这项工作是由美国心脏协会Predoctoral的奖学金JLI和国家机构的希思授予R01AR056624支持。

答：单聚合物静电<ol><li>准备电的解决方案之前，在光引发剂0.5％的溶液，Irgacure 2959（I2959），去离子水溶解在37 ° C几天。这一步是没有必要的，如果光反应的聚合物不被使用。 </li><li>结合methacrylated透明质酸（梅阿，看到伯迪克合成等 ），聚（环氧乙烷）（PEO，900 kDa的），在去离子水I2959准备与终浓度为2％，3％梅阿的解决方案私立教育机构，和0.05 wt％的I2959。使用一个旋涡混合解决方案，直到它被清除。聚合物的类型和浓度，以及使用的溶剂可以修改的，这取决于所需的脚手架属性的步骤。 </li><li>转移到一个注射器的解决方案，并附加18号，6英寸长，钝端针到底。 </li><li>计划注射泵在1.2毫升/小时的速度弹出。插入设备的注射器和针头。 </li><li>将一个高压电源的接地导致的收集装置。为了收集随机分布的纤维使用一个平面的金属板，或使用〜10米/秒旋转的芯棒收集对齐纤维。将带正电的铅针。静电仪器的原理 ， 参见图1。 </li><li>调整针或收集装置，有两者之间的15厘米的距离。 </li><li>启动注射泵的流量。当流体可视化的针尖上，打开电源，22千伏的电压设置。 </li><li>收集完成后（从几分钟薄膜，较厚的垫长达24小时），删除从收集设备的支架，并存储在真空条件下过夜，以确保完全去除的溶剂。 </li><li>可视化的纤维形态，利用扫描电子显微镜（SEM），有代表性的支架对齐和不结盟的结构如图1所示。 </li></ol>注：样品流速，收集装置的距离，和电压依赖于聚合物和溶剂的组合，并为每个系统，通常是通过扫描电镜观测支架形态，必须优化。 B.光交联和Photopatterning <ol><li>从支架垫，切出5mm x 5mm的样品。 </li><li>交联准备通过配售每个支架上覆盖玻片陪衬，直接放在支架上光罩，用干净的玻片上覆盖长尾夹夹闭两端。注：四个样本，可一次完成，并没有一个模式的透明度，可用于交联，如果不想要一个模式。 </li><li>清除脚手架在氮气室成立。重要的是要保持氧气，它可以抑制交联的构造。 </li><li>放置支架安装在氮气室下〜10毫瓦/厘米2 365纳米的光，用5分钟的准直适配器。参见原理图如图 2 。 </li><li>删除每个支架，并在12孔板地点。 </li><li>添加到每口井，封口膜板式蒸发的水和地点，以防止在37 ° C 24小时2 mL去离子水。换水三次。 </li><li>光学显微镜下可视化孔形成（参见图2中的例子） 。现在准备使用的支架。 </li></ol>注：聚合物的种类很多，但是photopatterning只能用于光反应的聚合物，光交联是没有必要的。 C.双聚合物静电荧光纤维可视化<ol><li>准备在90％乙醇的私立教育机构（200 kDa的）5 wt％的解决方案。在搅拌700转50 ° C时至少2个小时之前，以静电。 </li><li> PEO的解决方案转移到一个注射器和添加电液中的终浓度为10 mg / ml浓度的DAPI。用铝箔保护光注射器。 </li><li>准备除也为电液中25微米的终浓度添加methacryloxyethyl thiocarbamoyl罗丹明B（MeRho 683.24克/摩尔），在步骤A2相同的解决方案。用铝箔保护光注射器。 </li><li>小心地用透明胶带，以确保methacrylated盖玻片（见Khademhosseini等 。）芯棒表面。注：纤维将成为束缚methacrylated盖玻片。 </li><li>一个5毫米的长片硅胶管，带Luer锁附件注射器的一端连接和附加针的另一端。插入注射泵的注射器和针头通过孔的电风扇。重复与其他注射器和芯棒对面站点的电风扇。 fanners翻译的L芯棒ength和使用，以确保双方聚合物的平等分配造成脚手架。参见原理图如图 3 。 </li><li>在一个适当的按表1部分所述的调整参数。确保针尖芯棒为中心。 表1。双聚合物静电参数 <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0"><tbody><tr><td> 注射器 </td><td> 电风扇针尖（厘米） </td><td> 针尖芯棒（厘米） </td><td> 流量（毫升/小时） </td><td> 应用电压（kV） </td></tr><tr><td>梅阿</td><td> 6 </td><td> 15 </td><td> 1.2 </td><td> 22 </td></tr><tr><td>私立教育机构</td><td> 6 </td><td> 10 </td><td> 1.2 </td><td> 15 </td></tr></tbody></table> </li><li>一旦一切都正确对齐，关灯和芯棒和注射器泵打开。取下注射器铝箔。当流体是两针的技巧上可见，同时打开电源插头在fanners。 </li><li>当收集完成后，关闭电源和芯棒和拔掉fanners。小心地取出使用刀片的盖玻片和磁带。 </li><li>可视化的纤维，使用配备过滤罗丹明和DAPI荧光显微镜。看到图3的例子。注：荧光纤维是最清楚，以查看时短一段时间（&lt;3分钟）静电，但是，这个过程可以延长时间的无限量，以创造较厚的结构，尤其是不使用盖玻片， 。 </li></ol> D.在棚架的种子细胞<ol><li>将每个盖玻片连接到个人，以及一个适当大小的孔板与静电聚合物。注：与纤维细胞相互作用到methacrylated玻片上电，很容易可见。此外，MeRho可以再次用于光纤可视。 </li><li>孵育过夜，以确保完全去除溶剂和副产品的任何可能浸在PBS的棚架。 </li><li>从井中取出的PBS。 </li><li>消毒支架，放置在一个30分钟的层流罩下的杀菌灯。如果一个完整的支架正在播种，下一个30分钟的杀菌灯翻转的脚手架和地方。 </li><li>执行标准细胞培养，并准备在需要的细胞密度集中的细胞悬液（例如，6000细胞-2厘米）。例如，使用22毫米x 22毫米盖玻片的细胞悬液100毫升。在孵化器中放置1小时。 </li><li>细胞培养基中添加适量的每口井。进入孵化器放置的支架。 </li><li>使用市售的活/死套件染色的细胞。注：如DAPI（细胞核）和荧光标记的鬼笔环肽（肌动蛋白压力纤维），其他类型的细胞染色，可用于可视化的细胞。 </li><li>可视化细胞和纤维用荧光显微镜配备过滤TRITC和FITC。参见图4的例子。 </li></ol>代表性的成果： <img src="/files/ftp_upload/1589/1589figure1tmb.jpg" border="0" alt="图1" /> 图1。不结盟脚手架形成（上）和对齐支架形成（底部）的设备安装示意图说明。示例扫描电子显微镜图像，每种类型棚架所示。比例尺=5μm的。请<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1589/1589figure1.jpg">点击这里</a>看到图1的放大版本。 <img src="/files/ftp_upload/1589/1589figure2tmb.jpg" border="0" alt="图2" /> 图2。图案方法的原理。放置在光交联之间的光源光掩膜和支架，然后洗去未反应的聚合物所形成的模式。光罩和扫描电镜图像的孔隙的形成和冻干后支架。比例尺= 100微米。请<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1589/1589figure2.jpg">点击这里</a>看大图图2。 <img src="/files/ftp_upload/1589/1589figure3tmb.jpg" alt="图3" border="0" /> 图3多聚合物静电设置和必要的加工参数的原理图，以及一个代表了两种纤维的人群（例如：红梅阿和蓝色PEO）混合物的荧光图像，同时静电，形成多聚合物支架。比例尺= 100微米。请<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1589/1589figure3.jpg">点击这里</a> ，看到一个较大的version的图3。 <img src="/files/ftp_upload/1589/1589figure4tmb.jpg" border="0" alt="图4" /> 图4。一个例子活/死人类间质干细胞和它们之间的相互作用与静电纤维染色的形象。比例尺= 100微米。图4看到一个更大的版本， <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1589/1589figure4.jpg">请点击</a>这里。

<ol>
	<li>Burdick, J. A., Chung, C., Jia, X., Randolf, M. A., Langer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+degradation+and+mechanical+behavior+of+photopolymerized+hyaluronic+acid+networks.">Controlled degradation and mechanical behavior of photopolymerized hyaluronic acid networks.</a> Biomacromolecules. 6, 386-391 (2005).</li><li>Baker, B. M., Gee, A. O., Metter, R. B., Nathan, A. S., Marklein, R. A., Burdick, J. A., Mauck, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+to+improve+cell+infiltration+in+composite+fiber-aligned+electrospun+scaffolds+by+the+selective+removal+of+sacrificial+fibers.">The potential to improve cell infiltration in composite fiber-aligned electrospun scaffolds by the selective removal of sacrificial fibers.</a> Biomaterials. 29, 2348-2358 (2008).</li><li>Ifkovits, J. L., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+Photopolymerizable+and+degradable+biomaterials+for+tissue+engineering+applications.">Review: Photopolymerizable and degradable biomaterials for tissue engineering applications.</a> Tissue Engineering. 13, 2369-2385 (2007).</li><li>Khademhosseini, A., Eng, G., Yeh, J., Fukuda, J., Blumling, J., Langer, R., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Micromolding+of+photocrosslinkable+hyaluronic+acid+for+cell+encapsulation+and+entrapment.">Micromolding of photocrosslinkable hyaluronic acid for cell encapsulation and entrapment.</a> J. Biomed Mater Res A. 79A, 522-532 (2006).</li><li>Mauck, R. L., Baker, B. M., Nerurkar, N. L., Burdick, J. A., Li, W. J., Tuan, R. S., Elliott, D. M., M, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineering+on+the+Straight+and+Narrow:+The+Mechanics+of+Nanofibrous+Assemblies+for+Fiber-Reinforced+Tissue+Regeneration.">Engineering on the Straight and Narrow: The Mechanics of Nanofibrous Assemblies for Fiber-Reinforced Tissue Regeneration.</a> Tissue Engineering B. 15, 171-193 (2009).</li><li>Sill, T. J., Von Recum, H. a. v. o. n. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospinning:+applications+in+drug+delivery+and+tissue+engineering.">Electrospinning: applications in drug delivery and tissue engineering.</a> Biomaterials. 29, 1989-2006 (2008).</li><li>Sundararaghavan, H. G., Metter, R. B., Burdick, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospun+fibrous+scaffolds+with+multi-scale+and+photopatterned+porosity.">Electrospun fibrous scaffolds with multi-scale and photopatterned porosity.</a> , (2009).</li></ol>

静电是用来准备从聚合物纤维支架。 Photocrosslinkable支架的基础上被用来作为一个例证，在光线照射是需要交联透明质酸。随着反应macromers的使用，如梅阿，先前已证明增强细胞分布的通道被纳入棚架光交联过程中使用口罩，以形成宏观和微观多孔支架。此外，两个不同的聚合物，同时静电使用我们自定义的仪器。两种截然不同的纤维人口的存在，验证与荧光染料除了每个静电解决方案，后来用荧...

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		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>DAPI</td>
<td> Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>D1306</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>I2959</td>
<td>Reagent</td>
<td>Ciba Specialty Chemicals</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PEO 200 kDa</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Polysciences</td>
<td>17503</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PEO 900 kDa</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma</td>
<td>189456</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Methacryloxethyl thiocarbamoyl rhodamine B</td>
<td>Reagent</td>
<td>Polysciences</td>
<td>23591-100</td>
<td>Prepare stock solution in DMSO</td>
</tr>
<tr>
<td>Live/Dead Stain Kit</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>L3224</td>
<td>Contains Calcein (stains live cells green) and ethidium homodime (stains red dead cells)</td>
</tr>
<tr>
<td>Syringe Pump</td>
<td>Equipment</td>
<td>KD Scientific</td>
<td>KDS100</td>
<td>Two are needed for dual polymer spinning</td>
</tr>
<tr>
<td>Power Source</td>
<td>Equipment</td>
<td>Gamma High Voltage</td>
<td>ES30P-5W</td>
<td>Two are needed for dual polymer spinning</td>
</tr>
<tr>
<td>Motor</td>
<td>Equipment</td>
<td>Triem Electric Motors, Inc</td>
<td>0132022-15</td>
<td>Must attach to a custom built mandrel</td>
</tr>
<tr>
<td>Tachometer</td>
<td>Equipment</td>
<td>Network Tool Warehouse</td>
<td>ESI-330</td>
<td>Use to monitor mandrel speed</td>
</tr>
<tr>
<td>Omnicure UV Spot Cure System with collimating adapter</td>
<td>Equipment</td>
<td>Exfo Life Sciences Division</td>
<td>S1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silicone Tubing</td>
<td>Equipment</td>
<td>McMaster-Carr</td>
<td>51135K151</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Luer Lock Female Adapter</td>
<td>Equipment</td>
<td>McMaster-Carr</td>
<td>51525K293</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Luer Lock Male Adapter</td>
<td>Equipment</td>
<td>McMaster-Carr</td>
<td>51525K143</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Needles</td>
<td>Equipment</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>14-825-16H</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Coverslips</td>
<td>Equipment</td>
<td>Corning</td>
<td>2875-22</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

electrospinning fibrous polymer scaffolds for tissue engineering and cell culture

作为组织工程领域的的发展，是一个巨大的需求，生产更合适的材料和加工技术，以解决更复杂的器官和组织的要求（如机械和血管）。静电是一种流行的技术来创造，模仿原生细胞外基质的结构和大小规模的纤维支架。这些纤维支架也有用的，因为细胞培养基质的纤维可以被用来直接细胞的行为，包括干细胞的分化（见广泛的审查由莫克<em&gt;等。</em&gt;和西尔<em&gt;等。</em&gt;了解更多信息）。在这篇文章中，我们描述了静电纺丝聚合物的一般过程，作为一个例子，electrospin一个反应的光线照射交联透明质酸（见Ifkovits<em&gt;等。</em&gt;审查photocrosslinkable材料）。我们还介绍了进一步的处理能力，如photopatterning多聚合物支架形成。 Photopatterning可用于创建渠道和多尺度孔隙支架，以增加细胞浸润和组织分布。多聚合物支架是有用的，以便更好地调整棚架的属性（力学和退化），其中包括专为细胞浸润的孔隙度。此外，这些技术可以扩展到包括广泛的聚合物和反应macromers的创建提供必要的线索，开发成功的组织工程结构的复杂支架。

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Electrospinning Fibrous Polymer Scaffolds for Tissue Engineering and Cell Culture

静电聚合物组织工程和细胞培养的过程中，在这篇文章中解决。具体来说，静电photopatterning多聚合物静电额外的处理能力的光反应macromers描述。

静电纤维聚合物支架用于组织工程和细胞培养

As the field of tissue engineering evolves, there is a tremendous demand to produce more suitable materials and processing techniques in order to address ...

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