矫形子宫内膜癌模型，具有从 Vivo 传播和培养的 VX2 细胞中制成的再生淋巴病

摘要

该协议提出了一种标准化的方法，用于培养VX2细胞，并创建子宫内膜癌的正交VX2模型，在兔子中具有逆转淋巴结转移。正位子宫内膜癌模型对于对诊断淋巴结转移的新型成像模式进行临床前研究具有重要意义。

摘要

子宫内膜癌是北美最常见的妇科恶性肿瘤，其发病率正在全球上升。治疗包括手术与或不辅助治疗取决于淋巴结参与由淋巴腺切除术确定。淋巴腺切除术是一种病态手术，在许多患者中尚未证明具有治疗作用，因此需要一种诊断淋巴结转移的新方法。为了测试新的成像剂，需要一个可靠的子宫内膜癌模型与逆转淋巴结转移。VX2子宫内膜癌模型在文献中经常被描述;然而，在模型建立方法方面存在着很大的差异。此外，没有研究报告使用培养的VX2细胞来创建这个模型，因为以前只使用在体内繁殖的细胞。本文介绍了建立VX2子宫内膜癌模型的标准化手术方法和术后监测方法，并报告首次使用培养的VX2细胞创建该模型。

引言

子宫内膜癌，或子宫内膜癌，是全球第二大最常见的妇科恶性肿瘤，也是发达国家最常见的恶性^肿瘤1。子宫内膜癌的发病率稳步上升，在2005-2013年间每年上升2.3%，死亡率为1、2、3，相应上升2.2%。淋巴结转移的诊断是最重要的，因为正淋巴结的存在是^{生存4，5，6，7}的强烈负预测，并可以指导管理辅助疗法8，9，10，11，12，13。淋巴结转移目前通过手术切除骨盆和腹部主要血管的淋巴组织进行诊断。这个程序，被称为淋巴腺切除术，是有争议的，因为冲突的生存数据从....

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研究方案

深腹壁闭合:识别腹膜切口的顶点，用组织钳子抓住腹膜、整管肌肉和筋膜。所有动物研究均在大学卫生网络动物资源中心（ARC）批准的设施中进行，并符合经批准的动物使用和护理协议（AUP #3994/#4299）。VX2细胞系是从大学健康网络的Aken博士实验室获得的。

1. 创建体外VX2细胞系

1. 从兔子四头肌和小鼠侧翼生长中收获VX2肿瘤。
   1. 解冻冷冻VX2肿瘤块（1厘米x1厘米），用手术刀在培养板上切碎，并通过70μm过滤器应变，按顺序添加少量汉克斯平衡盐溶液（HBSS），以确保所有细胞在1mL的最终体积内紧张。
   2. 用0.9%磷酸盐缓冲盐水溶液计数细胞并稀释至浓度为1 x 10⁷/mL，并放置在无菌管中的冰上。
      注:肿瘤块是从实验室合作者从以前在兔子四头肌中传播VX2肿瘤中获得的。
   3. 用2-5%吸入的胶合物麻醉一只雌性新西兰白兔（体重2.5-3.5公斤），去除覆盖注射部位的毛皮，用化比酮-碘溶液清洗注射部位。将500 μL的制备VX2细胞悬浮液（5 x 10⁶细胞/mL）注射到兔子的四头肌中。从第10天开始，对兔子进行临床监测肿瘤生长。
   4. 在肿瘤达到1-1.5厘米直径（用卡钳外部测量）后，使用兽医批准的方法对兔子实施安乐死。通过检查生命体征，包括心率和呼吸速率，确认安乐死。使用贝塔丁溶液清洁区域后，使用无菌仪器切除肿瘤。

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结果

28只兔子被用于建立子宫内膜癌模型。在实验时，兔子的平均体重为2.83公斤（2.71-3.58公斤）。子宫肿瘤在21只兔子中成功生长，总体模型成功率为75%。在将子宫缝合纳入协议之前，成功率为57%，而添加子宫缝合后为81%。第7只兔子之后，由于最初的低模型成功率，在协议中加入了子宫缝合。五个模型是从培养的VX2细胞（在8只兔子中尝试，成功率为63%）和16个兔子模?.......

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讨论

在此，我们报告了建立VX2子宫内膜癌模型的标准化手术方法，并报告了首次使用培养的VX2细胞创建此模型。肿瘤的切除率75%低于^{文献35、37、53、56}所报告的100%;肿瘤的接受率是75%的。"37、53、56"的肿瘤取肿瘤率^低于75%的发病率。然而，90%的病理确认淋巴结转移率与之前对该^{模型35、53}

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材料

Name	Company	Catalog Number	Comments
11-blade scalpel, Sterile, Disposible	Aspen Surgical (VWR)	80094-086
22-gague ear vein catheter	CDMV	14332
3-0 absorbable poly-filament suture (Polysorb)	Covidien	356718
3-0 braided absorbable suture (Polysorb)	Covidien	356718
70uM cell strainer, Individually wrapped, Nylon	Falcon	352350
Acepromazine (Atravet)	CDMV	1047
Betadine soap (Poviodone iodine 7.5%)	CDMV	4363
Betadine solution (Poviodone iodine 10%)	UHN Stores	457955
Buprenorphine	McGill University
Cefazolin	UHN in-patient pharmacy	No Cat # Needed
Chlorhexidine solution	CDMV	119872
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 100mm dishes	Corning	354450	brand not important
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 24-well plates	Corning	354408	brand not important
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 6-well plates	Corning	354400	brand not important
Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 10 mL	Corning	354234
DMEM/HAM F12 1:1	Life Technologies	11320	brand not important
DMSO	Caledon Lab Chem	1/10/4100
Enrofloxacin (Baytril injectable)	CDMV	11242
Falcon Tube	Corning Centri-Star	430828
Fetal Bovine Serum, Qualified, Canadian Origin, 500ml	Life Technologies	12483020	brand/source not important
Isoflurane	UHN in-patient pharmacy	No Cat # Needed
Isohexol contrast	GE Healthcare	407141210
Meloxicam (Metacam 0.5%)	CDMV	104674
Normal Saline	House Brand (UofT Medstore)	1011
PBS	Multicell or Sigma	331-010-CL or D8537-500mL
Penicillin/Streptomycin (100mL; 10000U Penicillin, 10000ug Streptomycin)	Corning-Cellgro	CA45000-652
Sterile Hanks Balanced Salt Solution (-Ca++, -Mg++, -Phenol Red)	T.C.M.F (Dr Bristow)	28-Jan-11
Surgical Glue (Tissue Adhesive)	3M Vetbond	14695B
Trypsin (0.25%), Proteomics Grade	Sigma	T-6567-5X20UG
Trypsin-EDTA, 0.05%, 100ml	Wisent Inc	325-542-EL	brand not important