首先准备分化的内皮细胞、寄生虫和星形胶质细胞,以组装 iBBB 模型。从分化的内皮细胞中吸出细胞培养基后,用PBS洗涤细胞一次,然后向洗涤的细胞中加入蛋白酶胶原酶混合物,并在37摄氏度下解离细胞5分钟。将蛋白酶胶原酶混合物与解离的细胞转移到含有hECSR的锥形管中,保持混合物与hECSR的比例为1:3,然后将细胞以300G离心三分钟并吸出上清液,然后将所得细胞沉淀重悬于hECSR中。
在37摄氏度下用蛋白酶胶原酶混合物解离分化的寄生虫5分钟。在锥形管中加入适量的N 2 B 27,并将蛋白酶胶原酶混合物中的解离细胞转移到其中,保持混合物与N2B27的比例为1:3。将细胞以 300 G 旋转三分钟。
吸出上清液后,将细胞沉淀重悬于N 2 B 27中。在37摄氏度下将分化的星形胶质细胞与蛋白酶胶原酶混合物解离五分钟。将蛋白酶胶原酶混合物中的解离细胞以混合物与培养基的1:3比例转移到含有完整星形胶质细胞培养基的锥形管中。
在以300G离心细胞三分钟后,吸出上清液并将细胞沉淀重悬于完整的星形胶质细胞培养基中。电池现在已准备好组装 iBBB。