Cerebral Thrombus Clot Dissolution and Cell Staining for Cell Component Analyses

首先，使用镊子将收集的脑血凝块样本放在干净的培养皿上。然后，使用移液管，向其中加入五毫升生理盐水，轻轻摇晃培养皿。使用移液管取出生理盐水。

用一把剪刀将凝块切成小块。再次，在凝块中加入五毫升生理盐水，轻轻摇晃培养皿，然后用移液管吸出生理盐水。然后，使用镊子将凝块转移到新的、干净的 U 型板上。

通过使用生理盐水将SFE的浓度调节至每毫升2,000单位来制备SFE工作溶液。将 300 微升 SFE 工作溶液添加到预处理的凝块中。为了启动第一轮降解，将SFE和凝块的混合物在37摄氏度下孵育半小时。

之后，轻轻摇晃以混合SFE处理过的样品。并使用干净的移液器，将液体部分转移到无菌管中。将剩余的凝块留出，进行另一轮降解。

将收集的液体以 200 G 在 4 摄氏度下离心 5 分钟。接下来，使用移液器将上清液或回收的SFE溶液转移到另一个干净的试管中。通过轻轻混合将所得细胞沉淀重悬于50微升生理盐水中。

在此之后，如前所述，使用回收的SFE溶液对剩余的凝块进行后续降解。从每一轮降解中收集细胞混合物以制备血细胞样本。将获得的细胞样品的5微升加入聚-L-赖氨酸包被的载玻片中。

并使用盖玻片涂抹细胞。让液体在室温下蒸发。要进行细胞染色，请轻轻地向细胞涂片中加入 100 微升正确的染料。

让细胞在室温下染色 30 分钟，然后用清水轻轻冲洗染料。最后，使用光学显微镜检查染色的细胞。在降解的早期阶段观察到具有无色工作溶液的致密红血凝块。

孵育 30 分钟后观察到凝块溶解，长达 5 小时的长时间孵育可溶解大多数凝块，而阴性对照组即使在孵育 10 小时后也没有显着变化。正确染色后，成熟的红细胞、血小板和各种粒细胞在光学显微镜下可清晰识别。在自血液学的帮助下，可以成功地对细胞成分进行定量分析。