使用粪便斑点接种法对小鼠 T4 噬菌体进行体内监测和定量

首先，将T4噬菌体接种的大肠杆菌单体定植小鼠的粪便颗粒收集到无菌预称重的微量离心管中。记录试管的最终重量，并通过减去初始试管重量来计算样品重量。向试管中加入一毫升无菌SM缓冲液，并以最大速度涡旋以使粪便颗粒均质化。

记录添加到每个样品中的SM缓冲液的体积，用于菌落形成单位或CFU或PFU每克计算。在180μL SM缓冲液中制备一系列8个连续稀释液，每个样品20μL。将每种稀释液的 5 微升点在含有大肠杆菌或仅 LB 琼脂平板的 LB 琼脂平板上，以确定 T4 噬菌体和大肠杆菌浓度。

让每个点干燥，然后倒置板并在 37 摄氏度下孵育过夜。第二天，选择稀释度，每个点有 3 到 30 个可计数的斑块。计数并记录使用的牙菌斑和稀释液的数量。

将斑块数量除以每个点中镀的体积，得出每微升 PFU。将其乘以稀释因子和添加到每个样品的 SM 缓冲液体积，用于每个样品的 PFU。最后，除以样品重量得到每克样品的PFU。

在小鼠中检测到的 T4 噬菌体和大肠杆菌的水平，注射 2 x 10 到 6 个 PFU 的 T4 噬菌体或载体裂解物，证明 T4 噬菌体和大肠杆菌共存，在 4 周内没有耗尽任何一个种群。与6个PFU的2×10相比，较低剂量的T 4噬菌体不影响定植，并且未观察到对大肠杆菌水平的剂量依赖性影响。