首先,将浸泡在安乐死溶液中一小时的青蛙,捏住它的脚,检查是否没有疼痛反应。称量非洲爪蟾的重量,并进行其他测量,例如从鼻子到通风口的长度。将青蛙放在背上,并将其四肢固定在靠近身体的位置。
使用解剖剪刀,沿着中线在皮肤上切开一个切口,然后将其横向延伸以创建两个皮瓣。然后找到白线并用镊子抓住它。轻轻地将其从腔腔中拉出,然后用剪刀切开下面的肌肉组织。
从型腔壁创建两个襟翼。识别仍在跳动的心脏,并使用解剖剪刀修剪喙突骨,以便更好地进入。现在使用组织钳来识别薄的心包并拉伸它。
使用虹膜切除术剪刀的尖端,小心地穿孔心包。然后将心包从心脏的三个腔室中取出。在该协议中,显示了心室,肝左叶,胰腺,脂肪体,成对肾脏的采样。
要对心脏心室进行取样,请用镊子抓住心室的顶点,找到其与耳廓和动脉干的连接,并在这些点以下切断它。接下来,观察肝脏的三个叶。轻轻提起左肺叶,露出肝管和胆囊管,并在胃管下方取样该肺叶的三分之一。
如果青蛙是雌性,请找到被生发上皮覆盖的卵巢。轻轻地将裂片重新定位到每一侧,以露出附着区域。使用剪刀切除尽可能靠近肾脏的卵巢,而不会损坏它们。
然后检查肝脏的内侧叶及其通过肠系膜和肝胰管与胃和十二指肠的连接。使用虹膜切除术剪刀,切开十二指肠附近的肠系膜、肝十二指肠韧带和肝胰管。将胰腺和导管从肝脏的内侧叶分离,而不留下附着的深色肝组织。
接下来,在齿形镊子的帮助下握住胃,然后使用组织镊子将胰腺上端固定。在 5 倍放大镜下,小心地将胰腺与胃分开。现在找到并切除膀胱,尽可能靠近泄殖腔切开,然后丢弃组织。
之后,识别大肠并拉伸它,在泄殖腔附近切断它。接下来,将脂肪体向两侧分开,抓住左侧脂肪体的底部,并将其从腹膜上切开。如果是雌性青蛙或雄性有明显的输卵管,请握住输卵管并将其与肾脏和泄殖腔分开。
在泄殖腔交界处切开,继续将其与肾脏分离,去除任何明显的腹膜附着物。现在用镊子夹住肾脏,并在其下端切开腹膜。用剪刀将肾脏从腔腔中取出。
将腹膜尽可能靠近肾脏分离,而不会造成伤害。在 5 倍放大镜下,去除多余的腹膜和残留组织,如睾丸、脂肪体或脾脏。释放动物后,将其放在肚子上,并固定其四肢。
选择一个后肢进行取样,并固定其脚。从腓肠肌或胫腓骨区域切除杏仁形皮瓣。之后,用 PBS 冲洗所有样品,检查是否有多余的组织,并在需要时在使用前修剪。
心室、肝左叶、胰腺、左脂肪体、成对的肾脏和一块皮瓣在安乐死后一小时内净地切除。