基于丝绸的自行式微搅拌器的反应式喷墨打印及推进分析

摘要

该协议展示了利用反应喷墨打印打印自移动生物兼容和环保微搅拌器的能力, 用于生物医学和环境应用。

摘要

在这项研究中, 一个协议, 使用反应喷墨打印制造酶推进丝绸游泳具有明确的形状。由此产生的装置是能够在没有外部驱动的情况下产生运动的自行推进物体的一个例子, 并在医学和环境科学中具有潜在的应用, 用途从微搅拌、有针对性的水的补救 (例如, 清洁漏油)。这种方法采用反应喷墨打印, 通过将水溶性再生丝素 (丝 I) 转化为不溶性丝素 (丝 ii), 产生明确界定的小规模固体丝结构。这些结构也被选择性地掺杂在特定的区域与酶过氧化氢酶, 以便产生运动通过气泡产生和脱离。打印的图层数量决定了设备的三维 (3D) 结构, 因此在这里报告了此参数对推进轨迹的影响。结果表明, 通过改变印刷结构的尺寸来调整运动的能力。

引言

人工自行式微搅拌器 (spms) 采用多种推进机构来产生运动, 可分为化学推进^{1、2、3、4} 、^5,6或物理外部推进。一种常见的化学推进机制是利用催化或酶活性产生运动产生梯度, 或产生气泡, 使物体分离时产生动量。此前的研究已经研究了几种催化和化学 Spms, 包括聚苯乙烯珠与铂纳米颗粒和铬吸附在表面¹, 金-铂双金属雅努纳米棒 2, 镁雅努斯微搅拌器³, 微搅拌器由镁芯和二氧化钛壳与嵌入金纳米颗粒⁴, 丝素雅努斯微型火箭与过氧化氢酶嵌入在脚手架 5.物理推进机构包括磁性^7、8、光学⁹和超声波¹⁰推进系统, 所有这些系统都由外部物理源控制。根据预期的应用, SPMS 尺寸可以从几纳米到几百微米不等。上述和其他 Spms 的潜在应用实例包括用芯片上的实验室设备¹¹对疾病进行医学诊断、加载和在体内有针对性地提供疗法12、环境补救³(例如, 清洁溢油) 和光催化降解化学和生物战剂, 如炭疽芽孢杆菌和神经毒剂⁴。因此, 在目标应用方面, 最好能够产生经过特定轨迹的 Spms, 例如用于运输挑战的长线性轨迹或用于微混合应用的旋转轨迹。这里的重点是搅拌应用的旋转运动。

没有单一的既定方法来制造 Spms, 但对于医疗和环境应用, 必须使用一种生物相容性、可生物降解、环保、易于获得、价格低廉且易于制造复杂的 Spms 的材料无需先进的设备。再生丝素 (RSF) 就是这样一种材料, 它满足了所有这些参数, 同时也得到了食品药品监督管理局 (FDA) 的批准。

丝绸是一个通用术语, 用于几种天然纤维蛋白, 其中最常见的是由蚕蛾幼虫在木偶之前制造的纤维蛋白. 这些茧是由纤维蛋白组成的, 纤维蛋白是一种纤维蛋白, 与另一种叫做丝胶的蛋白质粘在一起。丝素 (SF) 具有优良的力学性能、生物相容性和生物降解性¹³, 是制备 spms 的理想选择, 其形态为丝 i、II、iii 三种。丝绸 I 是一种水溶性亚稳态形式, 主要含有螺旋和随机线圈;丝绸 II 是一种不溶于水的形式, 主要含有结晶丝的反平行β片;丝 III 是一种存在于丝状溶液的水-气界面上的三重聚甘氨酸 ii 螺旋结构。与其他纤维蛋白类似, SF 具有重复的氨基酸序列单位。茧的自然发生的 SF 由这种重复单元 (GAGAX) 的三个主要六肽域组成, 而 X 可以是 A、S 或 Y。通过氢结合, 反平行β片结构的 (ga) n 图案进一步堆叠通过范德华力, 形成疏水纳米结晶 14^,15。

通过利用自然产生的酶在液体介质 (燃料) 中产生浓度梯度或气泡来推动推进, 可以进一步提高生物相容性。因此, 在本研究中, 过氧化氢酶被用作 "引擎", 以产生推进与过氧化氢作为水燃料介质。过氧化氢酶是一种几乎在所有生物中都能找到的酶。它催化过氧化氢 (H2o2) 分解成水和氧气 16.从 Spms 的酶位点释放氧气气泡会对物体产生力, 使其在气泡释放⁵的相反方向上进行推进 (图 1)。

在催化驱动的 SPMS 中, 催化位点的不同定位会产生不同的推进行为和轨迹¹。因此, 为了实现高效的微型搅拌器, 有必要制造具有明确几何形状和发动机位置的搅拌器, 并比较发动机的不同功率。为了便于进行这些研究, 本文介绍了如何利用反应喷墨打印 (RIJ) 技术在毫米尺度上制备再生丝素 Spms。喷墨印刷是一种用于材料沉积的非接触式方法。这使得在生成各种形状时具有高精度的小型复杂结构的制造变得简单。RIJ 发生时, 两个或两个以上不同的反应材料沉积并在基板上进行反应, 以产生所需的产品材料。因此, 用一个催化搅拌器在中心外的位置打印的 Spms 会给出导致旋转运动的对象不对称。这种方法还可以很容易地制造由计算机辅助设计 (CAD) 定义的各种形状和设计配置的微型搅拌器, 从而在实际应用中更容易、更准确地控制所需的运动。应用。最后, 展示了具有不同推进特性的不同厚度印刷设备的性能。

本研究为以微米到毫米尺度的速度制造具有 RSF 的 Spms 提供了蓝图。利用 RIJ 技术制造 RSF 微型搅拌器, 为从现场生产的脚手架或水凝胶等材料中高效生产微型搅拌器打开了大门, 这些材料在其他方面无法通过现场生产的脚手架或水凝胶进行沉积或制造。其他手段, 如蒸发。经过适当的进一步功能化 (如酶), 这些 Spms 可适用于环境补救 3, 如清洁生物毒素、有机污染物以及化学和生物战剂⁴。

研究方案

注意事项:在使用过氧化氢、碳酸钠、乙醇、氯化钙和甲醇之前, 请查阅相关材料的安全数据表。在处理本协议中使用的化学品时, 确保佩戴所有适当的个人防护设备, 包括工程控制。

1. 纤维蛋白的提取

1. 用剪刀将5克清洁的蚕茧切成约1厘米²块小块。
2. 在萃取罩下的磁热板上的2升烧杯中煮沸2升的去离子化 (DI) 水。
3. 将4.24 克碳酸钠逐渐缓慢地放入沸水中, 避免沸腾, 并在磁搅拌棒的帮助下溶解。
4. 等待, 直到溶液开始再次沸腾, 并添加切割的茧块到溶液中。确保所有的丝绸都浸入溶液中, 并在不断搅拌下保持溶液沸腾 90分钟. 用铝箔轻轻覆盖烧杯, 定期用预热的 DI 水补充水分损失。

2. 纤维蛋白的干燥

1. 用玻璃棒或铲子从碳酸钠溶液中取出提取的纤维蛋白纤维, 每次洗涤用1升预热的 DI 水清洗 3x, 逐步降低每个洗涤步骤的温度 (约60°c、40°c 和室温, 25°C)。
2. 将纤维蛋白纤维涂在750毫升硼硅酸盐玻璃结晶盘上, 并将其放入常压下60°c 的烘箱中, 然后连夜干燥。干燥后, 将纤维蛋白存放在密闭的容器中。

3. 纤维蛋白的溶解

1. 准备含有4.8 克 di 水、3.7 克乙醇和3.1 克氯化钙17的三元溶液 (阿吉泽试剂).
2. 将双颈圆底烧瓶 (100 毫升) 放入水浴中, 将750毫升的硼硅酸盐玻璃结晶盘与600毫升 di 水一起填充在磁性热板的顶部。将三元溶液放入烧瓶内。
3. 将温度计放置在其中一个颈部, 以准确监测溶液温度。用铝箔覆盖另一个颈部, 以防止因蒸发而从溶液中干燥 (或使用水冷回流冷凝器)。将溶液加热至80°c。
   注: 确保温度计的灯泡在溶液中。
4. 当溶液的温度稳定在80°c 时, 去除铝箔, 并在溶液中加入1克纤维蛋白干。加入一个小磁搅拌杆, 以确保溶液在整个溶解过程中很好地混合。用铝箔再次覆盖第二个颈部, 以最大限度地减少蒸发, 但保持系统打开。离开溶解90分钟。

4. 纤维蛋白溶液透析

1. 溶解90分钟后, 将纤维蛋白溶液留下 10分钟, 冷却至室温。
2. 取一个15厘米长的透析管 (分子量截止 12000-14000 kDa), 并在两端之一打结。用水龙头里的 DI 水清洗几分钟。
3. 打开另一端, 将纤维蛋白溶液倒在里面。使用金属夹具, 关闭透析管的另一端, 确保导管尽可能紧闭。通过螺帽将透析管的一端连接到一个空的30毫升塑料小瓶上, 让透析管漂浮在水中。
4. 在一个2升的烧杯中加入2升的 di 水, 并将透析管放在里面。定期更换水。每次更换水的电导率以跟踪透析过程时, 都要检查水的电导率。一旦水的电导率低于 10μscm, 透析步骤就会完成。
   注: 此过程通常需要大约24-36小时与5个水的变化。
5. 透析完成后, 用剪刀将透析管的一端切割成一系列 1.5 mL 管, 然后将溶液倒入系列 1.5 ml 管中。然后, 离心 5分钟, 在 16, 000 x g , 以去除纤维蛋白溶液中的任何颗粒。将上清液收集在一个30毫升的塑料小瓶中, 并将其存放在4°c。

5. RSF 溶液浓度的测定

1. 称重干净的玻璃滑块 (W₁)。加入200Μl 的丝溶液 (_v1)。
2. 将玻璃滑块放在60°c 的烤箱中2小时。
3. 再次称重玻璃滑块 (W₂)。
4. 使用以下公式计算丝液 (w/v) 的浓度:
   

6. 印刷油墨的制备

1. 通过混合纤维蛋白溶液 (40 Mg/ml)、聚乙二醇 400 (peg 400; 14Mg/ml) 和去离子水来制备油墨 a (最终体积_1.5ml), 用于印刷 spms 的主体。
2. 用于印刷 Spms 的催化引擎, 将纤维素 (40 Mg/ml)、PEG₄₀₀ (12mgml)、过氧化氢酶 (6 mg/ml 与 gt;20,000 unitssmg) 和去离子水混合, 制成1.5 毫升的油墨 b。
3. 通过在甲醇中溶解 Coomassie 明亮的蓝色 (0.05 Mg/ml) 制备 1.5 mL 的油墨 c。
   注: 甲醇用于将纤维素随机线圈转换为刚性β板, 在油墨 a 或油墨 B 上油墨 c, 用于提供 Spms 的对比颜色, 以帮助在推进过程中自动跟踪 Spms。

7. 反应喷墨3D 打印

注: 这些实验中使用的喷墨打印机是基于带有玻璃喷嘴的压电驱动喷射装置。有几种商业上可用的喷墨打印机的研究, 可以复制这些功能。

1. 使用直径为80微米的喷射装置, 在喷嘴与硅晶片基板之间工作距离约为 5 mm 的工作距离上, 将放置在舞台上的硅基板上的油墨打印出来。Spms 的几何形状以数字方式定义为电子表格文件中的一系列 X-Y 坐标点。
   注: 打印机按顺序读取坐标并相应地运行打印机。每个坐标点使打印机喷射一次通过喷射装置。为墨迹 a 和 B 创建单独的电子表格文件 (请参阅补充文件[Spms 主力. XLSX 和 spms 工程. xlsx])。
2. 将三个墨水 (A、B 和 C) 装入三个储罐 (每个 1.5 mL), 然后使用每个通道的背压阀调整背压, 以确保油墨不会从喷射装置滴下。
   注: 需要在独立通道上使用三个喷射设备。
3. 调整每个通道的喷射参数 (上升时间1、停留时间、坠落时间、生态时间、上升时间2、空闲电压、停留时间、回波电压), 以确保每种油墨都能得到良好稳定的液滴形成 (图 2)。
   注: 这些参数取决于喷射装置和油墨, 需要进行相应的调整。
4. 在清洁抛光的硅晶片基材上逐层打印丝素油墨与甲醇交替: 第1阶段, 油墨 A (主体) 印刷;第2阶段: 油墨 C 的印刷 (固化油墨);第3阶段: 油墨 B 的印刷 (发动机现场的催化油墨);第4阶段: 油墨 C 的印刷 (固化油墨);第5阶段: 对所需的图层 (例如, 100 层) 重复阶段1-4。
   注:补充文件中包含4个阶段的两个示例设计;SPMS 主力. xlsx 用于第1阶段和第2阶段, SPMS 工程. xlsx 用于第3阶段和第4阶段。
5. 打印两批纤维蛋白 Spms, 分别为200层和100层厚。
   注: 过氧化氢酶发动机位于每个搅拌器的一端的一侧。因此, 搅拌器有一个催化引擎 (参见图 1红色区域)。
6. 要将样品从硅晶片上取出, 请将样品浸入 DI 水中, 轻轻搅拌, 直到发生分离。

8. 自行式搅拌器的数据采集和轨迹分析

1. 用 DI 水清洁玻璃培养皿 (直径9厘米), 确保表面无尘。
2. 一旦清洁和干燥, 加入10毫升的预过滤 (0.45μm) 5% w v h2o2 到培养皿中, 然后离开沉淀.用一个凉爽的白色发光二极管 (LED) 光源照亮 petri 盘的底部, 并使用带有宏变焦镜头的高速相机来捕捉上面的运动。将视频另存为. avi 文件。
   注: 有关所用设备的详细信息, 请参阅材料表。
3. 将印刷的真丝搅拌器浸入 DI 水中, 将其洗净 10分钟, 以去除任何未绑定的 PEG₄₀₀。小心地拿一个洗过的搅拌器与无菌注射器针的尖端, 并将其放置在 petri 盘的中心。当清洗的搅拌器接触到 H2o2 燃料_时, 发动机周围开始形成气泡, 并观察到搅拌器的圆周运动.当系统看起来稳定 (通常为10-30秒后) 时, 按录制软件中的记录开始捕获视频。
4. 对微型搅拌器进行逐帧跟踪, 如图 3中的 a 点和 b 点所示, 对搅拌器的每一端进行跟踪。
   注: 这可以手动完成, 也可以借助跟踪软件完成。
5. 从获得的跟踪数据中, 使用下面的方程计算两个连续帧 (例如1和 2) 之间的瞬时速度, 并从整个序列中平均得到的速度, 以获得平均瞬时速度。
6. 进一步, 计算方向的角度。然后使用的变化率来确定旋转速度 (图 3)。
   
   注: 在从跟踪的图像数据计算瞬时速度时, 重要的是要考虑到具有已知尺寸的对象的初始图像, 以便能够计算出正确的像素到千分尺值。这些值将取决于所使用的相机、目标和距离。根据打印粒子的类型, 选择不同的跟踪点来计算速度。例如, 这里跟踪点 A、B 和 C (质量中心) 都用于确定瞬时速度 (图 3)。

9. 用扫描电镜表征 Spms

1. 从 Si-fafer 或散装溶液中取出未使用和使用的 Spms, 并将其转移到安装在铝扫描电子显微镜 (SEM) 存根上的10毫米宽碳粘性垫上。在60°c 的干燥烤箱中干燥样品10分钟。
2. 将样品存根加载到溅射涂布机阶段。喷射涂层 (氩等离子体在 0.05 Torr) 50–100 nm 的黄金到样品上, 确保样品的黄金表面覆盖均匀。
3. 在 5.0 kV 的真空条件下, 从溅射涂布机和扫描电镜中取出样品存根和图像。
   注: 非常高的加速度电压可以烧毁丝绸, 并产生虚假的特征。

结果

将丝绸煮沸后, 预计干燥的纤维比以前轻了三分之一左右, 表明成功去除了丝胶。在阿吉泽试剂中丝绸溶解过程中, 纤维应完全溶解, 并回收黄色粘稠液体。透析后, 丝绸溶液应不那么粘稠, 但仍然表现出略带黄色的颜色。如果丝绸变成了凝胶, 这表明溶解没有成功。

从喷射装置形成的稳定液滴将使印刷样品具有更高的定义。图 2显示了一个稳定的单液滴的示例, 以提供良好的打印结果, 如图 4所示的打印的丝绸搅拌器。它是正常的, 这取决于油墨的粘性, 扩散发生在基板上。

根据所使用的喷墨打印机和液滴大小, 需要调整每个打印的液滴之间的距离, 使它们重叠以生成连接的线路。如果液滴相距太远, 打印的结构就会破裂。除此之外, 如果没有足够的层被打印出来, 有可能在放置到燃料溶液中时, 微搅拌器会破裂。一旦搅拌器从基板上取出并清洗, 将其放入过氧化氢燃料溶液中, 就会立即形成气泡。良好气泡释放的成功率在很大程度上取决于酶活性;如果酶活性低, 就会产生较少的气泡, 从而导致不良的推进结果。图 5显示了搅拌器的表面形态是如何由于内部结构释放产生小毛孔而改变的。一个成功的微型搅拌器看起来类似于那些可以看到的, 在图 6和两个补充视频 S1和s2分别。

图 6显示了两个具有代表性的静态视频帧, 100 层 (图 6a) 和200层 (图 6A) 微型搅拌器在 5% h2o2 燃料 .红色和绿色线条表示跟踪的轨迹 (参见补充视频 s1和s2)。旋转速度可以由方向的变化率 (ɸ,图 3) 确定, 如图 7所示。100层和200层过氧化氢酶掺杂微搅拌器的比较显示, 旋转速度从60±6转/分到100±10转/分的旋转速度显著增加 ~ 0.6倍 (图 7)。

图 1: 在所需位置将过氧化氢嵌入搅拌器支架中的过氧化氢酶催化分解为水和氧的示意图 (以红色显示).该产品的氧泡为移动搅拌器提供了必要的推进力。请点击这里查看此图的较大版本.

图 2: 喷射装置 (喷嘴直径80微米) 产生的 RSF 液滴形成的延时图像.图像下方的数字表示自丝墨液滴开始喷射以来经过的时间 (以微秒为单位)。请点击这里查看此图的较大版本.

图 3: 两个连续帧的粒子跟踪的示意图表示形式.A 和 B 表示跟踪点, C 表示质量中心。表示方向的角度。SPMS 轨迹方向由弯曲的黑色箭头指示。请点击这里查看此图的较大版本.

图 4: 清洗前新型 RIJ 打印微型搅拌器 (100 层) 的光显微镜.红色框表示过氧化氢酶掺杂区域 (发动机区域)。请点击这里查看此图的较大版本.

图 5: sem 图像的主体和过氧化氢酶发动机部分的 SPMS 形成后, 由于气泡释放.在源自氧气气泡释放的 Spms 的 SEM 图像中, 可以清楚地看到发动机表面上的毛孔。(A) 丝微搅拌器暴露在5% 的 h2o2 燃料溶液中之前 。(B) 接触 5% wv h2o2 燃料溶液后的丝绸 spms.右边的图像是红色区域的放大。请点击这里查看此图的较大版本.

图 6: 5% 燃料溶液中两个微型搅拌器的视频帧显示了一段时间内的轨迹.(A) 100 层微搅拌器。(B) 200 层微型搅拌器。请点击这里查看此图的较大版本.

图 7: 100 层 (60±6转/分) 和200层 (100±10转/分) 微型搅拌器的方向 () 角度比较.请点击这里查看此图的较大版本.

补充视频 s1: 代表100层自移动微搅拌器在 5% w/v h₂O₂正在进行的推进.请点击此处下载此文件.

补充视频 s2: 代表200层自移动微搅拌器在 5% w/v h₂O₂正在进行的推进.请点击此处下载此文件.

讨论

本协议中产生的 Spms 的一个关键特征是能够通过掺杂过氧化氢酶等酶的 RIJ 快速、轻松地设计不同的形状和结构, 并通过气泡推进5实现化学驱动运动.再加上这些搅拌器中的 18个具有高度的生物相容性, 它们非常适合未来的水修复挑战应用以及医疗诊断设备的片上实验室应用。

在这里, 通过使用简单的线路设计, 将发动机部件打印到其侧面, 从而证明了推进能力, 如图 1所示。红点代表催化活性过氧化氢酶掺杂发动机部件, 蓝点代表非活性部件。为了能够通过 RIJ 生成3D 形状, 必须打印多个图层才能生成 z 轴高度。在这里, 沉积在硅晶片上的层数分别为100层和200层。通过改变层数, 可以发现推进速度的差异, 可与沉积材料数量的两倍相比较。为了在喷墨打印过程中具有定义良好的结构, 必须选择正确的喷射参数, 以实现定义良好的液滴, 如图 2所示。这些参数将根据所使用的墨水和喷射装置而有所不同。如果油墨不能产生稳定的液滴, 那么油墨很可能不再适合印刷, 很可能开始变成凝胶。需要注意的是, 分辨率限制在很大程度上取决于所使用的喷嘴的大小, 而较小的喷嘴允许更高的分辨率和更小的结构颗粒。

RIJ 打印的真丝搅拌器的示例如图4所示, 其中过氧化氢酶掺杂发动机部件 (如红色标记区域所示) 可显示在主体的一侧 (有关详细信息, 请参见图1中的示意图)。印刷的丝绸脚手架是一种材料, 允许燃料溶液在整个3D 结构中扩散, 因此, 在过氧化氢通过过氧化氢分解过程中, 会形成氧气泡。通过比较暴露 h2o2 燃料前的 sem 显微图 (图 5A)和 h2o2 暴露 后的扫描电镜, 可以看出释放的氧泡在丝绸脚手架结构中产生微米级毛孔 (图 5B)。为了确保运动是由于 h2o2 燃料的分解,而不是通过释放 peg₄₀₀驱动的表面张力, 重要的是搅拌器最初浸入水中至少 10分钟, 并在 di 中测试在燃料溶液中推进之前, 用于表面张力运动的水。

根据 gregory 等人的前面所述, peg₄₀₀的使用可以更好地释放丝绸表面^的气泡 19, 但也会产生表面张力驱动的推进, 这可能是可取的, 具体取决于应用先前描述^{的 20}。第二种机制还提供了产生 Spms 的机会, 它们具有两个依赖于时间的机制, 并且可能对某些应用有利, 例如, 这些应用在开始时会出现初始的剧烈搅拌, 然后持续缓慢搅拌时间^长20。

总之, 通过使用 RIJ 生产自主的自行式装置, 可以轻松地设计和打印各种形状和尺寸。丝绸作为设备的基础材料, 提供了机会, 可以轻松地将酶和其他物质封装到结构中, 从而有可能为这些设备添加功能。

材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sodium Carbonate	Alfa Aesar	11552	anhydrous, 99.5%, granular
Calcium Chloride	Fluka Analytical	C1016	anhydrous, >93%, granular
Ethanol	Fisher Scientific	10542382	HPLC grade
PEG-400	Aldrich Chemistry	202398	average Mn 400, tetramer mol wt ~250 kDa
Catalase	Sigma Life Science	E3289	>20K units
Methanol	Acros Organics	268280025	HPLC grade
Hydrogen Peroxide	Sigma Aldrich	31642	30% (w/w)
Silk	Southwest University, China	NA	Raw Cleaned Silk Cocoons, Bombox Mori
Dialysis Tubes	Sigma Aldrich	D9777	Cellulose, avg, flat width 25 mm, Typical molecular weight cut-off = 14000
Fisherbrand Hoffman Clips	Fisher Scientific	12744396	Clips used to close the ends of the dialysis tubes
Si-Wafer	Sigma Aldrich	647535	Used as printing substrate
Balance	OHAUS Pioneer	PA214C	Analytical Balance
Conductivity meter	Mettler Toledo	FG3	Mettler Toledo FiveGo Portable conductivity meter
Centrifuge	Thermo Scientific	10355052	Heraeus Biofuge fresco sold by Thermo Scientific
Hotplate	Stuart	US152	Stuart US152 Magnetic Stirrer
Camera	PixeLink	PL-D732CU-T	High Speed Colour Camera
Lens	Navitar	Navitar 1-60135	Macro Zoom Lens
Jetting Devices	Microfab Technologies Inc.	MJ-AT-01-40-8MX	80um nozzle diameter Jetting device
MJ-AT-01-80-8MX	80um nozzle diameter Jetting device
Lightpad	AGPTEK	UN-HL0245-EUUN	Light for the swimming experiment
Pipettors	Eppendorf	3123000063	single-channel, variable,  100 – 1,000 µL, blue
3123000055	single-channel, variable, 20 – 200 µL, yellow
Microscope	Nikon	LV100ND	Manual, upright microscope
SEM	Fei	F50	Used for Scanning electron micrographs