SJL小鼠诱导实验性自身免疫性垂体炎

摘要

该视频演示了如何诱导自身免疫性垂体炎SJL小鼠，以及如何组织病理学来评估其严重性。

摘要

自身免疫性垂体炎可通过注射垂体蛋白与佐剂混合为¹易感小鼠实验转载。小鼠模型让我们研究如何开展疾病，往往提供了一个良好的副本在人类身上发生的相同的流程。对于某些自身免疫性疾病，如1A型糖尿病，有模型（NOD小鼠），自发地制定一个类似人类对口的疾病。对于很多其他的自身免疫性疾病，但是，该模型需要诱导实验。在这方面的一个常用的方法是与正在研究的器官所得显性抗原注入鼠标。例如，在自身免疫性甲状腺炎感兴趣的调查与^甲状腺 2注入老鼠，重症肌无力感兴趣的注入与乙酰胆碱^受体 3 。如果一个特定的自身免疫性疾病的自身抗原是不知道，办案人员从自身免疫反应的目标的器官注入粗蛋白提取物。自身免疫性垂体炎的致病性自身抗原（S）仍有待确定^4，从而原油垂体蛋白制备用于。在这个视频文章中，我们将演示如何诱发SJL小鼠实验性自身免疫性垂体炎。

研究方案

实验协议

一旦垂体的免疫原准备（见姊妹篇），它是皮下注射到SJL小鼠（杰克逊实验室，股票000686）。第二个相同的注射7天后重复。小鼠体内和验尸结果，然后用来收集。

第1步。 SJL小鼠皮下注射垂体的免疫原

小鼠第一次注射0.5毫升20毫克/毫升2,2,2 - Tribromoethanol（Avertin，特克斯和凯科斯群岛美国T - 1420）腹腔麻醉。小鼠皮下注射垂体乳液，在同伴的Jove 2181条与100μL，含有1毫克的垂体提取物和完全弗氏佐剂0.25毫克。乳液是左背后腿地区（（50μL）和右腹股沟区（50μL）注入。垂体乳液是7天再注射到对面站点（右后腿背侧地区的50μl和在左腹股沟区的50μL）。小鼠每天监测的第3天，然后每周，直到牺牲，这通常是第一次免疫后28天的日子。

第2步。收集在体内的结果：血液检测

最常用的评估实验的结果，而仍然活着的老鼠组织是血。血液常规绘制测量垂体抗体或其他标志物，如细胞因子和趋化因子的血清水平的第一次免疫接种后14天。

血液收集如下的活体小鼠。小鼠是安全举行颈背位于颌骨后部。一旦位于颌骨后部，4毫米的采血针是用来刺穿颌下维管束。血液收集后，使用酒精棉球放在对辖区内的压力，避免血肿。采集的血液离心20分钟，在2000克，并保存于-80℃直至使用。

第3步。收集的验尸报告的结果：垂体组织病理学

通常第一次免疫接种后28天处死小鼠。要建立诊断EAH的主要特征是脑垂体造血单核细胞浸润。

小鼠是由放置在一个密封的塑料腔，与CO ₂灌注安乐死。小鼠存放室共8分钟。安乐死后，脑垂体收集的姊妹篇。患病的脑垂体出现肿胀和更牢固地附着到周围硬脑膜。夏普镊子是用来放松的脑膜周围垂体。一旦垂体自由移动，蝶骨，脑垂体的一端是掌握和脑垂体，用镊子仔细解除。然后放置在含有微量Beckstead的固定液⁵管腺体。脑垂体固定过夜，镜头纸包裹，放置在录像带。腺体，然后处理，使用以下协议：

站号	试剂	时间（分钟）	温度（摄氏度）
1	70％的酒精	5	25
2	70％的酒精	15	25
3	95％的酒精	15	25
4	95％的酒精	15	25
5	100％的酒精	15	25
6	100％的酒精	7.5	25
7	100％的酒精	7.5	25
8	二甲苯	20	25
9	二甲苯	20	25
10	二甲苯	20	25
11	石蜡	30	58
12	石蜡	5	58
13	石蜡	5	58

处理后，脑垂体石蜡包埋，并从每个腺削减至少5（5微米厚）不连续的部分。切片后，腺体与苏木精和曙红染色，并进行分析，以量化的单核渗透。其中最严重的渗透部分进行打分选定。严重程度是基于一个垂体前叶置换或免疫细胞破坏程度的主观估计：0级，无病取得1级，2％-20％的参与; 2级，20％-30％; 3级， 30％-50％; 4级，50％-90％; 5级，大于90％。所有部分都取得了由两个人蒙蔽部分源。

讨论

四项技术已在实验动物诱发垂体炎。在这篇文章中描述的技术，即注射垂体蛋白质与弗氏佐剂混合，是最早的一个，可追溯至1967年^6，已超过最近¹改善。其他方法是：在1992 ^年 7注射风疹病毒的可溶性糖蛋白，立体一种腺病毒注入脑垂体直接在2002 ^年 8和在2010 ^年 9株从另一个大鼠株肾囊下大鼠脑垂体移植。弗氏佐剂的方法的主要优势是，它是创伤小，比较一...

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
SJL mice (The Jackson Laboratories)		stock 000686
2,2,2-Tribrom–thanol (Avertin)	TCI America	T-1420
Beckstead’s fixative