对于从真菌库中回收的EPF,首先将真菌分离物涂抹在四分之一强度的SDA板上。在分生孢子收获前,在 25 摄氏度的黑暗中孵育 10-14 天。然后,将 2-3 mL 的 0.03%吐温 80 移液到培养板上。
然后使用接种环刮除分生孢子。接下来,将真菌悬浮液转移到离心管中。以最高速度剧烈涡旋悬浮液,然后将样品移出到血细胞计数器中以计数分生孢子的数量。
使用0.03%吐温80稀释悬浮液中的分生孢子,直到获得所需的浓度。为了准备接种室,首先使用底部培养皿作为模具或用剪刀切割直径为9厘米的叶盘。接下来,使用微波炉为每个培养皿准备 1.5% 的水琼脂。
将 30 mL 冷却的水琼脂倒入培养皿中,让其在层流罩中凝固。当琼脂表面半固体时,将叶盘的背面朝上放置,然后轻轻按压以将其嵌入琼脂中。现在,将 20 只适龄成虫放在叶盘上。
打开接种室的盖子,将0.3mL分生孢子悬浮液直接喷洒到蚜虫和叶盘上。悬浮液干燥后,盖上盖子以防止芥菜蚜虫淹死。随后,使用石蜡膜密封接种室以保持高湿度。
将腔室置于温度为25摄氏度的培养箱中,明暗光周期各为12小时。使用立体显微镜每 12 小时计算一次死亡率,持续 5 天。毒力筛查显示,芥菜蚜虫的存活率一致,对照组的存活率为85%。
冬虫夏草对蚜虫的杀灭能力最快,接种后3 d和4.5 d的杀蚜率分别为50%和90%。Beauveria 菌株 141、143 和 153 表现出缓慢的蚜虫杀灭能力,在 3 DPI 时死亡率仅为 5%。除紫毛菌外,大多数EPF分离株在5 DPI内表现出高于70%的校正死亡率。
Beauveria bassiana在EPF分离株中显示出最高的死亡率,为100%。在毒力筛查期间,在感染Metarhizium属、Beauveria属、紫紫薇和冬虫夏草的芥菜蚜虫尸体上观察到EPF真菌病。