado hacia el lado nuclear del CNP y el interior del n&#xFA;cleo. En conjunci&#xF3;n con ensayos bioqu&#xED;micos, estos resultados indican que este cambio implicado Ran uni&#xF3;n dependiente de PU.1 a NUP153, un nucleoporin situado en el lado nuclear del CNP. Aqu&#xED; se describe en detalle los m&#xE9;todos utilizados en el ensayo de importaci&#xF3;n ultraestructural nuclear, incluida la preparaci&#xF3;n de la prote&#xED;na recombinante, la conjugaci&#xF3;n de oro, en el ensayo in vitro de importaci&#xF3;n nuclear, microscop&#xED;a electr&#xF3;nica, y an&#xE1;lisis de datos.

Ensayo nuclear de importaci&#xF3;n ultraestructural

NUP98 HOXA9 &#x662F;&#x4E00;&#x7EC4;&#x4E0E;&#x6025;&#x6027;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x539F;&#x578B;&#x3002;&#x5B83;&#x7531; NUP98 &#x878D;&#x5408;&#x7684; HOXA9 homeodomain N &#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x76F8;&#x4FE1;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5F02;&#x5E38;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x901A;&#x8FC7; homeodomain &#x7684; DNA&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; NUP98 HOXA9 &#x53EF;&#x4EE5;&#x8C03;&#x8282;&#x4E0D;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; DNA &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x786E;&#x5B9A;&#x8F6C;&#x5316;&#x80FD;&#x529B;&#x7684; NUP98 HOXA9 &#x7684; NUP98 &#x548C; HOXA9 &#x7684;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x8D21;&#x732E;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x4E3B; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684; NUP98 HOXA9 &#x5F71;&#x54CD;&#x4E86;&#x89E3;&#x5256;&#x548C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; HOXA9&#x3002;&#x4E0E;&#x4EE5;&#x524D;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x5728;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#xFF0C;HOXA9 &#x4E86;&#x53EA;&#x6709;&#x8F7B;&#x5FAE;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E3B;&#x8981;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x4E0E;&#x5206;&#x5316;&#x3002;&#x4E2D;&#x65AD;&#x4E3B;&#x8981;&#x4EBA;&#x7C7B; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x7684; NUP98 HOXA9 &#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x4E3B;&#x8981;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E;&#x7684; NUP98 &#x90E8;&#x5206;&#xFF0C;&#x800C;&#x611F;&#x5E94;&#x7684;&#x957F;&#x671F;&#x589E;&#x6B96;&#x6240;&#x9700;&#x7684; NUP98 &#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x5B8C;&#x6574;&#x7684; homeodomain&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E3B; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x5BE1;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x82AF;&#x7247;&#xFF0C;&#x4E00;&#x7EC4;&#x57FA;&#x56E0;&#x88AB;&#x786E;&#x5B9A;&#x5176;&#x65F6;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684; NUP98 HOXA9 &#x662F;&#x4E3B;&#x8981;&#x5F52;&#x56E0;&#x4E8E; NUP98 &#x90E8;&#x5206;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D;&#x5305;&#x62EC; RAP1A&#x3001; HEY1 &#x548C; PTGS2 (&#x73AF;&#x6C27;&#x5408;&#x9176;-2&#xFF09;&#x3002;&#x5176;&#x804C;&#x80FD;&#x53EF;&#x80FD;&#x53CD;&#x6620;&#x5411;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x8F6C;&#x5316;&#x7684; NUP98 HOXA9 &#x7684; NUP98 &#x7ED3;&#x6784;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x5BF9;&#x57FA;&#x56E0;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5316;&#x7684; NUP98 HOXA9 &#x5F71;&#x54CD;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x81F3;&#x5C11;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x673A;&#x5236;&#xFF1A; &#x4E00;&#x4E2A;&#x6D89;&#x53CA;&#x5177;&#x6709;&#x7EA6;&#x675F;&#x529B;&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7;&#x76F4;&#x63A5;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6FC0;&#x6D3B;&#xFF0C;&#x4E0E; homeodomain &#x7684;&#x542F;&#x52A8;&#x5B50;&#xFF0C;&#x53E6;&#x4E00;&#x79CD;&#x4E3B;&#x8981;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; NUP98 &#x7ED3;&#x6784;&#x548C;&#x4E0D;&#x6D89;&#x53CA; DNA &#x76F4;&#x63A5;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3002;

&#x8F6C;&#x578B;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x4EBA;&#x9020;&#x8840;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0; NUP98 HOXA9 &#x5939;&#x5C42;&#x52A8;&#x8109;&#x7624;&#x3002;

NUP98-HOXA9 is the prototype of a group of oncoproteins associated with acute myeloid leukemia. It consists of an N-terminal portion of NUP98 fused to the homeodomain of HOXA9 and is believed to act as an aberrant transcription factor that binds DNA through the homeodomain. Here we show that NUP98-HOXA9 can regulate transcription without binding to DNA. In order to determine the relative contributions of the NUP98 and HOXA9 portions to the transforming ability of NUP98-HOXA9, the effects of NUP98-HOXA9 on primary human CD34+ cells were dissected and compared to those of wild-type HOXA9. In contrast to previous findings in mouse cells, HOXA9 had only mild effects on the differentiation and proliferation of primary human hematopoietic cells. The ability of NUP98-HOXA9 to disrupt the differentiation of primary human CD34+ cells was found to depend primarily on the NUP98 portion, whereas induction of long-term proliferation required both the NUP98 moiety and an intact homeodomain. Using oligonucleotide microarrays in primary human CD34+ cells, a group of genes was identified whose dysregulation by NUP98-HOXA9 is attributable primarily to the NUP98 portion. These include RAP1A, HEY1, and PTGS2 (COX-2). Their functions may reflect the contribution of the NUP98 moiety of NUP98-HOXA9 to leukemic transformation. Taken together, these results suggest that the effects of NUP98-HOXA9 on gene transcription and cell transformation are mediated by at least two distinct mechanisms: one that involves promoter binding through the homeodomain with direct transcriptional activation, and another that depends predominantly on the NUP98 moiety and does not involve direct DNA binding.

Dissection of the transformation of primary human hematopoietic cells by the oncogene NUP98-HOXA9.

NUP98-HOXA9 est le prototype d&#x26;#39;un groupe de oncoprot&#xE9;ines associ&#xE9;s &#xE0; la leuc&#xE9;mie my&#xE9;lo&#xEF;de aigu&#xEB;. Il se compose d&#x26;#39;une partie N-terminale de NUP98 fusionn&#xE9;e &#xE0; l&#x26;#39;hom&#xE9;odomaine de HOXA9 et est cens&#xE9; agir comme un facteur de transcription qui se lie aberrante d&#x26;#39;ADN &#xE0; travers l&#x26;#39;hom&#xE9;odomaine. Ici, nous montrons que NUP98-HOXA9 peut r&#xE9;guler la transcription sans se lier &#xE0; l&#x26;#39;ADN. Afin de d&#xE9;terminer les contributions relatives des NUP98 et HOXA9 parties &#xE0; la capacit&#xE9; de transformation de NUP98-HOXA9, les effets de NUP98-HOXA9 sur humaines primaires de cellules CD34 + ont &#xE9;t&#xE9; diss&#xE9;qu&#xE9;es et compar&#xE9;es &#xE0; celles de type sauvage HOXA9. Contrairement aux r&#xE9;sultats pr&#xE9;c&#xE9;dents dans les cellules de souris, HOXA9 eu que des effets l&#xE9;gers sur la diff&#xE9;renciation et la prolif&#xE9;ration des cellules h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques humaines primaires. La capacit&#xE9; de NUP98-HOXA9 de perturber la diff&#xE9;renciation des humains primaires cellules CD34 + a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; &#xE0; d&#xE9;pendre principalement sur la partie NUP98, alors que l&#x26;#39;induction de la prolif&#xE9;ration &#xE0; long terme n&#xE9;cessaire &#xE0; la fois la fraction NUP98 et un hom&#xE9;odomaine intacte. Utilisation de puces &#xE0; oligonucl&#xE9;otides dans le primaire de l&#x26;#39;homme cellules CD34 +, un groupe de g&#xE8;nes a &#xE9;t&#xE9; identifi&#xE9; dont la d&#xE9;r&#xE9;gulation par NUP98-HOXA9 est principalement attribuable &#xE0; la portion NUP98. Il s&#x26;#39;agit notamment de RAP1A, HEY1, et PTGS2 (COX-2). Leurs fonctions peuvent refl&#xE9;ter la contribution de la fraction de NUP98 NUP98-HOXA9 &#xE0; la transformation leuc&#xE9;mique. Pris ensemble, ces r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent que les effets de NUP98-HOXA9 sur la transcription du g&#xE8;ne et la transformation cellulaire sont m&#xE9;di&#xE9;es par au moins deux m&#xE9;canismes distincts: l&#x26;#39;un qui implique la liaison par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire du promoteur hom&#xE9;odomaine avec activation de la transcription directe, et une autre qui d&#xE9;pend principalement de la fraction NUP98 et n&#x26;#39;implique pas de liaison directe de l&#x26;#39;ADN.

Dissection de la transformation des primaires des cellules h&#xE9;matopo&#xEF;&#xE9;tiques humaines par l&#x26;#39;oncog&#xE8;ne NUP98-HOXA9

NUP98-HOXA9 ist der Prototyp einer Gruppe von Oncoproteinen, die akute myeloische Leuk&auml;mie zugeordnet. Es besteht aus einer N-terminalen Teil des NUP98 verschmolzen, die Hom&ouml;odom&auml;ne des HOXA9 und wird geglaubt, um ein Transkriptionsfaktor, aberrante handeln, die durch die Hom&ouml;odom&auml;ne DNA bindet. Hier zeigen wir, dass NUP98-HOXA9 ohne Bindung an DNA Transkription regulieren kann. Um die relative Beitr&auml;ge der NUP98 und HOXA9 Teile die verwandelnde F&auml;higkeit der NUP98-HOXA9 zu ermitteln, wurden die Auswirkungen der NUP98-HOXA9 auf prim&auml;ren humanen CD34 + Zellen zerlegt und im Vergleich zu Wildtyp HOXA9. Im Gegensatz zu fr&uuml;heren befunden in Maus-Zellen hatte HOXA9 nur milde Effekte auf die Differenzierung und Vermehrung von prim&auml;ren humanen h&auml;matopoetischen Zellen. Die F&auml;higkeit des NUP98-HOXA9, die Differenzierung der prim&auml;ren humanen CD34 + Zellen st&ouml;ren wurde festgestellt, dass in erster Linie abh&auml;ngig von der NUP98 Teil, w&auml;hrend die Induktion der langfristigen Verbreitung der NUP98-Gruppe und eine intakte Hom&ouml;odom&auml;ne erforderlich. Oligonucleotide Microarrays in prim&auml;ren humanen CD34 + Zellen verwenden, wurde eine Gruppe von Genen identifiziert, deren Dysregulation durch NUP98-HOXA9 in erster Linie auf den NUP98 Teil zur&uuml;ckzuf&uuml;hren ist. Dazu geh&ouml;ren RAP1A, HEY1 und PTGS2 (COX-2). Ihre Funktionen k&ouml;nnen den Beitrag der NUP98 Teil des NUP98-HOXA9 zu leuk&auml;mischen Transformation widerspiegeln. Zusammen genommen, diese Ergebnisse legen nahe, dass die Auswirkungen der NUP98-HOXA9 gen-Transkription und Zelle-Transformation durch mindestens zwei verschiedene Mechanismen vermittelt sind: eine, die Projekttr&auml;ger, die Bindung durch die Hom&ouml;odom&auml;ne mit direkten transkriptionelle Aktivierung beinhaltet und ein anderes, das h&auml;ngt &uuml;berwiegend von der NUP98-Gruppe und das ohne direkte DNA-Bindung.

Dissektion der Transformation der prim&auml;ren menschlichen blutbildender Zellen durch das Onkogen-NUP98-HOXA9.

NUP98-HOXA9 &egrave; il prototipo di un gruppo di oncoproteins associati a leucemia mieloide acuta. Esso &egrave; costituito da una porzione N-terminale di NUP98 fuso a omeodominio di HOXA9 e si crede di agire come un fattore di trascrizione aberranti che lega il DNA attraverso l&#39;omeodominio. Qui vi mostriamo che NUP98-HOXA9 pu&ograve; regolare la trascrizione senza legame al DNA. Al fine di determinare i contributi relativi delle parti NUP98 e HOXA9 per la capacit&agrave; trasformante di NUP98-HOXA9, gli effetti della NUP98-HOXA9 su primarie cellule umane CD34 + furono sezionati e rispetto a quelle del selvaggio-tipo HOXA9. In contrasto con i risultati precedenti in cellule di topo, HOXA9 aveva solo lievi effetti sulla differenziazione e proliferazione delle cellule emopoietiche umane primarie. La capacit&agrave; di interferire con la differenziazione delle principali cellule umane CD34 + NUP98-HOXA9 &egrave; stata trovata a dipendere principalmente la porzione di NUP98, considerando che l&#39;induzione di proliferazione a lungo termine necessaria sia la frazione di NUP98 e un omeodominio intatto. Usando i microarrays del oligonucleotide in primarie cellule umane CD34 +, &egrave; stato identificato un gruppo di geni cui disregolazione di NUP98-HOXA9 &egrave; attribuibile principalmente alla parte NUP98. Questi includono RAP1A, HEY1 e PTGS2 (COX-2). Loro funzioni potrebbero riflettere il contributo del gruppo funzionale NUP98 di NUP98-HOXA9 di trasformazione leucemiche. Presi insieme, questi risultati suggeriscono che gli effetti di NUP98-HOXA9 sulla trasformazione delle cellule e trascrizione genica sono mediati da almeno due meccanismi distinti: uno che coinvolge promotore associazione attraverso l&#39;omeodominio con attivazione trascrizionale diretta e l&#39;altro che dipende principalmente la frazione NUP98 e non coinvolgere il binding diretto del DNA.

Dissezione della trasformazione delle cellule ematopoietiche primarie mediante la NUP98-HOXA9.

NUP98-HOXA9&#x6025;&#x6027;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306F;HOXA9&#x306E;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x3001;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;DNA&#x3092;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;NUP98&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;&#x90E8;&#x5206;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;NUP98-HOXA9&#x306F;&#x3001;DNA&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x305B;&#x305A;&#x306B;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002; NUP98-HOXA9&#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;CD34 +&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x5F71;&#x97FF;NUP98&#x3068;HOXA9&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306A;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x89E3;&#x5256;&#x3057;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;HOXA9&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x3068;&#x306F;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;HOXA9&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30E9;&#x30A4;&#x30DE;&#x30EA;&#x30D2;&#x30C8;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3068;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x306E;&#x307F;&#x8EFD;&#x5EA6;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;CD34 +&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5206;&#x5316;&#x3092;&#x6DF7;&#x4E71;&#x3055;&#x305B;&#x308B;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;NUP98&#x90E8;&#x5206;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x3001;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3059;&#x308B;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;NUP98&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x5224;&#x660E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;CD34 +&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x30AA;&#x30EA;&#x30B4;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30C1;&#x30C9;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED;&#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x4E0D;&#x5168;NUP98-HOXA9&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;NUP98&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x3059;&#x308B;&#x3082;&#x306E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x540C;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;RAP1A&#x3001;HEY1&#x3001;&#x3068;PTGS2&#xFF08;COX-2&#xFF09;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x95A2;&#x6570;&#x306F;&#x3001;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x3078;&#x306E;&#x5909;&#x63DB;NUP98-HOXA9&#x306E;NUP98&#x90E8;&#x5206;&#x306E;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x306E;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3002; NUP98&#x90E8;&#x5206;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x76F4;&#x63A5;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3068;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3044;&#x305A;&#x308C;&#x304B;&#x3001;&#x3082;&#x3046;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x306B;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x5C11;&#x306A;&#x304F;&#x3068;&#x3082;2&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5A92;&#x4ECB;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x76F4;&#x63A5;&#x306E;DNA&#x7D50;&#x5408;&#x3092;&#x4F34;&#x308F;&#x306A;&#x3044;&#x3002;

&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;NUP98-HOXA9&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4E00;&#x6B21;&#x30D2;&#x30C8;&#x9020;&#x8840;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x306E;&#x89E3;&#x5256;

NUP98-HOXA9 oncoproteins &#xAE09;&#xC131; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xACFC; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0; &#xD0C0;&#xC785;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xAC83;&#xACFC; NUP98 HOXA9 homeodomain &#xC735;&#xD569;&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790; &#xBD80;&#xBD84;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xD55C; &#xD0C8; &#xC120; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; homeodomain&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; DNA&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xB294; &#xD589;&#xC704;&#xB85C; &#xC5EC;&#xACA8;&#xC9C4;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4; NUP98 HOXA9 DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xC5C6;&#xC774; &#xB179;&#xC74C;&#xC744; &#xC870;&#xC808;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. NUP98 &#xBC0F; HOXA9 NUP98 hoxa9&#xC758; &#xBCC0;&#xD615; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xC77C;&#xBD80;&#xC758; &#xC0C1;&#xB300;&#xC801; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB97C; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; CD34 + &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; NUP98 hoxa9&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD574; &#xBD80; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; hoxa9&#xC758; &#xBE44;&#xAD50;. &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xC140;&#xC758; &#xC774;&#xC804; &#xACB0;&#xACFC; &#xB2EC;&#xB9AC; HOXA9 &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xBC0F; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC5D0;&#xB9CC; &#xC628;&#xD654;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBC18;&#xBA74; &#xC7A5;&#xAE30; &#xD655;&#xC0B0; &#xC720;&#xB3C4; &#xD544;&#xC694; NUP98 moiety &#xACE0; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; homeodomain NUP98 &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xD558; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; CD34 + &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xBC29;&#xD574; &#xD558;&#xB294; NUP98 hoxa9&#xC758; &#xB2A5;&#xB825; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB410;&#xB2E4;. Oligonucleotide microarrays&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; CD34 + &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;, &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xADF8;&#xB8F9; NUP98 hoxa9&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; dysregulation NUP98 &#xBD80;&#xBD84;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xAE30;&#xC778; &#xD558;&#xB294; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. RAP1A, HEY1, &#xBC0F; PTGS2 &#xD3EC;&#xD568; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; (-2). &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; leukemic &#xBCC0;&#xD658; NUP98 hoxa9&#xC758; NUP98 moiety&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC;&#xB3C4; &#xBC18;&#xC601; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC804;&#xC0AC;&#xC640; &#xC140; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0; NUP98 hoxa9&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xC801;&#xC5B4;&#xB3C4; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548;: &#xC9C1;&#xC811; transcriptional &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xC640; homeodomain&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C;&#xC640; &#xB41C; NUP98 moiety&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C1;&#xC811; DNA &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Oncogene NUP98 hoxa9&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; &#xC870; &#xD608; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658;&#xC758; &#xD574; &#xBD80;.

Nup98-Hoxa9 es el prototipo de un grupo de oncoprote&#xED;nas asociadas con la leucemia mieloide aguda. Se compone de una porci&#xF3;n N-terminal de Nup98 fusionado al homeodominio de Hoxa9 y se cree que act&#xFA;a como un factor de transcripci&#xF3;n aberrante que se une el ADN a trav&#xE9;s de la homeodominio. Aqu&#xED; nos muestran que Nup98-Hoxa9 puede regular la transcripci&#xF3;n, sin unirse al ADN. Con el fin de determinar las contribuciones relativas de los Nup98 y Hoxa9 porciones a la capacidad transformadora de la Nup98-Hoxa9, los efectos de Nup98-Hoxa9 en c&#xE9;lulas humanas primarias CD34 + fueron disecados y en comparaci&#xF3;n con los de tipo salvaje Hoxa9. En contraste con los resultados anteriores en c&#xE9;lulas de rat&#xF3;n, Hoxa9 ten&#xED;a s&#xF3;lo leves efectos sobre la diferenciaci&#xF3;n y proliferaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas humanas primarias. La capacidad de Nup98-Hoxa9 para interrumpir la diferenciaci&#xF3;n de primarios humanos c&#xE9;lulas CD34 + se encontr&#xF3; que dependen principalmente de la porci&#xF3;n Nup98, mientras que la inducci&#xF3;n de la proliferaci&#xF3;n a largo plazo requiere tanto la fracci&#xF3;n Nup98 y un homeodominio intacta. El uso de microarrays de oligonucle&#xF3;tidos en la ense&#xF1;anza primaria humanos c&#xE9;lulas CD34 +, un grupo de genes fue identificada por la desregulaci&#xF3;n, cuyo Nup98-Hoxa9 es atribuible principalmente a la parte Nup98. Estos incluyen RAP1A, Hey1 y PTGS2 (COX-2). Sus funciones pueden reflejar la contribuci&#xF3;n de la fracci&#xF3;n de Nup98 Nup98-Hoxa9 a la transformaci&#xF3;n leuc&#xE9;mica. En conjunto, estos resultados sugieren que los efectos de Nup98-Hoxa9 en la transcripci&#xF3;n de genes y la transformaci&#xF3;n celular son mediados por lo menos dos mecanismos diferentes: una que consiste en la uni&#xF3;n a trav&#xE9;s del promotor de homeodominio con la activaci&#xF3;n transcripcional directa, y otro que depende sobre todo de la fracci&#xF3;n Nup98 y no implica uni&#xF3;n directa del ADN.

La disecci&#xF3;n de la transformaci&#xF3;n de estas c&#xE9;lulas hematopoy&#xE9;ticas Humanos por el oncog&#xE9;n Nup98-Hoxa9

NUP98 &#x662F; nucleoporin &#x8D77;&#x8D29;&#x8FD0;&#x80DE;&#x6838;&#x80DE;&#x8D28;&#x8FDE;&#x4F53;&#x7684;&#x5927;&#x5206;&#x5B50;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x91CD;&#x6392;&#x7684; NUP98 &#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x4E2D;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8BB8;&#x591A;&#x878D;&#x5408;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x86CB;&#x767D;&#x5BF9;&#x80DE;&#x6838;&#x80DE;&#x8D28;&#x8FDE;&#x4F53;&#x8D29;&#x8FD0;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x62A5;&#x544A;&#x8FDB;&#x884C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x5BF9; CRM1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x6838;&#x51FA;&#x53E3; leukemogenic NUP98 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x5F71;&#x54CD;&#x3002;NUP98-HOXA9&#xFF0C;&#x539F;&#x578B;&#x7684; NUP98 &#x878D;&#x5408;&#xFF0C;&#x6291;&#x5236;&#x6838;&#x51FA;&#x53E3;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5DF2;&#x77E5;&#x7684; CRM1 &#x886C;&#x5E95;&#xFF1A; &#x7A81;&#x53D8;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x548C;&#x827E;&#x6ECB;&#x75C5;&#x6BD2; 1 &#x4FEE;&#x8BA2;&#x7248;&#x4F53;&#x5916;&#x7ED3;&#x5408;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x63ED;&#x793A; NUP98 HOXA9 &#x7ED1;&#x5B9A; CRM1&#xFF0C;&#x901A;&#x8FC7; FG &#x91CD;&#x590D;&#x56FE;&#x6848;&#x7684;&#x5189; GTP &#x4F9D;&#x8D56;&#x65B9;&#x5F0F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x4F46;&#x6BD4; CRM1 &#x548C;&#x5176;&#x51FA;&#x53E3;&#x886C;&#x5E95;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x4E24;&#x4E2A; NUP98 &#x878D;&#x5408;&#xFF0C;NUP98 HOXA9 &#x548C; NUP98 DDX10&#xFF0C;&#x5176;&#x878D;&#x5408;&#x4F19;&#x4F34;&#x662F;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0A;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0A;&#x65E0;&#x5173;&#xFF0C;&#x4EA4;&#x4E92;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185;&#x6E90;&#x6027; CRM1 co &#x6C89;&#x6DC0;&#x6240;&#x793A;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; leukemogenic NUP98 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528; CRM1&#x3001; &#x5189;&#xFF0C;&#x4E0E; nucleoporin NUP214 &#x91CE;&#x751F;&#x578B; NUP98 &#x622A;&#x7136;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;NUP98 HOXA9 &#x548C; NUP98 DDX10 &#x5F62;&#x6210;&#x7279;&#x5F81;&#x805A;&#x5408;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7CFB;&#x548C;&#x4E3B; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x5185;&#xFF0C;&#x5E76;&#x9020;&#x6210;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684; CRM1 &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x518D;&#x5230;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x805A;&#x5408;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B; NUP98 &#x878D;&#x5408;&#x9020;&#x6210;&#x6838;&#x79EF;&#x7D2F;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;NFAT &#x548C; NFkappaB&#xFF0C;&#x7531; CRM1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x51FA;&#x53E3;&#x7BA1;&#x5236;&#x3002;NFAT &#x548C; NFkappaB &#x7684;&#x6838;&#x8BF1;&#x60D1;&#x4E0E;&#x589E;&#x5F3A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x4ECE;&#x5BA3;&#x4F20;&#x5458;&#x56DE;&#x5E94;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x76F8;&#x5173;&#x3002;&#x4E24;&#x8005;&#x5408;&#x8BA1;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x679C;&#x7531;&#x54EA;&#x4E9B; NUP98 &#x878D;&#x5408; dysregulate &#x8F6C;&#x5F55;&#x5EFA;&#x8BAE;&#x65B0;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x5BFC;&#x81F4;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#xFF0C;&#x5373;&#x6291;&#x5236;&#x7684; CRM1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x6838;&#x51FA;&#x53E3;&#x4E0E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x8282;&#x57FA;&#x56E0;&#x5F02;&#x5E38;&#x6838;&#x4FDD;&#x7559;&#x3002;

CRM1 &#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; leukemogenic NUP98 &#x878D;&#x5408;&#x86CB;&#x767D;&#x7684;&#x6838;&#x51FA;&#x53E3;&#x7684;&#x6291;&#x5236;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

NUP98 is a nucleoporin that plays complex roles in the nucleocytoplasmic trafficking of macromolecules. Rearrangements of the NUP98 gene in human leukemia result in the expression of numerous fusion oncoproteins whose effect on nucleocytoplasmic trafficking is poorly understood. The present study was undertaken to determine the effects of leukemogenic NUP98 fusion proteins on CRM1-mediated nuclear export. NUP98-HOXA9, a prototypic NUP98 fusion, inhibited the nuclear export of two known CRM1 substrates: mutated cytoplasmic nucleophosmin and HIV-1 Rev. In vitro binding assays revealed that NUP98-HOXA9 binds CRM1 through the FG repeat motif in a Ran-GTP-dependent manner similar to but stronger than the interaction between CRM1 and its export substrates. Two NUP98 fusions, NUP98-HOXA9 and NUP98-DDX10, whose fusion partners are structurally and functionally unrelated, interacted with endogenous CRM1 in myeloid cells as shown by co-immunoprecipitation. These leukemogenic NUP98 fusion proteins interacted with CRM1, Ran, and the nucleoporin NUP214 in a manner fundamentally different from that of wild-type NUP98. NUP98-HOXA9 and NUP98-DDX10 formed characteristic aggregates within the nuclei of a myeloid cell line and primary human CD34+ cells and caused aberrant localization of CRM1 to these aggregates. These NUP98 fusions caused nuclear accumulation of two transcription factors, NFAT and NFkappaB, that are regulated by CRM1-mediated export. The nuclear entrapment of NFAT and NFkappaB correlated with enhanced transcription from promoters responsive to these transcription factors. Taken together, the results suggest a new mechanism by which NUP98 fusions dysregulate transcription and cause leukemia, namely, inhibition of CRM1-mediated nuclear export with aberrant nuclear retention of transcriptional regulators.

Inhibition of CRM1-mediated nuclear export of transcription factors by leukemogenic NUP98 fusion proteins.

NUP98 est un nucl&#xE9;oporine qui joue un r&#xF4;le complexe dans le trafic nucl&#xE9;ocytoplasmique des macromol&#xE9;cules. Les r&#xE9;arrangements du g&#xE8;ne NUP98 dans le r&#xE9;sultat de leuc&#xE9;mie humaine dans l&#x26;#39;expression de oncoprot&#xE9;ines de fusion de nombreuses dont l&#x26;#39;effet sur le trafic nucl&#xE9;ocytoplasmique est mal comprise. La pr&#xE9;sente &#xE9;tude a &#xE9;t&#xE9; entreprise pour d&#xE9;terminer les effets de leuc&#xE9;mog&#xE8;nes NUP98 prot&#xE9;ines de fusion sur CRM1 m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;exportation nucl&#xE9;aire. NUP98-HOXA9, un prototype NUP98 fusion, inhib&#xE9; l&#x26;#39;exportation nucl&#xE9;aire de deux substrats connus CRM1: mut&#xE9; cytoplasmique nucl&#xE9;ophosmine et le VIH-1 Rev Dans les essais de liaison in vitro ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que NUP98-HOXA9 lie CRM1 &#xE0; travers le motif r&#xE9;p&#xE9;t&#xE9; FG dans un Ran-GTP- de fa&#xE7;on d&#xE9;pendante similaire &#xE0;, mais plus fort que l&#x26;#39;interaction entre CRM1 et ses substrats exportation. Deux NUP98 fusions, NUP98-HoxA9 et NUP98-DDX10, dont la fusion des partenaires sont structurellement et fonctionnellement ind&#xE9;pendant, en interaction avec CRM1 endog&#xE8;ne dans les cellules my&#xE9;lo&#xEF;des, comme indiqu&#xE9; par co-immunopr&#xE9;cipitation. Ces NUP98 leuc&#xE9;mog&#xE8;nes prot&#xE9;ines de fusion ont interagi avec CRM1, Ran, et la NUP214 nucl&#xE9;oporine d&#x26;#39;une mani&#xE8;re fondamentalement diff&#xE9;rente de celle de type sauvage NUP98. NUP98-HOXA9 et NUP98-DDX10 form&#xE9;e agr&#xE9;gats caract&#xE9;ristiques dans les noyaux d&#x26;#39;une ligne de cellules my&#xE9;lo&#xEF;des et humaines primaires cellules CD34 + et la localisation caus&#xE9; aberrante de CRM1 &#xE0; ces agr&#xE9;gats. Ces fusions NUP98 provoqu&#xE9; une accumulation nucl&#xE9;aire de deux facteurs de transcription, NFAT et NFkappaB, qui sont r&#xE9;glement&#xE9;s par CRM1 m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;exportation. Le pi&#xE9;geage nucl&#xE9;aire de NFAT et NFkappaB en corr&#xE9;lation avec augmentation de la transcription des promoteurs sensibles &#xE0; ces facteurs de transcription. Pris dans leur ensemble, les r&#xE9;sultats sugg&#xE8;rent un nouveau m&#xE9;canisme par lequel NUP98 fusions d&#xE9;r&#xE9;gler la transcription et la leuc&#xE9;mie cause, &#xE0; savoir, l&#x26;#39;inhibition de CRM1 m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;exportation nucl&#xE9;aire avec r&#xE9;tention nucl&#xE9;aire aberrante de r&#xE9;gulateurs de transcription.

L&#x26;#39;inhibition de la CRM1 m&#xE9;di&#xE9;e par l&#x26;#39;exportation nucl&#xE9;aire de facteurs de transcription par leuc&#xE9;mog&#xE8;ne NUP98 prot&#xE9;ines de fusion

NUP98 ist eine Nucleoporin, die komplexe Rollen in den Nucleocytoplasmic Handel von Makromolek&uuml;len spielt. Umlagerungen des NUP98-Gens in menschliche Leuk&auml;mie f&uuml;hren in der Auspr&auml;gung der zahlreichen Fusion-Oncoproteinen, dessen Auswirkungen auf die Nucleocytoplasmic des Menschenhandels schlecht verstanden wird. Die vorliegende Studie wurde durchgef&uuml;hrt, zur Bestimmung der Wirkung von Leukemogenic NUP98 Schmelzverfahrensproteine auf nukleare Export CRM1-vermittelte. NUP98-HOXA9, eine prototypische NUP98 Fusion, gehemmt nukleare Ausfuhr von zwei bekannten CRM1 Substrate: mutierte zellplasmatisches Nucleophosmin und HIV-1 Rev. In-Vitro-verbindliche Proben ergeben, dass NUP98-HOXA9 durch das FG-wiederholen-Motiv in Ran-GTP-abh&auml;ngigen &auml;hnlich aber st&auml;rker als die Interaktion zwischen CRM1 und seine Export-Substrate CRM1 bindet. Zwei NUP98-Fusions, NUP98-HOXA9 und NUP98-DDX10, deren Verschmelzung Partner strukturell und funktionell nichts zu tun haben, interagierte mit endogenen CRM1 in myeloid Zellen, wie co-Immunopr&auml;zipitation gezeigt. Diese Leukemogenic NUP98 Schmelzverfahrensproteine interagierte mit CRM1, Ran und die Nucleoporin NUP214 in einer Weise grundlegend verschieden von der Wildtyp NUP98. NUP98-HOXA9 und NUP98-DDX10 charakteristische Aggregate innerhalb der Kerne von einer myeloische Zelllinie und prim&auml;ren humanen CD34 + Zellen gebildet und aberrante Lokalisierung von CRM1 um diese Aggregate verursacht. Diese NUP98-Fusionen verursachte nukleare Anreicherung von zwei Transkriptionsfaktoren, NFAT und NFkappaB, die CRM1-vermittelte Export geregelt sind. Die nukleare Fangstellen NFAT und NFkappaB korreliert mit verst&auml;rkten Transkription von Projekttr&auml;gern reagieren auf diese Transkriptionsfaktoren. Zusammen genommen die Ergebnisse schlagen Sie einen neuen Mechanismus, durch welche NUP98 Fusionen Dysregulate Transkription und verursachen Leuk&auml;mie, n&auml;mlich Hemmung der CRM1-vermittelte nukleare export mit aberrante nukleare Eigentumsvorbehalt transkriptionelle Regulatoren.

Hemmung der CRM1-vermittelte nukleare Export von Transkriptionsfaktoren durch Leukemogenic NUP98 Schmelzverfahrensproteine.

NUP98 &egrave; un nucleoporin che interpreta ruoli complessi del traffico nucleo-citoplasmatici di macromolecole. Riarrangiamenti del gene NUP98 nella leucemia umana come risultato l&#39;espressione di numerosi oncoproteins di fusione cui effetto sul traffico nucleo-citoplasmatici &egrave; capita male. Il presente studio &egrave; stato intrapreso per determinare gli effetti delle proteine di fusione leucemogeno NUP98 all&#39;esportazione nucleare CRM1-mediata. NUP98-HOXA9, una fusione di NUP98 prototipiche, inibito l&#39;esportazione nucleare di due noti substrati CRM1: mutato cytoplasmic nucleophosmin e Rev HIV-1 In vitro dosaggi di associazione ha rivelato che NUP98-HOXA9 lega CRM1 attraverso il motivo di ripetizione FG in modo simile ma pi&ugrave; forte che l&#39;interazione tra CRM1 e suo esportazione substrati Ran-GTP-dipendente. Due fusioni di NUP98, NUP98-HOXA9 e NUP98-DDX10, cui partner di fusione sono strutturalmente e funzionalmente correlate, interagivano con CRM1 endogena in cellule mieloidi come mostrato da co-immunoprecipitazione. Queste proteine di fusione NUP98 leucemogeno interagivano con CRM1, Ran e nucleoporin NUP214 in un modo fondamentalmente diverso da quello del selvaggio-tipo NUP98. NUP98-HOXA9 e NUP98-DDX10 formano caratteristici aggregati all&#39;interno di nuclei di una linea di cellule mieloidi e primarie cellule umane CD34 + e causato localizzazione aberrante di CRM1 di questi aggregati. Queste fusioni NUP98 causato accumulo nucleare di due fattori di trascrizione, NFAT e NFkappaB, che sono regolati da esportazione CRM1-mediata. L&#39;intrappolamento nucleare di NFAT e NFkappaB correlato con maggiore trascrizione dai promotori sensible a reagire a questi fattori di trascrizione. Presi insieme, i risultati suggeriscono un nuovo meccanismo da cui trascrizione di dysregulate NUP98 fusioni e causano leucemia, vale a dire, l&#39;inibizione di CRM1-mediata nucleare export con ritenzione nucleari aberranti di regolatori trascrizionali.

Inibizione di esportazione nucleare CRM1-mediata di fattori di trascrizione di proteine di fusione NUP98 leucemogeno.

NUP98&#x306F;&#x9AD8;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x6838; - &#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x8F38;&#x9001;&#x306B;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;&#x6838;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x4EBA;&#x8EAB;&#x58F2;&#x8CB7;&#x306B;&#x3042;&#x307E;&#x308A;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x591A;&#x6570;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x30D2;&#x30C8;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;NUP98&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x3002;&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;CRM1&#x5A92;&#x4ECB;&#x6838;&#x8F38;&#x51FA;&#x306E;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;NUP98&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x305F;&#x3002; NUP98-HOXA9&#x3001;&#x539F;&#x578B;NUP98&#x878D;&#x5408;&#x3001;&#x4E8C;&#x3064;&#x306E;&#x65E2;&#x77E5;&#x306E;CRM1&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x6838;&#x5916;&#x8F38;&#x9001;&#x3092;&#x963B;&#x5BB3;&#x3059;&#x308B;&#xFF1A;&#x30A4;&#x30F3;&#x30D3;&#x30C8;&#x30ED;&#x7D50;&#x5408;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x5909;&#x7570;&#x7D30;&#x80DE;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x3068;HIV-1&#x7267;&#x5E2B;&#x306F;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x306B;FG&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x30E2;&#x30C1;&#x30FC;&#x30D5;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;CRM1&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;RAN-GTP-&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;CRM1&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x8F38;&#x51FA;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x306E;&#x9593;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3088;&#x308A;&#x3082;&#x5F37;&#x3044;&#x4F9D;&#x5B58;&#x7684;&#x3002;&#x4E8C;NUP98&#x878D;&#x5408;&#x3001;&#x5171;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x3067;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5185;&#x56E0;&#x6027;CRM1&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x7121;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3067;&#x3059;NUP98-HOXA9&#x3068;NUP98-DDX10&#x3001;&#x3001;&#x3002; CRM1&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;NUP98&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;NUP98&#x306E;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x6839;&#x672C;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x5B9F;&#x884C;&#x3057;&#x3001;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;NUP214&#x3002; NUP98-HOXA9&#x3068;NUP98-DDX10&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x7D30;&#x80DE;&#x682A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;CD34 +&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x5185;&#x306B;&#x7279;&#x5FB4;&#x7684;&#x306A;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x51DD;&#x96C6;&#x4F53;&#x306B;CRM1&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x5C40;&#x5728;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;NUP98&#x878D;&#x5408;&#x306F;CRM1&#x5A92;&#x4ECB;&#x8F38;&#x51FA;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;2&#x3064;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3001;NFAT&#x3068;&#x5E30;&#x7740;&#x306E;&#x6838;&#x5185;&#x84C4;&#x7A4D;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002; NFAT&#x3068;&#x5E30;&#x7740;&#x306E;&#x6838;&#x6355;&#x6349;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3078;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x30D7;&#x30ED;&#x30E2;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x5F37;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8EE2;&#x5199;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x7DD2;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x6838;&#x4FDD;&#x6301;&#x306E;CRM1&#x5A92;&#x4ECB;&#x6838;&#x8F38;&#x51FA;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x3092;NUP98&#x878D;&#x5408;&#x8EE2;&#x5199;&#x3092;dysregulate&#x3084;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3053;&#x308C;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

&#x767D;&#x8840;&#x75C5;NUP98&#x878D;&#x5408;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E;CRM1&#x5A92;&#x4ECB;&#x6838;&#x8F38;&#x51FA;&#x306E;&#x6291;&#x5236;

NUP98 nucleocytoplasmic &#xACE0;&#xBD84;&#xC790;&#xC758; &#xBC00;&#xB9E4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xD558;&#xB294; nucleoporin&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC5D0;&#xC11C; NUP98 &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5F4; &#xB420; &#xC218;&#xB9CE;&#xC740; &#xD4E8;&#xC804; oncoproteins nucleocytoplasmic &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4;&#xC5D0; &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xC11C; &#xD22C;&#xB974; &#xAC8C; &#xC774;&#xD574;&#xC758; &#xD45C;&#xD604;. CRM1 &#xC911;&#xC7AC; &#xD575; &#xC218;&#xCD9C; leukemogenic NUP98 &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xD604;&#xC7AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xCC29;&#xC218; &#xD588;&#xB2E4;. NUP98-HOXA9, prototypic NUP98 &#xD4E8;&#xC804; &#xB450; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; CRM1 &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xD575; &#xC218;&#xCD9C; &#xC800;&#xD574;: &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; nucleophosmin&#xC640; &#xC5D0;&#xC774;&#xC988;-1 &#xBAA9;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; &#xBC14;&#xC778;&#xB529; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xACF5;&#xAC1C; NUP98 HOXA9 crm1&#xC640; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xC218;&#xCD9C; &#xAE30;&#xD310; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xAC15;&#xB825; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; Ran GTP &#xC885;&#xC18D; &#xBC29;&#xC2DD; FG &#xBC18;&#xBCF5; &#xBAA8;&#xD2F0;&#xD504;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; crm1&#xB97C; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xACF5;&#xB3D9;-immunoprecipitation&#xC640; &#xAC19;&#xC774; &#xB450; NUP98 fusions, NUP98-hoxa9&#xC640; NUP98-DDX10, &#xB204;&#xAD6C;&#xC758; &#xD4E8;&#xC804; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828; &#xB418;&#xC9C0; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD; crm1&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;. CRM1, Ran, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; nup98&#xC758; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xBC29;&#xC2DD;&#xC73C;&#xB85C; nucleoporin NUP214 leukemogenic NUP98 &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC774; &#xC791;&#xC6A9;. NUP98-HOXA9 &#xBC0F; NUP98 DDX10 &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778;&#xACFC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; CD34 + &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD575; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC131;&#xC758; &#xC9D1;&#xACC4;&#xB97C; &#xD615;&#xC131; &#xD558; &#xACE0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC9D1;&#xACC4; crm1&#xC758; &#xD0C8; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xD654;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; NUP98 fusions CRM1 &#xC911;&#xC7AC; &#xB0B4;&#xBCF4;&#xB0B4;&#xAE30;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADDC;&#xC81C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB450; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C;, NFAT&#xC640; NFkappaB, &#xC911; &#xD575; &#xCD95;&#xC801;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. NFAT&#xC640; Nfkappab&#xC758; &#xD575; &#xD568;&#xC815; &#xBC1C;&#xAE30;&#xC778;&#xC774; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC5D0; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xC804;&#xC0AC;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xD568;&#xAED8; &#xCC0D;&#xC740; &#xACB0;&#xACFC; NUP98 fusions dysregulate &#xC804;&#xC0AC; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xC81C;&#xC548; &#xD558; &#xACE0; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; &#xC6D0;&#xC778;, &#xC989;, &#xD575; CRM1 &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xC800;&#xD574; transcriptional &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xC758; &#xD0C8; &#xD575; &#xC720;&#xC9C0;&#xC640; &#xC218;&#xCD9C;.

Leukemogenic NUP98 &#xC735;&#xD569; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC758; &#xD575; &#xC218;&#xCD9C; CRM1 &#xC911;&#xC7AC;&#xC758; &#xC800;&#xD574;.

Nup98 es un nucleoporin que desempe&#xF1;a funciones complejas en el tr&#xE1;fico nucleocytoplasmic de macromol&#xE9;culas. Los reordenamientos del gen Nup98 en el resultado de la leucemia humana en la expresi&#xF3;n de las oncoprote&#xED;nas de fusi&#xF3;n numerosos cuyo efecto sobre el tr&#xE1;fico de nucleocytoplasmic es poco conocida. El presente estudio se realiz&#xF3; para determinar los efectos de leucemog&#xE9;nicos Nup98 prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n en CRM1 mediada por las exportaciones nucleares. Nup98-Hoxa9, un prototipo Nup98 fusi&#xF3;n, inhibe la exportaci&#xF3;n nuclear de dos conocidos CRM1 sustratos: mutado citoplasm&#xE1;tica nucleofosmina y el VIH-1 Rev. En los ensayos de uni&#xF3;n in vitro revelaron que Nup98-Hoxa9 CRM1 une a trav&#xE9;s de la repetici&#xF3;n de motivos de FG en un Ran-GTP- manera dependiente similar pero m&#xE1;s fuerte que la interacci&#xF3;n entre CRM1 y sus sustratos de exportaci&#xF3;n. Dos Nup98 fusiones, Nup98-Hoxa9 y Nup98 DDX10-, cuya fusi&#xF3;n asociados son estructural y funcionalmente relacionados, interactuado con CRM1 end&#xF3;geno en c&#xE9;lulas mieloides como se muestra por la co-inmunoprecipitaci&#xF3;n. Estas prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n leucemog&#xE9;nicos Nup98 interactuaron con CRM1, corri&#xF3;, y el nucleoporin NUP214 de una manera fundamentalmente diferente de la de tipo salvaje Nup98. Nup98-Hoxa9 Nup98 DDX10 formado agregados caracter&#xED;sticos en el n&#xFA;cleo de una l&#xED;nea de c&#xE9;lulas mieloides y primaria humanos c&#xE9;lulas CD34 + y caus&#xF3; la localizaci&#xF3;n aberrante de CRM1 de estos agregados. Estas fusiones Nup98 causado la acumulaci&#xF3;n nuclear de dos factores de transcripci&#xF3;n, NFAT y NFkappaB, que est&#xE1;n regulados por CRM1 mediada por la exportaci&#xF3;n. El atrapamiento nuclear de NFAT y NFkappaB correlacionado con una mayor transcripci&#xF3;n de los promotores que responden a estos factores de transcripci&#xF3;n. En conjunto, los resultados sugieren un nuevo mecanismo por el cual Nup98 fusiones dysregulate la transcripci&#xF3;n y la leucemia causa, a saber, la inhibici&#xF3;n de CRM1 mediada por exportaciones de material nuclear con la retenci&#xF3;n de aberrante nuclear de reguladores transcripcionales.

La inhibici&#xF3;n de la CRM1 mediada por las exportaciones nucleares de factores de transcripci&#xF3;n por leucemog&#xE9;nicos Nup98 prote&#xED;nas de fusi&#xF3;n

&#x4E0D;&#x540C;&#x878D;&#x5408;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x6025;&#x6027;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x767D;&#x8840;&#x75C5; (AML) &#x4E2D;&#x7684;&#x6709;&#x660E;&#x663E;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x548C;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x5BA4;&#x7279;&#x5F81;&#xFF0C;&#x8868;&#x660E;&#x4E0D;&#x540C;&#x6A21;&#x5F0F;&#x7684;&#x6076;&#x6027;&#x8F6C;&#x5316;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x5C06;&#x53CD;&#x6D17;&#x94B1;&#x878D;&#x5408;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0; 4 &#x4E3B;&#x8981;&#x7FA4;&#x4F53;&#x7684;&#x4EE3;&#x8868;&#x5BF9;&#x4E3B; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x4F53;&#x5916;&#x5F71;&#x54CD;&#x8FDB;&#x884C;&#x6BD4;&#x8F83;&#x3002;&#x5982;&#x9884;&#x671F;&#x90A3;&#x6837;&#x4ECE;&#x5176;&#x4E34;&#x5E8A;&#x7684;&#x76F8;&#x4F3C;&#x4E4B;&#x5904;&#xFF0C;MLL AF9 &#x548C; NUP98 HOXA9 &#x4E86;&#x4F53;&#x5916;&#x975E;&#x5E38;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x6548;&#x679C;&#x3002;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x4FE9;&#x90FD;&#x9020;&#x6210;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6210;&#x719F;&#x7EA2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x751F;&#x548C;&#x660E;&#x786E;&#x7684;&#x5757;&#x3002;&#x53E6;&#x4E00;&#x65B9;&#x9762;&#xFF0C;AML1 &#x7ECF;&#x8D38;&#x529E;&#x4E0E; PML &#x7F57;&#x62C9;&#x53EA;&#x6E29;&#x548C;&#x5BF9;&#x4E86;&#x5F71;&#x54CD;&#x9AD3;&#x7CFB;&#x53CA;&#x7EA2;&#x7CFB;&#x5206;&#x5316;&#x3002;PML &#x7F57;&#x62C9;&#x9664;&#x5916;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x957F;&#x671F;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x81EA;&#x6211;&#x66F4;&#x65B0;&#x5F15;&#x8D77;&#x6025;&#x5267;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x63ED;&#x793A;&#x57FA;&#x56E0;&#x653E;&#x677E;&#x7BA1;&#x5236;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x540C;&#x65F6;&#x7A7A;&#x7684;&#x683C;&#x5C40;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x653E;&#x677E;&#x7BA1;&#x5236;&#x7531; MLL AF9 &#x548C; NUP98 HOXA9 &#x7684;&#x5CF0;&#x503C;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x540E; 3 &#x5929;&#x3002;&#x4E0E;&#x6B64;&#x76F8;&#x53CD;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x7EDD;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0; AML1 ETO &#x7684;&#x653E;&#x677E;&#x7BA1;&#x5236;&#x548C; PML &#x67D0;&#x5730;&#x53D1;&#x751F;&#x5728; 6 &#x5C0F;&#x65F6;&#x5185;&#x8DDF;&#x653E;&#x677E;&#x7BA1;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x6025;&#x5267;&#x4E0B;&#x964D;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;p53 &#x6291;&#x5236; MDM2 &#x5F53;&#x65F6; AML1 ETO &#x4E0A;&#x8C03; 6 &#x5C0F;&#x65F6;&#x3002;Nutlin-3&#xFF0C;MDM2 &#x4E0E; p53&#xFF0C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x4E13;&#x95E8;&#x6291;&#x5236;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x81EA;&#x6211;&#x66F4;&#x65B0;&#x7684;&#x4E3B; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x4E0E; AML1 ETO&#xFF0C;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E; MDM2 &#x4E0A;&#x8C03; AML1 ETO &#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5316;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x663E;&#x793A; AML &#x878D;&#x5408;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x6982;&#x62EC;&#x4F53;&#x5916;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E3B; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x65E9;&#x671F;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53EF;&#x4EE5;&#x63ED;&#x793A;&#x5728;&#x53CD;&#x6D17;&#x94B1;&#x7684;&#x6F5C;&#x5728;&#x836F;&#x7269;&#x9776;&#x70B9;&#x3002;

&#x4F53;&#x5916;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5316;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x4EBA;&#x7C7B; /cd34 + &#x901A;&#x8FC7;&#x53CD;&#x6D17;&#x94B1;&#x878D;&#x5408;&#x764C;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF1A; &#x65E9;&#x671F;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x8C31;&#x63ED;&#x793A;&#x4E86;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x836F;&#x7269;&#x5728;&#x53CD;&#x6D17;&#x94B1;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;

Different fusion oncogenes in acute myeloid leukemia (AML) have distinct clinical and laboratory features suggesting different modes of malignant transformation. Here we compare the in vitro effects of representatives of 4 major groups of AML fusion oncogenes on primary human CD34+ cells. As expected from their clinical similarities, MLL-AF9 and NUP98-HOXA9 had very similar effects in vitro. They both caused erythroid hyperplasia and a clear block in erythroid and myeloid maturation. On the other hand, AML1-ETO and PML-RARA had only modest effects on myeloid and erythroid differentiation. All oncogenes except PML-RARA caused a dramatic increase in long-term proliferation and self-renewal. Gene expression profiling revealed two distinct temporal patterns of gene deregulation. Gene deregulation by MLL-AF9 and NUP98-HOXA9 peaked 3 days after transduction. In contrast, the vast majority of gene deregulation by AML1-ETO and PML-RARA occurred within 6 hours, followed by a dramatic drop in the numbers of deregulated genes. Interestingly, the p53 inhibitor MDM2 was upregulated by AML1-ETO at 6 hours. Nutlin-3, an inhibitor of the interaction between MDM2 and p53, specifically inhibited the proliferation and self-renewal of primary human CD34+ cells transduced with AML1-ETO, suggesting that MDM2 upregulation plays a role in cell transformation by AML1-ETO. These data show that differences among AML fusion oncogenes can be recapitulated in vitro using primary human CD34+ cells and that early gene expression profiling in these cells can reveal potential drug targets in AML.

In vitro transformation of primary human CD34+ cells by AML fusion oncogenes: early gene expression profiling reveals possible drug target in AML.

Oncog&#xE8;nes de fusion diff&#xE9;rents dans la leuc&#xE9;mie my&#xE9;lo&#xEF;de aigu&#xEB; (LMA) pr&#xE9;sentent des caract&#xE9;ristiques cliniques et de laboratoire sugg&#xE9;rant diff&#xE9;rents modes de transformation maligne. Ici, nous comparons les effets in vitro des repr&#xE9;sentants des 4 grands groupes de fusion oncog&#xE8;nes AML sur humaines primaires cellules CD34 +. Comme pr&#xE9;vu &#xE0; partir de leurs similitudes cliniques, MLL-AF9 et NUP98-HOXA9 eu des effets tr&#xE8;s similaires in vitro. Ils ont tous deux provoqu&#xE9; une hyperplasie &#xE9;rythro&#xEF;de et un bloc clair dans &#xE9;rythro&#xEF;de et la maturation my&#xE9;lo&#xEF;de. D&#x26;#39;autre part, AML1-ETO et la PML-RARA eu que des effets modestes sur my&#xE9;lo&#xEF;de et de la diff&#xE9;renciation &#xE9;rythro&#xEF;de. Tous les oncog&#xE8;nes &#xE0; l&#x26;#39;exception de la PML-RARA a provoqu&#xE9; une augmentation spectaculaire de long terme la prolif&#xE9;ration et l&#x26;#39;auto-renouvellement. Profilage de l&#x26;#39;expression g&#xE9;nique a r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; deux mod&#xE8;les temporels de la d&#xE9;r&#xE9;gulation des g&#xE8;nes. La d&#xE9;r&#xE9;gulation des g&#xE8;nes par MLL-AF9 et NUP98-HOXA9 a atteint un sommet de 3 jours apr&#xE8;s transduction. En revanche, la grande majorit&#xE9; de la d&#xE9;r&#xE9;glementation des g&#xE8;nes par AML1-ETO et la PML-RARA eu lieu dans les 6 heures, suivie d&#x26;#39;une chute spectaculaire du nombre de g&#xE8;nes d&#xE9;r&#xE9;gul&#xE9;s. Fait int&#xE9;ressant, l&#x26;#39;inhibiteur de p53 de MDM2 a &#xE9;t&#xE9; augment&#xE9;e par AML1-ETO moins 6 heures. Nutlin-3, un inhibiteur de l&#x26;#39;interaction entre MDM2 et p53, sp&#xE9;cifiquement inhib&#xE9; la prolif&#xE9;ration et l&#x26;#39;auto-renouvellement des humains primaires cellules CD34 + transduites avec AML1-ETO, ce qui sugg&#xE8;re que la r&#xE9;gulation positive MDM2 joue un r&#xF4;le dans la transformation cellulaire par AML1-ETO. Ces donn&#xE9;es montrent que les diff&#xE9;rences entre les oncog&#xE8;nes de fusion de LAB peuvent &#xEA;tre r&#xE9;capitul&#xE9;es in vitro en utilisant primaires de l&#x26;#39;homme des cellules CD34 + et que le profilage d&#x26;#39;expression du g&#xE8;ne pr&#xE9;coce dans ces cellules peut r&#xE9;v&#xE9;ler les cibles pharmaceutiques potentielles en mati&#xE8;re de LBC.

Transformation in vitro de l&#x26;#39;homme primaires cellules CD34 + par des oncog&#xE8;nes Fusion AML: Early profil d&#x26;#39;expression g&#xE9;nique r&#xE9;v&#xE8;le cible possible du m&#xE9;dicament dans les LAM

Verschiedene Fusion-Onkogene in akuter myeloischer Leuk&auml;mie (AML) haben unterschiedliche klinische und Labor-Funktionen schl&auml;gt verschiedene Formen der malignen Transformation. Hier vergleichen wir die in-vitro-Effekte aus Vertretern der vier Hauptgruppen AML Verschmelzung Onkogene auf prim&auml;ren humanen CD34 + Zellen. Wie erwartet von ihrer klinischen &Auml;hnlichkeiten hatte MLL-AF9 und NUP98-HOXA9 in-vitro-sehr &auml;hnliche Effekte. Beide verursachte Erythroid Hyperplasie und eine klare Block Erythroid und myeloische Reifung. Auf der anderen Seite, AML1-ETO und PML-RARA hatte nur geringe Auswirkungen auf die myeloische und Erythroid Differenzierung. Alle Onkogene au&szlig;er PML-RARA verursachte einen dramatischen Anstieg in langfristige Proliferation und Selbsterneuerung. Gene Expression profiling ergab zwei unterschiedliche zeitliche Muster des gen Deregulierung. Gen Deregulierung von MLL-AF9 und NUP98-HOXA9 erreichte 3 Tage nach Transduktion. Im Gegensatz dazu ist die &uuml;berwiegende Mehrheit der Gen Deregulierung von AML1-ETO und PML-RARA aufgetreten ist innerhalb von 6 Stunden, gefolgt von einen dramatischen R&uuml;ckgang der Anzahl der deregulierten Gene. Interessanterweise war der p53-Hemmer MDM2 herraufreguliert von AML1-ETO bei 6 Stunden. Nutlin-3, ein Inhibitor der Interaktion zwischen MDM2 und p53, gehemmt speziell die Verbreitung und Selbsterneuerung von prim&auml;ren humanen CD34 + Zellen transduzierten mit AML1-ETO, darauf hindeutet, dass MDM2 Hochregulation in Zelle Transformation von AML1-ETO eine Rolle spielt. Diese Daten zeigen, dass Unterschiede zwischen AML Verschmelzung Onkogene in-vitro mit prim&auml;re humanen CD34 + Zellen abgewogen werden k&ouml;nnen und die fr&uuml;hen Genexpression, die Profilerstellung in diesen Zellen m&ouml;gliche Droge-Ziele in AML aufdecken kann.

In-vitro-Transformation von prim&auml;ren humanen CD34 + Zellen von AML Verschmelzung Onkogene: fr&uuml;he gen Expression profiling zeigt m&ouml;gliche Droge Ziel in AML.

Oncogeni fusione diversi nella leucemia mieloide acuta (AML) hanno caratteristiche distinte, cliniche e di laboratorio, che suggerisce diverse modalit&agrave; di trasformazione maligna. Qui si confrontano gli effetti in vitro dei rappresentanti dei 4 gruppi principali degli oncogeni fusione AML sul primarie cellule umane CD34 +. Come previsto da loro somiglianze cliniche, MLL-AF9 e NUP98-HOXA9 ha avuto effetti molto simili in vitro. Entrambi hanno causato iperplasia eritroide e un chiaro blocco eritroidi e mieloidi maturazione. D&#39;altra parte, AML1-ETO e PML-RARA aveva solo modesti effetti sulla mieloidi ed eritroidi differenziazione. Oncogeni tutti tranne PML-RARA ha causato un aumento drammatico nella proliferazione a lungo termine e di auto-rinnovamento. Profilo di espressione genica ha rivelato due distinti pattern temporale della deregolazione del gene. Deregolazione del gene MLL-AF9 e NUP98-HOXA9 ha raggiunto la posizione 3 giorni dopo la trasduzione. Al contrario, la stragrande maggioranza del gene deregolamentazione di AML1-ETO e PML-RARA si &egrave; verificato entro 6 ore, seguita da un calo drammatico del numero di geni deregolamentati. &Egrave; interessante notare che, l&#39;inibitore di p53 MDM2 &egrave; stato sovraregolati da AML1-ETO a ore 6. Nutlin-3, un inibitore dell&#39;interazione tra MDM2 e p53, specificamente inibito la proliferazione e l&#39;auto-rinnovamento di primarie CD34 + cellule umane transduced con AML1-ETO, suggerendo che MDM2 upregulation gioca un ruolo nella trasformazione delle cellule da AML1-ETO. Questi dati mostrano che differenze tra oncogeni fusione AML possono essere ricapitolate in vitro usando primarie cellule umane CD34 + e che presto gene expression profiling in queste cellule pu&ograve; rivelare potenziali bersagli di droga in AML.

Trasformazione in vitro dell&#39;umane CD34 + cellule primarie di oncogeni fusione AML: inizio del gene expression profiling rivela obiettivo possibile droga in AML.

&#x6025;&#x6027;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#xFF08;AML&#xFF09;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x878D;&#x5408;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x60AA;&#x6027;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30E2;&#x30FC;&#x30C9;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3059;&#x308B;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x81E8;&#x5E8A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x691C;&#x67FB;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x5099;&#x3048;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;CD34 +&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;AML&#x878D;&#x5408;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;4&#x3064;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x306E;&#x4EE3;&#x8868;&#x306E;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305D;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x7684;&#x985E;&#x4F3C;&#x6027;&#x304B;&#x3089;&#x4E88;&#x60F3;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;MLL-AF9&#x3068;NUP98-HOXA9&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x3088;&#x304F;&#x4F3C;&#x305F;&#x52B9;&#x679C;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306F;&#x4E21;&#x65B9;&#x3068;&#x3082;&#x8D64;&#x82BD;&#x7403;&#x904E;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x3084;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x306E;&#x6210;&#x719F;&#x306B;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x30D6;&#x30ED;&#x30C3;&#x30AF;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E00;&#x65B9;&#x3001;AML1-ETO&#x3068;PML-RARA&#x306F;&#x3001;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8D64;&#x8840;&#x7403;&#x5206;&#x5316;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x3055;&#x3055;&#x3084;&#x304B;&#x306A;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x305F;&#x3002; PML-RARA&#x3092;&#x9664;&#x304F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306F;&#x3001;&#x9577;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x8907;&#x88FD;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x7DE9;&#x548C;&#x306E;2&#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x6642;&#x9593;&#x7684;&#x30D1;&#x30BF;&#x30FC;&#x30F3;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002; MLL-AF9&#x3068;NUP98-HOXA9&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x7DE9;&#x548C;&#x306F;3&#x65E5;&#x9593;&#x5C0E;&#x5165;&#x5F8C;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5BFE;&#x7167;&#x7684;&#x306B;&#x3001;AML1-ETO&#x3068;PML-RARA&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x7DE9;&#x548C;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x306F;&#x898F;&#x5236;&#x7DE9;&#x548C;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6570;&#x306E;&#x5287;&#x7684;&#x306A;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;6&#x6642;&#x9593;&#x4EE5;&#x5185;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;p53&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3067;&#x3042;&#x308B;MDM2&#x306F;6&#x6642;&#x9593;&#x3067;AML1-ETO&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30C8;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002; Nutlin-3&#x3001;MDM2&#x3068;p53&#x3068;&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x3001;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x30D2;&#x30C8;CD34&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x81EA;&#x5DF1;&#x8907;&#x88FD;&#x3092;&#x6291;&#x5236;+&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;MDM2&#x767A;&#x73FE;&#x4E0A;&#x6607;&#x306F;&#x3001;AML1-ETO&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3001;AML1-ETO&#x3068;&#x5C0E;&#x5165;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;AML&#x878D;&#x5408;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x306F;&#x3001;AML&#x306E;&#x6F5C;&#x5728;&#x7684;&#x306A;&#x5275;&#x85AC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;CD34 +&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x3066;in vitro&#x3067;recapitulated&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;

AML&#x878D;&#x5408;&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4E00;&#x6B21;&#x30D2;&#x30C8;CD34 +&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;in vitro&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5834;&#x5408;&#xFF1A;&#x521D;&#x671F;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;AML&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x5275;&#x85AC;&#x30BF;&#x30FC;&#x30B2;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;

&#xAE09;&#xC131; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; (AML)&#xC5D0; &#xB2E4;&#xB978; &#xD4E8;&#xC804; oncogenes &#xC545;&#xC131; &#xBCC0;&#xD658;&#xC758; &#xB2E4;&#xB978; &#xBAA8;&#xB4DC;&#xB97C; &#xC81C;&#xC548; &#xD558;&#xB294; &#xB69C;&#xB837;&#xD55C; &#xC784;&#xC0C1; &#xBC0F; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC2E4; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04; CD34 + &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; AML &#xD4E8;&#xC804; oncogenes&#xC758; 4 &#xAC1C;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xB300;&#xD45C;&#xC790;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678; &#xD6A8;&#xACFC; &#xBE44;&#xAD50;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC720;&#xC0AC;&#xC131;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC608;&#xC0C1; &#xB300;&#xB85C; MLL AF9 &#xBC0F; NUP98 HOXA9 &#xB9E4;&#xC6B0; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xCCB4; &#xC678;&#xB97C; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xB458; &#xB2E4; erythroid &#xBC0F; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xC131;&#xC219; erythroid &#xC99D;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xBA85;&#xD655;&#xD55C; &#xBE14;&#xB85D;&#xC744; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xD55C;&#xD3B8;&#xC73C;&#xB85C;, AML1 &#xD1A0; PML RARA &#xACE8;&#xC218;&#xC131;&#xC5D0; &#xACB8;&#xC190; &#xD55C; &#xC601;&#xD5A5;&#xB9CC;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4; erythroid &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. PML RARA &#xC81C;&#xC678;&#xD55C; &#xBAA8;&#xB4E0; oncogenes &#xC7A5;&#xAE30; &#xD655;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xC790;&#xAE30; &#xAC31;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xC99D;&#xAC00; &#xC77C;&#xC73C;&#xCF30;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C4; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xADDC;&#xC81C; &#xC644;&#xD654;&#xC758; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC801; &#xD328;&#xD134;&#xC744; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD588;&#xB2E4;. MLL AF9 &#xBC0F; NUP98 hoxa9&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xADDC;&#xC81C; &#xC644;&#xD654; &#xC815;&#xC810; &#xBCC0;&#xD658; &#xD6C4; 3 &#xC77C;. &#xBC18;&#xBA74;, &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xB300;&#xB2E4;&#xC218; AML1 &#xD1A0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; deregulation &#xBC0F; &#xADDC;&#xC81C; &#xC644;&#xD654; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC22B;&#xC790;&#xC5D0; &#xADF9;&#xC801;&#xC778; &#xB4DC;&#xB86D; &#xB4A4; PML RARA 6 &#xC2DC;&#xAC04; &#xC774;&#xB0B4; &#xBC1C;&#xC0DD;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, p53 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; MDM2 AML1 &#xD1A0; &#xD558; &#xC5EC; upregulated 6 &#xC2DC;&#xAC04; &#xC774;&#xC5C8;&#xB2E4;. Nutlin-3, MDM2 p53, &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9;&#xC758; &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C;&#xB294; &#xAD6C;&#xCCB4;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xC790;&#xAE30; &#xAC31;&#xC2E0;&#xC758; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; CD34 + &#xC138;&#xD3EC; AML1-&#xD1A0;, MDM2 upregulation AML1 &#xD1A0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC140; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD55C; &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD55C;&#xB2E4; &#xC81C;&#xC548;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD88;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC800;&#xD574;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xD45C;&#xC2DC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; CD34 + &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xC774;&#xC6A9;&#xD574; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00;&#xC5D0;&#xC11C; AML &#xD4E8;&#xC804; oncogenes &#xAC04;&#xC758; &#xCC28;&#xC774; recapitulated &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xCD08;&#xAE30; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1;&#xC774; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAE09;&#xC131; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A0;&#xC7AC;&#xC801;&#xC778; &#xC57D;&#xBB3C; &#xD45C;&#xC801;&#xC744; &#xBC1D;&#xD790; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;.

&#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; CD34 + &#xC138;&#xD3EC; AML &#xD4E8;&#xC804; oncogenes&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xCCB4; &#xC678; &#xBCC0;&#xD658;: &#xAE09;&#xC131; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB300;&#xC0C1; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xCD08;&#xAE30; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC2DD; &#xD504;&#xB85C; &#xD30C;&#xC77C;&#xB9C1;.

Diferentes oncogenes de fusi&#xF3;n en la leucemia mieloide aguda (LMA) tienen distintas caracter&#xED;sticas cl&#xED;nicas y de laboratorio que sugieren diferentes modos de transformaci&#xF3;n maligna. Este estudio compara el efecto in vitro de los representantes de los 4 grupos principales de los oncogenes de fusi&#xF3;n de AML en la ense&#xF1;anza primaria humanos c&#xE9;lulas CD34 +. Como era de esperar de sus similitudes cl&#xED;nicas, MLL AF9 y Nup98 Hoxa9-tuvo efectos muy similares in vitro. Ambos causado hiperplasia eritroide y un bloque de claro en la maduraci&#xF3;n eritroide y mieloide. Por otro lado, AML1-ETO y el PML-RARA ten&#xED;a s&#xF3;lo efectos modestos sobre mieloide y la diferenciaci&#xF3;n eritroide. Todos los oncogenes, excepto PML-RARA provoc&#xF3; un aumento dram&#xE1;tico en la proliferaci&#xF3;n a largo plazo y auto-renovaci&#xF3;n. Perfiles de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica revelaron dos patrones temporales de la desregulaci&#xF3;n de los genes. La desregulaci&#xF3;n de genes por MLL AF9 y Nup98 Hoxa9-alcanz&#xF3; su punto m&#xE1;ximo 3 d&#xED;as despu&#xE9;s de la transducci&#xF3;n. Por el contrario, la gran mayor&#xED;a de la desregulaci&#xF3;n de genes por AML1-ETO y el PML-RARA ocurri&#xF3; dentro de las 6 horas, seguido de un descenso dram&#xE1;tico en el n&#xFA;mero de genes desregulados. Curiosamente, el inhibidor de la p53 MDM2 se upregulated por AML1-ETO en 6 horas. Nutlin-3, un inhibidor de la interacci&#xF3;n entre MDM2 y p53, inhibe espec&#xED;ficamente la proliferaci&#xF3;n y la auto-renovaci&#xF3;n de la ense&#xF1;anza primaria humanos c&#xE9;lulas CD34 + transducidas con AML1-ETO, lo que sugiere que la regulaci&#xF3;n positiva MDM2 juega un papel en la transformaci&#xF3;n celular por AML1-ETO. Estos datos muestran que las diferencias entre los oncogenes de fusi&#xF3;n de AML se pueden recapitular in vitro utilizando la ense&#xF1;anza primaria humanos c&#xE9;lulas CD34 + y que los perfiles de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica a principios de estas c&#xE9;lulas puede revelar los posibles objetivos farmacol&#xF3;gicos en la LMA.

En la transformaci&#xF3;n in vitro de la ense&#xF1;anza primaria humanos c&#xE9;lulas CD34 + por oncogenes de fusi&#xF3;n AML: Perfiles de expresi&#xF3;n g&#xE9;nica temprana posible de la droga revela Meta en la LMA

NUP98 HOXA9 &#x662F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6025;&#x6027;&#x9AD3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x7684; NUP98 &#x878D;&#x5408;&#x764C;&#x7684;&#x539F;&#x578B;&#x3002;&#x5B83;&#x7531; NUP98 &#x878D;&#x5408;&#x5230; homeodomain &#x533A;&#x57DF;&#x7684;&#x540C;&#x6E90;&#x76D2;&#x57FA;&#x56E0;&#x86CB;&#x767D; HOXA9 &#x548C;&#x884C;&#x4E3A;&#x7684;&#x5F02;&#x5E38;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; nucleoporin N &#x7EC8;&#x7AEF; FG &#x5BCC;&#x90E8;&#x5206;&#x7EC4;&#x6210;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x7684; NUP98 HOXA9 &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x4F19;&#x4F34;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7528;&#x80DE;&#x8D28;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x6CD5;&#x68C0;&#x6D4B;&#x6765;&#x907F;&#x514D;&#x975E;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4F20;&#x7EDF;&#x9175;&#x6BCD;&#x53CC;&#x6742;&#x4EA4;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7531;&#x4E8E;&#x77ED;&#x7684; NUP98 HOXA9 &#x5C5E;&#x6027;&#x4F1A;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x627E;&#x51FA;&#x6C28;&#x57FA;&#x672B;&#x7AEF;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x62C6;&#x5206; (AES) NUP98 HOXA9 transducin &#x6837;&#x5F3A;&#x5316;&#x5242;/&#x7F57;&#x514B;&#x5BB6;&#x5EAD;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x65B0;&#x578B;&#x4E92;&#x52A8;&#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x8282;&#x3002;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x4E86;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x4E0B;&#x62C9;&#x5217;&#x8868;&#x4E2D;&#x548C; co &#x6C89;&#x6DC0;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x9700;&#x8981;&#x7684; NUP98 HOXA9 FG &#x91CD;&#x590D;&#x533A;&#x57DF;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E92;&#x52A8;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E; AES &#x672C;&#x5730;&#x5316;&#x4E3B;&#x8981;&#x5411;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x7684;&#x5185;&#x90E8;&#x3002;AES &#x4E5F;&#x8868;&#x660E;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B; NUP98 &#x5F3A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;AES &#x589E;&#x5F3A;&#x8F6C;&#x5F55;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684; NUP98 HOXA9&#x3002;&#x5F53;&#x7740; NUP98-HOXA9&#xFF0C;AES &#x9020;&#x6210;&#x589E;&#x52A0;&#x957F;&#x671F;&#x4E3B;&#x8981;&#x4EBA; /cd34 + &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x4E0E;&#x539F;&#x59CB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x660E;&#x663E;&#x589E;&#x52A0;&#x3002;AES &#x7684;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5F71;&#x54CD;&#x5747;&#x672A;&#x89C2;&#x6D4B;&#x5230;&#x7684; NUP98 HOXA9 &#x7F3A;&#x5E2D;&#x3002;AES &#x7EC4;&#x5408;&#x5F0F;&#x51CF;&#x5C11; NUP98 HOXA9 &#x7684;&#x8F6C;&#x5F55;&#x548C;&#x589E;&#x6B96;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;AES &#x9020;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8868;&#x8FBE; NUP98 HOXA9 &#x7CFB;&#x7956;&#x6CBF;&#x88AD;&#x7684;&#x8F6C;&#x53D8;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x6570;&#x636E;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684; NUP98 HOXA9 &#x5408;&#x4F5C;&#x4F19;&#x4F34;&#x5EFA;&#x7ACB; AES &#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x5B83;&#x4E0E;&#x5408;&#x4F5C; NUP98 HOXA9 &#x8F6C;&#x5F55;&#x8C03;&#x63A7;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5316;&#x3002;

&#x6C28;&#x57FA;&#x9178;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x540C;&#x6E90;&#x6027;&#x62C6;&#x5206; (AES) NUP98 HOXA9 &#x57FA;&#x56E0;&#x8FDB;&#x884C;&#x4EA4;&#x4E92;&#xFF0C;&#x5E76;&#x589E;&#x5F3A;&#x4E86;&#x5176;&#x8F6C;&#x578B;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x3002;

NUP98-HOXA9 is the prototype of NUP98 fusion oncoproteins that cause acute myeloid leukemia. It consists of an N-terminal FG-rich portion of the nucleoporin NUP98 fused to the homeodomain region of the homeobox protein HOXA9, and acts as an aberrant transcription factor. To identify interacting partners of NUP98-HOXA9, we used a cytoplasmic yeast two-hybrid assay to avoid the nonspecific trans-activation that would occur with the traditional yeast two-hybrid assay due to the transactivating properties of NUP98-HOXA9. We identified amino-terminal enhancer of split (AES), a transcriptional regulator of the transducin-like enhancer/Groucho family as a novel interaction partner of NUP98-HOXA9. The interaction was confirmed by in vitro pulldown and co-immunoprecipitation assays and was shown to require the FG repeat region of NUP98-HOXA9. Immunofluorescence analysis showed that AES localizes primarily to the interior of the nucleus. AES also showed a strong interaction with wild-type NUP98. AES augmented the transcriptional activity of NUP98-HOXA9. In the presence of NUP98-HOXA9, AES caused an increase in long-term proliferation of primary human CD34+ cells with a marked increase in the numbers of primitive cells. These effects of AES were not observed in the absence of NUP98-HOXA9. AES knockdown diminished the transcriptional and proliferative effects of NUP98-HOXA9. AES caused a shift away from the erythroid lineage in cells expressing NUP98-HOXA9. These data establish AES as an interacting partner of NUP98-HOXA9 and show that it cooperates with NUP98-HOXA9 in transcriptional regulation and cell transformation.

Amino-terminal enhancer of split (AES) interacts with the oncoprotein NUP98-HOXA9 and enhances its transforming ability.

NUP98-HOXA9 est le prototype de NUP98 oncoprot&#xE9;ines de fusion qui causent la leuc&#xE9;mie my&#xE9;lo&#xEF;de aigu&#xEB;. Il se compose d&#x26;#39;une partie N-terminale FG-riche de la NUP98 nucl&#xE9;oporine fusionn&#xE9; &#xE0; la r&#xE9;gion hom&#xE9;odomaine de la prot&#xE9;ine hom&#xE9;obox HOXA9, et agit comme un facteur de transcription aberrante. Pour identifier les partenaires d&#x26;#39;interaction de NUP98-HOXA9, nous avons utilis&#xE9; une levure cytoplasmique test double-hybride pour &#xE9;viter la trans-activation non sp&#xE9;cifique qui se produirait avec la levure traditionnelle dosage &#xE0; deux hybrides en raison des propri&#xE9;t&#xE9;s de transactivatrices NUP98-HOXA9. Nous avons identifi&#xE9; amino-terminale rehausseur de split (AES), un r&#xE9;gulateur transcriptionnel de la transducine-comme amplificateur / Groucho famille en tant que partenaire d&#x26;#39;interaction roman de NUP98-HOXA9. L&#x26;#39;interaction a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9;e par de pulldown vitro et co-immunopr&#xE9;cipitation et a &#xE9;t&#xE9; montr&#xE9; pour exiger la r&#xE9;gion de r&#xE9;p&#xE9;tition FG de NUP98-HOXA9. Analyse par immunofluorescence a montr&#xE9; que AES localise principalement &#xE0; l&#x26;#39;int&#xE9;rieur du noyau. AES a &#xE9;galement montr&#xE9; une forte interaction avec le type sauvage NUP98. AES augment&#xE9; l&#x26;#39;activit&#xE9; transcriptionnelle de NUP98-HOXA9. En pr&#xE9;sence de NUP98-HOXA9, AES a caus&#xE9; une augmentation &#xE0; long terme la prolif&#xE9;ration des primaires de l&#x26;#39;homme cellules CD34 + avec une augmentation marqu&#xE9;e du nombre de cellules primitives. Ces effets de AES n&#x26;#39;ont pas &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9;s en l&#x26;#39;absence de NUP98-HOXA9. Knockdown AES diminu&#xE9; les effets de la transcription et de prolif&#xE9;ration de NUP98-HOXA9. AES a provoqu&#xE9; un d&#xE9;placement loin de la lign&#xE9;e &#xE9;rythro&#xEF;de dans les cellules exprimant NUP98-HOXA9. Ces donn&#xE9;es &#xE9;tablissent AES en tant que partenaire d&#x26;#39;interaction de NUP98-HOXA9 et montrer qu&#x26;#39;il coop&#xE8;re avec NUP98-HOXA9 dans la r&#xE9;gulation transcriptionnelle et la transformation cellulaire.

Amino-terminale Enhancer de Split (AES) interagit avec l&#x26;#39;oncoprot&#xE9;ine NUP98-HOXA9 et am&#xE9;liore sa capacit&#xE9; Transformer

NUP98-HOXA9 ist der Prototyp des NUP98 Fusion Oncoproteinen, die akuten myeloischen Leuk&auml;mie verursachen. Es besteht aus eine N-terminale FG-reiche Teil der Nucleoporin, die NUP98 der Hom&ouml;odom&auml;ne-Region der Homeobox Protein HOXA9 und Handlungen ein Transkriptionsfaktor, aberrante verschmolzen. Ermittlung der interagierenden Partner des NUP98-HOXA9, haben wir eine zellplasmatische Hefe-zwei-Hybrid-Assay verwendet, die unspezifische Trans-Aktivierung zu vermeiden, die mit der traditionellen Hefe-zwei-Hybrid-Assay aufgrund der transactivating Eigenschaften des NUP98-HOXA9 auftreten w&uuml;rde. Wir identifizieren die amino-Terminal Vergr&ouml;&szlig;erer Split (AES), ein transcriptional Regulator der Familie transducin-wie Enhancer/Groucho als neuartige Interaktion Partner NUP98-HOXA9. Die Interaktion von in-vitro-Pulldown und co-Immunopr&auml;zipitation Assays best&auml;tigt wurde und zeigte FG Wiederholbereich des NUP98-HOXA9 zu verlangen. Immunofluoreszenz-Analyse zeigte, dass AES in erster Linie auf das Innere des Zellkerns lokalisiert. AES zeigten ebenfalls eine starke Wechselwirkung mit Wildtyp NUP98. AES erg&auml;nzt die transkriptionelle Aktivit&auml;t der NUP98-HOXA9. In Anwesenheit von NUP98-HOXA9 verursachte AES eine Erh&ouml;hung in langfristige Verbreitung von prim&auml;ren humanen CD34 + Zellen mit einem deutlichen Anstieg der Zahl der primitiven Zellen. Diese Effekte von AES wurden nicht ohne NUP98-HOXA9 beobachtet. AES Niederschlag verringert die transkriptionelle und proliferative Effekte des NUP98-HOXA9. AES verursachte eine Abkehr von der Linie Erythroid Zellen, die NUP98-HOXA9 zum Ausdruck zu bringen. Diese Daten AES als interagierenden Partner der NUP98-HOXA9 schaffen und zeigen, dass es mit NUP98-HOXA9 in transkriptionelle Verordnung und Zelle Transformation zusammenarbeitet.

Amino-Terminal Enhancer von Split (AES) interagiert mit der OIT3 NUP98-HOXA9 und erh&ouml;ht seine verwandelnde F&auml;higkeit.

NUP98-HOXA9 &egrave; il prototipo del NUP98 fusione oncoproteins che causano la leucemia mieloide acuta. Esso &egrave; costituito da una porzione N-terminale FG-ricco di nucleoporin che nup98 fuse nella regione di homeodomain del homeobox proteina HOXA9 e gli atti come un fattore di trascrizione aberranti. Per identificare partner interagenti di NUP98-HOXA9, abbiamo utilizzato un dosaggio di due-ibrido citoplasmatico lievito per evitare la trans-attivazione aspecifica che si sarebbe verificato con il dosaggio di due ibridi di lievito tradizionale a causa delle propriet&agrave; transactivating di NUP98-HOXA9. Abbiamo identificato amminico-terminale rinforzatore di Spalato (AES), un regolatore di transcriptional della famiglia transducina-come enhancer/Groucho come partner di interazione romanzo di NUP98-HOXA9. L&#39;interazione &egrave; stata confermata dai saggi in vitro di pulldown e co-immunoprecipitazione e fu dimostrato che richiedono la regione di ripetizione FG di NUP98-HOXA9. Immunofluorescenza analisi ha mostrato che AES si localizza principalmente all&#39;interno del nucleo. AES ha anche mostrato una forte interazione con selvaggio-tipo NUP98. AES aumentata l&#39;attivit&agrave; trascrizionale di NUP98-HOXA9. In presenza di NUP98-HOXA9, AES ha causato un aumento nella proliferazione a lungo termine di primarie cellule CD34 + umane con un marcato aumento del numero di celle primitive. Questi effetti di AES non sono stati osservati in assenza di NUP98-HOXA9. Atterramento AES ha diminuito gli effetti transcriptional e proliferativi di NUP98-HOXA9. AES ha provocato uno spostamento dal lignaggio eritroidi in cellule che esprimono NUP98-HOXA9. Questi dati stabiliscono AES come partner di interazione di NUP98-HOXA9 e mostrano che coopera con NUP98-HOXA9 in transcriptional trasformazione delle cellule e regolamento.

Amino-terminale rinforzatore di Spalato (AES) interagisce con l&#39;oncoproteina dei tipo NUP98-HOXA9 e migliora la sua capacit&agrave; di trasformazione.

NUP98-HOXA9&#x6025;&#x6027;&#x9AA8;&#x9AC4;&#x6027;&#x767D;&#x8840;&#x75C5;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;NUP98&#x878D;&#x5408;&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x539F;&#x578B;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30DC;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;HOXA9&#x3068;&#x3001;&#x7570;&#x5E38;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4F5C;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x306E;&#x30DB;&#x30E1;&#x30AA;&#x30C9;&#x30E1;&#x30A4;&#x30F3;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x878D;&#x5408;&#x3057;&#x305F;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30AA;&#x30DD;&#x30EA;&#x30F3;NUP98&#x306E;N&#x672B;&#x7AEF;FG-&#x30EA;&#x30C3;&#x30C1;&#x306A;&#x90E8;&#x5206;&#x3067;&#x69CB;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; NUP98-HOXA9&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x7279;&#x6027;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x5F93;&#x6765;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x8D77;&#x3053;&#x308B;&#x975E;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x306A;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x9175;&#x6BCD;&#x30C4;&#x30FC;&#x30CF;&#x30A4;&#x30D6;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C9;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30B9;&#x30D7;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#xFF08;AES&#xFF09;&#x3001;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C7;&#x30E5;&#x30FC;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;/&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30C1;&#x30E7;&#xB7;&#x30D5;&#x30A1;&#x30DF;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x5236;&#x5FA1;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x540C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306F;&#x3001;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x30D7;&#x30EB;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x3068;&#x5171;&#x514D;&#x75AB;&#x6C88;&#x964D;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x3067;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3068;NUP98-HOXA9&#x306E;FG&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x9818;&#x57DF;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3002;&#x514D;&#x75AB;&#x86CD;&#x5149;&#x5206;&#x6790;&#x3067;&#x306F;&#x3001;AES&#x306F;&#x6838;&#x306E;&#x5185;&#x90E8;&#x306B;&#x4E3B;&#x306B;&#x5C40;&#x5728;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AES&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;NUP98&#x3068;&#x306E;&#x5F37;&#x3044;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AES&#x306F;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5897;&#x5F37;&#x3002; NUP98-HOXA9&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x3001;AES&#x306F;&#x3001;&#x539F;&#x59CB;&#x7684;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x6570;&#x306E;&#x8457;&#x3057;&#x3044;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x4F34;&#x3063;&#x3066;&#x521D;&#x4EE3;&#x30D2;&#x30C8;CD34 +&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002; AES&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;&#x306F;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x975E;&#x5B58;&#x5728;&#x4E0B;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002; AES&#x306E;&#x30CE;&#x30C3;&#x30AF;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x8EE2;&#x5199;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x6B96;&#x52B9;&#x679C;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x308B;&#x3002; AES&#x306F;NUP98-HOXA9&#x3092;&#x767A;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x96E2;&#x308C;&#x3066;&#x8D64;&#x82BD;&#x7403;&#x7CFB;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30B7;&#x30D5;&#x30C8;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x306F;&#x3001;NUP98-HOXA9&#x306E;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x30D1;&#x30FC;&#x30C8;&#x30CA;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;AES&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x304C;&#x8EE2;&#x5199;&#x8ABF;&#x7BC0;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x306B;NUP98-HOXA9&#x3068;&#x5354;&#x529B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30B9;&#x30D7;&#x30EA;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x672B;&#x7AEF;&#x30A8;&#x30F3;&#x30CF;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#xFF08;AES&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x6027;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;NUP98-HOXA9&#x3068;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F62;&#x8CEA;&#x8EE2;&#x63DB;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x308B;

NUP98 HOXA9 &#xC6D0;&#xC778; &#xAE09;&#xC131; &#xACE8;&#xC218;&#xC131; &#xBC31;&#xD608;&#xBCD1; NUP98 &#xC735;&#xD569; oncoproteins&#xC758; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0; &#xD0C0;&#xC785;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. NUP98 &#xD0C8; &#xC120; &#xB179;&#xC74C; &#xBC29;&#xC1A1; &#xC694;&#xC778;&#xC73C;&#xB85C; homeobox &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; HOXA9, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD589;&#xC704;&#xC758; homeodomain &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC735;&#xD569; nucleoporin&#xC758; N &#xB2E8;&#xC790; FG &#xD48D;&#xBD80;&#xD55C; &#xBD80;&#xBD84;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xC131; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; NUP98 HOXA9 &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB97C; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; NUP98 hoxa9&#xC758; transactivating &#xC18D;&#xC131;&#xC73C;&#xB85C; &#xC778;&#xD574; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xD568;&#xAED8; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xD2B8;&#xB79C;&#xC2A4;-&#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD53C;&#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD6A8; &#xBAA8; 2 &#xC7A1;&#xC885; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBD84;&#xD560; (AES), NUP98-hoxa9&#xC758; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB85C; transducin &#xAC19;&#xC740; &#xC99D;&#xAC15;/&#xADF8;&#xB8E8;&#xCD08; &#xAC00;&#xC871;&#xC758; transcriptional &#xB808; &#xADE4; &#xB808;&#xC774; &#xD130;&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC99D;&#xAC15; &#xD30C;&#xC545;. &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC678; &#xD480; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xBC0F; co immunoprecipitation &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xD544;&#xC694; NUP98 hoxa9&#xC758; FG &#xBC18;&#xBCF5; &#xC601;&#xC5ED;&#xC744; &#xD45C;&#xC2DC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xBD84;&#xC11D; AES &#xD575; &#xB0B4;&#xBD80;&#xC5D0; &#xC8FC;&#xB85C; localizes &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. AES&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC57C;&#xC0DD;-&#xD0C0;&#xC785; nup98&#xC640; &#xAC15;&#xD55C; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. AES NUP98 hoxa9&#xC758; transcriptional &#xD65C;&#xB3D9; &#xC99D;&#xAC15;. NUP98 HOXA9 &#xC874;&#xC7AC; AES &#xAE30;&#xBCF8; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; CD34 + &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC140;&#xC758; &#xC22B;&#xC790;&#xC5D0; &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC99D;&#xAC00; &#xC7A5;&#xAE30; &#xD655;&#xC0B0; &#xC99D;&#xAC00; &#xC77C;&#xC73C;&#xCF30;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. AES&#xC758; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xD6A8;&#xACFC; &#xB418;&#xC9C0; NUP98 hoxa9&#xC758; &#xBD80;&#xC7AC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. AES &#xCD5C;&#xC800;&#xC758; NUP98 hoxa9&#xC758; transcriptional &#xBC0F; &#xC99D;&#xC2DD; &#xD6A8;&#xACFC; &#xAC10;&#xC18C;. AES NUP98 hoxa9&#xC744; &#xD45C;&#xD604; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; erythroid &#xD608;&#xD1B5;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; AES NUP98 hoxa9&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD30C;&#xD2B8;&#xB108;&#xB85C; &#xC124;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; NUP98 hoxa9&#xB97C; transcriptional &#xADDC;&#xC815;&#xACFC; &#xC140; &#xBCC0;&#xD658;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD611;&#xB825; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBD84;&#xD560; (AES)&#xC758; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178;&#xC0B0; &#xD130;&#xBBF8;&#xB110; &#xC99D;&#xAC15; oncoprotein NUP98 hoxa9&#xC640; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xBCC0;&#xD615; &#xB2A5;&#xB825;&#xC744; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xC2DC;&#xD0B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Nup98-Hoxa9 es el prototipo de Nup98 oncoprote&#xED;nas de fusi&#xF3;n que causan la leucemia mieloide aguda. Se compone de una porci&#xF3;n N-terminal FG-rico de la nucleoporin Nup98 fusionada a la regi&#xF3;n de la prote&#xED;na homeodominio homeobox Hoxa9, y act&#xFA;a como un factor de transcripci&#xF3;n aberrante. Para identificar la interacci&#xF3;n de los socios Nup98-Hoxa9, se utiliz&#xF3; una levadura citoplasm&#xE1;tica ensayo de dos h&#xED;bridos para evitar la trans-activaci&#xF3;n no espec&#xED;fica que se producir&#xED;a con la levadura tradicional de dos h&#xED;bridos de ensayo debido a las propiedades de transactivating Nup98-Hoxa9. Se identificaron amino-terminal de potenciador de la divisi&#xF3;n (AES), un regulador transcripcional de la transducina-como potenciador / Groucho familia como un compa&#xF1;ero de interacci&#xF3;n novela de Nup98-Hoxa9. La interacci&#xF3;n fue confirmada por telecine vitro y en ensayos de inmunoprecipitaci&#xF3;n de co-y se demostr&#xF3; que requieren la regi&#xF3;n de repetici&#xF3;n de FG Nup98-Hoxa9. El an&#xE1;lisis de inmunofluorescencia mostr&#xF3; que AES localiza principalmente en el interior del n&#xFA;cleo. AES tambi&#xE9;n mostr&#xF3; una fuerte interacci&#xF3;n con el tipo salvaje Nup98. AES aument&#xF3; la actividad transcripcional de Nup98-Hoxa9. En presencia de Nup98-Hoxa9, AES provocado un aumento en la proliferaci&#xF3;n a largo plazo de la ense&#xF1;anza primaria humanos c&#xE9;lulas CD34 +, con un marcado incremento en el n&#xFA;mero de c&#xE9;lulas primitivas. Estos efectos de la AES no se observaron en la ausencia de Nup98-Hoxa9. AES ca&#xED;da disminuye los efectos de la transcripci&#xF3;n y la proliferaci&#xF3;n de Nup98-Hoxa9. AES causado un desplazamiento del linaje eritroide en c&#xE9;lulas que expresan Nup98-Hoxa9. Estos datos establecen AES como un socio de la interacci&#xF3;n de los Nup98-Hoxa9 y demostrar que coopera con Nup98-Hoxa9 en la regulaci&#xF3;n transcripcional y la transformaci&#xF3;n celular.

Nabeel R. Yaseen

Department of Pathology and Immunology

Washington University School of Medicine

Colony Forming Cell (CFC) Assay for Human Hematopoietic Cells

Nabeel R. Yaseen

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Pathology and Immunology

Washington University School of Medicine

Colony Forming Cell (CFC) Assay for Human Hematopoietic Cells

Department of Pathology and Immunology