1. 装载树脂

1. 对100mL 多肽合成容器, 添加 2-chlorotrityl 氯 (CTC) 树脂 (1.1 摩尔/克, 0.360 克, 0.400 摩尔)。添加20毫升 DMF, 并允许他们膨胀30分钟, 在 N_2.
2. 在真空中排出珠子, 加入10毫升 DMF。
3. 添加500毫克芴甲氧羰基-Ala-OH (1.60 摩尔) 和2.5 毫升iPr₂EtN, 并在 N₂下混合15分钟。
4. 在真空下排出溶剂, 再用芴甲氧羰基-Ala-OH 为15分钟。
5. 在真空下沥干溶剂, 用10毫升 DMFunder N₂洗涤珠子, 在真空3x 下排水。

2. n-芴甲氧羰基组的脱

1. 在 DMF 中添加 10 mL 20% 4-啶, 并在 N₂下搅动珠子15分钟。
2. 在真空下排出溶剂, 重复脱。
3. 在 N₂下用10毫升 DMF 洗涤珠子, 在真空3x 下排水。

3. 执行凯泽测试

1. 通过添加1-2 滴溶液 A (0.5 毫升0.01 米 KCN) 进行凯撒测试24.5 毫升吡啶), 溶液 B (1 克茚, 20 毫升n丁醇), 和溶液 C (20 克苯酚, 10 毫升, n-丁醇), 每个成两个试管。一个测试管将是控制, 而另一个将监测反应。
2. 从反应釜中添加少量的树脂珠到反应试管, 将两个试管加热到110° c。
3. 如果脱是完整的, 测试管的内容将变成深蓝色/紫色的颜色。如果脱不完整或失败, 解决方案将保持黄色。将反应试验管与对照试验管进行比较。

4. 连接下一块积木

1. 在真空下排出溶剂。
2. 用10毫升n-methyl-2-pyrrolidone 在 n₂下清洗珠子, 并在真空下将溶剂排出。
3. 要开始下一个耦合, 添加10毫升 NMP, 620 mgFmoc-OH (1.6 摩尔), 610 毫克 HBTU (1.6 摩尔), 和2.5 毫升iPr₂EtN, 并允许树脂气泡下 N₂为30分钟。
4. 在真空下排出溶剂。
5. 在 N₂下用10毫升 DMF 洗涤珠子, 在真空3x 下排水。
6. 执行凯撒测试 (见步骤 3.1-3.3), 寻找完成的耦合。试管中的珠子和溶液应该是黄色的。

5. 将树脂上的肽裂解

1. 使用步骤 2.1-2.3 将剩下的 n-芴甲氧基切割。
2. 在真空下将溶剂排出后, 将40毫升解理液 (95% TFA、2.5% H₂O、2.5% 提示) 添加到树脂和 N₂下的气泡中 3 h。
3. 在多肽合成器上放置一个新的接收烧瓶, 并将含有所需肽的 theTFA 溶液排入新烧瓶。

6. 沉淀和 I 隔离肽

1. 将 TFA 溶液分离成4个圆锥小瓶, 并将25毫升冷醚 (20 ° c) 添加到每个小瓶中沉淀该肽。
2. 离心机的小瓶 (3000 rpm, 0-4 ° c) 为20分钟醒酒剩余的 TFA 和乙醚溶液从锥形小瓶和集中的肽沉淀, 以支付所需的二肽作为一个白色固体。