一种技术，屏幕美国榉木为抵抗山毛榉介壳虫（<em&gt;隐球菌fagisuga</em&gt;林德。）

摘要

山毛榉树皮病是由喂养，在树皮真菌创建入口点的山毛榉介壳虫活动启动。树木能够抵抗介壳虫也是疾病的抵抗力。在这里，我们提出，我们已经发展到筛选山毛榉规模抵抗个别山毛榉树的协议。

摘要

山毛榉树皮病（BBD）的结果在高水平的初始死亡率，留下幸存者的树木被大大削弱和变形。本病是由喂养侵入山毛榉介壳虫， 隐球菌fagisuga，它由Neonectria种真菌中的一种创造切入点感染活动启动。如果没有规模为患，对于真菌感染的机会很少。使用规模鸡蛋人为侵扰的严重影响BBD看台的健康树木证明，这些树是耐病情复杂¹的介壳虫部分。在这里，我们提出，我们已经开发的基础上，由休斯敦²人为侵扰的技术，它可以用于筛查的领域和更小的盆栽苗木移植和规模性树木的协议。规模性树木识别是对BBD的管理，通过树的重要组成部分改进方案和造林操纵。

引言

山毛榉树皮病（BBD）自19世纪90年代后期³引入了入侵的山毛榉介壳虫， 隐球菌fagisuga，在新斯科舍省的加拿大省已在北美地区于美国山毛榉产生了不利影响。当山毛榉介壳虫其插入喂食管芯到树皮制作的小裂缝，提供入口感染的Neonectria种真菌（Neonectria ditissima或Neonectria faginata）中的一本昆虫病情复杂启动。由于真菌菌丝体生长，大面积的组织可能会死，最终完全环剥树。从疾病的伤害削弱了树，使它容易出现抢购的大风^4。在疾病的第一波死亡率水平已报道高达^50％5。幸存的树木往往严重变形，溃疡形成降低了树的值作为木材产品。0;这种树有一个倾向根萌这导致了“山毛榉树丛”，以防止其他更理想的物种建立，减少了支架⁶的经济和生态价值的形成。虽然山毛榉树皮病是不是很可能导致美国山毛榉灭绝，它改变立场的组成和健康导致食物和栖息地减少对野生动物的^7,8。

在受BBD多年看台上，有报道称，依然无任何疾病症状的树木。人工接种试验表明，这些树是耐介壳虫^2。如果没有规模虫蛀，有一个Neonectria感染的机会很少，尽量减少真菌的影响。大规模死亡的美国榉木，由于Neonectria感染在没有事先规模为患从未据报道，所以抗阻为BBD山毛榉介壳虫结果。

对BBD的管理最近的研究集中在识别，繁殖，饲养，并保留美国山毛榉树与阻力山毛榉介壳虫的。遗传研究表明，抗介壳虫是可以遗传的，耐树木的精心选育可能会导致在一个世代⁹显著改善。这一发现得益于在美国的州和国家森林经理努力建立抵抗美国榉木的区域种子园提供遗传多样性BBD性种子的来源进行恢复种植^10,11。研究还表明立场遗传学造林操纵去除易感树木和保留性的树木可能会导致林分改造^9,12。

BBD通过树木改良活动，或通过开展造林处方管理需要来选择和山毛榉规模性和易感树木区分的能力。这里介绍的方法已经改编自一个方法首先由戴维·休斯顿引入人工接种苗木榉规模鸡蛋^1。该方法可以作为一种筛选工具，以确定数量性状基因座（QTL）与电阻或在遗传研究抗性和易感盆栽幼苗或接枝分株区分相关联。另外，它可用于筛选成熟的树木在现场以确定种子园的发展，或保留在现场耐树木。易感树木可以识别并删除，以减少疾病的影响。

研究方案

1植物材料：成熟的领域树木，盆栽苗木，盆栽或移植

1. 现场测试中，选择显示比例虫蛀或疾病进行检测的可能的阻力的迹象成熟健康的美国山毛榉树。明显地容易树木也将需要确定被用作对照（ 图1）。
2. 为了测试盆栽苗或移植物，收集和在科赫和凯里，2004或在凯里等人 ，2013描述的接穗嫁接描述发芽山毛榉。
3. 育苗移植或在盆栽土壤混合修订，47克微量营养素，477克缓释肥料15N-3.9P-9.9K，700克粗珍珠岩和每2.8立方米75克硫酸铝。英尺袋。如果在生长季节后需要，植物施肥每周用可溶性17N-1.3P-14.1K在200 ppm的氮。
4. 在生长季节，保持在阴凉处室内植物。让植物外面在秋天之前，移动它们进入休眠状态要控制温度储存设施（〜4℃）从十一月至四月。

榉木秤鸡蛋2个。收藏

1. 在一个BBD出没的展台，检查严重感染的树木（通过他们的“粉刷”的出现， 图1A易于识别）用一只手放大镜来确认鸡蛋，通常从丰富七月中旬到八月中旬的存在。
2. 使用画笔轻轻刷成人介壳虫，鸡蛋等杂物的白色蜡状团块，成塑料密封1加仑收集袋（ 图1B）。从至少三个不同的树木收集至少12米外。
3. 如果需要，在密封的收集袋长达两个星期的鸡蛋存放在4°C。带的湿的聚乙烯泡沫的袋子，以防止鸡蛋从晒出的内部的小片（2.5厘米见方）。
4. 从成年人（0.60毫米）和debri分开规模鸡蛋（0.15×0.25毫米）秒，用一段短的2'PVC管和一个耦合到支持一块方形的250微米的尼龙筛（ 图2）构建一个筛子。
5. 清空成人，蜡，鸡蛋，并从收集袋碎片的混合物到筛子并用一个小漆刷轻轻地鼓励卵穿过网眼进入下面的玻璃培养皿中。应避免塑料培养皿中，因为它们容纳更多的静电，从而难以移动的鸡蛋。鸡蛋之前和筛分后示于图3。
6. 纯化的蛋可以存储在培养皿中，在4℃下至少一周。为了防止鸡蛋变干，大盘潮湿的一块泡沫的盖子，用封口膜密封。

3，卵子活力测定

1. 评估卵存活率，使用10毫升注射器，以涂上薄薄的凡士林的环围绕60mm的玻璃培养皿的底部（ 图4A中的圆周）。
2. 转让约100个​​鸡蛋到环的中心，将盖子上的培养皿中，并用封口膜密封。允许所述密封培养皿，以保持原状在室温下放置2周，3周的时间，如果已存储的蛋在4℃下开始测定之前。
3. 孵化的若虫会卡在凡士林，并且可以很容易地计算，并且空的鸡蛋很容易从未孵化的卵通过它们的颜色和光泽（ 图4B）不同。除以若虫的数量通过的空鸡蛋加余下的全蛋的总和计算存活率。良好的生存力应该在75％到90％孵出的卵范围。

4，规模性的现场大型成熟的山毛榉树的筛选

1. 对于定量检测，计数出500个卵用解剖显微镜和使用小刮勺跨predampened，开孔10×15×1.3厘米聚乙烯泡​​沫塑料的矩形的中心轻轻地撒它们。至抑制泡沫，润湿它，然后挤压出尽可能多的水可能。对于定性试验，500鸡蛋可以算出来，放在一个小玻璃小瓶和一个“填充”行画，可用于测量约500个卵额外的批次。
2. 将泡沫垫到测试树鸡蛋一边对树皮面对的问题。用绳，带，细绳，或涂塑丝硬件握住垫到位。塑料或金属基材料，应使用而非天然纤维材料，这些材料由野生动物更易于清理。
3. 线的顶部和预切割23×30厘米的一块透蒸汽防水屋保鲜用乙硅氧烷基粘合剂的两侧，并将其放置在泡沫测试焊盘。请按殿裹边的树来创建一个防水密封。将尼龙绳或塑料涂层的硬线周围的树和房子包起来，使其保持在一定的地方，而粘台（ 图5）。
4. 放置至少两测试焊盘上的每个测试树，最好是在树干的两侧。在每个站点，放置测试点上至少有2棵敏感（有明显的天然鳞片虫蛀）作为对照。在此之前放置在测试片上的控制树，取出用坚定的毛刷任何自然发生介壳虫或鸡蛋。
   注意：泡沫垫用鸡蛋，也可放置在树上的饲养规模鸡蛋，这可以是特别有帮助的地区为患电平为低的目的。

5，规模性盆栽幼苗或移植物的筛选

1. 为了进行测试，选择1厘米（卡尺5厘米以上的土壤线）是足够高的至少有2个独立的测试焊盘放置在它们的最小直径盆栽树木。必要时，以腾出空间供试片修剪小偏科。
2. 用解剖显微镜来计算出150鸡蛋和撒在预切割和挫伤2.5×7.6×1.3厘米开孔polyethy溶解乙炔泡沫垫。
3. 加盖泡沫垫与苗对树皮鸡蛋的一面，用涂塑丝。缠绕在幼苗只是泡沫上面有个小平米的房子保鲜膜和醋酸基有机硅密封（ 见图6A）。
4. 包括已知的易感苗家庭或移植作为对照。

6，数据采集

注意：将所述泡沫垫和鸡蛋在测试树后约52至57周后，数据可以被收集。重要的是，不这样做，大人也开始产卵，使他们的繁殖能力才能确定之后。在一些树木耐它是很平常看到少数的成年人建立，但没有再生产发生。

1. 小心地取下泡沫垫和计数的使用手镜或放大镜（10倍），在树皮上建立成人介壳虫的数量。
2. 当泡沫垫被去除，它是非uncommon一些成人和最蛋同一簇的泡沫要被拉断树（参见图7）。使用解剖显微镜，算上卵块，而仍然附着在泡沫垫成年人。

结果

图6显示了抗苗（C）和两个易感苗（D，E）表现出不同程度的敏感性。一个什么样的易感成熟的树看起来像59周人工接虫试验成立后的一个例子如图5B所示。当泡沫被剥离的树，它是不寻常的介壳虫及其卵簇保持粘在泡沫如示于图7，这就是为什么它是必不可少的，以收集从树和泡沫衬垫的数据。

图8?...

讨论

需要这种测定法的成功关键步骤包括对所述蛋的可行性测试和在每个站点测试使用容易控制的，并与盆栽材料。同样重要的是使用每树或幼苗多个测试垫。我们发现，无论是在现场，并于盆栽多控制测试中，错误的一个常见来源可以是键盘故障。例如，在现场，即使我们的覆盖测试垫与房子的包裹，以防止多余的水分，水向下流动阀杆可以偏向于树的一侧，并且产生一个测试垫的损失的修改。

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Nylon Mesh Sheet, 250 micron	Small Parts	CMN-0250-D	Mesh opening size: 250 microns square, % of open area: 34, thread diameter: 180 micron, width: 24”, Length: 12”, Package quantity: 1
Tyvek Home Wrap	DuPont	D1349991	9 ft x 150 ft roll, can ask for it to be cut in half.
Polyethylene foam, ½” thick	Columbus Foam Products		2 ft x 50 ft roll
MetroMix 510	Sun Gro Horticulture		2.8 cu. ft. bark, peat moss, vermiculite, bark ash, starter nutrient charge (with Gypsum), slow release nitrogen and dolomitic limestone.
Osmocote Plus 15-9-12	Everris	E903206	Standard 3-4 month release
Sight Savers 10X	Bausch & Lomb	813434	10X magnification illuminated coddington
Nikon Mini Field Stereoscope	Nikon	7314	20X magnification
Silicone II clear	GE	159538	2.9 oz clear window & door caulk