首先，在无菌聚苯乙烯或玻璃培养管中的 5 毫升 Luria-Bertani 或 LB 培养基中培养大肠杆菌。将试管在 37 摄氏度下孵育过夜，并以 200 RPM 振荡。在锥形瓶中将隔夜培养的培养物 1 至 50 在 100 毫升 LB 中传代。
将培养物在37摄氏度和200RPM下孵育约1.5小时。接下来，将 100 微升高滴度 T4 噬菌体原液加入大肠杆菌培养物中，并在 37 摄氏度下振荡孵育 3 小时。一旦 T4 噬菌体裂解物澄清，将它们收集在 50 毫升锥形管中。
将裂解物以4,000g离心20分钟，以沉淀任何残留的细菌和细胞碎片。使用0.22微米尼龙过滤器对所得上清液进行过滤灭菌，并将滤液收集到新的50毫升管中。在过滤的T4噬菌体裂解物中加入0.1体积的氯仿，以杀死剩余的细菌并防止细菌生长。
短暂涡旋，并将裂解物在室温下孵育十分钟。将裂解物以4,000g离心五分钟，以将氯仿与裂解物分离。使用血清移液管，小心地将顶部裂解物层转移到新的50毫升管中。
将13毫升噬菌体裂解物加入到100千道尔顿离心过滤装置的上部储液器中。将裂解物浓缩在4,000克下五分钟，或直到大部分裂解物通过过滤器。使用 P200 或 P1000 移液器，在上部储液罐内轻轻上下移液 2 毫升裂解液，以疏通滤膜。
将下部储液罐中的滤液丢弃到废物容器中。重复浓缩，并在上部储液器中保留约2毫升浓缩噬菌体。最后一次旋转后，在上部储液器中轻轻地上下移液。
要洗涤噬菌体裂解物，将12毫升盐水镁或SM缓冲液加入上部储液器中，并以4,000g离心10分钟。第二次洗涤后，将剩余的 2 毫升裂解物重悬于 SM 缓冲液中，最终体积为 10 毫升。将裂解物转移到 50 毫升管中，并将其储存在 4 摄氏度。
为了去除污染的内毒素，在裂解物的总体积中加入0.4体积的1-辛醇。用密封膜密封管盖，以120RPM摇动一小时，然后在4摄氏度下孵育1.5小时，不要摇动。离心机将内毒素清除的裂解物与1-辛醇分离。
使用 P1000 移液管小心地去除尽可能多的 1-辛醇，并将其丢弃到适当的废物容器中。使用 18 号针头和 10 毫升注射器，将噬菌体裂解物收集到剩余的 1-辛醇层下方。将 1 毫升等分试样的 T4 噬菌体裂解物转移到无菌的 1.5 毫升微量离心管中。
以4,000g的速度对盖子打开的管进行真空抽真空，以蒸发裂解物中残留的1-辛醇。以10倍数制备噬菌体裂解物的连续稀释液，然后将每种稀释液的5微升点到LB琼脂平板上，并将平板在37摄氏度下孵育过夜。第二天，计算斑块以计算斑块形成单位或 PFU。
将所得裂解物和SM缓冲液稀释至所需浓度，并重凝确认。将浓缩裂解物储存在 4 摄氏度直至使用。
