Staining of Sub-Retinal Pigment Epithelium (RPE) Deposits

首先，将尼罗河红粉末以每毫升三毫克的浓度溶解在丙酮中。将溶液在室温下孵育 15 分钟，并定期混合。使用0.22微米过滤器过滤溶液一次或两次，具体取决于溶液中剩余的沉淀物量。

然后通过在DPBS中以1：500的比例稀释储备溶液来制备工作溶液。将 200 微升工作溶液加入多聚甲醛固定的 RPE 细胞中，并在室温下在避光振荡器上孵育 30 分钟。孵育后，用DPBS洗涤样品两次，然后加入200微升DPBS，并储存在4摄氏度下。

对于BODIPY染色，通过将BODIPY溶解在无水DMSO中来制备3.8毫摩尔的储备液浓度。然后通过在DPBS中以1：300的比例稀释储备溶液来制备工作溶液。将 200 微升 BODIPY 工作溶液加入多聚甲醛固定的 RPE 细胞中，并在室温下在摇床上孵育过夜。

第二天，用DPBS洗涤细胞两次，并加入200微升DPBS，然后将它们储存在4摄氏度。对于APOE免疫染色，通过将DPBS与1%BSA，0.5%吐温20和0.5%Triton X-100混合来制备缓冲溶液。在200微升缓冲溶液中封闭并透化多聚甲醛固定的RPE细胞一小时。

孵育后，加入在缓冲溶液中以 1：100 稀释的 APPLE 一抗，并在室温下孵育过夜。第二天，用DPBS洗涤样品两次。然后加入 200 微升二抗溶液，在室温下以 1 比 1000 稀释 1 小时。

孵育后，用 DPBS 洗涤细胞两次，并加入 200 微升 DPBS，然后将它们储存在 4 摄氏度。