Immunostaining of Mouse Stria Vascularis and Tissue Mounting

通过从小鼠解剖血管纹来准备免疫染色，并将组织添加到含有200微升4%多聚甲醛的1X PBS中的24孔板中。将组织在室温下孵育20分钟。在低转速下在轨道振动台上短时间洗涤两次 1X PBS。

取出PBS，然后在室温下在300微升PBST溶液中进行透化和封闭至少一小时。接下来，用一抗在 4 摄氏度下对组织染色过夜。然后加入二抗，并在室温下以低RPM在轨道振荡器上孵育两小时。

盖上平板以保护荧光标记的二抗免受光照。接下来，沿着 25 mm 轴放置两条小胶条，仅比 18 x 18 毫米的玻璃盖玻片小，准备一个更大的微载玻片。在胶条之间放置一滴封片剂。

使用55号镊子，在SV的一端尽可能少地吸动组织，并将其从PBS转移到封片试剂中。将盖玻片的一端放在放置一条胶水条纹的载玻片上。然后轻轻松开盖玻片，以免产生气泡。

通过在支架的每个角上涂抹一滴透明的指甲油来密封支架。在玻璃盖玻片上标记标本，远离可视化区域。在解剖显微镜下观察SV组织，以确保其平躺且不靠近任何气泡。

如果 SV 组织的方向不正确，请尝试推出气泡或小心地取出较小的玻璃盖玻片并重新定位 SV。制备来自P30小鼠的整个SV支架并进行共聚焦成像。在中间细胞中观察到ZsGreen表达，GSIB4标记的内皮细胞和DAPI标记的细胞核。