设计用于冷冻电子显微镜的链霉亲和素亲和网格

首先，用 70% 乙醇清洁工作台区域。然后用氯仿冲洗 5 微升玻璃注射器数次。使用前用 100% 乙醇清洗碳蒸发网格。

在干净的滤纸上擦干网格。同时，用100%氯仿洗涤每个抗毛细管镊子，然后用100%乙醇洗涤。在石蜡膜的清洁面上准备三滴 50 微升结晶缓冲液，用于制备每个网格。

用结晶缓冲液填充盖子，并用透镜纸擦拭 35 毫米无涂层培养皿的表面。在培养皿的周边撒上足够的科学级滑石粉。将 200 微升移液器吸头浸入蓖麻油中，取出中等大小的液滴。

将液滴接触培养皿中缓冲液的表面。在取样样之前，用溶解的脂质冲洗五次微升玻璃注射器两次。然后将悬挂的0.5微升脂滴轻轻接触蓖麻油表面，在中心形成脂质单层。

准备一个装有几滴连续液体的盘子。用防毛细管镊子拿起网格，使镊子的直臂和网格的碳蒸发面朝向单层。要转移单层，请将网格的碳蒸发侧接触单层一到两秒钟。

依次将缓冲液的球盖接触放置在石蜡膜上的三滴 50 微升结晶缓冲液。将四微升链霉亲和素加入网格上缓冲液的剩余球盖中。在室温下将网格在湿度室中孵育两个小时。

在封口膜的清洁面准备一滴 300 微升的冲洗缓冲液。将网格放在 300 微升冲洗缓冲液滴上以洗涤未结合的链霉亲和素。要拿起网格，请将干燥的防毛细管镊子的扭结臂插入液滴中。

用滤纸吸干网格，将其金色面朝下放置，然后干燥 15 至 20 分钟。干燥后，将网格翻转过来，使金色的一面朝上。将网格放入碳蒸发器中，在网格的金色面上添加一层薄薄的碳。

用链霉亲和素亲和素网格冷冻的生物素化样品的显微照片在背景中显示连续的网格图案。快速毛皮变换中的衍射图进一步证实了晶格的成功形成。在冷冻电镜数据收集后，链霉亲和素晶格提供的信号可以通过计算屏蔽以产生减去的显微照片。

快速毛皮转化结果表明，链霉亲和素的衍射图谱被成功去除。