IPSC Differentiation into Posterior Primitive Streak and Nephrogenic Intermediate Mesoderm

首先用两毫升DPBS洗涤膜基质包被的6孔板上的诱导多能干细胞或iPSC。使用移液器吸出DPBS。接下来，加入 1 毫升市售细胞分离溶液以分离 iPSC。

然后将细胞放入 37 度的培养箱中 5 分钟。现在将一毫升mTeSR移液到iPSC上，确保细胞已与塑料表面分离。在室温下以 400g 离心这些细胞 3 分钟。

重悬细胞沉淀，然后使用血细胞计数器计数细胞数。接下来，在涂有膜基质的 6 孔板上接种一系列细胞密度。用补充有 10 微摩尔 Rho 激酶抑制剂的 mTeSR 培养这些。

将培养板在37摄氏度的二氧化碳培养箱中培养过夜。第二天，吸出mTeSR并用两毫升DPBS洗涤细胞。接下来，向细胞中加入两毫升第 1 阶段培养基。

然后将细胞置于 37 摄氏度的培养箱中四天。第四天，取出第 1 阶段培养基并用 2 毫升 DPBS 洗涤细胞。然后向细胞中加入两毫升第 2 阶段培养基，然后像以前一样孵育细胞。

从第0天到第4天，iPSC迅速扩增并呈现菱形或三角形。汇合度达到 90% 至 100%，并均匀累积到第七天。悬浮培养后，聚集体在第 7 天解离后自发形成肾单位结构。