首先，从层流罩内的收集容器中取出新鲜切除的人网膜。将网膜浸入PBS中，轻轻洗去任何残留的血液或碎屑。使用手术刀和镊子，将组织切成碎片。
将网膜块放入 24 孔培养板的单个孔中。然后用 500 微升网膜培养基填充孔。将 10 毫升无菌 PBS 加入含有 75% 汇合的人 mCherry 阳性卵巢癌细胞的培养瓶中。
轻轻摇晃烧瓶以洗涤细胞。取出PBS，加入3毫升0.05%胰蛋白酶EDTA。再次轻轻摇动培养瓶，使胰蛋白酶EDTA均匀分布在附着的细胞上。
然后将烧瓶放入 37 摄氏度的培养箱中，在 5% 二氧化碳下放置 5 分钟。之后，从培养箱中取出烧瓶。现在轻敲培养瓶以完全分离细胞。
然后加入三毫升网膜培养基以中和胰蛋白酶。多次吸取细胞悬液以充分混合。将悬浮液转移到 15 毫升锥形管中。
将悬浮液在 1， 200 G 下在 24 摄氏度下离心 5 分钟。现在移出上清液并将细胞沉淀重悬于六毫升新鲜网膜培养基中。取 10 微升细胞悬液，使用细胞计数仪对细胞进行计数。
用新鲜培养基将细胞悬液稀释至所需密度。用一毫升注射器，抽出癌细胞悬浮液。将 26 号针头连接到注射器上。
现在使用一把小手术钳拿起一块切开的网膜，并将网膜块放入单独的工作无菌培养皿中。然后将约100微升的癌细胞悬浮液注射到组织中。或者，将等体积的解冻基底膜基质与网膜培养物混合。
将混合物放在冰上直至注射。将网膜块浸入培养板孔中的基质混合物中后，将板孵育 20 分钟。之后，从培养箱中取出板。
一旦混合物凝固，将癌细胞注射到网膜块中。使用荧光成像确认癌细胞的成功注射。在注射部位可以看到一条荧光信号作为确认。
为了促进网膜和癌细胞的共培养，每 48 至 72 小时添加 500 至 200 微升新鲜培养基。最后，使用荧光显微镜监测卵巢癌肿瘤的生长。肿瘤生长可能在两周内可见。
到第 14 天，卵巢癌细胞成功整合到网膜碎片中。癌细胞最初在第一周扩散到网膜表面。随着时间的流逝，细胞聚集形成肿瘤。
通过网膜介质的颜色变化证实了肿瘤负荷，该颜色由红色变为黄色。
