要设置成像系统，首先将 532 纳米激光器打开 15 分钟以预热。接下来，将定制的斜坡连接到成像膜旁边的手动可调载物台上。将带有连接呼吸管的鼠标牙架连接到坡道上，并将加热垫固定在坡道表面上。
激光预热后，在光纤束输入前面放置一个近红外探测器卡，并通过确保激光进入束来检查激光对准。通过用电动剃须刀从眼睛附近到耳朵后面修剪麻醉小鼠头部的头发来开始动物准备。在头顶涂抹脱毛霜。
保持五分钟后，用湿棉签擦去乳霜。重复应用，直到头部皮肤完全脱毛。在将动物转移到系统平台之前，使用27号针头以原液浓度回轨道注射100微升微气泡。
现在，将一滴护目化妆水滴在眼睛上。通过在成像窗口表面填充蒸馏水以进行声耦合来开始PAUSAT成像。接下来，将鼠标的头部固定在牙齿支架中，并确保适当的麻醉和气流。
使用加热灯和连接到温度控制器的直肠探头，将动物的体温保持在 37 摄氏度。打开成像应用程序并导航到 B 模式超声波。使用实时超声窗口手动将鼠标的头部调整到所需位置，并相应地调整载物台高度。
将 B 模式下的超声传输频率值调整为 16 兆赫兹。然后，在映像应用程序中输入保存目录信息。接下来，使用浮动框选择所需的脑部扫描区域。
图像采集完成后，按下采集静态按钮并检查扫描结果，以确保所需的区域成像。要执行声学血管造影成像，请返回“图像采集”，然后将模式更改为“声学血管造影”。接下来，输入所需的扫描协议参数，将帧间距设置为0.2毫米，每个位置10帧。
在图像分析下检查扫描结果以确保图像质量。要使用光声断层扫描成像，请打开光学参量振荡器或 OPO 应用程序，并将其设置为 756 纳米。然后，手动将线性阵列探头转换为先前确定的坐标，以自动共同配准摆动体积和线性阵列体积。
打开激光应用程序并打开 532 纳米激光器。将扫描参数设置为0.4毫米步长、20毫米扫描长度和每个位置平均10帧。现在，打开超声数据采集系统MATLAB程序，然后按运行按钮。
接下来，在扫描应用程序中按开始。扫描完成后，打开 MATLAB 保存程序。将保存名称更改为所需的文件名，然后按运行。
然后将OPO波长更改为798纳米并重复扫描。声学血管造影或AA成像显示，在未受伤的大脑中，两个半球的血管分布相似。在两种不同波长的光声图像中观察到类似的结果。
在电灼小鼠的AA图像中观察到右外侧皮层的信号显着减少。同一区域也显示组织氧合减少，提示缺血。PAUSAT成像可以通过识别血流供应减少和氧饱和度降低的上皮层区域，基于光血栓性卒中模型识别卒中区域。
小鼠年龄会影响成像，因为头骨变厚并导致不同的声阻抗，从而导致老年小鼠的成像深度降低。
