通过过滤水样粪便细菌的分离

1.水样本采集和处理

1. 从测试水源收集几个 1-L 水样 (如水喷泉、 游泳池、 水库、 配水系统，生食或处理后的污水)，和微生物分析实验室的冰上运输。
2. 灭菌或消毒膜过滤多方面的大会之前，使用高压蒸汽灭菌，暴露于紫外线辐射 （2 分钟） 或乙醇火焰点火。
3. 冷却时的所有零件，正确连接到真空泵和真空过滤废物瓶含漂白剂的流形。
4. 乙醇-火焰消毒一双钳和与他们，从袋中取出一个不育、 网格膜滤器。通常用于膜 0.45 微米孔隙大小直径 47 毫米。然而，交替直径和孔径大小，可规定，孔径大小可以充分诱捕目标 microorganism(s)，并至少 70%的筛选区域组成的孔隙空间。
5. 将筛选器放置的中心流形，膜过滤面积和适用于单位的无菌过滤漏斗、 安全到位。
6. 测量测试水所需的体积 (如100ml) 并将它添加到漏斗 （100 毫升线标记是在漏斗上可见的）。
7. 为了画测试样品通过过滤器应用局部真空 [压差的 34 至 51 kPa （千帕）]。总悬浮固体物质，包括细菌和腐烂的有机物，大于该筛选器的意思是 0.45 微米的孔径大小受困于对该筛选器。更小的粒子，包括病毒和溶解性固体，如少量的有机物质和盐，会通过通过膜和废物容器真空瓶含漂白剂。
8. 之后的样品通过筛选器的完整通道，冲洗漏斗与两至三 20-30 毫升容量的无菌水的内部。
9. 断电的真空和删除关闭的最后一次漂洗后流形的漏斗。
10. 与乙醇火焰消毒钳，立即从设备上卸下滤膜和迅速将其放置到适当增长琼脂糖凝胶介质目标微生物 （表 1列出了每个推荐的增长媒体和孵化条件）。
11. 适用于琼脂糖表面与滚式运动，确保膜的生长介质，完全接触，避免卡压征的气泡膜过滤器。
12. 用一个无菌的单位之间的每个示例中，处理取代使用的过滤漏斗和乙醇消毒不锈钢流形，防止交叉污染。

2.菌落计数

1. 后潜伏期，从孵化器枚举删除生长板。
2. 理想情况下，执行在低功率放大使用冷色的白光光源下菌落计数。
3. 总大肠菌群
   1. 大肠菌群细菌总数是通常粉色到深红色的颜色与金属表面的光泽。光泽本身可能部分或完全覆盖殖民地。非典型总大肠菌群菌落形态可能是暗红色，粘液，或有核无光泽。
   2. 而缺乏光泽是粉色、 蓝色、 白色或无色的殖民地被视为非大肠菌群。
4. 粪大肠菌群
   1. 粪大肠菌群菌落出现各种色调的蓝色。
   2. Nonfecal 大肠殖民地是奶油色的灰色。
5. 粪肠球菌
   1. 粪肠球菌殖民地范围从粉红到深红的颜色。

3.殖民地核查

1. 总大肠菌群
   1. 存在没有核查，棉签使用无菌的接种环全膜法。为殖民地，它是最好验证至少五个每个的典型及非典型形态。
   2. 将选定的殖民地转移到含月桂 tryptose 发酵液与达勒姆管玻璃容器。孵育 35±0.5 ° C 48 小时接种的管。浊度指示增长结合气体生产存在验证殖民地作为大肠菌群。
2. 粪大肠菌群
   1. 无菌转入殖民地蓝色的玻璃容器达勒姆管无菌 EC 中等。孵育 44.5 ± 0.2 ° C 24 小时接种的管。浊度指示增长结合气体生产存在验证殖民地为粪大肠菌群。
3. 粪肠球菌
   1. 罢工殖民地典型化粪肠球菌形态分离菌上脑心输液琼脂 (BHIA)，和孵育于 35 ± 0.5 ° C 为 24 到 48 小时。
   2. 两个预清洗的玻璃幻灯片，增长从孤立的殖民地转移上应用。
   3. 向准备涂片在幻灯片上添加 3%的双氧水两到三滴。泡沫的迅速出现表示"过氧化氢酶试验阳性"结果，和分离不是粪链球菌细菌。
   4. 执行一种革兰氏染色分离物检测作为"过氧化氢酶阴性"（观察无气泡）。粪肠球菌是革兰氏阳性菌，卵球形，并且主要在成对或短链出现。

粪便细菌指标	媒体推荐 （孵化温度、 时间）1
总大肠菌群	LES 远藤琼脂 （35 ± 5 ° C，24 小时） M-远藤介质 （35 ± 5 ° C，24 小时）
粪大肠菌群	m-FC 介质 （44.5 ± 0.2 ° C，24 小时）
粪肠球菌	米肠球菌琼脂 （35 ± 0.5 ° C，48 小时）

表 1。常用生长培养基测定环境样品中的粪便细菌指标
¹根据 （美国公共卫生来调停和美国水工程协会，22^nd版，2012年）考试的水和废水标准方法的建议