Сбор спермы и искусственного осеменения Мыши

Резюме

Этот протокол демонстрирует методы для извлечения сперматозоидов из яичек самцов, а затем inseminating самок мышей. Эта процедура полезна, когда точное время необходимо в развитии исследований, а также трансгенные работы.

Аннотация

Грызуны Реготузсиз рода (олени мышей) являются наиболее распространенными коренных народов Северной Америки млекопитающих. Реготузсиз видов используются в широком диапазоне исследований, включая токсикологии, эпидемиологии, экологии, поведенческие и генетические исследования. Здесь они предоставляют полезную модель для демонстрации искусственного оплодотворения.

Методы, аналогичные отображаются здесь ранее использовались в нескольких исследованиях, мышь оленя, но не подробный протокол был опубликован. Здесь мы показываем, основным методом искусственного оплодотворения. Этот метод влечет за собой извлечение из яички грызунов, то выделение спермы из придатка яичка и семявыносящих протоков. Зрелые сперматозоиды, теперь в молочную смесь, помещаются в половые пути самки в момент овуляции. Оплодотворение считается как день 0 для синхронизации развития эмбриона. Эмбрионы могут быть получены в заданное время точкой и манипулировать.

Искусственное оплодотворение может быть использован в различных видов грызунов, где точные сроки эмбрион имеет решающее значение или трудно получить. Эта техника имеет жизненно важное значение для видов или штаммов (в том числе большинство Реготузсиз), которые не могут спариваться сразу и / или там, где спаривание трудно оценить. Кроме того, искусственное осеменение обеспечивает точное время для развития эмбриона или в отображении развития прогресса и / или трансгенных работы. Сокращение числа животных может быть использован с оплодотворением гарантируется. Этот метод имеет жизненно важное значение для дальнейшего Реготузсиз системы, и мы надеемся принести пользу другим, а также.

протокол

Искусственное оплодотворение

Искусственное оплодотворение используется вместо природного вязки, чтобы увеличить шансы, что все женщины имеют станет беременной. 2 мужчины была использована на каждый 1 superovulated женщин или женщин, как известно, в эстрального. Caudae epididymides из зрелых самцов мышей были помещены в 9%, молока подвески и нарезанный открытым с 18 иглами калибра. Спермы было разрешено свободно плавать в течение нескольких минут, а затем epididymides были взяты из смеси. Подвески оценивали с помощью микроскопа для слияния и подвижных сперматозоидов. Тупой 22 калибра 1 ½ дюйма длиной иглы, используемые для введения спермы. 120 ° изгиб был сделан около 3 / ^4-й путь вниз иглу. Игла вводится во влагалище до изгиба и 0,025 - 0.05mls вводили. Если помощник используется для хранения женщиной в соответствующем положении, использование анестезии не требуется.

Подготовка

1. Используйте 4 мужчин в течение 6 женщин
2. Эвтаназии мужчин в виварий
3. Подготовка около 5 мл 9% молока из сухого молока
4. Положите 1,5 мл в небольших чашках Петри
5. Вырежьте придаток яичника и семявыносящих протоков
6. Положить в 1,5 мл 9% молока
7. С помощью двух игл 18 калибр, и с помощью длинных резки движения с иглы, кусочек открытым придаток яичника и семявыносящих протоков выпустить сперму
8. Выньте оставшиеся ткани и проверить его на сперму под микроскопом

Инъекция

1. Используйте тупой иглой на 120 градусов
2. Держите мышь в руки и вводят смесь. Если неудобно с одним лицом, занимающим и инъекционных, два человека могут быть использованы. Нет анестезии должны быть использованы, как на один знает, как это может повлиять на процедуру.
3. Используйте 0.05ml спермы / молоко смеси на женский

Получатель женщин

1. У вагинальных мазков на получателя женщин (к этому времени получателя женщины должны быть в проэструсе / течки)
2. Женщины, которые не достигли течки по 5-й день, вероятно, не использовались

Материалы

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Name	Company	Catalog Number	Comments
Petri Dish	Tool	Fisher	08-772-30
18 gauge needle	Tool	Becton Dickinson	305195
Powdered milk	Reagent	Any Grocery store
1 ml syringe	Tool	National Scientific Company	S7510-1
Forceps	Tool	Roboz	RS-5060
Scissors	Tool	Roboz	RS-5882
Dulbecco's Phosphate Buffered Saline	Reagent	Gibco	14200-075
22 gauge blunt needle	Tool	Give to me