收获的小鼠精子和人工授精

摘要

此协议表明，从男性的睾丸中提取精子，然后inseminating雌性小鼠的方法。此过程需要精确的时间是在发育的研究，以及转基因工作时非常有用。

摘要

鼠类属Peromyscus（鹿鼠）是最普遍的原生北美的哺乳动物。 Peromyscus物种的研究范围广泛，包括毒物学，流行病学，生态，行为，和遗传研究。在这里，他们提供了一个有用的模型示范人工授精。

此处显示的方法类似先前已被用于一些鹿小鼠研究，但没有详细的协议已经出版。在这里，我们展示了人工受精的基本方法。这种方法需要从啮齿类动物中提取的睾丸，然后隔离精子从附睾和输精管的。在排卵期，精子的成熟，现在在一个牛奶混合后，放置在女性生殖道。施肥是算作0天的胚胎发育的时间。胚胎可以在需要的时间点检索和操纵。

人工授精可用于在各种啮齿类动物是至关重要的，或难以取得确切的胚胎时机。这种技术是重要的物种或品系（包括最Peromyscus）可能无法立即交配和/或交配是很难评估。此外，人工受精胚胎发育的确切时间，无论是在映射发展进步和/或转基因工作。因为施肥是保证，可用于动物数量减少。这种方法已经进一步Peromyscus系统至关重要，以及将有望使他人受益。

研究方案

人工授精

人工授精代替自然交配，以增加成功的机会，所有的女性会怀孕。用于每1超排的女性或在发情已知一名女2男。 caudae附睾成熟的雄性小鼠被放置在了9％的牛奶悬挂和切片18表针开放。精子被允许自由游泳几分钟，然后是附睾从混合物。悬架被评估为合流和活动精子的显微镜。钝的22号1 ½英寸长针是用来管理精子。 120 °弯曲放置约3 / 4 ^次 ，上下针方式。弯曲和0.025 - 0.05mls注射针插入阴道。如果一个助理是用来装的女性，在适当的位置，不需要使用麻醉药。

制备

1. 使用女6男4例
2. 安乐死在男性的动植物公园
3. 准备从9％的牛奶约5毫升奶粉
4. 在小培养皿中放入1.5毫升
5. 剪出epididymus和输精管
6. 9％的牛奶在1.5毫升
7. 使用两个18表针，并使用针长切割运动，切片打开epididymus和输精管释放精子
8. 留过组织在显微镜下检查精子

注塑

1. 使用120 °角的钝针
2. 拿在手里的鼠标和注入的混合物。如果一个人持有和注射感到不舒服，两个人都可以使用。没有麻醉剂的使用，应在一个知道如何这可能会影响程序。
3. 使用每个女性的精子/牛奶混合0.05毫升

收件人女性

1. 对受援国的女性阴道涂片（此时收件人女性应在发情前期/发情）
2. 都没有达到第5天发情女性可能不应该使用

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Petri Dish	Tool	Fisher Scientific	08-772-30
18 G needle	Tool	BD Biosciences	305195
Powdered milk	Reagent	Any Supplier
1 mL syringe	Tool	National Scientific Company	S7510-1
Forceps	Tool	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5060
Scissors	Tool	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5882
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline	Reagent	GIBCO, by Life Technologies	14200-075
22 G blunt needle	Tool	Give to me