对药物处理的Hep-3B细胞进行成像后，使用共定位插件打开图像J中的共聚焦图像。在图像J服务器中打开ND文件，然后在对话框中选择分割通道选项。处理绿色和红色图像。
生成这些图像的副本以保持原始图像不变，方法是单击图像并选择重复或使用键盘快捷键 shift 以及 D.To 减少背景，生成另一个图像副本，减去滚动半径为 100 的背景，然后选择创建背景选项以生成具有给定图像背景的图像。然后，转到处理。单击图像计算器并从第二个重复图像中减去第一个重复的图像。
利用生成的图像进行共定位分析。要使用共定位插件，请通过单击图像，选择类型，然后选择 8 位，将绿色和红色通道图像转换为 8 位。接下来，单击插件并选择共定位。
要测量线粒体和溶酶体信号的共定位，请将比率设置为 75%，阈值红色通道设置为 80.0，阈值绿色通道设置为 50.0。将生成一个包含共定位点并将三个 8 位图像组合在 RGB 图像中的 8 位二进制图像。将这些图像转换为 8 位图像。
要获取像元的感兴趣区域，请通过选择共定位点的图像来生成突出显示像元区域的图像。要选择整个像元区域，请选择生成的共定位点图像，然后单击图像，调整阈值并设置阈值以确保突出显示所有像元区域。要分析像元的区域，请选择分析，单击分析粒子，然后测量图像中从零到无穷大的所有粒子，这是分析粒子的默认设置。
要分析共定位线粒体和溶酶体的区域，请选择共定位的 8 位图像。然后，选择“分析”。单击分析颗粒并测量 0.1625 平方微米和 4 平方微米之间的点和。
将共定位线粒体和溶酶体的面积除以总细胞面积以测量共定位点。Hep-3B细胞的共聚焦图像显示线粒体和溶酶体的共定位。VL 850和FCCP诱导Hep-3B细胞中显着的线粒体自噬。
